CN108064242A - 抗gitr抗体和其使用方法 - Google Patents
抗gitr抗体和其使用方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108064242A CN108064242A CN201580041149.7A CN201580041149A CN108064242A CN 108064242 A CN108064242 A CN 108064242A CN 201580041149 A CN201580041149 A CN 201580041149A CN 108064242 A CN108064242 A CN 108064242A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- antibody
- gitr
- seq
- mankind
- amino acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 156
- 101000801234 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 18 Proteins 0.000 title abstract description 12
- 102100033728 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 18 Human genes 0.000 title abstract description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 238
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 76
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims abstract description 62
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 44
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 34
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims abstract description 32
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims abstract description 26
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 claims abstract description 9
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 claims abstract description 6
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 504
- 102100035360 Cerebellar degeneration-related antigen 1 Human genes 0.000 claims description 296
- 239000011324 bead Substances 0.000 claims description 256
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 151
- 229910052721 tungsten Inorganic materials 0.000 claims description 146
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 145
- 229910052727 yttrium Inorganic materials 0.000 claims description 142
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 123
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 claims description 95
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 81
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 claims description 73
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 67
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 claims description 65
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 64
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 64
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 64
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 claims description 61
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 49
- 229910052720 vanadium Inorganic materials 0.000 claims description 49
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 48
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 47
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 44
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 44
- 101000777550 Homo sapiens CCN family member 2 Proteins 0.000 claims description 43
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 43
- 102000047612 human CCN2 Human genes 0.000 claims description 43
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 38
- 102100022153 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Human genes 0.000 claims description 31
- 101710165473 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 claims description 31
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 31
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 claims description 29
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 claims description 27
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 claims description 27
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 26
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 26
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 26
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 25
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 25
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 25
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 claims description 22
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 20
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 20
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 20
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 19
- 239000000556 agonist Substances 0.000 claims description 18
- 241000282553 Macaca Species 0.000 claims description 17
- 230000008473 connective tissue growth Effects 0.000 claims description 17
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims description 17
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 17
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 16
- 239000012636 effector Substances 0.000 claims description 15
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 claims description 14
- 102000009490 IgG Receptors Human genes 0.000 claims description 14
- 230000009137 competitive binding Effects 0.000 claims description 13
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 claims description 13
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 claims description 12
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 claims description 12
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 11
- 230000006870 function Effects 0.000 claims description 11
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 11
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 11
- 102220469588 Voltage-dependent L-type calcium channel subunit beta-2_D60A_mutation Human genes 0.000 claims description 10
- -1 Amino Chemical group 0.000 claims description 9
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 9
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 9
- 230000008685 targeting Effects 0.000 claims description 9
- 102100029204 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-a Human genes 0.000 claims description 8
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 8
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 8
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 8
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 8
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 101000917826 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-a Proteins 0.000 claims description 7
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 claims description 7
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 7
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 claims description 7
- 102100026122 High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Human genes 0.000 claims description 6
- 101000913074 Homo sapiens High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Proteins 0.000 claims description 6
- 101000604674 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 4-1 Proteins 0.000 claims description 6
- 102100038198 Immunoglobulin kappa variable 4-1 Human genes 0.000 claims description 6
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 6
- 238000013459 approach Methods 0.000 claims description 6
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 6
- 101000998953 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 1-2 Proteins 0.000 claims description 5
- 101001047520 Homo sapiens Probable non-functional immunoglobulin kappa variable 3-7 Proteins 0.000 claims description 5
- 102100036887 Immunoglobulin heavy variable 1-2 Human genes 0.000 claims description 5
- YGACXVRLDHEXKY-WXRXAMBDSA-N O[C@H](C[C@H]1c2c(cccc2F)-c2cncn12)[C@H]1CC[C@H](O)CC1 Chemical compound O[C@H](C[C@H]1c2c(cccc2F)-c2cncn12)[C@H]1CC[C@H](O)CC1 YGACXVRLDHEXKY-WXRXAMBDSA-N 0.000 claims description 5
- 102100022959 Probable non-functional immunoglobulin kappa variable 3-7 Human genes 0.000 claims description 5
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 5
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 5
- 230000033581 fucosylation Effects 0.000 claims description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 5
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 claims description 5
