CN1703426B - 识别β-淀粉样肽的人源化抗体 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了改进的试剂和方法，用于治疗与病人脑中的Aβ淀粉样沉积有关的疾病。优选的试剂包括人源化抗体。

Description

识别β-淀粉样肽的人源化抗体
相关的申请
本申请要求以前在先提交的临时专利申请U.S.No.60/363751(2002年3月12日提交)的优先权，该申请的标题是“识别β-淀粉样肽的人源化抗体”(在审)。上面引用的申请的全部内容在此引为参考。
发明背景
阿茨海默氏病(AD)是一种进行性疾病，可以引起老年痴呆。参见：Selkoe，TINS 16：403(1993)；Hardy等，WO 92/13069；Selkoe，J.Neuropathol.Exp.Neurol.53：438(1994)；Duff等，Nature 373：476(1995)；Games等，Nature 373：523(1995)。从广义来说，这种疾病分为两类：在老龄(65岁以上)发作的晚期发病型和老年期以前，即35岁到60岁之间就完全发展的早期发病型。在这两种类型的疾病中，病理学是相同的，但是在较早年龄开始发病的情况下，异常会趋于更加严重和广泛。该病的特点是在脑中至少有两种类型的损害，神经纤维缠结和老年斑。神经纤维缠结是与tau蛋白相关的微管的细胞内沉积，该蛋白由两根成对的互相缠绕的纤丝组成。老年斑(即淀粉样斑)是被打乱的神经纤维网的区域，它覆盖着位于中心的细胞外淀粉样沉积物，可达150μm，在脑组织切片的显微镜分析时可以看到。淀粉样斑在脑中的积累也与Down氏综合症和其它认知紊乱有关。
斑的基本组成成分是一种被称为Aβ或β-淀粉样肽的肽。Aβ肽是一种被称为淀粉样前体蛋白(APP)的较大的跨膜糖蛋白中含有39-43个氨基酸的内部片段，大小约为4-kDa。作为APP被不同的分泌酶进行蛋白水解加工的结果，最初发现的Aβ有两种形式，短的形式长度为40个氨基酸，而长的形式长度为42-43个氨基酸。在Aβ的羧基端发现了APP的疏水跨膜结构域的一部分，这可能解释了Aβ、特别是长形式的Aβ在斑中聚集的能力。淀粉样斑在脑中的积累最终导致神经元细胞的死亡。与这种类型的神经元退化有关的生理症状是阿茨海默氏病的特点。
APP蛋白中的几个突变已经与阿茨海默氏病的出现相关联。参见例如Goate等，Nature 349：704(1991)(717位的缬氨酸变为异亮氨酸)；Chartier Harlan等，Nature 353：844(1991)(717位的缬氨酸变为甘氨酸)；Murrell等，Science 254：97(1991)(717位的缬氨酸变为苯丙氨酸)；Mullan等，Nature Genet.1：345(1992)(双突变，595位的赖氨酸和596位的甲硫氨酸变为595位的天冬酰胺和596位的亮氨酸)。这些突变被认为通过增加或改变从APP到Aβ的加工，特别是从APP到增量的长形式的Aβ(即Aβ1-42和Aβ1-43)的加工而引起阿茨海默氏病。其它基因，例如早老素(presenilin)基因PS1和PS2的突变，被认为间接地影响了APP的加工，从而产生了增量的长形式Aβ(参见Hardy，TINS 20：154(1997))。
小鼠模型已经被成功地用来确定淀粉样斑在阿茨海默氏病中的重要性(Games等，同上；Johnson-Wood等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA94：1550(1997))。具体来说，当用长形式的Aβ注射PDAPP转基因小鼠(该小鼠表达突变形式的人APP，并在幼龄时就发展出阿茨海默氏病)时，它们表现出阿茨海默氏病发展的减慢和针对Aβ肽抗体滴度的增加(Schenk等，Nature 400：173(1999))。上面讨论的观察表明Aβ，特别是它的长形式，是阿茨海默氏病的一个病因。
因此，存在着对治疗阿茨海默氏病的新疗法和药剂，特别是能够在生理(例如非毒性的)剂量下实现治疗效果的疗法和药剂的需求。
发明简述
本发明的特征在于新的免疫药剂，具体来说是预防和治疗生成淀粉样疾病(例如阿茨海默氏病)的治疗性抗体药剂。本发明至少部分地基于一种单克隆抗体的识别和鉴定，该抗体与Aβ肽特异性结合，有效地减少了斑的产生和/或减少了与生成淀粉样紊乱有关的神经性营养不良。对该抗体的结构和功能的分析导致设计了各种人源化抗体用于预防和/或治疗。具体来说，本发明的特征在于对该抗体的可变区进行人源化，从而提供了所述抗体的人源化免疫球蛋白或抗体链、完整的人源化免疫球蛋白或抗体以及功能性免疫球蛋白或抗体片段，特别是抗原结合片段。
含有所述单克隆抗体的互补决定区的多肽也被公开了，适合于编码该多肽的多核苷酸试剂、载体和宿主细胞也被公开。
还公开了生成淀粉样疾病或紊乱(例如阿茨海默氏病)的治疗方法，以及其中使用的药物组合物和试剂盒。
本发明的特征为在所述单克隆抗体中对于适当的免疫功能来说是重要的残基的鉴定方法，以及在设计具有改善的结合亲和性和/或减少的免疫原性的人源化抗体中用于治疗药剂时适合取代的残基的鉴定方法。
本发明的特征还在可具有改变的效应子功能的抗体(例如人源化抗体)及其治疗应用。
附图简述
图1A-B描述了小鼠的12B4(成熟肽，SEQ ID NO：2)、人源化的12B4(成熟肽，SEQ ID NO：6)、Katat ID 005036(成熟肽，SEQ IDNO：32)和种系A19(X63397，成熟肽，SEQ ID NO：30)抗体的轻链的氨基酸序列的比对。CDR区为点画区并上划线。星号表示从人到小鼠的单一残基回复突变。划上阴影线的残基的重要性显示在图例中。编号从第一个甲硫氨酸开始，不是Kabat编号。
图2A-B描述了小鼠的12B4(成熟肽，SEQ ID NO：4)、人源化的12B4(第一版)(成熟肽，SEQ ID NO：8)、Katat ID 000333(成熟肽，SEQ ID NO：34)和种系VH4-39和VH4-61抗体(成熟肽，分别为SEQ ID NO：38和36)的重链的氨基酸序列的比对。注解同图1。编号从第一个甲硫氨酸开始，不是Kabat编号。
图3A-D描述了人源化的12B4VLv1与嵌合的12B4VL(与鼠12B4VL具有相同的可变区序列，分别为SEQ ID NO：1和2)、种系A19序列(分别为SEQ ID NO：29和30)以及Kabid ID 005036(分别为SEQID NO：31和32)的核苷酸和氨基酸序列的比较。
图4A-D描述了人源化的12B4VHv1与嵌合的12B4VH(与鼠12B4VH具有相同的可变区序列，分别为SEQ ID NO：3和4)、Kabat ID000333(分别为SEQ ID NO：33和34)以及种系VH4-61(分别为SEQID NO：35和36)的核苷酸和氨基酸序列的比较。
图5图解地描述了两个独立的测量嵌合12B4、3D6和嵌合3D6与Aβ结合的实验的ELISA结果(分别为图A和B)。
图6图解地描述了竞争性的ELISA结合，用于证实12B4和嵌合的12B4与3D6、嵌合的3D6和10D5相比的功能活性。嵌合的12B4(空心三角形)和它的非生物素化的鼠对应物(空心倒三角形)与生物素化的鼠12B4竞争结合Aβ1-42肽的能力相同。
图7图解地描述了一个离体的吞噬作用分析，测试了嵌合的12B4、3D6和人的IgG1在PDAPP脑切片上通过小神经胶质细胞介导摄取Aβ的能力。
图8图解地描述了两个独立的离体吞噬作用分析的结果(分别为图A和图B)，该分析测试了嵌合的12B4、人源化的3D6和人的IgG1在AD脑切片上通过小神经胶质细胞介导摄取Aβ的能力。
图9示意性描述了PCR介导的人源化12B4(第一版)的装配。图9A描述了轻链可变区的装配。图9B描述了重链可变区的装配。
发明详述
本发明的特征是用于预防和治疗阿茨海默氏病或其它生成淀粉样疾病的新的免疫药剂和方法。本发明至少部分地基于一种单克隆免疫球蛋白12B4的下列特征：有效地结合β淀粉样蛋白(Aβ)(例如结合可溶性的和/或聚集的Aβ)、介导吞噬作用(例如聚集的Aβ的吞噬作用)、减少斑的产生和/或减少神经性营养不良(例如在病人中)。本发明还基于对12B4免疫球蛋白的轻链可变区和重链可变区的一级和二级结构的确定及结构特征，以及对活性和免疫原性重要的残基的鉴定。
免疫球蛋白的特征在于包括了此处描述的12B4单克隆免疫球蛋白的轻链可变区和/或重链可变区。优选的免疫球蛋白，例如治疗性免疫球蛋白的特点在于包括了人源化的轻链可变区和/或人源化的重链可变区。优选的轻链可变区和/或重链可变区包括了来自12B4免疫球蛋白(例如供体免疫球蛋白)的互补决定区(CDR)和基本上来自人类受体免疫球蛋白的可变框架区。词组“基本上来自人类受体免疫球蛋白”意味着大部分或关键的框架残基来自于人类受体免疫球蛋白，但是允许在某些位置的残基用被选择用来改善人源化免疫球蛋白的活性(例如改变活性以便更接近地建模供体免疫球蛋白的活性)的残基、或被选择用来减少人源化免疫球蛋白的免疫原性的残基所取代。
在一个实施方案中，本发明的特征在于人源化免疫球蛋白的轻链或重链，它包括12B4可变区互补决定区(CDRs)(即包括一个、两个或三个来自SEQ ID NO：2所显示的轻链可变区序列的CDRs，或包括一个、两个或三个来自SEQ ID NO：4所显示的重链可变区序列的CDRs)，还包括基本上来自人类受体免疫球蛋白轻链或重链序列的可变框架区，条件是框架残基中至少一个残基回复突变为相应的鼠的残基，其中该回复突变基本上不影响链指导Aβ结合的能力。
在另一个实施方案中本发明的特征在于人源化免疫球蛋白的轻链或重链，它包括12B4可变区互补决定区(CDRs)(即包括一个、两个或三个来自SEQ ID NO：2所显示的轻链可变区序列的CDRs，和/或包括一个、两个或三个来自SEQ ID NO：4所显示的重链可变区序列的CDRs)，还包括基本上来自人类受体免疫球蛋白轻链或重链序列的可变框架区，条件是至少一个框架残基被小鼠12B4轻链或重链可变区序列中相应的氨基酸残基所取代，其中该框架残基选自：(a)直接非共价结合抗原的残基；(b)临近CDR的残基；(c)与CDR相互作用的残基(例如，通过对同源的已知免疫球蛋白链的已解析结构上的轻链或重链建立模型而鉴定)；以及(d)参与VL-VH界面的残基。
在另一个实施方案中，本发明的特征在于人源化免疫球蛋白的轻链或重链，它包括12B4可变区CDRs和来自人类受体免疫球蛋白轻链或重链序列的可变框架区，条件是至少一个框架残基被小鼠12B4轻链或重链可变区序列中相应的氨基酸残基所取代，其中该框架残基是正如通过可变区的三维模型分析所鉴定的能够影响轻链可变区构象或功能的残基，例如是能够与抗原相互作用的残基、靠近抗原结合位点的残基、能够与CDR相互作用的残基、临近某个CDR的残基、距离CDR残基
Figure G038058162D00061
以内的残基、典型序列的残基、微调区残基、链间装配的残基、稀有残基、或者在结构模型表面上的糖基化位点残基。
在另一个实施方案中，除了上述的取代之外，本发明的特征还在于至少一种稀有的人类框架残基的取代。例如，稀有残基可以被在该位点对于人的可变链序列来说常见的氨基酸残基所取代。此外，稀有残基可以被同源的种系可变链序列的相应氨基酸残基所取代。
在另一个实施方案中，本发明的特征在于如上所述包括一条轻链和一条重链的人源化免疫球蛋白，或该免疫球蛋白的一个抗原结合片段。在一个示例的实施方案中，人源化免疫球蛋白与β淀粉样肽(Aβ)结合(例如特异性结合)的亲和性至少为107M-1、108M-1或109M-1。在另一个实施方案中，免疫球蛋白或抗原结合片段包括了一个具有同种型γ1的重链。在另一个实施方案中，免疫球蛋白或抗原结合片段与可溶性的β淀粉样肽(Aβ)和聚集的Aβ都能结合(例如特异性结合)。在另一个实施方案中，免疫球蛋白或抗原结合片段介导了β淀粉样肽(Aβ)的吞噬作用(例如诱导吞噬作用)。在另一个实施方案中，免疫球蛋白或抗原结合片段通过个体中的血脑屏障。在另一个实施方案中，免疫球蛋白或抗原结合片段在个体中减少了β淀粉样肽(Aβ)的产生和神经性营养不良。
在另一个实施方案中，本发明的特征在于包括12B4可变区(例如在SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4中显示的可变区序列)的嵌合的免疫球蛋白。在另一个实施方案中，免疫球蛋白或其抗原结合片段还包括来自IgG1的恒定区。
此处描述的免疫球蛋白特别适用于旨在防止或治疗生成淀粉样疾病的治疗方法。在一个实施方案中，本发明的特征在于一种防止或治疗生成淀粉样疾病(例如阿茨海默氏病)的方法，其中包括给患者给药有效剂量的此处描述的人源化免疫球蛋白。在另一个实施方案中，本发明的特征在于包括此处描述的人源化免疫球蛋白和可药用载体的药物组合物。本发明的特征还有用于生产此处描述的免疫球蛋白或免疫球蛋白片段或链的分离的核酸分子、载体和宿主细胞，以及生产该免疫球蛋白、免疫球蛋白片段或免疫球蛋白链的方法。
本发明的特征还在于一种方法，用于鉴定那些在产生人源化12B4免疫球蛋白时分别适合取代的12B4残基。例如，一种鉴定那些适合取代的可变框架区残基的方法包括在已经解析的同源免疫球蛋白结构的基础上建立12B4可变区的三维结构模型，以及分析该模型中能够影响12B4免疫球蛋白可变区构象或功能的残基，从而鉴定出适合取代的残基。本发明的进一步特征是使用SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4中显示的可变区序列或其任何部分，来产生一个12B4免疫球蛋白、12B4免疫球蛋白链或其结构域的三维图象。
本发明的特征还在于一些免疫球蛋白，它们具有改变了的效应子功能，例如结合效应器分子如效应细胞上的补体或受体的能力。具体来说，本发明的免疫球蛋白具有改变了的恒定区例如Fc区，其中在Fc区中至少一个氨基酸残基被一个不同的残基或侧链所取代。在一个实施方案中，修饰的免疫球蛋白是IgG类的，在Fc区至少含有一个氨基酸取代，以便与例如未修饰的免疫球蛋白相比该免疫球蛋白具有改变了的效应子功能。在特定的实施方案中，本发明的免疫球蛋白具有改变了的效应子功能，以便它具有较低的免疫原性(例如不激活不需要的效应细胞活性、裂解作用或补体结合性质)、改善的淀粉体清除性质、和/或具有所需的半衰期。
在描述本发明之前，给出在本文中所用的某些术语的定义对于理解本发明可能是有帮助的。
术语“免疫球蛋白”或“抗体”(在此可以互换使用)是指一种具有基本的四条肽链结构的蛋白，由两条重链和两条轻链组成，这些链通过例如链间的二硫键被稳定化，它具有特异性结合抗原的能力。术语“单链免疫球蛋白”或“单链抗体”(在此可以互换使用)是指一种具有两条肽链结构的蛋白，由一条重链和一条轻链组成，这些链通过例如链间的肽键被稳定化，它具有特异性结合抗原的能力。术语“结构域”是指一种重链或轻链多肽的球状区域，其中含有肽环(例如含有3到4个肽环)，它们通过例如β-折叠片层和/或链间二硫键被稳定化。结构域在此还被称为“恒定的”或“可变的”，这是根据在“恒定的”结构域的情况下不同类的成员的结构域中相对缺少序列的变化，或在“可变的”结构域的情况下不同类的成员的结构域中显著的变化。抗体或多肽“结构域”在本领域内经常可以与抗体或多肽“区”互换使用。抗体轻链的“恒定的”结构域可以与“轻链恒定区”、“轻链恒定结构域”、“CL”区或“CL”结构域互换使用。抗体重链的“恒定的”结构域可以与“重链恒定区”、“重链恒定结构域”、“CH”区或“CH”结构域互换使用。抗体轻链的“可变的”结构域可以与“轻链可变区”、“轻链可变结构域”、“VL”区或“VL”结构域互换使用。抗体重链的“可变的”结构域可以与“重链可变区”、“重链可变结构域”、“VH”区或“VH”结构域互换使用。
术语“区”也可以指一个抗体链或抗体链结构域的一个部分(例如此处定义的重链或轻链的一个部分或恒定的或可变的结构域的一个部分)，以及该链或结构域的更为分散的部分。例如轻链和重链或轻链和重链可变结构域包括如本发明所定义的在“框架区域”或“FRs”间分隔分布的“互补决定区”或“CDRs”。
免疫球蛋白或抗体可以以单体或多聚体的形式存在，例如IgM抗体以五聚体形式存在，和/或IgA抗体以单体、二聚体或多聚体形式存在。术语“片段”是指抗体或抗体链的一个部分，其中含有比完整或完全的抗体或抗体链更少的氨基酸残基。片段可以通过用化学法或酶法处理完整或完全的抗体或抗体链而获得。片段也可以通过重组的方法获得。示例的片段包括Fab、Fab’、F(ab’)2和/或Fv片段。术语“抗原结合片段”是指免疫球蛋白或抗体中的多肽片段，它结合抗原或和完整抗体(即与衍生得到它们的完整抗体)竞争与抗原的结合(即特异性结合)。
术语“构象”是指蛋白或多肽(例如抗体、抗体链、结构域或其区域)的三级结构。例如，词组“轻链(或重链)构象”是指轻链(或重链)可变区的三级结构，而词组“抗体构象”或“抗体片段构象”是指抗体或其片段的三级结构。
抗体的“特异性结合”意味着抗体对抗原或优选的表位表现出明显的亲和性，并且在优选情况下不表现出明显的交叉反应性。“明显的”或优选的结合包括结合的亲和性至少为106、107、108、109M-1或1010M-1。优选的是亲和性大于107M-1，更优选为大于108M-1。位于这里提出的数值中间的数值也包括在本发明的范围之内，优选的结合亲和性可以由一个亲和性的范围来指示，例如106到1010M-1，优选为107到1010M-1，更优选为108到1010M-1。“不表现出明显的交叉反应性”的抗体是指不与不需要的实体(例如一种不需要的蛋白实体)发生明显的结合的抗体。例如，一种特异性结合Aβ的抗体将与Aβ有明显的结合，但是不与非Aβ的蛋白或肽(例如在斑中包含的非Aβ的蛋白或肽)发生明显的反应。例如特异性针对优选的表位的抗体，不与同样的蛋白或肽上远处的表位发生明显的交叉反应。特异性结合可以使用任何本领域已知的测定这样结合的方法来测定。优选情况下，使用Scatchard分析和/或竞争性结合分析来测定特异性的结合。
结合片段通过重组DNA技术，或通过完整的免疫球蛋白的酶法或化学水解来生产。结合片段包括Fab、Fab’、F(ab’)2、Fabc、Fv、单链和单链抗体。除了“双特异性的”或“双功能的”免疫球蛋白或抗体之外，免疫球蛋白或抗体被理解为每个结合位点都是相同的。“双特异性的”或“双功能的”抗体是一个人工的杂合抗体，具有两个不同的重链/轻链对和两个不同的结合位点。双特异性的抗体可以通过多种方法来生产，包括杂交瘤的融合或Fab’片段的连接。参见例如Songsivilai&Lachmann，Clin.Exp.Immunol.79：315-321(1990)；Kostelny等，J.Immunol.148：1547-1553(1992)。
术语“人源化免疫球蛋白”或“人源化抗体”是指包括了至少一个人源化免疫球蛋白或抗体链(即至少一个人源化的轻链或重链)的免疫球蛋白或抗体。术语“人源化免疫球蛋白链”或“人源化抗体链”(即“人源化的免疫球蛋白轻链”或“人源化的免疫球蛋白重链”)是指免疫球蛋白或抗体链(即分别为轻链或重链)，它具有可变区，包括了基本上来自人的免疫球蛋白或抗体的可变框架区和基本上来自非人类的免疫球蛋白或抗体的互补决定区(CDRs)(例如至少一个CDR，优选为两个CDRs，更优选为三个CDRs)，还包括恒定区(例如在轻链的情况下至少一个恒定区或其部分，而在重链的情况下优选为三个恒定区)。术语“人源化可变区”(例如“人源化轻链可变区”或“人源化重链可变区”)是指一种可变区，它包括了基本上来自人的免疫球蛋白或抗体的可变框架区和基本上来自非人类的免疫球蛋白或抗体的互补决定区(CDRs)。
词组“基本上来自人的免疫球蛋白或抗体”或“基本上人的”是指，当为了比较的目的与人类的免疫球蛋白或抗体氨基酸序列进行比对时，该区域与人类的框架或恒定区序列享有至少80-90％，优选至少90-95％，更优选至少95-99％的同一性(即局部序列同一性)，其中允许例如保守取代、共有序列取代、种系取代、回复突变等。保守取代、共有序列取代、种系取代、回复突变等的引入通常被称为人源化抗体或链的“最适化”。词组“基本上来自非人类的免疫球蛋白或抗体”或“基本上非人的”是指一种免疫球蛋白或抗体序列与一种非人类的生物体，例如非人类的哺乳动物的免疫球蛋白或抗体序列具有至少80-95％，优选至少90-95％，更优选为96％、97％、98％或99％的同一性。
因此，人源化免疫球蛋白或抗体、或人源化免疫球蛋白或抗体链的所有区域或残基，可能除了CDRs之外，都基本上与一个或多个天然的人类免疫球蛋白序列的相应区域或残基相同。术语“相应区域”或“相应残基”是指，当为了比较的目的将两个序列进行最适化比对时，第二个氨基酸或核苷酸序列上的区域或残基与第一个氨基酸或核苷酸序列上的区域或残基占据同样的(即等同的)位置。
术语“明显的同一性”是指两个多肽序列，当通过例如GAP或BESTFIT程序使用默认的间隙量进行最适化比对时，享有至少50-60％的序列同一性，优选至少60-70％的序列同一性，更优选至少70-80％的序列同一性，更优选至少80-90％的序列同一性，更优选至少90-95％的序列同一性，更优选至少95％或以上的序列同一性(例如99％或以上的序列同一性)。术语“基本上同一性”是指两个多肽序列，当通过例如GAP或BESTFIT程序使用默认的间隙量进行最适化比对时，享有至少80-90％的序列同一性，优选至少90-95％的序列同一性，更优选至少95％或以上的序列同一性(例如99％或以上的序列同一性)。为了进行序列比较，一般来说以一个序列作为参比序列，测试序列与其相比较。在使用序列比较算法时，测试和参比序列被输入计算机，然后如果需要就设定子序列座标，再设定序列算法程序参数。然后序列比较算法基于设定的程序参数，计算出测试序列相对于参比序列的序列同一性百分数。
用于比较的序列的最适比对可以使用Smith&Waterman的局部同源性算法Adv.Appl.Math.2：482(1981)、Needleman&Wunsch的同源比对算法J.Mol.Biol.48：443(1970)、Pearson&Lipman的相似性搜索方法Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：2444(1988)、对这些算法的计算机化执行(威斯康星遗传学软件包中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA，Genetics Computer Group，575 Science Dr.，Madison，WI)、或通过手工检查(参见Ausubel等《现代分子生物学方法》)来进行。一个适合于确定序列同一性和序列相似性百分数的算法的例子是BLAST算法，在Altschul等，J.Mol.Biol.215：403(1990)中有描述。进行BLAST分析的软件通过国立生物技术信息中心对公众开放(公众可以通过国立卫生研究院NCBI英特网服务器进入)。一般来说，可以使用缺省的程序参数进行序列比较，尽管也可以使用定制的参数。对于氨基酸序列，BLASTP程序使用的缺省参数为词长度(W)为3，预期数值(E)为10，以及BLOSUM62记分矩阵(参见Henikoff&Henikoff，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：10915(1989))。
在优选情况下，不一样的残基位置由于保守的氨基酸取代而有所不同。为了将氨基酸取代分类为保守的或非保守的，氨基酸被分为如下的组：第一组(疏水侧链)：亮氨酸、甲硫氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸；第二组(中性亲水侧链)：半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸；第三组(酸性侧链)：天冬氨酸、谷氨酸；第四组(碱性侧链)：天冬酰胺、谷氨酰胺、组氨酸、赖氨酸、精氨酸；第五组(影响链方向的残基)：甘氨酸、脯氨酸；以及第六组(芳香族侧链)：色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸。保守取代涉及同一组中氨基酸之间的取代。非保守的取代包括一组中的成员与另一组中的成员之间的替换。
优选情况下，人源化免疫球蛋白或抗体结合抗原的亲和性为3、4或5倍于相应的非人源化抗体的亲和性。例如，如果非人源化抗体的结合亲和性是109M-1，人源化抗体的结合亲和性将至少为3X109M-1、4X109M-1或5X109M-1。在描述免疫球蛋白或抗体链的结合特性时，可以基于链“指导抗原(例如Aβ)结合”的能力来描述它。一条链，当它赋予完整的免疫球蛋白或抗体(或其抗原结合片段)特异性结合的性质或结合亲和性时，就被称为“指导抗原结合”。如果突变(例如回复突变)影响(例如减少)了含有该链的完整的免疫球蛋白或抗体(或其抗原结合片段)的结合亲和性，达到与含有缺少该突变的等同链的抗体(或其抗原结合片段)的结合亲和性相比差别至少一个数量级的时候，该突变被称为基本上影响了重链或轻链指导抗原结合的能力。如果突变对含有该链的完整的免疫球蛋白或抗体(或其抗原结合片段)的结合亲和性的影响(例如减少)与含有缺少该突变的等同链的抗体(或其抗原结合片段)的结合亲和性相比只差2倍、3倍或4倍时，该突变“没有基本上影响(例如减少)该链指导抗原结合的能力”。
术语“嵌合的免疫球蛋白”或抗体是指一个免疫球蛋白或抗体，其可变区来自于第一个物种而恒定区来自第二个物种。嵌合的免疫球蛋白或抗体可以通过例如遗传工程的方法，从属于不同物种的免疫球蛋白基因区段构建而成。术语“人源化免疫球蛋白”或“人源化抗体”并不包括嵌合的免疫球蛋白或抗体，如下文所定义的那样。尽管人源化的免疫球蛋白或抗体在它们的结构上是嵌合的(即含有来自一种以上蛋白的区域)，但它们包括了在此处定义的嵌合的免疫球蛋白或抗体中没有发现的其它特点(即可变区含有供体CDR残基和受体的框架残基)。
“抗原”是抗体能够与其特异性结合的实体(例如一个蛋白实体或肽)。
术语“表位”或“抗原决定簇”是指抗原上的一个位点，免疫球蛋白或抗体(或其抗原结合片段)能够特异性与它相结合。表位可以由相邻的氨基酸或不相邻的氨基酸通过蛋白的三级折叠并置起来而形成。由相邻的氨基酸形成的表位当暴露到变性溶剂时一般能够保持，而通过三级折叠形成的表位在用变性溶剂处理时通常会失去。典型的表位在独特的空间构象中包括至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸。确定表位空间构象的方法包括例如X-射线晶体衍射和二维核磁共振。参见例如G.E.Morris主编的《分子生物学方法(Methods in Molecular Biology)》第66卷中的“表位作图方案(EpitopeMapping Protocols)”(1996年)。
识别同样表位的抗体可以在一个简单的免疫分析中被鉴定，该分析可以显示一个抗体阻断另一个抗体与靶抗原结合的能力，即竞争性结合分析。竞争性结合可以被一个分析所确定，在该分析中被测试的免疫球蛋白抑制了参比抗体与共同抗原例如Aβ的特异性结合。已知有许多种类的竞争性结合分析，例如：固相的直接或间接放射免疫分析(RIA)、固相的直接或间接酶免疫分析(EIA)、三明治竞争分析(参见Stahli等，Methods in Enzymology 9：242(1983))、固相的直接生物素-亲和素EIA(参见Kirkland等，J.Immunol.137：3614(1986))、固相的直接标记分析、固相的直接标记三明治分析(参见Harlow和Lane，Antibodies：A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Press(1988))、使用I-125标记的固相的直接标记RIA(参见Morel等，Mol.Immunol.25(1)：7(1988))、固相的直接生物素-亲和素EIA(Cheung等，Virology176：546(1990))和直接的标记RIA(Moldenhauer等，Scand.J.Immunol.32：77(1990))。一般来说，这样的分析包括使用与固相表面结合的纯化的抗原、或带有未标记的测试免疫球蛋白和标记的参比免疫球蛋白中任一种的细胞。竞争性抑制通过确定在存在测试免疫球蛋白的情况下与固相表面或细胞结合的标记的量来测量。通常测试的免疫球蛋白是过量的。一般来说，当一种竞争性抗体过量时，它将抑制参比抗体与共同抗原的特异性结合达到至少50-55％、55-60％、60-65％、65-70％、70-75％或以上。
表位也被免疫细胞例如B细胞和/或T细胞所识别。表位的细胞识别可以通过体外分析来确定，该分析测定抗原依赖性的增殖，正如通过3H-胸腺嘧啶的掺入、通过细胞因子的分泌、通过抗体的分泌、通过抗原依赖性的杀死(细胞毒性T淋巴细胞分析)来确定。
示例的表位或抗原决定簇可以在人类淀粉样前体蛋白(APP)中发现，但是在优选情况下在APP的Aβ中发现。APP存在多种同工型，例如APP695、APP751和APP770。APP中的氨基酸是按照APP770同工型的序列(例如参见GenBank登记号P05067)来指派号码。Aβ(在本文中也称为β淀粉样肽和A-β)肽是一个大约4-kDa的含有39-43个氨基酸的APP内部片段(Aβ39、Aβ40、Aβ41、Aβ42和Aβ43)。例如Aβ40含有APP的672-711位残基，而Aβ42由APP的673-713位残基组成。作为APP被不同的分泌酶进行体内或原位蛋白水解加工的结果，发现Aβ有两种形式，短的形式长度为40个氨基酸，而长的形式长度为42-43个氨基酸。正如在此处描述的那样，优选的表位或抗原决定簇位于Aβ肽的N-末端内，并包括了Aβ的1-10位氨基酸内的残基，优选为来自Aβ42的1-3、1-4、1-5、1-6、1-7或3-7位残基。此外优选的表位或抗原决定簇包括Aβ的2-4、5、6、7或8位残基，Aβ的3-5、6、7、8或9位残基，或Aβ42的4-7、8、9或10位残基。当说抗体结合到特定的残基例如Aβ的3-7位残基中的表位时，其意思是指该抗体与含有该特定残基(在这个例子中是Aβ的3-7位残基)的多肽特异性结合。这样的抗体不必需与Aβ的3-7位残基中的每个残基接触。Aβ的3-7位残基中的每个单个氨基酸取代或缺失也不必然显著地影响结合亲和性。
术语“生成淀粉样疾病”包括任何与不溶性的淀粉样纤丝的形成或沉积有关的(或由其引起的)疾病。示例的生成淀粉样疾病包括但不限于全身性淀粉样变性病、阿茨海默氏病、成熟期发作的糖尿病、帕金森氏症、Huntington氏病、额骨-颞部痴呆症、以及与朊病毒相关的传染性海绵状组织脑病(分别为人类的kuru和Creutzfeldt-Jacob病以及羊和牛中的瘙痒病和疯牛病)。不同的生成淀粉样疾病是根据沉积的纤丝的多肽组分的本质来定义或表征的。例如，在患有阿茨海默氏病的个体或病人中，β-淀粉样蛋白(例如野生型、变体或截短的β-淀粉样蛋白)是淀粉样沉积的特征性多肽组分。因此，阿茨海默氏病是“以Aβ的沉积为特征的疾病”或“与Aβ的沉积有关的疾病”的一个例子，该沉积发生在例如个体或病人的脑中。术语“β-淀粉样蛋白”、“β-淀粉样肽”、“β-淀粉体”、“Aβ”和“Aβ肽”在此可以互换使用。
“免疫原性试剂”或“免疫原”，在任选与佐剂结合起来给哺乳动物施用时，能够诱导针对其自身的免疫反应。
此处使用的术语“治疗”，被定义为给患有疾病、具有疾病的症状或者倾向于患有疾病的病人施用或给药一种治疗药剂、或者给从病人分离的组织或细胞系施用或给药一种治疗药剂，目的在于治疗、治愈、缓解、减轻、改变、医治、改善、提高或影响疾病、疾病的症状或患病的倾向性。
术语“有效量”或“有效剂量”被定义为足够获得或至少部分获得预期疗效的量。术语“治疗上有效剂量”被定义为在一个已经患病的病人中足够治愈或至少部分阻止该病及其并发症的量。对于这种用途有效的量将依赖于感染的严重程度和病人自身免疫系统的整体状态。
术语“病人”包括接受预防或治疗的人类和其它哺乳动物个体。
“溶解的”或“解离的”Aβ是指非聚集的或没有聚集的Aβ多肽，包括单体溶解的以及寡聚体溶解的Aβ多肽(例如溶解的Aβ二聚体、三聚体等)。“不溶性的”Aβ是指聚集的Aβ多肽，例如通过非共价键集合在一起的Aβ。据信Aβ(例如Aβ42)的聚集至少在部分上是由于在肽的C-端(APP的跨膜结构域的一部分)存在疏水性残基。溶解的Aβ可以在体内的生物体液中发现，例如脑脊液和/或血清。此外，溶解的Aβ可以通过使用超声在纯DMSO中溶解冷冻干燥的肽而制备。得到的溶液被离心(例如在4℃、14000xg离心10分钟)以除去任何不溶的颗粒物。
术语“效应子功能”是指保留在抗体(例如IgG抗体)的Fc区中的活性，包括例如抗体与效应器分子如补体和/或Fc受体结合的能力，它可以控制抗体的几种免疫功能，例如效应细胞活性、裂解、补体介导的活性、抗体清除和抗体半衰期。
术语“效应器分子”是指一种能够与抗体(例如IgG抗体)的Fc区结合的分子，包括但不限于补体蛋白或Fc受体。
术语“效应细胞”是指一个能够结合到抗体(例如IgG抗体)的Fc部分的细胞，结合一般是通过在效应细胞表面上表达的Fc受体来进行的，所述效应细胞包括但不限于淋巴细胞，例如抗原呈递细胞和T细胞。
术语“Fc区”是指IgG抗体的C-末端区，特别是该IgG抗体重链的C-末端区。尽管IgG重链Fc区的边界可以轻微地变化，但Fc区一般被定义为跨度从IgG重链的大约226位的半胱氨酸残基到其羧基末端。
术语“Kabat编号”除非特别说明，被定义为使用EU索引在例如IgG重链抗体中的残基的编码，如同在Kabat等的文献中那样(免疫学目的蛋白的序列(Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest)，第五版，Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，Md.(1991))，专门在此引为参考。
术语“Fc受体”或“FcR”是指一种与抗体的Fc区结合的受体。典型的与抗体(例如IgG抗体)的Fc区结合的Fc受体包括但不限于FcγRI、FcγRII和FcγRIII亚类的受体，包括这些受体的等位变体和替代拼接形式。Fc受体在下列文献中有综述：Ravetch和Kinet，Annu.Rev.Immunol.9：457-92(1991)；Capel等，Immunomethods 4：25-34(1994)；以及de Haas等，J.Lab.Clin.Med.126：330-41(1995)。
