JP2012034697A - βアミロイドペプチドを認識するヒト化抗体 - Google Patents

Abstract

【課題】患者の脳中のＡβのアミロイド沈着物と関連する疾患の処置のための改良された剤および方法を提供すること。
【解決手段】本発明は、少なくとも部分的に、Ａβペプチドに特異的に結合しかつアミロイド原性障害と関連する斑負荷の低下および／若しくは神経炎性ジストロフィーの低下で有効である２種のモノクローナル抗体の同定および特徴付けに基づく。とりわけ、本発明はこれらの抗体の可変領域のヒト化を特徴とし、そして従ってヒト化免疫グロブリン若しくは抗体鎖、無傷のヒト化免疫グロブリン若しくは抗体、および機能的免疫グロブリン若しくは抗体フラグメント、とりわけ特徴とされる抗体の抗原結合フラグメントを提供する。
【選択図】なし

Description

関連出願
本出願は、“Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｈａｔ Ｒｅｃｏｇｎｉ
ｚｅ Ｂｅｔａ Ａｍｙｌｏｉｄ Ｐｅｐｔｉｄｅ”（βアミロイドペプチドを認識する
ヒト化抗体）と題された、２００１年１２月６日出願の以前に出願された米国特許出願第
１０／０１０，９４２号明細書（順に、“Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ
Ｔｈａｔ Ｒｅｃｏｇｎｉｚｅ Ｂｅｔａ−Ａｍｙｌｏｉｄ Ｐｅｐｔｉｄｅ”（β−ア
ミロイドペプチドを認識するヒト化抗体）と題された、以前に出願された米国仮出願第６
０／２５１，８９２号明細書（２０００年１２月６日出願）（失効）の利益を主張する）
の一部継続出願である、２００３年３月１４日出願の米国特許出願第１０／３８８，３８
９号明細書に対する優先権を主張する。上で言及された出願の内容全体は引用することに
より本明細書に組み込まれる。

アルツハイマー病（ＡＤ）は老人性痴呆をもたらす進行性疾患である。全般として、非
特許文献１；特許文献１；非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４を参照されたい。
大まかに言って、該疾患は２つの範疇、すなわち高齢（６５歳以上）で発生する晩発性お
よび老年期の十分に前すなわち３５と６０歳との間に発症する早発性に分けられる。双方
の型の疾患で病状は同一であるが、しかし、より若年齢で開始する症例において異常がよ
り重篤かつ広範な傾向がある。該疾患は脳中の最低２つの型の病変、すなわち神経原線維
変化および老人斑を特徴とする。神経原線維変化は対になって相互の周囲で捻れた２本の
細糸よりなる微小管結合τタンパク質の細胞内沈着物である。老人斑（すなわちアミロイ
ド斑）は脳組織の切片の顕微鏡分析により見ることができる、中心に細胞外アミロイド沈
着物をもつ直径１５０μｍまでのまとまりのない神経絨の領域である。脳内のアミロイド
斑の蓄積はダウン症候群および他の認識障害ともまた関連する。

該斑の主構成要素はＡβすなわちβ−アミロイドペプチドと命名されるペプチドである
。Ａβペプチドは、より大きい膜貫通糖タンパク質（アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰ
Ｐ）と命名された著名なタンパク質）の３９−４３アミノ酸の４ｋＤａの内部のフラグメ
ントである。多様な分泌酵素によるＡＰＰのタンパク質分解性プロセシングの結果として
、Ａβは主として長さ４０アミノ酸の短い形態および長さ４２〜４３アミノ酸からの範囲
にわたる長い形態の双方で見出される。ＡＰＰの疎水性膜貫通ドメインの一部はＡβのカ
ルボキシ端に見出され、そしてとりわけ、長い形態の場合は斑に凝集するＡβの能力の原
因であるとみられる。脳中のアミロイド斑の蓄積は最終的に神経細胞死に至る。この型の
神経系の劣化に関連する身体的症状がアルツハイマー病の特徴である。

ＡＰＰタンパク質内の数種の突然変異がアルツハイマー病の存在と相関している。例え
ば、非特許文献５（バリン^７１７からイソロイシン）；非特許文献６（バリン^７１７から
グリシン）；非特許文献７（バリン^７１７からフェニルアラニン）；非特許文献８（リシ
ン^５９５−メチオニン^５９６をアスパラギン^５９５−ロイシン^５９６に変える二重突然変
異）を参照されたい。こうした突然変異は、ＡＰＰのＡβへの増大した若しくは変えられ
たプロセシング、とりわけＡＰＰの増大された量の長い形態のＡβ（すなわちＡβ１−４
２およびＡβ１−４３）へのプロセシングによりアルツハイマー病を引き起こすと考えら
れている。プレセニリン遺伝子ＰＳ１およびＰＳ２のような他の遺伝子中の突然変異がＡ
ＰＰのプロセシングに間接的に影響を及ぼして増大された量の長い形態のＡβを生成させ
ると考えられている（非特許文献９を参照されたい）。

アルツハイマー病におけるアミロイド斑の意義を決定するためにマウスモデルが成功裏
に使用されてきた（非特許文献４；非特許文献１０）。とりわけ、ＰＤＡＰＰトランスジ
ェニックマウス（変異体の形態のヒトＡＰＰを発現しかつ若齢でアルツハイマー病を発症
する）に長い形態のＡβを注入する場合に、それらはアルツハイマー病の進行の低下およ
びＡβペプチドに対する抗体力価の増大の双方を表す（非特許文献１１）。上で論考され
た観察結果は、（とりわけその長い形態の）Ａβがアルツハイマー病における原因要素で
あることを示している。

特許文献２は、事前に確立された（ｐｒｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ）ＡＤを伴う患者へ
のホメオパシー療法の投薬量（１０^−２ｍｇ／日未満若しくはそれに等しい）のＡβの投
与を提案している。約５リットルの血漿をもつ典型的なヒトにおいて、この投薬量の上限
でさえ２ｐｇ／ｍｌを超えない濃度を生成させると期待されるとみられる。ヒト血漿中の
Ａβの通常濃度は典型的に５０〜２００ｐｇ／ｍｌの範囲にある（非特許文献１２）。特
許文献２の提案された投薬量は内因性の循環するＡβのレベルを辛うじて変えるとみられ
るため、また、特許文献２は免疫賦活剤としてのアジュバントの使用を推奨していないた
め、何らかの治療的利益が生じるとみられることはありそうもないと思われる。

従って、アルツハイマー病の処置のための新たな療法および試薬、とりわけ生理学的（
例えば非毒性の）用量で治療上の利益を遂げることが可能な療法および試薬に対する必要
性が存在する。

Ｈａｒｄｙら、第ＷＯ ９２／１３０６９号明細書 ＭｃＭｉｃｈａｅｌ、欧州特許第５２６，５１１号明細書

Ｓｅｌｋｏｅ、ＴＩＮＳ １６：４０３（１９９３） Ｓｅｌｋｏｅ、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．５３：４３８（１９９４） Ｄｕｆｆら、Ｎａｔｕｒｅ ３７３：４７６（１９９５） Ｇａｍｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ ３７３：５２３（１９９５） Ｇｏａｔｅら、Ｎａｔｕｒｅ ３４９：７０４）（１９９１） Ｃｈａｒｔｉｅｒ Ｈａｒｌａｎら Ｎａｔｕｒｅ ３５３：８４４（１９９１）） Ｍｕｒｒｅｌｌら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５４：９７（１９９１） Ｍｕｌｌａｎら、Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．１：３４５（１９９２） Ｈａｒｄｙ、ＴＩＮＳ ２０：１５４（１９９７） Ｊｏｈｎｓｏｎ−Ｗｏｏｄら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９４：１５５０（１９９７） Ｓｃｈｅｎｋら、Ｎａｔｕｒｅ ４００、１７３（１９９９） Ｓｅｕｂｅｒｔら、Ｎａｔｕｒｅ ３５９：３２５（１９９２）

［発明の要約］
本発明は、アミロイド原性疾患（例えばアルツハイマー病）の予防および処置のための
新たな免疫学的試薬、とりわけ治療的抗体試薬を特徴とする。本発明は、少なくとも部分
的に、Ａβペプチドに特異的に結合しかつアミロイド原性障害と関連する斑負荷の低下お
よび／若しくは神経炎性ジストロフィーの低下で有効である２種のモノクローナル抗体の
同定および特徴付けに基づく。これらの抗体の構造および機能分析は、予防的および／若
しくは治療的使用のための多様なヒト化抗体の設計につながる。とりわけ、本発明はこれ
らの抗体の可変領域のヒト化を特徴とし、そして従ってヒト化免疫グロブリン若しくは抗
体鎖、無傷のヒト化免疫グロブリン若しくは抗体、および機能的免疫グロブリン若しくは
抗体フラグメント、とりわけ特徴とされる抗体の抗原結合フラグメントを提供する。

前記ポリペプチドをコードするのに適するポリヌクレオチド試薬、ベクターおよび宿主
がそうであるように、特徴とするモノクローナル抗体の相補性決定領域を含んでなるポリ
ペプチドもまた開示される。

アミロイド原性疾患若しくは障害（例えばアルツハイマー病）の処置方法が、こうした
応用での使用のための製薬学的組成物およびキットがそうであるように開示される。

治療的試薬として使用される場合に、適正な免疫学的機能、ならびに向上した結合親和
性および／若しくは低下した免疫原性を有するヒト化抗体の設計における置換の影響を受
けやすい残基の同定に重要である、特徴とするモノクローナル抗体内の残基の同定方法も
また特徴とする。

変えられたエフェクター機能を有する抗体（例えばヒト化抗体）およびそれらの治療上
の用途もまた特徴とする。

マウス３Ｄ６、ヒト化３Ｄ６、Ｋａｂａｔ ＩＤ １０９２３０および生殖系列Ａ１９抗体のＬ鎖のアミノ酸配列のアラインメントを描く。ＣＤＲ領域を矢印により示す。太字斜体は希少なネズミの残基を示す。太字は充填（ＶＨ＋ＶＬ）残基を示す。黒地はカノニカル／ＣＤＲと相互作用する残基を示す。＊印はヒト化３Ｄ６、バージョン１の戻し突然変異に選択した残基を示す。 マウス３Ｄ６、ヒト化３Ｄ６、Ｋａｂａｔ ＩＤ ０４５９１９および生殖系列ＶＨ３−２３抗体のＨ鎖のアミノ酸残基のアラインメントを描く。注釈は図１についてと同一である。 ３Ｄ６、キメラ３Ｄ６および１０Ｄ５のＡβ結合特性をグラフで描く。図３Ａはネズミの３Ｄ６と比較したキメラ３Ｄ６（ＰＫ１６１４）へのＡβの結合を描くグラフである。図３Ｂは、Ａβへの結合についての未標識の３Ｄ６、ＰＫ１６１４および１０Ｄ５に対するビオチニル化３Ｄ６の競合を描くグラフである。 α−炭素バックボーンの軌跡を示す３Ｄ６ ＶＨおよびＶＬの相同性モデルを描く。ＶＨは点線としてに示し、また、ＶＬは実線として示す。ＣＤＲ領域はリボンの形態で示す。 キメラ３Ｄ６およびヒト化３Ｄ６のＡβ結合特性をグラフで描く。図５Ａは、ヒト化３Ｄ６ｖ１およびキメラ３Ｄ６の凝集したＡβへの結合を測定するＥＬＩＳＡの結果を描く。図５Ｂはヒト化３Ｄ６ｖ１およびヒト化３Ｄ６ｖ２の凝集したＡβへの結合を測定するＥＬＩＳＡの結果を描く。 ＰＤＡＰＰマウスの脳切片からのＡβ斑へのヒト化３Ｄ６およびキメラ３Ｄ６の結合を定量するグラフである。 Ａβへの結合についてネズミの３Ｄ６と競合するヒト化３Ｄ６のバージョン１および２、キメラ３Ｄ６、ネズミの３Ｄ６ならびに１０Ｄ５の能力を試験する競合結合アッセイの結果を示すグラフである。 小膠細胞によるＡβの取り込みを媒介するヒト化３Ｄ６ｖ２、キメラ３Ｄ６およびヒトＩｇＧの能力を試験するｅｘ ｖｉｖｏ食作用アッセイのグラフで描く。 １０Ｄ５ ＶＬおよび３Ｄ６ ＶＬのアミノ酸配列のアラインメントを描く。太字は１０Ｄ５と正確に一致する残基を示す。 １０Ｄ５ ＶＨおよび３Ｄ６ ＶＨのアミノ酸配列のアラインメントを描く。太字は１０Ｄ５と正確に一致する残基を示す。

［発明の詳細な記述］
本発明は、アルツハイマー病若しくは他のアミロイド原性疾患を予防若しくは治療する
ための新たな免疫学的試薬および方法を特徴とする。本発明は、少なくとも部分的に、β
アミロイドタンパク質（Ａβ）の結合（例えば可溶性および／若しくは凝集したＡβの結
合）、（例えば凝集したＡβの）食作用の媒介、（例えば患者での）斑負荷の減少ならび
に／または神経炎性ジストロフィーの低下で有効な２種のモノクローナル免疫グロブリン
３Ｄ６および１０Ｄ５の特徴付けに基づく。本発明はさらに、これらの免疫グロブリンの
可変ＬおよびＨ鎖の一次および二次構造の決定および構造的特徴付け、ならびに活性およ
び免疫原性に重要な残基の同定に基づく。

本明細書で記述される好ましいモノクローナル免疫グロブリンの可変Ｌおよび／若しく
は可変Ｈ鎖を包含する免疫グロブリンを特徴とする。ヒト化可変Ｌおよび／若しくはヒト
化可変Ｈ鎖を包含する好ましい免疫グロブリン、例えば治療的免疫グロブリンを特徴とす
る。好ましい可変Ｌおよび／若しくは可変Ｈ鎖は、モノクローナル免疫グロブリン（例え
ばドナー免疫グロブリン）からの相補性決定領域（ＣＤＲ）および実質的にヒトアクセプ
ター免疫グロブリンからの可変枠組み領域を包含する。「実質的にヒトアクセプター免疫
グロブリンから」という句は、大多数の若しくは重要な枠組み残基がヒトアクセプター配
列からであり、しかしながらヒト化免疫グロブリンの活性を向上させる（例えばそれがド
ナー免疫グロブリンの活性をより緊密に模倣するように活性を変える）ように選択された
か若しくはヒト化免疫グロブリンの免疫原性を低下させるように選択された残基でのある
位置の残基の置換を見込む。

一態様において、本発明は、３Ｄ６の可変領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含し（
すなわち、配列番号２として示されるＬ鎖可変領域配列からの１、２若しくは３個のＣＤ
Ｒを包含するか、または配列番号４として示されるＨ鎖可変領域配列からの１、２若しく
は３個のＣＤＲを包含する）かつ実質的にヒトアクセプター免疫グロブリンＬ若しくはＨ
鎖配列からの可変枠組み領域を包含するヒト化免疫グロブリンＬ若しくはＨ鎖を特徴とす
るが、但し、枠組み残基の最低１残基が対応するネズミの残基に戻し突然変異され（ｂａ
ｃｋｍｕｔａｔｅｄ）、前記戻し突然変異はＡβ結合に導く該鎖の能力に実質的に影響を
及ぼさない。

別の態様において、本発明は、３Ｄ６可変領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含し（
例えば、配列番号２として示されるＬ鎖可変領域配列からの１、２若しくは３個のＣＤＲ
を包含しかつ／または配列番号４として示されるＨ鎖可変領域配列からの１、２若しくは
３個のＣＤＲを包含する）かつ実質的にヒトアクセプター免疫グロブリンＬ若しくはＨ鎖
配列からの可変枠組み領域を包含するヒト化免疫グロブリンＬ若しくはＨ鎖を特徴とする
が、但し、最低１個の枠組み残基が、マウス３Ｄ６ Ｌ若しくはＨ鎖可変領域配列からの
対応するアミノ酸残基で置換され、該枠組み残基は（ａ）抗原を直接非共有結合する残基
；（ｂ）ＣＤＲに隣接する残基；（ｃ）（例えば相同な既知の免疫グロブリン鎖の解明さ
れた構造上のＬ若しくはＨ鎖をモデル化することにより同定される）ＣＤＲと相互作用す
る残基；および（ｄ）ＶＬ−ＶＨ界面に参画する残基よりなる群から選択される。

別の態様において、本発明は、３Ｄ６の可変領域のＣＤＲおよびヒトアクセプター免疫
グロブリンＬ若しくはＨ鎖配列からの可変枠組み領域を包含するヒト化免疫グロブリンＬ
若しくはＨ鎖を特徴とするが、但し、最低１個の枠組み残基がマウス３Ｄ６ Ｌ若しくは
Ｈ鎖可変領域配列からの対応するアミノ酸残基で置換され、該枠組み残基は、可変領域の
三次元モデルの解析により同定されるところのＬ鎖可変領域のコンホメーション若しくは
機能に影響を及ぼすことが可能な残基、例えば抗原と相互作用することが可能な残基、抗
原結合部位に近接する残基、ＣＤＲと相互作用することが可能な残基、ＣＤＲに隣接する
残基、ＣＤＲ残基の６Å以内の残基、カノニカル残基、バーニア領域（ｖｅｒｎｉｅｒ
ｚｏｎｅ）残基、鎖間充填残基、異常な残基、若しくは構造モデルの表面上のグリコシル
化部位残基である。

別の態様において、本発明は、（例えば配列番号２として示される３Ｄ６ Ｌ鎖可変領
域配列からの）３Ｄ６可変領域のＣＤＲを包含しかつヒトアクセプター免疫グロブリン可
変枠組み領域を包含するヒト化免疫グロブリンＬ鎖を特徴とするが、但し、Ｌ１、Ｌ２、
Ｌ３６およびＬ４６（Ｋａｂａｔの番号付け規約）よりなる群から選択される最低１個の
枠組み残基がマウス３Ｄ６ Ｌ鎖可変領域配列からの対応するアミノ酸残基で置換されて
いる。別の態様において、本発明は、（例えば配列番号４として示される３Ｄ６ Ｈ鎖可
変領域配列からの）３Ｄ６可変領域ＣＤＲを包含しかつヒトアクセプター免疫グロブリン
可変枠組み領域を包含するヒト化免疫グロブリンＨ鎖を特徴とするが、但し、Ｈ４９、Ｈ
９３およびＨ９４（Ｋａｂａｔの番号付け規約）よりなる群から選択される最低１個の枠
組み残基がマウス３Ｄ６ Ｈ鎖可変領域配列からの対応するアミノ酸残基で置換されてい
る。

好ましいＬ鎖は、サブタイプκＩＩ（Ｋａｂａｔの規約）のκＩＩ枠組み領域、例えば
アクセプター免疫グロブリンＫａｂａｔ ＩＤ ０１９２３０、Ｋａｂａｔ ＩＤ ００
５１３１、Ｋａｂａｔ ＩＤ ００５０５８、Ｋａｂａｔ ＩＤ ００５０５７、Ｋａｂ
ａｔ ＩＤ ００５０５９、Ｋａｂａｔ ＩＤ Ｕ２１０４０およびＫａｂａｔ ＩＤ
Ｕ４１６４５からの枠組み領域を包含する。好ましいＨ鎖は、サブタイプＩＩＩ（Ｋａｂ
ａｔの規約）の枠組み領域、例えばアクセプター免疫グロブリンＫａｂａｔ ＩＤ ０４
５９１９、Ｋａｂａｔ ＩＤ ０００４５９、Ｋａｂａｔ ＩＤ ０００５５３、Ｋａｂ
ａｔ ＩＤ ０００３８６およびＫａｂａｔ ＩＤ Ｍ２３６９１からの枠組み領域を包
含する。

一態様において、本発明は、１０Ｄ５可変領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含し（
すなわち、配列番号１４として示されるＬ鎖可変領域配列からの１、２若しくは３個のＣ
ＤＲを包含するか、または配列番号１６として示されるＨ鎖可変領域配列からの１、２若
しくは３個のＣＤＲを包含する）かつ実質的にヒトアクセプター免疫グロブリンＬ若しく
はＨ鎖配列からの可変枠組み領域を包含するヒト化免疫グロブリンＬ若しくはＨ鎖を特徴
とするが、但し、枠組み残基の最低１残基は対応するネズミの残基に戻し突然変異され、
前記戻し突然変異はＡβ結合に導く該鎖の能力に実質的に影響を及ぼさない。

別の態様において、本発明は、１０Ｄ５可変領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含し
（例えば配列番号１４として示されるＬ鎖可変領域配列からの１、２若しくは３個のＣＤ
Ｒを包含しかつ／または配列番号１６として示されるＨ鎖可変領域配列からの１、２若し
くは３個のＣＤＲを包含する）かつ実質的にヒトアクセプター免疫グロブリンＬ若しくは
Ｈ鎖配列からの可変枠組み領域を包含するヒト化免疫グロブリンＬ若しくはＨ鎖を特徴と
するが、但し、最低１個の枠組み残基がマウス３Ｄ６ Ｌ若しくはＨ鎖可変領域配列から
の対応するアミノ酸残基で置換され、該枠組み残基は（ａ）抗原を直接非共有結合する残
基；（ｂ）ＣＤＲに隣接する残基；（ｃ）（例えば相同な既知の免疫グロブリン鎖の解明
された構造上のＬ若しくはＨ鎖をモデル化することにより同定される）ＣＤＲと相互作用
する残基；および（ｄ）ＶＬ−ＶＨ界面に参画する残基よりなる群から選択される。

別の態様において、本発明は、１０Ｄ５可変領域のＣＤＲおよびヒトアクセプター免疫
グロブリンＬ若しくはＨ鎖配列からの可変枠組み領域を包含するヒト化免疫グロブリンＬ
若しくはＨ鎖を特徴とするが、但し、最低１個の枠組み残基がマウス１０Ｄ５ Ｌ若しく
はＨ鎖可変領域配列からの対応するアミノ酸残基で置換され、該枠組み残基は、可変領域
の三次元モデルの解析により同定されるところのＬ鎖可変領域のコンホメーション若しく
は機能に影響を及ぼすことが可能な残基、例えば抗原と相互作用することが可能な残基、
抗原結合部位に近接する残基、ＣＤＲと相互作用することが可能な残基、ＣＤＲに隣接す
る残基、ＣＤＲ残基の６Å以内の残基、カノニカル残基、バーニア領域残基、鎖間充填残
基（ｉｎｔｅｒｃｈａｉｎ ｐａｃｋｉｎｇ ｒｅｓｉｄｕｅ）、異常な残基、若しくは
構造モデルの表面上のグリコシル化部位残基である。

別の態様において、本発明は、上述された置換に加え最低１個の希少ヒト枠組み残基（
ｒａｒｅ ｈｕｍａｎ ｆｒａｍｅｗｏｒｋ ｒｅｓｉｄｕｅ）の置換を特徴とする。例
えば、希少残基はその位置でヒト可変鎖配列に共通であるアミノ酸残基で置換し得る。あ
るいは、希少残基は相同な生殖系列可変鎖配列からの対応するアミノ酸残基で置換し得る
（例えば、希少Ｌ鎖枠組み残基をＡ１、Ａ１７、Ａ１８、Ａ２若しくはＡ１９生殖系列免
疫グロブリン配列からの対応する生殖系列残基で置換し得るか、または、希少Ｈ鎖枠組み
残基をＶＨ３−４８、ＶＨ３−２３、ＶＨ３−７、ＶＨ３−２１若しくはＶＨ３−１１生
殖系列免疫グロブリン配列からの対応する生殖系列残基で置換し得る。

別の態様において、本発明は、上述されたところのＬ鎖およびＨ鎖を包含するヒト化免
疫グロブリン、若しくは前記免疫グロブリンの抗原結合フラグメントを特徴とする。例示
的一態様において、ヒト化免疫グロブリンは最低１０^７Ｍ^−１、１０^８Ｍ^−１若しくは１
０^９Ｍ^−１の結合親和性でβアミロイドペプチド（Ａβ）に結合する（例えば特異的に結
合する）。別の態様において、免疫グロブリン若しくは抗原結合フラグメントはアイソタ
イプγ１を有するＨ鎖を包含する。別の態様において、免疫グロブリン若しくは抗原結合
フラグメントは可溶性βアミロイドペプチド（Ａβ）および凝集したＡβ双方に結合する
（例えば特異的に結合する）。別の態様において、免疫グロブリン若しくは抗原結合フラ
グメントはβアミロイドペプチド（Ａβ）の食作用を媒介する（例えば食作用を誘導する
）。なお別の態様において、免疫グロブリン若しくは抗原結合フラグメントは被験体の血
液脳関門を横断する。なお別の態様において、免疫グロブリン若しくは抗原結合フラグメ
ントは被験体におけるβアミロイドペプチド（Ａβ）負荷および神経炎性ジストロフィー
の双方を低下させる。

別の態様において、本発明は３Ｄ６可変領域（例えば配列番号２若しくは配列番号４と
して示される可変領域配列）を包含するキメラ免疫グロブリンを特徴とする。本明細書で
使用されるところの例えば配列番号２若しくは配列番号４に示されるところのＶＬおよび
／若しくはＶＨ配列を含んでなる抗体若しくは免疫グロブリン配列は、完全なＶＬ若しく
はＶＨ配列を含み得るか、または成熟ＶＬ若しくはＶＨ配列（すなわちシグナル若しくは
リーダーペプチドを伴わない成熟ペプチド）を含み得るかのいずれかである。なお別の態
様において、本発明は、配列番号８に示されるところの可変Ｈ鎖領域および配列番号５に
示されるところの可変Ｌ鎖領域を包含する免疫グロブリン若しくはその抗原結合フラグメ
ントを特徴とする。なお別の態様において、本発明は、配列番号１２に示されるところの
可変Ｈ鎖領域および配列番号１１に示されるところの可変Ｌ鎖領域を包含する免疫グロブ
リン若しくはその抗原結合フラグメントを特徴とする。別の態様において、本発明は１０
Ｄ５可変領域（例えば配列番号１４若しくは配列番号１６として示される可変領域配列）
を包含するキメラ免疫グロブリンを特徴とする。なお別の態様において、免疫グロブリン
若しくはその抗原結合フラグメントはＩｇＧ１からの定常領域をさらに包含する。

本明細書に記述される免疫グロブリンはアミロイド原性疾患を予防若しくは治療するこ
とを目的とした治療法での使用にとりわけ適する。一態様において、本発明は本明細書に
記述されるところのヒト化免疫グロブリンの有効投薬量を患者に投与することを必要とす
るアミロイド原性疾患（例えばアルツハイマー病）の予防若しくは治療方法を特徴とする
。別の態様において、本発明は本明細書に記述されるところのヒト化免疫グロブリンおよ
び製薬学的担体を包含する製薬学的組成物を特徴とする。本明細書に記述される免疫グロ
ブリンまたは免疫グロブリンフラグメント若しくは鎖を製造するための単離された核酸分
子、ベクターおよび宿主細胞、ならびに前記免疫グロブリン、免疫グロブリンフラグメン
ト若しくは免疫グロブリン鎖の製造方法もまた特徴とする。

本発明はさらに、ヒト化３Ｄ６若しくは１０Ｄ５免疫グロブリンを製造する場合に置換
の影響を受けやすい３Ｄ６若しくは１０Ｄ５それぞれの残基の同定方法を特徴とする。例
えば、置換の影響を受けやすい可変枠組み領域残基の同定方法は、解明された相同な免疫
グロブリン構造上の３Ｄ６若しくは１０Ｄ５の可変領域の三次元構造をモデル化すること
、および３Ｄ６若しくは１０Ｄ５免疫グロブリン可変領域のコンホメーション若しくは機
能に影響を及ぼすことが可能な残基について前記モデルを解析してその結果置換の影響を
受けやすい残基を同定することを必要とする。本発明はさらに、３Ｄ６免疫グロブリン、
３Ｄ６免疫グロブリン鎖若しくはそれらのドメインの三次元像の作製における配列番号２
若しくは配列番号４に示される可変領域配列またはそれらのいずれかの部分の使用を特徴
とする。１０Ｄ５免疫グロブリン、１０Ｄ５免疫グロブリン鎖若しくはそれらのドメイン
の三次元像の作製における配列番号１４若しくは配列番号１６として示される可変領域配
列またはそれらのいずれかの部分の使用もまた特徴とする。

本発明はさらに、エフェクター分子、例えば補体若しくはエフェクター細胞上の受容体
を結合する能力のような変えられたエフェクター機能を有する免疫グロブリンを特徴とす
る。とりわけ、本発明の免疫グロブリンは、定常領域例えばＦｃ領域の最低１アミノ酸残
基が異なる残基若しくは側鎖で置換されている、変えられた定常領域例えばＦｃ領域を有
する。一態様において、改変免疫グロブリンはＩｇＧクラスのものであり、該免疫グロブ
リンが例えば未改変の免疫グロブリンと比較して変えられたエフェクター機能を有するよ
うなＦｃ領域中の最低１個のアミノ酸残基置換を含んでなる。特定の態様において、本発
明の免疫グロブリンは、それがより少なく免疫原性であり（例えば望ましくないエフェク
ター細胞活性、溶解若しくは補体結合を惹起しない）、改良されたアミロイド消失特性を
有し、かつ／または望ましい半減期を有するような変えられたエフェクター機能を有する
。

本発明を記述する前に、下で使用されることになるある種の用語の定義を示すことがそ
の理解に役立ちうる。

「免疫グロブリン」若しくは「抗体」（本明細書で互換性に使用される）という用語は
、抗原を特異的に結合する能力を有する２本のＨおよび２本のＬ鎖（前記鎖は例えば鎖間
ジスルフィド結合により安定化される）よりなる基本的な４ポリペプチド鎖構造を有する
抗原結合タンパク質を指す。ＨおよびＬ鎖双方がドメインに折り畳まれる。「ドメイン」
という用語は例えばβ−プリーツシートおよび／若しくは鎖間ジスルフィド結合により安
定化されたペプチドループを含んでなる（例えば３ないし４個のペプチドループを含んで
なる）Ｈ若しくはＬ鎖ポリペプチドの球状領域を指す。ドメインは、「定常」ドメインの
場合は多様なクラスのメンバーのドメイン内の配列の変動の相対的欠如、若しくは「可変
」ドメインの場合は多様なクラスのメンバーのドメイン内のかなりの変動に基づいて「定
常」若しくは「可変」と本明細書でさらに称される。Ｌ鎖上の「定常」ドメインは「Ｌ鎖
定常領域」、「Ｌ鎖定常ドメイン」、「ＣＬ」領域若しくは「ＣＬ」ドメイン）と互換性
に称される。Ｈ鎖上の「定常ドメイン」は「Ｈ鎖定常領域」、「Ｈ鎖定常ドメイン」、「
ＣＨ」領域若しくは「ＣＨ」ドメイン）と互換性に称される。Ｌ鎖上の「可変」ドメイン
は「Ｌ鎖可変領域」、「Ｌ鎖可変ドメイン」、「ＶＬ」領域若しくは「ＶＬ」ドメイン）
と互換性に称される。Ｈ鎖上の「可変」ドメインは「Ｈ鎖可変領域」、「Ｈ鎖可変ドメイ
ン」、「ＣＨ」領域若しくは「ＣＨ」ドメイン）と互換性に称される。

「領域」という用語は抗体鎖の一部（ｐａｒｔ）若しくは一部分（ｐｏｒｔｉｏｎ）を
指し、そして本明細書で定義されるところの定常若しくは可変ドメイン、ならびに前記ド
メインのより分離している一部（ｐａｒｔ）若しくは部分（ｐｏｒｔｉｏｎ）を包含する
。例えばＬ鎖可変ドメイン若しくは領域は、本明細書で定義されるところの「枠組み領域
」すなわち「ＦＲ」の間に差し込まれた「相補性決定領域」すなわち「ＣＤＲ」を包含す
る。

免疫グロブリン若しくは抗体は単量体若しくは多量体で存在し得る。「抗原結合フラグ
メント」という用語は、抗原を結合するか若しくは抗原結合（すなわち特異的結合）につ
いて無傷の抗体と（すなわちそれらが由来した無傷の抗体と）競合する免疫グロブリン若
しくは抗体のポリペプチドフラグメントを指す。「コンホメーション」という用語はタン
パク質若しくはポリペプチド（例えば抗体、抗体鎖、ドメインもしくはそれらの領域）の
三次構造を指す。例えば、「Ｌ（若しくはＨ）鎖のコンホメーション」という句はＬ（若
しくはＨ）鎖可変領域の三次構造を指し、また、「抗体のコンホメーション」若しくは「
抗体フラグメントのコンホメーション」という句は抗体若しくはそのフラグメントの三次
構造を指す。

抗体の「特異的結合」は、抗体が抗原若しくは好ましいエピトープに対する認識可能な
親和性を表しかつ好ましくは有意の交差反応性を表さないことを意味している。「認識可
能な」若しくは好ましい結合は最低１０^６、１０^７、１０^８、１０^９Ｍ^−１若しくは１０
^１０Ｍ^−１の親和性を伴う結合を包含する。１０^７Ｍ^−１以上、好ましくは１０^８Ｍ^−１
以上の親和性がより好ましい。本明細書で示される値の中間の値もまた本発明の範囲内に
あることを意図しており、また、好ましい結合親和性はある範囲例えば１０^６ないし１０
^１０Ｍ^−１、好ましくは１０^７ないし１０^１０Ｍ^−１、より好ましくは１０^８ないし１０
^１０Ｍ^−１の親和性として示し得る。「有意の交差反応性を表さない」抗体は望ましくな
い実体（例えば望ましくないタンパク質性の実体）に認識可能に結合することができない
ものである。例えば、Ａβに特異的に結合する抗体はＡβを認識可能に結合することがで
きるが、しかし非Ａβタンパク質若しくはペプチド（例えば斑に包含される非Ａβタンパ
ク質若しくはペプチド）と有意に反応することができない。好ましいエピトープに特異的
な抗体は、例えば同一のタンパク質若しくはペプチド上の離れたエピトープと有意に交差
反応しないことができる。特異的結合はこうした結合を測定するためのいかなる技術に認
識された手段によっても測定し得る。好ましくは、特異的結合はスキャッチャード分析お
よび／若しくは競合結合アッセイにより測定する。

結合フラグメントは組換えＤＮＡ技術または無傷の免疫グロブリンの酵素的若しくは化
学的切断により製造する。結合フラグメントはＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆａ
ｂｃ、Ｆｖ、一本鎖および一本鎖抗体を包含する。「二特異性」若しくは「二官能性」免
疫グロブリン若しくは抗体以外は、免疫グロブリン若しくは抗体は同一のその結合部位の
それぞれを有すると理解される。「二特異性」若しくは「二官能性抗体」は２個の異なる
Ｈ／Ｌ鎖対および２個の異なる結合部位を有する人工的ハイブリッド抗体である。二特異
性抗体はハイブリドーマの融合若しくはＦａｂ’フラグメントの結合を包含する多様な方
法により製造し得る。例えばＳｏｎｇｓｉｖｉｌａｉとＬａｃｈｍａｎｎ、Ｃｌｉｎ．Ｅ
ｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５−３２１（１９９０）；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８、１５４７−１５５３（１９９２）を参照されたい。

「ヒト化免疫グロブリン」若しくは「ヒト化抗体」という用語は最低１本のヒト化免疫
グロブリン若しくは抗体鎖（すなわち最低１本のヒト化Ｌ若しくはＨ鎖）を包含する免疫
グロブリン若しくは抗体を指す。「ヒト化免疫グロブリン鎖」若しくは「ヒト化抗体鎖」
（すなわち「ヒト化免疫グロブリンＬ鎖」若しくは「ヒト化免疫グロブリンＨ鎖」）とい
う用語は、実質的にヒト免疫グロブリン若しくは抗体からの可変枠組み領域および実質的
にヒト以外の免疫グロブリン若しくは抗体からの相補性決定領域（ＣＤＲ）（例えば最低
１個のＣＤＲ、好ましくは２個のＣＤＲ、より好ましくは３個のＣＤＲ）を包含する可変
領域を有しかつ定常領域（例えばＬ鎖の場合は最低１個の定常領域若しくはその一部分、
およびＨ鎖の場合は好ましくは３個の定常領域）をさらに包含する免疫グロブリン若しく
は抗体鎖（すなわちそれぞれＬ若しくはＨ鎖）を指す。「ヒト化可変領域」（例えば「ヒ
ト化Ｌ鎖可変領域」若しくは「ヒト化Ｈ鎖可変領域」）という用語は、実質的にヒト免疫
グロブリン若しくは抗体からの可変枠組み領域および実質的にヒト以外の免疫グロブリン
若しくは抗体からの相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含する可変領域を指す。

「実質的にヒト免疫グロブリン若しくは抗体から」または「実質的にヒト」という句は
、比較の目的上ヒト免疫グロブリン若しくは抗体のアミノ酸配列に整列した場合に該領域
がヒト枠組み若しくは定常領域配列と最低８０〜９０％、好ましくは９０〜９５％、より
好ましくは９５〜９９％の同一性（すなわち局所配列の同一性）を共有して例えば保存的
置換、コンセンサス配列置換、生殖系列置換、戻し突然変異などを見込むことを意味して
いる。保存的置換、コンセンサス配列置換、生殖系列置換、戻し突然変異などの導入はし
ばしばヒト化抗体若しくは鎖の「至適化」と称される。「実質的にヒト以外の免疫グロブ
リン若しくは抗体から」または「実質的にヒト以外」という句は、ヒト以外の生物体、例
えばヒト以外の哺乳動物の免疫グロブリン若しくは抗体配列に最低８０〜９５％、好まし
くは９０〜９５％、より好ましくは９６％、９７％、９８％若しくは９９％同一の免疫グ
ロブリン若しくは抗体配列を有することを意味している。

従って、ヒト化免疫グロブリン若しくは抗体、またはヒト化免疫グロブリン若しくは抗
体鎖の全部の領域若しくは残基は、おそらくＣＤＲを除き、１種若しくはそれ以上の天然
のヒト免疫グロブリン配列の対応する領域若しくは残基に実質的に同一である。「対応す
る領域」若しくは「対応する残基」という用語は、第一および第二の配列を比較の目的上
至適に整列する場合に第一のアミノ酸若しくはヌクレオチド配列上のある領域若しくは残
基と同一の（すなわち同等の）位置を占有する第二のアミノ酸若しくはヌクレオチド配列
上の領域若しくは残基を指す。

「ヒト化免疫グロブリン」若しくは「ヒト化抗体」という用語は下で定義されるところ
のキメラ免疫グロブリン若しくは抗体を包含することを意図していない。ヒト化免疫グロ
ブリン若しくは抗体はそれらの構造においてキメラである（すなわち１以上の種のタンパ
ク質からの領域を含んでなる）とは言え、それらは本明細書で定義されるところのキメラ
免疫グロブリン若しくは抗体中に見出されない付加的な特徴（すなわちドナーＣＤＲ残基
およびアクセプター枠組み残基を含んでなる可変領域）を包含する。