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 claims description 4
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 claims description 4
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 4
- 101000998947 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 1-46 Proteins 0.000 claims description 4
- 101001037147 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 1-69 Proteins 0.000 claims description 4
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 claims description 4
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 claims description 4
- 102100036888 Immunoglobulin heavy variable 1-46 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100040232 Immunoglobulin heavy variable 1-69 Human genes 0.000 claims description 4
- 229940126547 T-cell immunoglobulin mucin-3 Drugs 0.000 claims description 4
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 claims description 4
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 150000002475 indoles Chemical class 0.000 claims description 4
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 4
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 4
- 238000001890 transfection Methods 0.000 claims description 4
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 claims description 4
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 4
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 3
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 claims description 3
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 claims description 3
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 claims description 3
- 101000998952 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 1-3 Proteins 0.000 claims description 3
- 101000989065 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 7-4-1 Proteins 0.000 claims description 3
- 102100036886 Immunoglobulin heavy variable 1-3 Human genes 0.000 claims description 3
- 102100029420 Immunoglobulin heavy variable 7-4-1 Human genes 0.000 claims description 3
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 claims description 3
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 claims description 3
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 claims description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 3
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 3
- 208000007860 Anus Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010004146 Basal cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010006143 Brain stem glioma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 102000016680 Dioxygenases Human genes 0.000 claims description 2
- 108010028143 Dioxygenases Proteins 0.000 claims description 2
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 206010017993 Gastrointestinal neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 claims description 2
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 claims description 2
- 102100034458 Hepatitis A virus cellular receptor 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 101710083479 Hepatitis A virus cellular receptor 2 homolog Proteins 0.000 claims description 2
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 claims description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 claims description 2
- 208000005726 Inflammatory Breast Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010021980 Inflammatory carcinoma of the breast Diseases 0.000 claims description 2
- 102000017578 LAG3 Human genes 0.000 claims description 2
- 101150030213 Lag3 gene Proteins 0.000 claims description 2
- 102000043136 MAP kinase family Human genes 0.000 claims description 2
- 108091054455 MAP kinase family Proteins 0.000 claims description 2
- 241000712079 Measles morbillivirus Species 0.000 claims description 2
- 101100407308 Mus musculus Pdcd1lg2 gene Proteins 0.000 claims description 2
- 229940124060 PD-1 antagonist Drugs 0.000 claims description 2
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 2
- 108700030875 Programmed Cell Death 1 Ligand 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100024213 Programmed cell death 1 ligand 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 2
- 206010061934 Salivary gland cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 241001655322 Streptomycetales Species 0.000 claims description 2
- 102000004398 TNF receptor-associated factor 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000920 TNF receptor-associated factor 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 108090000925 TNF receptor-associated factor 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004399 TNF receptor-associated factor 3 Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000922 TNF receptor-associated factor 3 Proteins 0.000 claims description 2
- 102000003715 TNF receptor-associated factor 4 Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000008 TNF receptor-associated factor 4 Proteins 0.000 claims description 2
- 102000003718 TNF receptor-associated factor 5 Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000001 TNF receptor-associated factor 5 Proteins 0.000 claims description 2
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 230000001270 agonistic effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 2
- 201000011165 anus cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 2
- 201000001531 bladder carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 claims description 2
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000000893 fibroproliferative effect Effects 0.000 claims description 2
- 201000004653 inflammatory breast carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 claims description 2
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000026037 malignant tumor of neck Diseases 0.000 claims description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 claims description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 210000000581 natural killer T-cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000005134 plasmacytoid dendritic cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000003804 salivary gland carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 230000035939 shock Effects 0.000 claims description 2
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 230000008093 supporting effect Effects 0.000 claims description 2
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 claims description 2
- 208000008732 thymoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000010570 urinary bladder carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000013013 vulvar carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 101000737793 Homo sapiens Cerebellar degeneration-related antigen 1 Proteins 0.000 claims 22
- 102220013477 rs117560775 Human genes 0.000 claims 5
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims 5
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 claims 2
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 claims 2
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 claims 2
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 claims 1
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 claims 1
- 208000017897 Carcinoma of esophagus Diseases 0.000 claims 1
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 claims 1
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 claims 1
- 102100024216 Programmed cell death 1 ligand 1 Human genes 0.000 claims 1
- 102000004393 TNF receptor-associated factor 2 Human genes 0.000 claims 1
- 208000002352 blister Diseases 0.000 claims 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims 1
- 201000003914 endometrial carcinoma Diseases 0.000 claims 1
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 claims 1
- 238000006213 oxygenation reaction Methods 0.000 claims 1