I、免疫和治疗剂
本发明的免疫和治疗剂包含此处定义的免疫原或抗体、或它们的功能性片段或抗原结合片段，或由其所组成。已知抗体的基本结构单位由亚基的四聚体构成。每个四聚体由两个相同的多肽链对组成，每对有一条“轻链”(大约25kDa)和一条“重链”(大约50-70kDa)。每条链的氨基末端部分包括一个大约100到110或以上个氨基酸的可变区，主要负责抗原识别。每条链的羧基末端部分定义了一个恒定区，主要负责效应子功能。
轻链被分为κ和λ型，长度大约230个残基。重链被分为γ、μ、α、δ或ε型，长度大约450-600个残基，并定义了抗体的同种型，分别为IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。重链和轻链都折叠成结构域。术语“结构域”是指蛋白，例如免疫球蛋白或抗体的球状区域。免疫球蛋白或抗体的结构域包括例如通过β-折叠片层和链间二硫键被稳定化的3或4个肽环。例如，完整的轻链具有两个结构域(VL和CL)，而完整的重链具有四或五个结构域(VH、CH1、CH2和CH3)。
在轻链和重链中，可变区和恒定区通过一个大约12个或以上的氨基酸构成的“J”区连接，重链中也包括一个大约10个或以上的氨基酸构成的“D”区(参见《基本免疫学(Fundamental Immunology)》(Paul，W.主编，第二版，Raven Press，N.Y.(1989))，第七章，为所有目的以其全文引为参考)。
每个轻链/重链对的可变区形成了抗体结合位点。因此，一个完整的抗体具有两个结合位点。除了在双功能或双特异性抗体中以外，这两个结合位点是相同的。链都表现出同样的基本结构，相对保守的框架区域(FR)被三个超变区，也称为互补决定区或CDRs连接起来。天然产生的或重组产生的链被表达时可以带有一个前导序列，它在产生成熟链的细胞加工过程中被除去。带有非天然产生的前导序列的成熟链也可以重组产生，以便例如增加一个特定的目的链的分泌或改变其加工。
每对的两条成熟链的CDRs被框架区连成一排，能够结合特异的表位。从N-端到C-端，轻链和重链都含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4结构域。“FR4”在本技术领域内也被称为可变重链的D/J区和可变轻链的J区。每个结构域中氨基酸的排布与Kabat的定义一致(《免疫学目的蛋白的序列(Sequences of Proteins ofImmunological Interest)》National Institutes of Health，B ethesda，MD，1987和1991)。Chothia等也提出了另一种结构的定义(J.Mol.Biol.196：901(1987)；Nature 342：878(1989)和J.Mol.Biol.186：651(1989))(在下文中总称为“Chothia等”，为所有目的以其全文引为参考)。
A、Aβ抗体
本发明的治疗剂包括特异性结合Aβ或其它淀粉样斑成分的抗体。优选的抗体是单克隆抗体。有些这样的抗体特异性结合聚集形式的Aβ但不结合可溶形式的Aβ。有些则特异性结合可溶形式的但不结合聚集形式的。有些则聚集形式和可溶形式的都结合。优选的用于治疗方法中的抗体具有完整的恒定区或至少足够的恒定区以便与Fc受体相互作用。优选的抗体能够在斑中有效地刺激Fc介导的Aβ的吞噬作用。人的同种型IgG1是优选的，因为它在人的同种型中与吞噬细胞上(例如脑部滞留的巨噬细胞或小神经胶质细胞上)的FcRI受体的亲和性最高。人的IgG1等同于鼠的IgG2a，因此后者适合于在阿茨海默氏病的动物(例如小鼠)模型中试验体内功效。双特异性的Fab片段也可以使用，其中抗体的一个臂对Aβ有特异性，而另一个臂对Fc受体有特异性。优选的抗体与Aβ结合的结合亲和性大于(或等于)大约106、107、108、109、或1010M-1(包括这些值中间的亲和性)。
单克隆抗体与Aβ中特定的表位结合，它可以是构象的或非构象的表位。抗体的预防和治疗效果可以使用实施例中描述的转基因动物模型步骤来测试。优选的单克隆抗体与Aβ的1-10位残基(天然Aβ的第一个N末端残基被指定为1位)中的表位结合，更优选的情况下与Aβ的3-7位残基中的表位结合。在一些方法中，使用了对不同的表位具有结合特异性的多个单克隆抗体，例如，一种特异性针对Aβ的3-7位残基中的表位的抗体，可以与一种特异性针对Aβ的3-7位残基之外的表位的抗体共同给药。这样的抗体可以按顺序给药或也可以同时给药。针对除了Aβ之外其它的淀粉样成分的抗体也可以使用(例如给药或共同给药)。
抗体的表位特异性可以被测定，例如通过形成噬菌体展示文库，其中不同的成员显示出不同的Aβ子序列。然后对噬菌体展示文库进行筛选，选择出在测试条件下与抗体特异性结合的成员。一个序列家族被分离。一般来说，这样的家族含有共同的核心序列，在不同成员中侧翼序列长度有所不同。能够显示出与抗体特异性结合的最短的核心序列定义了被抗体结合的表位。也可以在竞争性分析中测试抗体的表位特异性，其中使用一种其表位特异性已经被确定的抗体。例如，与12B4抗体竞争结合Aβ的抗体，与12B4结合相同或相似的表位，即位于Aβ的3-7位残基中的表位。筛选具有表位特异性的抗体是对治疗效果的一种有用的预测。例如，一种被确定与Aβ的1-7位残基中的表位结合的抗体，按照本发明的方法学可能能够有效地预防和治疗阿茨海默氏病。
特异性结合优选的Aβ区段而不与Aβ的其它区域结合的抗体，相对于与其它区域结合的单克隆抗体或针对完整Aβ的多克隆抗血清来说有许多优点。首先，对于同样质量的剂量来说，特异性结合优选区段的抗体剂量含有对有效清除淀粉样斑的抗体具有更高的摩尔剂量。第二，特异性结合优选区段的抗体能够诱导针对淀粉样沉积的清除反应，而不会诱导针对完整的APP多肽的清除反应，因此减少了潜在的副作用。
1、非人类抗体的生产
本发明的特征在于非人类的抗体，例如对本发明的优选的Aβ表位具有特异性的抗体。这样的抗体可以用于配制本发明的各种治疗组合物，或者在优选情况下，为生产人源化的或嵌合的抗体(在下文中有详细描述)提供互补决定区。非人类，例如鼠、豚鼠、灵长动物、兔或大鼠的单克隆抗体的生产，可以通过例如用Aβ免疫动物来实现。含有Aβ或Aβ的免疫原性片段或针对Aβ抗体的抗独特型抗体的较长的多肽也可以使用(参见Harlow&Lane，同上，为所有目的引为参考)。这样的免疫原可以从天然来源、通过肽的合成或重组表达来获得。任选地，如下所述，免疫原可以与载体蛋白融合或络合在一起给药。任选地，免疫原可以与佐剂一起给药。术语“佐剂”是指一种化合物，当与一种抗原结合在一起给药时能增强对该抗原的免疫反应，但是当单独给药时不产生针对该抗原的免疫反应。佐剂可以通过几种机制增强免疫反应，包括召集淋巴细胞、刺激B和/或T细胞以及刺激巨噬细胞。下面描述的几种类型的佐剂可以使用。对于免疫实验动物来说优选的是弗氏完全佐剂以及随后使用不完全佐剂。
兔或豚鼠一般被用来制造多克隆抗体。示例的多克隆抗体的制备，例如对于被动保护来说，可以如下进行。用100μg Aβ1-42加上CFA/IFA佐剂免疫125只非转基因小鼠，4-5个月时使小鼠安乐死。从免疫的小鼠收集血液。将IgG与其它的血液成分分离。特异性针对免疫原的抗体可以通过亲和层析部分纯化。平均从每只小鼠可以获得大约0.5-1mg对免疫原特异的抗体，总共得到60-120mg。
小鼠一般被用来制造单克隆抗体。针对一种片段的单克隆抗体的制备可以通过将片段或较长形式的Aβ注射到小鼠中，制备杂交瘤，筛选产生特异性结合Aβ的抗体的杂交瘤。任选地，也筛选结合Aβ的特定区域或所需片段而不与Aβ的其它非重叠的片段结合的抗体。后者的筛选可以通过测定抗体与一系列Aβ肽的缺失突变体的结合、然后确定哪个缺失突变体与抗体结合来实现。结合可以用例如Western杂交或ELISA来评估。显示出与抗体特异性结合的最小的片段被定义为抗体的表位。此外，表位的特异性可以通过竞争性分析来确定，其中测试抗体与参比抗体竞争与Aβ的结合。如果测试抗体和参比抗体竞争，然后它们结合到同样的表位或足够接近的表位上，以至一个抗体的结合干扰了另一个抗体的结合。这种抗体优选的同种型是小鼠的同种型IgG2a或其它物种中等同的同种型。小鼠的同种型IgG2a等同于人的同种型IgG1(例如人IgG1)。
2、嵌合的和人源化的抗体
本发明的特征还在于对β-淀粉样肽特异的嵌合和/或人源化的抗体(即嵌合的和/或人源化的免疫球蛋白)。嵌合的和/或人源化的抗体与为构建嵌合和/或人源化抗体提供起始材料的小鼠或其它非人类抗体具有同样的或相似的结合特异性和亲和性。
A、嵌合抗体的生产
术语“嵌合抗体”是指一种抗体，它的轻链和重链基因一般是通过遗传工程的方法从属于不同物种的免疫球蛋白基因区段构建的。例如，来自小鼠单克隆抗体的可变区(V)基因区段可以与人的恒定区(C)区段，诸如IgG1和IgG4相连接。优选的是人的同种型IgG1。因此典型的嵌合抗体是一种杂合蛋白，由来自小鼠抗体的V或抗原结合结构域和来自人抗体的C或效应器结构域组成。
B、人源化抗体的生产
术语“人源化抗体”是指一种抗体，其中包括至少一条链，含有基本上来自人抗体链(称为受体免疫球蛋白或抗体)的可变区框架残基和基本上来自小鼠抗体(称为供体免疫球蛋白或抗体)的至少一个互补决定区。参见Queen等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86：10029-10033(1989)，US 5530101，US5585089，US5693761，US5693762，Selick等，WO90/07861，和Winter，US5225539(在此为所有目的以其全文引为参考)。恒定区，如果存在，也基本上或完全来自人的免疫球蛋白。
如果人的可变结构域框架与CDRs所源自的小鼠的可变区框架采用相同或相似的构象，将小鼠CDRs替代到人的可变结构域框架中很可能会使它们的正确空间取向得到保留。这可以通过从其框架序列与CDRs所源自的鼠的可变框架结构域表现出高度序列同一性的人抗体中获得人可变结构域来实现。重链和轻链可变框架区可以来自相同或不同的人抗体序列。人抗体序列可以是天然发生的人抗体的序列，也可以是几种人抗体的共有序列。参见Kettleborough等，ProteinEngineering 4：773(1991)；Kolbinger等，Protein Engineering 6：971(1993)和Carter等，WO 92/22653。
在鉴定了鼠供体免疫球蛋白的互补决定区和适当的人受体免疫球蛋白后，下一步是确定如果有的话，这些成分中的哪个残基应该被取代以便最适化产生的人源化抗体的性质。一般来说，用鼠的氨基酸残基取代人的氨基酸残基应该被最小化，因为导入鼠的残基增加了抗体在人中引发人抗小鼠抗体(HAMA)反应的危险。可以使用本领域现有的测定免疫反应的方法来监测一个特定病人中或临床试验过程中的HAMA反应。可以在进行该治疗的开始和整个过程中对给药人源化抗体的病人进行免疫原性评估。HAMA反应的测量可以通过例如在病人的血清样品中检测针对人源化治疗剂的抗体，使用本领域技术人员公知的方法，包括表面胞质团共振技术(BIACORE)和/或固相ELISA分析。
基于对CDR构象和/或与抗原的结合的可能的影响，从人的可变区框架残基中选择某些氨基酸进行取代。非天然的鼠CDR区和人可变框架区的并置排列可能导致非天然的构象的限制，除非通过某些氨基酸残基的取代进行校正，否则这将导致结合亲和性的损失。
对用于取代的氨基酸残基的选择，部分是通过建立计算机模型来确定的。此处描述的计算机硬件和软件用于产生免疫球蛋白分子的三维图象。一般来说，分子模型的产生是从解析免疫球蛋白链或其结构域开始的。将要制作模型的链与解析的三维结构的链或结构域进行氨基酸序列同一性比较，表现出最大的序列同一性的链或结构域被选作构建分子模型的出发点。享有至少50％序列同一性的链或结构域被选来制作模型，在优选情况下享有至少60％、70％、80％、90％或以上序列同一性的链或结构域被选来制作模型。被解析的起始结构可以被修饰，允许在被制作模型的免疫球蛋白链或结构域中的实际氨基酸与起始结构中的氨基酸之间存在差异。然后将修饰后的结构装配成一种复合的免疫球蛋白。最后，通过使能量最小化和保证所有的原子都彼此在适当的距离之内以及键长和键角处于化学上可接受的限度之内来改进模型。
用于替换的氨基酸的选择也可以部分地通过检验在特定位置的氨基酸的特征，或通过经验观察对特定氨基酸的取代或突变的影响来确定。例如，当在鼠的可变区框架残基和选择的人可变区框架残基之间有一个氨基酸不同时，一般来说人框架氨基酸应该可以用来自小鼠抗体的等同的框架氨基酸替换，只要有理由预计该氨基酸：
(1)直接非共价地结合抗原，
(2)临近CDR区，
(3)或者与CDR区相互作用(例如通过计算机建模确定是位于距CDR区约3-的范围之内)，或
(4)参与了VL-VH界面。
“直接非共价地结合抗原”的残基包括位于框架区的氨基酸，这些氨基酸根据已建立的化学力例如氢键、范德华力、疏水相互作用等很可能直接与抗原上的氨基酸相互作用。
CDR和框架区象Kabat等或Chothia等(同上)所定义的那样。当如Kabat等(同上)所定义的框架残基组成了如Chothia等(同上)所定义的结构环残基时，在小鼠抗体中存在的氨基酸可以被选择用来替换到人源化抗体中。“临近CDR区”的残基包括在位置上直接临近人源化免疫球蛋白链一级序列中的一个或多个CDRs，例如位置上直接临近由Kabat所定义的CDR，或由Chothia所定义的CDR(参见例如Chothia和Lesk JMB 196：901(1987))的氨基酸残基。这些氨基酸特别可能与CDRs中的氨基酸相互作用，并且如果从受体中被选择出来，特别可能使供体CDRs变形并减少亲和性。此外，相邻氨基酸可直接与抗原相互作用(Amit等，Science，233：747(1986)，在此引作参考)，并且从供体中选择这些氨基酸可以理想的保持所有抗原接触，以在原始抗体中提供亲和性。
“或者与CDR区相互作用”的残基包括那些通过二级结构分析确定的在空间取向上足够影响CDR区的残基。在一个实施方案中，“或者与CDR区相互作用”的残基通过分析供体免疫球蛋白的三维模型(例如一个计算机生成的模型)而被鉴定。三维模型，一般是最初的供体抗体的，显示出在CDRs外的某些氨基酸靠近CDRs，并很可能通过氢键、范德华力、疏水相互作用等与CDRs中的氨基酸相互作用。在那些氨基酸位置，可以选择供体免疫球蛋白的氨基酸而不是受体免疫球蛋白的氨基酸。根据这个标准挑选的氨基酸一般带有一个与CDRs中的某些原子距离在大约之内的侧链原子，并必须含有一个能够通过已建立的化学力例如上面列出的那些，与CDRs的原子相互作用的原子。
在原子可以形成氢键的情况下，是在它们的核之间测量的，但是对于不形成键的原子，是在它们的范德华表面之间测量的。因此，在后一种情况下，对于被考虑能够相互作用的原子来说，核必须在大约之内(
Figure G038058162D00264
加上平均范德华半径之和)。在许多情况下，核将分开4或5到
Figure G038058162D00265
在确定氨基酸是否能够与CDRs相互作用时，优选不将重链CDR2的最后8个氨基酸考虑为CDRs的一部分，这是因为从结构的观点来说，这8个氨基酸在行为上更象框架的一部分。
能够与CDRs中的氨基酸相互作用的氨基酸也可以通过其它方法鉴定。每个框架氨基酸的溶剂可接近面积以两种方式进行计算：(1)在完整抗体中，以及(2)在由除去了其CDRs的抗体组成的假定分子中。在大约10平方埃或以上的区域内这些数值之间的显著区别显示了框架氨基酸对溶剂的进入至少部分被CDRs阻断，因此氨基酸正与CDRs相接触。氨基酸的溶剂可接近表面面积可以在抗体的三维模型的基础上，使用本领域已知的算法(例如Connolly，J.Appl.Cryst.16：548(1983)以及Lee和Richards，J.Mol.Biol.55：379(1971)，两篇文献在此都引为参考)进行计算。通过影响另一个与CDRs接触的框架氨基酸的构象，有时框架氨基酸也可以间接地与CDRs相互作用。
已知在框架中有几个位置的氨基酸能够与许多抗体中的CDRs相互作用(Chothia和Lesk，同上，Chothia等，同上，和Tramontano等，J.Mol.Biol.215：175(1990)，所有在此都引为参考)。值得注意的是，已知轻链的2、48、64和71位氨基酸和重链的26-30、71和94位氨基酸(根据Kabat编号)能够与许多抗体中的CDRs相互作用。在轻链的35位和重链的93和103位的氨基酸也可能与CDRs相互作用。在所有这些编号的位置上，在人源化免疫球蛋白中优先选择供体的氨基酸而不是受体的氨基酸(当两者不同时)。在另一方面，某些能够与CDR区相互作用的残基，例如轻链的前5个氨基酸，有时可以从受体免疫球蛋白中选择而不损失在人源化免疫球蛋白中的亲和性。
“参与VL-VH界面”的残基或“装配残基”包括那些在VL和VH之间的界面上的残基，如同被例如Novotny和Haber，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，82：4592-66(1985)或Chothia等，同上所定义的那样。一般来说，稀有的装配残基应该被保留在人源化抗体中，如果它们与人框架中的残基不同的话。
一般来说，满足上述标准的一个或多个氨基酸被取代。在某些实施方案中，所有或大多数满足上述标准的氨基酸被取代。有时，关于一个特定的氨基酸是否符合上述的标准有一些模糊，并且生产两种变体免疫球蛋白，一种有特定的取代，另一种没有。这样产生的两种变体免疫球蛋白可以在任何本文描述的分析中测试所需的活性，然后选择优选的免疫球蛋白。
人源化抗体中的CDR区经常是基本相同的，更经常的是与供体抗体中的相应CDR区相同。尽管不是经常可以指望的，有时可能对CDR残基进行一个或多个保守的氨基酸取代而不显著影响得到的人源化免疫球蛋白的结合亲和性。保守的取代意指例如甘氨酸和丙氨酸，缬氨酸、异亮氨酸和亮氨酸，天冬氨酸和谷氨酸，天冬酰胺和谷氨酰胺，丝氨酸和苏氨酸，赖氨酸和精氨酸以及苯丙氨酸和酪氨酸那样的组合。
其它的用于取代的侯选者是对于人免疫球蛋白来说在该位置是不寻常的或“稀有”的受体人框架氨基酸。这些氨基酸可以用来自小鼠供体抗体的等同位置或来自更典型的人免疫球蛋白的等同位置的氨基酸来取代。例如，当受体人免疫球蛋白框架区的氨基酸对于该位置来说是稀有的，而供体免疫球蛋白中相应的氨基酸对于人免疫球蛋白序列的那个位置来说是常见的，或者当受体免疫球蛋白中的氨基酸对于该位置来说是稀有的，而供体免疫球蛋白中相应的氨基酸相对于其它的人类序列来说也是稀有的时候，可以进行取代。这些标准帮助确保在人类框架中的非典型氨基酸不会破坏抗体的结构。此外，通过用来自供体抗体的对人类抗体来说是典型的氨基酸来代替一个不寻常的人类受体氨基酸，可以使人源化抗体具有更小的免疫原性。
此处使用的术语“稀有的”表示一种氨基酸，在代表性的序列样品中出现在那个位置上的概率少于大约20％、更经常是少于大约10％的序列，而此处使用的术语“常见的”表示一种氨基酸，在代表性的序列样品中出现在那个位置上的概率多于大约25％、更经常是多于大约50％的序列。例如，所有的人轻链和重链可变区序列分别被分组成序列的“亚群”，亚群中的序列彼此之间特别同源，并且或在某些关键位置上具有相同的氨基酸(Kabat等，同上)。在决定一种人类受体序列中的氨基酸在人类序列中是“稀有的”还是“常见的”时，通常只优选考虑那些与受体序列在同样的亚群中的人类系列。
其它的用于取代的侯选者是能够被鉴定为根据Chuthia等，同上提出的另一种定义所确定的一部分CDR区的受体人框架氨基酸。其它的用于取代的侯选者是能够被鉴定为根据AbM和/或接触定义所确定的一部分CDR区的受体人框架氨基酸。
其它的用于取代的侯选者是对应于稀有的或不寻常的供体框架残基的受体框架残基。稀有的或不寻常的框架残基是那些对于鼠抗体来说在该位置是稀有的或不寻常(如本文所定义)的残基。对于鼠抗体来说，亚类可以按照Kabat和被鉴定为与共有序列不同的残基位置来确定。这些供体特异性的差别可以指出在鼠序列中能够增加活性的体细胞突变。被预计能影响结合的不寻常残基被保留，但是被预计对于结合来说不重要的残基可以被替换。
其它的用于取代的侯选者是受体框架区中存在的非种系残基。例如，当将一种受体抗体链(即与供体抗体链享有明显的序列同一性的人类抗体链)与一个种系抗体链(同样与供体链享有明显的序列同一性)比对时，受体链框架和种系链框架之间不匹配的残基可以用来自种系序列的相应残基取代。
除了上面讨论的特异性氨基酸取代之外，人源化免疫球蛋白的框架区通常是基本一致的，或者更经常的是与它们所来自的人类抗体的框架区一致。当然，框架区中的许多氨基酸对于抗体的特异性或亲和性几乎没有或没有直接的贡献。因此，许多单个的框架残基的保守取代是可以容忍的，它们不明显改变得到的人源化免疫球蛋白的特异性或亲和性。因此，在一个实施方案中，人源化免疫球蛋白的可变框架区与人类的可变框架区序列或这些序列的共有序列享有至少85％的序列同一性。在另一个实施方案中，人源化免疫球蛋白的可变框架区与人类可变框架区序列或这些序列的共有序列享有至少90％、优选为95％、更优选为96％、97％、98％或99％的序列同一性。但是一般来说这样的取代是不希望的。
优选的人源化抗体表现出对抗原的特异性结合亲和性为至少107、108、109或1010M-1。人源化抗体与抗原的结合亲和性的上限通常在供体免疫球蛋白的结合亲和性的3、4或5倍的范围内。结合亲和性的下限通常也在供体免疫球蛋白的结合亲和性的3、4或5倍的范围内。此外，结合亲和性也可以与没有取代的人源化抗体(例如具有供体CDRs和受体FRs，但是没有FR取代的抗体)的结合亲和性进行比较。在这种情况下，最适化的抗体(具有取代)的结合优选为至少比未取代的抗体的结合高2到3倍或3到4倍。为了进行比较，可以测定不同抗体的活性，例如通过BIACORE(即使用非标记试剂的表面胞质团共振)或竞争性结合分析。
C、人源化12B4抗体的生产
具体来说，本发明的一个优选实施方案的特征是一种针对Aβ的N末端的人源化抗体，用于本文描述的治疗和/或诊断方法学中。生产人源化抗体的一种特别优选的起始材料是12B4。12B4特异性针对Aβ的N末端，并且已经被显示能够介导淀粉样斑的吞噬作用(例如诱导吞噬作用)。编码12B4抗体重链和轻链可变区的cDNA的克隆和测序在实施例1中描述。
通过对小鼠可变区氨基酸序列和已知的人抗体的序列的计算机比较鉴定出了合适的人受体抗体序列。重链和轻链的比较是分别进行的，但各个的原理是相同的。具体来说，其框架序列与鼠VL和VH框架区表现出高度序列同一性的人抗体可变区，通过利用NCBI BLAST(可以通过国立卫生研究院NCBI互联网服务器公开进入)以相应的鼠框架序列在Kabat数据库中进行查询而鉴定。在一个实施方案中，与鼠供体序列享有多于50％的序列同一性的受体序列被选择。在优选情况下，享有60％、70％、80％、90％或以上的序列同一性的受体序列被选择。
12B4的计算机比较发现12B4的轻链与人轻链的κII亚型显示出最高的序列同一性，以及12B4的重链与人重链的II亚型显示出最高的序列同一性，其定义见Kabat等，同上。因此，轻链和重链框架区优选来自这些亚型的人类抗体，或者来自这些亚类的共有序列。与12B4的相应区表现出最高序列同一性的优选的轻链人可变区来自Kabat ID号为005036的抗体。与12B4的相应区表现出最高序列同一性的优选的重链人可变区来自一种Kabat ID号为000333的抗体，一种GenBank登记号为No.AAB35009的抗体和一种GenBank登记号为No.AAD53816的抗体，其中Kabat ID号为000333的抗体是更为优选的。
下一步选择用于取代的残基，如下所述。当在12B4可变框架区和等同的人可变框架区之间存在一个氨基酸不同时，人可变框架区通常应该被等同的小鼠氨基酸取代，只要有理由预计该氨基酸：
(1)直接非共价地结合抗原，
(2)临近CDR区，是根据Chothia等，同上提出的替代定义下的一部分CDR区，或者与CDR区相互作用(例如位于距CDR区大约
Figure G038058162D00311
的范围之内)，或
(3)参与了VL-VH界面。
12B4抗体重链和轻链可变区的计算机建模和12B4抗体的人源化在实施例V中描述。简单地说，在最接近的已解析的鼠抗体结构的基础上为重链和轻链产生三维模型。模型通过一系列能量最小化步骤进一步改进以减少不利的原子接触并最适化静电和范德华相互作用。
此处描述的抗体的三维结构信息是公众可以使用的，例如获自结构生物信息学研究联合实验室的蛋白数据库(PDB)。PDB是通过万维网可以免费进入的，并在Berman等(2000)Nucleic Acids Research，28：235中有描述。计算机建模允许鉴定与CDR相互作用的残基。12B4结构的计算机模型反过来又可以作为起始点，用于预测抗体的三维结构，所述抗体含有在人框架结构中替换的12B4互补决定区。当其它的氨基酸取代被引入时表示其结构的其它模型也可以被构建。
总的说来，取代满足上述标准的一个、大多数或所有的氨基酸是可以预期的。因此本发明的人源化抗体通常将在至少1、2、3或更多的选定位置用相应的12B4残基取代人轻链框架残基。人源化抗体通常也在至少1、2、3或更多的选定位置用相应的12B4残基取代人重链框架残基。
但是，有时候关于一个特定的氨基酸是否符合上述的标准有一些模糊，这时生产两种变体免疫球蛋白，一种有特定的取代，另一种没有。在用一个鼠的残基取代将在一个特定位点引入一个在人免疫球蛋白中稀有的残基的情况下，可能希望测试在有或没有特定取代的情况下抗体的活性。如果有或没有取代时活性(例如结合亲和性和/或结合特异性)大约相同，没有取代的抗体可能是优选的，因为预计它将引发较少的HAMA反应，如本文所描述。
其它的用于取代的侯选者是对于人免疫球蛋白来说在该位置是不寻常的受体人框架氨基酸。这些氨基酸可以用来自更典型的人免疫球蛋白的等同位置的氨基酸来取代。此外，来自小鼠12B4中等同位置的氨基酸，当它们在所述等同位置上对于人免疫球蛋白来说是典型的时，可以被引入到人框架区中。
其它的用于取代的侯选者是框架区中存在的非种系残基。通过将12B4与已知的种系序列进行计算机比较，可以鉴定出与重链或轻链具有最高度的序列同一性的种系序列。框架区和种系序列的比对将揭示出哪个残基可以被选择出来用相应的种系残基取代。在一个选定的轻链受体框架和这些种系序列之一之间不匹配的残基可以被选择出来用相应的种系残基取代。
表1总结了12B4的VH和VL区的序列分析。其它可以用于12B4抗体和其它人抗体的计算机建模的小鼠和人结构以及能够用于选择氨基酸取代的种系序列被列出。稀有的小鼠残基也在表1中列出。稀有的小鼠残基是通过将供体VL和/或VH序列与供体VL和/或VH序列所属的亚型(根据Kabat)中的其它成员的序列进行比较、并且鉴定出与共有序列不同的残基位置来鉴定的。这些供体特异性的区别可以指出能够增加活力的体细胞突变。靠近结合位点的不寻常或稀有残基可能与抗原接触，使得保留小鼠的残基是希望的。但是，如果不寻常的小鼠残基对于结合来说是不重要的，优选使用相应的受体残基，因为小鼠残基可能在人源化抗体中产生免疫原性的新的表位。在供体序列中的不寻常残基在相应的受体序列中实际上是常见残基的情况下，优选的残基显然是受体残基。
表1、12B4 V区序列的概述
在此引用的Kabat ID序列是公众可以使用的，例如获自西北大学生物医学工程系的Kabat免疫学目的蛋白的序列数据库。此处描述的抗体的三维结构信息是公众可以使用的，例如获自结构生物信息学研究联合实验室的蛋白数据库(PDB)。PDB是通过万维网可以免费进入的，并在Berman等(2000)Nucleic Acids Research，p235-242中有描述。此处引用的种系基因序列是公众可以使用的，例如获自国家生物技术信息中心(NCBI)的Igh、Igκ和Igλ种系V基因序列库(作为国立卫生研究院(NIH)的国家医学图书馆(NLM)的一个分部)。NCBI的“Ig种系基因”同源性搜索数据库由IgG BLASTTM提供。
在一个优选实施方案中，本发明的人源化抗体含有(i)包括含有鼠12B4 VL CDRs的可变结构域和人受体框架的轻链，框架带有至少一个用相应的12B4残基取代的残基，和(ii)含有12B4 VH CDRs和人受体框架的重链，框架带有至少1个，优选2、3、4、5、6、7、8或9个用相应的12B4残基取代的残基，以及任选至少1个，优选2或3个用相应的人种系残基取代的残基。
在另一个优选实施方案中，本发明的人源化抗体具有本文描述的结构特点，并且还具有至少1个(优选2、3、4个或所有的)下面的活性：(1)结合可溶性的Aβ；(2)结合聚集的Aβ1-42(例如如通过ELISA确定的那样)；(3)在斑中结合Aβ(例如AD和/或PDAPP斑的染色)；(4)与嵌合的12B4(例如含有鼠可变区序列和人恒定区序列的12B4)相比与Aβ结合的结合亲和性高2到3倍；(5)介导Aβ的吞噬作用(例如在本文描述的一种离体吞噬作用分析中)；以及(6)通过血-脑屏障(例如在本文描述的PDAPP动物模型中表现出短期的脑部定位)。
在另一个优选实施方案中，本发明的人源化抗体具有本文描述的结构特点，并且以一种方式或一种亲和性与Aβ结合，足够引起至少一种下列体内效应：(1)减少Aβ斑的负荷；(2)防止斑的形成；(3)减少可溶性结合的水平；(4)减少与生成淀粉样紊乱有关的神经性病理；(5)减轻或缓解至少一种与生成淀粉样紊乱有关的生理症状；和/或(6)改善认知功能。
在另一个优选实施方案中，本发明的人源化抗体具有本文描述的结构特点，并与包含Aβ的3-7位残基的表位特异性结合。
在另一个优选实施方案中，本发明的人源化抗体具有本文描述的结构特点，与Aβ中的N-末端表位结合(例如与Aβ的3-7位氨基酸中的表位结合)，并能够减少(1)Aβ肽的水平；(2)Aβ斑的负荷；以及(3)与生成淀粉样紊乱有关的神经性负荷或神经性营养不良。
上面描述的活性可以利用任何一种本文描述的或本技术领域中的分析方法来测定(例如结合分析、吞噬作用分析等)。活性分析可以在体内(例如使用标记的分析成分和/或成像技术)也可以在体外(例如使用来自个体的样品或样本)进行。活性可以直接或间接地分析。在某些优选实施方案中，神经元终点(例如淀粉样负荷、神经性负荷等)被分析。这些终点可以在活的个体中(例如在阿茨海默氏病的动物模型中或经历免疫治疗的人类个体中)使用非侵入性的检测方法来分析。此外，这样的终点也可以在个体的尸体解剖中进行分析。在动物模型和/或人类个体的尸体解剖中分析这样的终点可用于评估在同样的免疫治疗应用中使用的不同药剂(例如人源化抗体)的功效。在其它的优选实施方案中，行为或神经参数可以作为上述的神经病理学活性或终点的指标而被评估。
3、可变区的生产
在从概念上选择了人源化免疫球蛋白的CDR和框架成分后，有多种方法可用于生产这样的免疫球蛋白。由于密码的简并性，编码每个免疫球蛋白氨基酸序列的核酸序列可以有多个。所需的核酸序列可以通过重新固相DNA合成或以前制备的所需多核苷酸变体的PCR突变来生产。寡核苷酸介导的突变是制备靶多肽DNA的取代、缺失和插入突变体的优选方法。参见Adelman等，DNA 2：183(1983)。简而言之，通过将一个编码所需突变的寡核苷酸与一个单链DNA模板进行杂交而将靶多肽DNA改变。杂交后，使用DNA聚合酶合成模板的完整的第二条互补链，它掺入寡核苷酸引物并编码选定的靶多肽DNA的改变。
4、恒定区的选择
如上所述产生的抗体可变区段(例如嵌合的或人源化抗体的重链和轻链可变区)通常被连接到至少部分的免疫球蛋白，通常为人免疫球蛋白的恒定区(Fc区)上。人的恒定区DNA序列可以使用现有的程序从多种人细胞中分离，但是优选为永生的B细胞(参见Kabat等，同上，以及Liu等，WO87/02671)(为所有目分别的以其全文引为参考)。通常轻链和重链恒定区都将包含在抗体中。重链恒定区经常包括CH1、铰链区、CH2、CH3和CH4区。本文描述的抗体包括了具有所有类型恒定区的抗体，包括IgM、IgG、IgD、IgA和IgE，以及任何同种型，包括IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。当希望抗体(例如人源化抗体)表现出细胞毒性活性时，恒定结构域通常是一个补体固定的恒定结构域，典型的类型为IgG1。人的同种型IgG1是优选的。轻链恒定区可以是λ或κ型的。人源化抗体可以包含来自一个以上类别或同种型的序列。抗体可以表达成含有两条轻链和两条重链的四聚体，表达为分离的重链、轻链，表达为Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv，或者表达为单链抗体，其中重链和轻链可变结构域通过一个间隔区连接在一起。
5、重组抗体的表达
嵌合的和人源化抗体一般是通过重组表达来生产的。编码轻链和重链可变区、任选与恒定区相连的核酸被插入表达载体。轻链和重链可以被克隆在相同的或不同的表达载体中。编码免疫球蛋白链的DNA区段与表达载体中的控制序列可操作地连接以确保免疫球蛋白多肽的表达。表达控制序列包括但不限于启动子(例如天然相关的或异源的启动子)、信号序列、增强子元件和转录终止序列。优选情况下，表达控制序列是能够转化或转染真核宿主细胞的载体中的真核启动子系统。一旦载体被转入适当的宿主，宿主就被维持在适合于核苷酸序列的高水平表达、以及适合交叉反应性抗体的收集和纯化的条件之下。
这些表达载体通常既可以作为游离基因又可以作为宿主染色体DNA的整合部分在宿主生物体中复制。通常，表达载体含有选择性标记(例如氨苄青霉素抗性、潮霉素抗性、四环素抗性、卡那霉素抗性或新霉素抗性)，以允许检测那些用所需的DNA序列转化的细胞(参见例如Itakura等，美国专利4704362)。
大肠杆菌是原核宿主，在克隆本发明的多核苷酸(例如DNA序列)方面特别有用。其它适用的微生物宿主包括杆菌，例如枯草芽孢杆菌，和其它肠杆菌，例如沙门氏菌、沙雷氏菌和多种假单胞菌属的种。在这些原核宿主中，人们也可以制造表达载体，它通常将含有与宿主细胞相容的表达控制序列(例如复制起点)。此外，任何数量的多种已知的启动子都可以存在，例如乳糖启动子系统、色氨酸(trp)启动子系统、β-内酰胺酶启动子系统、或来自λ噬菌体的启动子系统。启动子一般通过操纵基因序列控制表达，并含有核糖体结合位点序列等用于起始和完成转录和翻译。