「有意の同一性」という用語は、２種のポリペプチド配列をデフォルトのギャップ重み
（ｇａｐ ｗｅｉｇｈｔ）を使用してプログラムＧＡＰ若しくはＢＥＳＴＦＩＴによるよ
うに至適に整列した場合に最低５０〜６０％の配列の同一性、好ましくは６０〜７０％の
配列の同一性、より好ましくは７０〜８０％の配列の同一性、より好ましくは最低８０〜
９０％の同一性、なおより好ましくは最低９０〜９５％の同一性、およびなおより好まし
くは最低９５％の配列の同一性若しくはそれ以上（例えば９９％の配列の同一性若しくは
それ以上）を共有することを意味している。「実質的同一性」という用語は、２種のポリ
ペプチド配列をデフォルトのギャップ重み（ｇａｐ ｗｅｉｇｈｔ）を使用してプログラ
ムＧＡＰ若しくはＢＥＳＴＦＩＴによるように至適に整列した場合に最低８０〜９０％の
配列の同一性、好ましくは９０〜９５％の配列の同一性、およびより好ましくは最低９５
％の配列の同一性若しくはそれ以上（例えば９９％の配列の同一性若しくはそれ以上）を
共有することを意味している。配列の比較のため、典型的には１配列が参照配列として作
用し、それと試験配列を比較する。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験および参
照配列をコンピュータに入力し、必要な場合は下位配列座標を指定し、そして配列アルゴ
リズムプログラムのパラメータを指定する。その後、配列比較アルゴリズムが、指定した
プログラムパラメータに基づき参照配列に関する試験配列（１種若しくは複数）の配列の
同一性パーセントを計算する。「配列の同一性」および「配列の同一性」という用語は本
明細書で互換性に使用する。

比較のための配列の至適のアラインメントは、例えばＳｍｉｔｈとＷａｔｅｒｍａｎ、
Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）の局所相同性アルゴリズム、Ｎｅ
ｅｄｌｅｍａｎとＷｕｎｓｃｈ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）の相
同性アラインメントアルゴリズム、ＰｅａｒｓｏｎとＬｉｐｍａｎ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：２４４４（１９８８）の類似性検索方法、これら
のアルゴリズムのコンピュータ化実装（Ｗｉｓｃｏｎｃｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓソフトウ
ェアパッケージ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、５７５ Ｓｉｅｎ
ｅｃｅ Ｄｒ．、ウィスコンシン州マディソン中のＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ
およびＴＦＡＳＴＡ）、若しくは視覚的検査（全般的にＡｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎ
ｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙを参照されたい）
により実施し得る。配列の同一性および配列の類似性のパーセントを決定するのに適する
アルゴリズムの一例は、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３（
１９９０）に記述されるＢＬＡＳＴアルゴリズムである。ＢＬＡＳＴ解析を実施するため
のソフトウェアは、国立生物工学情報センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏ
ｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）（国立保健研究所（Ｎａｔ
ｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ）のＮＣＢＩインターネットサ
ーバーを通じて公的にアクセス可能）から公的に入手可能である。典型的には、デフォル
トのプログラムパラメータを使用して配列の比較を実施し得るが、とは言えカスタマイズ
したパラメータもまた使用し得る。アミノ酸配列には、ＢＬＡＳＴＰプログラムは３の語
長（ｗｏｒｄｌｅｎｇｔｈ）（Ｗ）、１０の期待（ｅｘｐｅｃｔａｔｉｏｎ）（Ｅ）およ
びＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックスをデフォルトとして使用する（Ｈｅｎｉｋ
ｏｆｆとＨｅｎｉｋｏｆｆ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１
０９１５（１９８９）を参照されたい）。

好ましくは、同一でない残基位置は保存的アミノ酸置換により異なる。アミノ酸置換を
保存的若しくは非保存的に分類する目的上、アミノ酸を後に続くとおりグループ分けする
。すなわち、グループＩ（疎水性側鎖）：ｌｅｕ、ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉ
ｌｅ；グループＩＩ（中性の親水性側鎖）：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；グループＩＩＩ（
酸性側鎖）：ａｓｐ、ｇｌｕ；グループＩＶ（塩基性側鎖）：ａｓｎ、ｇｌｎ、ｈｉｓ、
ｌｙｓ、ａｒｇ；グループＶ（鎖の配置に影響する残基）：ｇｌｙ、ｐｒｏ；およびグル
ープＶＩ（芳香族側鎖）：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ。保存的置換は同一分類中のアミノ酸
間の置換を伴う。非保存的置換はこれらの分類の１つの１メンバーを別の１メンバーと交
換することを構成する。

好ましくは、ヒト化免疫グロブリン若しくは抗体は、対応するヒト以外の抗体の親和性
の３、４若しくは５の係数以内である親和性で抗原を結合する。例えば、ヒト以外の抗体
が１０^９Ｍ^−１の結合親和性を有する場合、ヒト化抗体は最低３×１０^９Ｍ^−１、４×１
０^９Ｍ^−１若しくは１０^９Ｍ^−１の結合親和性を有することができる。免疫グロブリン若
しくは抗体鎖の結合特性を記述する場合に、該鎖は「抗原（例えばＡβ）結合に導く」そ
の能力に基づいて記述し得る。鎖が無傷の免疫グロブリン若しくは抗体（またはそれらの
抗原結合フラグメント）に特異的結合特性若しくは結合親和性を賦与する場合に、それは
「抗原結合に導く」と言われる。突然変異（例えば戻し突然変異）が、前記突然変異を欠
く同等な鎖を含んでなる抗体（若しくはその抗原結合フラグメント）の結合親和性に比較
して、Ｈ若しくはＬ鎖を含んでなる無傷の免疫グロブリン若しくは抗体（またはそれらの
抗原結合フラグメント）の結合親和性に、最低一桁の影響を及ぼす（例えば低下させる）
場合に、それは抗原結合に導くＨ若しくはＬ鎖の能力に実質的に影響を及ぼすと言われる
。突然変異が、ある鎖を含んでなる無傷の免疫グロブリン若しくは抗体（またはそれらの
抗原結合フラグメント）の結合親和性に、前記突然変異を欠く同等な鎖を含んでなる抗体
（若しくはその抗原結合フラグメント）の結合親和性の２、３若しくは４の係数のみ影響
を及ぼす（例えば低下させる）場合、それは「抗原結合に導く鎖の能力に実質的に影響を
及ぼさない（例えば低下させない）」。

「キメラ免疫グロブリン」若しくは抗体という用語は、その可変領域が第一の種由来で
ありかつその定常領域が第二の種由来である免疫グロブリン若しくは抗体を指す。キメラ
免疫グロブリン若しくは抗体は、異なる種に属する免疫グロブリン遺伝子セグメントから
例えば遺伝子工学により構築し得る。

「抗原」は抗体が特異的に結合する実体（例えばタンパク質性の実体すなわちペプチド
）である。

「エピトープ」若しくは「抗原決定基」という用語は、免疫グロブリン若しくは抗体（
またはそれらの抗原結合フラグメント）が特異的に結合する抗原上の部位を指す。エピト
ープは、隣接するアミノ酸、若しくはタンパク質の三次折り畳みにより並置される隣接し
ないアミノ酸の双方から形成され得る。隣接するアミノ酸から形成されるエピトープは、
典型的には変性溶媒への曝露に際して保持される一方、三次折り畳みにより形成されるエ
ピトープは変性溶媒での処理に際して典型的に喪失される。エピトープは典型的に最低３
、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４若しくは１５アミノ酸を独特
の空間的コンホメーションに包含する。エピトープの空間的コンホメーションの決定方法
は、例えばｘ線結晶学および二次元核磁気共鳴を包含する。例えばＥｐｉｔｏｐｅ Ｍａ
ｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ．６６、Ｇ．Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ編（１９９６）を参照されたい。

同一のエピトープを認識する抗体は、標的抗原への別の抗体の結合を阻害する１抗体の
能力を示す単純なイムノアッセイ、すなわち競合結合アッセイで同定し得る。競合結合は
、試験中の免疫グロブリンがＡβのような共通の抗原への参照抗体の特異的結合を阻害す
るアッセイで測定する。多数の型の競争結合アッセイ、例えば：固相直接若しくは間接ラ
ジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相直接若しくは間接エンザイムイムノアッセイ（ＥＩ
Ａ）、サンドイッチ競合アッセイ（Ｓｔａｈｌｉら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍ
ｏｌｏｇｙ ９：２４２（１９８３）を参照されたい）；固相直接ビオチン−アビジンＥ
ＩＡ（Ｋｉｒｋｌａｎｄら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４（１９８６）を参照
されたい）：固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（Ｈａｒｌｏｗ
とＬａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌ
ｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ（１９８８）を参照されたい）；Ｉ−１２
５標識を使用する固相直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｒｅｌら、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５（
１）：７（１９８８）を参照されたい）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Ｃｈｅｕ
ｎｇら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７６：５４６（１９９０））；および直接標識ＲＩＡ（Ｍ
ｏｌｄｅｎｈａｕｅｒら、Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：７７（１９９０））
が既知である。典型的には、こうしたアッセイは、これらすなわち未標識の試験免疫グロ
ブリンおよび標識した参照免疫グロブリンのいずれかを持つ固体表面もしくは細胞に結合
した精製された抗原の使用を必要とする。競合阻害は試験免疫グロブリンの存在下で固体
表面若しくは細胞に結合した標識の量を測定することにより測定する。通常、試験免疫グ
ロブリンは過剰に存在する。通常、競合する抗体が過剰に存在する場合、それは共通の抗
原への参照抗体の特異的結合を最低５０〜５５％、５５〜６０％、６０〜６５％、６５〜
７０％、７０〜７５％若しくはそれ以上阻害することができる。

エピトープは免疫学的細胞、例えばＢ細胞および／若しくはＴ細胞によってもまた認識
される。エピトープの細胞認識は、^３Ｈ−チミジン取り込み、サイトカイン分泌、抗体分
泌若しくは抗原依存性の殺傷（細胞傷害性Ｔリンパ球アッセイ）により測定されるところ
の抗原依存性の増殖を測定するｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイにより測定し得る。

例示的エピトープ若しくは抗原決定基はヒトアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）内
に見出し得るが、しかし好ましくはＡＰＰのＡβペプチド内に見出される。ＡＰＰの複数
のアイソフォーム、例えばＡＰＰ^６９５、ＡＰＰ^７５１およびＡＰＰ^７７０が存在する。
ＡＰＰ内のアミノ酸はＡＰＰ^７７０アイソフォームの配列に従って番号を割当てられてい
る（例えば配列番号３８としてもまた示されるＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｐ０５０６７を参
照されたい）。Ａβ（本明細書でβアミロイドペプチドおよびＡ−βともまた称される）
ペプチドはＡＰＰの３９〜４３アミノ酸の約４ｋＤａの内的フラグメント（Ａβ３９、Ａ
β４０、Ａβ４１、Ａβ４２およびＡβ４３）である。例えばＡβ４０はＡＰＰの残基６
７２−７１１よりなり、また、Ａβ４２はＡＰＰの残基６７３−７１３よりなる。ｉｎ
ｖｉｖｏ若しくはｉｎ ｓｉｔｕでの多様な分泌酵素によるＡＰＰのタンパク質分解性プ
ロセシングの結果として、Ａβは「短い形態」すなわち長さ４０アミノ酸、および長さ４
２〜４３アミノ酸からの範囲にわたる「長い形態」の双方で見出される。本明細書に記述
されるところの好ましいエピトープ若しくは抗原決定基はＡβペプチドのＮ末端内に位置
し、そして好ましくはＡβ４２の残基１−３、１−４、１−５、１−６、１−７若しくは
３−７からのＡβのアミノ酸１−１０内の残基を包含する。付加的な言及されるエピトー
プ若しくは抗原決定基はＡβの残基２−４、５、６、７若しくは８、Ａβの残基３−５、
６、７、８若しくは９、またはＡβ４２の残基４−７、８、９若しくは１０を包含する。

「アミロイド原性疾患」という用語は、不溶性アミロイド原線維の形成若しくは沈着を
伴う（若しくはそれらにより引き起こされる）いかなる疾患も包含する。例示的アミロイ
ド原性疾患は、限定されるものでないが全身性アミロイドーシス、アルツハイマー病、成
人発症型糖尿病、パーキンソン病、ハンチントン病、前頭側頭型痴呆、およびプリオン関
連の伝染性海綿状脳症（それぞれヒトにおけるクールーおよびクロイツフェルト・ヤコブ
病ならびにヒツジおよび蓄牛におけるスクレイピーおよびＢＳＥ）を挙げることができる
。多様なアミロイド原性疾患は、沈着される原線維のポリペプチド成分の性質により定義
すなわち特徴付けられる。例えば、アルツハイマー病を有する被験体すなわち患者におい
て、β−アミロイドタンパク質（例えば野性型、バリアント若しくは短縮型β−アミロイ
ドタンパク質）はアミロイド沈着物の特徴づけるポリペプチド成分である。従って、アル
ツハイマー病は例えば被験体すなわち患者の脳中の「Ａβの沈着物を特徴とする疾患」若
しくは「Ａβの沈着物を伴う疾患」の一例である。「β−アミロイドタンパク質」、「β
−アミロイドペプチド」、「β−アミロイド」、「Ａβ」および「Ａβペプチド」という
用語は本明細書で互換性に使用される。

「有効用量」若しくは「有効投薬量」という用語は所望の効果を達成若しくは少なくと
も部分的に達成するのに十分な量と定義する。「治療上有効な用量」という用語は、既に
疾患に罹っている患者において疾患およびその合併症を治癒若しくは少なくとも部分的に
停止させるのに十分な量と定義する。この使用に有効な量は、感染の重篤度および患者自
身の免疫系の全般的状態に依存することができる。

「患者」という用語は予防的若しくは治療的いずれかの処置を受領するヒトおよび他の
哺乳動物被験体を包含する。

「可溶性」若しくは「脱凝集した」Ａβは凝集していないすなわち脱凝集したＡβポリ
ペプチドを指す。「不溶性」Ａβは凝集するＡβポリペプチド、例えば非共有結合により
一緒に保持されるＡβを指す。Ａβ（例えばＡβ４２）は、少なくとも部分的に該ペプチ
ドのＣ末端の疎水性残基（ＡＰＰの膜貫通ドメインの一部）の存在により凝集すると考え
られている。可溶性Ａβの一調製方法は、凍結乾燥したペプチドを希釈していないＤＭＳ
Ｏに超音波処理を用いて溶解することである。生じる溶液を遠心分離していかなる不溶性
微粒子も除去する。

「エフェクター機能」という用語は、エフェクター細胞の活性、溶解、補体に媒介され
る活性、抗体消失のような抗体の数種の免疫機能および抗体半減期を制御し得る、抗体（
例えばＩｇＧ抗体）のＦｃ領域に存しかつ例えば補体および／若しくはＦｃ受容体のよう
なエフェクター分子を結合する抗体の能力を包含する活性を指す。

「エフェクター分子」という用語は、限定されるものでないが補体タンパク質若しくは
Ｆｃ受容体を挙げることができる抗体（例えばＩｇＧ抗体）のＦｃ領域に結合することが
可能である分子を指す。

「エフェクター細胞」という用語は、典型的には限定されるものでないがリンパ球、例
えば抗原提示細胞およびＴ細胞を挙げることができるエフェクター細胞の表面上で発現さ
れるＦｃ受容体を介して、抗体（例えばＩｇＧ抗体）のＦｃ部分に結合することが可能な
細胞を指す。

「Ｆｃ領域」という用語は、ＩｇＧ抗体のＣ末端領域、とりわけ前記ＩｇＧ抗体のＨ鎖
（１個若しくは複数）のＣ末端領域を指す。ＩｇＧ Ｈ鎖のＦｃ領域の境界はわずかに変
動し得るとは言え、Ｆｃ領域は典型的にはほぼアミノ酸残基Ｃｙｓ２２６からＩｇＧ Ｈ
鎖（１個若しくは複数）のカルボキシル末端まで広がると定義する。

「Ｋａｂａｔの番号付け」という用語は、別の方法で述べられない限り、Ｋａｂａｔら
（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ
Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版 Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏ
ｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、メリーランド州ベセスダ（１９９１
））（明らかに引用することにより本明細書に組み込まれる）におけるようなＥＵインデ
ックス（ＥＵ ｉｎｄｅｘ）を使用する例えばＩｇＧ Ｈ鎖抗体中の残基の番号付けと定
義する。

「Ｆｃ受容体」若しくは「ＦｃＲ」という用語は抗体のＦｃ領域に結合する受容体を指
す。抗体（例えばＩｇＧ抗体）のＦｃ領域に結合する典型的なＦｃ受容体は、限定される
ものでないが、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体の対
立遺伝子バリアントおよび選択的スプライスされた形態を包含するこれらの受容体を挙げ
ることができる。Ｆｃ受容体は、ＲａｖｅｔｃｈとＫｉｎｅｔ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ ９：４５７−９２（１９９１）；Ｃａｐｅｌら、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄ
ｓ ４：２５−３４（１９９４）；およびｄｅ Ｈａａｓら、Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍ
ｅｄ．１２６：３３０−４１（１９９５）に総説されている。
Ｉ．免疫学的および治療的試薬
本発明の免疫学的および治療的試薬は、本明細書で定義されるところの免疫原若しくは
抗体またはその機能的若しくは抗原結合フラグメントを含んでなるか若しくはそれらより
なる。基本的な抗体の構造単位はサブユニットの四量体を含んでなることが既知である。
各四量体はポリペプチド鎖の２つの同一の対から構成され、各対は１個の「Ｌ」（約２５
ｋＤａ）および１個の「Ｈ」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分
は、主として抗原認識の原因である約１００ないし１１０若しくはそれ以上のアミノ酸の
可変領域を包含する。各鎖のカルボキシ末端部分は主としてエフェクター機能の原因であ
る定常領域を規定する。

Ｌ鎖はκ若しくはλいずれかに分類され、そして長さ約２３０残基である。Ｈ鎖はγ、
μ、α、δ若しくはεに分類され、長さ約４５０〜６００残基であり、そして抗体のアイ
ソタイプをそれぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥと規定する。Ｈおよび
Ｌ鎖双方ともドメインに折り畳まれる。「ドメイン」という用語はタンパク質例えば免疫
グロブリン若しくは抗体の球状領域を指す。免疫グロブリン若しくは抗体のドメインは例
えばβ−プリーツシートおよび鎖間ジスルフィド結合により安定化される３若しくは４個
のペプチドループを包含する。無傷のＬ鎖は例えば２ドメイン（Ｖ_ＬおよびＣ_Ｌ）を有し
、また、無傷のＨ鎖は例えば４若しくは５ドメイン（Ｖ_Ｈ、Ｃ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２およびＣ_Ｈ３
）を有する。

ＬおよびＨ鎖内で、可変および定常領域は約１２若しくはそれ以上のアミノ酸の「Ｊ」
領域により結合され、Ｈ鎖は約あと１０アミノ酸の「Ｄ」領域もまた包含する（全般とし
て、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｐａｕｌ，Ｗ．編、第２版 Ｒａ
ｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ、ニューヨーク（１９８９）、第７章（全部の目的上そっくりそのま
ま引用することにより組み込まれる）を参照されたい）。

各Ｌ／Ｈ鎖対の可変領域は抗体結合部位を形成する。従って無傷の抗体は２個の結合部
位を有する。二官能性若しくは二機能性抗体でを除き、２個の結合部位は同一である。鎖
は全部、相補性決定領域すなわちＣＤＲともまた呼ばれる３個の超可変領域により結合さ
れた、相対的に保存された枠組み領域（ＦＲ）の同一の一般的構造を表す。天然に存在す
る鎖若しくは組換えで製造した鎖はリーダー配列（細胞のプロセシングの間に除去されて
成熟鎖を生じる）を伴い発現され得る。例えば目的の特定の鎖の分泌を高める若しくはプ
ロセシングを変えるために、天然に存在しないリーダー配列を有する成熟鎖もまた組換え
で製造し得る。

各対の２本の成熟鎖のＣＤＲは枠組み領域により整列されて特異的エピトープへの結合
を可能にする。Ｎ末端からＣ末端まで、ＬおよびＨ鎖双方はドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、
ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４を含んでなる。「ＦＲ４」はまた、可
変Ｈ鎖のＤ／Ｊ領域および可変Ｌ鎖のＪ領域とも当該技術分野で称される。各ドメインへ
のアミノ酸の割当てはＫａｂａｔ、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕ
ｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、メリーランド州ベセスダ、１９８７および１９９１）の定
義に従う。代替の構造の定義はＣｈｏｔｈｉａら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０
１（１９８７）；Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７８（１９８９）；およびＪ．Ｍｏｌ．Ｂｉ
ｏｌ．１８６：６５１（１９８９）（下で集合的に「Ｃｈｏｔｈｉａら」と称され、そし
て全部の目的上そっくりそのまま引用することにより組み込まれる）により提案されてい
る。
Ａ．Ａβ抗体
本発明の治療薬はＡβ若しくはアミロイド斑の他成分に特異的に結合する抗体を包含す
る。こうした抗体はモノクローナル若しくはポリクローナルであり得る。数種のこうした
抗体は可溶性の形態に結合することなく凝集した形態のＡβに特異的に結合する。数種は
凝集した形態に結合することなく可溶性の形態に特異的に結合する。数種は凝集した形態
および可溶性の形態双方に結合する。数種のこうした抗体は、天然に存在する長い形態の
Ａβ（すなわちＡβ４２およびＡβ４３）に結合することなく天然に存在する短い形態の
Ａβ（すなわちＡβ３９、４０若しくは４１）に結合する。数種の抗体は短い形態に結合
することなく長い形態のＡβに結合する。数種の抗体は完全長のアミロイド前駆体タンパ
ク質に結合することなくＡβに結合する。治療方法で使用される抗体は、好ましくは無傷
（ｉｎｔａｃｔ）の定常領域、若しくは少なくともＦｃ受容体と総合作用するのに十分な
定常領域を有する。ヒトアイソタイプＩｇＧ１は、貪食細胞上のＦｃＲＩ受容体に対する
ヒトアイソタイプの最高の親和性を有するそれのために好ましい。抗体の一方のアームが
Ａβに対する、そして他方がＦｃ受容体に対する特異性を有する二特異性Ｆａｂフラグメ
ントもまた使用し得る。好ましい抗体は約１０^６、１０^７、１０^８、１０^９若しくは１０
^１０Ｍ^−１（これらの値の中間の親和性を包含する）より大きい（若しくはこれらに等し
い）結合親和性でＡβに結合する。

ポリクローナル血清は、典型的に、Ａβの長さに沿って数種のエピトープに結合する抗
体の混合した集団を含有する。しかしながらポリクローナル血清はＡβ１−１０のような
Ａβの特異的一セグメントに特異的であり得る。モノクローナル抗体は、コンホメーショ
ン性若しくは非コンホメーション性エピトープであり得るＡβ内の特定の一エピトープに
結合する。抗体の予防的および治療的有効性は実施例で記述されるトランスジェニック動
物モデル手順を使用して試験し得る。好ましいモノクローナル抗体はＡβの残基１−１０
（天然のＡβの最初のＮ末端残基を１と呼称する）内の１エピトープに結合する。数種の
好ましいモノクローナル抗体はアミノ酸１−５内の１エピトープに、そして数種は５−１
０内の１エピトープに結合する。数種の好ましい抗体はアミノ酸１−３、１−４、１−５
、１−６、１−７若しくは３−７内のエピトープに結合する。数種の好ましい抗体はＡβ
の残基１−３で開始しかつ残基７−１１で終了する１エピトープに結合する。より少なく
好ましい抗体はＡβの残基１０−１５、１５−２０、２５−３０、１０−２０、２０、３
０若しくは１０−２５を含むエピトープに結合するものを包含する。こうした抗体を、実
施例に記述されるマウスモデルで活性について使用前にスクリーニングすることが推奨さ
れる。例えば、残基１０−１８、１６−２４、１８−２１および３３−４２内のエピトー
プに対するある種の抗体は活性を欠く（例えば、アルツハイマー病と関連する斑負荷を低
下させかつ／若しくは神経炎性の病状を自然治癒させる能力を欠く）ことが見出された。
いくつかの方法において、異なるエピトープに対する結合特異性を有する複数のモノクロ
ーナル抗体を使用する。こうした抗体は連続して若しくは同時に投与し得る。Ａβ以外の
アミロイド成分に対する抗体もまた使用し得る（例えば投与若しくは共投与し得る）。例
えば、抗体をアミロイド関連タンパク質シヌクレインに向けることができる。

抗体が例えばＡβ１−５のような指定された残基内の１エピトープに結合すると言われ
る場合、意味しているものは、該抗体が指定された残基（すなわち本例においてＡβ１−
５）を含有するポリペプチドに特異的に結合することである。こうした抗体はＡβ１−５
内のすべての残基と必ずしも接触しない。また、Ａβ１−５内のどの単一アミノ酸の置換
若しくは欠失も結合親和性に必ずしも有意に影響を及ぼさない。抗体のエピトープ特異性
は、例えば多様なメンバーがＡβの異なる下位配列を表すファージディスプレイライブラ
リーを形成することにより決定し得る。その後、該ファージディスプレイライブラリーを
、試験中の抗体に特異的に結合するメンバーについて選択する。一群の配列を単離する。
典型的には、こうした一群は、異なるメンバーで共通のコア配列および変動する長さの隣
接配列を含有する。抗体への特異的結合を示す最も短いコア配列が、該抗体により結合さ
れるエピトープを規定する。抗体はまた、エピトープ特異性が既に決定されている抗体と
の競合アッセイでもエピトープ特異性について試験し得る。例えば、Ａβへの結合につい
て３Ｄ６抗体と競合する抗体は、３Ｄ６と同一若しくは類似のエピトープに、すなわち残
基Ａβ１−５内で結合する。同様に、１０Ｄ５抗体と競合する抗体は同一若しくは類似の
エピトープに、すなわち残基Ａβ３−７内で結合する。エピトープ特異性についての抗体
のスクリーニングは治療的有効性の有用な予測因子である。例えば、Ａβの残基１−７内
の１エピトープに結合することが決定された抗体は、本発明の方法論によるアルツハイマ
ー病の予防および治療において有効であることがありそうである。

Ａβの他領域に結合することなくＡβの好ましいセグメントに特異的に結合するモノク
ローナル若しくはポリクローナル抗体は、他領域に結合するモノクローナル抗体若しくは
無傷のＡβに対するポリクローナル血清に関して多数の利点を有する。第一に、等量の投
薬量について、好ましいセグメントに特異的に結合する抗体の投薬量はアミロイド斑の消
失において有効な抗体のより高いモル投薬量を含有する。第二に、好ましいセグメントに
特異的に結合する抗体は、無傷のＡＰＰポリペプチドに対する消失応答を誘導することな
くアミロイド沈着物に対する消失応答を誘導してそれにより潜在的な副作用を低減し得る
。
１．ヒト以外の抗体の製造
本発明はヒト以外の抗体、例えば本発明の好ましいＡβエピトープに対する特異性を有
する抗体を特徴とする。こうした抗体は、本発明の多様な治療的組成物の処方で使用し得
るか、または、好ましくはヒト化若しくはキメラ抗体（下に詳細に記述される）の製造の
ための相補性決定領域を提供し得る。ヒト以外のモノクローナル抗体（例えばネズミ、モ
ルモット、霊長類、ウサギ若しくはラット）の製造は、例えばＡβで動物を免疫すること
により達成し得る。Ａβ若しくはＡβの免疫原性フラグメントを含んでなるより長いポリ
ペプチド、またはＡβに対する抗体に対する抗イディオタイプ抗体もまた使用し得る。Ｈ
ａｒｌｏｗとＬａｎｅ、上記（全部の目的上引用することにより組み込まれる）を参照さ
れたい）。こうした免疫原は、天然の供給源から、ペプチド合成により若しくは組換え発
現により得ることができる。場合によっては、免疫原は下述されるとおり担体タンパク質
と融合若しくは別の方法で複合体形成して投与し得る。場合によっては、免疫原はアジュ
バントとともに投与し得る。「アジュバント」という用語は、抗原とともに投与される場
合に該抗原に対する免疫応答を増加させるがしかし単独で投与される場合に該抗原に対す
る免疫応答を生成しない化合物を指す。アジュバントは、リンパ球補充（ｌｙｍｐｈｏｃ
ｙｔｅ ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ）、Ｂおよび／若しくはＴ細胞の刺激、ならびにマクロ
ファージの刺激を包含するいくつかの機構により免疫応答を増加させ得る。数種の型のア
ジュバントを下述されるとおり使用し得る。フロイントの完全アジュバント、次いで不完
全アジュバントが実験動物の免疫化に好ましい。

ポリクローナル抗体を作成するのにウサギ若しくはモルモットを典型的に使用し得る。
例えば受動保護のためのポリクローナル抗体の例示的製造は後に続くとおり実施する。１
２５匹の非トランスジェニックマウスを１００μｇのＡβ１−４２およびＣＦＡ／ＩＦＡ
アジュバントで免疫し、そして４〜５か月に安楽死させる。免疫したマウスから血液を収
集する。ＩｇＧを他の血液成分から分離する。免疫原に特異的な抗体をアフィニティーク
ロマトグラフィーにより部分的に精製してもよい。マウスあたり平均約０．５〜１ｍｇの
免疫原特異的抗体が得られ、合計６０〜１２０ｍｇを生じる。

マウスはモノクローナル抗体を作成するのに典型的に使用する。モノクローナル抗体は
、Ａβのフラグメント若しくはより長い形態のＡβをマウスに注入すること、ハイブリド
ーマを調製すること、およびＡβに特異的に結合する抗体についてハイブリドーマをスク
リーニングすることによりフラグメントに対し製造し得る。場合によっては、抗体は、Ａ
βの他のオーバーラップしないフラグメントへの結合を伴わないＡβの特定の領域若しく
は所望のフラグメントへの結合についてスクリーニングする。後者のスクリーニングは、
Ａβペプチドの欠失変異体の集合物への抗体の結合を測定すること、およびどの欠失変異
体が該抗体に結合するかを決定することにより達成し得る。結合は例えばウエスタンブロ
ット若しくはＥＬＩＳＡにより評価し得る。抗体への特異的結合を示す最小のフラグメン
トが抗体のエピトープを規定する。あるいは、エピトープ特異性は、試験および参照抗体
がＡβへの結合について競合する競合アッセイにより決定し得る。試験および参照抗体が
競合する場合には、それらは同一のエピトープ、または一方の抗体の結合が他方の結合を
妨害するような十分に近接したエピトープに結合する。こうした抗体の好ましいアイソタ
イプはマウスアイソタイプＩｇＧ２ａ若しくは他の種の同等のアイソタイプである。マウ
スアイソタイプＩｇＧ２ａはヒトアイソタイプＩｇＧ１の同等物である。
２．キメラおよびヒト化抗体
本発明はまた、βアミロイドペプチドに特異的なキメラおよび／若しくはヒト化抗体（
例えばキメラおよび／若しくはヒト化免疫グロブリン）も特徴とする。キメラおよび／若
しくはヒト化抗体は、キメラ若しくはヒト化抗体の構築のための出発原料を提供するマウ
ス若しくは他のヒト以外の抗体と同一の若しくは類似の結合特異性および親和性を有する
。
Ａ．キメラ抗体の製造
「キメラ抗体」という用語は、そのＬおよびＨ鎖遺伝子が、典型的には遺伝子工学によ
り異なる種に属する免疫グロブリン遺伝子セグメントから構築された抗体を指す。例えば
、マウスモノクローナル抗体からの遺伝子の可変（Ｖ）セグメントを、ＩｇＧ１およびＩ
ｇＧ４のようなヒト定常（Ｃ）セグメントに結合しうる。ヒトアイソタイプＩｇＧ１が好
ましい。典型的なキメラ抗体は、従って、マウス抗体からのＶすなわち抗原結合ドメイン
およびヒト抗体からのＣすなわちエフェクタードメインよりなるハイブリッドタンパク質
である。
Ｂ．ヒト化抗体の製造
「ヒト化抗体」という用語は、実質的にヒト抗体鎖（アクセプター免疫グロブリン若し
くは抗体と称される）からの可変領域枠組み残基および実質的にマウス抗体（ドナー免疫
グロブリン若しくは抗体と称される）からの最低１個の相補性決定領域を含んでなる最低
１本の鎖を含んでなる抗体を指す。Ｑｕｅｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９−１００３３（１９８９）、米国特許第５，５３０，１０
１号、同第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６１号、同第５，６９３，７６２
号明細書、Ｓｅｌｉｃｋら、第ＷＯ ９０／０７８６１号明細書およびＷｉｎｔｅｒ、米
国特許第５，２２５，５３９号明細書（全部の目的上そっくりそのまま引用することによ
り組み込まれる）を参照されたい。定常領域（１個若しくは複数）もまた、存在する場合
は実質的に若しくは完全にヒト免疫グロブリンからである。

ヒト可変ドメイン枠組みへのマウスＣＤＲの置換は、最もありそうには、ヒト可変ドメ
イン枠組みが、ＣＤＲが発するマウス可変枠組みに同一の若しくは類似のコンホメーショ
ンを採用する場合に、それらの正しい空間的配置の保持をもたらす。これは、ＣＤＲが由
来したネズミの可変枠組みドメインとの高い程度の配列の同一性を枠組み配列が表すヒト
抗体からヒト可変ドメインを得ることにより達成される。ＨおよびＬ鎖可変枠組み領域は
同一若しくは異なるヒト抗体配列由来であり得る。ヒト抗体配列は、天然に存在するヒト
抗体の配列であり得るか、若しくは数種のヒト抗体のコンセンサス配列であり得る。Ｋｅ
ｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ４：７７３（１
９９１）；Ｋｏｌｂｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ６：９７
１（１９９３）およびＣａｒｔｅｒら、第ＷＯ ９２／２２６５３号明細書を参照された
い。

ネズミのドナー免疫グロブリンおよび適切なヒトアクセプター免疫グロブリンの相補性
決定領域を同定すれば、次の段階は、生じるヒト化抗体の特性を至適化するためにこれら
の成分からのどの残基（あれば）を置換すべきかを決定することである。一般に、ネズミ
の残基の導入はヒトにおけるヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答を導き出す抗体の危険を
増大させるため、ネズミのアミノ酸残基でのヒトアミノ酸残基の置換は最小限にすべきで
ある。免疫応答の技術に認識された決定方法を実施して、特定の患者における若しくは臨
床試験の間のＨＡＭＡ応答をモニターし得る。ヒト化抗体を投与された患者に、前記治療
の投与の開始時におよびそれを通じて免疫原性の評価を与え得る。ＨＡＭＡ応答は、例え
ば、表面プラスモン共鳴技術（ＢＩＡＣＯＲＥ）および／若しくは固相ＥＬＩＳＡ分析を
包含する当業者に既知の方法を使用して、患者からの血清サンプル中のヒト化治療薬に対
する抗体を検出することにより測定する。

ヒト可変領域枠組み残基からのあるアミノ酸を、ＣＤＲのコンホメーションおよび／若
しくは抗原への結合に対するそれらの可能な影響に基づいて置換のため選択する。ヒト可
変枠組み領域とのネズミのＣＤＲ領域の不自然な並置は、あるアミノ酸残基の置換により
是正されない限り、結合親和性の喪失につながる不自然なコンホメーションの歪みをもた
らし得る。

置換のためのアミノ酸残基の選択は部分的にコンピュータモデル化により決定する。免
疫グロブリン分子の三次元像を作製するためのコンピュータハードウェアおよびソフトウ
ェアを本明細書に記述する。一般に、分子モデルは免疫グロブリン鎖若しくはそれらのド
メインの解明された構造から出発して作製する。モデル化すべき鎖を、アミノ酸配列の類
似性について、解明された三次元構造の鎖若しくはドメインと比較し、そして、最大の配
列の類似性を示す鎖若しくはドメインを分子モデルの構築のための出発点として選択する
。最低５０％の配列の同一性を共有する鎖若しくはドメインをモデル化のため選択し、そ
して、好ましくは最低６０％、７０％、８０％、９０％の配列の同一性若しくはそれ以上
を共有するものをモデル化のため選択する。解明された出発構造を、モデル化されている
免疫グロブリン鎖若しくはドメイン中の実際のアミノ酸と出発構造中のアミノ酸との間の
差違を見込むように改変する。改変した構造をその後混成免疫グロブリンに集成する。最
後に、エネルギー最小化、ならびに、全部の原子が相互から適切な距離内にあることなら
びに結合の長さおよび角度が化学的に許容できる限界内にあることを確認することにより
、モデルを精緻なものとする。

置換のためのアミノ酸残基の選択はまた、部分的には特定の位置のアミノ酸の特徴の検
査または特定のアミノ酸の置換若しくは突然変異誘発の効果の経験的観察によっても決定
し得る。例えば、あるアミノ酸がネズミの可変領域枠組み残基と選択したヒト可変領域枠
組み残基との間で異なる場合、ヒト枠組みアミノ酸は、通常、該アミノ酸が：
（１）抗原を直接非共有結合する、
（２）ＣＤＲ領域に隣接する、
（３）ＣＤＲ領域と別の方法で相互作用する（例えばコンピュータモデル化により決定さ
れるところのＣＤＲ領域の約３〜６Å内にある）、若しくは
（４）ＶＬ−ＶＨ界面に参画する
ことが合理的に期待される場合はマウス抗体からの同等な枠組みアミノ酸により置換すべ
きである。

「抗原と直接非共有結合する」残基は、確立された化学的力により、例えば水素結合形
成、ファンデルワールス力、疎水性相互作用などにより抗原上のアミノ酸と直接相互作用
する十分な確率を有するである枠組み領域中の位置のアミノ酸を包含する。

ＣＤＲおよび枠組み領域はＫａｂａｔら若しくはＣｈｏｔｈｉａら、上記により定義さ
れるとおりである。Ｋａｂａｔら、上記により定義されるところの枠組み残基がＣｈｏｔ
ｈｉａら、上記により定義されるところの構造的ループ残基を構成する場合、マウス抗体
中に存在するアミノ酸をヒト化抗体中での置換に選択しうる。「ＣＤＲ領域に隣接する」
残基は、ヒト化免疫グロブリン鎖の一次配列中でＣＤＲの１個若しくはそれ以上に直に隣
接する位置、例えばＫａｂａｔにより定義されるところのＣＤＲ若しくはＣｈｏｔｈｉａ
により定義されるところのＣＤＲに直に隣接する位置のアミノ酸残基を包含する（例えば
ＣｈｏｔｈｉａとＬｅｓｋ ＪＭＢ １９６：９０１（１９８７）を参照されたい）。こ
れらのアミノ酸は、とりわけ、ＣＤＲ中のアミノ酸と相互作用しかつアクセプターから選
ばれる場合はドナーＣＤＲを歪ませかつ親和性を低下させることがありそうである。さら
に、隣接アミノ酸は抗原と直接相互作用するとみられ（Ａｍｉｔら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２
３３：７４７（１９８６））（引用することにより本明細書に組み込まれる）、また、ド
ナーからこれらのアミノ酸を選択することは元の抗体における親和性を提供する全部の抗
原接触を保つために望ましいとみられる。

「ＣＤＲ領域と別の方法で相互作用する」残基は、ＣＤＲ領域を達成するのに十分な空
間的配置にあることが二次構造解析により決定されるものを包含する。一態様において、
「ＣＤＲ領域と別の方法で相互作用する」残基は、ドナー免疫グロブリンの三次元モデル
（例えばコンピュータで生成されるモデル）を解析することにより同定される。典型的に
は元のドナー抗体の三次元モデルは、ＣＤＲの外側のあるアミノ酸がＣＤＲに近くかつ水
素結合形成、ファンデルワールス力、疎水性相互作用などによりＣＤＲ中のアミノ酸と相
互作用する十分な確率を有することを示す。それらのアミノ酸位置では、アクセプター免
疫グロブリンのアミノ酸よりもむしろドナー免疫グロブリンのアミノ酸を選択しうる。こ
の基準に従うアミノ酸は、一般に、ＣＤＲ中の何らかの原子の約３オングストローム単位
（Å）内に側鎖原子を有することができ、そして上に列挙されたもののような確立した化
学的力によりＣＤＲ原子と相互作用し得る原子を含有するはずである。

水素結合を形成しうる原子の場合、３Åはそれらの核間で測定されるが、しかし、結合
を形成しない原子については、３Åはそれらのファンデルワールス表面間で測定される。
これゆえに、後者の場合において、核は、相互作用することが可能とみなされる原子につ
いて約６Å（３Åおよびファンデルワールス半径の合計）内になくてはならない。多くの
場合、核は４若しくは５ないし６Å離れていることができる。アミノ酸がＣＤＲと相互作
用し得るかどうかの決定において、Ｈ鎖のＣＤＲ２の最後の８アミノ酸をＣＤＲの一部と
みなさないことが好ましい。構造の見地から、これら８アミノ酸は枠組みの一部としてよ
り多く挙動するからである。

ＣＤＲ中のアミノ酸と相互作用することが可能であるアミノ酸はなお別の方法で同定し
うる。各枠組みアミノ酸の溶媒が接近可能な表面積は、２つの方法、すなわち（１）無傷
の抗体で、および（２）そのＣＤＲを除去した抗体よりなる仮定の分子で計算する。約１
０平方Å若しくはそれ以上のこれらの数の間の有意の差異は、枠組みアミノ酸の溶媒への
接近がＣＤＲにより少なくとも部分的に阻害されること、および従って該アミノ酸はＣＤ
Ｒと接触していることを示す。アミノ酸の溶媒が接近可能な表面積は、当該技術分野で既
知のアルゴリズム（例えばＣｏｎｎｏｌｌｙ、Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔ．１６：５４８
（１９８３）およびＬｅｅとＲｉｃｈａｒｄｓ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．５５：３７９（
１９７１）（それらの双方は引用することにより本明細書に組み込まれる））を使用して
抗体の三次元モデルに基づき計算しうる。枠組みアミノ酸はまた、ときに、順にＣＤＲと
接触する別の枠組みアミノ酸のコンホメーションに影響を及ぼすことによりＣＤＲと間接
的に相互作用することもある。

枠組み中のいくつかの位置のアミノ酸は多くの抗体中のＣＤＲと相互作用することが可
能であることが既知である（ＣｈｏｔｈｉａとＬｅｓｋ、上記、Ｃｈｏｔｈｉａら、上記
およびＴｒａｍｏｎｔａｎｏら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：１７５（１９９０）（
それらの全部は引用することにより本明細書に組み込まれる））。注目すべきことに、Ｌ
鎖の位置２、４８、６４および７１ならびにＨ鎖の２６−３０、７１および９４のアミノ
酸（Ｋａｂａｔによる番号付け）は、多くの抗体中のＣＤＲと相互作用することが可能で
あることが既知である。Ｌ鎖の位置３５ならびにＨ鎖の９３および１０３のアミノ酸もま
たＣＤＲと相互作用することがありそうである。全部のこれらの番号付けられた位置では
、ヒト化免疫グロブリン中にあるべきアクセプターアミノ酸よりはむしろドナーアミノ酸
（それらが異なる場合）の選択が好ましい。他方、Ｌ鎖の最初の５アミノ酸のようなＣＤ
Ｒ領域と相互作用することが可能なある残基を、ときに、ヒト化免疫グロブリンにおける
親和性の喪失を伴わずにアクセプター免疫グロブリンから選ぶことができる。

「ＶＬ−ＶＨ界面に参画する」残基若しくは「充填残基」は、例えばＮｏｖｏｔｎｙと
Ｈａｂｅｒ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８２：４５９２−６６（
１９８５）若しくはＣｈｏｔｈｉａら、上記により定義されるところのＶＬとＶＨとの間
の界面の残基を包含する。一般に、異常な充填残基は、それらがヒト枠組み中のものと異
なる場合は、ヒト化抗体中で保持されるべきである。

一般に、上の基準を満たすアミノ酸の１個若しくはそれ以上を置換する。いくつかの態
様においては上の基準を満たすアミノ酸の全部若しくは大部分を置換する。ときに、特定
の一アミノ酸が上の基準に合致するかどうかについて若干のあいまいさが存在し、そして
、一方はその特定の置換を有し、他方は有しない代替のバリアント免疫グロブリンが製造
される。そのように製造した代替のバリアント免疫グロブリンを、本明細書に記述される
アッセイのいずれかで所望の活性について試験し得、そして好ましい免疫グロブリンを選
択し得る。

通常、ヒト化抗体中のＣＤＲ領域はドナー抗体の対応するＣＤＲ領域に実質的に同一、
およびより通常は同一である。通常は望ましくないとは言え、生じるヒト化免疫グロブリ
ンの結合親和性に認識可能に影響を及ぼすことなくＣＤＲ残基の１個若しくはそれ以上の
保存的アミノ酸置換を行うことがときに可能である。保存的置換により、ｇｌｙ、ａｌａ
；ｖａｌ、ｉｌｅ、ｌｅｕ；ａｓｐ、ｇｌｕ；ａｓｎ、ｇｌｎ；ｓｅｒ、ｔｈｒ；ｌｙｓ
、ａｒｇ；およびｐｈｅ、ｔｙｒのような組合せを意図している。

置換の付加的な候補は、その位置でヒト免疫グロブリンにとって異常若しくは「希少」
であるアクセプターヒト枠組みアミノ酸である。これらのアミノ酸は、マウスドナー抗体
の同等な位置若しくはより典型的なヒト免疫グロブリンの同等な位置からのアミノ酸で置
換し得る。例えば、アクセプター免疫グロブリンのヒト枠組み領域中のアミノ酸がその位
置にとって希少でありかつドナー免疫グロブリン中の対応するアミノ酸がヒト免疫グロブ
リン配列中のその位置に普遍的である場合；若しくはアクセプター免疫グロブリン中のア
ミノ酸がその位置にとって希少でありかつドナー免疫グロブリン中の対応するアミノ酸も
また他のヒト配列に関して希少である場合、置換が望ましいとみられる。これらの基準は
、ヒト枠組み中の典型的でないアミノ酸が抗体構造を破壊しないことを確実にするのに役
立つ。さらに、異常なヒトアクセプターアミノ酸をヒト抗体に偶々典型的であるドナー抗
体からのアミノ酸で置換することにより、ヒト化抗体はより少なく免疫原性にされうる。

本明細書で使用されるところの「希少な（ｒａｒｅ）」という用語は、配列の代表的サ
ンプル中の配列の約２０％未満、しかし通常は約１０％未満でその位置に存在するアミノ
酸を示し、また、本明細書で使用されるところの「普遍的な（ｃｏｍｍｏｎ）」という用
語は、代表的サンプル中の配列の約２５％以上しかし通常は約５０％以上に存在するアミ
ノ酸を示す。例えば、全部のヒトＬおよびＨ鎖可変領域配列は、それぞれ、相互にとりわ
け相同でありかつある極めて重要な位置に同一のアミノ酸を有する配列の「サブグループ
」にグループ分けされる（Ｋａｂａｔら、上記）。ヒトアクセプター配列中のあるアミノ
酸がヒト配列の間で「希少」であるか若しくは「普遍的」であるかを決定する場合、該ア
クセプター配列と同一のサブグループのヒト配列のみを考慮することがしばしば好ましい
ことができる。

置換の付加的な候補は、Ｃｈｏｔｈｉａら、上記により提案された代替の定義のもとで
ＣＤＲ領域の一部と同定されるとみられるアクセプターヒト枠組みアミノ酸である。置換
の付加的な候補は、ＡｂＭおよび／若しくは接触の定義のもとでＣＤＲ領域の一部と同定
されるとみられるアクセプターヒト枠組みアミノ酸である。注目すべきことに、可変Ｈ鎖
中のＣＤＲ１は残基２６−３２を包含すると定義される。

置換の付加的な候補は、希少若しくは異常なドナー枠組み残基に対応するアクセプター
枠組み残基である。希少若しくは異常なドナー枠組み残基は、その位置でネズミの抗体に
とって（本明細書で定義されるところの）希少若しくは異常であるものである。ネズミの
抗体について、サブグループをＫａｂａｔに従って決定し得、そしてコンセンサスと異な
る残基位置を同定し得る。これらのドナー特異的な差異は活性を高めるネズミの配列中の
体細胞突然変異を指すとみられる。結合に影響を及ぼすと予測される異常な残基が保持さ
れる一方、結合に重要でないと予測される残基を置換し得る。

置換の付加的な候補はアクセプター枠組み領域中に存在する非生殖系列残基である。例
えば、アクセプター抗体鎖（すなわちドナー抗体鎖と有意の配列の同一性を共有するヒト
抗体鎖）を生殖系列抗体鎖（同様にドナー鎖と有意の配列の同一性を共有する）に整列さ
せる場合、アクセプター鎖枠組みと生殖系列鎖枠組みとの間で一致しない残基を、生殖系
列配列からの対応する残基で置換し得る。

上で論考された特定のアミノ酸置換以外に、ヒト化免疫グロブリンの枠組み領域は通常
、それらが由来したヒト抗体の枠組み領域に実質的に同一、およびより通常は同一である
。もちろん、枠組み領域中のアミノ酸の多くは抗体の特異性若しくは親和性にほとんど若
しくは全く直接的な寄与をなさない。従って、枠組み残基の多くの個々の保存的置換は、
生じるヒト化免疫グロブリンの特異性若しくは親和性の認識可能な変化を伴わずに耐えら
れ得る。従って、一態様において、ヒト化免疫グロブリンの可変枠組み領域はヒト可変枠
組み領域配列若しくはこうした配列のコンセンサスに対する最低８５％の配列の同一性を
共有する。別の態様において、ヒト化免疫グロブリンの可変枠組み領域は、ヒト可変枠組
み領域配列若しくはこうした配列のコンセンサスに対する最低９０％、好ましくは９５％
、より好ましくは９６％、９７％、９８％若しくは９９％の配列の同一性を共有する。し
かしながら一般にこうした置換は望ましくない。

ヒト化抗体は、好ましくは最低１０^７、１０^８、１０^９若しくは１０^１０Ｍ^−１の抗原
に対する特異的結合親和性を表す。通常、抗原に対するヒト化抗体の結合親和性の上限は
ドナー免疫グロブリンのものの３、４若しくは５の係数以内である。しばしば、結合親和
性の下限もまたドナー免疫グロブリンのものの３、４若しくは５の係数以内である。ある
いは、結合親和性は、置換を有しないヒト化抗体（例えばドナーのＣＤＲおよびアクセプ
ターのＦＲを有するがしかしＦＲ置換を有しない抗体）のものと比較し得る。こうした例
において、（置換を伴う）至適化した抗体の結合は、好ましくは、未置換の抗体のものよ
り最低２ないし３倍より大きいか、若しくは３ないし４倍より大きい。比較を行うために
、多様な抗体の活性を例えばＢＩＡＣＯＲＥ（すなわち未標識の試薬を使用する表面プラ
スモン共鳴）若しくは競合結合アッセイにより測定し得る。
Ｃ．ヒト化３Ｄ６抗体の製造
本発明の好ましい一態様は、とりわけ本明細書に記述される治療および／若しくは診断
の方法論での使用のためのＡβのＮ末端に対するヒト化抗体を特徴とする。ヒト化抗体の
製造のためのとりわけ好ましい一出発原料は３Ｄ６である。３Ｄ６はＡβのＮ末端に特異
的でありかつアミロイド斑の食作用を媒介する（例えば食作用を誘導する）ことが示され
ている（実施例Ｉ〜Ｖを参照されたい）。３Ｄ６抗体のＨおよびＬ鎖可変領域をコードす
るｃＤＮＡのクローニングおよびシークエンシングを実施例ＶＩに記述する。

適するヒトアクセプター抗体配列は、マウス可変領域のアミノ酸配列の既知のヒト抗体
の配列とのコンピュータ比較により同定する。該比較はＨおよびＬ鎖について別個に実施
するがしかし原理はそれぞれについて類似である。とりわけ、その枠組み配列がネズミの
ＶＬおよびＶＨ枠組み領域と高い程度の配列の同一性を表すヒト抗体からの可変ドメイン
を、それぞれのネズミの枠組み配列を用いてＮＣＢＩのＢＬＡＳＴ（国立保健研究所（Ｎ
ａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ）のＮＣＢＩのインターネ
ットサーバーを通じて公的にアクセス可能）を使用するＫａｂａｔデータベースのクエリ
により同定した。一態様において、ネズミのドナー配列と５０％以上の配列の同一性を共
有するアクセプター配列を選択する。好ましくは、６０％、７０％、８０％、９０％若し
くはそれ以上を共有するアクセプター抗体配列を選択する。

３Ｄ６のコンピュータ比較は、３Ｄ６ Ｌ鎖がＫａｂａｔら、上記により定義されると
ころのサブタイプκＩＩのヒトＬ鎖に対する最大の配列の同一性を示すこと、および３Ｄ
６ Ｈ鎖がサブタイプＩＩＩのヒトＨ鎖に対する最大の配列の同一性を示すことを明らか
にした。従って、ＬおよびＨヒト枠組み領域は、好ましくはこれらのサブタイプのヒト抗
体若しくはこうしたサブタイプのコンセンサス配列由来である。３Ｄ６からの対応する領
域に対する最大の配列の同一性を示す好ましいＬ鎖ヒト可変領域は、Ｋａｂａｔ ＩＤ番
号０１９２３０、００５１３１、００５０５８、００５０５７、００５０５９、Ｕ２１０
４０およびＵ４１６４５を有する抗体からであり、０１９２３０がより好ましい。３Ｄ６
からの対応する領域に対する最大の配列の同一性を示す好ましいＨ鎖ヒト可変領域は、Ｋ
ａｂａｔ ＩＤ番号０４５９１９、０００４５９、０００５５３、０００３８６およびＭ
２３６９１を有する抗体からであり、０４５９１９がより好ましい。

次に、後に続くとおり置換のための残基を選択する。あるアミノ酸が３Ｄ６可変枠組み
領域と同等なヒト可変枠組み領域との間で異なる場合、ヒト枠組みアミノ酸は通常、該ア
ミノ酸が：
（１）抗原を直接非共有結合する、
（２）ＣＤＲ領域に隣接する、Ｃｈｏｔｈｉａら、上記により提案される代替の定義のも
とでＣＤＲ領域の一部である、若しくはＣＤＲ領域と別の方法で相互作用する（例えばＣ
ＤＲ領域の約３Ａ以内である）（例えば３Ｄ６の位置Ｌ２、Ｈ４９およびＨ９４のアミノ
酸）、または
（３）ＶＬ−ＶＨ界面に参画する（例えば３Ｄ６の位置Ｌ３６、Ｌ４６およびＨ９３のア
ミノ酸）
ことが合理的に期待される場合は、同等なマウスのアミノ酸により置換されるべきである
。

３Ｄ６抗体のＨおよびＬ鎖可変領域のコンピュータモデル化、ならびに３Ｄ６抗体のヒ
ト化を実施例ＶＩＩに記述する。簡潔には、ＨおよびＬ鎖の最も緊密に解明されたネズミ
の抗体の構造に基づき三次元モデルを生成した。この目的上、１ＣＲ９と呼称される抗体
（タンパク質データバンク（ＰＤＢ）ＩＤ：１ＣＲ９、Ｋａｎｙｏら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉ
ｏｌ．２９３：８５５（１９９９））を、３Ｄ６ Ｌ鎖をモデル化するための鋳型として
選び、また、１ＯＰＧと呼称される抗体（ＰＤＢ ＩＤ：１ＯＰＧ、Ｋｏｄａｎｄａｐａ
ｎｉら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：２２６８（１９９５））を、Ｈ鎖をモデル化
するための鋳型として選んだ。該モデルは、好ましくない原子接触を緩和しかつ静電的お
よびファンデルワールス相互作用を至適化するための一連のエネルギー最小化段階により
さらに精緻なものとした。３Ｄ６および１ＯＰＧは比較の目的上整列した場合にこの領域
で有意の配列の相同性を表さなかったため、Ｈ鎖のＣＤＲ３をモデル化するための鋳型と
して１ｑｋｚ（ＰＤＢ ＩＤ：１ＱＫＺ、Ｄｅｒｒｉｃｋら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２
９３：８１（１９９９））の解明された構造を選んだ。

本明細書に記述される抗体の三次元構造の情報は、例えば構造バイオインフォマティク
ス研究共同体（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ Ｓｔｒｕｃｔ
ｕｒａｌ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ）のタンパク質データバンク（ＰＤＢ）から公
的に入手可能である。ＰＤＢはワールドワイドウェブのインターネットを介して自由にア
クセス可能であり、そしてＢｅｒｍａｎら（２０００）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒ
ｅｓｅａｒｃｈ、２８：２３５により記述されている。コンピュータモデル化はＣＤＲと
相互作用する残基の同定を見込む。３Ｄ６の構造のコンピュータモデルは、順に、ヒト枠
組み構造中で置換された３Ｄ６の相補性決定領域を含有する抗体の三次元構造を予測する
ための出発点としてはたらく可能性がある。さらなるアミノ酸置換を導入した際の構造を
表す付加的なモデルを構築し得る。

一般に、上の基準を満たすアミノ酸の１個、大部分若しくは全部の置換が望ましい。従
って、本発明のヒト化抗体は、通常、以下の位置すなわちＬ１、Ｌ２、Ｌ３６およびＬ４
６の最低１、２若しくは３、およびより通常は４個において対応する３Ｄ６残基でのヒト
Ｌ鎖枠組み残基の置換を含有することができる。該ヒト化抗体はまた、通常、以下の位置
すなわちＨ４９、Ｈ９３およびＨ９４の最低１、２およびときに３個において対応する３
Ｄ６残基でのヒトＨ鎖枠組み残基の置換も含有する。ヒト化抗体はまた、以下の位置すな
わちＨ７４、Ｈ７７およびＨ８９の最低１、２およびときに３個において対応する生殖系
列残基でのＨ鎖枠組み残基の置換も含有し得る。

しかしながら、ときに特定の一アミノ酸が上の基準に合致するかどうかに関して若干の
あいまいさが存在し、そして一方はその特定の置換を有し、他方は有しない代替のバリア
ント免疫グロブリンが製造される。ネズミの残基での置換がヒト免疫グロブリンにおいて
希少である残基を特定の一位置に導入するとみられる場合、該特定の置換を伴う若しくは
伴わない活性について該抗体を試験することが望ましいことがある。活性（例えば結合親
和性および／若しくは結合特異性）が置換を伴い若しくは伴わずにほぼ同一である場合、
置換を伴わない抗体は本明細書に記述されるところのＨＡＨＡ応答をほとんど導き出さな
いと期待することができるため、それが好ましいことができる。

置換の他の候補はその位置でヒト免疫グロブリンにとって異常であるアクセプターヒト
枠組みアミノ酸である。これらのアミノ酸をより典型的なヒト免疫グロブリンの同等の位
置からのアミノ酸で置換し得る。あるいは、マウス３Ｄ６中の同等な位置からのアミノ酸
が該同等な位置でヒト免疫グロブリンに典型的である場合は、こうしたアミノ酸をヒト枠
組み領域に導入し得る。

ヒトＬ鎖枠組みアクセプター免疫グロブリンがＫａｂａｔ ＩＤ番号０１９２３０であ
る付加的な態様において、該Ｌ鎖は以下の位置、すなわちＬ７、Ｌ１０、Ｌ１２、Ｌ１５
、Ｌ１７、Ｌ３９、Ｌ４５、Ｌ６３、Ｌ７８、Ｌ８３、Ｌ８５、Ｌ１００若しくはＬ１０
４の最低１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２若しくはより通常は１
３個に置換を含有する。ヒトＨ鎖枠組みアクセプター免疫グロブリンがＫａｂａｔ ＩＤ
番号０４５９１９である付加的な態様において、Ｈ鎖は以下の位置、すなわちＨ３、Ｈ５
、Ｈ１３、Ｈ１６、Ｈ１９、Ｈ４０、Ｈ４１、Ｈ４２、Ｈ４４、Ｈ７２、Ｈ７７、Ｈ８２
Ａ、Ｈ８３、Ｈ８４若しくはＨ１０８の最低１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０
、１１、１２、１３、１４若しくはより通常は１５個に置換を含有する。これらの位置を
、より典型的なアミノ酸残基を有するヒト免疫グロブリンの同等の位置からのアミノ酸で
置換する。置換するための適切なアミノ酸の例を図１および２に示す。

置換の他の候補は枠組み領域中に存在する非生殖系列残基である。既知の生殖系列配列
との３Ｄ６のコンピュータ比較は、最高の程度の配列の同一性を示すＨ鎖が生殖系列可変
領域配列ＶＨ３−４８、ＶＨ３−２３、ＶＨ３−７、ＶＨ３−２１およびＶＨ３−１１を
包含することを示し、ＶＨ３−２３がより好ましい。ＶＨ３−２３とのＫａｂａｔ ＩＤ
０４５９１９のアラインメントは、残基Ｈ７４、Ｈ７７および／若しくはＨ８９が、対
応する生殖系列残基（例えばＫａｂａｔ ＩＤ ０４５９１９およびＶＨ３−２３を比較
する場合に残基Ｈ７４、Ｈ７７および／若しくはＨ８９）での置換に選択されうることを
示す。同様に、３Ｄ６ L鎖に対する最高の程度の同一性を有する生殖系列配列はＡ１、
Ａ１７、Ａ１８、Ａ２およびＡ１９を包含し、Ａ１９が最も好ましい。選択したＬ鎖アク
セプター枠組みとこれらの生殖配列の１つとの間で一致しない残基を、対応する生殖系列
残基での置換に選択し得る。

表１は３Ｄ６ ＶＨおよびＶＬ領域の配列分析を要約する。３Ｄ６抗体および付加的な
ヒト抗体のコンピュータモデル化に使用し得る付加的なマウスおよびヒト配列、ならびに
アミノ酸置換の選択で使用し得る生殖系列配列を示す。希少マウス残基もまた表１に示す
。希少マウス残基は、ドナーＶＬおよび／若しくはＶＨ配列を該ドナーＶＬおよび／若し
くはＶＨ配列が属する（Ｋａｂａｔによる）サブグループの他メンバーの配列と比較する
こと、ならびにコンセンサスと異なる残基位置を同定することにより同定する。これらの
ドナー特異的な差異は活性を高める体細胞突然変異を示すかもしれない。結合部位に近い
異常な若しくは希少残基はおそらく抗原と接触してマウス残基を保持することを望ましく
するとみられる。しかしながら、異常なマウス残基が結合に重要でない場合は、該マウス
残基がヒト化抗体中で免疫原性のネオエピトープ（ｎｅｏｅｐｉｔｏｐｅ）を創製しうる
ため、対応するアクセプター残基の使用が好ましい。ドナー配列中の異常な残基が対応す
るアクセプター配列中で実際は普遍的残基である状況では、好ましい残基は明らかにアク
セプター残基である。

本明細書で言及されるＫａｂａｔ ＩＤは、例えばノースウエスタン大学生物医学工学
部の免疫学的目的のタンパク質の配列のＫａｂａｔデータベース（Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔｅ
ｒｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｄｅｐ
ａｒｔｍｅｎｔ’ｓ Ｋａｂａｔ Ｄａｔａｂａｓｅ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ
Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ）から公的
に入手可能である。本明細書に記述される抗体の三次元構造の情報は、例えば構造バイオ
インフォマティクス研究共同体（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏ
ｒ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ）のタンパク質データバンク
（ＰＤＢ）から公的に入手可能である。ＰＤＢはワールドワイドウェブのインターネット
を介して自由にアクセス可能であり、そしてＢｅｒｍａｎら（２０００）Ｎｕｃｌｅｉｃ
Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、ｐ２３５−２４２により記述されている。本明細書で
言及される生殖系列遺伝子配列は、例えば国立生物工学情報センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ
Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）（Ｎ
ＣＢＩ）のＩｇｈ、Ｉｇ κおよびＩｇ λ生殖系列Ｖ遺伝子の集合物の配列のデータベ
ース（国立保健研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ
）（ＮＩＨ）の国立医学図書館（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｌｉｂｒａｒｙ ｏｆ Ｍｅｄｉｃ
ｉｎｅ）（ＮＬＭ）の一部門として）から公的に入手可能である。ＮＣＢＩの「Ｉｇ生殖
系列遺伝子」データベースの相同性検索はＩｇＧ ＢＬＡＳＴ^ＴＭにより提供される。

好ましい一態様において、本発明のヒト化抗体は、（ｉ）ネズミの３Ｄ６ ＶＬのＣＤ
Ｒおよびヒトアクセプター枠組み（該枠組みは対応する３Ｄ６残基で置換されたＬ１、Ｌ
２、Ｌ３６およびＬ４６よりなる群から選択される最低１、好ましくは２、３若しくは４
残基を有する）を含んでなる可変ドメインを含んでなるＬ鎖、ならびに（ｉｉ）３Ｄ６
ＶＨのＣＤＲおよびヒトアクセプター枠組み（該枠組みは対応する３Ｄ６残基で置換され
たＨ４９、Ｈ９３およびＨ９４よりなる群から選択される最低１、好ましくは２若しくは
３残基を有する）を含んでなるＨ鎖を含有し、そして、場合によっては、Ｈ７４、Ｈ７７
およびＨ８９よりなる群から選択される最低１、好ましくは２若しくは３残基が、対応す
るヒト生殖系列残基で置換される。

より好ましい一態様において、本発明のヒト化抗体は、（ｉ）ネズミの３Ｄ６ ＶＬの
ＣＤＲおよびヒトアクセプター枠組み（該枠組みはｔｙｒ（Ｙ）で置換された残基１、ｖ
ａｌ（Ｖ）で置換された残基２、ｌｅｕ（Ｌ）で置換された残基３６および／若しくはａ
ｒｇ（Ｒ）で置換された残基４６を有する）を含んでなる可変ドメインを含んでなるＬ鎖
、ならびに（ｉｉ）３Ｄ６ ＶＨのＣＤＲおよびヒトアクセプター枠組み（該枠組みはａ
ｌａ（Ａ）で置換された残基４９、ｖａｌ（Ｖ）で置換された残基９３および／若しくは
ａｒｇ（Ｒ）で置換された残基９４を有し、かつ、場合によっては、ｓｅｒ（Ｓ）で置換
された残基７４、ｔｈｒ（Ｔ）で置換された残基７７および／若しくはｖａｌ（Ｖ）で置
換された残基８９を有する）を含んでなるＨ鎖を含有する。

とりわけ好ましい一態様において、本発明のヒト化抗体は、本明細書に記述されるとこ
ろの構造的特徴を有し、かつ、以下の活性、すなわち（１）（例えばＥＬＩＳＡにより測
定されるとおり）凝集したＡβ１−４２に結合する；（２）斑中のＡβを結合する（例え
ばＡＤおよび／若しくはＰＤＡＰＰ斑の染色）；（３）キメラ３Ｄ６（例えばネズミの可
変領域配列およびヒト定常領域配列を有する３Ｄ６）に比較して２ないし３倍より高い結
合親和性でＡβを結合する；（４）（例えば本明細書に記述されるところのｅｘ ｖｉｖ
ｏ食作用アッセイにおいて）Ａβの食作用を媒介する；ならびに（５）血液脳関門を横断
する（例えば、例えば本明細書に記述されるところのＰＤＡＰＰ動物モデルにおいて短期
の脳局在化を示す）の最低１つ（好ましくは２、３、４若しくは全部）をさらに有する。

別の態様において、本発明のヒト化抗体は本明細書に記述されるところの構造的特徴を
有し、以下のｉｎ ｖｉｖｏ効果、すなわち（１）Ａβ斑負荷を低下させる；（２）斑形
成を予防する；（３）可溶性Ａβのレベルを低下させる；（４）アミロイド原性障害と関
連する神経炎性の病状を低下させる；（５）アミロイド原性障害と関連する最低１種の生
理学的症状を小さくするすなわち改善する；および／若しくは（６）認識機能を向上させ
る、の最低１つを導き出すのに十分な様式で若しくは親和性を伴いＡβを結合する。

別の態様において、本発明のヒト化抗体は本明細書に記述されるところの構造的特徴を
有し、そしてＡβの残基１−５若しくは３−７を含んでなるエピトープに特異的に結合す
る。

上述された活性は本明細書若しくは当該技術分野で記述される多様なアッセイ（例えば
結合アッセイ、食作用アッセイなど）のいずれか１つを利用して測定し得る。活性は（例
えば標識したアッセイ成分および／若しくは画像化技術を使用して）ｉｎ ｖｉｖｏまた
は（例えば被験体由来のサンプル若しくは試料を使用して）ｉｎ ｖｉｔｒｏのいずれで
もアッセイし得る。活性は直接若しくは間接的のいずれでもアッセイし得る。ある好まし
い態様において、神経学的エンドポイント（例えばアミロイド負荷、神経炎性負荷など）
をアッセイする。こうしたエンドポイントは、非侵襲的検出の方法論を使用して、生存す
る被験体で（例えばアルツハイマー病の動物モデル若しくは例えば免疫療法を受けている
ヒト被験体で）アッセイし得る。あるいは、こうしたエンドポイントは死後の被験体でア
ッセイし得る。動物モデルおよび／若しくは死後のヒト被験体でこうしたエンドポイント
をアッセイすることは、類似の免疫治療の応用で利用されるべき多様な剤（例えばヒト化
抗体）の有効性の評価において有用である。他の好ましい態様において、行動若しくは神
経学的パラメータを上の神経病理学的活性若しくはエンドポイントの指標として評価し得
る。
３．ヒト抗体
Ａβに対するヒト抗体は下述される多様な技術により提供される。数種のヒト抗体は、
競合結合実験により、そうでなければ本明細書に記述されるマウスモノクローナル抗体の
１種のような特定の１マウス抗体と同一のエピトープ特異性を有するように選択する。ヒ
ト抗体はまた、免疫原としてＡβのフラグメントのみを使用することにより、および／若
しくはＡβの欠失変異体の集合物に対し抗体をスクリーニングすることにより、特定の１
エピトープ特異性についてもスクリーニングし得る。ヒト抗体は好ましくはヒトＩｇＧ１
アイソタイプ特異性を有する。
ａ．トリオーマ（ｔｒｉｏｍａ）の方法論
基礎的アプローチ、および本アプローチでの使用のための例示的一細胞融合パートナー
ＳＰＡＺ−４は、Ｏｅｓｔｂｅｒｇら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ２：３６１（１９８３）；
Ｏｅｓｔｂｅｒｇ、米国特許第４，６３４，６６４号明細書；およびＥｎｇｌｅｍａｎら
、米国特許第４，６３４，６６６号明細書（それらのそれぞれは全部の目的上そっくりそ
のまま引用することにより組み込まれる）により記述されている。本方法により得られる
抗体産生細胞株は、それらが３種の細胞（２種はヒトおよび１種はマウス）の子孫である
ためにトリオーマ（ｔｒｉｏｍａ）と呼ばれる。最初に、マウス骨髄腫株をヒトＢリンパ
球と融合して、Ｏｅｓｔｂｅｒｇ、上記により記述されるＳＰＡＺ−４細胞株のような抗
体を産生しない異種ハイブリッド細胞を得る。該異種細胞をその後、免疫したヒトＢリン
パ球と融合して抗体産生トリオーマ細胞株を得る。トリオーマはヒト細胞から作成した通
常のハイブリドーマより安定に抗体を産生することが見出された。

免疫したＢリンパ球はヒトドナーの血液、脾、リンパ節若しくは骨髄から得る。特定の
抗原若しくはエピトープに対する抗体が望ましい場合は、免疫化にその抗原若しくはその
エピトープを使用することが好ましい。免疫化はｉｎ ｖｉｖｏ若しくはｉｎ ｖｉｔｒ
ｏのいずれでもあり得る。ｉｎ ｖｉｖｏ免疫化には、Ｂ細胞は典型的にＡβ、そのフラ
グメント、Ａβ若しくはフラグメントを含有するより大きなポリペプチド、またはＡβに
対する抗体に対する抗イディオタイプ抗体で免疫したヒトから単離する。いくつかの方法
において、Ｂ細胞は抗体治療を最終的に投与されることになる同一患者から単離する。ｉ
ｎ ｖｉｔｒｏ免疫化には、Ｂリンパ球は典型的に、１０％ヒト血漿を補充したＲＰＭＩ
−１６４０（Ｅｎｇｌｅｍａｎ、上記を参照されたい）のような培地中で７〜１４日の期
間、抗原に曝露する。

免疫したＢリンパ球を公知の方法によりＳＰＡＺ−４のような異種ハイブリッド細胞に
融合する。例えば、該細胞をＭＷ １０００〜４０００の４０〜５０％ポリエチレングリ
コールで約３７℃で約５〜１０分間処理する。細胞を融合混合物から分離し、そして所望
のハイブリッドについて選択的な培地（例えばＨＡＴ若しくはＡＨ）中で増殖させる。必
要とされる結合特異性を有する抗体を分泌するクローンを、Ａβ若しくはそのフラグメン
トに結合する能力についてトリオーマ培地をアッセイすることにより同定する。所望の特
異性を有するヒト抗体を産生するトリオーマを限界希釈技術によりサブクローニングし、
そして培地中でｉｎ ｖｉｔｒｏで増殖させる。得られるトリオーマ細胞株をその後、Ａ
β若しくはそのフラグメントを結合する能力について試験する。

トリオーマは遺伝的に安定であるとは言えそれらは抗体を非常に高力価で産生するわけ
ではない。発現レベルは、抗体遺伝子をトリオーマから１種若しくはそれ以上の発現ベク
ターにクローン化すること、および該ベクターを標準的な哺乳動物、細菌若しくは酵母細
胞株に形質転換することにより増大させ得る。
ｂ．トランスジェニックのヒト以外の哺乳動物
Ａβに対するヒト抗体はまた、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の最低１セグメントをコー
ドする導入遺伝子を有するヒト以外のトランスジェニック哺乳動物からも産生させ得る。
通常、こうしたトランスジェニック哺乳動物の内因性の免疫グロブリン遺伝子座は機能的
に不活性化する。好ましくは、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の該セグメントはＨおよびＬ
鎖成分の再配列されていない配列を包含する。内因性免疫グロブリン遺伝子の不活性化お
よび外因性免疫グロブリン遺伝子の導入の双方を、標的化相同的組換え若しくはＹＡＣ染
色体の導入により達成し得る。この方法から生じるトランスジェニック哺乳動物は、免疫
グロブリン成分の配列を機能的に再配列しかつ内因性免疫グロブリン遺伝子を発現するこ
となくヒト免疫グロブリン遺伝子によりコードされる多様なアイソタイプの抗体のレパー
トリーを発現することが可能である。これらの特性を有する哺乳動物の製造および特性は
、例えばＬｏｎｂｅｒｇら、第ＷＯ９３／１２２２７号明細書（１９９３）；米国特許第
５，８７７，３９７号、同第５，８７４，２９９号、同第５，８１４，３１８号、同第５
，７８９，６５０号、同第５，７７０，４２９号、同第５，６６１，０１６号、同第５，
６３３，４２５号、同第５，６２５，１２６号、同第５，５６９，８２５号、同第５，５
４５，８０６号明細書、Ｎａｔｕｒｅ １４８：１５４７（１９９４）、Ｎａｔｕｒｅ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４：８２６（１９９６）、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ、
第ＷＯ ９１／１０７４１号明細書（１９９１）（それらのそれぞれは全部の目的上そっ
くりそのまま引用することにより組み込まれる）により詳細に記述されている。トランス
ジェニックマウスがとりわけ適する。抗Ａβ抗体は、Ｌｏｎｂｅｒｇ若しくはＫｕｃｈｅ
ｒｌａｐａｔｉ、上記により記述されるようなトランスジェニックのヒト以外の哺乳動物
をＡβ若しくはそのフラグメントで免疫することにより得られる。モノクローナル抗体は
例えば慣習的なＫｏｈｌｅｒ−Ｍｉｌｓｔｅｉｎの技術を使用してこうした哺乳動物から
のＢ細胞を適する骨髄腫細胞株に融合することにより製造する。免疫原性の剤で免疫した
ヒトから血清の形態でヒトポリクローナル抗体もまた提供し得る。場合によっては、こう
したポリクローナル抗体を、アフィニティー試薬としてＡβ若しくは他のアミロイドペプ
チドを使用するアフィニティー精製により濃縮し得る。
ｃ．ファージディスプレイ法
ヒト抗Ａβ抗体を得るためのさらなる一アプローチは、Ｈｕｓｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ
２４６：１２７５−１２８１（１９８９）により概説された一般的プロトコルに従ってヒ
トＢ細胞からのＤＮＡライブラリーをスクリーニングすることである。トリオーマの方法
論について記述されたとおり、こうしたＢ細胞はＡβ、フラグメント、Ａβ若しくはフラ
グメントを含有するより長いポリペプチド、または抗イディオタイプ抗体で免疫したヒト
から得ることができる。場合によっては、こうしたＢ細胞は抗体処置を最終的に受けるこ
とになる患者から得る。Ａβ若しくはそのフラグメントに結合する抗体を選択する。こう
した抗体（若しくは結合フラグメント）をコードする配列をその後クローン化しかつ増幅
する。Ｈｕｓｅにより記述されたプロトコルはファージディスプレイ技術と組合せてより
効率的にされる。例えば、Ｄｏｗｅｒら、第ＷＯ ９１／１７２７１号明細書、ＭｃＣａ
ｆｆｅｒｔｙら、第ＷＯ ９２／０１０４７号明細書、Ｈｅｒｚｉｇら、米国特許第５，
８７７，２１８号明細書、Ｗｉｎｔｅｒら、米国特許第５，８７１，９０７号明細書、Ｗ
ｉｎｔｅｒら、米国特許第５，８５８，６５７号明細書、Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、米国特許
第５，８３７，２４２号明細書、Ｊｏｈｎｓｏｎら、米国特許第５，７３３，７４３号明
細書およびＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、米国特許第５，５６５，３３２号明細書（それらの
それぞれは全部の目的上そっくりそのまま引用することにより組み込まれる）を参照され
たい。これらの方法で、メンバーがそれらの外側表面上に多様な抗体を表示するファージ
のライブラリーが製造される。抗体は通常Ｆｖ若しくはＦａｂフラグメントとして表示さ
れる。所望の特異性をもつ抗体を表示するファージを、Ａβペプチド若しくはそのフラグ
メントに対する親和性の強化により選択する。