其它的微生物，例如酵母也可以用于表达。与适当的载体配合，糖酵母(Saccharomyces)是一个优选的酵母宿主，这些载体具有所需的表达控制序列(例如启动子)、复制起点、终止序列等。典型的启动子包括3-磷酸甘油酸激酶和其它糖酵解的酶。其中可诱导的酵母启动子包括来自醇脱氢酶、异细胞色素C和负责麦芽糖和半乳糖利用的酶的启动子。
除了微生物以外，哺乳动物组织细胞培养也可以用来表达和生产本发明的多肽(例如编码免疫球蛋白及其片段的多核苷酸)。参见Winnacker，《从基因到克隆(From Genes to Clones)》，VCH出版社，纽约(1987)。在实际中真核细胞是优选的，因为在该领域已经开发了许多能够分泌异源蛋白(例如完整的免疫球蛋白)的适合的宿主细胞系，包括CHO细胞系、多种Cos细胞系、HeLa细胞，优选的是骨髓瘤细胞系或转化的B细胞或杂交瘤。优选情况下，细胞是非人类的。这些细胞的表达载体可以包含表达控制序列，例如复制起点、启动子和增强子(Queen等，Immunol.Rev.89：49(1986))，以及必需的加工信息位点，例如核糖体结合位点、RNA拼接位点、多聚腺苷化位点和转录终止子序列。优选的表达控制序列是来自免疫球蛋白基因、SV40、腺病毒、牛乳头瘤病毒、细胞肥大病毒等的启动子。参见Co.等，J.Immunol.148：1149(1992)。
此外，抗体编码序列可以被整合到转化基因中导入转基因动物的基因组中，然后在转基因动物的乳汁中表达(参见例如Deboer等，US5741957，Rosen，US5304489，以及Meade等，US5849992)。合适的转化基因包括与来自哺乳动物腺特异性基因，例如酪蛋白或β-乳球蛋白的启动子和增强子可操作地连接的轻链和/或重链的编码序列。
含有目的多核苷酸(例如重链和轻链编码序列和表达控制序列)的载体可以根据细胞宿主的类型使用众所周知的方法转化到宿主细胞中。例如氯化钙转染常用于原核细胞，而磷酸钙处理、电穿孔、脂转染、生物弹(biolistics)或基于病毒的转染可以用于其它细胞宿主(参见Sambrook等，《分子克隆实验指南》(冷泉港出版社，第二版，1989)，为所有目的以其全文引为参考)。其它用于转化哺乳动物细胞的方法包括使用1，5-二甲基-1，5-二氮十一亚甲基聚甲溴化物、原生质体融合、脂质体、电穿孔和微注射(参见Sambrook等，同上)。为了产生转基因动物，转化基因可以微注射到受精卵中，或者可以整合在胚胎干细胞的基因组中，然后将这些细胞的核转移到去核卵细胞中。
当重链和轻链被克隆在单独的表达载体上时，载体被共转染以便表达和装配完整的免疫球蛋白。一旦表达，完整的抗体、它们的二聚体、单个的轻链和重链、或本发明的其它免疫球蛋白形式可以通过本技术领域的标准步骤进行纯化，包括硫酸铵沉淀、亲和柱、柱层析、HPLC纯化和凝胶电泳等(参见Scopes的《蛋白纯化(ProteinPurification)》(Springer-Verlag出版社，纽约，1982))。对于药用来说，至少大约90到95％均一性的基本上纯的免疫球蛋白是优选的，而98到99％或以上均一性更为优选。
6、抗体片段
抗体片段也包括在本发明的范围内。在一个实施方案中，提供了非人类的和/或嵌合的抗体的片段。在另一个实施方案中，提供了人源化抗体的片段。一般来说，这些片段与抗原的特异性结合亲和性至少为107、更常见为108或109M-1。人源化抗体片段包括分离的重链、轻链、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fabc和Fv。片段由重组DNA技术产生，或通过完整免疫球蛋白的酶法或化学分离产生。
7、在动物模型中测试抗体的治疗功效
7-9月龄组的PDAPP小鼠每只注射0.5mg多克隆抗Aβ或特异性抗Aβ单克隆抗体的PBS。所有的抗体制备物都被纯化，具有低的内毒素水平。针对片段的单克隆抗体的制备方法是将该片段或长形式的Aβ注射到小鼠中、制备杂交瘤、筛选能够产生特异性结合所需的Aβ片段而不结合其它非重叠的Aβ片段的抗体的杂交瘤。
如果需要，在4个月的时期内给小鼠进行腹膜内注射，以维持通过ELISA滴度测定的循环抗体浓度高于通过针对Aβ42或其它免疫原的ELISA所确定的值的1/1000。监测滴度，在注射6个月末安乐处死小鼠。在尸体解剖后进行组织化学、Aβ水平和毒物学分析。每组使用10只小鼠。
8、筛选具有清除活性的抗体
本发明还提供了筛选具有清除活性的抗体的方法，这种抗体能够清除淀粉样沉积或对其来说清除活性是需要的任何其它抗原或相关的生物实体。为了筛选针对淀粉样沉积的活性，来自阿茨海默氏病病人或具有典型的阿茨海默氏病病理的动物模型的脑中的组织样品，在体外培养基中与带有Fc受体的吞噬细胞，例如小神经胶质细胞，和测试抗体相接触。吞噬细胞可以是原代培养物也可以是细胞系，可以是鼠源的(例如BV-2或C8-B4细胞)也可以是人类来源的(例如THP-1细胞)。在某些方法中，成分在显微镜载玻片上混合以方便显微镜检测。在某些方法中，多个反应在微孔板的孔中平行地进行。在这种格式中，可以在分开的孔中安装分开的微型显微镜载玻片，或者可以使用非显微镜的检测方式例如Aβ的ELISA检测。优选情况下，对体外反应混合物中淀粉样沉积的量进行一系列测量，从反应进行前的基线值开始，在反应中测定一个或多个测试值。抗原可以通过染色进行检测，例如使用针对Aβ或淀粉样斑中其它成分的荧光标记抗体。用于染色的抗体可以与被测试清除活性的抗体相同，也可以不同。在与淀粉样沉积的反应过程中相对于基线的减少表明被测试的抗体有清除活性。这样的抗体有可能用于预防或治疗阿茨海默氏病或其它生成淀粉样疾病。对预防或治疗阿茨海默氏病或其它生成淀粉样疾病特别有用的抗体包括那些对压缩的和扩散的淀粉样斑都能够清除的抗体，例如本发明的12B4抗体或其嵌合的或人源化的版本。
类似的方法可用于筛选具有清除其它类型生物实体的活性的抗体。这种分析可以用来检测实际上针对任何种类的生物实体的清除活性。一般来说，生物实体在人或动物疾病中扮演某种角色。生物实体可以组织样品或分离的形式提供。对于组织样品来说，它优选不被固定，以便允许更容易接近组织样品的成分并避免伴随着固定发生的对成分构象的干扰。可以在这种分析中进行测试的组织样品的例子包括癌组织、癌前期的组织、含有良性生长的组织例如疣或痣、被病原微生物感染的组织、渗进了炎性细胞的组织、带有病原性细胞间基质(例如纤维蛋白性心包炎)的组织、带有畸形抗原的组织、以及瘢痕组织。可以使用的分离的生物实体的例子包括Aβ、病毒抗原或病毒、蛋白聚糖、其它病原微生物的抗原、肿瘤抗原和黏附分子。这样的抗原可以从天然来源、重组表达或化学合成等途径获得。组织样品或分离的生物实体在培养基中与带有Fc受体的吞噬细胞，例如单核细胞或小神经胶质细胞，以及被测试的抗体一起接触。抗体可以被导向测试的生物实体或与实体相关的抗原。在后一种情况下，目标是测试生物实体是否随着抗原被吞噬。通常情况下，尽管不是必需的，抗体和生物实体(有时带有相关的抗原)在加入吞噬细胞之前预先互相接触。然后检测残留在培养基中的生物实体和/或相关抗原的浓度(如果存在的话)。培养基中的抗原或相关生物实体的量或浓度的降低，表明抗体与吞噬细胞结合在一起具有针对抗原和/或相关生物实体的清除反应(参见例如实施例IV)。
9、具有改变的效应子功能的嵌合/人源化抗体
对于上述本发明的含有恒定区(Fc区)的抗体来说，也可以希望改变分子的效应子功能。一般来说。抗体的效应子功能在于分子的恒定区或Fc区，它可以介导与各种效应器分子的结合，例如补体蛋白或Fc受体。补体与Fc区的结合对于例如细胞病原体的调理作用和裂解以及炎性反应的激活来说是重要的。例如，抗体与效应细胞表面上的Fc受体的结合可以引发许多重要的和多样的生物反应，包括例如抗体包被的病原体或微粒的吞入和破坏、免疫复合物的清除、抗体包被的靶细胞被杀伤细胞的裂解(即抗体依赖性细胞介导的细胞毒性，或ADCC)、炎性介质的释放、抗体的胎盘转移、以及免疫球蛋白生产的控制。
因此，依赖于具体的治疗或诊断应用，上面提到的免疫功能或仅仅是选定的免疫功能，是可能实现的。通过改变抗体的Fc区，分子的效应子功能的各个方面、包括增强或抑制免疫系统的各种反应以及在诊断和治疗中的有益效果，都可以实现。
只能与某些类型的Fc受体反应的本发明的抗体可以被产生，例如可以对本发明的抗体进行修饰，使其只能与某些Fc受体结合，或者如果需要，通过缺失或改变位于抗体Fc区中的Fc受体结合位点使其完全失去与Fc受体的结合。其它所需的对本发明抗体的Fc区的改变在下面列出。一般来说，Kabat编号系统被用来指明为了实现所需的效应子功能的变化，Fc区(例如IgG抗体的Fc区)的哪个(些)氨基酸残基要改变(例如通过氨基酸取代)。这种编号系统也被用于在种间对抗体进行比较，以便在例如小鼠抗体中观察到的所需的效应子功能能够被系统地工程化到本发明的人、人源化或嵌合抗体中。
例如，已经观察到抗体(例如IgG抗体)可以被分组成与Fc受体(例如人单核细胞上的Fc受体(FcγRI))表现为紧密、中等或弱的结合的抗体。通过对这些不同亲和性组中的氨基酸序列进行比较，鉴定了铰链区中的一个单核细胞结合位点(234位的亮氨酸到239位的丝氨酸)。此外，人的FcγRI受体以单体的形式结合人的IgG1和小鼠的IgG2a，但是与小鼠的IgG2b的结合弱100倍。这些蛋白在铰链区中的序列的比较显示出在强的结合中的234位到238位残基，即亮氨酸-亮氨酸-甘氨酸-甘氨酸-脯氨酸在小鼠的γ2b，即弱的结合中变为亮氨酸-谷氨酸-甘氨酸-甘氨酸-脯氨酸。因此，如果需要减少FcγI受体的结合，可以在人抗体铰链序列中进行相应的改变。可以理解其它的变化也可以进行以获得相同或相似的结果。例如，FcγRI的结合亲和性可以通过用侧链上有不合适的官能团的残基取代特定的残基，或者通过引入带电荷的官能团(例如谷氨酸或天冬氨酸)或例如芳香族非极性残基(例如苯丙氨酸、酪氨酸或色氨酸)来改变。
这些改变可以同等地应用于鼠、人和大鼠系统，只要在不同的免疫球蛋白之间有序列同源性。已经显示，对于与人FcγRI受体结合的人IgG3来说，将235位的亮氨酸改变为谷氨酸破坏了突变体与受体的相互作用。因此这个受体的结合位点可以通过制造适当的突变来打开或关闭。
对铰链区附近或临近的位点的突变(例如用丙氨酸取代234、236或237位的残基)表明234、235、236和237位残基的改变至少影响了与FcγRI受体的亲和性。因此，本发明的抗体也可以具有改变的Fc区，使得与未修饰的抗体相比对FcγRI的结合亲和性改变了。这样的抗体在234、235、236、或237位的氨基酸残基已方便地发生了修饰。
为了以不同的方式控制免疫反应，与其它Fc受体的亲和性也可以以相似的方法进行改变。
作为另一个例子，IgG抗体在与补体的C1成分结合后的裂解性质也可以被改变。
补体系统的第一个组分C1含有3个蛋白，称为Clq、Clr和Cls，它们紧密结合在一起。已经表明Clq负责三蛋白的复合物与抗体的结合。
因此，抗体的Clq结合活性可以通过提供一种带有改变了的CH2结构域的抗体来改变，在该结构域中重链的318、320和322位氨基酸残基中的至少一个已经被改变成具有不同侧链的残基。重链中的残基编号是EU索引编号(参见Kabat等，同上)。其它为改变例如减小或完全破坏Clq与抗体的特异性结合而做的适当的变化包括将318位的谷氨酸、320位的赖氨酸和322位的赖氨酸中的任何一个残基改变成丙氨酸。
此外，通过在这些残基进行突变，已经显示只要318位的残基具有氢键侧链，同时320位和322位的残基都具有带正电荷的侧链，则Clq的结合就可以保持。
通过用一种在侧链上带有不合适官能团的残基取代3个特定残基中的任何一个，Clq的结合活性就可以被完全破坏。并不必需只能用丙氨酸代替离子性残基以完全破坏Clq的结合。也可能使用其它的烷基取代的非离子性残基，例如甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸或缬氨酸，或芳香族的非极性残基如苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸和脯氨酸代替三个残基中的任何一个来完全破坏Clq的结合。此外，也可能使用极性的非离子性残基如丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸和甲硫氨酸代替320位和322位、而不是318位的残基来破坏Clq的结合活性。
另外值得注意的是离子性或非离子性极性残基上的侧链能够以与谷氨酸残基形成氢键相同的方式来形成氢键。因此，用一个极性残基取代318位的谷氨酸残基可以修饰但不会完全破坏Clq的结合活性。
此外已经知道用丙氨酸残基取代297位的天冬酰胺残基可以除去裂解活性，同时只轻微地减弱(大约弱3倍)Clq的亲和性。这个改变破坏了为补体激活所必需的糖基化位点和糖的出现。在该位点的任何其它的取代也将破坏糖基化位点。
本发明还提供了具有改变的效应子功能的抗体，该抗体含有修饰的铰链区。修饰的铰链区可以含有一个完整的铰链区，该铰链区所来自的抗体与CH1结构域所来自的抗体属于不同的抗体型或亚型。例如，IgG型抗体的恒定区(CH1)可以与IgG4型抗体的铰链区相连。此外，新的铰链区可以含有天然铰链的一部分或重复的单位，其中重复的每个单位来自天然的铰链区。在一个实施例中，通过将一个或多个半胱氨酸残基转变为中性的残基例如丙氨酸，或将适当位置的残基转变为半胱氨酸残基，可以将天然的铰链区改变。进行这样的改变可以使用本领域已知的蛋白化学以及优选为遗传工程技术，如本文所述。
在本发明的一个实施方案中，抗体铰链区中的半胱氨酸残基数量被减少到例如一个。这种修饰的优点在于方便了抗体，例如双特异性抗体分子和其中的Fc部分已经被效应器或报告分子取代的抗体分子的装配，因为只需要形成单个二硫键。这种修饰提供了一个特异性靶，用于通过例如化学途径直接或间接地将该铰链区结合另一个铰链区或结合一个效应器或报告分子。
反过来说，抗体铰链区中的半胱氨酸残基数量也可以增加，例如比正常存在的半胱氨酸残基数量多至少一个。半胱氨酸残基数量的增加可以用来稳定相邻的铰链间的相互作用。这种修饰的另一个优点是它方便了半胱氨酸巯基的使用，以将效应器或报告分子与改变的抗体，例如放射性标记的抗体进行结合。
因此，本发明在不同的抗体型，特别是IgG型之间提供了铰链区的交换，和/或铰链区中半胱氨酸残基数量的增加或减少，以便获得改变的效应子功能(参见例如美国专利No.5677425，专门在此引为参考)。对改变的抗体效应子功能的确定使用本文描述的分析方法或其它本领域已知的技术来进行。
重要的是，获得的抗体可以进行一种或多种分析，以评估与起始抗体相比任何的生物活性变化。例如，带有改变的Fc区的抗体结合补体或Fc受体的能力可以使用此处公开的分析方法和任何本领域已知的分析方法进行评估。
本发明的抗体的生产可以使用任何适当的技术进行，包括本文描述的技术和本领域的专业技术人员所熟知的技术。例如适当的蛋白序列，例如形成了抗体的部分或全部的相关恒定区如Fc区即CH2区和/或CH3结构域，并且包含了适当的被改变的残基，可以被合成，然后通过化学方法连接到抗体分子中的适当位置。
优选情况下，遗传工程技术被用来生产改变的抗体。优选的技术包括例如制备适当的引物用于聚合酶链反应(PCR)，以便编码了至少一部分IgG重链，例如Fc或恒定区(例如CH2和/或CH3)的DNA序列在一个或多个残基上被改变了。然后可以将这个区段与抗体的剩余部分如抗体的可变区以及在细胞中表达所需的调控元件进行可操作的连接。
本发明还包括了用于转化细胞系的载体、用于产生转化载体的载体、用转化载体转化的细胞系、用制备载体转化的的细胞系以及生产它们的方法。
优选情况下，被转化以生产带有改变的Fc区(即具有改变的效应子功能)的抗体的细胞系是不死的哺乳动物细胞系(例如CHO细胞)。
尽管用于生产带有改变的Fc区的抗体的细胞系优选为哺乳动物细胞系，但任何其它的细胞系，例如细菌或酵母的细胞系，也可以使用。
B、编码免疫和治疗剂的核酸
针对淀粉样沉积的免疫反应也可以通过给药编码用于被动免疫的抗体和它们的组分链的核酸来诱导。这样的核酸可以是DNA或RNA。编码免疫原的核酸区段一般连接到调控元件如启动子和增强子上，以便允许DNA区段在病人的目的靶细胞中表达。当希望在血细胞中表达以诱导免疫反应时，来自轻链或重链免疫球蛋白基因的启动子和增强子元件或CMV的主要中早期启动子和增强子适合于指导表达。相连的调控元件和编码序列通常被克隆在载体中。对于给药双链抗体而言，两条链可以被克隆在同一个的或分开的载体中。
有许多病毒载体系统可以使用，包括逆转录病毒系统(参见例如Lawrie和Tumin，Cur.Opin.Genet.Develop.3：102-109(1993))，腺病毒载体(参见例如Bett等，J.Virol.67：5911(1993))，腺伴随病毒载体(参见例如Zhou等，J.Exp.Med.179：1867(1994))，来自痘病毒科包括痘苗病毒和鸟痘病毒的病毒载体，来自α病毒属例如源自Sindbis和Semliki森林病毒的病毒载体(参见例如Dubensky等，J.Virol.70：508(1996))，委内瑞拉马脑炎病毒(参见Johnston等，US 5643576)和棒状病毒，例如水泡性口膜炎病毒(参见Rose，6168943)和乳头瘤病毒(Ohe等，Human Gene Therapy 6：325(1995)；Woo等，WO 94/12629；以及Xiao&Brandsma，Nucleic Acids.Res.24，2630-2622(1996))。
编码免疫原的DNA或含有它的载体可以被包装到脂质体中。适用的脂类和相关的类似物在Eppstein等US5208036、Felgner等US5264618、Rose等US5279833和Epand等US5283185中有描述。载体和编码免疫原的DNA也可以被吸附到微粒载体上或与其相连，其例子包括聚甲基丙烯酸甲酯聚合物和聚丙交酯和聚(丙交酯-乙交酯共聚物)，参见例如McGee等，J.Micro Encap.(1996)。
基因治疗载体或裸露的多核苷酸(例如DNA)可以通过施用于单个病人投送到体内，一般是通过全身给药(例如静脉内、腹膜内、鼻腔、胃部、皮内、肌内、皮下或颅内灌注)或局部给药(参见例如Anderson等，US5399346)。术语“裸露的多核苷酸”是指不与胶体状物质复合的多核苷酸。裸露的多核苷酸有时被克隆在质粒载体中。这样的载体还可以包括促进剂例如bupivacine(Weiner等，US5593972)。DNA也可以使用基因枪给药。参见Xiao&Brandsma，同上。编码免疫原的DNA被沉淀在细微金属珠的表面上。微粒用冲击波或膨胀的氦气加速，穿透组织达到几个细胞层的深度。例如由Agricetus，Inc.(Middleton WI)生产的AccelTM基因投送装置是适用的。此外，裸露的DNA也可以简单地通过将DNA点在用化学或机械刺激的皮肤上而透皮进入血流(参见Howell等，WO 95/05853)。
在另一种修改的方法中，编码免疫原的载体可以在离体投送到细胞，例如从单个病人体内移植出的细胞(例如淋巴细胞、骨髓抽出物、活组织切片)或全能性的供体造血干细胞中，然后将细胞重新植入到病人中，这通常是在筛选到整合了载体的细胞之后进行。
II、预防和治疗方法
本发明特别针对阿茨海默氏病和其它生成淀粉样疾病的治疗，这是在病人中产生有益的治疗反应(例如在病人中诱导Aβ的细胞吞噬作用，减少斑的负荷，抑制斑的形成，减轻神经性营养障碍，改善认知功能，和/或逆转、治疗或防止认知减退)例如以预防或治疗生成淀粉样疾病的条件下，给病人给药针对Aβ中的特异性表位的治疗性免疫药剂(例如人源化免疫球蛋白)来进行的。本发明也涉及了本发明公开的免疫药剂(例如人源化免疫球蛋白)在制备用于治疗或预防生成淀粉样疾病的药物中的应用。
一方面，本发明提供了预防或治疗与Aβ在病人的脑中淀粉样沉积有关的疾病的方法。这样的疾病包括阿茨海默氏病、Down氏综合症和认知缺损。后者可以伴随或不伴随生成淀粉样疾病的其它特征而出现。本发明的某些方法要求给病人给药有效剂量的能够特异性结合淀粉样沉积的某种成分的抗体。这样的方法对于在人类病人中预防或治疗阿茨海默氏病特别有用。示例的方法要求给药有效剂量的能够结合Aβ的抗体。优选的方法要求给药有效剂量的能够与Aβ的1-10位残基中的表位特异性结合的抗体，例如能够与Aβ的1-3位残基中的表位特异性结合的抗体，能够与Aβ的1-4位残基中的表位特异性结合的抗体，能够与Aβ的1-5位残基中的表位特异性结合的抗体，能够与Aβ的1-6位残基中的表位特异性结合的抗体，能够与Aβ的1-7位残基中的表位特异性结合的抗体，或能够与Aβ的3-7位残基中的表位特异性结合的抗体。在另一方面，本发明的特征在于给药能够与含有Aβ的游离N-端残基的表位结合的抗体。在另一方面，本发明的特征在于给药能够与Aβ的1-10位残基中的表位结合的抗体，其中Aβ的1位和/或7位残基是天冬氨酸。在另一方面，本发明的特征在于给药能够与Aβ肽特异性结合而不与全长的淀粉样肽前体蛋白(APP)结合的抗体。在另一方面，抗体的同种型是人IgG1。
在另一方面，本发明的特征在于给药能够在病人中与淀粉样沉积结合并诱导针对淀粉样沉积的清除反应的抗体。例如，这样的清除反应可以由Fc受体介导的细胞吞噬作用所实施。
本发明的治疗药剂一般来说是基本上纯的，不含不想要的污染物。这意味着药剂一般为至少大约50％w/w(重量/重量)纯，并且基本上不含有干扰性蛋白和污染物。有时药剂是至少大约80％w/w纯，更优选为至少90％或大约95％w/w纯。但是，使用常规的蛋白纯化技术，可以获得至少99％w/w的均一肽。
方法既可以用于无症状的病人也可以用于目前显示出疾病症状的病人。在这些方法中使用的抗体可以是人类的、人源化的、嵌合的或非人类的抗体或其片段(例如抗原结合片段)，并且可以是单克隆的，也可以是多克隆的，如本文所描述。在另一方面，本发明的特征在于给药从用Aβ肽免疫的人中获得的抗体，该人可以是准备用抗体进行治疗的病人。
在另一方面，本发明的特征在于以药物载体和抗体作为药物组合物给药。此外，抗体也可以通过给药编码至少一条抗体链的多核苷酸而施用给病人。多核苷酸在病人中表达产生了抗体链。任选地，多核苷酸也可以编码抗体的重链和轻链。多核苷酸在病人中表达产生了重链和轻链。在示例的实施方案中，监测病人的血液中被给药的抗体的水平。
因此，本发明满足了一个长期存在的、对用来预防或缓解与阿茨海默氏病有关的神经性疾病以及某些病人中的认知损伤的治疗方案的需要。
A、适合治疗的病人
适合治疗的病人包括有疾病危险但是还没有显示出症状的个体以及现在已经显示出症状的病人。对于阿茨海默氏病来说，实际上任何人，如果他或她活得足够长，都有患阿茨海默氏病的危险。因此，本方法可以预防性地给药给普通人群而不需要任何对受试患者的危险进行评估。本方法对于已知在遗传上有患阿茨海默氏病危险的个体来说特别有用。这样的个体包括那些有亲属患有该病的个体，以及那些其危险通过遗传或生化标记物分析被确定的个体。阿茨海默氏病患病危险的遗传标记物包括APP基因上的突变，特别是在717位以及670和671位上的突变，它们分别被称为Hardy和Swedish突变(参见Hardy，同上)。其它的危险标记物是早老素基因、PS1和PS2、ApoE4上的突变，以及AD、高胆固醇血症或动脉粥样硬化的家族史。现在患有阿茨海默氏病的个体可以从特征性的痴呆以及上述的危险因素的存在识别出来。此外，许多诊断测试可用来鉴定患有AD的病人。这包括测定CSF tau和Aβ42的水平。升高的tau和降低的Aβ42水平表明存在AD。患有阿茨海默氏病的个体也可以通过ADRDA标准进行诊断，这在实施例部分中讨论。
在没有显示出症状的病人中，治疗可以在任何年龄开始(例如10、20、30岁)。但是通常在病人达到40、50、60或70岁之前并不需要开始治疗。治疗一般需要在一段时期内使用多个剂量。治疗可以通过分析随时间变化的抗体水平来监测。如果反应下降，表明需要加强剂量。对于潜在的Down氏综合症病人，治疗可以在出生前通过将治疗药剂施用给母亲来开始，也可以在出生后马上开始。
B、治疗方案和剂量
在预防应用中，药物组合物或药物被给药易于患有、或有危险患阿茨海默氏病的病人，其量足够消除或减少疾病的危险，减轻疾病的严重性，或延缓疾病的发作，包括疾病的生化、组织学和/或行为学上的症状，以及在疾病发展过程中出现的并发症和中间的病理表型。在治疗应用中，组合物或药物被给药易于患有、或有危险患该病的病人，其量足够治愈、或至少部分阻止疾病的症状(生化、组织学和/或行为学上的)，包括在疾病发展过程中出现的并发症和中间的病理表型。
在某些方法中，给药药剂在还没有发展出特征性的阿茨海默氏病病理的病人中减少或消除了肌认知(myocognitive)损伤。足够实现治疗或预防性治疗的量被定义为治疗或预防有效剂量。在预防和治疗方案中，药剂经常以几种剂量给药直到产生足够的免疫反应。术语“免疫反应”或“免疫学反应”包括发展出针对受试者中的抗原的体液的(抗体介导的)和/或细胞的(由抗原特异性T细胞或它们的分泌产物介导的)反应。这样的反应可以是一个主动反应，即由给药免疫原而诱导，也可以是一个被动反应，即由给药免疫球蛋白或抗体或接触过抗原的T细胞而诱导。一般来说，免疫反应被监测，如果免疫反应开始减小就给药重复的剂量。
对于上述病症的治疗来说，本发明组合物的有效剂量依赖于许多不同的因素而变化，包括给药方法、靶位点、病人的生理状态、患者是人还是动物、其它施用的药物、以及处理是预防性的还是治疗性的。通常患者是人，但是非人类的哺乳动物包括转基因哺乳动物也可以被治疗。治疗剂量需要被滴定以最适化安全性和功效。
对于使用抗体的被动免疫来说，剂量范围从每公斤宿主体重大约0.0001到100mg、更经常从0.01到5mg(例如0.02mg/kg，0.25mg/kg，0.5mg/kg，0.75mg/kg，1mg/kg，2mg/kg等)。例如剂量可以是1mg/kg体重或10mg/kg体重或者在1-10mg/kg体重的范围内，优选至少为1mg/kg。在上述范围内中间的剂量值也包括在本发明的范围内。受试者的给药可以每天、隔日、每周或根据经验分析确定的任何其它方案进行。一个示例的治疗需要在一个延长的时期内，例如至少6个月内以多次剂量给药。另一个示例的治疗方案需要在每两周给药一次或一个月给药一次或每3-6个月给药一次。示例的计量方案包括每天连续给药1-10mg/kg或15mg/kg，隔天给药30mg/kg或每周给药60mg/kg。在某些方法中，两种或以上的具有不同特异性的单克隆抗体被同时给药，其中每种给药的抗体的剂量落入上述的范围内。
抗体通常给药多次。单次剂量之间的间隔可以是一周、一月或一年。间隔也可以是不规则的，正如通过测量病人血液中针对Aβ的抗体的水平所指示的那样。在某些方法中，剂量被调整到血浆中的抗体浓度为1-1000μg/ml，而在某些方法中调整到25-300μg/ml。此外，抗体也可以以缓释制剂的方式给药，在这种情况下只需要较少频率的给药。剂量和频率依赖于抗体在病人中的半衰期而变化。一般来说，人源化抗体显示出最长的半衰期，然后是嵌合抗体和非人类抗体。
给药的剂量和频率可以依赖于处理是预防性的还是治疗性的而变化。在预防性应用中，含有本发明抗体或其混合物的组合物被施用给还没有处于疾病状态的病人以增强病人的抵抗力。这样的量被定义为“预防有效剂量”。在这种应用中，准确的量还是依赖于病人的健康和总体免疫状态，但是一般范围从每剂0.1mg到25mg，特别是每剂0.5mg到2.5mg。相对低的剂量在一个长的时间期内以相对长的间隔给药。某些病人在他们的余生中持续接受治疗。
在治疗性应用中，有时需要相对高的剂量(例如从每剂大约1mg到200mg抗体，其中更常用的剂量是从5到25mg)以相对短的间隔给药，直到疾病的发展被减弱或终止，在优选情况下直到病人显示出部分或完全的改善病症。此后，病人可以采用预防性的方案给药。
编码抗体的核酸的剂量范围为每个病人从大约10ng到1g、100ng到100mg、1μg到10mg、或30-300μg DNA。感染性病毒载体的剂量变化范围从每剂10到100个病毒粒子或更多。
对于预防性和/或治疗性处理，治疗药剂可以以肠胃外、局部、静脉内、口服、皮下、动脉内、颅内、腹膜内、鼻腔内或肌内的方式给药。免疫原性药剂最典型的给药途径是皮下，尽管其它的途径同样有效。第二个最常见的途径是肌内注射。这种类型的注射最典型是在手臂或腿的肌肉中进行。在某些方法中，药剂被直接注射到积累了沉积的特定组织中，例如颅内注射。对于抗体的给药来说，肌内注射或静脉内灌注是优选的。在某些方法中，特定的治疗抗体被直接注射到颅内。在某些方法中，抗体以缓释组合物或装置的方式给药，例如MedipadTM装置。
本发明的药剂也可以任选与其它在治疗生成淀粉样疾病中至少部分有效的药剂结合起来一起给药。在阿茨海默氏病和Down氏综合症的情况下，淀粉样沉积发生在脑中，本发明的药剂也可以与其它能够增加本发明的药剂通过血-脑屏障的药剂结合起来一起给药。本发明的药剂也可以与其它能够增强治疗药剂进入靶细胞或组织例如脂质体等的药剂结合起来一起给药。这些药剂的共同给药可以减少为达到期望效果所需要的治疗药剂(例如治疗性抗体或抗体链)的剂量。
C、药物组合物
本发明的药剂通常以包含活性治疗试剂，即多种其它的可药用成分的药物组合物的形式给药。参见《Remington’s PharmaceuticalScience》(第15版，Mack出版公司，Easton，Pennsylvania(1980))。优选的方式依赖于所需的给药方式和治疗用途。依赖于所需的制剂，组合物中也可以包括可药用的、无毒性的载体或稀释剂，它们被定义为通常用来配制药物组合物以便给药给动物或人的载体。稀释剂的选择以不影响混合物的生物活性为根据。这样的稀释剂的例子是蒸馏水、生理磷酸盐缓冲液、Ringer氏溶液、葡萄糖溶液以及Hank氏溶液。此外，药物组合物或制剂也可以包括其它载体、佐剂或无毒、无治疗性、无免疫原性的稳定剂等。
药物组合物也可以包括大的、缓慢代谢的大分子，例如蛋白，多糖如壳聚糖、聚乳酸、聚羟基乙酸和共聚物(例如树脂乳剂官能化的琼脂糖凝胶(TM)、琼脂糖、纤维素等)，聚氨基酸，氨基酸共聚物和脂类聚集物(例如油滴或脂质体)。此外，这些载体可以作为免疫刺激试剂(即佐剂)。
对于肠胃外给药来说，本发明的药剂可以以可注射剂量的方式给药，这种药剂是物质的生理可接受的稀释剂与药用载体的溶液或悬浮液，所述药用载体可以是一种灭菌的液体，例如水油、盐水、甘油或乙醇。此外，辅助物质例如润湿剂或乳化剂、表面活性剂、pH缓冲物质等也可以出现在组合物中。药物组合物的其它成分是来源于石油、动物、蔬菜的成分或合成的成分，例如花生油、大豆油和矿物油。一般来说，二醇类物质例如丙二醇或聚乙二醇是优选的液体载体，特别是对可注射溶液而言。抗体可以以团注(depot injection)或植入制备物的方式给药，其配制方式允许活性成分的持续释放。一个示例的组合物包括5mg/mL单克隆抗体，配制在由50mM L-组氨酸、150mMNaCl组成的缓冲水溶液中，用HCl将pH调整到6.0。
一般来说，组合物被制成可注射的液体溶液或悬浮液；适合于溶解或悬浮于液体载体中的固体形式也可以在注射前制备。制备物也可以被乳化或密封在脂质体或微粒中，例如聚丙交酯、聚乙交脂或共聚物，以增强佐剂的效果，如前面所讨论的(参见Langer，Science 249：1527(1990)和Hanes，Advanced Drug Delivery Reviews 28：97(1997))。本发明的药剂可以以团注或植入制备物的方式给药，其配制方式允许活性成分的持续或脉动式释放。
适合于其它的给药方式的其他制剂包括口服、鼻腔内和肺部制剂、栓剂和透皮敷用。对于栓剂来说，结合剂和载体包括例如聚烷二醇或甘油三酯；这样的栓剂可以从含有0.5％到10％、优选为1％到2％的活性成分的混合物形成。口服制剂包括赋形剂，例如药物级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素和碳酸镁。这些组合物采取溶液、悬浮液、片剂、丸剂、胶囊、缓释制剂或粉剂的形式，并含有10％到95％的活性成分，优选为25％到70％的活性成分。
局部施用可以产生透皮的或皮内的投药。通过将药剂与霍乱毒素或其脱毒的衍生物或亚基或其它相似的细菌毒素(参见Glenn等，Nature391，851(1998))共同给药，可以使局部给药更加便利。共同给药可以通过将成分作为混合物或通过化学交联获得的结合分子、或表达为融合蛋白来使用而得以完成。
此外，透皮投药可以通过使用皮肤途径或使用转移体(transferosomes)来实现(Paul等，Eur.J.Immunol.25：3521(1995)；Cevc等，Biochem.Biophys.Acta 1368：210-15(1998))。
III、治疗过程的监控
本发明提供了在患有或易于患有阿茨海默氏病的病人中监控治疗，即监控给病人给药的治疗过程的方法。该方法既可用于监控对有症状的病人的治疗性治疗，也可用于监控对无症状的病人的预防性治疗。本方法对于监控被动免疫(例如测量被给药的抗体的水平)特别有用。
某些方法需要在给药剂量的药剂之前测定一个基线值，例如病人中的抗体水平或分布，并将它与治疗后的分布或水平值进行比较。水平值或分布显著增加(即在同样样品的重复测量中大于典型的实验误差幅度，被表示为这些测量值的平均值的标准偏差)表明正的治疗结果(即给药产生了预期的反应)。如果免疫反应的值没有明显的变化或者降低，表明了负的治疗结果。
在其它方法中，从对照人群测定一个水平或分布的对照值(即平均值和标准偏差)。一般来说，对照人群中的个体以前没有接受过治疗。然后将给药治疗药剂后病人的水平或分布的测量值与对照值进行比较。相对于对照值的显著增加(例如大于平均值的一个标准偏差)表明了正的或充分的治疗结果。缺少明显的增加或减少表明负的或不充分的治疗结果。一般来说，当连续给药时水平相对于对照值是增加的。如前所述，相对于对照值达到平台表明给药治疗可以中断，或者可以减少剂量和/或频率。