ファージディスプレイ法の一変形において、選択したネズミの抗体の結合特異性を有す
るヒト抗体を製造し得る。Ｗｉｎｔｅｒ、第ＷＯ ９２／２０７９１号明細書を参照され
たい。本方法では、選択したネズミの抗体のＨ若しくはＬ鎖いずれかの可変領域を出発原
料として使用する。例えばＬ鎖可変領域を出発原料として選択する場合、メンバーが同一
のＬ鎖可変領域（すなわちネズミの出発原料）および異なるＨ鎖可変領域を表示するファ
ージライブラリーが構築される。Ｈ鎖可変領域は再配列されたヒトＨ鎖可変領域のライブ
ラリーから得られる。Ａβに対する強い特異的結合（例えば最低１０^８および好ましくは
最低１０^９Ｍ^−１）を示すファージを選択する。このファージからのヒトＨ鎖可変領域が
その後さらなるファージライブラリーを構築するための出発原料としてはたらく。本ライ
ブラリーにおいて、各ファージは同一のＨ鎖可変領域（すなわち第一のディスプレイライ
ブラリーから同定される領域）および異なるＬ鎖可変領域を表示する。Ｌ鎖可変領域は再
配列されたヒト可変Ｌ鎖領域のライブラリーから得られる。再度、Ａβに対する強い特異
的結合を示すファージを選択する。これらのファージは完全にヒトの抗Ａβ抗体の可変領
域を表示する。これらの抗体は通常、ネズミの出発原料と同一若しくは類似のエピトープ
特異性を有する。
４．可変領域の製造
ヒト化免疫グロブリンのＣＤＲおよび枠組み成分を概念的に選択したら、こうした免疫
グロブリンの多様な製造方法が利用可能である。暗号の縮重のため、多様な核酸配列が各
免疫グロブリンのアミノ酸配列をコードすることができる。所望の核酸配列は新規固相Ｄ
ＮＡ合成若しくは所望のポリヌクレオチドのより早期に製造されたバリアントのＰＣＲ突
然変異誘発により製造し得る。オリゴヌクレオチドに媒介される突然変異誘発は標的ポリ
ペプチドのＤＮＡの置換、欠失および挿入バリアントの好ましい製造方法である。Ａｄｅ
ｌｍａｎら、ＤＮＡ ２：１８３（１９８３）を参照されたい。簡潔には、所望の突然変
異をコードするオリゴヌクレオチドを一本鎖ＤＮＡ鋳型にハイブリダイズさせることによ
り、標的ポリペプチドのＤＮＡを変える。ハイブリダイゼーション後にＤＮＡポリメラー
ゼを使用して、オリゴヌクレオチドプライマーを組込みかつ標的ポリペプチドのＤＮＡ中
に選択された変化をコードする鋳型の完全な第二の相補鎖を合成する。
５．定常領域の選択
上述されたとおり製造した抗体の可変セグメント（例えばキメラ、ヒト化若しくはヒト
抗体のＨおよびＬ鎖可変領域）は、典型的に、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）（典型的
にはヒト免疫グロブリンの定常領域）の最低一部分に連結する。ヒト定常領域のＤＮＡ配
列は、多様なヒト細胞、しかし好ましくは不死化Ｂ細胞（Ｋａｂａｔら、上記およびＬｉ
ｕら、第ＷＯ８７／０２６７１号明細書を参照されたい）（それらのそれぞれは全部の目
的上そっくりそのまま引用することにより組み込まれる）から公知の手順に従って単離し
得る。通常、該抗体はＬ鎖およびＨ鎖双方の定常領域を含有することができる。Ｈ鎖定常
領域は通常、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３およびＣＨ４領域を包含する。本明細書に
記述される抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＥを包含する全部のタイ
プの定常領域、ならびにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を包含するいずれ
かのアイソタイプを有する抗体を包含する。定常領域の選択は、部分的に、抗体依存性の
補体および／若しくは細胞媒介性の毒性が望ましいかどうかに依存する。例えば、アイソ
タイプＩｇＧ１およびＩｇＧ３は補体活性を有し、そしてアイソタイプＩｇＧ２およびＩ
ｇＧ４は有しない。抗体（例えばヒト化抗体）が細胞傷害性の活性を表すことが望ましい
場合、定常ドメインは通常、補体を固定する定常ドメインであり、そしてクラスは典型的
にＩｇＧ１である。こうした細胞傷害性の活性が望ましくない場合、定常ドメインはＩｇ
Ｇ２クラスのものでありうる。アイソタイプの選択は脳中への抗体の通過にもまた影響を
及ぼし得る。ヒトアイソタイプＩｇＧ１が好ましい。Ｌ鎖定常領域はλ若しくはκであり
得る。ヒト化抗体は１種以上のクラス若しくはアイソタイプからの配列を含みうる。抗体
は、２本のＬおよび２本のＨ鎖を含有する四量体として、個別のＨ鎖、Ｌ鎖として、Ｆａ
ｂ、Ｆａｂ’ Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖとして、若しくはＨおよびＬ鎖可変ドメインが
スペーサーにより連結されている一本鎖抗体として発現させ得る。
６．組換え抗体の発現
キメラ、ヒト化およびヒト抗体は典型的には組換え発現により製造する。定常領域に作
動可能に連結されたＬおよびＨ鎖可変領域をコードする核酸を発現ベクターに挿入する。
ＬおよびＨ鎖は同一の若しくは異なる発現ベクターにクローン化し得る。免疫グロブリン
鎖をコードするＤＮＡセグメントは、免疫グロブリンポリペプチドの発現を確実にする発
現ベクター（１種若しくは複数）中で制御配列に作動可能に連結する。発現制御配列は、
限定されるものでないが、プロモーター（例えば天然に関連する若しくは異種のプロモー
ター）、シグナル配列、エンハンサー要素および転写終止配列を挙げることができる。好
ましくは、発現制御配列は真核生物宿主細胞を形質転換若しくはトランスフェクトするこ
とが可能なベクター中の真核生物プロモーター系である。ベクターが一旦適切な宿主に組
込まれれば、該宿主を該ヌクレオチド配列の高レベル発現ならびに交差反応する抗体の収
集および精製に適する条件下で維持する。

これらの発現ベクターは、典型的にはエピソーム若しくは宿主の染色体ＤＮＡの複合的
部分のいずれかとして宿主生物体中で複製可能である。一般に、発現ベクターは所望のＤ
ＮＡ配列で形質転換した細胞の検出を可能にするための選択マーカー（例えばアンピシリ
ン耐性、ヒグロマイシン耐性、テトラサイクリン耐性若しくはネオマイシン耐性）を含有
する（例えばＩｔａｋｕｒａら、米国特許第４，７０４，３６２号明細書を参照されたい
）。

大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）は本発明のポリヌクレオチド（例えばＤＮＡ配列）をクローン
化するのにとりわけ有用な１種の原核生物宿主である。使用に適する他の微生物宿主は、
枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）のような杆菌、ならびにサルモネラ属（
Ｓａｌｍｏｎｅｌｌ）、セラチア属（Ｓｅｒｒａｔｉａ）および多様なシュードモナス属
（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）の種のような他の腸内細菌を包含する。これらの原核生物宿
主中で、宿主細胞と適合性の発現制御配列（例えば複製起点）を典型的に含有することが
できる発現ベクターもまた作成し得る。加えて、乳糖プロモーター系、トリプトファン（
ｔｒｐ）プロモーター系、β−ラクタマーゼプロモーター系若しくはファージλからのプ
ロモーター系のようないずれかの数の多様な公知のプロモーターが存在することができる
。プロモーターは、典型的には、場合によってはオペレーター配列とともに発現を制御す
ることができ、そして、転写および翻訳を開始および完了するためのリボソーム結合部位
配列などを有することができる。

酵母のような他の微生物もまた発現に有用である。サッカロミセス属（Ｓａｃｃｈａｒ
ｏｍｙｃｅｓ）が好ましい酵母宿主であり、適するベクターは発現制御配列（例えばプロ
モーター）、複製起点、終止配列などを所望のとおり有する。典型的なプロモーターは３
−ホスホグリセレートキナーゼおよび他の解糖酵素を包含する。誘導可能な酵母のプロモ
ーターは、とりわけ、アルコール脱水素酵素、イソチトクロームＣ、ならびに麦芽糖およ
びガラクトース利用の原因である酵素からのプロモーターを包含する。

微生物に加え、哺乳動物組織細胞培養物もまた本発明のポリペプチドを発現かつ産生す
るのに使用しうる（例えば免疫グロブリン若しくはそれらのフラグメントをコードするポ
リヌクレオチド）。Ｗｉｎｎａｃｋｅｒ、Ｆｒｏｍ Ｇｅｎｅｓ ｔｏ Ｃｌｏｎｅｓ、
ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、ニューヨーク州ニューヨーク（１９８７）を参照された
い。異種タンパク質（例えば無傷の免疫グロブリン）を分泌することが可能な多数の適す
る宿主細胞株が当該技術分野で開発されているために真核生物細胞が実際に好ましく、そ
してＣＨＯ細胞株、多様なＣｏｓ細胞株、ＨｅＬａ細胞、好ましくは骨髄腫細胞株、若し
くは形質転換したＢ細胞、またはハイブリドーマを包含する。好ましくは細胞はヒト以外
である。これらの細胞の発現ベクターは、複製起点、プロモーター、およびエンハンサー
（Ｑｕｅｅｎら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．８９：４９（１９８６））のような発現制御
配列、ならびにリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位および
転写ターミネーター配列のような必要なプロセシング情報部位を包含し得る。好ましい発
現制御配列は、免疫グロブリン遺伝子、ＳＶ４０、アデノウイルス、ウシパピローマウイ
ルス、サイトメガロウイルスなど由来のプロモーターである。Ｃｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．１４８：１１４９（１９９２）を参照されたい。

あるいは、抗体をコードする配列を、トランスジェニック動物のゲノム中への導入およ
び該トランスジェニック動物の乳中でのその後の発現のため導入遺伝子に組込み得る（例
えばＤｅｂｏｅｒら、米国特許第５，７４１，９５７号明細書、Ｒｏｓｅｎ、米国特許第
５，３０４，４８９号明細書、およびＭａｅｄａら、米国特許第５，８４９，９９２号明
細書を参照されたい）。適する導入遺伝子は、カゼイン若しくはβラクトグロブリンのよ
うな乳腺特異的遺伝子からのプロモーターおよびエンハンサーと作動可能な連結のＬおよ
び／若しくはＨ鎖のコーディング配列を包含する。

目的のポリヌクレオチド配列（例えばＨおよびＬ鎖をコードする配列ならびに発現制御
配列）を含有するベクターは、細胞宿主の型に依存して変動する公知の方法により宿主細
胞に移入し得る。例えば、塩化カルシウムトランスフェクションは原核生物細胞に一般に
利用される一方、リン酸カルシウム処理、電気穿孔、リポフェクション、遺伝子銃若しく
はウイルスに基づくトランスフェクションを他の細胞宿主に使用しうる。（全般として、
Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｍａｕｎａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ、第２版、１９８
９）（全部の目的上そっくりそのまま引用することにより組み込まれる）を参照されたい
。哺乳動物細胞を形質転換するのに使用される他の方法は、ポリブレンの使用、プロトプ
ラスト融合、リポソーム、電気穿孔および微小注入を包含する（全般として、Ｓａｍｂｒ
ｏｏｋら、上記を参照されたい）。トランスジェニック動物の製造のため、導入遺伝子を
受精卵に微小注入し得るか、若しくは胚幹細胞のゲノムに組込み得、そしてこうした細胞
の核を除核卵細胞に移入し得る。

ＨおよびＬ鎖を別個の発現ベクター上にクローン化する場合は、該ベクターをコトラン
スフェクトして無傷の免疫グロブリンの発現および集成を得る。一旦発現されれば、抗体
全体、それらの二量体、個々のＬおよびＨ鎖若しくは本発明の他の免疫グロブリンの形態
を、硫酸アンモニウム沈殿、アフィニティーカラム、カラムクロマトグラフィー、ＨＰＬ
Ｃ精製、ゲル電気泳動などを包含する当該技術分野の標準的手順により精製し得る（全般
として、Ｓｃｏｐｅｓ、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ
−Ｖｅｒｌａｇ、ニューヨーク、（１９８２）を参照されたい）。製薬学的使用のために
は最低約９０ないし９５％の均一性の実質的に純粋な免疫グロブリンが好ましく、そして
９８ないし９９％若しくはそれ以上の均一性が最も好ましい。
７．抗体フラグメント
抗体フラグメントもまた本発明の範囲内で企図されている。一態様において、ヒト以外
、キメラおよび／若しくはヒト抗体のフラグメントが提供される。別の態様において、ヒ
ト化抗体のフラグメントが提供される。典型的には、これらのフラグメントは最低１０^７
、およびより典型的には１０^８若しくは１０^９Ｍ^−１の親和性での抗原への特異的結合を
表す。ヒト化抗体フラグメントは、別個のＨ鎖、Ｌ鎖 Ｆａｂ、Ｆａｂ’ Ｆ（ａｂ’）
２、ＦａｂｃおよびＦｖを包含する。フラグメントは組換えＤＮＡ技術、または無傷の免
疫グロブリンの酵素的若しくは化学的分離により製造する。
８．動物モデルでの治療的有効性についての抗体の試験
７〜９月齢のＰＤＡＰＰマウスの群それぞれにＰＢＳ中０．５ｍｇのポリクローナル抗
Ａβ若しくは特異的抗Ａβモノクローナル抗体を注入する。全部の抗体調製物は低エンド
トキシンレベルを有するよう精製する。モノクローナル抗体は、Ａβのフラグメント若し
くはより長い形態のＡβをマウスに注入すること、ハイブリドーマを調製すること、およ
びＡβの他のオーバーラップしないフラグメントに結合することなくＡβの所望のフラグ
メントに特異的に結合する抗体についてハイブリドーマをスクリーニングすることにより
、フラグメントに対して製造し得る。

マウスに、４か月の期間にわたり必要とされるように腹腔内注入して、Ａβ４２若しく
は他の免疫原に対するＥＬＩＳＡにより定義される１／１０００より大きいＥＬＩＳＡ力
価により測定される循環抗体濃度を維持する。力価をモニターし、そして６か月の注入の
終了時にマウスを安楽死させる。組織化学、Ａβレベルおよび毒物学を死後に実施する。
群あたり１０匹のマウスを使用する。
９．消失活性についての抗体のスクリーニング
本発明はまた、アミロイド沈着物若しくはいずれかの他の抗原、または消失活性が望ま
しい関連する生物学的実体の消失における活性についての抗体のスクリーニング方法も提
供する。アミロイド沈着物に対する活性についてスクリーニングするため、アルツハイマ
ー病を伴う患者若しくは特徴的なアルツハイマー病の病理学を有する動物モデルの脳から
の組織サンプルを、小膠細胞のようなＦｃ受容体をもつ貪食細胞、および試験中の抗体と
培地中、ｉｎ ｖｉｔｒｏで接触させる。貪食細胞は初代培養物またはＢＶ−２、Ｃ８−
Ｂ４若しくはＴＨＰ−１のような細胞株であり得る。いくつかの方法においては、成分を
顕微鏡スライドガラス上で合わせて顕微鏡モニタリングを助長する。いくつかの方法にお
いては複数の反応をマイクロタイター皿のウェル中で同時に実施する。こうした形式にお
いては、別個の小型顕微鏡スライドガラスを別個のウェル中に据付け得るか、若しくはＡ
βのＥＬＩＳＡ検出のような顕微鏡によらない検出形式を使用し得る。好ましくは、反応
が進行する前の基礎値から出発して、および反応の間の１個若しくはそれ以上の試験値の
ｉｎ ｖｉｔｒｏ反応混合物中のアミロイド沈着物の量の一連の測定を行う。抗原は例え
ばＡβ若しくはアミロイド斑の他成分に対する蛍光標識した抗体で染色することにより検
出し得る。染色に使用される抗体は消失活性について試験されている抗体と同一であって
も若しくはなくてもよい。アミロイド沈着物の反応の間の基礎に関する低下は、試験中の
抗体が消失活性を有することを示す。こうした抗体は、アルツハイマー病および他のアミ
ロイド原性疾患の予防若しくは治療において有用であることがありそうである。

類似の方法を使用して、他の型の生物学的実体の消失における活性について抗体をスク
リーニングし得る。該アッセイを使用して事実上いかなる種類の生物学的実体に対する消
失活性も検出し得る。典型的には、該生物学的実体はヒト若しくは動物の疾患で何らかの
役割を有する。生物学的実体は組織サンプルとして若しくは単離された形態で提供され得
る。組織サンプルとして提供される場合、該組織サンプルは、好ましくは、該組織サンプ
ルの成分への容易な到達を可能にしかつ固定に付帯する成分のコンホメーションを混乱さ
せることを回避するために固定されない。本アッセイで試験し得る組織サンプルの例は癌
組織、前癌組織、疣贅若しくは母斑のような良性増殖を含有する組織、病原性微生物に感
染した組織、炎症細胞が浸潤した組織、細胞間に病理学的マトリックスをもつ組織（例え
ば線維素性心膜炎）、異常な抗原をもつ組織および瘢痕組織を包含する。使用し得る単離
された生物学的実体の例は、Ａβ、ウイルス抗原若しくはウイルス、プロテオグリカン、
他の病原性微生物の抗原、腫瘍抗原および接着分子を包含する。こうした抗原は、とりわ
け、天然の供給源、組換え発現若しくは化学合成から得ることができる。組織サンプル若
しくは単離された生物学的実体を、単球若しくは小膠細胞のようなＦｃ受容体をもつ貪食
細胞および試験されるべき抗体と培地中で接触させる。抗体は試験中の生物学的実体若し
くは該実体に関連する抗原に向け得る。後者の状況において、目的は、該生物学的実体が
該抗原とともに代償性に貪食されるかどうかを試験することである。通常、とは言え必ず
しもではなく、抗体および生物学的実体（ときに関連抗原を伴う）は貪食細胞を添加する
前に相互と接触させる。培地中に残存する生物学的実体および／若しくは関連抗原の濃度
を、存在する場合はその後モニターする。培地中の抗原若しくは関連する生物学的実体の
量若しくは濃度の低下は、該抗体が貪食細胞とともに該抗原および／若しくは関連する生
物学的実体に対する消失応答を有することを示す（例えば実施例ＩＶを参照されたい）。
１０．変えられたエフェクター機能を有するキメラ／ヒト化抗体
定常領域（Ｆｃ領域）を含んでなる本発明の上述された抗体について、該分子のエフェ
クター機能を変えることもまた望ましいことがある。一般に、抗体のエフェクター機能は
、多様なエフェクター分子、例えば補体タンパク質若しくはＦｃ受容体への結合を媒介し
得る該分子の定常すなわちＦｃ領域中に存する。Ｆｃ領域への補体の結合は、例えば細胞
病原体のオプソニン作用および溶解ならびに炎症応答の活性化において重要である。例え
ばエフェクター細胞の表面上のＦｃ受容体への抗体の結合は、例えば抗体で被覆された病
原体若しくは粒子の貪食および破壊、免疫複合体の消失、キラー細胞による抗体で被覆さ
れた標的細胞の溶解（すなわち抗体依存性の細胞媒介性の細胞傷害性、すなわちＡＤＣＣ
）、炎症メディエーターの放出、抗体の胎盤通過、ならびに免疫グロブリン産生の制御を
包含する多数の重要かつ多彩な生物学的応答を誘発し得る。

従って、特定の治療的若しくは診断的応用に依存して、前述の免疫機能若しくは選択し
た免疫機能のみが望ましいことがある。抗体のＦｃ領域を変えることにより、診断および
治療における有益な効果を伴い免疫系の多様な反応を高める若しくは抑制することを包含
する該分子のエフェクター機能の多様な局面が達成される。

ある型のＦｃ受容体とのみ反応する本発明の抗体を製造し得、例えば、本発明の抗体は
、ある種のＦｃ受容体にのみ結合するか、または、所望の場合は該抗体のＦｃ領域に位置
するＦｃ受容体結合部位の欠失若しくは変化によりＦｃ受容体結合を完全に欠くように改
変し得る。本発明の抗体のＦｃ領域の他の所望の変化の目録を下に作成する。典型的には
、エフェクター機能の所望の変化を達成するために（例えばＩｇＧ抗体の）Ｆｃ領域のど
のアミノ酸残基（１個若しくは複数）を（例えばアミノ酸置換により）変えるかを示すの
に、Ｋａｂａｔの番号付け体系を使用する。該番号付け体系はまた、例えばマウス抗体で
観察される所望のエフェクター機能をその後本発明のヒト、ヒト化若しくはキメラ抗体に
系統的に工作し得るように種を横断して抗体を比較するのにも使用する。

例えば、抗体（例えばＩｇＧ抗体）を、Ｆｃ受容体（例えばヒト単球上のＦｃ受容体（
ＦｃγＲＩ））への強固な、中間の若しくは弱い結合を表すことが見出されたものにグル
ープ分けし得ることが観察されている。これらの異なる親和性の群中でのアミノ酸配列の
比較により、ヒンジ連結領域中の単球結合部位（Ｌｅｕ２３４−Ｓｅｒ２３９）が同定さ
れた。さらに、ヒトＦｃγＲＩ受容体は単量体としてのヒトＩｇＧ１およびマウスＩｇＧ
２ａを結合するが、しかしマウスＩｇＧ２ｂの結合は１００倍より弱い。ヒンジ連結領域
でのこれらのタンパク質の配列の比較は、強結合体中での配列２３４ないし２３８すなわ
ちＬｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏがマウスγ２ｂすなわち弱結合体中でＬｅｕ
−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏになることを示す。従って、低下されたＦｃγＩ受容
体結合が望ましい場合はヒト抗体のヒンジ配列中の対応する変化を行い得る。他の変化を
行って同一若しくは類似の結果を達成し得ることが理解される。例えば、ＦｃγＲＩ結合
の親和性は、指定された残基をその側鎖に不適切な官能基を有する残基で置換することに
より、あるいは荷電した官能基（例えばＧｌｕ若しくはＡｓｐ）または例えば芳香族非極
性残基（例えばＰｈｅ、Ｔｙｒ若しくはＴｒｐ）を導入することにより変えることができ
る。

多様な免疫グロブリン間の配列の相同性を考えれば、これらの変化はネズミ、ヒトおよ
びラットの系に等しく適用し得る。ヒトＦｃγＲＩ受容体に結合するヒトＩｇＧ３につい
てＬｅｕ２３５をＧｌｕに変えることが該受容体に対する該変異体の相互作用を破壊する
ことが示されている。従って、適切な突然変異を作成することにより本受容体の結合部位
のスイッチをオンまたはオフに切り替え得る。

ヒンジ連結領域中の隣接する若しくは近い部位の突然変異（例えば残基２３４、２３６
若しくは２３７のＡｌａによる置換）は、残基２３４、２３５、２３６および２３７の変
化がＦｃγＲＩ受容体の親和性に少なくとも影響を及ぼすことを示す。従って、本発明の
抗体は、未改変の抗体と比較してＦｃγＲＩに対する変えられた結合親和性をもつ変えら
れたＦｃ領域もまた有し得る。こうした抗体は、便宜的にアミノ酸残基２３４、２３５、
２３６若しくは２３７に改変を有する。

他のＦｃ受容体に対する親和性は、多様な方法で免疫応答を制御するために類似のアプ
ローチにより変えることができる。

さらなる一例として、補体のＣ１成分の結合後のＩｇＧ抗体の溶解特性を変えることが
できる。

補体系の第一の成分Ｃ１は、一緒に強固に結合するＣ１ｑ、Ｃ１ｒおよびＣ１ｓとして
知られる３種のタンパク質を含んでなる。Ｃ１ｑが該３種のタンパク質の複合体の抗体へ
の結合の原因であることが示されている。

従って、Ｈ鎖のアミノ酸残基３１８、３２０および３２２の最低１個が異なる側鎖を有
する残基に変えられている変えられたＣＨ２ドメインをもつ抗体を提供することにより、
抗体のＣ１ｑ結合活性を変えることができる。Ｈ鎖中の残基の番号付けはＥＵインデック
ス（Ｋａｂａｔら、上記を参照されたい）のものである。抗体への特異的Ｃ１ｑ結合を変
える（例えば低下若しくは根絶する）ための他の適する変化は、残基３１８（Ｇｌｕ）、
３２０（Ｌｙｓ）および３２２（Ｌｙｓ）のいずれか１つをＡｌａに変えることを包含す
る。

さらに、これらの残基で突然変異を作成することにより、残基３１８が水素結合する側
鎖を有しかつ残基３２０および３２２の双方が正に荷電した側鎖を有する限りはＣ１ｑ結
合が保持されることが示された。

Ｃ１ｑ結合活性は、その側鎖上に不適切な官能性を有する残基で３種の指定された残基
のいずれか１つを置換することにより根絶し得る。Ｃ１ｑ結合を根絶するためにイオン性
残基のみをＡｌａで置換することは必要でない。Ｃ１ｑ結合を根絶するために該３残基の
いずれか１つの代わりにＧｌｙ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ若しくはＶａｌのような他のアルキル置
換された非イオン性残基、またはＰｈｅ、Ｔｙｒ、ＴｒｐおよびＰｒｏのような芳香族非
極性残基を使用することもまた可能である。加えて、Ｃ１ｑ結合活性を根絶するために残
基３２０および３２２（しかし３１８でない）の代わりにＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓおよび
Ｍｅｔのような極性の非イオン性残基を使用することもまた可能である。

イオン性若しくは非イオン性極性残基上の側鎖が、Ｇｌｕ残基により形成される結合に
類似の様式で水素結合を形成することが可能であることができることもまた言及される。
従って、極性残基による３１８（Ｇｌｕ）残基の置換はＣ１ｑ結合活性を改変するがしか
し根絶しないとみられる。

残基２９７（Ａｓｎ）をＡｌａで置換することは、Ｃｌｑに対する親和性をわずかにの
み低下（約３倍より弱い）させつつ溶解活性の除去をもたらすこともまた既知である。こ
の変化は、補体活性に必要とされるグリコシル化部位および炭水化物の存在を破壊する。
この部位でのいかなる他の置換もまた該グリコシル化部位を破壊することができる。

本発明はまた、改変されたヒンジ領域を有する、変えられたエフェクター機能を有する
抗体も提供する。該改変されたヒンジ領域は、ＣＨ１ドメインの抗体クラス若しくはサブ
クラスと異なる抗体クラス若しくはサブクラスの抗体に由来する完全なヒンジ領域を含み
うる。例えば、クラスＩｇＧ抗体の定常ドメイン（ＣＨ１）をクラスＩｇＧ４抗体のヒン
ジ領域に結合し得る。あるいは、新たなヒンジ領域は、天然のヒンジの一部、若しくは反
復配列中の各単位が天然のヒンジ領域由来である反復単位を含みうる。一例において、１
個若しくはそれ以上のシステイン残基をアラニンのような中性残基に転化すること、若し
くは適して配置された残基をシステイン残基に転化することにより天然のヒンジ領域を変
える。こうした変化は技術に認識されるタンパク質化学および好ましくは本明細書に記述
されるところの遺伝子工学技術を使用して実施する。

本発明の一態様において、抗体のヒンジ領域中のシステイン残基の数を例えば１システ
イン残基まで減少させる。この改変は、抗体、例えば二特異性抗体分子およびＦｃ部分が
エフェクター若しくはレポーター分子により置換されている抗体分子の集成を助長すると
いう利点を有する。単一のジスルフィド結合を形成することのみが必要であるからである
。この改変はまた、例えば化学的手段により直接若しくは間接的にのいずれかで別のヒン
ジ領域またはエフェクター若しくはレポーター分子のいずれかにヒンジ領域を結合するた
めの特異的標的も提供する。

対照的に、抗体のヒンジ領域中のシステイン残基の数を、例えば通常存在するシステイ
ン残基の数より最低１以上増大させる。システイン残基の数を増大させることを使用して
隣接するヒンジ間の相互作用を安定化し得る。本改変の別の利点は、変えられた抗体にエ
フェクター若しくはレポーター分子、例えば放射標識を結合するためのシステインのチオ
ール基の使用をそれが助長することである。

従って、本発明は、変えられたエフェクター機能を達成するための抗体クラス、とりわ
けＩｇＧクラス間のヒンジ領域の交換、および／またはヒンジ領域中のシステイン残基の
数の増大若しくは減少を提供する（例えば米国特許第５，６７７，４２５号明細書（明ら
かに本明細書に組込まれる）を参照されたい）。変えられた抗体のエフェクター機能の測
定は、本明細書に記述されるアッセイ若しくは他の技術に認識された技術を使用して行う
。

重要なことに、結果として生じる抗体を１種若しくはそれ以上のアッセイにかけて出発
抗体に比較しての生物学的活性のいかなる変化も評価し得る。例えば、補体若しくはＦｃ
受容体を結合する変えられたＦｃ領域をもつ抗体の能力を、本明細書に開示されるアッセ
イならびにいずれかの技術に認識されたアッセイを使用して評価し得る。

本発明の抗体の製造は、本明細書に記述される技術ならびに当業者に既知の技術を包含
するいずれかの適する技術により実施する。例えば、例えば抗体の適切な定常ドメイン、
例えばＦｃ領域すなわちＣＨ２および／若しくはＣＨ３ドメイン（１個若しくは複数）の
一部若しくは全部を形成しかつ適切な変えられた残基（１個若しくは複数）を包含する適
切なタンパク質配列を合成し得、そしてその後抗体分子中の適切な場所に化学的に結合し
得る。

好ましくは、変えられた抗体を製造するために遺伝子工学技術を使用する。好ましい技
術は、例えば、ＩｇＧ Ｈ鎖の少なくとも一部、例えばＦｃすなわち定常領域（例えばＣ
Ｈ２および／若しくはＣＨ３）をコードするＤＮＡ配列が１個若しくはそれ以上の残基で
変えられているようなポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）での使用のための適するプライマ
ーを製造することを包含する。該セグメントをその後、抗体の残存する部分、例えば抗体
の可変領域、および細胞中での発現のための必要とされる制御配列に作動可能に連結し得
る。

本発明はまた、細胞株を形質転換するために使用されるベクター、形質転換ベクターの
製造において使用されるベクター、形質転換ベクターで形質転換された細胞株、調製ベク
ターで形質転換された細胞株、およびそれらの製造方法も包含する。

好ましくは、変えられたＦｃ領域をもつ（すなわち変えられたエフェクター機能の）抗
体を製造するために形質転換される細胞株は、不死化哺乳動物細胞株（例えばＣＨＯ細胞
）である。

変えられたＦｃ領域をもつ抗体を製造するのに使用される細胞株は好ましくは哺乳動物
細胞株であるとは言え、細菌細胞株若しくは酵母細胞株のようないずれかの他の適する細
胞株をあるいは使用しうる。
Ｂ．免疫学的および治療的剤をコードする核酸
アミロイド沈着物に対する免疫応答は、抗体および受動免疫に使用されるそれらの成分
鎖をコードする核酸の投与によってもまた誘導し得る。こうした核酸はＤＮＡ若しくはＲ
ＮＡであり得る。免疫原をコードする核酸セグメントは、典型的に、患者の意図される標
的細胞中のＤＮＡセグメントの発現を可能にするプロモーターおよびエンハンサーのよう
な制御配列に連結される。免疫応答の誘導のため望ましいところの血液細胞中での発現の
ため、Ｌ若しくはＨ鎖免疫グロブリン遺伝子からのプロモーターおよびエンハンサー要素
、またはＣＭＶ主中初期プロモーターおよびエンハンサーが発現に導くのに適する。連結
された制御配列およびコーディング配列はしばしば１ベクターにクローン化される。二本
鎖抗体の投与のためには、該２本の鎖を同一若しくは別個のベクターにクローン化し得る
。

レトロウイルス系（例えばＬａｗｒｉｅとＴｕｍｉｎ、Ｃｕｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔ
．Ｄｅｖｅｌｏｐ．３：１０２−１０９（１９９３）を参照されたい）；アデノウイルス
ベクター（例えばＢｅｔｔら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６７：５９１１（１９９３）を参照され
たい）；アデノ随伴ウイルスベクター（例えばＺｈｏｕら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７９
：１８６７（１９９４）を参照されたい）、ワクシニアウイルスおよび禽痘ウイルスを包
含するポックス科（ｐｏｘ ｆａｍｉｌｙ）からのウイルスベクター、シンドビスウイル
スおよびセムリキ森林ウイルス（例えばＤｕｂｅｎｓｋｙら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７０：５
０８（１９９６）を参照されたい）、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（Ｊｏｈｎｓｔｏｎら
、米国特許第５，６４３，５７６号明細書を参照されたい）由来のもののようなアルファ
ウイルス属、ならびに水疱性口内炎ウイルス（Ｒｏｓｅ、第ＷＯ ９６／３４６２５号明
細書を参照されたい）のようなラブドウイルス、ならびにパピローマウイルス（Ｏｈｅら
、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ６：３２５（１９９５）；Ｗｏｏら、第ＷＯ
９４／１２６２９号明細書、およびＸｉａｏとＢｒａｎｄｓｍａ、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａ
ｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．２４、２６３０−２６２（１９９６））からのウイルスベクターを包
含する多数のウイルスベクター系が利用可能である。

免疫原をコードするＤＮＡ若しくはそれを含有するベクターをリポソーム中にパッケー
ジングし得る。適する脂質および関連する類似物は、Ｅｐｐｓｔｅｉｎら、米国特許第５
，２０８，０３６号明細書、Ｆｅｌｇｎｅｒら、米国特許第５，２６４，６１８号明細書
、Ｒｏｓｅ、米国特許第５，２７９，８３３号明細書およびＥｐａｎｄら、米国特許第５
，２８３，１８５号明細書により記述されている。免疫原をコードするベクターおよびＤ
ＮＡはまた、微粒子状担体（それらの例はポリメチルメタクリレートポリマーならびにポ
リラクチドおよびポリ（ラクチドコグリコリド）を包含する）に吸着若しくはそれらと会
合させ得る。例えばＭｃＧｅｅら、Ｊ．Ｍｉｃｒｏ Ｅｎｃａｐ．（１９９６）を参照さ
れたい。

遺伝子治療ベクター若しくは裸のポリペプチド（例えばＤＮＡ）は、典型的には全身投
与（例えば静脈内、腹腔内、鼻、胃、皮内、筋肉内、皮下若しくは頭蓋内注入）または局
所適用（例えばＡｎｄｅｒｓｏｎら、米国特許第５，３９９，３４６号明細書を参照され
たい）による個々の患者への投与によりｉｎ ｖｉｖｏで送達し得る。「裸のポリヌクレ
オチド」という用語はコロイド状物質と複合体形成されていないポリヌクレオチドを指す
。裸のポリヌクレオチドはときにプラスミドベクター中にクローン化される。こうしたベ
クターはブピバカイン（Ａｔｔａｒｄｏら、米国特許第５，５９３，９７０号明細書）の
ような促進剤をさらに包含し得る。ＤＮＡは遺伝子銃を使用してもまた投与し得る。Ｘｉ
ａｏとＢｒａｎｄｓｍａ、上記を参照されたい。免疫原をコードするＤＮＡを極微の金属
ビーズの表面上に沈殿させる。微小発射体は衝撃波若しくは膨張ヘリウムガスで加速され
、そして数細胞層の深さまで組織に浸透する。例えば、Ａｇａｃｅｔｕｓ，Ｉｎｃ．、ウ
ィスコンシン州ミドルトンにより製造されるＡｃｃｅｌ^ＴＭ遺伝子送達装置が適する。あ
るいは、裸のＤＮＡは、化学的若しくは機械的刺激を用いて皮膚上にＤＮＡを単にスポッ
トすることにより、皮膚を通して血流中に進め得る（Ｈｏｗｅｌｌら、第ＷＯ ９５／０
５８５３号明細書を参照されたい）。

さらなる一変形において、免疫原をコードするベクターは、個々の患者から外植された
細胞（例えばリンパ球、骨髄吸引物、組織生検）若しくは普遍的ドナーの造血幹細胞のよ
うな細胞にｅｘ ｖｉｖｏで送達し得、次いで通常はベクターを組込んだ細胞についての
選択後に該細胞を患者に再移植し得る。
ＩＩ．予防および治療方法
本発明は、とりわけ、例えばアミロイド原性疾患の予防若しくは処置のための、患者に
おいて、患者における有益な治療応答（例えばＡβの食作用の誘導、斑負荷の低下、斑形
成の阻害、神経炎性ジストロフィーの低下、認識機能の改善および／または認識低下の逆
転、治療若しくは予防）を生成させる条件下での、Ａβ内の特定のエピトープに対する治
療的免疫学的試薬（例えばヒト化免疫グロブリン）の該患者への投与によるアルツハイマ
ー病および他のアミロイド原性疾患の処置に向けられる。本発明はまた、アミロイド原性
疾患の処置若しくは予防のための薬品の製造における開示される免疫学的試薬（例えばヒ
ト化免疫グロブリン）の使用にも向けられる。

本明細書で使用されるところの「処置」という用語は、疾患、疾患の症状若しくは疾患
に対する素因を治癒、回復、軽減、緩和、変化、治療、改善、改良若しくはそれらに影響
する目的で、疾患、疾患の症状若しくは疾患に対する素因を有する患者への治療薬の適用
若しくは投与、または患者からの単離した組織若しくは細胞株への治療薬の適用若しくは
投与と定義する。

一局面において、本発明は患者の脳中のＡβのアミロイド沈着物と関連する疾患の予防
若しくは治療方法を提供する。こうした疾患はアルツハイマー病、ダウン症候群および認
識障害を包含する。後者はアミロイド原性疾患の他の特徴を伴い若しくは伴わずに発生し
得る。本発明のいくつかの方法は、アミロイド沈着物の１成分に特異的に結合する抗体の
有効投薬量を患者に投与することを伴う。こうした方法はヒト患者でアルツハイマー病を
予防若しくは治療するためにとりわけ有用である。例示的方法はＡβに結合する抗体の有
効投薬量を投与することを伴う。好ましい方法は、Ａβの残基１−１０内の１エピトープ
に特異的に結合する抗体、例えばＡβの残基１−３内の１エピトープに特異的に結合する
抗体、Ａβの残基１−４内の１エピトープに特異的に結合する抗体、Ａβの残基１−５内
の１エピトープに特異的に結合する抗体、Ａβの残基１−６内の１エピトープに特異的に
結合する抗体、Ａβの残基１−７内の１エピトープに特異的に結合する抗体、若しくはＡ
βの残基３−７内の１エピトープに特異的に結合する抗体の有効投薬量を投与することを
伴う。なお別の局面において、本発明は、Ａβの遊離のＮ末端残基を含んでなる１エピト
ープに結合する抗体を投与することを特徴とする。なお別の局面において、本発明は、Ａ
βの１−１０（ここでＡβの残基１および／若しくは残基７はアスパラギン酸である）の
残基内の１エピトープに結合する抗体を投与することを特徴とする。なお別の局面におい
て、本発明は、完全長のアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）に結合することなくＡβ
ペプチドに特異的に結合する抗体を投与することを特徴とする。なお別の局面において、
該抗体のアイソタイプはヒトＩｇＧ１である。