在其它方法中，水平或分布的对照值(如平均值和标准偏差)是从对照人群测定的，其中的个体已经经历了药剂的治疗，并且他们的水平或分布对治疗的反应已经达到了平台。将病人中测定的水平或分布值与对照值进行比较。如果病人中测量的水平与对照值没有明显的区别(例如超过一个标准偏差)，治疗可以中断。如果病人中的水平明显低于对照值，保证连续的给药。如果病人中的水平保持低于对照值，那么表明治疗需要改变。
在其他方法中，现在没有接受治疗但是以前经历了一个疗程的病人被检测抗体的水平或分布，以确定是否需要恢复治疗。病人中测定的水平或分布与以前在经过一个疗程治疗的病人中获得的值进行比较。相对于以前测量值的明显的减少(即在同样样品的重复测量中大于典型的实验误差的界限)表明治疗可以恢复。此外，病人中的测量值可以与在经历过一个疗程的病人人群中测定的对照值(平均值加标准偏差)进行比较。此外，病人中的测量值还可以与在经历过预防治疗并仍然没有表现出症状的病人人群中、或经历过治疗性治疗并表现出疾病特征减轻的病人人群中测定的对照值进行比较。在所有这些情况中，相对于对照值的明显减少(即大于标准偏差)表明治疗应该在病人中恢复。
典型的用于分析的组织样品是病人的血液、血浆、血清、粘液或脑脊液。样品被分析例如针对Aβ肽的抗体的水平或分布，例如人源化抗体的水平或分布。检测特异性针对Aβ的抗体的ELISA方法在实施例部分中描述。在某些方法中，被给药的抗体的水平或分布使用清除分析来确定，例如本文描述的体外细胞吞噬分析。在这些方法中，来自测试病人的组织样品与淀粉样沉积(例如来自PDAPP小鼠)和带有Fc受体的吞噬细胞相接触。然后监控随后发生的淀粉样沉积的清除。清除反应的出现和程度指示了在测试病人的组织样品中有效清除Aβ的抗体的存在和水平。
一般来说在被动免疫后抗体的分布在抗体浓度上显示出一个瞬时峰，随后指数性地降低。在没有进一步剂量的情况下，依赖于给药的抗体的半衰期，这种降低在几天到几个月的时期内达到治疗前的水平。
在某些方法中，在给药前测定病人中针对Aβ的抗体的基线值，在给药后马上测定第二个值以确定抗体的峰值水平，此后在不同的间隔时间在进行一个或多个测定以监测抗体水平的降低。当抗体水平降低到基线值或峰值与基线值差的预定的百分数(例如50％、25％或10％)时，需要给药另一剂抗体。在某些方法中，峰值或随后测量的水平减去背景值与以前测定的参比水平进行比较，以在其它病人中建立一种有益的预防性或治疗性处理方案。如果测量的抗体水平明显低于参比水平(例如少于在从治疗得到改善的病人人群中的平均值减一个标准偏差)，表明需要给药另一剂抗体。
其它的方法包括在治疗过程中检测任何本技术领域熟知的研究人员或医生常规依赖的生理症状(例如身体或精神上的症状)，以诊断或检测生成淀粉样疾病(例如阿茨海默氏病)。例如，人们可以检测认知缺损。后者是阿茨海默氏病和Down氏综合症的一个症状，但是也可以不伴随这些疾病的其它特征而发生。例如，认知缺损可以通过在治疗全过程中根据常规测定病人在小精神状态检查(Mini-MentalState Exam)中的分数而检测。
C、试剂盒
本发明还提供了用于进行上述检测方法的试剂盒。一般来说，这样的试剂盒包含了一种能够与针对Aβ的抗体特异性结合的试剂。试剂盒也可以包含标记物。为了检测针对Aβ的抗体，标记物一般是标记的抗独特型抗体的形式。为了检测抗体，试剂可以预先结合在固相上，例如在微量滴定板的孔上。一般来说，试剂盒也含有标签，为试剂盒的使用提供指导。标签也可以包括一张图或其它对应方案，提供测量的标记的水平与针对Aβ的抗体的水平的相关性。术语“标签”是指在一个试剂盒生产、运输、销售和使用过程中，任何时候贴在上面或伴随它的任何书写的或记录的材料。例如，术语“标签”包含了广告传单和小册子、包装材料、说明书、声频或视频卡带、计算机碟片以及直接印刷在试剂盒上的文字。
本发明还提供了诊断试剂盒，例如研究、检测盒和/或诊断试剂盒(例如用于进行体内成像)。这样的试剂盒一般包括一种与Aβ的表位结合的抗体，优选为1-10位残基中的表位。在优选情况下，抗体被标记，或者在试剂盒中包括第二个标记试剂。优选情况下，试剂盒被标注有说明书，以便进行所需的应用，例如进行体内成像分析。示例的抗体在本文中有描述。
D、体内成像
本发明提供了在病人中对淀粉样沉积进行体内成像的方法。这样的方法对阿茨海默氏病或对其易感性的诊断或诊断的确认是有用的。例如，这些方法可以用于表现出痴呆症状的病人。如果病人有异常的淀粉样沉积，那么病人就可能患有阿茨海默氏病。这些方法也可以用于无症状的病人。存在异常的淀粉样沉积表明对将来有症状的疾病有易感性。这些方法也可用于监测在以前已经被诊断为阿茨海默氏病的病人中疾病的进展和/或对治疗的反应。
这些方法的实施是将试剂例如结合Aβ的抗体给药病人，然后在试剂结合后检测它。优选的抗体在病人中结合Aβ沉积但是不结合全长的APP多肽。与Aβ的1-10位氨基酸中的表位结合的抗体是特别优选的。在某些方法中，抗体与Aβ的7-10位氨基酸中的表位结合。这样的抗体一般结合但不诱导大量的清除反应。在另一些方法中，抗体与Aβ的1-7位氨基酸中的表位结合。这样的抗体一般结合并且诱导针对Aβ的清除反应。但是，清除反应可以通过使用缺少全长的恒定区例如Fabs的抗体片段来避免。在某些方法中，同样的抗体既可用做治疗试剂也可用做诊断试剂。一般来说，与Aβ的10位残基C-端的表位结合的抗体并不显示出同与1-10位残基内的表位结合的抗体一样强的信号，推测是因为C-端的表位在淀粉样沉积中是不可进入的。因此这样的抗体不是优选的。
诊断试剂可以通过静脉内注射给药到病人的身体中，也可以通过颅内注射或在颅骨上钻一个孔直接给药到脑中。试剂的剂量应该在与治疗方法中所用的相同的范围内。一般来说试剂是标记的，尽管在某些方法中，与Aβ有亲和性的一级试剂没有标记，而是使用了二级标记试剂来结合一级试剂。标记的选择依赖于检测的方法。例如荧光标记适合于光学检测。使用顺磁标记适合于X线断层摄影检测而不需要外科的介入。放射性标记也可以使用PET或SPECT检测。
诊断通过将标记位点的数量、大小和/或强度与相应的基线水平比较而进行。基线值可以代表在无病的个体人群中的平均水平。基线值也可以代表在同一个病人中以前测定的水平。例如，基线值可以在病人开始治疗前测定，然后将治疗后的测定值与基线值进行比较。相对于基线的值的减少表明对治疗的正反应。
本发明将通过下面非限制性的实施例进行更全面的描述。
实施例
下列的序列标志符在整个实施例部分被用来指称免疫球蛋白链可变区的核苷酸和氨基酸序列。
            VL核苷酸  VL氨基酸  VH核苷酸  VH氨基酸
抗体
            序列      序列      序列      序列
            SEQ ID    SEQ ID    SEQ ID    SEQ ID
12B4
            NO：1     NO：2     NO：3     NO：4
人源化      SEQ ID    SEQ ID    SEQ ID    SEQ ID
12B4v1      NO：5     NO：6     NO：7     NO：8
人源化      SEQ ID    SEQ ID    SEQ ID    SEQ ID
12B4v2      NO：5     NO：6     NO：9     NO：10
人源化      SEQ ID    SEQ ID    SEQ ID    SEQ ID
12B4v3      NO：5     NO：6     NO：11    NO：12
            SEQ ID    SEQ ID
种系A19
            NO：29    NO：30
Kabat ID    SEQ ID    SEQ ID
005036      NO：31    NO：32
Kabat ID                        SEQ ID    SEQ ID
D00333                          NO：33    NO：34
                                SEQ ID    SEQ ID
种系VH4-61
                                NO：35    NO：36
                                SEQ ID    SEQ ID
种系VH4-39
                                NO：37    NO：38
在本文中使用时，含有如SEQ ID NOs：1-12或29-38中任何一个所示的VL和/或VH序列的抗体或免疫球蛋白序列既可以包含全长的序列，也可以只包含成熟序列(即不带有信号或前导肽的成熟肽)。
实施例I、小鼠12B4可变区的克隆和测序
12B4 VH的克隆和序列分析。使用来自杂交瘤细胞的mRNA和标准的克隆方法，通过RT-PCR和5’RACE对来自杂交瘤细胞的12B4VH和VL区进行了克隆。来自两个编码推测的12B4 VH结构域的独立的cDNA克隆的核苷酸序列(SEQ ID NO：3)和推导的氨基酸序列(SEQ ID NO：4)分别被显示在表2和表3中。
表2：小鼠12B4 VH DNA序列
ATGGACAGGCTTACTTCCTCATTCCTGCTGCTGATTGTCCCTG CATATGTCCTGTCCCAGGTTACTCTGAAAGAGTCTGGCCCTGGGATATTGCAGCCCTCCCAGACCCTCAGTCTGACTTGTTCTTTCTCTGGGTTTTCACTGAGCACTAATGGTATGGGTGTGAGCTGGATTCGTCAGCCTTCAGGAAAGGGTCTGGAGTGGCTGGCACACATTTACTGGGATGAGGACAAGCGCTATAACCCATCCCTGAAGAGCCGGCTCACAATCTCCAAGGATACCTCTAACAATCAGGTATTCCTCAAGATCACCAATGTGGACACTGCTGATACTGCCACATACTACTGTGCTCGAAGGAGGATCATCTATGATGTTGAGGACTACTTTGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCAG(SEQ ID NO：3)
*下划线部分为前导肽
表3：小鼠12B4 VH氨基酸序列
mdrltssflllivpayvlsqVTLKESGPGILQPSQTLSLTCSFSGFSLStngmgvsWIRQPSGKGLEWLAhiywdedkrynpslksRLTISKDTSNNQVFLKITNVDTADTATYYCARrriiydvedyfdyWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO：4)
*前导肽和CDRs用小写字母表示。
12B4 VL的克隆和序列分析。以与VH区类似的方式对12B4的轻链可变区VL区进行了克隆。来自两个编码推测的12B4 VL结构域的独立的cDNA克隆的核苷酸序列(SEQ ID NO：1)和推导的氨基酸序列(SEQ ID NO：2)分别被显示在表4和表5中。
表4：小鼠12B4 VL DNA序列
ATGAAGTTGCCTGTTAGGCTGTTGGTGCTGATGTTCTGGATTC CTGCTTCCAGCAGTGATGTTTTGATGACCCAAACTCCACTCTCCCTGCCTGTCAGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAACATTGTTCATAGTAATGGAAACACCTATTTAGAATGGTACCTGCAGAAACCAGGCCAGTCTCCAAAGCTCCTGATCTACAAAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCAAGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGAGTTTATTACTGCTTTCAAGGTTCACATGTTCCGCTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAAC(SEQ IDNO：1)
*下划线部分为前导肽
表5：小鼠12B4 VL氨基酸序列
mklpvrllvlmfwipasssDVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCrssqnivhsngntyleWYLQKPGQSPKLLIYkvsnrfSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCfqgshvpltFGAGTKLELK(SEQ ID NO：2)
*前导肽和CDRs用小写字母表示。
12B4的VL和VH序列满足功能性V区的标准，即它们含有从起始的甲硫氨酸到C区的连续的ORF，并且享有免疫球蛋白V区基因的保守的残基特征。从N-末端到C-末端，轻链和重链都含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4结构域。每个结构域的氨基酸的赋值参照Kabat等(同上)的编号惯例。
实施例II、嵌合的12B4抗体的表达
嵌合的12B4抗体的表达：重链和轻链可变区被重新改造以编码分别位于VDJ或CJ结合区下游的拼接供体序列，并将重链克隆到哺乳动物表达载体pCMV-hγ1中，轻链克隆到pCMV-hκ1中。这些载体将人γ1和Ck恒定区编码为位于插入的可变区盒下游的外显子片段。在证实了序列后，重链和轻链表达载体被共转染到COS细胞中。不同的重链克隆独立地与不同的嵌合轻链克隆共转染，以证实结果的再现性。条件培养基在转染48小时后收集，并使用Western杂交分析来检验抗体的产生，或使用ELISA分析Aβ的结合。多个转染子都表达重链+轻链的组合，这可以在Western杂交中用山羊抗人IgG(H+L)抗体来识别。
嵌合的12B4抗体与Aβ的直接结合通过ELISA分析测试。图5显示了嵌合的12B4被发现能够以高的亲和性与Aβ结合，嵌合的和人源化的3D6也显示出同样的情况(图5)。(3D6的克隆、鉴定和人源化被描述在美国专利申请系列号10/010942中，在此以其全文引为参考)。此外，基于ELISA的竞争性抑制分析显示，嵌合的12B4和鼠12B4抗体与生物素化的鼠和嵌合的3D6以及10D5(一种IgGγ1同种型鼠单克隆抗体，与12B4识别同样的表位)在结合Aβ时有同等的竞争力。图6显示嵌合的12B4(虚线、空心三角形)与它的非生物素化的鼠对应物(实线、实心三角形)以同等的能力与生物素化的鼠12B4竞争与Aβ1-42肽的结合。
实施例III、mAb 12B4在PDAPP小鼠种对各种神经病理终点的功效
本实施例描述了鼠mAb 12B4对各种神经病理终点的功效。描述了两种mAbs，即12B4和3D6的比较。两种mAbs都是IgG2a同种型，并且都结合在Aβ肽N-端内的表位。
免疫
PDAPP小鼠用IgGγ2a的两种同种型mAb 12B4(识别Aβ的3-7位)或mAb 3D6(识别Aβ的1-5位)进行被动免疫。12B4的测试剂量是10mg/kg。3D6以3种不同的剂量10mg/kg、1mg/kg和10mg/kg每月给药一次(1x4)。以一个无关的IgGγ2a抗体(TY 11/15)和PBS注射液作为对照。用Aβ肽主动免疫作为比较。每组分析20到35只动物。
神经病理终点分析包括淀粉样负荷和神经性负荷。
淀粉样负荷
前皮质被淀粉样沉积所占据的程度通过用3D6免疫染色然后进行定量成像分析来确定。分析的结果显示在表6中。所有的免疫治疗(例如用12B4、3D6(所有实验剂量)和Aβ肽免疫)都导致淀粉样负荷的显著减少。
神经性负荷
以前已经观察到10D5不能明显地减少神经性负荷，表明IgGγ2a同种型的抗体而不是其它同种型的抗体，能够在阿茨海默氏病的动物模型中减少神经性负荷(数据未显示)。因此，在用12B4和3D6(IgGγ2a的两种同种型)被动免疫后PDAPP小鼠中的神经性负荷通过用抗APP抗体8E5与脑切片进行免疫染色，然后进行定量成像分析来确定。在紧邻淀粉样斑的周围出现营养不良的轴突(例如带有球状外表的轴突)表明存在神经性营养障碍。分析的结果显示在表7中。这些数据表明用12B4进行治疗最显著地减少了神经性负荷。相反，3D6没有明显地减少神经性负荷。
Figure G038058162D00651
上述结果表明用IgGγ2a同种型的Aβ抗体进行治疗对于减少神经性负荷来说可能是必要的、但不是充分的。通过不同的表位(即Aβ的3-7位)结合Aβ对于在PDAPP小鼠中减轻这种病理可能也是必需的。
在阿茨海默氏病的PDAPP小鼠模型中各种神经病理终点的特征为专业技术人员在设计合适的人治疗免疫方案中提供了可使用的有价值的信息。例如，在人类受试者中神经性负荷的减少可以使用能够与Aβ的3-7位残基中的表位结合的IgG1亚型(即小鼠IgGγ2a亚型在人类中的等同物)的12B4的人源化版本来实现。
实施例IV、离体筛选分析抗体针对淀粉样沉积的活性
为了检查抗体对斑清除的影响使用了一种离体分析方法，其中原始的小神经胶质细胞与PDAPP小鼠或人AD脑的未固定的恒冷切片一起培养。小神经胶质细胞从新生的DBA/2N小鼠(1-3天)的大脑皮层获得。皮层在含有50μg/ml DNase I(Sigma)的HBSS-(Hank氏平衡盐溶液，Sigma)中机械剥离。剥离的细胞用100μm的细胞过滤器(Falcon)过滤，并在1000rpm离心5分钟。沉淀在生长培养基(高葡萄糖的DMEM，10％FBS、25ng/ml重组的鼠GM-CSF(rmGM-CSF))中重新悬浮，细胞以每个T-75塑料培养瓶两个脑的密度铺板。7到9天后，培养瓶在有轨摇床上在37℃以200rpm旋转2小时。细胞悬浮液在1000rpm离心，重新悬浮在分析培养基中。
10μm的PDAPP小鼠或人AD脑(尸体解剖时间间隔小于3小时)的恒冷切片被固定在聚赖氨酸包被的圆形玻璃盖玻片上解冻，并放置在24孔组织培养板的孔中。盖玻片用分析培养基洗涤两次，所述培养基组成为H-SFM(无杂交瘤血清培养基，Gibco BRL)以及1％FBS、谷氨酰胺、青霉素/链霉素和5ng/ml rmGM-CSF(R&D)。以2倍浓度(终浓度5μg/ml)加入对照或抗Aβ抗体(12B4)，放置1小时。然后将小神经胶质细胞以0.8x106细胞/ml分析培养基的密度接种。培养物在增湿的培养箱中(37℃，5％CO2)维持24小时或以上。在培养结束后，培养物用4％的聚甲醛固定，并用0.1％Triton-X100使其可透过。切片用生物素化的3D6然后用链亲和素/Cy3缀合物(JacksonImmunoResearch)染色。外源的小神经胶质细胞通过核染色(DAPI)可视化。培养物用一个倒置荧光显微镜(Nikon，TE300)观察，并用SPOT数码相机使用SPOT软件(Diagnostic instruments)进行显微照相。
当用PDAPP脑切片进行分析时，在存在不具有体内功效的对照抗体的情况下，β-淀粉样斑保持完整，没有观察到细胞吞噬作用。相反，当邻近的切片在存在3D6或12B4的情况下培养时，淀粉样沉积大部分消失，小神经胶质细胞显示出大量含有Aβ的吞噬泡(图7)。用AD脑切片得到了同样的结果3D6(人源化版本)和嵌合的12B4诱导AD斑的细胞吞噬作用，而对照的IgG1无效(图8A-B)。
实施例II和III中的数据证实了克隆的12B4可变区的功能。
实施例V、12B4的人源化
A、12B4人源化抗体，版本1
同源性/分子模型的建立。为了鉴定鼠12B4抗体中关键的结构框架残基，基于最接近的鼠抗体的结构为重链和轻链建立了三维模型。出于这个目的，一个名为2PCP的抗体被选择作为建立12B4轻链模型的模板(PDB ID：2PCP，Lim等，(1998)J.Biol.Chem.273：28576)，而一个名为1ETZ的抗体被选择作为建立12B4重链模型的模板(PDB ID：1ETZ，Guddat等，(2000)J.Mol.Biol.302：853)。12B4与这些抗体的轻链和重链的氨基酸序列的比对显示出2PCP和1ETZ抗体与12B4享有显著的序列同源性。此外，被选择的抗体的CDR环与12B4的CDR环同属于一个相同的典型Chothia结构类型。因此，2PCP和1ETZ被首先选择作为已解析结构的抗体为12B4建立同源性模型。
基于上述抗体，12B4可变区的第一个通过的同源性模型是使用Look&SegMod Modules GeneMine(v3.5)软件包建立的。该软件从Molecular Applications Group(Palo Alto，CA)购买，获得了永久的使用许可。该软件包，其作者为Michael Levitt和Chris Lee博士，方便了建立分子模型的过程，使包括在已知结构的模板上基于序列同源性建立一级序列的结构模型中的步骤自动化。经过在UNIX环境下的SiliconGraphics IRIS工作站中的运算，模型的结构被一系列能量最小化步骤自动改进，除去不理想的原子接触，并最适化静电和范德华相互作用。使用的建模能力建立进一步改进的模型。
人受体抗体序列的选择。合适的人受体抗体序列是通过将小鼠可变区的氨基酸序列与已知的人抗体的序列进行计算机比较而鉴定出来的。12B4重链和轻链的比较分别进行。具体来说，其框架序列与鼠VL和VH框架区表现出高度序列同一性的人抗体的可变结构域是通过利用NCBI BLAST(可以通过国立卫生研究院NCBI互联网服务器公开进入)用各自的鼠框架序列在Kabat数据库中查询而鉴定的。
基于下列标准选择了两个候选序列作为受体序列：(1)与受试序列的同源性；(2)与供体序列共有典型的CDR结构；以及(3)在框架区不含任何稀有的氨基酸残基。为VL选择的受体序列是Kabat ID号(KABID)005036(GenBank登记号X67904)，而为VH选择的是KABID 000333(GenBank登记号X54437)。第一版的人源化12B4抗体利用了这些选择的受体抗体序列。
氨基酸残基的取代。如同前面注意到的，本发明的人源化抗体含有基本上来自人免疫球蛋白(受体免疫球蛋白)的可变框架区和基本上来自名为12B4的小鼠免疫球蛋白(供体免疫球蛋白)的互补决定区。在鉴定了12B4的互补决定区和适当的人受体免疫球蛋白后，下一步是确定这些组分中的哪个残基，如果有的话，被取代以最适化获得的人源化抗体的性质。
重构的轻链可变区：
重构的轻链可变区的氨基酸比对被显示在图1中。受体框架(Kabid005036)是从与鼠可变区相应的同样的人亚型中选择出来的，没有稀有的框架残基，并且CDRs属于同样的Chothia典型结构组。指定了一个单个的回复突变(I2V)，这个残基决定了典型性分类。第一版重构的VL是完全种系的。
重构的重链可变区：
重构的重链可变区的氨基酸比对被显示在图2中。受体框架(Kabid000333)是从与鼠可变区相应的同样的人亚型中选择出来的，没有稀有的框架残基，并且CDRs属于同样的Chothia典型结构组。鼠VH链的结构模型以及Kabid 000333与鼠序列的氨基酸比对显示出在第一版(v1)重构的重链重有9个回复突变：L2V、V24F、G27F、I29L、I48L、G49A、V67L、V71K和F78V(Kabat编号)。在图2显示的氨基酸比对中回复突变用星号着重注明。
在9个回复突变中有4个被模型指定，因为这些残基是典型的残基(V24F、G27F、I29L和V71K，用实心填充的框指示)即由于邻近CDR残基可能对抗原的结合有贡献的框架残基。在第二重要的残基类型，即参与VH-VL包装相互作用的界面残基(用虚线框指示)中不必需有回复突变。剩余的5个回复突变残基(L2V、I48L、G49A、V67L和F78V，Kabat编号)都在微调的类型中(对CDR构象没有直接的贡献，图2中的深色点画框)。
第二版的设计保留了最低数量的非CDR鼠残基。L2V的回复突变导入了非种系的变化(当使用VH4-61作为种系参照时)，而这个回复突变在重链的第二版中被消除了，将它恢复成种系。其余4个微调类型的回复突变在重链的第二版中也被恢复了(I48L、G49A、V67L和F78V)。因此第二版包含了总共5个非CDR的鼠残基(在VL中1个，以及在VH中4个)。第三版的设计恢复了5个微调残基中的两个(I48L和F78V)，因为模型表明它们可能是较重要的微调残基。因此第三版含有总共7个非CDR的鼠残基。
人源化12B4的第一、二、三版中包含的变化的概要显示在表8中。
表8、第一版人源化12B4中的变化的概要
  变化   VL(111个残基)   VH(123个残基)
  人→鼠：框架   1/111   9/123
  CDR1   8/16   7/7
  CDR2   3/7   8/16
  CDR3   6/8   10/13
  人→鼠总数   18/111(16％)   34/123(28％，第二版23％)
  鼠→人：框架   10/111   16/123
  回复突变说明   1、I12V：典型位置   2、典型：V24F、G27F、I29L和V71K3、包装：无4、微调：L2V*、I48L#、G49A*、V67L*和F78V#
  受体说明   5、KABID 005036/GenBankAcc#-X679046、CDRs来自与供体小鼠相同的典型结构组；7、来自SLE病人的抗心磷脂/ss DNA自身抗体   8、KABID 000333/GenBankAcc#-X544379、CDRs来自与供体小鼠相同的典型结构组；10、来自RA病人的类风湿因子mAb
*在第二和第三版中消除；
#在第二版中消除，但在第三版中恢复。
表9和10分别显示了不同的轻链和重链的Kabat编号的要点。
表9、轻链的Kabat编号的要点
                   小鼠     人       KABID
KAB#   #    类型                             A19-株系    注释
                   12B4 VL  12B4 VL  005036
1      1    FR1    D        D        D       D
                                                         典型的——在第
2      2           V        V        I       I           1、2、3版中回复
                                                         突变
3      3           L        V        V       V
4      4           M        M        M       M
5      5           T        T        T       T
6      6           Q        Q        Q       Q
7      7           T        S        S       S
8      8           P        P        P       P
9      9           L        L        L       L
10     10          S        S        S       S
11     11          L        L        L       L
12     12          P        P        P       P
13     13          V        V        V       V
14     14          S        T        T       T
15     15          L        P        P       P
16     16          G        G        G       G
17     17          D        E        E       E
18     18          Q        P        P       P
19     19          A        A        A       A
20     20          S        S        S       S
21     21          I        I        I       I
22     22          S        S        S       S
23     23          C        C        C       C
24     24   CDR1   R        R        R       R
25     25          S        S        S       S
26     26          S        S        S       S
27     27          Q        Q        Q       Q
27A    28          N        N        S       S
27B    29          I        I        L       L
27C    30          V        V        L       L
27D    31          H        H        H       H
27E    32          S        S        R       S
28    33           N       N       Y       N
29    34           G       G       G       G
30    35           N       N       Y       Y
31    36           T       T       N       N
32    37           Y       Y       Y       Y
33    38           L       L       L       L
34    39           E       E       D       D
35    40    FR2    W       W       W       W
36    41           Y       Y       Y       Y
37    42           L       L       L       L
38    43           Q       Q       Q       Q
39    44           K       K       K       K
40    45           P       P       P       P
41    46           G       G       G       G
42    47           Q       Q       Q       Q
43    48           S       S       S       S
44    49           P       P       P       P
45    50           K       Q       Q       Q
46    51           L       L       L       L
47    52           L       L       L       L
48    53           I       I       I       I
49    54           Y       Y       Y       Y
50    55    CDR2   K       K       L       L
51    56           V       V       G       G
52    57           S       S       S       S
53    58           N       N       N       N
54    59           R       R       R       R
55    60           F       F       A       A
56    61           S       S       S       S
57    62    FR3    G       G       G       G
58    63           V       V       V       V
59    64           P       P       P       P
60    65           D       D       D       D
61    66           R       R       R       R
62    67           F       F       F       F
63    68           S       S       S       S
64    69           G       G       G       G
65    70            S       S       S       S
66    71            G       G       G       G
67    72            S       S       S       S
68    73            G       G       G       G
69    74            T       T       T       T
70    75            D       D       D       D