なお別の局面において、本発明は、患者中のアミロイド沈着物に結合しかつアミロイド
沈着物に対する消失応答を誘導する抗体を投与することを特徴とする。例えば、こうした
消失応答はＦｃ受容体に媒介される食作用により遂げ得る。

本発明の治療薬は、典型的には望ましくない汚染物質から実質的に純粋である。これは
、該剤が典型的には最低約５０％ｗ／ｗ（重量／重量）純度であり、ならびに妨害するタ
ンパク質および汚染物質を実質的に含まないことを意味している。ときに、該剤は最低約
８０％ｗ／ｗ、およびより好ましくは最低９０若しくは約９５％ｗ／ｗ純度である。しか
しながら、慣習的タンパク質精製技術を使用して最低９９％ｗ／ｗの均一なペプチドを得
ることができる。

該方法は無症候性患者および疾患の症状を現在示している者双方に使用し得る。こうし
た方法で使用される抗体はヒト、ヒト化、キメラ若しくはヒト以外の抗体またはそれらの
フラグメント（例えば抗原結合フラグメント）であり得、そして、本明細書に記述される
とおりモノクローナル若しくはポリクローナルであり得る。なお別の局面において、本発
明は、抗体で治療されるべき患者であり得る、Ａβペプチドで免疫したヒトから調製した
抗体を投与することを特徴とする。

別の局面において、本発明は抗体を製薬学的担体とともに製薬学的組成物として投与す
ることを特徴とする。あるいは、該抗体は、最低１種の抗体鎖をコードするポリヌクレオ
チドを投与することにより患者に投与し得る。該ポリヌクレオチドは患者中で発現されて
抗体鎖を産生する。場合によっては、該ポリヌクレオチドは抗体のＨおよびＬ鎖をコード
する。該ポリヌクレオチドは患者中で発現されてＨおよびＬ鎖を産生する。例示的態様に
おいて、患者を該患者の血液中の投与された抗体のレベルについてモニターする。

本発明は従って、神経病理学および若干の患者においてはアルツハイマー病と関連する
認識障害を予防若しくは軽減するための治療レジメンに対する長年の必要性を満たす。
Ａ．処置の影響を受けやすい患者
処置の影響を受けやすい患者は、疾患の危険にさらされているがしかし症状を示してい
ない個体、ならびに症状を現在示している患者を包含する。アルツハイマー病の場合、彼
若しくは彼女が十分に長く生きる場合は事実上誰でもアルツハイマー病に罹る危険にさら
されている。従って、本方法は、被験体患者の危険のいかなる評価に対する必要性も伴わ
ずに一般集団に予防的に投与し得る。本方法は、アルツハイマー病の既知の遺伝的危険を
有する個体にとりわけ有用である。こうした個体は、本疾患を経験した親族を有する者、
および遺伝子若しくは生化学的マーカーの分析によりその危険が決定される者を包含する
。アルツハイマー病に対する危険の遺伝子マーカーは、ＡＰＰ遺伝子の突然変異、とりわ
けそれぞれハーディ型およびスウェーデン型突然変異と称される位置７１７、ならびに位
置６７０および６７１の突然変異を包含する（Ｈａｒｄｙ、上記を参照されたい）。危険
の他のマーカーは、プレセニリン遺伝子ＰＳ１およびＰＳ２、ならびにＡｐｏＥ４の突然
変異、ＡＤの家族歴、高コレステロール血症若しくはアテローム硬化症である。現在アル
ツハイマー病に罹っている個体は、特徴的な痴呆、ならびに上述された危険因子の存在か
ら認識し得る。加えて、多数の診断検査がＡＤを有する個体を同定するために利用可能で
ある。これらはＣＳＦ τおよびＡβ４２レベルの測定を包含する。上昇したτおよび減
少したＡβ４２レベルはＡＤの存在を知らせる。アルツハイマー病に罹っている個体は、
実施例の節で論考されるところのＡＤＲＤＡ基準によってもまた診断し得る。

無症候性の患者において、処置はいかなる年齢（例えば１０歳、２０歳、３０歳）でも
開始し得る。しかしながら通常は、患者が４０歳、５０歳、６０歳若しくは７０歳に達す
るまで処置を開始することは必要でない。処置は典型的にある期間にわたる複数の投薬量
を伴う。処置は抗体レベルを長期間アッセイすることによりモニターし得る。応答が下落
する場合は追加免疫投薬量を指示する。潜在的ダウン症候群の患者の場合、処置は、出生
前に母親に治療薬を投与することにより、若しくは出生直後に開始し得る。
Ｂ．処置レジメンおよび投薬量
予防的応用においては、製薬学的組成物若しくは薬品を、アルツハイマー病に感受性の
、そうでなければその危険にさらされている患者に、危険を排除若しくは縮小する、重篤
度を小さくする、または疾患の生化学的、組織学的および／若しくは行動上の症状を包含
する該疾患の発症、その合併症ならびに該疾患の進行の間に現れる中間的な病理学的表現
型を遅らせるのに十分な量で投与する。治療的応用においては、組成物若しくは薬品を、
こうした疾患が疑われる、若しくは既に罹っている患者に、その合併症を包含する疾患の
症状（生化学的、組織学的および／若しくは行動上の）、ならびに該疾患の進行中の中間
的な病理学的表現型を治癒若しくは少なくとも部分的に停止するのに十分な量で投与する
。

いくつかの方法において、剤の投与は、特徴的なアルツハイマー病の病状を未だ発症し
ていない患者における筋認識（ｍｙｏｃｏｇｎｉｔｉｖｅ）障害を低下若しくは排除する
。治療的若しくは予防的処置を達成するのに十分な量を治療上若しくは予防上有効な用量
と定義する。予防的および治療的双方のレジメンにおいて、剤は通常、十分な免疫応答が
達成されるまでいくつかの投薬量で投与する。「免疫応答」若しくは「免疫学的応答」と
いう用語は、レシピエント被験体における抗原に向けられた体液性（抗体媒介性）および
／または細胞性（抗原特異的Ｔ細胞若しくはそれらの分泌産物により媒介される）応答の
発生を包含する。こうした応答は能動的応答であり得る（すなわち免疫原の投与により誘
導し得る）か、または受動的応答であり得る（すなわち免疫グロブリン若しくは抗体若し
くは薬物刺激されたＴ細胞の投与により誘導し得る）。

「免疫原性の剤」若しくは「免疫原」は、場合によってはアジュバントとともにの哺乳
動物への投与に際してそれ自身に対する免疫学的応答を誘導することが可能である。典型
的には、免疫応答をモニターし、そして免疫応答が衰え始めた場合に反復投薬量を与える
。

上述された状態の処置のための本発明の組成物の有効用量は、投与手段、標的部位、患
者の生理学的状態、患者がヒトであるか若しくは動物であるか、投与されている他の薬品
、および処置が予防的であるか若しくは治療的であるかを包含する多くの異なる因子に依
存して変動する。通常、患者はヒトであるがしかしトランスジェニック哺乳動物を包含す
るヒト以外の哺乳動物もまた治療し得る。処置投薬量は安全性および有効性を至適化する
ように滴定されるべきである。

抗体での受動免疫のためには、投薬量は約０．０００１から１００ｍｇ／ｋｇまで、お
よびより通常は０．０１ないし５ｍｇ／ｋｇ宿主体重の範囲にわたる。例えば、投薬量は
１ｍｇ／ｋｇ体重若しくは１０ｍｇ／ｋｇ体重、または１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲内、好
ましくは最低１ｍｇ／ｋｇであり得る。被験体には、こうした用量を毎日、１日おき、毎
週、若しくは経験的分析により決められるいずれかの他のスケジュールに従って投与し得
る。例示的一処置は例えば最低６か月の長期にわたる複数の投薬量の投与を伴う。付加的
な例示的処置レジメンは２週ごとあたり１回若しくは月１回若しくは３ないし６か月ごと
に１回の投与を伴う。例示的投薬スケジュールは、連日１〜１０ｍｇ／ｋｇ若しくは１５
ｍｇ／ｋｇ、１日おきに３０ｍｇ／ｋｇ、または毎週６０ｍｇ／ｋｇを包含する。いくつ
かの方法においては、異なる結合特異性をもつ２種若しくはそれ以上のモノクローナル抗
体を同時に投与し、この場合投与される各抗体の投薬量は示される範囲内にある。

抗体は通常複数の機会に投与する。単一投薬量間の間隔は週単位、月単位若しくは年単
位であり得る。間隔はまた患者中のＡβに対する抗体の血液レベルを測定することにより
示されるように不規則でもあり得る。いくつかの方法においては、１〜１０００μｇ／ｍ
ｌおよびいくつかの方法においては２５〜３００μｇ／ｍｌの血漿抗体濃度を達成するよ
うに投薬量を調節する。あるいは、抗体は徐放性製剤として投与し得、この場合より少な
く頻繁な投与が必要とされる。投薬量および頻度は患者での抗体の半減期に依存して変動
する。一般にヒト抗体が最長の半減期を示し、次いでヒト化抗体、キメラ抗体およびヒト
以外の抗体である。

投薬量および投与頻度は、該処置が予防的であるか若しくは治療的であるかに依存して
変動し得る。予防的応用において、本抗体若しくはそれらのカクテルを含有する組成物を
、患者の抵抗性を高めるため、既に疾患状態にはなっていない患者に投与する。こうした
量は「予防的有効用量」であると定義する。本使用において、正確な量は再度、患者の健
康状態および全身免疫に依存するが、しかし一般には投与あたり０．１から２５ｍｇまで
、とりわけ投与あたり０．５ないし２．５ｍｇの範囲にわたる。比較的低投薬量を長期に
わたり比較的頻繁でない間隔で投与する。若干の患者は彼らの生涯の残りの間処置を受け
続ける。

治療的応用においては、疾患の進行が低下若しくは停止されるまで、および好ましくは
患者が疾患の症状の部分的若しくは完全な改善を示すまで、比較的短い間隔で比較的高投
薬量（例えば投与あたり約１から２００ｍｇまでの抗体、５から２５ｍｇまでの投薬量を
より一般的に使用する）がときに必要とされる。その後は患者に予防的レジメンを投与し
得る。

抗体をコードする核酸の用量は患者あたり約１０ｎｇから１ｇ、１００ｎｇないし１０
０ｍｇ、１μｇないし１０ｍｇ、若しくは３０〜３００μｇのＤＮＡの範囲にわたる。感
染性ウイルスベクターの用量は投与あたり１０〜１００から若しくはそれ以上のビリオン
で変動する。

治療薬は予防的および／若しくは治療的処置のため非経口、局所、静脈内、経口、皮下
、動脈内、頭蓋内、腹腔内、鼻内若しくは筋肉内の手段により投与し得る。免疫原性の剤
の最も典型的な投与経路は皮下であるとは言え、他の経路が等しく有効であり得る。次に
最も一般的な経路は筋肉内注入である。この型の注入は最も典型的には腕若しくは脚の筋
肉で実施する。いくつかの方法においては、沈着物が蓄積している特定の組織に剤を直接
注入する（例えば頭蓋内注入）。筋肉内注入若しくは静脈内注入が抗体の投与に好ましい
。いくつかの方法においては、特定の治療的抗体を頭蓋に直接注入する。いくつかの方法
において、抗体は徐放性組成物若しくはメディパッド［Ｍｅｄｉｐａｄ］^ＴＭ装置のよう
な装置として投与する。

本発明の剤は、場合によっては、アミロイド原性疾患の処置で少なくとも部分的に有効
である他の剤とともに投与し得る。アミロイド沈着物が脳中に存在するアルツハイマー病
およびダウン症候群の場合、本発明の剤は、血液脳関門を横断する本発明の剤の通過を増
大させる他の剤とともにもまた投与し得る。
Ｃ．製薬学的組成物
本発明の剤は、しばしば、有効な治療薬、すなわち、および多様な他の製薬学的に許容
できる成分を含んでなる製薬学的組成物として投与される。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐ
ｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ（第１５版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉ
ｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、ペンシルバニア州イーストン（１９８０））を参照されたい。好
ましい形態は意図される投与様式および治療的応用に依存する。組成物は、所望の製剤に
依存して、動物若しくはヒトの投与のための製薬学的組成物を処方するのに一般に使用さ
れるベヒクルと定義される製薬学的に許容できる非毒性の担体若しくは希釈剤もまた包含
し得る。希釈剤は組合せの生物学的活性に影響を及ぼさないように選択する。こうした希
釈剤の例は蒸留水、生理学的リン酸緩衝生理的食塩水、リンゲル液、ブドウ糖液、および
ハンクス液である。加えて、製薬学的組成物若しくは製剤は他の担体、補助物質若しくは
非毒性の非治療的非免疫原性安定剤なども包含しうる。

製薬学的組成物はまた、タンパク質、キトサンのような多糖、ポリ乳酸、ポリグリコー
ル酸および（ラテックス官能性化セファロース（ＴＭ）、アガロース、セルロースなどの
ような）コポリマー、ポリマー性アミノ酸、アミノ酸コポリマーならびに（油滴若しくは
リポソームのような）脂質凝集物のような大型のゆっくりと代謝される巨大分子も包含し
得る。加えて、これらの担体は免疫刺激剤（すなわちアジュバント）として機能し得る。

非経口投与のために、本発明の剤は水、油、生理的食塩水、グリセロール若しくはエタ
ノールのような滅菌の液体であり得る製薬学的担体を含む生理学的に許容できる希釈剤中
の物質の溶液若しくは懸濁液の注入可能な投薬量として投与し得る。加えて、湿潤剤若し
くは乳化剤、界面活性剤、ｐＨ緩衝物質などのような補助物質が組成物中に存在し得る。
製薬学的組成物の他の成分は石油、動物、植物若しくは合成起源のもの、例えばラッカセ
イ油、ダイズ油および鉱物油である。一般に、プロピレングリコール若しくはポリエチレ
ングリコールのようなグリコールはとりわけ注入可能な溶液のための好ましい液体担体で
ある。抗体は、有効成分の徐放性を可能にするような様式で処方し得るデポー注射剤若し
くは移植製剤の形態で投与し得る。例示的一組成物は、ＨＣｌでｐＨ６．０に調節された
５０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、１５０ｍＭ ＮａＣｌよりなる水性緩衝液中で処方した５ｍ
ｇ／ｍＬのモノクローナル抗体を含んでなる。

典型的には、組成物は液体の溶液若しくは懸濁液のいずれかのような注入可能物として
製造し；注入前に液体ベヒクル中の溶液若しくは懸濁液に適する固体の形態もまた製造し
得る。該製剤はまた、乳化もし得るか、あるいは、上で論考されたとおり高められたアジ
ュバント効果のためにリポソームまたはポリラクチド、ポリグリコリド若しくはコポリマ
ーのような微粒子中に被包化もし得る（Ｌａｎｇｅｒ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２
７（１９９０）およびＨａｎｅｓ、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒ
ｅｖｉｅｗｓ ２８：９７（１９９７）を参照されたい）。本発明の剤は、有効成分の徐
放性若しくは拍動性放出を可能にするような様式で処方し得るデポー注射剤若しくは移植
製剤の形態で投与し得る。

他の投与様式に適する付加的な製剤は、経口、鼻内および肺製剤、坐剤ならびに経皮適
用を包含する。坐剤について、結合剤および担体は例えばポリアルキレングリコール若し
くはトリグリセリドを包含し；こうした坐剤は０．５％ないし１０％、好ましくは１％〜
２％の範囲の有効成分を含有する混合物から成形し得る。経口製剤は、製薬学的等級のマ
ンニトール、乳糖、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セル
ロースおよび炭酸マグネシウムのような賦形剤を包含する。これらの組成物は溶液、懸濁
剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、徐放性製剤若しくは散剤の形態をとり、そして１０％〜９
５％、好ましくは２５％〜７０％の有効成分を含有する。

局所適用は経皮若しくは皮内送達をもたらし得る。局所投与は、コレラトキシン、また
はその無毒化誘導体若しくはサブユニット、あるいは他の類似の細菌のトキシンとの該剤
の共投与により助長し得る（Ｇｌｅｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３９１、８５１（１９９８）
を参照されたい）。共投与は、成分を混合物または化学的架橋若しくは融合タンパク質と
しての発現により得られる連結した分子として使用することにより達成し得る。

あるいは、経皮送達は皮膚経路を使用して若しくはトランスフェロソーム（ｔｒａｎｓ
ｆｅｒｏｓｏｍｅ）を使用して達成し得る（Ｐａｕｌら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．
２５：３５２１（１９９５）；Ｃｅｖｃら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ
１３６８：２０１−１５（１９９８））。
ＩＩＩ．処置の経過のモニタリング
本発明は、アルツハイマー病に罹っているか若しくはそれに感受性である患者における
処置のモニター方法、すなわち患者に投与されている１クールの処置のモニター方法を提
供する。該方法を使用して、症候性の患者での治療的処置および無症候性の患者での予防
的処置の双方をモニターし得る。とりわけ、該方法は受動免疫をモニターする（例えば投
与された抗体のレベルを測定する）のに有用である。

いくつかの方法は、ある投薬量の剤を投与する前に例えば患者の抗体のレベル若しくは
プロファイルの基礎値を測定すること、およびこれを処置後のプロファイル若しくはレベ
ルの値と比較することを伴う。レベル若しくはプロファイルの値の有意の増大（すなわち
、反復した測定値の平均からの１標準偏差として表される同一サンプルのこうした測定値
の典型的な実験誤差より大きい）は正の処置の結果（すなわち該剤の投与が所望の応答を
達成したこと）を知らせる。免疫応答の値が有意に変化しない若しくは減少する場合は負
の処置の結果を示す。

他の方法において、レベル若しくはプロファイルの対照値（すなわち平均および標準偏
差）を対照集団について測定する。典型的には、対照集団の個体は前の処置を受けていな
い。治療薬を投与した後の患者でのレベル若しくはプロファイルの測定値をその後対照値
と比較する。対照値に関しての有意の増大（例えば平均から１標準偏差より大きい）は正
のすなわち十分な処置の結果を知らせる。有意の増大の欠如若しくは減少は負のすなわち
不十分な処置の結果を知らせる。一般に、レベルが対照値に関して増大している間は剤の
投与を継続する。前のとおり、対照値に関してのプラトーの達成は、処置の投与を中断ま
たは投薬量および／若しくは頻度を低下し得ることの指標である。

他の方法において、レベル若しくはプロファイルの対照値（例えば平均および標準偏差
）は、治療薬での処置を受けかつそのレベル若しくはプロファイルが処置に応答してプラ
トーに達した個体の対照集団から測定する。患者でのレベル若しくはプロファイルの測定
値を対照値と比較する。患者で測定されたレベルが対照値と有意に異ならない（例えば１
標準偏差より大きくない）場合は、処置を中断し得る。患者でのレベルが対照値より有意
に低い場合は剤の継続投与が保証される。患者でのレベルが対照値より下で持続する場合
には、処置の変更を指示しうる。

他の方法において、処置を現在受けていないがしかし以前の１クールの処置を受けた患
者を抗体のレベル若しくはプロファイルについてモニターして、処置の再開が必要とされ
るかどうかを決定する。患者での測定されたレベル若しくはプロファイルを、以前の１ク
ールの処置後に該患者で以前に達成された値と比較し得る。以前の測定値に関して有意の
減少（すなわち同一サンプルの反復測定における典型的な誤差より大きい）は処置を再開
し得ることの指標である。あるいは、患者で測定された値を、１クールの処置を受けた後
の患者の集団で測定した対照値（平均＋標準偏差）と比較し得る。あるいは、患者での測
定値を、疾患の症状がないままである予防的に処置した患者の集団、若しくは疾患の特徴
の改善を示す治療的に処置した患者の集団での対照値と比較し得る。これらの場合の全部
において、対照レベルに関して有意の減少（すなわち１標準偏差より大きい）は、処置を
患者で再開すべきであることの指標である。

分析のための組織サンプルは、典型的には患者からの血液、血漿、血清、粘液若しくは
脳脊髄液である。サンプルを例えばＡβペプチドに対する抗体のレベル若しくはプロファ
イル、例えばヒト化抗体のレベル若しくはプロファイルについて分析する。Ａβに特異的
な抗体のＥＬＩＳＡ検出方法を実施例の節に記述する。いくつかの方法において、投与さ
れた抗体のレベル若しくはプロファイルは、消失アッセイを使用して、例えば本明細書に
記述されるところのｉｎ ｖｉｔｒｏ食作用アッセイで測定する。こうした方法において
、試験されている患者からの組織サンプルを（例えばＰＤＡＰＰマウスからの）アミロイ
ド沈着物およびＦｃ受容体をもつ貪食細胞と接触させる。アミロイド沈着物のその後の消
失をその後モニターする。消失応答の存在および程度は、試験中の患者の組織サンプル中
のＡβを消失させるのに有効な抗体の存在およびレベルの指標を提供する。

受動免疫後の抗体プロファイルは、典型的には、抗体濃度の即時のピーク、次いで指数
的減衰を示す。さらなる投薬量が伴わなければ、該減衰は、投与された抗体の半減期に依
存して数日ないし数ヶ月の期間内に処置前のレベルに近づく。例えば数種のヒト抗体の半
減期は２０日の次数のものである。

いくつかの方法において、患者でのＡβに対する抗体のベースライン測定を投与前に行
い、第二の測定をその直後に行ってピーク抗体レベルを決定し、そして間をおいて１回若
しくはそれ以上のさらなる測定を行って抗体レベルの減衰をモニターする。抗体のレベル
がベースライン若しくはピークのないベースラインの予め決められたパーセント（例えば
５０％、２５％若しくは１０％）まで減少した場合に、抗体のさらなる投薬量の投与を投
与する。いくつかの方法において、ピーク若しくはバックグラウンドより小さいその後の
測定レベルを、以前に決定した参照レベルと比較して、他の患者での有益な予防若しくは
治療的処置レジメンを構成する。測定された抗体レベルが参照レベルより有意により小さ
い（例えば処置によって利益を得る患者の集団での参照値の平均−１標準偏差未満）場合
は、抗体の付加的な投薬量の投与を指示する。

付加的な方法は、アミロイド原性疾患（例えばアルツハイマー病）を診断若しくはモニ
ターするために研究者若しくは医師により慣例に頼られる、いずれかの技術に認識された
生理学的症状（例えば身体的若しくは精神的症状）を処置の経過にわたってモニターする
ことを包含する。例えば認識障害をモニターし得る。後者はアルツハイマー病およびダウ
ン症候群の症状であるが、しかしこれらの疾患のいずれの他の特徴を伴わなくともまた発
生し得る。例えば、認識障害は、処置の経過の間中、知能状態小検査（Ｍｉｎｉ−Ｍｅｎ
ｔａｌ Ｓｔａｔｅ Ｅｘａｍ）で規約に従って患者のスコアを決定することによりモニ
ターし得る。
Ｃ．キット
本発明は上述されたモニター方法を実施するためのキットをさらに提供する。典型的に
は、こうしたキットはＡβに対する抗体に特異的に結合する剤を含有する。該キットはま
た標識も包含し得る。Ａβに対する抗体の検出のため、標識は典型的に標識抗イディオタ
イプ抗体の形態である。抗体の検出のため、該剤はマイクロタイター皿のウェルへのよう
に固相に予め結合して供給し得る。キットは、典型的に、該キットの使用のための説明書
を提供するラベルもまた含有する。該ラベルは、測定された標識のレベルをＡβに対する
抗体のレベルと相互に関連づけるチャート若しくは他の対応レジメンもまた包含しうる。
ラベルという用語は、キットの製造、輸送、販売若しくは使用の間のいずれかの時点でそ
れに貼付若しくは別の方法で付随するいかなる文書若しくは記録された資料も指す。例え
ばラベルという用語は、広告用チラシおよびパンフレット、包装資材、説明書、音声若し
くはビデオカセット、コンピュータディスク、ならびにキットに直接刻印された文書を包
含する。

本発明はまた診断キット、例えば研究、検出および／若しくは診断キット（例えばｉｎ
ｖｉｖｏ画像化を実施するための）も提供する。こうしたキットは、典型的にはＡβの
、好ましくは残基１−１０内の１エピトープに結合するための抗体を含有する。好ましく
は、抗体は標識されているか、若しくは二次標識試薬がキットに包含される。好ましくは
、該キットは、意図される応用を実施するため、例えばｉｎ ｖｉｖｏ画像化アッセイを
実施するための説明書のラベルが貼られている。例示的抗体は本明細書に記述されるもの
である。
Ｄ．ｉｎ ｖｉｖｏ画像化
本発明は患者におけるアミロイド沈着物のｉｎ ｖｉｖｏ画像化方法を提供する。こう
した方法は、アルツハイマー病若しくはそれに対する感受性を診断若しくはそれらを確認
するのに有用である。例えば、該方法は痴呆の症状を伴って現れる患者で使用し得る。該
患者が異常なアミロイド沈着物を有する場合には、該患者はアルツハイマー病に罹ってい
ることがありそうである。該方法は無症候性の患者でもまた使用し得る。アミロイドの異
常な沈着物の存在は将来の症候性疾患に対する感受性を示す。該方法は、以前にアルツハ
イマー病と診断された患者における疾患の進行および／若しくは処置に対する応答をモニ
ターするのにもまた有用である。

該方法は、Ａβに結合する抗体のような試薬を患者に投与すること、およびその後該剤
が結合した後にそれを検出することにより機能する。好ましい抗体は、完全長のＡＰＰポ
リペプチドに結合することなく患者中のＡβ沈着物に結合する。アミノ酸１−１０内のＡ
βの１エピトープに結合する抗体がとりわけ好ましい。いくつかの方法においては、抗体
はＡβのアミノ酸７−１０内の１エピトープに結合する。こうした抗体は、典型的には実
質的な消失応答を誘導することなく結合する。他の方法において、抗体はＡβのアミノ酸
１−７内の１エピトープに結合する。こうした抗体は典型的にＡβに結合しかつそれに対
する消失応答を誘導する。しかしながら、消失応答は、Ｆａｂのような完全長の定常領域
を欠く抗体フラグメントを使用することにより回避し得る。いくつかの方法においては、
同一の抗体が処置および診断双方の試薬としてはたらき得る。一般に、Ａβの残基１０に
対しＣ末端のエピトープに結合する抗体は、おそらくＣ末端エピトープがアミロイド沈着
物中に到達不可能であるために、残基１−１０内のエピトープに結合する抗体ほど強いシ
グナルを示さない。従ってこうした抗体はより少なく好ましい。

診断試薬は、静脈内注入により患者の身体に、または頭蓋内注入若しくは頭蓋骨を通る
孔をドリルで開けることにより脳中に直接投与し得る。試薬の投薬量は処置方法について
と同一の範囲内であるべきである。典型的には試薬は標識されるとは言え、いくつかの方
法においては、Ａβに対する親和性をもつ一次試薬が未標識であり、そして一次試薬に結
合する二次標識試薬を使用する。標識の選択は検出手段に依存する。例えば、光学的検出
には蛍光標識が適する。常磁性標識の使用は外科的介入を伴わない断層撮影による検出に
適する。放射活性標識もまたＰＥＴ若しくはＳＰＥＣＴを使用して検出し得る。

診断は、標識された遺伝子座の数、大きさおよび／若しくは強度を、対応する基礎値と
比較することにより実施する。基礎値は疾患に罹っていない固体の集団の平均レベルを表
し得る。基礎値はまた、同一患者で測定した以前のレベルも表し得る。例えば、処置を開
始する前に患者で基礎値を測定し得、そしてその後測定した値を基礎値と比較する。基礎
に関しての値の減少は処置に対する正の応答を知らせる。

本発明は以下の制限しない実施例によりより完全に記述されるであろう。
実施例

抗Ａβ抗体：ｍＡｂ ２Ｈ３、ｍＡｂ １０Ｄ５、ｍＡｂ ２６６、ｍＡｂ ２１Ｆ１２
およびｐＡｂ Ａβ１−４２の治療的有効性
本実施例はヘテロ接合性トランスジェニックマウスの脳中のＡβの蓄積を阻害するＡβ
に対する多様なモノクローナルおよびポリクローナル抗体の能力を試験する。
Ａ．試験デザイン
８．５ないし１０．５月齢の６０匹の雄性および雌性のヘテロ接合性ＰＤＡＰＰトラン
スジェニックマウスをＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから得た。マ
ウスを、Ａβに向けられた多様な抗体で処理するため６群に分類した。動物は、動物の性
、齢、血統および起源を群内で可能な限り緊密に一致させるように分配した。表２は該実
験デザインを描く。

表２に示されるとおり、抗体は、４種のネズミのＡβ特異的モノクローナル抗体２Ｈ３
（Ａβの残基１−１２に向けられる）、１０Ｄ５（Ａβの残基３−７に向けられる）、２
６６（Ａβの残基１３−２８に向けられかつ可溶性ＡＮ１７９２に結合するがしかし凝集
したＡＮ１７９２にはしない）、２１Ｆ１２（Ａβの残基３３−４２に向けられる）を包
含した。第五の群はＡβ特異的ポリクローナル抗体画分（凝集したＡＮ１７９２での免疫
化により生じさせた）で処理した。陰性対照群は抗体を含まない希釈剤ＰＢＳ単独を受け
た。
Ｂ．処置の経過のモニタリング
モノクローナル抗体は約１０ｍｇ／ｋｇ（マウスの体重が５０ｇであると想定した）の
用量で注入した。抗体力価を２８週の処置の間中モニターした。注入は、抗Ａβ力価を１
０００より上に維持するため平均で７日ごとに腹腔内投与した。ｍＡｂ ２６６は該アッ
セイで捕捉抗原として使用した凝集したＡＮ１７９２に良好に結合しないためにそれに対
するより低い力価が測定されたとは言え、この群について同一の投与スケジュールを維持
した。モノクローナル抗体２Ｈ３を受けた群は、該抗体がｉｎ ｖｉｖｏであまりにも迅
速に消失されたため最初の３週以内に中断した。

抗体力価の測定のため、各群からの３匹の無作為に選んだマウスのサブセットを各腹腔
内接種直前に採血した（合計３０採血）。抗体力価は、一般的材料および方法に詳細に記
述されるとおり、Ａβ１−４２で被覆したプラスチック製マルチウェルプレートを用いる
サンドイッチＥＬＩＳＡを使用して、Ａβ１−４２結合抗体として測定した。各採血の平
均力価を、ポリクローナル抗体ならびにモノクローナル抗体１０Ｄ５および２１Ｆ１２に
ついて表３に示す。

力価は、ポリクローナル抗体調製物についてこの期間にわたり平均約１０００であり、
そして、１０Ｄ５および２１Ｆ１２で処理した動物についてはこのレベルよりわずかに上
であった。

処置は６か月間にわたり合計１９６日間継続した。動物を最終投与１週後に安楽死させ
た。
Ｃ．脳中のＡβおよびＡＰＰレベル：
多様な抗Ａβ抗体調製物での約６か月の処置後に、脳を生理的食塩水灌流後に動物から
取り出した。一半球を免疫組織化学的分析のため調製し、そして第二の半球をＡβおよび
ＡＰＰレベルの定量に使用した。多様な形態のβアミロイドペプチドおよびアミロイド前
駆体タンパク質（ＡＰＰ）の濃度を測定するために、半球を切開し、そして海馬、皮質お
よび小脳領域のホモジェネートを５Ｍグアニジン中で調製した。これらを連続希釈し、そ
してアミロイドペプチド若しくはＡＰＰのレベルを、ＥＬＩＳＡの形式での既知濃度のＡ
βペプチド若しくはＡＰＰの標準品の一連の希釈物との比較により定量した。

皮質および海馬のホモジェネート中のＥＬＩＳＡにより測定された全ＡβおよびＡβ１
−４２のレベル、ならびに小脳中の全Ａβのレベルをそれぞれ表４、５および６に示す。
ＰＢＳを接種した対照群の全Ａβの濃度の中央値は、皮質でよりも海馬で３．６倍より高
かった（皮質の１７，８１８ｎｇ／ｇに比較して、６３，３８９ｎｇ／ｇ海馬組織という
中央値）。対照群の小脳中のレベルの中央値（３０．６ｎｇ／ｇ組織）は海馬でよりも２
，０００倍以上より低かった。これらのレベルはこの齢のヘテロ接合性ＰＤＡＰＰトラン
スジェニックマウスについて以前に報告されたもの（Ｊｏｈｎｓｏｎ−Ｗｏｏｄら、上記
）と同様である。

皮質について、１処置群（それらの動物は表４に示されるとおりポリクローナル抗Ａβ
抗体を受けた）が対照群のものと有意に異なる（ｐ＜０．０５）Ａβ１−４２として測定
されたＡβレベルの中央値を有した。Ａβ１−４２のレベルの中央値は、この処置群の対
照に比較して６５％減少した。Ａβ１−４２のレベルの中央値は、付加的な１処置群（そ
れらの動物はｍＡｂ １０Ｄ５を投与された）でもまた対照に比較して５５％有意に低下
した（ｐ＝０．０４３３）。

海馬においては、ポリクローナル抗Ａβ抗体での処置と関連した全Ａβの減少パーセン
トの中央値（５０％、ｐ＝０．０５５）は、皮質で観察されたもの（６５％）ほど大きく
なかった（表５）。しかしながら、該減少の絶対的大きさは皮質においてよりも海馬でほ
ぼ３倍より大きかった（皮質での１１，６５８ｎｇ／ｇ組織に対し海馬で３１，６８３ｎ
ｇ／ｇ組織の正味の減少）。全Ａβよりはむしろよりアミロイド原性の形態のＡβすなわ
ちＡβ１−４２のレベルとして測定した場合、ポリクローナル抗体で達成された減少は有
意であった（ｐ＝０．００２５）。ｍＡｂ １０Ｄ５および２６６で処置した群のレベル
の中央値はそれぞれ３３％および２１％低下した。

全Ａβを小脳でもまた測定した（表６）。ポリクローナル抗Ａβおよび２６６抗体を投
与した群は、全Ａβのレベルの有意の低下（それぞれ４３％および４６％、ｐ＝０．００
３３およびｐ＝０．０１８４）を示し、また、１０Ｄ５で処置した群はほぼ有意の低下（
２９％、ｐ＝０．０６７５）を有した。

抗体で処置したマウスおよび対照すなわちＰＢＳで処置したマウスからの皮質および小
脳で、ＥＬＩＳＡによりＡＰＰ濃度もまた測定した。２種の異なるＡＰＰアッセイを利用
した。ＡＰＰ−α／ＦＬと呼称される第一のものはＡＰＰ−α（α、Ａβ配列内で切断さ
れている分泌型のＡＰＰ）および完全長の形態（ＦＬ）のＡＰＰの双方を認識する一方、
第二のものはＡＰＰ−αのみ認識する。処置群の１サブセットでのＡβの処置に関連する
減少と対照的に、ＡＰＰのレベルは処置群の全部で対照動物と比較して事実上変化しなか
った。これらの結果は、Ａβ抗体での免疫化がＡＰＰを枯渇させることなくＡβを枯渇さ
せることを示す。

要約すれば、ＡＮ１７９２に対して生じさせたポリクローナル抗体で処置した動物の大
脳皮質、海馬および小脳でＡβレベルが有意に低下した。より小さい程度まで、Ａβ１−
４２のアミノ末端領域、具体的にはアミノ酸１−１６および１３−２８に対するモノクロ
ーナル抗体もまた、有意の処置効果を示した。
Ｄ．組織化学的解析：
ＰＢＳ、ポリクローナルＡβ４２、２１Ｆ１２、２６６および１０Ｄ５処置群のマウス
からの脳のサブセットにおけるＡβ免疫反応性斑の形態学を、Ａβ４２を用いる標準的免
疫化手順に従った以前の研究のものと比較した。

アミロイド斑の程度および出現（ａｐｐｅａｒａｎｃｅ）の双方での最大の変化は、ポ
リクローナルＡβ４２抗体で免疫した動物で生じた。アミロイド負荷の減少、侵食された
斑の形態学および細胞に関連したＡβの免疫反応性は、標準的免疫化手順により生じられ
る効果に緊密に似ていた。これらの観察結果は、ポリクローナルＡβ４２抗体の投与によ
り全ＡβおよびＡβ４２双方の有意の減少が達成されたＥＬＩＳＡの結果を裏付ける。

類似の定性的評価において、１０Ｄ５群のアミロイド斑もまた、細胞に関連したＡβの
免疫反応性の若干の証拠を伴い、数および出現が減少した。対照で処理した動物に関して
、Ａβに対するポリクローナルＩｇ画分およびモノクローナル抗体の１種（１０Ｄ５）は
、斑負荷をそれぞれ９３％および８１％減少させた（ｐ＜０．００５）。２１Ｆ１２は斑
負荷に対する比較的限られた効果を有するようであった。ｐＡｂＡβ_１−４２での処置後
の脳の顕微鏡写真は、対照で処置した動物に関して、ｐＡｂＡβ_１−４２処置した群にお
ける拡散した沈着物およびより大きな密集した斑の多くの非存在を示す。
Ｅ．リンパ球増殖応答
Ａβ依存性のリンパ球増殖を、最終抗体注入８日後に収集した脾細胞を使用して測定し
た。新たに収集した細胞（ウェルあたり１０^５）を、刺激のため５μＭの濃度のＡβ１−
４０の存在下で５日間培養した。陽性対照として、付加的な細胞をＴ細胞マイトジェンＰ
ＨＡとともに培養し、また、陰性対照として、添加されるペプチドを伴わずに細胞を培養
した。

多様な抗Ａβ抗体で受動免疫した加齢ＰＤＡＰＰマウスからの脾細胞をＡＮ１７９２で
ｉｎ ｖｉｔｒｏで刺激し、そして増殖およびサイトカイン応答を測定した。これらのア
ッセイの目的は、受動免疫が抗原提示および従ってＡＮ１７９２に特異的なＴ細胞応答の
初回刺激を助長したかどうかを決定することであった。ＡＮ１７９２特異的な増殖若しく
はサイトカイン応答は、抗Ａβ抗体で受動免疫したマウスで観察されなかった。

抗Ａβ抗体：ｍＡｂ ２Ｈ３、ｍＡｂ １０Ｄ５、ｍＡｂ ２６６、ｍＡｂ ２１Ｆ１２
、ｍＡｂ ３Ｄ６、ｍＡｂ １６Ｃ１１およびｐＡｂ Ａβ１−４２の治療的有効性
第二の研究において、１０Ｄ５での処置を反復し、また、２種の付加的な抗Ａβ抗体す
なわちモノクローナル抗体３Ｄ６（Ａβ１−５）および１６Ｃ１１（Ａβ３３−４２）を
試験した。対照群はＰＢＳ若しくは無関係なアイソタイプを一致させた抗体（ＴＭ２ａ）
のいずれかを受けた。マウスは以前の研究より高齢（１１．５〜１２月齢のヘテロ接合性
）であったが、それ以外は実験デザインは同一であった。もう一度、６か月の処置後に、
１０Ｄ５はＰＢＳ若しくはアイソタイプを一致させた抗体の対照のいずれに関しても８０
％以上斑負荷を減少させた（ｐ＝０．００３）。Ａβに対する他の抗体の一方すなわち３
Ｄ６は等しく有効であり、８６％の減少を生じた（ｐ＝０．００３）。対照的に、該ペプ
チドに対する第三の抗体、１６Ｃ１１は斑負荷に対するいかなる効果も有することに失敗
した。類似の知見がＡβ４２のＥＬＩＳＡ測定で得られた。

これらの結果は、Ａβペプチドに対する抗体応答がＴ細胞免疫の非存在下でＰＤＡＰＰ
マウスのアミロイド沈着を減少させるのに十分であること、しかし全部の抗Ａβ抗体が等
しく有効であるわけではないことを示す。Ａβのアミノ酸１−５若しくは３−７を含んで
なるエピトープに向けられた抗体がとりわけ有効である。要約すれば、Ａβに対する受動
的に投与された抗体（すなわち受動免疫）がアルツハイマー病のマウスモデルでの斑沈着
の程度を低下させることを示し得る。

ＣＮＳでの抗体結合のモニタリング
本実施例は、限られた血清濃度（２５〜７０μｇ／ｍｌ）で保持される場合に抗体がβ
−アミロイド斑を装飾するのに十分なレベルでＣＮＳへの到達経路を獲得したことを示す
。

Ａβに対する抗体がＣＮＳ内で直接作用し得るかどうかを決定するため、実施例２の終
了時に生理的食塩水で灌流したマウスから採取した脳を、末梢で投与した抗体の存在につ
いて検査した。未固定のクライオスタット脳切片を、マウス免疫グロブリンに対する蛍光
試薬（ヤギ抗マウスＩｇＧ−Ｃｙ３）に曝露した。１０Ｄ５および３Ｄ５群の脳内の斑は
抗体で強く装飾された一方、１６Ｃ１１群では染色が存在しなかった。斑沈着の完全な程
度を明らかにするために、各脳の連続切片を最初に抗Ａβ抗体と、およびその後二次試薬
と免疫反応させた。１０Ｄ５および３Ｄ６は末梢投与後にＣＮＳ内の大部分の斑への到達
経路を獲得した。斑負荷はこれらの処置群で１６Ｃ１１群に比較して大きく低下した。Ｐ
ＤＡＰＰマウスでエバンスブルーにより測定されるところの血管透過性の増大が存在しな
かったため、ＣＮＳ中への抗体の進入は血液脳関門の異常な漏出によらなかった。加えて
、加齢ＰＤＡＰＰマウスの脳実質中の抗体の濃度は非トランスジェニックマウスにおいて
と同一であり、血清中の抗体濃度の０．１％に相当した（アイソタイプに関係なく）。

これらのデータは、末梢で投与した抗体がＣＮＳに進入し得、それらはそこでアミロイ
ド消失を直接誘発し得ることを示す。１６Ｃ１１もまた斑への到達経路を有したがしかし
結合することが不可能であったことがありそうである。

アミロイド沈着物に対する抗体の活性についてのｅｘ ｖｉｖｏスクリーニングアッセイ
斑消失に対する抗体の効果を検査するために、われわれは、初代小膠細胞をＰＤＡＰＰ
マウス若しくはヒトＡＤ脳のいずれかの未固定のクライオスタット切片とともに培養する
ｅｘ ｖｉｖｏアッセイを確立した。小膠細胞を新生ＤＢＡ／２Ｎマウス（１〜３日齢）
の大脳皮質から得た。皮質を５０μｇ／ｍｌのＤＮアーゼＩ（Ｓｉｇｍａ）を含むＨＢＳ
Ｓ⁻（ハンクス平衡塩類溶液、Ｓｉｇｍａ）中で機械的に解離させた。解離した細胞を１
００μｍ細胞濾過器（Ｆａｌｃｏｎ）で濾過し、そして１０００ｒｐｍで５分間遠心分離
した。ペレットを増殖培地（高グルコースＤＭＥＭ、１０％ＦＢＳ、２５ｎｇ／ｍｌ ｒ
ｍＧＭ−ＣＳＦ）に再懸濁し、そして細胞をＴ−７５プラスチック製培養フラスコあたり
２個の脳の密度でプレーティングした。７〜９日後にフラスコを回転式振とう機で２００
ｒｐｍで３７℃で２時間回転した。細胞懸濁液を１０００ｒｐｍで遠心分離し、そしてア
ッセイ培地に再懸濁した。

ＰＤＡＰＰマウス若しくはヒトＡＤ脳（死後間隔＜３時間）の１０μｍクライオスタッ
ト切片を、ポリリシン被覆した円形のガラス製カバーガラス上で融解マウントし、そして
２４ウェル組織培養プレートのウェルに入れた。該カバーガラスを、１％ＦＢＳ、グルタ
ミン、ペニシリン／ストレプトマイシンおよび５ｎｇ／ｍｌのｒｍＧＭ−ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ
）を含むＨ−ＳＦＭ（ハイブリドーマ無血清培地、Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ）よりなるアッセ
イ培地で２回洗浄した。対照若しくは抗Ａβ抗体を２倍濃度（最終５μｇ／ｍｌ）で１時
間添加した。小膠細胞をその後、０．８×１０^６細胞／ｍｌアッセイ培地の密度で接種し
た。培養物を加湿インキュベータ（３７℃、５％ＣＯ_２）中で２４時間若しくはそれ以上
維持した。インキュベーションの終了時に、培養物を４％パラホルムアルデヒドで固定し
、そして０．１％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００で浸透化した。切片をビオチニル化３Ｄ６、次
いでストレプトアビジン／Ｃｙ３複合物（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃ
ｈ）で染色した。外因性小膠細胞を核染色（ＤＡＰＩ）により可視化した。培養物を倒立
蛍光顕微鏡（Ｎｉｋｏｎ、ＴＥ３００）で観察し、そしてＳＰＯＴソフトウェア（Ｄｉａ
ｇｎｏｓｉｔｃ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を使用してＳＰＯＴデジタルカメラを用いて
顕微鏡写真を撮影した。ウエスタンブロット分析のため、培養物を８Ｍ尿素で抽出し、還
元トリシンサンプル緩衝液で１：１希釈しそして１６％トリシンゲル（Ｎｏｖｅｘ）上に
負荷した。イモビロンへの転写後に、ブロットを５μｇ／ｍｌのｐａｂＡβ４２、次いで
ＨＲＰ結合抗マウス抗体に曝露し、そしてＥＣＬ（Ａｍｅｒｓｈａｍ）で発色させた。

アッセイを１６Ｃ１１（ｉｎ ｖｉｖｏで有効でなかったＡβに対する抗体の１種）の
存在下にＰＤＡＰＰ脳切片を用いて実施した場合、β−アミロイド斑は無傷のままであり
、また、食作用は観察されなかった。対照的に、隣接切片を１０Ｄ５の存在下で培養した
場合、アミロイド沈着物はほぼ消失しかつ小膠細胞はＡβを含有する無数の貪食胞を示し
た。同一の結果がＡＤ脳切片で得られ；１０Ｄ５はＡＤ斑の食作用を誘導した一方、１６
Ｃ１１は無効であった。加えて、該アッセイは、マウス若しくはヒト小膠細胞のいずれか
、およびＡβに対するマウス、ウサギ若しくは霊長類抗体を用いて実施した場合に匹敵す
る結果を提供した。

表７は、数種の異なる抗体結合特異性について食作用に対しＡβ結合を比較する。ａａ
１−７内のエピトープに結合する抗体はアミロイド沈着物を結合および消失の双方をする
一方、アミノ酸４−１０内のエピトープに結合する抗体はアミロイド沈着物を消失するこ
となく結合することを理解し得る。残基１０に対しＣ末端のエピトープに結合する抗体は
アミロイド沈着物に結合もそれらを消失もしない。

表８は、ｅｘ ｖｉｖｏアッセイで食作用を誘導する、および受動的移入研究において
ｉｎ ｖｉｖｏの斑負荷を減少させるＡβに対する数種の抗体の能力を比較した、それら
の抗体で得た結果を示す。１６Ｃ１１および２１Ｆ１２は凝集した合成Ａβペプチドに高
親和性で結合したとは言え、これらの抗体は未固定の脳切片中のβ−アミロイド斑と反応
することが不可能であり、ｅｘ ｖｉｖｏアッセイで食作用を誘発し得ず、そしてｉｎ
ｖｉｖｏで有効でなかった。１０Ｄ５、３Ｄ６、およびＡβに対するポリクローナル抗体
は全３種の測定により活性であった。これらの結果は、ｉｎ ｖｉｖｏの有効性がＣＮＳ
内の斑の直接の抗体に媒介される消失によること、およびｅｘ ｖｉｖｏアッセイがｉｎ
ｖｉｖｏ有効性を暗示することを示す。

同一のアッセイを使用して、ＮＡＣと称されるシヌクレインの１フラグメントに対する
抗体の消失活性を試験した。シヌクレインはアミロイド斑に関連するタンパク質であるこ
とが示されている。ＮＡＣに対する抗体を、前のとおり、アミロイド斑を含有する脳組織
サンプルおよび小膠細胞と接触させた。ウサギ血清を対照として使用した。その後のモニ
タリングは、抗体の消失活性を暗示する、斑の数および大きさの顕著な低下を示した。

共焦点顕微鏡検査を使用して、Ａβがｅｘ ｖｉｖｏアッセイの経過の間に内部移行さ
れたことを確認した。対照抗体の存在下で、外因性の小膠細胞は組織の上の共焦点面に留
まり、Ａβを含有する貪食胞は存在せず、そして斑は切片内で無傷のままであった。１０
Ｄ５の存在下では、ほぼ全部の斑物質が外因性の小膠細胞内の小胞中に含有された。内部
移行されたペプチドの運命を決定するために、１０Ｄ５で処理した培養物を多様な時点で
８Ｍ尿素で抽出し、そしてウエスタンブロット分析により検査した。食作用が未だ起きて
いなかった１時間の時点で、Ａβに対するポリクローナル抗体との反応は強い４ｋＤのバ
ンド（Ａβペプチドに対応する）を示した。Ａβの免疫反応性は第１日に減少し、そして
第３日までに非存在となった。従って、Ａβの抗体に媒介される食作用はその分解につな
がる。

ｅｘ ｖｉｖｏアッセイでの食作用がＦｃ媒介性であったかどうかを決定するために、
抗Ａβ抗体３Ｄ６のＦ（ａｂ’）２フラグメントを製造した。Ｆ（ａｂ’）２フラグメン
トは斑と反応するそれらの完全な能力を保持したとは言え、それらは小膠細胞による食作
用を誘発することが不可能であった。加えて、完全な抗体での食作用は、ネズミのＦｃ受
容体に対する試薬（抗ＣＤ１６／３２）により阻害され得た。これらのデータは、Ａβの
ｉｎ ｖｉｖｏ消失がＦｃ受容体媒介性の食作用により生じることを示す。

抗体の血液脳関門の通過
本実施例は、正常若しくはＰＤＡＰＰいずれかのマウスの末梢組織への静脈内注入後に
脳に送達される抗体の濃度を測定する。処置後、ＰＤＡＰＰ若しくは対照の正常マウスを
０．９％ＮａＣｌで灌流した。脳領域（海馬若しくは皮質）を切開しかつ急速凍結した。
脳を０．１％ｔｒｉｔｏｎ＋プロテアーゼ阻害剤中でホモジェナイズした。免疫グロブリ
ンがＥＬＩＳＡにより抽出物中で検出された。Ｆ（ａｂ’）２ヤギ抗マウスＩｇＧを捕捉
試薬としてＲＩＡプレート上に被覆した。血清若しくは脳抽出物を１時間インキュベート
した。抗マウスＩｇＧ１−ＨＲＰ若しくはＩｇＧ２ａ−ＨＲＰ若しくはＩｇＧ２ｂ−ＨＲ
Ｐ（Ｃａｌｔａｇ）でアイソタイプを検出した。抗体は、アイソタイプに関係なく、血液
中で見出された濃度の１／１０００である濃度で、ＣＮＳ中に存在した。例えば、ＩｇＧ
１の濃度が血中でＩｇＧ２ａの濃度の３倍であった場合、それは脳中で同様にＩｇＧ２ａ
の３倍であり、双方は血中のそれらのそれぞれのレベルの０．１％で存在した。この結果
はトランスジェニックおよび非トランスジェニック双方のマウスで観察され、ＰＤＡＰＰ
が独特に漏出する血液脳関門を有しないことを示す。

マウス３Ｄ６可変領域のクローニングおよびシークェンシング
３Ｄ６ ＶＨのクローニングおよび配列分析。３Ｄ６のＨ鎖可変ＶＨ領域を、２つの独
立した方法によりハイブリドーマ細胞から調製したｍＲＮＡを使用するＲＴ−ＰＣＲによ
りクローン化した。第一において、コンセンサスプライマー、５’プライマーとしての翻
訳開始コドンを包含するＶＨ領域リーダーペプチド（ＤＮＡ ＃３８１８−３８２９）、
およびｇ２ｂ（ＤＮＡ ＃３８３２）定常領域特異的３’プライマーを使用した。ＰＣＲ
で増幅した産物ならびに複数の独立に派生したクローンからの配列は相互と完全に一致し
た。３Ｄ６ ＶＨ領域の配列に対するさらなる確認として、５’ＲＡＣＥ ＲＴ−ＰＣＲ
の方法論により得られるＶＨフラグメントおよび３’のｇ２ｂ特異的プライマー（ＤＮＡ
＃３８３２）をシークェンシングすることにより該結果を確認した。再度、該配列はＰ
ＣＲ産物ならびに複数の独立に単離されたクローン由来であった。双方の配列は（５’Ｒ
ＡＣＥ産物からのリーダー領域中のＶ８Ｉ置換を除き）相互と完全に一致し、該配列が３
Ｄ６のＶＨ領域をコードするｍＲＮＡ由来であることを示す。３Ｄ６のＶＨ領域のヌクレ
オチド（配列番号３）およびアミノ酸配列（配列番号４）をそれぞれ表９Ａおよび図２に
示す。

３Ｄ６ ＶＬのクローニングおよび配列分析。３Ｄ６のＬ鎖可変ＶＬ領域をＶＨ領域と
類似の様式でクローン化した。第一の試行において、後に続くとおりネズミのＶＬ領域の
増幅のためコンセンサスのプライマー組を設計した。すなわち、５’プライマー（ＤＮＡ
＃３８０６−３８１６）は翻訳開始コドンを包含するＶＬ領域にハイブリダイズするよ
うに設計し、そして３’プライマー（ＤＮＡ＃３８１７）はＶ−Ｊ接合領域の下流のネズ
ミのＣｋ領域に特異的であった。ＰＣＲフラグメント、ならびにこのコンセンサスＬ鎖プ
ライマー組を使用して単離された独立に派生したクローンのＤＮＡ配列分析は、該配列が
Ｖ−Ｊ領域の接合の間のフレームシフト突然変異を含有したため、得られたｃＤＮＡが非
機能的に再配列されたメッセージ由来であったことを示した。

第二の試行において、５’ＲＡＣＥを使用して、第二のＶＬをコードするｃＤＮＡをク
ローン化した。この産物（コンセンサス１１）のＤＮＡ配列分析はそれが機能的ｍＲＮＡ
をコードしたことを示した。従って、該配列が正しい３Ｄ６ Ｌ鎖ｍＲＮＡをコードする
と結論し得る。３Ｄ６のＶＬ領域のヌクレオチド（配列番号１）およびアミノ酸配列（配
列番号２）をそれぞれ表９Ｂおよび図１に示す。

３Ｄ６ ＶＬのｃＤＮＡのクローニングに使用したプライマーを表１０に示す。

Ｎ末端からＣ末端へ、ＬおよびＨ鎖双方はドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ
２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４を含んでなる。各ドメインへのアミノ酸の割当てはＫ
ａｂａｔら、上記の番号付け規約に従う。

キメラ３Ｄ６抗体の発現：可変ＨおよびＬ鎖領域を、それぞれのＶＤＪ若しくはＶＪ接
合部の下流のスプライスドナー配列をコードするように再工作し、そしてＨ鎖について哺
乳動物発現ベクターｐＣＭＶ−ｈγ１およびＬ鎖についてｐＣＭＶ−ｈκ１にクローン化
した。これらのベクターは、挿入された可変領域カセットの下流のエキソンフラグメント
としてヒトγ１およびＣｋ定常領域をコードする。配列の確認後にＨ鎖およびＬ鎖発現ベ
クターをＣＯＳ細胞にコトランスフェクトした。２種の異なるＨ鎖クローン（Ｈ２．２お
よびＨ３．２）を３種の異なるキメラＬ鎖クローン（Ｌ３、Ｌ４およびＬ１０）とともに
独立にコトランスフェクトして結果の再現性を確認した。キメラ２１．６抗体のトランス
フェクションをベクターの陽性対照として実施した。トランスフェクション４８時間後に
馴化培地を収集し、そして抗体産生についてウエスタンブロット分析、若しくはＡβ結合
についてＥＬＩＳＡによりアッセイした。

複数のトランスフェクタントは全部、Ｈ鎖＋Ｌ鎖の組合せを発現し、それらはウエスタ
ンブロット上でヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）抗体により認識される。

Ａβへの３Ｄ６およびキメラ３Ｄ６（ＰＫ１６１４）抗体の直接結合をＥＬＩＳＡ分析
により試験した。キメラ３Ｄ６は、３Ｄ６により示される親和性に類似の高親和性でＡβ
に結合することが見出された（図３Ａ）。さらに、ＥＬＩＳＡに基づく競合阻害アッセイ
は、キメラ３Ｄ６およびネズミの３Ｄ６抗体がＡβへのビオチニル化３Ｄ６の結合と等し
く競合したことを示した（図３Ｂ）。キメラ抗体は３Ｄ６参照サンプルと識別不可能な結
合特性を表した。

さらに、３Ｄ６およびＰＫ１６１４双方がＡβ斑の消失で有効であった。該ｅｘ ｖｉ
ｖｏアッセイは、抗体の濃度が増大する際にＡβの量がネズミおよびキメラ双方の３Ｄ６
抗体について類似の様式で減少することを示す。これゆえに、該配列がそれぞれ機能的な
３Ｄ６ Ｈ鎖およびＬ鎖をコードすると結論し得る。

３Ｄ６のヒト化
相同性／分子モデル化。ネズミの３Ｄ６抗体中の重要な構造的枠組み残基を同定するた
めに、ＨおよびＬ鎖について最も近いネズミの抗体に基づき三次元モデルを生成した。こ
の目的上、１ＣＲ９と呼称される抗体を３Ｄ６ Ｌ鎖をモデル化するための鋳型として選
び（ＰＤＢ ＩＤ；１ＣＲ９、Ｋａｎｙｏら、上記）、そして１ＯＰＧと呼称される抗体
をＨ鎖をモデル化するための鋳型として選んだ（ＰＤＢ ＩＤ：１ＯＰＧ Ｋｏｄａｎｄ
ａｐａｎｉら、上記）。（表１もまた参照されたい。）これらの抗体のＬ鎖およびＨ鎖と
の３Ｄ６のアミノ酸配列のアラインメントは、Ｈ鎖のＣＤＲ３を除き、１ＣＲ９および１
ＯＰＧ抗体が３Ｄ６と有意の配列の相同性を共有することを示した。加えて、選択した抗
体のＣＤＲループは、再度Ｈ鎖のＣＤＲ３を除き、３Ｄ６のＣＤＲループがそうであるよ
うに同一のカノニカルのＣｈｏｔｈｉａ構造分類にある。従って、１ＣＲ９および１ＯＰ
Ｇを、３Ｄ６の相同性モデル化のための解明された構造の抗体として最初に選択した。

上に示された抗体に基づく３Ｄ６の可変領域の最初の試みの相同性モデルを、Ｌｏｏｋ
＆ ＳｅｇＭｏｄ Ｍｏｄｕｌｅ ＧｅｎｅＭｉｎｅ（ｖ３．５）ソフトウェアパッケ
ージを使用して構築した。このソフトウェアはＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ａｐｐｌｉｃａｔｉ
ｏｎｓ Ｇｒｏｕｐ（カリフォルニア州パロアルト）から無期限ライセンスのもとに購入
した。Ｍｉｃｈａｅｌ Ｌｅｖｉｔｔ博士およびＣｈｒｉｓ Ｌｅｅ博士により生み出さ
れたこのソフトウェアパッケージは、配列の相同性に基づく既知の構造の鋳型での一次構
造の構造的モデル化に関与する段階を自動化することにより分子モデル化の過程を促進す
る。ＵＮＩＸ（登録商標）環境下でＳｉｌｉｃｏｎ Ｇｒａｐｈｉｃｓ ＩＲＩＳワークステーションで作業して、該モデル構造は、好ましくない原子接触を緩和しかつ静電的およびファンデルワールス相互作用を至適化する一連のエネルギー最小化段階により、自動的に精緻なものとされる。

さらなる精緻なものにされたモデルをＱｕａｎｔａ^（Ｒ）のモデル化機能を使用して構
築した。３Ｄ６のＨ鎖のＣＤＲ３でのＰＤＢデータベースのクエリは、１ｑｋｚを最も相
同かつ３Ｄ６と同一の数の残基を有すると同定した。これゆえに、３Ｄ６のＨ鎖のＣＤＲ
３は、１ｑｋｚの結晶構造を鋳型として使用してモデル化した。３Ｄ６のモデルのα−炭
素バックボーンの軌跡を図４に示す。ＶＨドメインは点線として示し、そしてＶＬドメイ
ンは実線として示し、また、ＣＤＲループはリボンの形態で示す。

ヒトアクセプター抗体配列の選択。適するヒトアクセプター抗体配列は、マウス可変領
域のアミノ酸配列の既知のヒト抗体の配列とのコンピュータ比較により同定した。該比較
は３Ｄ６ ＨおよびＬ鎖について別個に実施した。とりわけ、枠組み配列がネズミのＶＬ
およびＶＨ枠組み領域と高い程度の配列の同一性を表したヒト抗体からの可変ドメインは
、ネズミの枠組み配列に関してＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴ（国立保健研究所（Ｎａｔｉｏｎａ
ｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ）のＮＣＢＩのインターネットサーバー
を通じて公的にアクセス可能）を使用するＫａｂａｔデータベースのクエリにより同定し
た。

２個の候補配列を、以下の基準、すなわち（１）主題の配列との相同性；（２）ドナー
配列とカノニカルＣＤＲ構造を共有すること；および（３）枠組み領域にいかなる希少ア
ミノ酸残基も含有しないことに基づき、アクセプター配列として選んだ。ＶＬについて選
択されたアクセプター配列はＫａｂａｔ ＩＤ番号（ＫＡＢＩＤ）０１９２３０（Ｇｅｎ
ｂａｎｋ受託番号Ｓ４０３４２）であり、そしてＶＨについてはＫＡＢＩＤ ０４５９１
９（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＦ１１５１１０）である。最初のバージョンのヒト化３Ｄ
抗体はこれらの選択されたアクセプター抗体配列を利用している。

アミノ酸残基の置換。上で示されたとおり、本発明のヒト化抗体は、実質的にヒト免疫
グロブリン（アクセプター免疫グロブリン）からの可変枠組み領域、および実質的に３Ｄ
６と命名されるマウス免疫グロブリン（ドナー免疫グロブリン）からの相補性決定領域を
含んでなる。３Ｄ６の相補性決定領域および適切なヒトアクセプター免疫グロブリンが同
定されれば、次の段階は、生じるヒト化抗体の特性を至適化するためにこれらの成分から
のどの残基を（あれば）置換するかを決定することであった。上述された基準を使用して
置換のための残基を選択した。

図１および２は、ヒト化配列、対応するヒト枠組みアクセプター配列、および最後に該
ヒト枠組みアクセプター配列に対する最高の相同性を示すヒト生殖系列Ｖ領域配列のそれ
ぞれのバージョン１とのそれぞれ元のネズミの３Ｄ６ ＶＬおよびＶＨのアラインメント
を描く。影を付けた残基はカノニカル（黒地）、バーニア（点線の輪郭）、充填（太字）
および希少アミノ酸（太字斜体）を示し、そして図上で示される。＊印はヒトアクセプタ
ー枠組み配列中のネズミの残基に戻し突然変異された残基を示し、そしてＣＤＲ領域は上
線を付けて示す。ヒト化３Ｄ６ ＶＨおよびＶＬのバージョン１に組込まれた変化の要約
を表１２に提示する。

表１３および１４はそれぞれ多様なＬおよびＨ鎖のＫａｂａｔの番号付けの符号を示す
。

ヒト化抗体は、好ましくは最低１０^７、１０^８、１０^９若しくは１０^１０Ｍ^−１のＡβ
に対する特異的結合親和性を表す。通常、Ａβに対するヒト化抗体の結合親和性の上限は
３Ｄ６の上限（すなわち約１０^９Ｍ^−１）の３、４若しくは５の係数内である。しばしば
、結合親和性の下限もまた３Ｄ６の下限の３、４若しくは５の係数内である。

ヒト化３Ｄ６ ＶＨおよびＶＬ、バージョン１の集成および発現
簡潔には、各Ｖ領域について、４種の大きな一本鎖のオーバーラップするオリゴヌクレ
オチドを合成した。加えて、特定のＶ領域の集成をさらに助長するために各Ｖ領域のため
の４種の短いＰＣＲプライマーを合成した。この目的上使用したオリゴヌクレオチドのＤ
ＮＡ配列を表１５に示す。

ヒト化Ｌ鎖はＰＣＲを使用して集成した。２ダース以上のクローンのＤＮＡ配列分析は
、期待された配列に関してＶＬ領域全体に散在した点突然変異および欠失を示した。配列
の分析は、クローン２．３がアミノ末端領域の２個の狭い間隔で並ぶ単一ヌクレオチド欠
失の修復の影響を受けやすかったことを示した。これゆえに、オリゴヌクレオチドを使用
してクローンｐＣＲＳｈｕｍ３Ｄ６ｖ１２．３で部位特異的突然変異誘発を実施して２個
の欠失ヌクレオチドを導入し、そして点突然変異の修復をＤＮＡ配列分析により確認し、
また、ＶＬ挿入物をＬ鎖発現ベクターｐＣＭＶ−ｃＫにクローン化した。

ＰＣＲに基づく方法を使用したヒト化ＶＨの集成は、該配列の５’半分にかなりの欠失
をもつクローンをもたらした。ＰＣＲ条件を至適化するためのさらなる試みは部分的成功
をみた。至適化されたＰＣＲ条件を介して集成したクローンは、Ａ＋Ｂフラグメントのオ
ーバーラップに位置する領域に１０〜２０ｎｔの欠失をなお有した。結果、ＤＮＡポリメ
ラーゼ（Ｔ４、クレノウ、およびシークェナーゼ）に媒介されるオーバーラップ伸長、次
いでオーバーラップ端を共有結合するためのＴ４ ＤＮＡリガーゼを利用するＶＨ集成の
ため代替の一戦略を使用した。後者のアプローチを使用するＶＨ集成から生じるクローン
のサブセットのＤＮＡ配列分析は、該クローン間の散在した点突然変異および欠失を示し
た。２ダースを上回るクローンの分析は、該クローンについて具体的に説明されたと本質
的に同一のパターンを示した。ＶＨおよびＶＬクローンの初回通過集成後に観察された類
似の結果は、観察されたＤＮＡ配列の誤りが集成に使用した長いＤＮＡの合成の間の自動
合成機の誤りから生じたことを示唆する。

ヒト化ＶＨクローン２．７を、３ヌクレオチド欠失の部位特異的突然変異誘発に媒介さ
れる修復のため選択し、それは含有することが観察された。

ヒト化３Ｄ６ｖ２抗体の特徴付け
残基１でのＤ→Ｙ置換を除きバージョン１について示された置換のそれぞれを有する第
二のバージョンのヒト化３Ｄ６を創製した。この残基がＣＤＲと相互作用する残基と同定
されたため、該残基での置換をバージョン１で実施した。しかしながら、置換は、その位
置でヒト免疫グロブリンにとって希少であった１残基を欠失した。これゆえに置換を伴わ
ない１バージョンを創製した。さらに、Ｈ鎖枠組み領域中の非生殖系列残基を生殖系列残
基で置換した（すなわちＨ７４＝Ｓ、Ｈ７７＝ＴおよびＨ８９＝Ｖ）。バージョン２のＬ
およびＨ鎖のＫａｂａｔの番号付けは、バージョン２のＬ鎖の残基１がａｓｐ（Ｄ）であ
り、Ｈ鎖の残基７４がｓｅｒ（Ｓ）であり、Ｈ鎖の残基７７がｔｈｒ（Ｔ）でありかつＨ
鎖の残基８９がｖａｌ（Ｖ）であることを除き、それぞれ表１３および１４に描かれたも
のと同一である。ヒト化３Ｄ６のバージョン１のＬおよびＨ鎖のヌクレオチド配列をそれ
ぞれ配列番号３４および３６に示す。ヒト化３Ｄ６のバージョン２のＬおよびＨ鎖のヌク
レオチド配列をそれぞれ配列番号３５および３７に示す。

ヒト化３Ｄ６抗体の機能試験
凝集したＡβへのヒト化３Ｄ６ｖ１の結合。ヒト化３Ｄ６ｖ１の機能試験を、一過性に
トランスフェクトしたＣＯＳ細胞からの馴化培地を使用して実施した。細胞を、完全にキ
メラの抗体、キメラＨ鎖＋ヒト化Ｌ鎖、若しくはキメラＬ鎖＋ヒト化Ｈ鎖のいずれかの混
合物、および最後に完全にヒト化した抗体でトランスフェクトした。馴化培地は、凝集し
たＡβ１−４２への結合についてＥＬＩＳＡアッセイにより試験した。ヒト化抗体は実験
誤差内の良好な活性を示し、かつ、キメラ３Ｄ６参照サンプルと識別不可能な結合特性を
表した。結果を表１６に示す。

ヒト化３Ｄ６ｖ１および３Ｄ６ｖ２抗体の結合親和性を比較するため、抗原として凝集
したＡβを使用してＥＬＩＳＡ分析を実施した。該結果は、３Ｄ６ｖ１（Ｈ１Ｌ１）およ
び３Ｄ６ｖ２（Ｈ２Ｌ２）双方がほぼ同一のＡβ結合特性を有することを示す（図５）。

ｈ３Ｄ６ｖ２の置換ＮＥＴ（ｒＮＥＴ）分析。ｒＮＥＴエピトープマップアッセイは、
抗体の全体的な結合活性へのエピトープ内の個々の残基の寄与についての情報を提供する
。ｒＮＥＴ分析は合成した系統的単一置換ペプチドアナログを使用する。試験されている
抗体の結合を、天然のペプチド（天然の抗原）および１９種の代替の「単一置換」ペプチ
ド（各ペプチドは第一の位置で、その位置についての１９種の非天然のアミノ酸の１種で
置換されている）に対して測定する。その位置の多様な非天然の残基での置換の影響を反
映するプロファイルが生成される。プロファイルを同様に、抗原性ペプチドに沿った連続
した位置で生成させる。組合せたプロファイルすなわちエピトープマップ（各位置の全１
９種の非天然の残基での置換を反映する）をその後、第二の抗体について同様に生成させ
たマップと比較する。実質的に類似若しくは同一のマップは、比較されている抗体が同一
若しくは類似のエピトープ特異性を有することを示す。

この分析を３Ｄ６およびヒト化３Ｄ６のバージョン２について実施した。抗体を天然の
ＡβペプチドＤＡＥＦＲＨＤＳＧＹ（配列番号３３）に対する結合について試験した。残
基１−８をその位置についての１９種の非天然の残基のそれぞれで系統的に置換した。３
Ｄ６およびｈ３Ｄ６ｖ２について相応してマップを生成させた。結果を表の形態で表１７
に提示する。

注目すべきことに、各位置での置換を見る場合に該プロファイルは３Ｄ６およびｈ３Ｄ
６ｖ２について事実上同一である（すなわち、値は欄２（ｈ３Ｄ６ｖ２）に対し欄１（３
Ｄ６）のデータを比較する場合に同一の様式で変動する。これらのデータは、ｈ３Ｄ６ｖ
２のｒＮＥＴエピトープマップがＡβの残基１−４および５−８双方を使用してｍ３Ｄ６
に事実上同一であるため、ｈ３Ｄ６ｖ２の特異性が保存されることを示す。

ＰＤＡＰＰ脳切片での免疫組織化学はｈ３Ｄ６ｖ１抗体の特異性を示す。ヒト化３Ｄ６
ｖ１抗体は、ＰＤＡＰＰマウスからのクライオスタットで調製した脳切片中のＡβを認識
した。ヒト化３Ｄ６ｖ１およびＰＫ１６１４双方が、組織を染色するのに使用した抗体の
量に対するスライドガラスあたりの蛍光の量（ピクセルで定量される）により測定される
とおり、同一の用量応答様式でＰＤＡＰＰ斑に結合した（図６）。同一の抗ヒト二次抗体
をこの実験で使用した。切片作成、染色および画像処置は前述した。同一の実験において
、ＰＤＡＰＰおよびＡＤ脳切片でのｈ３Ｄ６ｖ２染色の画像解析は、ｈ３Ｄ６ｖ２が３Ｄ
６ｖ１に類似の様式でＡβ斑を認識することを示した（例えば高度に装飾された（ｄｅｃ
ｏｒａｔｅｄ）斑）。

ｈ３Ｄ６の競合結合分析。ネズミの３Ｄ６と競合するｈ３Ｄ６抗体ｖ１およびｖ２の能
力を、ビオチニル化３Ｄ６抗体を使用するＥＬＩＳＡにより測定した。競合結合分析は、
ｈ３Ｄ６ｖ１、ｈ３Ｄ６ｖ２およびキメラＰＫ１６１４が全部、Ａβを結合するためにｍ
３Ｄ６と競合し得ることを示した（図７）。ｈ３Ｄ６ｖ１およびｈ３Ｄ６ｖ２はＡβに対
し３Ｄ６と競合するそれらの能力において同一であった。１０Ｄ５抗体は３Ｄ６と異なる
結合エピトープを有するため、それを陰性対照として使用した。ＢＩＡｃｏｒｅ分析もま
た、Ａβに対するｈ３Ｄ６ｖ１およびｈ３Ｄ６ｖ２の高親和性を示した（表１８）。

０．８８ｎＭというＫｄを有する３Ｄ６と比較して、ｈ３Ｄ６ｖ１およびｈ３Ｄ６ｖ２
双方が、ｈ３Ｄ６ｖ１およびｈ３Ｄ６ｖ２についてそれぞれ２．０６ｎＭおよび２．２４
ｎＭで測定される約２ないし３倍より小さい結合親和性を有した。ＥＬＩＳＡ競合結合ア
ッセイは、ｈ３Ｄ６ｖ１およびｈ３Ｄ６ｖ２に対するおよそ６倍より小さい結合親和性を
示した。典型的には、ヒト化抗体はそれらのネズミの対蹠物に比較して結合親和性を約３
〜４倍喪失する。従って、ｈ３Ｄ６ｖ１およびｈ３Ｄ６ｖ２についての約３倍（ＥＬＩＳ
ＡおよびＢＩＡｃｏｒｅの結果の平均）の喪失は許容される範囲内にある。

ｈ３Ｄ６ｖ２抗体を使用するｅｘ ｖｉｖｏアッセイ。小膠細胞を刺激するｈ３Ｄ６ｖ
２の能力をｅｘ ｖｉｖｏ食作用アッセイにより試験した（図８）。ｈ３Ｄ６ｖ２は、Ｐ
ＤＡＰＰマウス脳組織からのＡβ凝集物の食作用の誘導においてキメラ３Ｄ６と同じくら
い有効であった。ＩｇＧはＡβを結合することが不可能であり、そして従って食作用を誘
導し得ないため、それをこの実験で陰性対照として使用した。

ｈ３Ｄ６のｉｎ ｖｉｖｏ脳局在化。^１２５Ｉ標識したｈ３Ｄ６ｖ２、ｍ３Ｄ６および
抗体ＤＡＥ１３を、別個の実験で１４匹の個別のＰＤＡＰＰマウスにそれぞれＩＶ注入し
た。マウスを第７日後に殺しそしてさらなる分析のため灌流した。それらの脳領域を切開
し、そして特定の脳領域の^１２５Ｉ活性について測定した。脳中の放射標識活性を血清サ
ンプル中の活性と比較した。結果を血清および脳領域についてそれぞれ表１９および２０
に示す。

該データは、ｈ３Ｄ６ｖ２が脳に局在化し、そしてＡβが凝集することが知られている
海馬領域でとりわけ濃縮されたことを示す。ｍ３Ｄ６およびＤＡＥ１３の脳のカウントは
ｈ３Ｄ６ｖ２に匹敵した。全３種の抗体は、ｉｎ ｖｉｖｏでのＡβ斑結合により示され
るとおり、血液関門を横断することが可能であった。

マウス１０Ｄ５可変領域のクローニングおよびシークェンシング
１０Ｄ５ ＶＨのクローニングおよび配列分析。ハイブリドーマ細胞からの１０Ｄ５の
ＶＨおよびＶＬ領域を、５’ＲＡＣＥ手順を使用するＲＴ−ＰＣＲによりクローン化した
。推定される１０Ｄ５ ＶＬドメインをコードする２個の独立のｃＤＮＡクローン由来の
ヌクレオチド配列（配列番号１３）および推定されるアミノ酸配列（配列番号１４）を表
２１および図９に示す。推定される１０Ｄ５ ＶＨドメインをコードする２個の独立のｃ
ＤＮＡクローン由来のヌクレオチド配列（配列番号１５）および推定されるアミノ酸配列
（配列番号１６）を表２２および図１０に示す。１０Ｄ５ ＶＬおよびＶＨ配列は、それ
らがイニシエーターのメチオニンからＣ領域までの１個の連続したＯＲＦを含有しかつ免
疫グロブリンＶ領域遺伝子の保存された残基の特徴を共有する限りにおいては、機能的Ｖ
領域の基準に合致する。