71    76            F       F       F       F
72    77            T       T       T       T
73    78            L       L       L       L
74    79            K       K       K       K
75    80            I       I       I       I
76    81            S       S       S       S
77    82            R       R       R       R
78    83            V       V       V       V
79    84            E       E       E       E
80    85            A       A       A       A
81    86            E       E       E       E
82    87            D       D       D       D
83    88            L       V       V       V
84    89            G       G       G       G
85    90            V       V       V       V
86    91            Y       Y       Y       Y
87    92            Y       Y       Y       Y
88    93            C       C       C       C
89    94    CDR3    F       F       M       M
90    95            Q       Q       Q       Q
91    96            G       G       A       A
92    97            S       S       L       L
93    98            H       H       Q       Q
94    99            V       V       T       T
95    100           P       P       P       P
96    101           L       L       Y
97    102           T       T       T
98    103    FR4    F       F       F
99    104           G       G       G
100   105           A       Q       Q
101   106           G       G       G
102    107            T       T       T
103    108            K       K       K
104    109            L       L       L
105    110            E       E       E
106    111            L       I       I
106A   112            K       K       K
表1G、重链的Kabat编号的要点
                   小鼠
KAB                        人12B4  KABID   VH4-39  VH4-61
      #    类型    12B4                                      注释
#                          VHv1    000333  种系    种系
                   VH
1     1    FR1     Q       Q       Q       Q       Q
                                                             微调的——只
2     2            V       V       L       L       V         在第1版中回
                                                             复突变
3     3            T       Q       Q       Q       Q
4     4            L       L       L       L       L
5     5            K       Q       Q       Q       Q
6     5            E       E       E       E       E
7     7            S       S       S       S       S
8     8            G       G       G       G       G
9     9            P       P       P       P       P
10    10           G       G       G       G       G
11    11           I       L       L       L       L
12    12           L       V       V       V       V
13    13           Q       K       K       K       K
14    14           P       P       P       P       P
15    15           S       S       S       S       S
16    16           Q       E       E       E       E
17    17           T       T       T       T       T
18    18           L       L       L       L       L
19    19           S       S       S       S       S
20    20           L       L       L       L       L
21    21           T       T       T       T       T
22    22           C       C       C       C       C
23    23           S       T       T       T       T
                                            典型的——在
24     24          F    F    V    V    V    第1、2、3版
                                            中回复突变
25     25          S    S    S    S    S
26     26          G    G    G    G    G
                                            典型的——在
27     27          F    F    G    G    G    第1、2、3版
                                            中回复突变
28     28          S    S    S    S    S
                                            典型的——在
29     29          L    L    I    I    V    第1、2、3版
                                            中回复突变
30     30          S    S    S    S    S
31     31  CDR1    T    T    R    S    S
32     32          N    N    G    S    G
33     33          G    G    S    S    G
34     34          M    M    H    Y    Y
35     35          G    G    Y    Y    Y
35A    36          V    V    W    W    W
35B    37          S    S    G    G    S
36     38  FR2     W    W    W    W    W
37     39          I    I    I    I    I
38     40          R    R    R    R    R
39     41          Q    Q    Q    Q    Q
40     42          P    P    P    P    P
41     43          S    P    P    P    P
42     44          G    G    G    G    G
43     45          K    K    K    K    K
44     46          G    G    G    G    G
45     47          L    L    L    L    L
46     48          E    E    E    E    E
47     49          W    W    W    W    W
                                            微调的——只
48     50          L    L    I    I    I    在第1、3版
                                            中回复突变
                                            微调的——只
59     51          A    A    G    G    G
                                            在第1版中回
                                           复突变
50    52  CDR2    H    H    S    S    Y
51    53          I    I    I    I    I
52    54          Y    Y    Y    Y    Y
53    55          W    W    Y    Y    Y
54    56          D    D    S    S    S
55    57          E    E    G    G    G
56    58          D    D    N    S    S
57    59          K    K    T    T    T
58    60          R    R    Y    Y    N
59    61          Y    Y    F    Y    Y
60    62          N    N    N    N    N
61    63          P    P    P    P    P
62    64          S    S    S    S    S
63    65          L    L    L    L    L
64    66          K    K    K    K    K
65    67          S    S    S    S    S
66    68  FR3     R    R    R    R    R
                                           微调的——只
67    69          L    L    V    V    V    在第1版中回
                                           复突变
68    70          T    T    T    T    T
69    71          I    I    I    I    I
70    72          S    S    S    S    S
                                           典型的——在
71    73          K    K    V    V    V    第1、2、3版
                                           中回复突变
72    74          D    D    D    D    D
73    75          T    T    T    T    T
74    76          S    S    S    S    S
75    77          N    K    K    K    K
76    78          N    N    N    N    N
77    79          Q    Q    Q    Q    Q
                                           微调的——在
78    80          V    V    F    F    F    第1、3版中
                                           回复突变
79    81          F    S    S    S    S
80      82           L    L    L    L    L
81      83           K    K    K    K    K
82      84           I    L    L    L    L
82A     85           T    S    S    S    S
82B     86           N    S    S    S    S
82C     87           V    V    V    V    V
83      88           D    T    T    T    T
84      89           T    A    A    A    A
85      90           A    A    A    A    A
86      91           D    D    D    D    D
87      92           T    T    T    T    T
88      93           A    A    A    A    A
89      94           T    V    V    V    V
90      95           Y    Y    Y    Y    Y
91      96           Y    Y    Y    Y    Y
92      97           C    C    C    C    C
93      98           A    A    A    A    A
94      99           R    R    R    R    R
95      100  CDR3    R    R    L
95A     -            -    -    G
96      101          R    R    P
97      102          I    I    D
98      103          I    I    D
99      104          Y    Y    Y
100     105          D    D    T
100A    106          V    V    L
100B    107          E    E    D
100C    108          D    D    G
100D    109          Y    Y    -
100E    110          F    F    M
101     111          D    D    D
102     112          Y    Y    V
103     113  FR4     W    W    W
104     114          G    G    G
105     115          Q    Q    Q
106     116          G    G    G
107     117          T    T    T
108    118        T    T    T
109    119        L    V    V
110    120        T    T    T
111    121        V    V    V
112    122        S    S    S
113    123        S    S    S
优选的人源化抗体表现出与Aβ的特异性结合亲和性为至少107、108、109或1010M-1。通常人源化抗体与Aβ的结合亲和性的上限在12B4的结合亲和性(即大约109M-1)的3、4、或5倍的范围内。结合亲和性的下限通常也在12B4的结合亲和性的3、4、或5倍的范围内。
第一版人源化12B4 VH和VL的装配和表达。图9a示意性地表示了PCR介导的第一版人源化VL的装配策略。图9b示意性地表示了PCR介导的第一版人源化VH的装配策略。表11显示了用于PCR介导的第一版人源化12B4的装配的引物。
Figure G038058162D00791
等摩尔比的VHv1A+VHv1B和VHv1C+VHv1D合成片段在分开的反应试管中使用标准步骤进行退火配对。A+B退火反应物用PCR方法进行装配，使用A+B正向引物和A+B反向引物在60℃退火，共25个循环。同样C+D的退火反应物使用PCR引物C+D正向引物和C+D反向引物在同样条件下进行装配。PCR装配的5’A+B半分子和3’C+D半分子被凝胶纯化以用于最后的PCR介导的组装。全长的V区的装配是通过将装配的V区的5’A+B半分子和3’C+D半分子混合、退火、以及通过PCR延伸，使用VHv1A+B正向引物和VHv1C+D反向引物。以这种方式装配的全长VH和VL区被凝胶纯化，并克隆到pCRScript中进行DNA序列证实。
人源化12B4VL(第一版)(SEQ ID NO：5)和12B4VH(第一版)(SEQ ID NO：7)的核苷酸序列分别被列于下表12和13中。
表12、人源化12B4VLv1的核苷酸序列
ATGAGGCTCCCTGCTCAGCTCCTGGGGCTGCTAATGCTCTGGGTCTCTGGATCCAGTGGGGATGTTGTGATGACTCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCACCCCTGGAGAGCCGGCCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTCAGAACATTGTTCATAGTAATGGAAACACCTATTTGGAATGGTACCTGCAGAAGCCAGGGCAGTCTCCACAGCTCCTGATCTACAAAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCTGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGCACAGATTTTACACTGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTACTGCTTTCAAGGTTCACATGTTCCGCTCACGTTCGGTCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAAC
表13、人源化12B4VHv1的核苷酸序列
ATGAAGCACCTGTGGTTCTTCCTCCTGCTGGTGGCAGCTCCCAGATGGGTCCTGTCCCAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTTTCTCTGGTTTTTCCCTGAGCACTAATGGTATGGGTGTGAGCTGGATCCGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGCTGGCACACATCTATTGGGATGAGGACAAGCGCTATAACCCATCCCTCAAGAGTCGACTCACCATATCAAAGGACACGTCCAAGAACCAGGTATCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGCAGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAAGGAGGATCATCTATGATGTTGAGGACTACTTTGACTACTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAG
B、第二版人源化12B4抗体
产生的第二版人源化12B4具有第一版中指明的各个取代，除了2位残基的L→V取代、48位残基的I→L取代、49位残基的G→A取代、67位残基的V→L取代和78位残基的F→V取代之外。第二版人源化12B4的轻链和重链的核苷酸序列分别显示在SEQ ID NOs：5和9中。第二版人源化12B4的轻链和重链的氨基酸序列分别显示在SEQ IDNOs：6和10中。
C、第三版人源化12B4抗体
产生的第三版人源化12B4具有第一版中指明的各个取代，除了2位残基的L→V取代、49位残基的G→A取代和67位残基的V→L取代之外。第三版人源化12B4的轻链和重链的核苷酸序列分别显示在SEQ ID NOs：5和11中。第三版人源化12B4的轻链和重链的氨基酸序列分别显示在SEQ ID NOs：6和12中。
实施例VI、人类受试者的预防和治疗
进行了单剂的I期临床试验以确定在人中的安全性。治疗药剂以增加的剂量给药不同的病人，从大约为推测功效水平的0.01开始，以3倍的倍数增加，直至达到大约为小鼠有效剂量的10倍的水平。
进行II期临床试验以确定治疗效果。使用阿茨海默氏病及相关的紊乱协会(ADRDA)对于可能的AD的判断标准所定义的患有早期到中期阿茨海默氏病的病人被选择。合适的病人在小精神状态测验(MMSE)中的得分在12-26的范围内。其它的选择标准是病人可能在研究期间保持存活以及没有复杂的情况例如相伴使用了其它可能有干扰作用的药物治疗。病人功能的基线评估使用经典的心理测验来进行，例如MMSE和ADAS，后者是一种综合的标度，用于评估患有阿茨海默氏病的病人的状态和功能。这些心理测验标度为阿茨海默氏病症状的发展提供了一种度量。适当的定量生命标度也可以用来监测治疗。疾病的发展也可以通过MRI监测。病人的血液分布也可以被监测，包括分析免疫原特异性抗体和T细胞反应的分析。
在基线测量后，病人开始接受治疗。他们被随机地用治疗药剂或安慰剂在不知情的情况下治疗。病人至少每6个月进行检测。功效通过治疗组相对于安慰剂组疾病发展的明显降低来确定。
进行第二次II期临床试验以评估病人从非阿茨海默氏病早期记忆丧失，有时称为与年龄相关的记忆损伤(AAMI)或中度认知损伤(MCI)，到根据ADRDA标准定义为可能的阿茨海默氏病的转变。通过在参比人群中筛选记忆丧失的早期信号或与阿茨海默氏病前期症状相关的其它障碍、阿茨海默氏病家族史、遗传风险因素、年龄、性别以及其它被发现能预测阿茨海默氏病的高度风险的特征，从非临床人群中选择出有转变为阿茨海默氏病高度风险的病人。收集在适当的度量中得到的基线分数，这些度量包括MMSE和ADAS以及其它被设计用来评估更普通人群的度量。这些病人人群被分成适当的组，服用同样剂量的安慰剂或药剂以进行比较。这些病人人群被跟踪大约6个月，每个病人的终点是在观察结束时他或她是否转变成由ADRDA标准定义的可能的阿茨海默氏病。
尽管上述的发明为了理解清晰的已经被详细地描述了，显然可以在附后的权利要求的范围内对它进行某些修改。所有本文引用的出版物和专利文件以及在图和序列列表中显示的文字，在此为所有目的以它们的全文引为参考，其程度如同对它们中每一个进行单独的表示。
从上文中显然可以看出本发明提供了许多用途。例如，本发明提供了使用任何上述的针对Aβ的抗体对生成淀粉样疾病进行治疗、预防或诊断，或生产用于这些目的的药物或诊断组合物。

Claims (12)

1.人源化12B4抗体或其抗原结合片段，包括人源化轻链可变区和人源化重链可变区，其中人源化重链可变区的氨基酸序列显示为SEQID NO：8的第1-123位氨基酸，以及人源化轻链可变区的氨基酸序列显示为SEQ ID NO：6的第1-112位氨基酸。
2.人源化12B4抗体或其抗原结合片段，包括人源化轻链可变区和人源化重链可变区，其中人源化重链可变区的氨基酸序列显示为SEQ ID NO：10的第1-123位氨基酸，以及人源化轻链可变区的氨基酸序列显示为SEQ ID NO：6的第1-112位氨基酸。
3.人源化12B4抗体或其抗原结合片段，包括人源化轻链可变区和人源化重链可变区，其中人源化重链可变区的氨基酸序列显示为SEQ ID NO：12的第1-123位氨基酸，以及人源化轻链可变区的氨基酸序列显示为SEQ ID NO：6的第1-112位氨基酸。
4.一种分离的核酸分子，编码权利要求1-3任一项中的人源化重链可变区。
5.一种分离的核酸分子，编码权利要求1-3任一项中的人源化轻链可变区。
6.分离的核酸分子，分别编码权利要求1-3任一项中的人源化重链可变区以及权利要求1-3任一项中的人源化轻链可变区。
7.载体，含有权利要求4-6任一项的核酸分子。
8.一种宿主细胞，含有权利要求7的载体。
9.一种生产人源化抗体或其抗原结合片段的方法，包括在允许所述抗体或其抗原片段生产的条件下培养权利要求8的宿主细胞，以及从宿主细胞或培养物中分离该抗体。
10.一种药物组合物，含有权利要求1-3任一项的人源化抗体或其抗原结合片段以及可药用载体。
11.权利要求1-3任一项的人源化抗体或其抗原结合片段在制备用于治疗或预防患者生成淀粉样疾病的药物中的应用。
12.权利要求11的应用，其中所述疾病为阿茨海默氏病。
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ZA (1) ZA200406616B (zh)

Families Citing this family (124)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI239847B (en) 1997-12-02 2005-09-21 Elan Pharm Inc N-terminal fragment of Abeta peptide and an adjuvant for preventing and treating amyloidogenic disease
US6787523B1 (en) * 1997-12-02 2004-09-07 Neuralab Limited Prevention and treatment of amyloidogenic disease
US7790856B2 (en) * 1998-04-07 2010-09-07 Janssen Alzheimer Immunotherapy Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
US7179892B2 (en) * 2000-12-06 2007-02-20 Neuralab Limited Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
US7964192B1 (en) 1997-12-02 2011-06-21 Janssen Alzheimer Immunotherapy Prevention and treatment of amyloidgenic disease
US20080050367A1 (en) * 1998-04-07 2008-02-28 Guriq Basi Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
US7700751B2 (en) 2000-12-06 2010-04-20 Janssen Alzheimer Immunotherapy Humanized antibodies that recognize β-amyloid peptide
PE20020574A1 (es) * 2000-12-06 2002-07-02 Wyeth Corp Anticuerpos humanizados que reconocen el peptido amiloideo beta
US7658924B2 (en) * 2001-10-11 2010-02-09 Amgen Inc. Angiopoietin-2 specific binding agents
US7521053B2 (en) * 2001-10-11 2009-04-21 Amgen Inc. Angiopoietin-2 specific binding agents
AR038568A1 (es) * 2002-02-20 2005-01-19 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-a beta y su uso
MY139983A (en) * 2002-03-12 2009-11-30 Janssen Alzheimer Immunotherap Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
DE10303974A1 (de) 2003-01-31 2004-08-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Amyloid-β(1-42)-Oligomere, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung
CN1745175A (zh) * 2003-02-01 2006-03-08 神经实验室有限公司 自动免疫产生针对可溶性A－β的抗体
TWI306458B (en) * 2003-05-30 2009-02-21 Elan Pharma Int Ltd Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
JP5068072B2 (ja) * 2003-06-27 2012-11-07 バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド 連結ペプチドを含む改変された結合分子
US20060024667A1 (en) * 2004-07-29 2006-02-02 Karen Manucharyan Compositions and methods for Alzheimer's disease
US7807165B2 (en) * 2004-07-30 2010-10-05 Rinat Neuroscience Corp. Antibodies directed against amyloid-beta peptide and methods using same
TWI374935B (en) * 2004-08-27 2012-10-21 Pfizer Ireland Pharmaceuticals Production of α-abeta
US7300773B2 (en) 2004-08-27 2007-11-27 Wyeth Research Ireland Limited Production of TNFR-Ig
TWI384069B (zh) 2004-08-27 2013-02-01 Pfizer Ireland Pharmaceuticals 多胜肽之製法