ＰＤＡＰＰマウスにおける多様な神経病理学的エンドポイントに対するｍＡｂ ３Ｄ６の
有効性
本実施例は多様な神経病理学的エンドポイントに対するネズミのｍＡｂ ３Ｄ６の有効
性を記述する。（変動する用量での）３Ｄ６での受動免疫とＡβペプチドでの能動免疫と
の間で比較を行う。
免疫化
ＰＤＡＰＰマウスを３種の異なる用量すなわち１０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇおよび１
０ｍｇ／ｋｇを月１回（１×４）のｍＡｂ ３Ｄ６で受動免疫した。無関係のＩｇＧγ２
ａ抗体（ＴＹ １１／１５）およびＰＢＳ注入が対照としてはたらいた。Ａβペプチドで
の能動免疫が比較としてはたらいた。各群で２０と３５匹の間の動物を分析した。

アッセイした神経病理学的エンドポイントはアミロイド負荷および神経炎性負荷を包含
する。
アミロイド負荷
アミロイド沈着物により占有される前頭皮質の程度を、３Ｄ６で免疫染色すること、次
いで定量的画像解析により決定した。この分析の結果を表６に示す。免疫療法のそれぞれ
がアミロイド負荷の有意の減少に至った。
神経炎性負荷
３Ｄ６での受動免疫後の神経炎性負荷を、抗ＡＰＰ抗体８Ｅ５での脳切片の免疫染色、
次いで定量的画像解析によりＰＤＡＰＰマウスで測定した。神経炎性ジストロフィーはア
ミロイド斑の直近に位置する異栄養性神経突起の出現（例えば球状の外観をもつ神経突起
）により示される。この分析の結果を表７に示す。３Ｄ６（ＩｇＧγ２ａアイソタイプ、
Ａβ１−５を認識する）はＡβペプチドでの能動免疫に比較して神経炎性負荷を有意に低
下させなかった。以前に、１０Ｄ５（Ａβ３−７を認識するＩｇＧγ１アイソタイプ）は
神経炎性負荷を有意に低下させることが不可能であったことが観察されていた。

アルツハイマー病のＰＤＡＰＰマウスモデルにおける多様な神経病理学的エンドポイン
トの特徴付けは、適切なヒトの治療的免疫化プロトコルの設計において当業者を補助する
とみられる。

ヒト被験体の予防および処置
単回投与のフェーズＩ試験をヒトでの安定性を決定するために実施する。治療薬は、想
定される有効性のレベルの約０．０１から開始しかつ有効なマウス投薬量の約１０倍のレ
ベルに達するまで３の係数により増大させて、異なる患者に増大する投薬量で投与する。

フェーズＩＩ試験は治療的有効性を決定するために実施する。推定（ｐｒｏｂａｂｌｅ
）ＡＤについてのアルツハイマー病および関連疾患協会（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉ
ｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）
（ＡＤＲＤＡ）の基準を使用して定義される早期ないし中期のアルツハイマー病を伴う患
者を選択する。適する患者は、知能状態小検査（Ｍｉｎｉ−Ｍｅｎｔａｌ Ｓｔａｔｅ
Ｅｘａｍ）（ＭＭＳＥ）で１２〜２６の範囲の点を得る。他の選択基準は、患者が研究の
持続期間を生存しかつ妨害するとみられる併用薬の使用のような複雑にする問題を欠くこ
とがありそうであることである。患者機能の基礎評価は、ＭＭＳＥ、およびアルツハイマ
ー病を伴う患者の状態および機能を評価するための包括的尺度であるＡＤＡＳのような、
古典的計量心理学的基準を使用して行う。これらの計量心理学的尺度はアルツハイマー病
の状態の進行の基準を提供する。適する定性的な生命尺度もまた処置をモニターするのに
使用し得る。疾患の進行はＭＲＩによってもまたモニターし得る。免疫原特異的抗体およ
びＴ細胞応答のアッセイを包含する患者の血液プロファイルもまたモニターし得る。

基礎測定後に患者は処置を受け始める。彼らを無作為化し、そして盲検化した様式で治
療薬若しくはプラセボのいずれかで処置する。患者は最低でも６か月ごとにモニターする
。有効性は、プラセボ群に関しての処置群の進行の有意の低下により決定する。

第二のフェーズＩＩ試験は、ときに加齢性記憶障害（ＡＡＭＩ）若しくは軽度認識障害
（ＭＣＩ）と称される非アルツハイマー病の早期記憶障害から、ＡＤＲＤＡ基準によると
おり定義されるところの推定アルツハイマー病への患者の変換を評価するために実施する
。アルツハイマー病への変換の高危険度を伴う患者は、記憶障害の初期兆候若しくは前ア
ルツハイマー病の症候学と関連する他の困難、アルツハイマー病の家族歴、遺伝的危険因
子、年齢、性別、およびアルツハイマー病の高危険度を予測することが見出された他の特
徴について参照集団をスクリーニングすることにより、非臨床的集団から選択する。ＭＭ
ＳＥおよびＡＤＡＳを包含する適する数的指標でのベースラインスコアを、より正常な集
団を評価するために設計された他の数的指標と一緒に収集する。これらの患者集団を、該
剤を含む投薬代替物に対するプラセボの比較を伴う適する群に分割する。これらの患者集
団を約６か月間隔で追跡し、そして、各患者のエンドポイントは、彼若しくは彼女が観察
の終了時にＡＤＲＤＡ基準により定義されるところの推定アルツハイマー病に変換するか
どうかである。
一般的材料および方法
Ａ．ポリクローナルおよびモノクローナルＡβ抗体の製造
抗Ａβポリクローナル抗体は２群の動物から収集した血液から調製した。第一群は６な
いし８週齢の１００匹の雌性Ｓｗｉｓｓ Ｗｅｂｓｔｅｒマウスよりなった。それらを第
０、１５および２９日に、ＣＦＡ／ＩＦＡと組合せた１００μｇのＡＮ１７９２で免疫し
た。第四の注入を半分の用量のＡＮ１７９２を用いて第３６日に与えた。動物を第４２日
に殺す際に放血し、血清を調製し、そして血清をプールして合計６４ｍｌを創製した。第
二群は６ないし９週齢のＰＤＡＰＰマウスと同系しかしヒトＡＰＰ遺伝子について非トラ
ンスジェニックの２４匹の雌性マウスよりなった。それらを第０、１４、２８および５６
日に、ＣＦＡ／ＩＦＡと組合せた１００μｇのＡＮ１７９２で免疫した。これらの動物も
また、第６３日に殺す際に放血し、血清を調製しかつ合計１４ｍｌのためプールした。該
２ロットの血清をプールした。５０％飽和硫酸アンモニウムを用いる２回の連続した沈殿
を使用して抗体画分を精製した。最終沈殿物をＰＢＳに対し透析しかつエンドトキシンに
ついて試験した。エンドトキシンのレベルは１ＥＵ／ｍｇ未満であった。

抗Ａβモノクローナル抗体を腹水から調製した。腹水はまず、０．２３８％の最終濃度
に達するまで氷上で攪拌することによる氷冷腹水への濃デキストラン硫酸ナトリウムの添
加により脱脂した。その後濃ＣａＣｌ_２を６４ｍＭの最終濃度に達するまで攪拌しながら
添加した。この溶液を１０，０００×ｇで遠心分離しかつペレットを廃棄した。上清を、
等容積の飽和硫酸アンモニウムを一滴ずつ添加しつつ氷上で攪拌した。該溶液を１０，０
００×ｇで再度遠心分離しかつ上清を廃棄した。ペレットを再懸濁しかつ２０ｍＭトリス
−ＨＣｌ、０．４Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ７．５に対し透析した。この画分を、Ｐｈａｒｍａ
ｃｉａ ＦＰＬＣ セファロース（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）Ｑカラムに適用しかつ２０ｍＭ
トリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．５中０．４Ｍから０．２７５ＭまでのＮａＣｌの逆勾配で溶出
した。

抗体のピークを２８０ｎｍでの吸光度により同定し、そして適切な画分をプールした。
精製した抗体調製物は、ＢＣＡ法を使用してタンパク質濃度を、およびＳＤＳ−ＰＡＧＥ
を使用して純度を測定することにより特徴付けした。プールはまたエンドトキシンについ
ても試験した。エンドトキシンのレベルは１ＥＵ／ｍｇ未満であった。力価、１００未満
の力価は２５の力価値に自由裁量で割り当てた。
Ｂ．抗体力価の測定
尾静脈に小さな切れ目を作成することおよび約２００μｌの血液を微小遠心管に収集す
ることによりマウスを採血した。モルモットは、最初に後肢領域の毛を剃ること、および
その後１８ゲージ針を使用して中足静脈に切れ目を入れること、ならびに血液を微小遠心
管に収集することにより採血した。血液を室温（ＲＴ）で１時間凝血させ、ボルテックス
攪拌し、その後１４，０００×ｇで１０分間遠心分離して血餅を血清から分離した。血清
をその後清浄な微小遠心管に移しかつ力価測定するまで４℃で保存した。

抗体力価はＥＬＩＳＡにより測定した。９６ウェルマイクロタイタープレート（Ｃｏｓ
ｔｅｒ ＥＩＡプレート）を、ウェル被覆緩衝液（０．１Ｍリン酸ナトリウム、ｐＨ８．
５、０．１％アジ化ナトリウム）中の１０μｇ／ｍｌのＡβ４２若しくはＳＡＰＰのいず
れか、または個々の報告のそれぞれで示されるところの他の抗原のいずれかを含有する１
００μｌの溶液で被覆し、そしてＲＴで一夜保持した。ウェルを吸引し、そして、血清を
試料希釈剤（０．０１４Ｍリン酸ナトリウム、ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、０．
６％ウシ血清アルブミン、０．０５％チメロサール）中１００倍希釈で開始してウェルに
添加した。サンプルの７種の連続希釈物を、１／２１８，７００の最終希釈に達するまで
３倍の段階でプレート中で直接作成した。希釈物は被覆したプレートのウェル中ＲＴで１
時間インキュベートした。その後プレートを０．０５％Ｔｗｅｅｎ ２０を含有するＰＢ
Ｓで４回洗浄した。二次抗体すなわちワサビペルオキシダーゼに結合したヤギ抗マウスＩ
ｇ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｉｍから得た）を、試料希釈剤中の１００μｌの
３０００倍希釈物としてウェルに添加し、そしてＲＴで１時間インキュベートした。プレ
ートを再度ＰＢＳ、Ｔｗｅｅｎ ２０で４回洗浄した。色原体を発色させるため、１００
μｌのＳｌｏｗ ＴＭＢ（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓから得た３，３’，５，５
’−テトラメチルベンジジン）を各ウェルに添加し、そしてＲＴで１５分間インキュベー
トした。２５μｌの２Ｍ Ｈ_２ＳＯ_４の添加により反応を停止した。その後、色の強度を
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｖｍａｘで（４５０ｎｍ〜６５０ｎｍ）で読取っ
た。

力価は最大のＯＤの半分を生じる血清の希釈の逆数と定義した。最大のＯＤは、最大の
ＯＤを確立するのにより高い初期希釈が必要であった非常に高力価を伴う場合を除き、一
般に最初の１００倍希釈から得られた。５０％点が２種の希釈の間にあった場合は、直線
の外挿を行って最終力価を計算した。抗体力価の幾何平均を計算するため、１００未満の
力価は２５の力価値を自由裁量で割り当てた。
Ｃ．脳組織の調製
安楽死後に脳を取り出し、そして一半球を免疫組織化学的分析のため調製した一方、３
種の脳領域（海馬、皮質および小脳）を他方の半球から切開し、そして特異的ＥＬＩＳＡ
（Ｊｏｈｎｓｏｎ−Ｗｏｏｄら、上記）を使用して多様なＡβタンパク質およびＡＰＰの
形態の濃度を測定するのに使用した。

ＥＬＩＳＡに運命づけられた組織を１０容積の氷冷グアニジン緩衝液（５．０Ｍグアニ
ジン−ＨＣｌ、５０ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ８．０）中でホモジェナイズした。ホモジ
ェネートは、Ａｄａｍｓ Ｎｕｔａｔｏｒ（Ｆｉｓｈｅｒ）を使用する穏やかな攪拌によ
りＲＴで３ないし４時間混合し、その後ＡβおよびＡＰＰの定量前に−２０℃で保存した
。以前の実験は、該被検体がこの貯蔵条件下で安定であったこと、および、合成Ａβタン
パク質（Ｂａｃｈｅｍ）がマウス同腹子からの対照脳組織のホモジェネートに添加した場
合に定量的に回収し得たことを示していた（Ｊｏｈｎｓｏｎ−Ｗｏｏｄら、上記）。
Ｄ．Ａβレベルの測定
脳ホモジェネートを氷冷カゼイン希釈剤（０．２５％カゼイン、ＰＢＳ、０．０５％ア
ジ化ナトリウム、２０μｇ／ｍｌアプロチニン、５ｍＭ ＥＤＴＡ ｐＨ８．０、１０μ
ｇ／ｍｌロイペプチン）で１０倍希釈し、そしてその後１６，０００×ｇで４℃で２０分
間遠心分離した。合成Ａβタンパク質標準品（１−４２アミノ酸）およびＡＰＰ標準品は
、最終組成物に０．５Ｍグアニジンおよび０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を包含
するように調製した。「全」ＡβサンドイッチＥＬＩＳＡは、捕捉抗体としてＡβのアミ
ノ酸１３−２８に特異的なモノクローナル抗体、モノクローナル抗体２６６（Ｓｅｕｂｅ
ｒｔら、上記）、およびレポーター抗体としてＡβのアミノ酸１−５に特異的なビオチニ
ル化モノクローナル抗体３Ｄ６（Ｊｏｈｎｓｏｎ−Ｗｏｏｄら、上記）を利用する。３Ｄ
６モノクローナル抗体は分泌型ＡＰＰ若しくは完全長のＡＰＰを認識しないが、しかしア
ミノ末端のアスパラギン酸をもつＡβ種のみを検出する。このアッセイは約５０ｎｇ／ｍ
ｌ（１１ｎＭ）の感度の下限を有し、そして１ｎｇ／ｍｌまでの濃度で内因性のネズミの
Ａβタンパク質に対する交差反応性を示さない（Ｊｏｈｎｓｏｎ−Ｗｏｏｄら、上記）。

Ａβ１−４２特異的サンドイッチＥＬＩＳＡは、捕捉抗体としてＡβのアミノ酸３３−
４２に特異的なｍＡβ ２１Ｆ１２を使用する。ビオチニル化ｍＡβ ３Ｄ６はまた、こ
のアッセイで約１２５μｇ／ｍｌ（２８μＭ、Ｊｏｈｎｓｏｎ−Ｗｏｏｄら、上記）の感
度の下限を有するレポーター抗体でもある。ＡβのＥＬＩＳＡのために、１００μｌのｍ
Ａβ ２６６（１０μｇ／ｍｌの）若しくは（５μｇ／ｍｌ）のｍＡβ ２１Ｆ１２のい
ずれかを、ＲＴでの一夜インキュベーションにより９６ウェルイムノアッセイプレート（
Ｃｏｓｔａｒ）のウェルに被覆した。吸引により溶液を除去し、そして２００μｌのＰＢ
Ｓ緩衝液中０．２５％ヒト血清アルブミンの添加によりウェルをＲＴで最低１時間ブロッ
キングした。ブロッキング溶液を除去し、そしてプレートを使用するまで４℃で乾燥させ
て保存した。プレートは使用前に洗浄緩衝液［トリス緩衝生理的食塩水（０．１５Ｍ Ｎ
ａＣｌ、０．０１Ｍトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．５）および０．０５％Ｔｗｅｅｎ ２０］
で再水和した。サンプルおよび標準をウェルあたり１００μｌの三重のアリコートで添加
しそしてその後４℃で一夜インキュベートした。プレートはアッセイの各段階の間に洗浄
緩衝液で最低３回洗浄した。カゼインアッセイ緩衝液（０．２５％カゼイン、ＰＢＳ、０
．０５％Ｔｗｅｅｎ ２０、ｐＨ７．４）中０．５μｇ／ｍｌまで希釈したビオチニル化
ｍＡβ ３Ｄ６を添加し、そしてウェル中でＲＴで１時間インキュベートした。カゼイン
アッセイ緩衝液で４０００倍希釈したアビジン−ワサビペルオキシダーゼ複合物（Ｖｅｃ
ｔｏｒ、カリフォルニア州バーリンゲームから得たアビジン−ＨＲＰ）をウェルにＲＴで
１時間添加した。比色定量の基質すなわちＳｌｏｗ ＴＭＢ−ＥＬＩＳＡ（Ｐｉｅｒｃｅ
）を添加しかつＲＴで１５分間反応させ、その後２５μｌの２Ｎ Ｈ_２ＳＯ_４の添加によ
り酵素反応を停止した。Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｖｍａｘを使用して４５
０ｎｍおよび６５０ｎｍでの吸光度の差異を測定して反応生成物を定量した。
Ｅ．ＡＰＰレベルの測定
２種の異なるＡＰＰアッセイを利用した。ＡＰＰ−α／ＦＬと呼称される第一のものは
ＡＰＰ−α（α）および完全長（ＦＬ）の形態のＡＰＰの双方を認識する。第二のアッセ
イはＡＰＰ−αに特異的である。ＡＰＰ−α／ＦＬアッセイはＡβの最初の１２アミノ酸
を包含する分泌型ＡＰＰを認識する。レポーター抗体（２Ｈ３）はＡＰＰ^６９５のアミノ
酸６１２−６１３の間に存在するα−クリップ部位に特異的でないため（Ｅｓｃｈら、Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ ２４８：１１２２−１１２４（１９９０））；このアッセイは完全長のＡ
ＰＰ（ＡＰＰ−ＦＬ）もまた認識する。ＡＰＰ−ＦＬの脳ホモジェネートを枯渇させるた
めにＡＰＰ−ＦＬの細胞質尾部に対する固定されたＡＰＰ抗体を使用する予備実験は、Ａ
ＰＰ−α／ＦＬ ＡＰＰのおよそ３０〜４０％がＦＬであることを示唆している（データ
は示されない）。ＡＰＰ−α／ＦＬおよびＡＰＰ−αアッセイ双方のための捕捉抗体は、
ＡＰＰ^６９５の形態のアミノ酸４４４ないし５９２に対し生じられたｍＡｂ ８Ｅ５であ
る（Ｇａｍｅｓら、上記）。ＡＰＰ−α／ＦＬアッセイのためのレポーターｍＡｂは、Ａ
ＰＰ^６９５のアミノ酸５９７−６０８に特異的なｍＡｂ ２Ｈ３（Ｊｏｈｎｓｏｎ−Ｗｏ
ｏｄら、上記）であり、また、ＡＰＰ−αアッセイのためのレポーター抗体はＡＰＰのア
ミノ酸６０５ないし６１１に対し生じられたｍＡｂ １６Ｈ９のビオチニル化誘導体であ
る。ＡＰＰ−αＦＬアッセイの感度の下限は約１１ｎｇ／ｍｌ（１５０ρＭ）（Ｊｏｈｎ
ｓｏｎ−Ｗｏｏｄら）であり、また、ＡＰＰ−α特異的アッセイの下限は２２ｎｇ／ｍｌ
（０．３ｎＭ）である。双方のＡＰＰアッセイのため、ｍＡｂ ８Ｅ５を、ｍＡｂ ２６
６について上述されたとおり９６ウェルＥＩＡプレートのウェル上に被覆した。精製した
組換え分泌型ＡＰＰ−αをＡＰＰ−αアッセイおよびＡＰＰ−α／ＦＬアッセイの参照標
準として使用した（Ｅｓｃｈら、上記）。５Ｍグアニジン中の脳ホモジェネートサンプル
をＥＬＩＳＡ試料希釈剤（０．０１４Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ７．４、０．６％ウシ血清ア
ルブミン、０．０５％チメロサール、０．５Ｍ ＮａＣｌ、０．１％ＮＰ４０）で１０倍
希釈した。それらをその後、０．５Ｍグアニジンを含有する試料希釈剤で４倍希釈した。
希釈したホモジェネートをその後１６，０００×ｇでＲＴで１５秒間遠心分離した。ＡＰ
Ｐ標準およびサンプルを二重のアリコートでプレートに添加しかつＲＴで１．５時間イン
キュベートした。ビオチニル化レポーター抗体２Ｈ３若しくは１６Ｈ９をサンプルととも
にＲＴで１時間インキュベートした。試料希釈剤で１０００倍希釈したストレプトアビジ
ン−アルカリホスファターゼ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ）をウェル中で
ＲＴで１時間インキュベートした。蛍光基質４−メチルウンベリフェリルホスフェートを
３０分のＲＴでのインキュベーションのため添加し、そしてプレートを３６５ｎｍの励起
および４５０ｎｍの発光でＣｙｔｏｆｌｕｏｒ ｔｍ ２３５０蛍光計（Ｍｉｌｌｉｐｏ
ｒｅ）で読取った。
Ｆ．免疫組織化学
脳をＰＢＳ中４％パラホルムアルデヒド中で４０Ｃで３日間固定し、そしてその後切片
にするまで１％パラホルムアルデヒド、ＰＢＳ中４℃で１から７日まで保存した。４０ミ
クロン厚の冠状切片をＲＴでビブラトームで切断し、そして免疫組織化学的処理前に−２
０℃で低温保護物質（リン酸緩衝液中３０％グリセロール、３０％エチレングリコール）
中で保存した。各脳について、それぞれ連続する２４０μｍの間隔により分離される背側
海馬の水準の６切片を、以下の抗体、すなわち（１）ＰＢＳおよび１％ウマ血清中２μｇ
／ｍｌの濃度に希釈したビオチニル化抗Ａβ（ｍＡｂ、３Ｄ６、ヒトＡβに特異的）；若
しくは（２）ＰＢＳおよび１．０％ウマ血清中３μｇ／ｍｌの濃度に希釈したヒトＡＰＰ
に特異的なビオチニル化ｍＡｂ、８Ｅ５；若しくは（３）トリス緩衝生理的食塩水、ｐＨ
７．４（ＴＢＳ）中０．２５％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００および１％ウマ血清で５００倍
希釈したグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ；Ｓｉｇｍａ Ｃｈｍｉｃａｌ Ｃｏ．
）に特異的なｍＡｂ；若しくは（４）ＴＢＳ中０．２５％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００およ
び１％ウサギ血清で１００倍希釈したＣＤ１１ｂ、ＭＡＣ−１抗原に特異的なｍＡｂ（Ｃ
ｈｅｍｉｃｏｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）；若しくは（５）ＴＢＳ中０．２５％Ｔ
ｒｉｔｏｎ Ｘ−１００および１％ウサギ血清で１００倍希釈したＭＨＣ ＩＩ抗原に特
異的なｍＡｂ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）；若しくは（６）ＰＢＳ中１％ウサギ血清で１０
０倍希釈したＣＤ ４３に特異的なラットｍＡｂ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、若しくは（
７）ＰＢＳ中１％ウサギ血清で１００倍希釈したＣＤ ４５ＲＡに特異的なラットｍＡｂ
（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）；若しくは（８）ＰＢＳ中１％ウサギ血清で１００倍希釈した
ＣＤ ４５ＲＢに特異的なラットモノクローナルＡβ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）；若しく
は（９）ＰＢＳ中１％ウサギ血清で１００倍希釈したＣＤ ４５に特異的なラットモノク
ローナルＡβ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）；若しくは（１０）ＰＢＳ中１％ウサギ血清で１
００倍希釈したＣＤ３ｅに特異的なビオチニル化ポリクローナルハムスターＡβ（Ｐｈａ
ｒｍｉｎｇｅｎ）、若しくは（１１）ＰＢＳ中１％ウサギ血清で２００倍希釈したＣＤ３
に特異的なラットｍＡｂ（Ｓｅｒｏｔｅｃ）の１種とともに；または（１２）１％正常ウ
マ血清を含有する一次抗体を欠くＰＢＳの溶液とともに一夜インキュベートした。

上の１、２および６〜１２に列挙される抗体溶液と反応させた切片は、内因性ペルオキ
シダーゼを阻害するためにＰＢＳ中１．０％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、０．４％過酸化
水素でＲＴで２０分間前処理した。それらを次に一次抗体とともに４℃で一夜インキュベ
ートした。３Ｄ６若しくは８Ｅ５若しくはＣＤ３ｅ ｍＡｂと反応させた切片は、その後
、ＰＢＳで７５倍希釈したキット成分「Ａ」および「Ｂ」とともにワサビペルオキシダー
ゼ−アビジン−ビオチン複合体とＲＴで１時間反応させた（Ｖｅｃｔｏｒ Ｅｌｉｔｅ
Ｓｔａｎｄａｒｄキット、Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｓ、カリフォルニア州バーリンゲーム）
。ＣＤ ４５ＲＡ、ＣＤ ４５ＲＢ、ＣＤ４５、ＣＤ３に特異的な抗体および一次抗体を
欠くＰＢＳ溶液と反応させた切片は、それぞれ、ＰＢＳで７５倍希釈したビオチニル化抗
ラットＩｇＧ（Ｖｅｃｔｏｒ）若しくはＰＢＳで７５倍希釈したビオチニル化抗マウスＩ
ｇＧ（Ｖｅｃｔｏｒ）とともにＲＴで１時間インキュベートした。切片をその後、ＰＢＳ
で７５倍希釈したキット成分「Ａ」および「Ｂ」とともにワサビペルオキシダーゼ−アビ
ジン−ビオチン複合体とＲＴで１時間反応させた（Ｖｅｃｔｏｒ Ｅｌｉｔｅ Ｓｔａｎ
ｄａｒｄキット、Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｓ、カリフォルニア州バーリンゲーム）。

切片を、０．０１％過酸化水素、０．０５％３，３’−ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）
中でＲＴで発色させた。ＧＦＡＰ、ＭＡＣ−１およびＭＨＣ ＩＩ特異的抗体とのインキ
ュベーションに運命づけられた切片は、０．６％過酸化水素でＲＴで前処理して内因性ペ
ルオキシダーゼを阻害し、その後一次抗体とともに４℃で一夜インキュベートした。ＧＦ
ＡＰ抗体と反応させた切片は、ＴＢＳで２００倍希釈したウマで作成したビオチニル化抗
マウスＩｇＧ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；Ｖｅｃｔａｓｔａｔｉｎ Ｅ
ｌｉｔｅ ＡＢＣキット）とともにＲＴで１時間インキュベートした。該切片を次に、Ｔ
ＢＳで１０００倍希釈したアビジン−ビオチン−ペルオキシダーゼ複合体（Ｖｅｃｔｏｒ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；Ｖｅｃｔａｓｔａｔｉｎ Ｅｌｉｔｅ ＡＢＣキット）と
１時間反応させた。一次抗体としてのＭＡＣ−１若しくはＭＨＣ ＩＩ特異的モノクロー
ナル抗体とともにインキュベートした切片は、その後、ＴＢＳで２００倍希釈したウサギ
で作成したビオチニル化抗ラットＩｇＧとＲＴで１時間反応させ、次いで、ＴＢＳで１０
００倍希釈したアビジン−ビオチン−ペルオキシダーゼ複合体とともに１時間インキュベ
ートした。ＧＦＡＰ、ＭＡＣ−１およびＭＨＣ ＩＩ特異的抗体とインキュベートした切
片は、その後、それぞれ０．０５％ＤＡＢ、０．０１％過酸化水素、０．０４％塩化ニッ
ケル、ＴＢＳでの４および１１分間のＲＴでの処理により可視化した。

免疫標識した切片をガラス製スライドガラス（ＶＷＲ、Ｓｕｐｅｒｆｒｏｓｔスライド
ガラス）上にマウントし、一夜風乾し、Ｐｒｏｐａｒ（Ａｎａｔｅｃｈ）に浸積し、そし
てマウント媒体としてＰｅｒｍｏｕｎｔ（Ｆｉｓｈｅｒ）を使用してカバーガラスで覆っ
た。

Ａβ斑を対染色するため、ＧＦＡＰ陽性切片の１サブセットをＳｕｐｅｒｆｒｏｓｔス
ライドガラス上にマウントし、そして免疫組織化学的処理後に水性１％チオフラビンＳ（
Ｓｉｇｍａ）中で７分間インキュベートした。切片をその後脱水しかつＰｒｏｐａｒ中で
澄明にし、その後Ｐｅｒｍｏｕｎｔでマウントしたカバーガラスで覆った。
Ｇ．画像解析
ＣＣＤビデオカメラおよびＳｏｎｙ ＴｒｉｎｉｔｒｏｎモニタによりＮｉｋｏｎ Ｍ
ｉｃｒｏｐｈｏｔ−ＦＸ顕微鏡に接続したＶｉｄｅｏｍｅｔｒｉｃ １５０画像解析装置
（Ｏｎｃｏｒ，Ｉｎｃ．、メリーランド州ゲイサーズバーグ）を免疫反応性のスライドガ
ラスの定量に使用した。切片の画像をビデオバッファに保存し、そして、免疫標識された
構造により占有される全画素面積を選択かつ計算するための色および彩度に基づく閾値を
決定した。各切片について、海馬の輪郭を人的に描き、そして海馬により占有される全画
素面積を計算した。アミロイド負荷パーセントを：（ｍＡｂ ３Ｄ６と免疫反応性のＡβ
沈着物を含有する海馬領域の画分）×１００として測定した。同様に、神経炎性負荷パー
セントは：（モノクローナル抗体８Ｅ５と反応性のジストロフィー性の神経突起を含有す
る海馬領域の画分）×１００として測定した。Ｓｉｍｐｌｅ ３２ソフトウェアアプリケ
ーションプログラムを動作するＣ−Ｉｍａｇｉｎｇ装置（Ｃｏｍｐｉｘ，Ｉｎｃ．、フィ
ラデルフィア州クランベリータウンシップ）をＯｐｔｒｏｎｉｃｓカメラによりＮｉｋｏ
ｎ Ｍｉｃｒｏｐｈｏｔ−ＦＸ顕微鏡に接続し、そしてＧＦＡＰ陽性の星状細胞ならびに
ＭＡＣ−１およびＭＨＣ ＩＩ陽性小膠細胞により占有される膨大後部皮質のパーセント
を定量するのに使用した。免疫反応した切片の画像をビデオバッファに保存し、そして、
免疫標識された細胞により占有される全画素面積を選択かつ計算するためのモノクロに基
づく閾値を決定した。各切片について、膨大後部皮質（ＲＳＣ）の輪郭を人的に描き、そ
してＲＳＣにより占有される全画素面積を計算した。星状細胞増加のパーセントを：（Ｇ
ＦＡＰ反応性の星状細胞により占有されるＲＳＣの画分）×１００と定義した。同様に、
小膠細胞症のパーセントを：（ＭＡＣ−１若しくはＭＨＣ ＩＩ反応性の小膠細胞により
占有されるＲＳＣの画分）×１００と定義した。全部の画像解析について、それぞれ連続
する２４０μｍの間隔により分離される背側海馬の水準の６切片を各動物について定量し
た。全部の場合で、動物の処置状態は観察者に未知であった。

前述の発明は理解の明瞭さの目的上詳細に記述したとは言え、付属として付けられる請
求の範囲の範囲内である種の改変を実施しうることが明らかであろう。本明細書で引用さ
れる全部の刊行物および特許文書、ならびに図面および配列表に出現する本文は、これに
より、それぞれが個々にそのように表示されたかのように、全部の目的上同一の程度まで
そっくりそのまま引用することにより組み込まれる。

前述から、本発明が多数の用途を提供することが明らかであろう。例えば、本発明は、
アミロイド原性疾患の処置、予防若しくは診断、またはそれでの使用のための薬品若しく
は診断組成物の製造における上述されたＡβに対する抗体のいずれの使用も提供する。

Claims (158)

1. （ｉ）配列番号２として示される３Ｄ６免疫グロブリンＬ鎖可変領域配列からの可変領
   域の相補性決定領域（ＣＤＲ）、および（ｉｉ）ヒトアクセプター免疫グロブリンＬ鎖配
   列からの可変枠組み領域を含んでなるが、但し、最低１個の枠組み残基がマウス３Ｄ６
   Ｌ鎖可変領域配列からの対応するアミノ酸残基で置換され、該枠組み残基が：
   （ａ）抗原を直接非共有結合する残基；
   （ｂ）ＣＤＲに隣接する残基；
   （ｃ）ＣＤＲと相互作用する残基；および
   （ｄ）ＶＬ−ＶＨ界面に参画する残基
   よりなる群から選択される、ヒト化免疫グロブリンＬ鎖。
2. （ｉ）配列番号４として示される３Ｄ６免疫グロブリンＨ鎖可変領域配列からの可変領
   域の相補性決定領域（ＣＤＲ）、および（ｉｉ）ヒトアクセプター免疫グロブリンＨ鎖か
   らの可変枠組み領域を含んでなるが、但し、最低１個の枠組み残基がマウス３Ｄ６ Ｈ鎖
   可変領域配列からの対応するアミノ酸残基で置換され、該枠組み残基が：
   （ａ）抗原を直接非共有結合する残基；
   （ｂ）ＣＤＲに隣接する残基；
   （ｃ）ＣＤＲと相互作用する残基；および
   （ｄ）ＶＬ−ＶＨ界面に参画する残基
   よりなる群から選択される、ヒト化免疫グロブリンＨ鎖。
3. ＣＤＲと相互作用する残基が、１ＣＲ９の解明された構造に基づき３Ｄ６ Ｌ鎖をモデ
   ル化することにより同定される、請求項１に記載のＬ鎖。
4. ＣＤＲと相互作用する残基が、１ＮＬＤの解明された構造に基づき３Ｄ６ Ｌ鎖をモデ
   ル化することにより同定される、請求項１に記載のＬ鎖。
5. ＣＤＲと相互作用する残基が、１ＯＰＧの解明された構造に基づき３Ｄ６ Ｈ鎖をモデ
   ル化することにより同定される、請求項２に記載のＨ鎖。
6. （ｉ）配列番号２として示される３Ｄ６免疫グロブリンＬ鎖可変領域配列からの可変領
   域の相補性決定領域（ＣＤＲ）、および（ｉｉ）ヒトアクセプター免疫グロブリンＬ鎖配
   列からの可変枠組み領域を含んでなるが、但し、最低１個の枠組み残基がマウス３Ｄ６
   Ｌ鎖可変領域配列からの対応するアミノ酸残基で置換され、該枠組み残基が、３Ｄ６免疫
   グロブリンＬ鎖可変領域の三次元モデルの解析により同定されるところのＬ鎖可変領域の
   コンホメーション若しくは機能に影響を及ぼすことが可能な残基である、ヒト化免疫グロ
   ブリンＬ鎖。
7. （ｉ）配列番号４として示される３Ｄ６免疫グロブリンＨ鎖可変領域配列からの可変領
   域の相補性決定領域（ＣＤＲ）、および（ｉｉ）ヒトアクセプター免疫グロブリンＨ鎖か
   らの可変枠組み領域を含んでなるが、但し、最低１個の枠組み残基がマウス３Ｄ６ Ｈ鎖
   可変領域配列からの対応するアミノ酸残基で置換され、該枠組み残基が、３Ｄ６免疫グロ
   ブリンＨ鎖可変領域の三次元モデルの解析により同定されるところのＨ鎖可変領域のコン
   ホメーション若しくは機能に影響を及ぼすことが可能な残基である、ヒト化免疫グロブリ
   ンＨ鎖。
8. 枠組み残基が、抗原と相互作用することが可能な残基、抗原結合部位に近接する残基、
   ＣＤＲと相互作用することが可能な残基、ＣＤＲに隣接する残基、ＣＤＲ残基の６Å以内
   の残基、カノニカル残基、バーニア領域残基、鎖間充填残基、希少残基、および構造モデ
   ルの表面上のグリコシル化部位残基よりなる群から選択される、請求項６に記載のＬ鎖。
9. 枠組み残基が、抗原と相互作用することが可能な残基、抗原結合部位に近接する残基、
   ＣＤＲと相互作用することが可能な残基、ＣＤＲに隣接する残基、ＣＤＲ残基の６Å以内
   の残基、カノニカル残基、バーニア領域残基、鎖間充填残基、希少残基、および構造モデ
   ルの表面上のグリコシル化部位残基よりなる群から選択される、請求項７に記載のＨ鎖。
10. 枠組み残基が、１ＣＲ９の解明された構造に基づいて３Ｄ６ Ｌ鎖をモデル化すること
    により同定される、請求項６若しくは８に記載のＬ鎖。
11. 枠組み残基が、１ＮＬＤの解明された構造に基づいて３Ｄ６ Ｌ鎖をモデル化すること
    により同定される、請求項６若しくは８に記載のＬ鎖。
12. 枠組み残基が、１ＯＰＧの解明された構造に基づいて３Ｄ６ Ｈ鎖をモデル化すること
    により同定される、請求項７若しくは９に記載のＨ鎖。
13. （ｉ）配列番号２として示される３Ｄ６免疫グロブリンＬ鎖可変領域配列からの可変領
    域の相補性決定領域（ＣＤＲ）、および（ｉｉ）ヒトアクセプター免疫グロブリンＬ鎖か
    らの可変枠組み領域を含んでなるが、但し、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３６およびＬ４６（Ｋａｂａ
    ｔの番号付け規約）よりなる群から選択される最低１個の枠組み残基がマウス３Ｄ６ Ｌ
    鎖可変領域配列からの対応するアミノ酸残基で置換されている、ヒト化免疫グロブリンＬ
    鎖。
14. （ｉ）配列番号４として示される３Ｄ６ Ｈ鎖可変領域配列からの可変領域の相補性決
    定領域、および（ｉｉ）ヒトアクセプター免疫グロブリンＨ鎖からの可変枠組み領域を含
    んでなるが、但し、Ｈ４９、Ｈ９３およびＨ９４（Ｋａｂａｔの番号付け規約）よりなる
    群から選択される最低１個の枠組み残基がマウス３Ｄ６ Ｈ鎖可変領域配列からの対応す
    るアミノ酸残基で置換されている、ヒト化免疫グロブリンＨ鎖。
15. ヒトアクセプターＬ鎖がサブタイプκＩＩ（Ｋａｂａｔの規約）のものである、請求項
    １、３、４、６、８、１０、１１および１３のいずれか１つに記載のＬ鎖。
16. ヒトアクセプターＨ鎖がサブタイプＩＩＩ（Ｋａｂａｔの規約）のものである、請求項
    ２、５、７、９、１２および１４のいずれか１つに記載のＨ鎖。
17. ヒトアクセプターＬ鎖が、Ｋａｂａｔ ＩＤ ０１９２３０、Ｋａｂａｔ ＩＤ ００
    ５１３１、Ｋａｂａｔ ＩＤ ００５０５８、Ｋａｂａｔ ＩＤ ００５０５７、Ｋａｂ
    ａｔ ＩＤ ００５０５９、Ｋａｂａｔ ＩＤ Ｕ２１０４０およびＫａｂａｔ ＩＤ
    Ｕ４１６４５よりなる群から選択される、請求項１５に記載のＬ鎖。
18. ヒトアクセプターＬ鎖がＫａｂａｔ ＩＤ ０１９２３０である、請求項１５に記載の
    Ｌ鎖。
19. ヒトアクセプターＨ鎖が、Ｋａｂａｔ ＩＤ ０４５９１９、Ｋａｂａｔ ＩＤ ００
    ０４５９、Ｋａｂａｔ ＩＤ ０００５５３、Ｋａｂａｔ ＩＤ ０００３８６およびＫ
    ａｂａｔ ＩＤ Ｍ２３６９１よりなる群から選択される、請求項１６に記載のＨ鎖。
20. ヒトアクセプターＨ鎖がＫａｂａｔ ＩＤ ０４５９１９である、請求項１６に記載の
    Ｈ鎖。
21. 最低１個の希少ヒト枠組み残基が、その位置でヒト可変Ｌ鎖配列に共通であるアミノ酸
    残基で置換されている、請求項１、３、４、６、８、１０、１１、１３、１５、１７およ
    び１８のいずれか１つに記載のＬ鎖。
22. 最低１個の希少ヒト枠組み残基が、生殖系列可変Ｌ鎖配列からの対応するアミノ酸残基
    で置換されている、請求項１、３、４、６、８、１０、１１、１３、１５、１７および１
    ８に記載のＬ鎖。
23. 生殖系列可変Ｌ鎖配列がＡ１、Ａ１７、Ａ１８、Ａ２およびＡ１９よりなる群から選択
    される、請求項２２に記載のＬ鎖。
24. 最低１個の希少ヒト枠組み残基が、その位置でヒト可変Ｈ鎖配列に共通であるアミノ酸
    残基で置換されている、請求項２、５、７、９、１２、１４、１６、１９および２０のい
    ずれか１つに記載のＨ鎖。
25. 最低１個の希少ヒト枠組み残基が、生殖系列可変Ｈ鎖配列からの対応するアミノ酸残基
    で置換されている、請求項２、５、７、９、１２、１４、１６、１９および２０のいずれ
    か１つに記載のＨ鎖。
26. 生殖系列可変Ｈ鎖配列がＶＨ３−４８、ＶＨ３−２３、ＶＨ３−７、ＶＨ３−２１およ
    びＶＨ３−１１よりなる群から選択される、請求項２５に記載のＨ鎖。
27. 生殖系列可変Ｈ鎖配列がＶＨ３−２３である、請求項２５に記載のＨ鎖。
28. 希少枠組み残基が、Ｌ鎖可変領域サブグループのヒトＬ鎖可変領域配列の１０％未満の
    その位置での存在に基づいて選択され、また、共通残基はＬ鎖可変領域サブグループの配
    列の５０％以上のその位置での存在に基づいて選択される、請求項２１〜２３のいずれか
    １つに記載のＬ鎖。
29. 希少枠組み残基が、Ｈ鎖可変領域サブグループのヒトＨ鎖可変領域配列の１０％未満の
    その位置での存在に基づいて選択され、また、共通残基はＨ鎖可変領域サブグループの配
    列の５０％以上のその位置での存在に基づいて選択される、請求項２４〜２６のいずれか
    １つに記載のＨ鎖。
30. モノクローナル抗体３Ｄ６ Ｌ鎖からの相補性決定領域（ＣＤＲ）ならびに可変領域枠
    組み残基Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３６およびＬ４６（Ｋａｂａｔの番号付け規約）を含んでなり、
    残部がヒト免疫グロブリンからであるＬ鎖。
31. モノクローナル抗体３Ｄ６ Ｈ鎖からの相補性決定領域（ＣＤＲ）ならびに可変枠組み
    残基Ｈ４９、Ｈ９３およびＨ９４（Ｋａｂａｔの番号付け規約）を含んでなり、残部がヒ
    ト免疫グロブリンからであるＨ鎖。
32. 請求項１、３、４、６、８、１０、１１、１３、１５、１７および１８のいずれか１つ
    に記載のＬ鎖、ならびに請求項２、５、７、９、１２、１４、１６、１９および２０のい
    ずれか１つに記載のＨ鎖を含んでなるヒト化免疫グロブリン、若しくは前記免疫グロブリ
    ンの抗原結合フラグメント。
33. 最低１０^７Ｍ^−１の結合親和性でβアミロイドペプチド（Ａβ）に特異的に結合する、
    請求項３２に記載の免疫グロブリン若しくは抗原結合フラグメント。
34. 最低１０^８Ｍ^−１の結合親和性でβアミロイドペプチド（Ａβ）に特異的に結合する、
    請求項３２に記載の免疫グロブリン若しくは抗原結合フラグメント。
35. 最低１０^９Ｍ^−１の結合親和性でβアミロイドペプチド（Ａβ）に特異的に結合する、
    請求項３２に記載の免疫グロブリン若しくは抗原結合フラグメント。
36. Ｈ鎖アイソタイプがγ１である、請求項３２に記載の免疫グロブリン若しくは抗原結合
    フラグメント。
37. 可溶性βアミロイドペプチド（Ａβ）および凝集したＡβの双方に結合する、請求項３
    ２に記載の免疫グロブリン若しくは抗原結合フラグメント。
38. 可溶性βアミロイドペプチド（Ａβ）が脱凝集したＡβである、請求項３７に記載の免
    疫グロブリン。
39. βアミロイドペプチド（Ａβ）の食作用を媒介する、請求項３２に記載の免疫グロブリ
    ン若しくは抗原結合フラグメント。
40. 被験体の血液脳関門を横断する、請求項３２に記載の免疫グロブリン若しくは抗原結合
    フラグメント。
41. 被験体のβアミロイドペプチド（Ａβ）負荷および神経炎性ジストロフィーの双方を低
    下させる、請求項３２に記載の免疫グロブリン若しくは抗原結合フラグメント。
42. （ａ）ヒト化Ｌ鎖が、配列番号２と呼称されるマウス３Ｄ６免疫グロブリンＬ鎖可変ド
    メインの対応する相補性決定領域からのアミノ酸配列を有する３種の相補性決定領域（Ｃ
    ＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）、ならびにヒトＬ鎖可変領域枠組み配列からの可変領
    域枠組みを含んでなるが、但し、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３６およびＬ４６（Ｋａｂａｔの番号付
    け規約）よりなる第一の群から選択される最低１位置が、マウス３Ｄ６免疫グロブリンＬ
    鎖可変領域枠組みの同等な位置に存在する同一のアミノ酸残基により占有され；ならびに
    （ｂ）ヒト化Ｈ鎖が、配列番号４と呼称されるマウス３Ｄ６免疫グロブリンＨ鎖可変ドメ
    インの対応する相補性決定領域からのアミノ酸配列を有する３種の相補性決定領域（ＣＤ
    Ｒ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）、ならびにヒトＨ鎖可変領域枠組み配列からの可変領域
    枠組みを含んでなるが、但し、Ｈ４９、Ｈ９３およびＨ９４（Ｋａｂａｔの番号付け規約
    ）よりなる第二の群から選択される最低１位置が、マウス３Ｄ６免疫グロブリンＨ鎖可変
    領域枠組みの同等な位置に存在する同一のアミノ酸残基により占有され、
    該ヒト化免疫グロブリンが最低１０^７Ｍ^−１の結合親和性でβアミロイドペプチド（Ａβ
    ）に特異的に結合し、該３Ｄ６免疫グロブリンは配列番号２と呼称される可変ドメインを
    もつＬ鎖および配列番号４と呼称される可変ドメインをもつＨ鎖を有する、
    ヒト化Ｈ鎖およびヒト化Ｌ鎖を含んでなるヒト化免疫グロブリン。
43. ヒトＬ鎖可変領域枠組みがκ Ｌ鎖可変領域からである、請求項４２に記載のヒト化免
    疫グロブリン。
44. ヒトＨ鎖可変領域枠組みがＩｇＧ１ Ｈ鎖可変領域からである、請求項４２に記載のヒ
    ト化免疫グロブリン。
45. ヒト化Ｌ鎖可変領域枠組みが、Ｋａｂａｔ ＩＤ ０１９２３０、Ｋａｂａｔ ＩＤ
    ００５１３１、Ｋａｂａｔ ＩＤ ００５０５８、Ｋａｂａｔ ＩＤ ００５０５７、Ｋ
    ａｂａｔ ＩＤ ００５０５９、Ｋａｂａｔ ＩＤ Ｕ２１０４０およびＫａｂａｔ Ｉ
    Ｄ Ｕ４１６４５よりなる群から選択されるＬ鎖からである、請求項４２に記載のヒト化
    免疫グロブリン。
46. ヒト化Ｈ鎖可変領域枠組みが、Ｋａｂａｔ ＩＤ ０４５９１９、Ｋａｂａｔ ＩＤ
    ０００４５９、Ｋａｂａｔ ＩＤ ０００５５３、Ｋａｂａｔ ＩＤ ０００３８６およ
    びＫａｂａｔ ＩＤ Ｍ２３６９１よりなる群から選択されるＨ鎖からである、請求項４
    ２に記載のヒト化免疫グロブリン。
47. ヒト化Ｌ鎖可変領域枠組みが、第一の群からの位置を除きＫａｂａｔ ＩＤ ０１９２
    ３０のＬ鎖可変領域枠組み配列に同一であり、かつ、Ｈ鎖可変領域枠組みは、第二の群か
    らの位置を除きＫａｂａｔ ＩＤ ０４５９１９のＨ鎖可変領域枠組み配列に同一である
    、請求項４２に記載のヒト化免疫グロブリン。
48. ヒト化Ｌ鎖がマウス３Ｄ６ Ｈ鎖の対応する相補性決定領域に同一である相補性決定領
    域を含んでなり、かつ、ヒト化Ｈ鎖がマウス３Ｄ６ Ｈ鎖の対応する相補鎖決定領域に同
    一である相補性決定領域を含んでなる、請求項４２に記載のヒト化免疫グロブリン。
49. 配列番号２として示される３Ｄ６の可変Ｌ鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ
    ２およびＣＤＲ３）を含んでなるヒト化抗体。
50. 配列番号４として示される３Ｄ６の可変Ｈ鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ
    ２およびＣＤＲ３）を含んでなるヒト化抗体。
51. マウス３Ｄ６抗体からの相補性決定領域（ＣＤＲ）に対応するＣＤＲを含んでなる可変
    領域を含んでなる、βアミロイドペプチド（Ａβ）に特異的に結合するヒト化抗体若しく
    はその抗原結合フラグメント。
52. （ａ）ネズミの３Ｄ６の相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸残基およびヒトＶＬサブ
    グループＩＩの可変ドメイン枠組み領域（ＦＲ）のアミノ酸残基を含んでなるＬ鎖可変ド
    メイン；ならびに
    （ｂ）ネズミの３Ｄ６の相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸残基およびヒトＶＨサブグ
    ループＩＩＩの可変ドメイン枠組み領域（ＦＲ）のアミノ酸残基を含んでなるＨ鎖可変ド
    メイン
    を含んでなる、最低１０^７Ｍ^−１の結合親和性でβアミロイドペプチド（Ａβ）を結合す
    るヒト化抗体。
53. 配列番号２若しくは配列番号４として示される３Ｄ６免疫グロブリン可変領域配列から
    の可変領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）、およびヒトアクセプター免疫グロブリンからの
    可変枠組み領域を含んでなるキメラ免疫グロブリン。
54. 配列番号８に示されるところの可変Ｈ鎖領域および配列番号５に示されるところの可変
    Ｌ鎖領域を含んでなる免疫グロブリン若しくはその抗原結合フラグメント。
55. 配列番号１２に示されるところの可変Ｈ鎖領域および配列番号１１に示されるところの
    Ｌ鎖領域を含んでなる免疫グロブリン若しくはその抗原結合フラグメント。
56. 配列番号８に示されるところの可変Ｈ鎖領域、配列番号５に示されるところの可変Ｌ鎖
    領域およびＩｇＧ１からの定常領域を含んでなる免疫グロブリン。
57. 配列番号１２に示されるところの可変Ｈ鎖領域、配列番号１１に示されるところのＬ鎖
    領域およびＩｇＧ１からの定常領域を含んでなる免疫グロブリン。
58. 請求項３２〜５２のいずれか１つに記載のヒト化免疫グロブリンの有効投薬量を患者に
    投与することを含んでなる、患者におけるアミロイド原性疾患の予防若しくは治療方法。
59. 請求項３２〜５２のいずれか１つに記載のヒト化免疫グロブリンの有効投薬量を患者に
    投与することを含んでなる、患者におけるアルツハイマー病の予防若しくは治療方法。
60. ヒト化免疫グロブリンの有効投薬量が１ｍｇ／ｋｇ体重である、請求項５９に記載の方
    法。
61. ヒト化免疫グロブリンの有効投薬量が１０ｍｇ／ｋｇ体重である、請求項５９に記載の
    方法。
62. 請求項３２〜５２のいずれか１つに記載の免疫グロブリンおよび製薬学的担体を含んで
    なる製薬学的組成物。
63. 配列番号２のアミノ酸２４−３９、配列番号２のアミノ酸５５−６１および配列番号２
    のアミノ酸９４−１０２よりなる群から選択される配列番号２のフラグメントを含んでな
    る単離されたポリペプチド。
64. 配列番号２のアミノ酸２４−３９、配列番号２のアミノ酸５５−６１および配列番号２
    のアミノ酸９４−１０２を含んでなる単離されたポリペプチド。
65. 配列番号４のアミノ酸３１−３５、配列番号４のアミノ酸５０−６６および配列番号４
    のアミノ酸９９−１０７よりなる群から選択される配列番号４のフラグメントを含んでな
    る単離されたポリペプチド。
66. 配列番号４のアミノ酸３１−３５、配列番号４のアミノ酸５０−６６および配列番号４
    のアミノ酸９９−１０７を含んでなる単離されたポリペプチド。
67. 配列番号２のアミノ酸配列を含んでなる単離されたポリペプチド。
68. 配列番号４のアミノ酸配列を含んでなる単離されたポリペプチド。
69. 最低１個の保存的アミノ酸置換を含んでなり、最低１０^７Ｍ^−１の結合親和性でのβア
    ミロイドペプチド（Ａβ）への特異的結合に導く能力を保持する、配列番号２のアミノ酸
    配列を含んでなるポリペプチドのバリアント。
70. 最低１個の保存的アミノ酸置換を含んでなり、最低１０^７Ｍ^−１の結合親和性でβアミ
    ロイドペプチド（Ａβ）を特異的に結合する能力を保持する、配列番号４のアミノ酸配列
    を含んでなるポリペプチドのバリアント。
71. 配列番号２のアミノ酸配列の残基１−１１２を含んでなるか、若しくは配列番号４のア
    ミノ酸配列の残基１−１１９を含んでなる、単離されたポリペプチド。
72. 請求項１、３、４、６、８、１０、、１１、１３、１５および１８のいずれか１つに記
    載のＬ鎖をコードする単離された核酸分子。
73. 請求項２、５、７、９、１２、１４、１６、１９および２０のいずれか１つに記載のＨ
    鎖をコードする単離された核酸分子。
74. 請求項６４−７１のいずれか１つに記載のポリペプチドをコードする単離された核酸分
    子。
75. 請求項３２−５７のいずれか１つに記載の免疫グロブリンをコードする単離された核酸
    分子。
76. 配列番号１若しくは３のヌクレオチド配列を含んでなる単離された核酸分子。
77. 請求項７２−７６のいずれかに記載の核酸分子を含んでなるベクター。
78. 請求項７２−７６のいずれかに記載の核酸分子を含んでなる宿主細胞。
79. 請求項４５に記載の宿主細胞を抗体若しくはそのフラグメントが産生されるような条件
    下で培養すること、および前記抗体を宿主細胞若しくは培養物から単離することを含んで
    なる、抗体若しくはそのフラグメントの製造方法。
80. 抗体若しくはそのフラグメントをコードする核酸分子を発現する宿主細胞を前記抗体若
    しくはフラグメントが産生されるような条件下で培養すること、および前記抗体若しくは
    フラグメントを宿主細胞若しくは培養物から単離することを含んでなり、前記抗体若しく
    はフラグメントが配列番号２のアミノ酸２４−３９、配列番号２のアミノ酸５５−６１お
    よび配列番号２のアミノ酸９４−１０２を含んでなる、抗体若しくはそのフラグメントの
    製造方法。
81. 抗体若しくはそのフラグメントをコードする核酸分子を発現する宿主細胞を前記抗体若
    しくはフラグメントが産生されるような条件下で培養すること、および前記抗体を宿主細
    胞若しくは培養物から単離することを含んでなり、前記抗体若しくはフラグメントが配列
    番号４のアミノ酸３１−３５、配列番号４のアミノ酸５０−６６および配列番号４のアミ
    ノ酸９９−１１２を含んでなる、抗体若しくはそのフラグメントの製造方法。
82. 解明された免疫グロブリン構造に基づき３Ｄ６可変領域の三次元構造をモデル化するこ
    と、および３Ｄ６免疫グロブリン可変領域のコンホメーション若しくは機能に影響を及ぼ
    すことが可能な残基について前記モデルを解析してその結果置換の影響を受けやすい残基
    を同定することを含んでなる、ヒト化３Ｄ６免疫グロブリン可変枠組み領域中の置換の影
    響を受けやすい残基の同定方法。
83. ３Ｄ６免疫グロブリン、３Ｄ６免疫グロブリン鎖若しくはそれらのドメインの三次元像
    の作製における配列番号２若しくは配列番号４として示される可変領域配列またはそのい
    ずれかの部分の使用。
84. （ｉ）配列番号１４として示される１０Ｄ５免疫グロブリンＬ鎖可変領域配列からの可
    変領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）、および（ｉｉ）ヒトアクセプター免疫グロブリンＬ
    鎖配列からの可変枠組み領域を含んでなるが、但し、最低１個の枠組み残基がマウス１０
    Ｄ５ Ｌ鎖可変領域配列からの対応するアミノ酸残基で置換され、該枠組み残基が：
    （ａ）抗原を直接非共有結合する残基；
    （ｂ）ＣＤＲに隣接する残基；
    （ｃ）ＣＤＲと相互作用する残基；および
    （ｄ）ＶＬ−ＶＨ界面に参画する残基
    よりなる群から選択される、ヒト化免疫グロブリンＬ鎖。
85. （ｉ）配列番号１６として示される１０Ｄ５免疫グロブリンＨ鎖可変領域配列からの可
    変領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）、および（ｉｉ）ヒトアクセプター免疫グロブリンＨ
    鎖からの可変枠組み領域を含んでなるが、但し、最低１個の枠組み残基がマウス１０Ｄ５
    Ｈ鎖可変領域配列からの対応するアミノ酸残基で置換され、該枠組み残基が：
    （ａ）抗原を直接非共有結合する残基；
    （ｂ）ＣＤＲに隣接する残基；
    （ｃ）ＣＤＲと相互作用する残基；および
    （ｄ）ＶＬ−ＶＨ界面に参画する残基
    よりなる群から選択される、ヒト化免疫グロブリンＨ鎖。
86. ＣＤＲと相互作用する残基が、１０Ｄ５ Ｌ鎖と最低７０％の配列の同一性を共有する
    ネズミの免疫グロブリンＬ鎖の解明された構造に基づき１０Ｄ５ Ｌ鎖をモデル化するこ
    とにより同定される、請求項８４に記載のＬ鎖。
87. ＣＤＲと相互作用する残基が、１０Ｄ５ Ｌ鎖と最低８０％の配列の同一性を共有する
    ネズミの免疫グロブリンＬ鎖の解明された構造に基づき１０Ｄ５ Ｌ鎖をモデル化するこ
    とにより同定される、請求項８４に記載のＬ鎖。
88. ＣＤＲと相互作用する残基が、１０Ｄ５ Ｌ鎖と最低９０％の配列の同一性を共有する
    ネズミの免疫グロブリンＬ鎖の解明された構造に基づき１０Ｄ５ Ｌ鎖をモデル化するこ
    とにより同定される、請求項８４に記載のＬ鎖。
89. ＣＤＲと相互作用する残基が、１０Ｄ５ Ｈ鎖と最低７０％の配列の同一性を共有する
    ネズミの免疫グロブリンＨ鎖の解明された構造に基づき１０Ｄ５ Ｈ鎖をモデル化するこ
    とにより同定される、請求項８５に記載のＨ鎖。
90. ＣＤＲと相互作用する残基が、１０Ｄ５ Ｈ鎖と最低８０％の配列の同一性を共有する
    ネズミの免疫グロブリンＨ鎖の解明された構造に基づき１０Ｄ５ Ｈ鎖をモデル化するこ
    とにより同定される、請求項８５に記載のＨ鎖。
91. ＣＤＲと相互作用する残基が、１０Ｄ５ Ｈ鎖と最低９０％の配列の同一性を共有する
    ネズミの免疫グロブリンＨ鎖の解明された構造に基づき１０Ｄ５ Ｈ鎖をモデル化するこ
    とにより同定される、請求項８５に記載のＨ鎖。
92. （ｉ）配列番号１４として示される１０Ｄ５免疫グロブリンＬ鎖可変領域配列からの可
    変領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）、および（ｉｉ）ヒトアクセプター免疫グロブリンＬ
    鎖配列からの可変枠組み領域を含んでなるが、但し、最低１個の枠組み残基がマウス１０
    Ｄ５ Ｌ鎖可変領域配列からの対応するアミノ酸残基で置換され、該枠組み残基は１０Ｄ
    ５免疫グロブリンＬ鎖可変領域の三次元モデルの解析により同定されるところのＬ鎖可変
    領域のコンホメーション若しくは機能に影響を及ぼすことが可能な残基である、ヒト化免
    疫グロブリンＬ鎖。
93. （ｉ）配列番号１６として示される１０Ｄ５免疫グロブリンＨ鎖可変領域配列からの可
    変領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）、および（ｉｉ）ヒトアクセプター免疫グロブリンＨ
    鎖からの可変枠組み領域を含んでなるが、但し、最低１個の枠組み残基がマウス１０Ｄ５
    Ｈ鎖可変領域配列からの対応するアミノ酸残基で置換され、該枠組み残基は１０Ｄ５免
    疫グロブリンＨ鎖可変領域の三次元モデルの解析により同定されるところのＨ鎖可変領域
    のコンホメーション若しくは機能に影響を及ぼすことが可能な残基である、ヒト化免疫グ
    ロブリンＨ鎖。
94. 枠組み残基が、抗原と相互作用することが可能な残基、抗原結合部位に近接する残基、
    ＣＤＲと相互作用することが可能な残基、ＣＤＲに隣接する残基、ＣＤＲ残基の６Å以内
    の残基、カノニカル残基、バーニア領域残基、鎖間充填残基、希少残基、および構造モデ
    ルの表面上のグリコシル化部位残基よりなる群から選択される、請求項９２に記載のＬ鎖
    。
95. 枠組み残基が、抗原と相互作用することが可能な残基、抗原結合部位に近接する残基、
    ＣＤＲと相互作用することが可能な残基、ＣＤＲに隣接する残基、ＣＤＲ残基の６Å以内
    の残基、カノニカル残基、バーニア領域残基、鎖間充填残基、異常な残基、および構造モ
    デルの表面上のグリコシル化部位残基よりなる群から選択される、請求項９３に記載のＨ
    鎖。
96. 枠組み残基が、１０Ｄ５ Ｌ鎖と最低７０％の配列の同一性を共有するネズミの免疫グ
    ロブリンＬ鎖の解明された構造に基づき１０Ｄ５ Ｌ鎖をモデル化することにより同定さ
    れる、請求項９２若しくは９４に記載のＬ鎖。
97. 枠組み残基が、１０Ｄ５ Ｌ鎖と最低８０％の配列の同一性を共有するネズミの免疫グ
    ロブリンＬ鎖の解明された構造に基づき１０Ｄ５ Ｌ鎖をモデル化することにより同定さ
    れる、請求項９２若しくは９４に記載のＬ鎖。
98. 枠組み残基が、１０Ｄ５ Ｌ鎖と最低９０％の配列の同一性を共有するネズミの免疫グ
    ロブリンＬ鎖の解明された構造に基づき１０Ｄ５ Ｌ鎖をモデル化することにより同定さ
    れる、請求項９２若しくは９４に記載のＬ鎖。
99. 枠組み残基が、１０Ｄ５ Ｈ鎖と最低７０％の配列の同一性を共有するネズミの免疫グ
    ロブリンＨ鎖の解明された構造に基づき１０Ｄ５ Ｈ鎖をモデル化することにより同定さ
    れる、請求項９３若しくは９５に記載のＨ鎖。
100. 枠組み残基が、１０Ｄ５ Ｈ鎖と最低８０％の配列の同一性を共有するネズミの免疫グ
     ロブリンＨ鎖の解明された構造に基づき１０Ｄ５ Ｈ鎖をモデル化することにより同定さ
     れる、請求項９３若しくは９５に記載のＨ鎖。
101. 枠組み残基が、１０Ｄ５ Ｈ鎖と最低９０％の配列の同一性を共有するネズミの免疫グ
     ロブリンＨ鎖の解明された構造に基づき１０Ｄ５ Ｈ鎖をモデル化することにより同定さ
     れる、請求項９３若しくは９５に記載のＨ鎖。
102. 最低１個の希少ヒト枠組み残基が、その位置でヒト可変Ｌ鎖配列に共通であるアミノ酸
     残基で置換されている、請求項８４、８６−８８、９２、９４および９６−９８のいずれ
     か１つに記載のＬ鎖。
103. 最低１個の希少ヒト枠組み残基が、生殖系列可変Ｌ鎖配列からの対応するアミノ酸残基
     で置換されている、請求項８４、８６−８８、９２、９４および９６−９８のいずれか１
     つに記載のＬ鎖。
104. 生殖系列可変Ｌ鎖配列が、配列の同一な可変Ｌ鎖配列と最低７０％の同一性を共有する
     免疫グロブリンのものである、請求項１０３に記載のＬ鎖。
105. 生殖系列可変Ｌ鎖配列が、配列の同一な可変Ｌ鎖配列と最低８０％の同一性を共有する
     免疫グロブリンのものである、請求項１０３に記載のＬ鎖。
106. 生殖系列可変Ｌ鎖配列が、配列の同一な可変Ｌ鎖配列と最低９０％の同一性を共有する
     免疫グロブリンのものである、請求項１０３に記載のＬ鎖。
107. 最低１個の希少ヒト枠組み残基が、その位置でヒト可変Ｈ鎖配列に共通であるアミノ酸
     残基で置換されている、請求項８５、８９−９１、９３および９９−１０１のいずれか１
     つに記載のＨ鎖。
108. 最低１個の希少ヒト枠組み残基が、生殖系列可変Ｈ鎖配列からの対応するアミノ酸残基
     で置換されている、請求項８５、８９−９１、９３および９９−１０１のいずれか１つに
     記載のＨ鎖。
109. 生殖系列可変Ｈ鎖配列が、配列番号１６の可変Ｈ鎖配列のものであるか、若しくはそれ
     との最低７０％の同一性の共有している、請求項１０８に記載のＨ鎖。
110. 生殖系列可変Ｈ鎖配列が、配列番号１６の可変Ｈ鎖配列のものであるか、若しくはそれ
     と最低８０％の同一性の共有している、請求項１０８に記載のＨ鎖。
111. 生殖系列可変Ｈ鎖配列が、配列番号１６の可変Ｈ鎖配列のものであるか、若しくはそれ
     と最低９０％の同一性の共有している、請求項１０８に記載のＨ鎖。
112. 希少枠組み残基が、Ｌ鎖可変領域サブグループのヒトＬ鎖可変領域配列の１０％未満の
     その位置での存在に基づいて選択され、また、共通残基はＬ鎖可変領域サブグループの配
     列の５０％以上のその位置での存在に基づいて選択される、請求項１０２−１０６のいず
     れか１つに記載のＬ鎖。
113. 希少枠組み残基が、Ｈ鎖可変領域サブグループのヒトＨ鎖可変領域配列の１０％未満の
     その位置での存在に基づいて選択され、また、共通残基はＨ鎖可変領域サブグループの配
     列の５０％以上のその位置での存在に基づいて選択される、請求項１０７−１１１のいず
     れか１つに記載のＨ鎖。
114. 請求項８４、８６−８８、９２、９４および９６−９８のいずれか１つに記載のＬ鎖、
     ならびに請求項８５、８９−９１および９３ならびに９９−１０１のいずれか１つに記載
     のＨ鎖を含んでなるヒト化免疫グロブリン、若しくは前記免疫グロブリンの抗原結合フラ
     グメント。
115. 最低１０^−７Ｍの結合親和性でβアミロイドペプチド（Ａβ）に特異的に結合する、請
     求項１１４に記載の免疫グロブリン若しくは抗原結合フラグメント。
116. 最低１０^−８Ｍの結合親和性でβアミロイドペプチド（Ａβ）に特異的に結合する、請
     求項１１４に記載の免疫グロブリン若しくは抗原結合フラグメント。
117. 最低１０^−９Ｍの結合親和性でβアミロイドペプチド（Ａβ）に特異的に結合する、請
     求項１１４に記載の免疫グロブリン若しくは抗原結合フラグメント。
118. Ｈ鎖のアイソタイプがγ１である、請求項１１４に記載の免疫グロブリン若しくは抗原
     結合フラグメント。
119. 凝集したβアミロイドペプチド（Ａβ）に結合する、請求項１１４に記載の免疫グロブ
     リン若しくは抗原結合フラグメント。
120. βアミロイドペプチド（Ａβ）の食作用を媒介する、請求項１１４に記載の免疫グロブ
     リン若しくは抗原結合フラグメント。
121. 被験体の血液脳関門を横断する、請求項１１４に記載の免疫グロブリン若しくは抗原結
     合フラグメント。
122. 被験体のβアミロイドペプチド（Ａβ）斑負荷を低下させる、請求項１１４に記載の免
     疫グロブリン若しくは抗原結合フラグメント。
123. （ａ）ヒト化Ｌ鎖が、配列番号１４と呼称されるマウス１０Ｄ５免疫グロブリンＬ鎖可
     変ドメインの対応する相補性決定領域からのアミノ酸配列を有する３個の相補性決定領域
     （ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）、ならびにヒトＬ鎖可変領域枠組み配列からの可
     変領域枠組みを含んでなるが、但し、カノニカル残基、バーニア残基、充填残基および希
     少残基よりなる群から選択される最低１個の枠組み残基が、マウス１０Ｄ５免疫グロブリ
     ンＬ鎖可変領域枠組みの同等な位置に存在する同一のアミノ酸残基により占有され；かつ
     （ｂ）ヒト化Ｈ鎖が、配列番号１６と呼称されるマウス１０Ｄ５免疫グロブリンＨ鎖可変
     ドメインの対応する相補性決定領域からのアミノ酸配列を有する３個の相補性決定領域（
     ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）、ならびにヒトＨ鎖可変領域枠組み配列からの可変
     領域枠組みを含んでなるが、但し、カノニカル残基、バーニア残基、充填残基および希少
     残基よりなる第二の群から選択される最低１個の枠組み残基が、マウス１０Ｄ５免疫グロ
     ブリンＨ鎖可変領域枠組みの同等な位置に存在する同一のアミノ酸残基により占有され；
     最低１０^−７Ｍの結合親和性でβアミロイドペプチド（「Ａβ」）に特異的に結合し、１
     ０Ｄ５免疫グロブリンは配列番号１４と呼称される可変ドメインをもつＬ鎖および配列番
     号１６と呼称される可変ドメインをもつＨ鎖を有する、
     ヒト化Ｈ鎖およびヒト化Ｌ鎖を含んでなるヒト化免疫グロブリン。
124. ヒトＬ鎖可変領域枠組みがκ Ｌ鎖可変領域からである、請求項１２３に記載のヒト化
     免疫グロブリン。
125. ヒトＨ鎖可変領域枠組みがＩｇＧ１ Ｈ鎖可変領域からである、請求項１２３に記載の
     ヒト化免疫グロブリン。
126. Ｌ鎖可変領域枠組みが、１０Ｄ５免疫グロブリンのＬ鎖配列との最低７０％の配列の同
     一性を有するヒト免疫グロブリンＬ鎖からである、請求項１２３に記載のヒト化免疫グロ
     ブリン。
127. Ｈ鎖可変領域枠組みが、１０Ｄ５免疫グロブリンのＨ鎖配列との最低７０％の配列の同
     一性を有するヒト免疫グロブリンＨ鎖からである、請求項１２３に記載のヒト化免疫グロ
     ブリン。
128. ヒト化Ｌ鎖が、マウス１０Ｄ５ Ｈ鎖の対応する相補性決定領域に同一である相補性決
     定領域を含んでなり、かつ、ヒト化Ｈ鎖は、マウス１０Ｄ５ Ｈ鎖の対応する相補性決定
     領域に同一である相補性決定領域を含んでなる、請求項１２３に記載のヒト化免疫グロブ
     リン。
129. 配列番号１４として示される１０Ｄ５の可変Ｌ鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ１、Ｃ
     ＤＲ２およびＣＤＲ３）を含んでなるヒト化抗体。
130. 配列番号１６として示される１０Ｄ５の可変Ｈ鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ１、
     ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）を含んでなるヒト化抗体。
131. マウス１０Ｄ５抗体からの相補性決定領域（ＣＤＲ）に対応するＣＤＲを含んでなる可
     変領域を含んでなる、βアミロイドペプチド（Ａβ）に特異的に結合するヒト化抗体若し
     くはその抗原結合フラグメント。
132. 実質的に配列番号１４若しくは配列番号１６に示されるところの可変領域配列、および
     ヒト免疫グロブリンからの定常領域配列を含んでなるキメラ免疫グロブリン。
133. 請求項１１４−１３１のいずれか１つに記載のヒト化免疫グロブリンの有効投薬量を患
     者に投与することを含んでなる、患者におけるアミロイド原性疾患の予防若しくは治療方
     法。
134. 請求項１１４−１３１のいずれか１つに記載のヒト化免疫グロブリンの有効投薬量を患
     者に投与することを含んでなる、患者におけるアルツハイマー病の予防若しくは治療方法
     。
135. ヒト化免疫グロブリンの有効投薬量が１ｍｇ／ｋｇ体重である、請求項１３４に記載の
     方法。
136. ヒト化免疫グロブリンの有効投薬量が１０ｍｇ／ｋｇ体重である、請求項１３４に記載
     の方法。
137. 請求項１１４−１３１のいずれか１つに記載の免疫グロブリンおよび製薬学的担体を含
     んでなる製薬学的組成物。
138. 配列番号２のアミノ酸２４−３９、配列番号２のアミノ酸５５−６１および配列番号２
     のアミノ酸９４−１０２よりなる群から選択される配列番号２のフラグメントを含んでな
     る単離されたポリペプチド。
139. 配列番号２のアミノ酸２４−３９、配列番号２のアミノ酸５５−６１および配列番号２
     のアミノ酸９４−１０２を含んでなる単離されたポリペプチド。
140. 配列番号４のアミノ酸３１−３７、配列番号４のアミノ酸５２−６７および配列番号４
     のアミノ酸１００−１１２よりなる群から選択される配列番号４のフラグメントを含んで
     なる単離されたポリペプチド。
141. 配列番号４のアミノ酸３１−３７、配列番号４のアミノ酸５２−６７および配列番号４
     のアミノ酸１００−１１２を含んでなる単離されたポリペプチド。
142. 配列番号１４のアミノ酸配列を含んでなる単離されたポリペプチド。
143. 配列番号１６のアミノ酸配列を含んでなる単離されたポリペプチド。
144. 最低１個の保存的アミノ酸置換を含んでなり、最低１０^−７Ｍの結合親和性でβアミロ
     イドペプチド（Ａβ）を特異的に結合する能力を保持する、配列番号１４のアミノ酸配列
     を含んでなるポリペプチドのバリアント。
145. 最低１個の保存的アミノ酸置換を含んでなり、最低１０^−７Ｍの結合親和性でのβアミ
     ロイドペプチド（Ａβ）への特異的結合に導く能力を保持する、配列番号１６のアミノ酸
     配列を含んでなるポリペプチドのバリアント。
146. 配列番号１４のアミノ酸配列の残基１−１１２を含んでなるか、若しくは配列番号１６
     のアミノ酸配列の残基１−１２３を含んでなる単離されたポリペプチド。
147. 請求項８４、８６−８８、９２、９４および９６−９８のいずれか１つに記載のＬ鎖を
     コードする単離された核酸分子。
148. 請求項８５、８９−９１、９３および９９−１０１のいずれか１つに記載のＨ鎖をコー
     ドする単離された核酸分子。
149. 請求項１３９−１４６のいずれか１つに記載のポリペプチドをコードする単離された核
     酸分子。
150. 請求項１１４−１３２のいずれか１つに記載の免疫グロブリンをコードする単離された
     核酸分子。
151. 配列番号１３若しくは１５のヌクレオチド配列を含んでなる単離された核酸分子。
152. 請求項１４７−１５１のいずれかに記載の核酸分子を含んでなるベクター。
153. 請求項１４７−１５１のいずれかに記載の核酸分子を含んでなる宿主細胞。
154. 請求項１５３に記載の宿主細胞を抗体若しくはそのフラグメントが産生されるような条
     件下で培養すること、および前記抗体を該宿主細胞若しくは培養物から単離することを含
     んでなる、抗体若しくはそのフラグメントの製造方法。
155. 抗体若しくはそのフラグメントをコードする核酸分子を発現する宿主細胞を前記抗体若
     しくはフラグメントが産生されるような条件下で培養すること、および前記抗体を該宿主
     細胞若しくは培養物から単離することを含んでなり、前記抗体若しくはフラグメントが配
     列番号２のアミノ酸２４−３９、配列番号２のアミノ酸５５−６１および配列番号２のア
     ミノ酸９４−１０２を含んでなる、抗体若しくはそのフラグメントの製造方法。
156. 抗体若しくはそのフラグメントをコードする核酸分子を発現する宿主細胞を前記抗体若
     しくはフラグメントが産生されるような条件下で培養すること、および前記抗体を該宿主
     細胞若しくは培養物から単離することを含んでなり、前記抗体若しくはフラグメントが配
     列番号４のアミノ酸３１−３７、配列番号４のアミノ酸５２−６７および配列番号４のア
     ミノ酸１００−１１２を含んでなる、抗体若しくはそのフラグメントの製造方法。
157. 解明された免疫グロブリンの構造に基づいて１０Ｄの５可変領域の三次元構造をモデル
     化すること、および１０Ｄ５免疫グロブリン可変領域のコンホメーション若しくは機能に
     影響を及ぼすことが可能な残基について前記モデルを解析して、その結果置換の影響を受
     けやすい残基を同定することを含んでなる、ヒト化１０Ｄ５免疫グロブリン可変枠組み領
     域中の置換の影響を受けやすい残基の同定方法。
158. １０Ｄ５免疫グロブリン、１０Ｄ５免疫グロブリン鎖若しくはそれらのドメインの三次
     元像の作製における配列番号１４若しくは配列番号１６として示される可変領域配列また
     はそれらのいずれかの部分の使用。

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