ZA200703561B (en) * 2004-10-05 2009-09-30 Wyeth Corp Methods and compositions for improving recombinant protein production
TW200635608A (en) * 2004-12-15 2006-10-16 Neuralab Ltd Aβ antibodies for use in improving cognition
AR052051A1 (es) * 2004-12-15 2007-02-28 Neuralab Ltd Anticuerpos ab humanizados usados en mejorar la cognicion
US7625560B2 (en) * 2004-12-15 2009-12-01 Janssen Alzheimer Immunotherapy Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
EP2311881A3 (en) * 2005-01-05 2011-07-27 Biogen Idec MA Inc. Cripto binding molecules
CA2589860A1 (en) * 2005-01-24 2006-08-03 Amgen Inc. Humanized anti-amyloid antibody
GT200600031A (es) 2005-01-28 2006-08-29 Formulacion anticuerpo anti a beta
JP2008528638A (ja) * 2005-01-28 2008-07-31 ワイス ポリペプチドの安定化液体処方
MY148086A (en) * 2005-04-29 2013-02-28 Rinat Neuroscience Corp Antibodies directed against amyloid-beta peptide and methods using same
ES2402650T3 (es) * 2005-06-17 2013-05-07 Janssen Alzheimer Immunotherapy Métodos de purificación de anticuerpos anti A beta
EP1976877B2 (en) 2005-11-30 2016-10-05 AbbVie Inc. Monoclonal antibodies against amyloid beta protein and uses thereof
DK1954718T3 (en) 2005-11-30 2014-12-15 Abbvie Inc Anti-A-globulomer antibodies antigenbindingsgrupper thereof, corresponding hybridomas, nucleic acids, vectors, host cells, methods for producing said antibodies,
TWI382990B (zh) * 2005-12-12 2013-01-21 Hoffmann La Roche 可變區域抗體之糖化
MX358175B (es) 2005-12-12 2018-08-08 Ac Immune Sa Anticuerpos monoclonales especificos 1-42 beta con propiedades terapeuticas.
WO2009017467A1 (en) 2007-07-27 2009-02-05 Elan Pharma International Limited Treatment of amyloidogenic diseases
US8784810B2 (en) 2006-04-18 2014-07-22 Janssen Alzheimer Immunotherapy Treatment of amyloidogenic diseases
WO2008011348A2 (en) 2006-07-14 2008-01-24 Ac Immune S.A. Humanized antibody against amyloid beta
MX2009003542A (es) * 2006-10-12 2009-04-15 Wyeth Corp Metodos y composiciones con opalescencia reducida.
US8188046B2 (en) 2006-10-16 2012-05-29 University Of South Florida Amyloid beta peptides and methods of use
US8455626B2 (en) 2006-11-30 2013-06-04 Abbott Laboratories Aβ conformer selective anti-aβ globulomer monoclonal antibodies
IL199534A (en) 2007-01-05 2013-01-31 Univ Zuerich An isolated human antibody capable of detecting a neoepitope in a disease-related protein, a polynucleotide encoding an antibody, a vector containing the polynucleotide, a host cell containing the polynucleotide or vector, a preparation containing the antibody and related methods and uses.
KR101735257B1 (ko) * 2007-01-05 2017-05-12 유니버시티 오브 취리히 질환 특이적 결합 분자 및 표적을 제공하는 방법
DK2104682T3 (en) 2007-01-11 2017-01-16 Michael Bacher DIAGNOSIS AND TREATMENT OF ALZHEIMER'S AND OTHER DEMENTIA DISEASES
EP2486928A1 (en) 2007-02-27 2012-08-15 Abbott GmbH & Co. KG Method for the treatment of amyloidoses
NZ579310A (en) 2007-03-01 2012-03-30 Probiodrug Ag Use of glutaminyl cyclase inhibitors for the treatment of mild cognitive impairment and diagnostic purposes thereof
US8003097B2 (en) * 2007-04-18 2011-08-23 Janssen Alzheimer Immunotherapy Treatment of cerebral amyloid angiopathy
EP2142514B1 (en) 2007-04-18 2014-12-24 Probiodrug AG Thiourea derivatives as glutaminyl cyclase inhibitors
JP2011526240A (ja) * 2007-04-18 2011-10-06 ヤンセン アルツハイマー イミュノセラピー 脳アミロイド血管症の予防および治療
US8048420B2 (en) 2007-06-12 2011-11-01 Ac Immune S.A. Monoclonal antibody
US8613923B2 (en) 2007-06-12 2013-12-24 Ac Immune S.A. Monoclonal antibody
CA2701793C (en) 2007-10-05 2017-04-25 Genentech, Inc. Use of anti-amyloid beta antibody in ocular diseases
JO3076B1 (ar) * 2007-10-17 2017-03-15 Janssen Alzheimer Immunotherap نظم العلاج المناعي المعتمد على حالة apoe
US9217024B2 (en) 2007-12-18 2015-12-22 Acumen Pharmaceuticals, Inc. ADDL receptor polypeptides, polynucleotides and host cells for recombinant production
EP2261254A3 (en) 2007-12-21 2011-04-13 Amgen, Inc Anti-amyloid antibodies and uses thereof
PT2237803E (pt) * 2007-12-28 2015-10-16 Prothena Biosciences Ltd Tratamento e profilaxia da amiloidose
EP2246427B1 (en) 2008-02-08 2016-11-30 Immunas Pharma, Inc. Antibodies capable of binding specifically to amyloid beta-oligomers, and use thereof
JO2913B1 (en) 2008-02-20 2015-09-15 امجين إنك, Antibodies directed towards angiopoietin-1 and angiopoietin-2 proteins and their uses
KR101592156B1 (ko) * 2008-05-23 2016-02-04 시와 코퍼레이션 재생을 촉진하는 방법, 조성물 및 장치
US9085614B2 (en) 2008-08-01 2015-07-21 Immunas Pharma, Inc. Antibodies that specifically bind to Aβ oligomers and uses thereof
US9067981B1 (en) 2008-10-30 2015-06-30 Janssen Sciences Ireland Uc Hybrid amyloid-beta antibodies
EP2949666B1 (en) 2008-12-19 2018-12-19 Biogen International Neuroscience GmbH Human anti-alpha-synuclein antibodies
US8614297B2 (en) * 2008-12-22 2013-12-24 Hoffmann-La Roche Inc. Anti-idiotype antibody against an antibody against the amyloid β peptide
ES2641612T3 (es) * 2009-04-17 2017-11-10 Immunas Pharma, Inc. Anticuerpos que se unen específicamente a oligómeros de beta A y uso de los mismos
US8858949B2 (en) 2009-08-06 2014-10-14 Immunas Pharma, Inc. Antibodies that specifically bind to a beta oligomers and use thereof
CA2772488C (en) 2009-09-11 2018-04-17 Probiodrug Ag Heterocyclic derivatives as inhibitors of glutaminyl cyclase
WO2011075185A1 (en) 2009-12-18 2011-06-23 Oligasis Targeted drug phosphorylcholine polymer conjugates
US9102717B2 (en) 2010-03-01 2015-08-11 The J. David Gladstone Institutes Antibody specific for apolipoprotein and methods of use thereof
PE20130527A1 (es) 2010-03-03 2013-05-09 Boehringer Ingelheim Int Polipeptidos de union a a-beta biparatopicos
US9181233B2 (en) 2010-03-03 2015-11-10 Probiodrug Ag Inhibitors of glutaminyl cyclase
US8269019B2 (en) 2010-03-10 2012-09-18 Probiodrug Ag Inhibitors
CA2796339C (en) 2010-04-15 2020-03-31 Abbott Laboratories Amyloid-beta binding proteins
EP2560953B1 (en) 2010-04-21 2016-01-06 Probiodrug AG Inhibitors of glutaminyl cyclase
CA2803937A1 (en) 2010-06-30 2012-01-05 Mount Sinai Hospital Reagents and methods for diagnosing conditions associated with hydroxylated hif 1-a
CN103179981B (zh) 2010-07-30 2017-02-08 Ac免疫有限公司 安全和功能性的人源化抗β‑淀粉样蛋白抗体
US9062101B2 (en) 2010-08-14 2015-06-23 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Amyloid-beta binding proteins
US9649376B2 (en) 2010-09-27 2017-05-16 Siwa Corporation Selective removal of age-modified cells for treatment of atherosclerosis
US8721571B2 (en) 2010-11-22 2014-05-13 Siwa Corporation Selective removal of cells having accumulated agents
JP6050264B2 (ja) 2011-03-16 2016-12-21 プロビオドルグ エージー グルタミニルシクラーゼの阻害剤としてのベンゾイミダゾール誘導体
PT2723379T (pt) 2011-06-23 2018-11-14 Univ Of Zuerich Moléculas de ligação anti-alfa-sinucleína
JP2012034697A (ja) * 2011-09-16 2012-02-23 Janssen Alzheimer Immunotherapy βアミロイドペプチドを認識するヒト化抗体
IN2015DN00552A (zh) 2012-07-19 2015-06-26 Redwood Bioscience Inc
WO2014189973A2 (en) 2013-05-20 2014-11-27 Genentech, Inc. Anti-transferrin receptor antibodies and methods of use
JP2014001232A (ja) * 2013-09-02 2014-01-09 Janssen Alzheimer Immunotherapy アミロイド原性疾患の処置
JP6463361B2 (ja) 2013-09-08 2019-01-30 コディアック サイエンシーズ インコーポレイテッドＫｏｄｉａｋ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ． 第ｖｉｉｉ因子両性イオンポリマーコンジュゲート
US9840553B2 (en) 2014-06-28 2017-12-12 Kodiak Sciences Inc. Dual PDGF/VEGF antagonists
ES2908203T3 (es) 2014-09-19 2022-04-28 Siwa Corp Anticuerpos anti-age para el tratamiento de inflamación y trastornos autoinmunes
CN107208076A (zh) 2014-10-17 2017-09-26 科达制药 丁酰胆碱酯酶两性离子聚合物缀合物
US11008403B2 (en) 2014-11-19 2021-05-18 Genentech, Inc. Anti-transferrin receptor / anti-BACE1 multispecific antibodies and methods of use
JP6779876B2 (ja) 2014-11-19 2020-11-04 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗トランスフェリン受容体抗体及びその使用方法
MA41115A (fr) 2014-12-02 2017-10-10 Biogen Int Neuroscience Gmbh Procédé de traitement de la maladie d'alzheimer
JP2018502840A (ja) 2014-12-10 2018-02-01 ジェネンテック， インコーポレイテッド 血液脳関門受容体抗体及び使用方法
US10358502B2 (en) 2014-12-18 2019-07-23 Siwa Corporation Product and method for treating sarcopenia
US9993535B2 (en) 2014-12-18 2018-06-12 Siwa Corporation Method and composition for treating sarcopenia
EP4074730A1 (en) 2015-06-24 2022-10-19 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-transferrin receptor antibodies with tailored affinity
AR106189A1 (es) 2015-10-02 2017-12-20 Hoffmann La Roche ANTICUERPOS BIESPECÍFICOS CONTRA EL A-b HUMANO Y EL RECEPTOR DE TRANSFERRINA HUMANO Y MÉTODOS DE USO
NZ741067A (en) 2015-10-02 2023-07-28 Hoffmann La Roche Bispecific anti-human cd20/human transferrin receptor antibodies and methods of use
JP7452829B2 (ja) * 2015-11-09 2024-03-19 ザ・ユニバーシティ・オブ・ブリティッシュ・コロンビア アミロイドベータのエピトープおよびそれに対する抗体
EP3374381A4 (en) * 2015-11-09 2019-05-15 The University Of British Columbia EPITAOPES IN THE CENTRAL REGION OF BETA-AMYLOID AND RELATED CONFORMATIONAL ANTIBODIES
EP3374379A4 (en) 2015-11-09 2019-05-15 The University Of British Columbia N-TERMINAL EPITOPES IN BETA-AMYLOID AND CONFORMATIONALLY SELECTIVE ANTIBODIES THEREOF
JP2016047839A (ja) * 2015-11-24 2016-04-07 ヤンセン・サイエンシズ・アイルランド・ユーシー アミロイド原性疾患の処置
RU2744860C2 (ru) 2015-12-30 2021-03-16 Кодиак Сайенсиз Инк. Антитела и их конъюгаты
WO2018191718A1 (en) 2017-04-13 2018-10-18 Siwa Corporation Humanized monoclonal advanced glycation end-product antibody
EP3337829B1 (en) 2016-02-19 2020-01-08 Siwa Corporation Method and composition for treating cancer, killing metastatic cancer cells and preventing cancer metastasis using antibody to advanced glycation end products (age)
WO2017222535A1 (en) 2016-06-23 2017-12-28 Siwa Corporation Vaccines for use in treating various diseases and disorders
US20180125920A1 (en) 2016-11-09 2018-05-10 The University Of British Columbia Methods for preventing and treating A-beta oligomer-associated and/or -induced diseases and conditions
US10961321B1 (en) 2017-01-06 2021-03-30 Siwa Corporation Methods and compositions for treating pain associated with inflammation
US10925937B1 (en) 2017-01-06 2021-02-23 Siwa Corporation Vaccines for use in treating juvenile disorders associated with inflammation
US10858449B1 (en) 2017-01-06 2020-12-08 Siwa Corporation Methods and compositions for treating osteoarthritis
US10995151B1 (en) 2017-01-06 2021-05-04 Siwa Corporation Methods and compositions for treating disease-related cachexia
BR112019028149A2 (pt) 2017-06-29 2020-07-21 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York anticorpos químicos para tratamento de doenças de deposição amilóide
US11382974B2 (en) 2017-08-01 2022-07-12 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods and compositions for treatment of amyloid deposition diseases
CA3073066A1 (en) 2017-08-22 2019-02-28 Biogen Ma Inc. Pharmaceutical compositions containing anti-beta amyloid antibodies
PL3461819T3 (pl) 2017-09-29 2020-11-30 Probiodrug Ag Inhibitory cyklazy glutaminylowej
US11518801B1 (en) 2017-12-22 2022-12-06 Siwa Corporation Methods and compositions for treating diabetes and diabetic complications
CA3115071A1 (en) 2018-10-04 2020-04-09 University Of Rochester Improvement of glymphatic delivery by manipulating plasma osmolarity
WO2020132230A2 (en) 2018-12-20 2020-06-25 Genentech, Inc. Modified antibody fcs and methods of use
CN111518206B (zh) * 2019-02-01 2022-03-29 长春金赛药业有限责任公司 人源化抗Aβ单克隆抗体及其应用
EP3946626A1 (en) 2019-04-02 2022-02-09 Kenjockety Biotechnology, Inc. Efflux pump-cancer antigen multi-specific antibodies and compositions, reagents, kits and methods related thereto
CN114786731A (zh) 2019-10-10 2022-07-22 科达制药股份有限公司 治疗眼部病症的方法
US20230192902A1 (en) 2020-06-04 2023-06-22 Kenjockety Biotechnology, Inc. Abcg2 efflux pump-cancer antigen multi-specific antibodies and compositions, reagents, kits and methods related thereto
EP4185612A1 (en) 2020-07-23 2023-05-31 Othair Prothena Limited Anti-abeta antibodies
TW202300517A (zh) 2021-03-12 2023-01-01 美商美國禮來大藥廠 抗類澱粉β抗體及其用途
WO2022251048A1 (en) 2021-05-24 2022-12-01 Eli Lilly And Company Anti-amyloid beta antibodies and uses thereof

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5589154A (en) * 1994-11-22 1996-12-31 Rutgers, The State University Of New Jersey Methods for the prevention or treatment of vascular hemorrhaging and Alzheimer's disease

Family Cites Families (351)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6096318A (en) 1973-05-07 2000-08-01 The Ohio State University Antigenically modified HCG polypeptides
US4902506A (en) 1983-07-05 1990-02-20 The University Of Rochester Immunogenic conjugates
GB8308235D0 (en) * 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5158769A (en) * 1984-03-07 1992-10-27 New York Blood Center, Inc. Pre-S gene coded peptide hepatitis B immunogens, vaccines, diagnostics, and synthetic lipid vesicle carriers
US5417986A (en) * 1984-03-16 1995-05-23 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army Vaccines against diseases caused by enteropathogenic organisms using antigens encapsulated within biodegradable-biocompatible microspheres
US5208036A (en) * 1985-01-07 1993-05-04 Syntex (U.S.A.) Inc. N-(ω, (ω-1)-dialkyloxy)- and N-(ω, (ω-1)-dialkenyloxy)-alk-1-yl-N,N,N-tetrasubstituted ammonium lipids and uses therefor
US4666829A (en) * 1985-05-15 1987-05-19 University Of California Polypeptide marker for Alzheimer's disease and its use for diagnosis
US5618920A (en) * 1985-11-01 1997-04-08 Xoma Corporation Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use
US4713366A (en) 1985-12-04 1987-12-15 The Ohio State University Research Foundation Antigenic modification of polypeptides
US5096706A (en) * 1986-03-25 1992-03-17 National Research Development Corporation Antigen-based treatment for adiposity
US6548640B1 (en) * 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
US5225539A (en) * 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US5278049A (en) * 1986-06-03 1994-01-11 Incyte Pharmaceuticals, Inc. Recombinant molecule encoding human protease nexin
US5231170A (en) * 1986-08-27 1993-07-27 Paul Averback Antibodies to dense microspheres
US5187153A (en) * 1986-11-17 1993-02-16 Scios Nova Inc. Methods of treatment using Alzheimer's amyloid polypeptide derivatives
US5223482A (en) 1986-11-17 1993-06-29 Scios Nova Inc. Recombinant Alzheimer's protease inhibitory amyloid protein and method of use
US5220013A (en) * 1986-11-17 1993-06-15 Scios Nova Inc. DNA sequence useful for the detection of Alzheimer's disease
US4879213A (en) 1986-12-05 1989-11-07 Scripps Clinic And Research Foundation Synthetic polypeptides and antibodies related to Epstein-Barr virus early antigen-diffuse
US4912206A (en) 1987-02-26 1990-03-27 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services CDNA clone encoding brain amyloid of alzheimer's disease
DE3883899T3 (de) * 1987-03-18 1999-04-22 Sb2 Inc Geänderte antikörper.
US4883666A (en) 1987-04-29 1989-11-28 Massachusetts Institute Of Technology Controlled drug delivery system for treatment of neural disorders
US5258498A (en) 1987-05-21 1993-11-02 Creative Biomolecules, Inc. Polypeptide linkers for production of biosynthetic proteins
US5057540A (en) 1987-05-29 1991-10-15 Cambridge Biotech Corporation Saponin adjuvant
US5583112A (en) 1987-05-29 1996-12-10 Cambridge Biotech Corporation Saponin-antigen conjugates and the use thereof
US5245015A (en) 1991-04-26 1993-09-14 Tanox Biosystems, Inc. Monoclonal antibodies which neutralize HIV-1 through reaction with a conformational epitope in vitro
US4912506A (en) * 1987-06-10 1990-03-27 Brother Kogyo Kabushiki Kaisha Image recording apparatus having exposure unit
US5849298A (en) 1987-06-24 1998-12-15 Autoimmune Inc. Treatment of multiple sclerosis by oral administration of bovine myelin
US5869054A (en) * 1987-06-24 1999-02-09 Autoimmune Inc. Treatment of multiple sclerosis by oral administration of autoantigens
US5641474A (en) * 1987-06-24 1997-06-24 Autoimmune, Inc. Prevention of autoimmune diseases by aerosol administration of autoantigens
WO1988010120A1 (en) 1987-06-24 1988-12-29 Brigham And Women's Hospital Treatment of autoimmune diseases by oral administration of autoantigens
US5571500A (en) 1987-06-24 1996-11-05 Autoimmune, Inc. Treatment of autoimmune diseases through administration by inhalation of autoantigens
US5571499A (en) 1987-06-24 1996-11-05 Autoimmune, Inc. Treatment of autoimmune diseases by aerosol administration of autoantigens
US5645820A (en) * 1987-06-24 1997-07-08 Autoimmune, Inc. Treatment of autoimmune diseases by aerosol administration of autoantigens
US5004697A (en) 1987-08-17 1991-04-02 Univ. Of Ca Cationized antibodies for delivery through the blood-brain barrier
US5677425A (en) 1987-09-04 1997-10-14 Celltech Therapeutics Limited Recombinant antibody
CA1339014C (en) 1987-10-08 1997-03-25 Ronald E. Majocha Antibodies to a4 amyloid peptide
US5231000A (en) * 1987-10-08 1993-07-27 The Mclean Hospital Antibodies to A4 amyloid peptide
AU2728588A (en) 1987-10-23 1989-05-23 Genetics Institute Inc. Composition and method for treating cancers characterized by over-expression of the c-fms proto-oncogene
US5089603A (en) * 1989-06-21 1992-02-18 Tanox Biosystems, Inc. Antigenic epitopes present on membrane-bound but not secreted iga
WO1989006689A1 (en) 1988-01-13 1989-07-27 The Mclean Hospital Corporation Genetic constructs containing the alzheimer brain amyloid gene
US4912094B1 (en) 1988-06-29 1994-02-15 Ribi Immunochem Research Inc. Modified lipopolysaccharides and process of preparation
US5576184A (en) 1988-09-06 1996-11-19 Xoma Corporation Production of chimeric mouse-human antibodies with specificity to human tumor antigens
EP0442926A1 (en) 1988-11-10 1991-08-28 Imperial Cancer Research Technology Limited Polypeptides
IL162181A (en) 1988-12-28 2006-04-10 Pdl Biopharma Inc A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5227159A (en) * 1989-01-31 1993-07-13 Miller Richard A Anti-idiotype antibodies reactive with shared idiotopes expressed by B cell lymphomas and autoantibodies
US5262332A (en) 1989-04-05 1993-11-16 Brigham And Women's Hospital Diagnostic method for Alzheimer's disease: examination of non-neural tissue
AU5439790A (en) 1989-04-14 1990-11-16 Research Foundation For Mental Hygiene, Inc. Cerebrovascular amyloid protein-specific monoclonal antibody sv17-6e10
AU5525090A (en) 1989-04-14 1990-11-16 Research Foundation For Mental Hygiene, Inc. Monoclonal antibody to amyloid peptide
CA2017507C (en) 1989-05-25 1996-11-12 Gary Van Nest Adjuvant formulation comprising a submicron oil droplet emulsion
DE69033487T2 (de) 1989-12-20 2000-06-29 Autoimmune Inc Behandlung von autoimmunkrankheiten durch verabreichung von autoantigenen in form von aerosol
GB8928874D0 (en) * 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
US5859205A (en) * 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
CA2050918A1 (en) 1990-01-12 1991-07-13 Raju Kucherlapati Generation of xenogeneic antibodies
JPH05508621A (ja) 1990-03-02 1993-12-02 オートイミューン　インク 自己抗原の経口投与による自己免疫疾患のダウンコントロール
EP0527823A1 (en) 1990-04-24 1993-02-24 The Regents Of The University Of California Purification, detection and methods of use of protease nexin-2
GB9009548D0 (en) 1990-04-27 1990-06-20 Celltech Ltd Chimeric antibody and method
US5753624A (en) 1990-04-27 1998-05-19 Milkhaus Laboratory, Inc. Materials and methods for treatment of plaquing disease
DE69126304T2 (de) 1990-04-27 1997-09-04 John Mcmichael Verfahren und zusammensetzung zur behandlung von erkrankungen des zns hervorgerufen durch abnormales beta-amyloid-protein
AU646877B2 (en) * 1990-06-15 1994-03-10 Scios Nova Inc. Transgenic non-human mammal displaying the amyloid-forming pathology of alzheimer's disease
CA2085897A1 (en) 1990-06-19 1991-12-20 George Pieczenik Nonpathogenic variant virus
GB9014932D0 (en) 1990-07-05 1990-08-22 Celltech Ltd Recombinant dna product and method
US5780587A (en) * 1990-08-24 1998-07-14 President And Fellows Of Harvard College Compounds and methods for inhibiting β-protein filament formation and neurotoxicity
NZ239643A (en) 1990-09-17 1996-05-28 North American Vaccine Inc Vaccine containing bacterial polysaccharide protein conjugate and adjuvant (c-nd-che-a-co-b-r) with a long chain alkyl group.
US5702906A (en) 1990-09-25 1997-12-30 Genentech, Inc. Antibodies to neurotrophic factor-4 (NT-4)
CA2092823A1 (en) 1990-09-28 1992-03-29 Barry D. Greenberg Transgenic animals with alzheimer's amyloid precursor gene
EP0553244B8 (en) 1990-10-05 2005-06-08 Celldex Therapeutics, Inc. Targeted immunostimulation with bispecific reagents
AU9023791A (en) 1990-10-15 1992-05-20 Brigham And Women's Hospital Treatment of autoimmune diseases by oral administration of autoantigens
GB9023352D0 (en) 1990-10-26 1990-12-05 Lynxvale Ltd Vaccinia vectors,vaccinia genes and expression products thereof
ES2335720T3 (es) 1991-01-21 2010-03-31 Elan Pharmaceuticals, Inc. Ensayo y modelo para la enfermedad de alzheimer.
WO1992015330A1 (fr) 1991-03-01 1992-09-17 Rhône Merieux Procede d'immunoneutralisation anti-lhrh des animaux domestiques males non castres et peptide pour cela
US5192753A (en) * 1991-04-23 1993-03-09 Mcgeer Patrick L Anti-rheumatoid arthritic drugs in the treatment of dementia
CA2086831C (en) 1991-05-08 1999-03-16 Reinhard Gluck Immunostimulating and immunopotentiating reconstituted influenza virosomes and vaccines containing them
EP0590058B1 (en) 1991-06-14 2003-11-26 Genentech, Inc. HUMANIZED Heregulin ANTIBODy
WO1994004679A1 (en) * 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
US5672805A (en) 1991-07-18 1997-09-30 The Regents Of The University Of California Transgenic mice expressing the neurotoxic C-terminus of β-amyloid precursor protein
US5434050A (en) 1991-08-13 1995-07-18 Regents Of The University Of Minnesota Labelled β-amyloid peptide and methods of screening for Alzheimer's disease
US5837268A (en) 1991-10-16 1998-11-17 University Of Saskatchewan GnRH-leukotoxin chimeras
EP0746609A4 (en) 1991-12-17 1997-12-17 Genpharm Int NON-HUMAN TRANSGENIC ANIMALS CAPABLE OF PRODUCING HETEROLOGOUS ANTIBODIES
CA2127450C (en) 1992-01-07 2007-04-17 Samuel Wadsworth Transgenic animal models for alzheimer's disease
US5679348A (en) 1992-02-03 1997-10-21 Cedars-Sinai Medical Center Immunotherapy for recurrent HSV infections
AU685047B2 (en) 1992-02-11 1998-01-15 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Dual carrier immunogenic construct
BR9306042A (pt) 1992-02-28 1997-11-18 Autoimmune Inc Método para tratar uma doença auto-immune em um mamifero e formas de dosagens farmacêuticas oral e inalável
US5714350A (en) 1992-03-09 1998-02-03 Protein Design Labs, Inc. Increasing antibody affinity by altering glycosylation in the immunoglobulin variable region
US5604102A (en) 1992-04-15 1997-02-18 Athena Neurosciences, Inc. Methods of screening for β-amyloid peptide production inhibitors
US5441870A (en) * 1992-04-15 1995-08-15 Athena Neurosciences, Inc. Methods for monitoring cellular processing of β-amyloid precursor protein
US5851787A (en) * 1992-04-20 1998-12-22 The General Hospital Corporation Nucleic acid encoding amyloid precursor-like protein and uses thereof
EP0640094A1 (en) 1992-04-24 1995-03-01 The Board Of Regents, The University Of Texas System Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells
GB9209118D0 (en) 1992-04-28 1992-06-10 Sb 120 Amsterdam Bv Vaccine compositions
CA2138137C (en) * 1992-06-18 2004-11-09 R. John Collier Diphtheria toxin vaccines
ES2143716T3 (es) 1992-06-25 2000-05-16 Smithkline Beecham Biolog Composicion de vacuna que contiene adyuvantes.
US5766846A (en) * 1992-07-10 1998-06-16 Athena Neurosciences Methods of screening for compounds which inhibit soluble β-amyloid peptide production
US6610493B1 (en) 1993-06-17 2003-08-26 Brigham And Women's Hospital Screening compounds for the ability to alter the production of amyloid-β peptide
US5837672A (en) 1992-07-10 1998-11-17 Athena Neurosciences, Inc. Methods and compositions for the detection of soluble β-amyloid peptide
WO1994001772A1 (en) 1992-07-13 1994-01-20 The Children's Medical Center Corporation SCREEN FOR ALZHEIMER'S DISEASE THERAPEUTICS BASED ON β-AMYLOID PRODUCTION
IL102687A (en) 1992-07-30 1997-06-10 Yeda Res & Dev Conjugates of poorly immunogenic antigens and synthetic pepide carriers and vaccines comprising them
US6680182B1 (en) 1992-07-31 2004-01-20 Acambis Research Limited Expression of recombinant fusion proteins in attenuated bacteria
BR9306984A (pt) * 1992-08-27 1999-01-12 Deakin Res Ltd Análogo de antígeno de peptídeo de um antígeno de peptídeo nativo vacina anticorpo processo para vacinar um hospedeiro necessitando deste tratamento estojo diagnóstico processos para preparar um análogo de um antiígeno de um antígeno de peptídeo nativo para preparar uma vacina para analisar uma amostra para um antígeno de peptídeo nativo e para analisar uma amostra para um anticorpo
US5958883A (en) 1992-09-23 1999-09-28 Board Of Regents Of The University Of Washington Office Of Technology Animal models of human amyloidoses
WO1994009364A1 (en) 1992-10-13 1994-04-28 Duke University Method of inhibiting binding of amyloid precursor protein to beta-amyloid protein
PT1298436E (pt) 1992-10-26 2010-10-21 Lilly Co Eli Métodos para a identificação de compostos inibidores da libertação de péptido beta-amilóide (bap)
US5605811A (en) * 1992-10-26 1997-02-25 Athena Neurosciences, Inc. Methods and compositions for monitoring cellular processing of beta-amyloid precursor protein
US5972336A (en) 1992-11-03 1999-10-26 Oravax Merieux Co. Urease-based vaccine against helicobacter infection
US6210671B1 (en) * 1992-12-01 2001-04-03 Protein Design Labs, Inc. Humanized antibodies reactive with L-selectin
ATE237357T1 (de) 1993-01-22 2003-05-15 Sloan Kettering Inst Cancer Gangliosid-klh-konjugatimastoffe mit qs-21
EP0683234B2 (en) 1993-01-25 2007-06-06 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibody against beta-amyloid or their derivative and use thereof
US5955317A (en) 1993-01-25 1999-09-21 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibodies to β-amyloids or their derivatives and use thereof
US5358708A (en) 1993-01-29 1994-10-25 Schering Corporation Stabilization of protein formulations
US5472693A (en) 1993-02-16 1995-12-05 The Dow Chemical Company Family of anti-carcinoembryonic antigen chimeric antibodies
DE614989T1 (de) * 1993-02-17 1995-09-28 Morphosys Proteinoptimierung Verfahren für in vivo Selektion von Ligandenbindende Proteine.
AU692152B2 (en) * 1993-03-17 1998-06-04 Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, The Immunogenic chimeras comprising nucleic acid sequences encoding endoplasmic reticulum signal sequence peptides and at least one other peptide, and their uses in vaccines and disease treatments
DE69433870T2 (de) 1993-03-18 2005-06-30 Cytimmune Sciences, Inc. Zusammensetzung und methode zur reduktion der toxizität von biologisch-aktiven faktoren
EP0689454B2 (en) * 1993-03-23 2005-02-23 SMITHKLINE BEECHAM BIOLOGICALS s.a. Vaccine compositions containing 3-o deacylated monophosphoryl lipid a
IT1270939B (it) 1993-05-11 1997-05-26 Angeletti P Ist Richerche Bio Procedimento per la preparazione di immunogeni e reagenti diagnostici,e immunogeni e reagenti diagnostici cosi' ottenibili.
ES2150493T5 (es) * 1993-05-25 2004-07-01 Wyeth Holdings Corporation Adyuvantes para vacunas contra el virus sincitico respiratorio.
AU7043894A (en) 1993-05-28 1994-12-20 Miriam Hospital, The Composition and method for (in vivo) imaging of amyloid deposits
ES2171454T3 (es) 1993-06-04 2002-09-16 Whitehead Biomedical Inst Proteinas de estres y sus usos.
US5464823A (en) 1993-07-20 1995-11-07 The Regents Of The University Of California Mammalian antibiotic peptides
JPH09500540A (ja) 1993-07-30 1997-01-21 メデヴァ ホールディングス ビー．ヴイ． ワクチン組成物
JPH08503490A (ja) 1993-08-18 1996-04-16 モルフォシス・ゲゼルシャフト・フュア・プロタインオプティミールング・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング リポ多糖結合性および中和能のあるペプチド
DK96493D0 (da) 1993-08-26 1993-08-26 Mouritsen Og Elsner Aps Fremgangsmaade til at inducere antistofresponser mod selvproteiner og autovaccine fremstillet ved fremgangsmaaden
WO1995005853A1 (en) 1993-08-26 1995-03-02 The Regents Of The University Of California Method, compositions and devices for administration of naked polynucleotides which encode biologically active peptides
AU707083B2 (en) 1993-08-26 1999-07-01 Bavarian Nordic Inc. Inducing antibody response against self-proteins with the aid of foreign T-cell epitopes
WO1995006407A1 (en) 1993-08-30 1995-03-09 The Regents Of The University Of California Novel component of amyloid in alzheimer's disease and methods for use of same
ES2236693T3 (es) 1993-09-07 2005-07-16 Smithkline Beecham Corporation Anticuerpos recombinantes contra il4 utiles en el tratamiento de afecciones mediadas por il4.
US5652334A (en) * 1993-09-08 1997-07-29 City Of Hope Method for design of substances that enhance memory and improve the quality of life
US5385887A (en) * 1993-09-10 1995-01-31 Genetics Institute, Inc. Formulations for delivery of osteogenic proteins
ES2318848T3 (es) * 1993-09-14 2009-05-01 Pharmexa Inc. Peptidos que se unen a pan dr para potenciar la respuesta inmunitaria.
US5470951A (en) 1993-09-29 1995-11-28 City Of Hope Peptides for antagonizing the effects of amyloid βprotein
US5858981A (en) * 1993-09-30 1999-01-12 University Of Pennsylvania Method of inhibiting phagocytosis
WO1995011311A1 (en) 1993-10-20 1995-04-27 Duke University METHOD OF BINDING MATERIAL TO THE β-AMYLOID PEPTIDE
CA2172507C (en) 1993-10-22 2008-12-02 Jeffrey L. Cleland Methods and compositions for microencapsulation of antigens for use as vaccines
US5744368A (en) * 1993-11-04 1998-04-28 Research Foundation Of State University Of New York Methods for the detection of soluble amyloid β-protein (βAP) or soluble transthyretin (TTR)
US5827690A (en) 1993-12-20 1998-10-27 Genzyme Transgenics Corporatiion Transgenic production of antibodies in milk
US5434170A (en) * 1993-12-23 1995-07-18 Andrulis Pharmaceuticals Corp. Method for treating neurocognitive disorders
US5877399A (en) * 1994-01-27 1999-03-02 Johns Hopkins University Transgenic mice expressing APP-Swedish mutation develop progressive neurologic disease
JPH09511388A (ja) * 1994-01-27 1997-11-18 リージェンツ オブ ザ ユニバーシティー オブ ミネソタ 進行性神経疾患を持つヒト以外のトランスジェニック哺乳類
EP0802797A1 (en) * 1994-02-03 1997-10-29 The Picower Institute For Medical Research Compositions and methods for advanced glycosylation endproduct-mediated modulation of amyloidosis
AUPM411994A0 (en) 1994-02-25 1994-03-24 Deakin Research Limited Epitopes
US5795954A (en) 1994-03-04 1998-08-18 Genentech, Inc. Factor VIIa inhibitors from Kunitz domain proteins
US6270757B1 (en) * 1994-04-21 2001-08-07 Genetics Institute, Inc. Formulations for IL-11
US6372716B1 (en) * 1994-04-26 2002-04-16 Genetics Institute, Inc. Formulations for factor IX
CA2191101C (en) 1994-05-25 2001-08-07 Ellis L. Kline Materials and methods for treatment of plaquing diseases
US5622701A (en) * 1994-06-14 1997-04-22 Protein Design Labs, Inc. Cross-reacting monoclonal antibodies specific for E- and P-selectin
US5798100A (en) 1994-07-06 1998-08-25 Immunomedics, Inc. Multi-stage cascade boosting vaccine
US6417178B1 (en) * 1994-07-19 2002-07-09 University Of Pittsburgh Amyloid binding nitrogen-linked compounds for the antemortem diagnosis of alzheimer's disease, in vivo imaging and prevention of amyloid deposits
NZ290089A (en) 1994-07-27 1999-05-28 Queensland Inst Med Res Recombinant polyepitope cytotoxic t lymphocyte (ctl) vaccines
EP0784684B8 (en) 1994-09-16 2008-03-26 Cancer Research Institute of Contra Costa RECOMBINANT PEPTIDES DERIVED FROM THE Mc3 ANTI-BA46 ANTIBODY, METHODS OF USE THEREOF, AND METHODS OF HUMANIZING ANTIBODY PEPTIDES
US5872005A (en) 1994-11-03 1999-02-16 Cell Genesys Inc. Packaging cell lines for adeno-associated viral vectors
US6114133A (en) 1994-11-14 2000-09-05 Elan Pharmaceuticals, Inc. Methods for aiding in the diagnosis of Alzheimer's disease by measuring amyloid-β peptide (x-≧41)
US5688651A (en) 1994-12-16 1997-11-18 Ramot University Authority For Applied Research And Development Ltd. Prevention of protein aggregation
AU695129B2 (en) * 1995-02-06 1998-08-06 Genetics Institute, Llc Formulations for IL-12
US5786180A (en) 1995-02-14 1998-07-28 Bayer Corporation Monoclonal antibody 369.2B specific for β A4 peptide
US5624937A (en) 1995-03-02 1997-04-29 Eli Lilly And Company Chemical compounds as inhibitors of amyloid beta protein production
US5854215A (en) 1995-03-14 1998-12-29 Praecis Pharmaceuticals Incorporated Modulators of β-amyloid peptide aggregation
WO1996028471A1 (en) 1995-03-14 1996-09-19 Praecis Pharmaceuticals Incorporated Modulators of amyloid aggregation
US6303567B1 (en) 1995-03-14 2001-10-16 Praecis Pharmaceuticals, Inc . Modulators of β-amyloid peptide aggregation comprising D-amino acids
US5817626A (en) 1995-03-14 1998-10-06 Praecis Pharmaceuticals Incorporated Modulators of beta-amyloid peptide aggregation
EP0871755A1 (en) 1995-03-23 1998-10-21 Cantab Pharmaceuticals Research Limited Vectors for gene delivery
US6121022A (en) 1995-04-14 2000-09-19 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5869046A (en) * 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
UA56132C2 (uk) 1995-04-25 2003-05-15 Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. Композиція вакцини (варіанти), спосіб стабілізації qs21 відносно гідролізу (варіанти), спосіб приготування композиції вакцини
ATE274064T1 (de) 1995-05-23 2004-09-15 Morphosys Ag Multimere proteine
WO1996039176A1 (en) 1995-06-05 1996-12-12 Brigham & Women's Hospital USE OF ORAL TOLERANCE TO SUPPRESS BOTH Th1 AND Th2 IMMUNE RESPONSES AND TO SUPPRESS ANTIBODY PRODUCTION
US5948763A (en) 1995-06-07 1999-09-07 New York University Peptides and pharmaceutical compositions thereof for treatment of disorders or diseases associated with abnormal protein folding into amyloid or amyloid-like deposits
AU6264996A (en) 1995-06-07 1996-12-30 Athena Neurosciences, Inc. Method for identifying alzheimer's disease therapeutics usin g transgenic animal models
US5910427A (en) 1995-06-22 1999-06-08 La Jolla Institute For Allergy And Immunology Antigen non-specific glycosylation inhibiting factor derivatives
PT750907E (pt) 1995-06-30 2002-08-30 American Cyanamid Co Formulacoes de vacinas estaveis para administracao parenterica metodo para a sua utilizacao e processo para a sua preparacao
EP1637600A1 (en) 1995-07-07 2006-03-22 Darwin Molecular Corporation Chromosome 1 gene and gene products related to Alzheimer's disease
US6685940B2 (en) 1995-07-27 2004-02-03 Genentech, Inc. Protein formulation
AUPN443995A0 (en) 1995-07-27 1995-08-17 Csl Limited Papillomavirus polyprotein
US6267958B1 (en) * 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
DE69621940T2 (de) 1995-08-18 2003-01-16 Morphosys Ag Protein-/(poly)peptidbibliotheken
US5824322A (en) 1995-08-21 1998-10-20 Cytrx Corporation Compositions and methods for growth promotion
BR9610580A (pt) 1995-09-14 2000-10-24 Univ California Anticorpos especìficos para prpse nativos
US5731284A (en) * 1995-09-28 1998-03-24 Amgen Inc. Method for treating Alzheimer's disease using glial line-derived neurotrophic factor (GDNF) protein product
AU3804995A (en) 1995-10-10 1997-04-30 Novartis Ag Melanoma-associated protein
US5985242A (en) 1995-10-27 1999-11-16 Praecis Pharmaceuticals, Inc. Modulators of β-amyloid peptide aggregation comprising D-amino acids
US5750361A (en) * 1995-11-02 1998-05-12 The Regents Of The University Of California Formation and use of prion protein (PRP) complexes
ES2203722T3 (es) 1995-11-10 2004-04-16 Elan Corporation, Plc Peptidos que faccilitan el transporte a traves de tejidos y metodos de identificarlos y usarlos.
WO1997018855A1 (en) 1995-11-21 1997-05-29 Eduard Naumovich Lerner Device for enhanced delivery of biologically active substances and compounds in an organism
WO1997021728A1 (en) 1995-12-12 1997-06-19 Karolinska Innovations Ab PEPTIDE BINDING THE KLVFF-SEQUENCE OF AMYLOID $g(b)
US6015662A (en) * 1996-01-23 2000-01-18 Abbott Laboratories Reagents for use as calibrators and controls
US5770700A (en) * 1996-01-25 1998-06-23 Genetics Institute, Inc. Liquid factor IX formulations
US6096313A (en) 1996-02-09 2000-08-01 Ludwig Institute For Cancer Research Compositions containing immunogenic molecules and granulocyte-macrophage colony stimulating factor, as an adjuvant
WO1997032017A1 (en) 1996-02-26 1997-09-04 Morphosys Gesellschaft Für Proteinoptimierung Mbh Novel method for the identification of nucleic acid sequences encoding two or more interacting (poly)peptides
US6150091A (en) 1996-03-06 2000-11-21 Baylor College Of Medicine Direct molecular diagnosis of Friedreich ataxia
JP2000507449A (ja) 1996-03-29 2000-06-20 ユニバーシティ オブ オタゴ パラポックスウイルスベクター
AU713067B2 (en) 1996-04-03 1999-11-25 Anergen, Inc. Cyclic peptide vaccines for treatment and prevention of diabetes
JP2002506419A (ja) 1996-04-19 2002-02-26 アメリカ合衆国 Ａ型肝炎ウイルスポリタンパク質の抗原反応性領域
US6284533B1 (en) 1996-05-01 2001-09-04 Avant Immunotherapeutics, Inc. Plasmid-based vaccine for treating atherosclerosis
EP0938506B1 (en) 1996-07-16 2003-11-05 Plückthun, Andreas, Prof. Dr. Immunoglobulin superfamily domains and fragments with increased solubility
JP2000516090A (ja) 1996-07-26 2000-12-05 スローン―ケッタリング インスティチュート フォー キャンサー リサーチ 遺伝子的免疫化のための方法と試薬
US7147851B1 (en) 1996-08-15 2006-12-12 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Humanized immunoglobulin reactive with α4β7 integrin
GB9617616D0 (en) 1996-08-22 1996-10-02 Osteometer Biotech As Assaying protein fragments in body fluids
CA2183901A1 (en) 1996-08-22 1998-02-23 Johanna E. Bergmann Targets for therapy and diagnosis of alzheimer's disease and down syndrome in humans
DK0929574T3 (da) 1996-08-27 2005-10-31 Praecis Pharm Inc Modulatorer af beta-amyloidpeptidaggregering, som omfatter D-aminosyrer
US6057367A (en) * 1996-08-30 2000-05-02 Duke University Manipulating nitrosative stress to kill pathologic microbes, pathologic helminths and pathologically proliferating cells or to upregulate nitrosative stress defenses
US6797495B2 (en) 1996-11-05 2004-09-28 The Regents Of The University Of California Somatic cells with ablated PrP gene and methods of use
US6022859A (en) * 1996-11-15 2000-02-08 Wisconsin Alumni Research Foundation Inhibitors of β-amyloid toxicity
WO1998022120A1 (en) 1996-11-19 1998-05-28 The Wistar Institute Of Anatomy & Biology Diagnostic and therapeutic reagents for alzheimer's disease
US6962984B2 (en) 1996-12-05 2005-11-08 Nihon University IgA nephropathy-related DNA
US6218506B1 (en) * 1997-02-05 2001-04-17 Northwestern University Amyloid β protein (globular assembly and uses thereof)
US20030068316A1 (en) 1997-02-05 2003-04-10 Klein William L. Anti-ADDL antibodies and uses thereof
US6277375B1 (en) 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
WO1998039303A1 (en) 1997-03-03 1998-09-11 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Small molecules useful in the treatment of inflammatory disease
US5798102A (en) 1997-03-04 1998-08-25 Milkhaus Laboratory, Inc. Treatment of cardiomyopathy
US6057098A (en) * 1997-04-04 2000-05-02 Biosite Diagnostics, Inc. Polyvalent display libraries
US8173127B2 (en) * 1997-04-09 2012-05-08 Intellect Neurosciences, Inc. Specific antibodies to amyloid beta peptide, pharmaceutical compositions and methods of use thereof
US20020086847A1 (en) * 1997-04-09 2002-07-04 Mindset Biopharmaceuticals (Usa) Recombinant antibodies specific for beta-amyloid ends, DNA encoding and methods of use thereof
WO1998044955A1 (en) 1997-04-09 1998-10-15 Mindset Ltd. Recombinant antibodies specific for beta-amyloid ends, dna encoding and methods of use thereof
US6787319B2 (en) * 1997-04-16 2004-09-07 American Home Products Corp. β-amyloid peptide-binding proteins and polynucleotides encoding the same
AU7690898A (en) * 1997-05-20 1998-12-11 Ottawa Civic Hospital Loeb Research Institute Vectors and methods for immunization or therapeutic protocols
EP0999853B1 (en) 1997-06-13 2003-01-02 Genentech, Inc. Stabilized antibody formulation
AU8269898A (en) 1997-06-27 1999-01-19 Regents Of The University Of California, The Drug targeting of a peptide radiopharmaceutical through the primate blood-brain barrier in vivo with a monoclonal antibody to the human insulin receptor
IT1293511B1 (it) 1997-07-30 1999-03-01 Gentili Ist Spa Anticorpi monoclonali catalitici ad attivita' proteasica per la lisi selettiva della componente proteica di placche e aggregati correlati
WO1999006587A2 (en) 1997-08-01 1999-02-11 Morphosys Ag Novel method and phage for the identification of nucleic acid sequences encoding members of a multimeric (poly)peptide complex
WO1999006545A2 (en) 1997-08-01 1999-02-11 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Composition and method for the detection of diseases associated with amyloid-like fibril or protein aggregate formation
DE69840962D1 (de) 1997-08-29 2009-08-20 Antigenics Inc Adjuvant qs-21 enthaltende zusammensetzungen mit polysorbate oder cyclodextrin als hilfsmittel
US6175057B1 (en) * 1997-10-08 2001-01-16 The Regents Of The University Of California Transgenic mouse model of alzheimer's disease and cerebral amyloid angiopathy
EP0921189B1 (en) * 1997-11-14 2005-01-12 Sankyo Company Limited Transgenic animal allergy models and methods for their use
US7790856B2 (en) 1998-04-07 2010-09-07 Janssen Alzheimer Immunotherapy Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
US6913745B1 (en) * 1997-12-02 2005-07-05 Neuralab Limited Passive immunization of Alzheimer's disease
US20080050367A1 (en) * 1998-04-07 2008-02-28 Guriq Basi Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
US7179892B2 (en) 2000-12-06 2007-02-20 Neuralab Limited Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
US6743427B1 (en) * 1997-12-02 2004-06-01 Neuralab Limited Prevention and treatment of amyloidogenic disease
US6923964B1 (en) 1997-12-02 2005-08-02 Neuralab Limited Active immunization of AScr for prion disorders
US6710226B1 (en) * 1997-12-02 2004-03-23 Neuralab Limited Transgenic mouse assay to determine the effect of Aβ antibodies and Aβ Fragments on alzheimer's disease characteristics
US6761888B1 (en) 2000-05-26 2004-07-13 Neuralab Limited Passive immunization treatment of Alzheimer's disease
US7964192B1 (en) * 1997-12-02 2011-06-21 Janssen Alzheimer Immunotherapy Prevention and treatment of amyloidgenic disease
TWI239847B (en) * 1997-12-02 2005-09-21 Elan Pharm Inc N-terminal fragment of Abeta peptide and an adjuvant for preventing and treating amyloidogenic disease
US6750324B1 (en) * 1997-12-02 2004-06-15 Neuralab Limited Humanized and chimeric N-terminal amyloid beta-antibodies
US6787523B1 (en) 1997-12-02 2004-09-07 Neuralab Limited Prevention and treatment of amyloidogenic disease
US7588766B1 (en) 2000-05-26 2009-09-15 Elan Pharma International Limited Treatment of amyloidogenic disease
HUP0004821A2 (hu) 1997-12-03 2001-06-28 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Lágy pellet alakjában lévő gyógyszerkészítmény és előállítása
JP2002511385A (ja) 1997-12-03 2002-04-16 ニューララブ リミテッド アルツハイマー病におけるβ−アミロイド関連変化を抑制する方法
FR2777015B3 (fr) 1998-02-23 2000-09-15 Financ De Biotechnologie Procede et moyens pour l'obtention de modeles cellulaires et animaux de maladies neurodegeneratives
US6194551B1 (en) * 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6528624B1 (en) * 1998-04-02 2003-03-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US20050059802A1 (en) * 1998-04-07 2005-03-17 Neuralab Ltd Prevention and treatment of amyloidogenic disease
US20050059591A1 (en) * 1998-04-07 2005-03-17 Neuralab Limited Prevention and treatment of amyloidogenic disease
JP2002512776A (ja) 1998-04-28 2002-05-08 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション 免疫原性の低下したモノクローナル抗体
NO314086B1 (no) 1998-05-08 2003-01-27 Gemvax As Peptider og farmasöytiske sammensetninger inneholdende disse, nukleinsyresekvenser som koder for slike peptider, plasmider og virusvektoreromfattende slike DNA-sekvenser samt anvendelse av disse for fremstilling avfarmasöytiske preparater til
EP1080110A2 (en) 1998-05-19 2001-03-07 Yeda Research And Development Co. Ltd. Use of activated t cells, nervous system-specific antigens for treating disorders of the nevrous system
DE69942274D1 (de) 1998-05-21 2010-06-02 Univ Tennessee Res Foundation Methoden zur amyloidentfernung mit anti-amyloid-antikörper
US20030147882A1 (en) 1998-05-21 2003-08-07 Alan Solomon Methods for amyloid removal using anti-amyloid antibodies
US6432710B1 (en) 1998-05-22 2002-08-13 Isolagen Technologies, Inc. Compositions for regenerating tissue that has deteriorated, and methods for using such compositions
US6727349B1 (en) * 1998-07-23 2004-04-27 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Recombinant anti-CCR2 antibodies and methods of use therefor
EA003634B1 (ru) 1998-10-05 2003-08-28 Фармэкса А/С Новые способы терапевтической вакцинации
CA2354862A1 (en) 1998-10-19 2000-04-27 Yeda Research And Development Co. Ltd. Treatment of systemic lupus erythematosus by down-regulating the autoimmune response to autoantigens
US7112661B1 (en) 1998-10-30 2006-09-26 The Research Foundation Of State University Of New York Variable heavy chain and variable light chain regions of antibodies to human platelet glycoprotein Ib alpha
GB2348203B (en) 1998-11-04 2002-06-19 Imp College Innovations Ltd Solube beta-forms of prion proteins, methods of preparation and use
ES2216509T3 (es) 1999-01-19 2004-10-16 PHARMACIA & UPJOHN COMPANY Procedimiento de envasado para sustancias medicinales sensibles a la oxidacion.
EP1146898A1 (en) 1999-01-22 2001-10-24 Matthew John During Vaccine-mediated treatment of neurological disorders
US7629311B2 (en) 1999-02-24 2009-12-08 Edward Lewis Tobinick Methods to facilitate transmission of large molecules across the blood-brain, blood-eye, and blood-nerve barriers
US7282570B2 (en) * 1999-04-20 2007-10-16 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of immune related diseases
ATE384077T1 (de) 1999-05-05 2008-02-15 Neurochem Int Ltd Stereoselektive antifibrillogene peptide
US6787637B1 (en) 1999-05-28 2004-09-07 Neuralab Limited N-Terminal amyloid-β antibodies
UA81216C2 (en) 1999-06-01 2007-12-25 Prevention and treatment of amyloid disease
PE20010212A1 (es) 1999-06-01 2001-02-22 Neuralab Ltd Composiciones del peptido a-beta y procesos para producir las mismas
US6582945B1 (en) * 1999-06-16 2003-06-24 Boston Biomedical Research Institute Immunological control of β-amyloid levels in vivo
WO2001005355A2 (en) 1999-07-15 2001-01-25 Genetics Institute, Inc. Formulations for il-11
ATE445639T1 (de) 1999-08-04 2009-10-15 Univ Southern California Globularer aufbau vom amyloid-beta- protein und deren verwendungen
IL142948A0 (en) 1999-09-03 2002-04-21 Univ Ramot Agents and compositions and methods utilizing same useful in diagnosing and/or treating or preventing plaque forming diseases
US6294171B2 (en) 1999-09-14 2001-09-25 Milkhaus Laboratory, Inc. Methods for treating disease states comprising administration of low levels of antibodies
US6824780B1 (en) 1999-10-29 2004-11-30 Genentech, Inc. Anti-tumor antibody compositions and methods of use
US20020094335A1 (en) 1999-11-29 2002-07-18 Robert Chalifour Vaccine for the prevention and treatment of alzheimer's and amyloid related diseases
AU784312B2 (en) 1999-11-29 2006-03-09 Bellus Health (International) Limited Vaccine for the prevention and treatment of alzheimer's and amyloid related diseases
IL149976A0 (en) 1999-12-08 2002-12-01 Mindset Biopharmaceuticals Usa Chimeric peptides as immunogens, antibodies thereto, and methods for immunization using chimeric peptides or antibodies
US6399314B1 (en) * 1999-12-29 2002-06-04 American Cyanamid Company Methods of detection of amyloidogenic proteins
EP1259251B1 (en) 2000-02-21 2005-10-19 Pharmexa A/S Novel method for down-regulation of amyloid
CA2400838C (en) 2000-02-21 2013-04-23 Pharmexa A/S Novel method for down-regulation of amyloid
CZ306683B6 (cs) * 2000-02-24 2017-05-03 Washington University Léčivo pro prevenci nebo léčení preklinické nebo klinické Alzheimerovy nemoci
US7485616B2 (en) 2000-04-05 2009-02-03 University Of Tennessee Research Foundation Methods of investigating, diagnosing, and treating amyloidosis
AU5162201A (en) 2000-04-13 2001-10-30 Corixa Corporation Immunostimulant compositions comprising an aminoalkyl glucosaminide phosphate and qs-21
DE60108111T2 (de) * 2000-05-22 2005-12-08 New York University Synthetische immunogene jedoch nicht amyloidogene peptide, die homolog zu amyloid beta sind und deren verwendung zur induktion einer immunantwort gegen amyloid beta und amyloidaggregate
JP5362164B2 (ja) 2000-07-07 2013-12-11 バイオアークティック ニューロサイエンス アーベー アルツハイマー病の予防及び治療
US20020009445A1 (en) * 2000-07-12 2002-01-24 Yansheng Du Human beta-amyloid antibody and use thereof for treatment of alzheimer's disease
EP1172378A1 (en) 2000-07-12 2002-01-16 Richard Dr. Dodel Human beta-amyloid antibody and use thereof for treatment of alzheimer's disease
US20030092145A1 (en) * 2000-08-24 2003-05-15 Vic Jira Viral vaccine composition, process, and methods of use
DK1317479T3 (da) * 2000-09-06 2009-11-23 Aventis Pharma Sa Fremgangsmåder og sammensætninger for sygdomme, der er associeret med amyloidosis
IT1319277B1 (it) 2000-10-24 2003-09-26 Chiesi Farma Spa Proteine di fusione utili per il trattamento di immunizzazione dellamalattia di alzheimer.
IL139308A0 (en) 2000-10-26 2001-11-25 Marikovsky Moshe Peptides from amyloid precursor protein which inhibit tumor growth and metastasis
WO2002064084A2 (en) * 2000-11-02 2002-08-22 Cornell Research Foundation, Inc. In vivo multiphoton diagnostic detection and imaging of a neurodegenerative disease
PT1346041E (pt) 2000-11-27 2007-06-05 Praecis Pharm Inc Agentes terapêuticos e métodos para a sua utilização no tratamento de uma doença amiloidogénica.
US7700751B2 (en) 2000-12-06 2010-04-20 Janssen Alzheimer Immunotherapy Humanized antibodies that recognize β-amyloid peptide
PE20020574A1 (es) 2000-12-06 2002-07-02 Wyeth Corp Anticuerpos humanizados que reconocen el peptido amiloideo beta
WO2002060920A2 (en) 2000-12-27 2002-08-08 Board Of Regents, University Of Texas System Prion isomers, methods of making, methods of using, and compositions and products comprising prion isomers
US20020160394A1 (en) 2001-01-24 2002-10-31 Bayer Corporation Regulation of transthyretin to treat obesity
DE60121729T2 (de) 2001-04-19 2007-11-29 Dr. Hermann Schätzl Prion Proteindimere für Impfungen
EP1385545B1 (en) * 2001-04-30 2009-01-07 Eli Lilly And Company Humanized antibodies recognizing the beta-amyloid peptide
WO2002088307A2 (en) * 2001-04-30 2002-11-07 Eli Lilly And Company Humanized antibodies
US6906169B2 (en) * 2001-05-25 2005-06-14 United Biomedical, Inc. Immunogenic peptide composition comprising measles virus Fprotein Thelper cell epitope (MUFThl-16) and N-terminus of β-amyloid peptide
GB0113179D0 (en) 2001-05-31 2001-07-25 Novartis Ag Organic compounds
AU2002345843A1 (en) 2001-06-22 2003-01-08 Panacea Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for preventing protein aggregation in neurodegenerative diseases
JP4317010B2 (ja) 2001-07-25 2009-08-19 ピーディーエル バイオファーマ，インコーポレイティド ＩｇＧ抗体の安定な凍結乾燥医薬製剤
US20030135035A1 (en) 2001-08-09 2003-07-17 Mark Shannon Human ZZAP1 protein
US20040192898A1 (en) 2001-08-17 2004-09-30 Jia Audrey Yunhua Anti-abeta antibodies
CA2452104A1 (en) 2001-08-17 2003-02-27 Eli Lilly And Company Use of antibodies having high affinity for soluble ass to treat conditions and diseases related to ass
EP1519740A4 (en) 2001-08-17 2005-11-09 Lilly Co Eli FASTER IMPROVEMENT OF COGNITION IN DISEASES ASSOCIATED WITH A-BETA
US20030082191A1 (en) 2001-08-29 2003-05-01 Poduslo Joseph F. Treatment for central nervous system disorders
US6907297B2 (en) 2001-09-28 2005-06-14 Ethicon, Inc. Expandable intracardiac return electrode and method of use
US7781413B2 (en) 2001-10-31 2010-08-24 Board Of Regents, The University Of Texas System SEMA3B inhibits tumor growth and induces apoptosis in cancer cells
WO2003039485A2 (en) 2001-11-08 2003-05-15 Protein Design Labs Stable liquid pharmaceutical formulation of igg antibodies
CA2466841A1 (en) 2001-11-21 2003-06-05 New York University Synthetic immunogenic but non-deposit-forming polypeptides and peptides homologous to amyloid .beta., prion protein, amylin, .alpha.-synuclein, or polyglutamine repeats for induction of an immune response thereto
WO2003051374A2 (en) 2001-12-17 2003-06-26 New York State Office Of Mental Health SEQUESTRATION OF Aβ IN THE PERIPHERY IN THE ABSENCE OF IMMUNOMODULATING AGENT AS A THERAPEUTIC APPROACH FOR THE TREATMENT OR PREVENTION OF BETA-AMYLOID RELATED DISEASES
AR038568A1 (es) 2002-02-20 2005-01-19 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-a beta y su uso
EP1476120B1 (en) 2002-02-21 2010-09-29 Duke University Treatment methods using anti-cd22 antibodies
MY139983A (en) * 2002-03-12 2009-11-30 Janssen Alzheimer Immunotherap Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
US7132100B2 (en) 2002-06-14 2006-11-07 Medimmune, Inc. Stabilized liquid anti-RSV antibody formulations
SI1524994T1 (sl) 2002-07-19 2011-08-31 Cytos Biotechnology Ag Sestavki cepiv, ki vsebujejo amiloidne beta 1-6 antigenske mreĹľe
WO2004013172A2 (en) 2002-07-24 2004-02-12 Innogenetics N.V. Fragments of beta-amyloid as targets for vaccination against alzheimer disease
JP2006508072A (ja) 2002-10-01 2006-03-09 ノースウエスタン ユニバーシティ アミロイドベータ由来拡散性リガンド（ＡＤＤＬｓ）、ＡＤＤＬ代替物、ＡＤＤＬ結合性分子、およびそれらの使用
US20060019850A1 (en) 2002-10-31 2006-01-26 Korzenski Michael B Removal of particle contamination on a patterned silicon/silicon dioxide using dense fluid/chemical formulations
FR2846667B1 (fr) 2002-11-06 2004-12-31 Pasteur Institut Fragments variables d'anticorps de camelides a chaine unique diriges contre le peptide beta-amyloide 1-42 et leurs applications pour le diagnostic et le traitement des maladies neuroagregatives
WO2004055164A2 (en) 2002-12-13 2004-07-01 Abgenix, Inc. System and method for stabilizing antibodies with histidine
US6787129B1 (en) 2003-01-13 2004-09-07 Zenitech Llc Castor polyester as gloss agents in anionic systems
CN1745175A (zh) 2003-02-01 2006-03-08 神经实验室有限公司 自动免疫产生针对可溶性A－β的抗体
ES2344645T3 (es) 2003-02-10 2010-09-02 Applied Molecular Evolution, Inc. Moleculas de union al abeta.
AU2004229335C1 (en) 2003-04-04 2010-06-17 Genentech, Inc. High concentration antibody and protein formulations
EP1480041A1 (en) 2003-05-22 2004-11-24 Innogenetics N.V. Method for the prediction, diagnosis and differential diagnosis of Alzheimer's disease
TWI306458B (en) 2003-05-30 2009-02-21 Elan Pharma Int Ltd Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
WO2005002444A1 (en) 2003-07-07 2005-01-13 Agency For Science, Technology And Research Method and apparatus for extracting third ventricle information
WO2005014041A2 (en) 2003-07-24 2005-02-17 Novartis Ag Use of an amyloid beta dna vaccine for the treatment and/or prevention of amyloid diseases
US20060233788A1 (en) 2003-09-05 2006-10-19 Heiman Mark L Anti-ghrelin antibodies
CA2445743A1 (en) 2003-10-08 2005-04-08 The University Of British Columbia Methods for modulating neuronal responses
PT2336147E (pt) 2003-12-17 2014-07-16 Janssen Alzheimer Immunotherap Conjugados transportadores de péptidos beta imunogénicos e seus processos de produção
SG182163A1 (en) 2003-12-17 2012-07-30 Wyeth Corp Immunogenic peptide carrier conjugates and methods of producing same
US20050214222A1 (en) 2004-02-13 2005-09-29 Mckinnon Stuart J In vivo imaging of amyloid plaques in glaucoma using intravenous injectable dyes
AU2005270026A1 (en) 2004-07-02 2006-02-09 University Of Pittsburgh - Of The Commonwealth System Of Higher Education Use of thioflavin radiolabeled derivatives in amyloid imaging for assessing anti-amyloid therapies
US7807165B2 (en) * 2004-07-30 2010-10-05 Rinat Neuroscience Corp. Antibodies directed against amyloid-beta peptide and methods using same
ZA200703561B (en) * 2004-10-05 2009-09-30 Wyeth Corp Methods and compositions for improving recombinant protein production
US20060160161A1 (en) 2004-10-26 2006-07-20 Elan Pharmaceuticals, Inc. Methods for assessing antibodies to neurodegenerative disease-associated antigens
WO2006066118A2 (en) 2004-12-15 2006-06-22 Neuralab Limited Contextual fear test for predicting efficacy of alzheimer immunotherapeutic treatment
TW200635608A (en) 2004-12-15 2006-10-16 Neuralab Ltd Aβ antibodies for use in improving cognition
US7625560B2 (en) 2004-12-15 2009-12-01 Janssen Alzheimer Immunotherapy Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
WO2006066233A1 (en) 2004-12-15 2006-06-22 Neuralab Limited An immunoprecipitation-based assay for predicting in vivo efficacy of beta-amyloid antibodies
AR052051A1 (es) 2004-12-15 2007-02-28 Neuralab Ltd Anticuerpos ab humanizados usados en mejorar la cognicion
GT200600031A (es) 2005-01-28 2006-08-29 Formulacion anticuerpo anti a beta
JP2008528638A (ja) 2005-01-28 2008-07-31 ワイス ポリペプチドの安定化液体処方
ES2402650T3 (es) * 2005-06-17 2013-05-07 Janssen Alzheimer Immunotherapy Métodos de purificación de anticuerpos anti A beta
WO2007011833A2 (en) 2005-07-18 2007-01-25 Merck & Co., Inc. Spiropiperidine beta-secretase inhibitors for the treatment of alzheimer's disease
EP1951750A4 (en) * 2005-11-10 2009-12-09 Roskamp Res Llc MODULATION OF THE ANGIOGENESIS BY A-BETA PEPTIDE FRAGMENTS
WO2010044803A1 (en) 2008-10-17 2010-04-22 Elan Pharma International Limited Treatment of amyloidogenic diseases
WO2009017467A1 (en) 2007-07-27 2009-02-05 Elan Pharma International Limited Treatment of amyloidogenic diseases
JP2010521651A (ja) 2007-03-12 2010-06-24 独立行政法人放射線医学総合研究所 脳内のアミロイド関連神経炎症の画像化
US8003097B2 (en) 2007-04-18 2011-08-23 Janssen Alzheimer Immunotherapy Treatment of cerebral amyloid angiopathy
JP2011526240A (ja) 2007-04-18 2011-10-06 ヤンセン アルツハイマー イミュノセラピー 脳アミロイド血管症の予防および治療
JO3076B1 (ar) 2007-10-17 2017-03-15 Janssen Alzheimer Immunotherap نظم العلاج المناعي المعتمد على حالة apoe
TR201816335T4 (tr) 2008-09-18 2018-11-21 Cedars Sinai Medical Center Alzheimer hastalığının tespitine yönelik optik yöntem.

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5589154A (en) * 1994-11-22 1996-12-31 Rutgers, The State University Of New Jersey Methods for the prevention or treatment of vascular hemorrhaging and Alzheimer's disease

Also Published As

Publication number Publication date
SG180018A1 (en) 2012-05-30
KR20050071368A (ko) 2005-07-07
IS7499A (is) 2004-10-11
PL375159A1 (en) 2005-11-28
EA200401170A1 (ru) 2005-10-27
US8128928B2 (en) 2012-03-06
HRP20040950A2 (en) 2005-08-31
CA2478049A1 (en) 2003-09-25
ZA200406616B (en) 2006-10-25
CO5611164A2 (es) 2006-02-28
US20110142823A1 (en) 2011-06-16
US7256273B2 (en) 2007-08-14
PE20040207A1 (es) 2004-04-13
UA89469C2 (uk) 2010-02-10
ES2389541T3 (es) 2012-10-29
PL215258B1 (pl) 2013-11-29
MY139983A (en) 2009-11-30
BR0308143A (pt) 2007-01-23
AR038953A1 (es) 2005-02-02
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WO2003077858A2 (en) 2003-09-25
AU2003214152A1 (en) 2003-09-29
EP1554311A4 (en) 2007-04-11
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KR101122871B1 (ko) 2012-06-01
KR20110027846A (ko) 2011-03-16
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IL163626A (en) 2011-12-29
JP2006503549A (ja) 2006-02-02
EP1554311B1 (en) 2012-06-13

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