- 208000029340 primitive neuroectodermal tumor Diseases 0.000 claims 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 abstract description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 553
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 553
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 553
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 512
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 511
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 466
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 112
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 96
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 80
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 55
- 238000001994 activation Methods 0.000 description 44
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 38
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 38
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 25
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 22
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 19
- 108010047620 Phytohemagglutinins Proteins 0.000 description 17
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 17
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 description 17
- 101000611183 Homo sapiens Tumor necrosis factor Proteins 0.000 description 16
- PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N phorbol 13-acetate 12-myristate Chemical compound C([C@]1(O)C(=O)C(C)=C[C@H]1[C@@]1(O)[C@H](C)[C@H]2OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)C(CO)=C[C@H]1[C@H]1[C@]2(OC(C)=O)C1(C)C PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N 0.000 description 16
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 16
- 102100029205 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-b Human genes 0.000 description 15
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 15
- 102100029193 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Human genes 0.000 description 14
- 230000008859 change Effects 0.000 description 14
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 14
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 14
- 101000917824 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-b Proteins 0.000 description 13
- 102100039641 Protein MFI Human genes 0.000 description 13
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 12
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 12
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 12
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 12
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 12
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 12
- 108700022034 Opsonin Proteins Proteins 0.000 description 11
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 11
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 11
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 10
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 10
- 239000002085 irritant Substances 0.000 description 10
- 231100000021 irritant Toxicity 0.000 description 10
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 8
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 8
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 8
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 7
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 7
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 7
- 238000011160 research Methods 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 230000004940 costimulation Effects 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 6
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 6
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 6
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 6
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 6
- 238000012867 alanine scanning Methods 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 230000036541 health Effects 0.000 description 5
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 5
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 239000011049 pearl Substances 0.000 description 5
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 5
- 102220091023 rs377377296 Human genes 0.000 description 5
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 5
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 4
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 4
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 4
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 4
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 241000282577 Pan troglodytes Species 0.000 description 4
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 4
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 4
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 4
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 4
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 4
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 4
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 4
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 3
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 3
- 101000998950 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 1-18 Proteins 0.000 description 3
- 102100026120 IgG receptor FcRn large subunit p51 Human genes 0.000 description 3
- 101710177940 IgG receptor FcRn large subunit p51 Proteins 0.000 description 3
- 102100036884 Immunoglobulin heavy variable 1-18 Human genes 0.000 description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 description 3
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 3
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 3
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 3
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 3
- 238000000151 deposition Methods 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- 238000002050 diffraction method Methods 0.000 description 3
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 3
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QGVLYPPODPLXMB-UBTYZVCOSA-N (1aR,1bS,4aR,7aS,7bS,8R,9R,9aS)-4a,7b,9,9a-tetrahydroxy-3-(hydroxymethyl)-1,1,6,8-tetramethyl-1,1a,1b,4,4a,7a,7b,8,9,9a-decahydro-5H-cyclopropa[3,4]benzo[1,2-e]azulen-5-one Chemical compound C1=C(CO)C[C@]2(O)C(=O)C(C)=C[C@H]2[C@@]2(O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@@]3(O)C(C)(C)[C@H]3[C@@H]21 QGVLYPPODPLXMB-UBTYZVCOSA-N 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 16-Epiaffinine Natural products C1C(C2=CC=CC=C2N2)=C2C(=O)CC2C(=CC)CN(C)C1C2CO PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZBMRKNMTMPPMMK-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4-[hydroxy(methyl)phosphoryl]butanoic acid;azane Chemical compound [NH4+].CP(O)(=O)CCC(N)C([O-])=O ZBMRKNMTMPPMMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000208340 Araliaceae Species 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 2
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 2
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- YZCKVEUIGOORGS-OUBTZVSYSA-N Deuterium Chemical compound [2H] YZCKVEUIGOORGS-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 2
- 206010015866 Extravasation Diseases 0.000 description 2
- 108010021472 Fc gamma receptor IIB Proteins 0.000 description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 241000282575 Gorilla Species 0.000 description 2
- 101100334515 Homo sapiens FCGR3A gene Proteins 0.000 description 2
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 2
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100027268 Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Human genes 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 101710099301 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 2
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 2
- 241000282576 Pan paniscus Species 0.000 description 2
- 235000005035 Panax pseudoginseng ssp. pseudoginseng Nutrition 0.000 description 2
- 235000003140 Panax quinquefolius Nutrition 0.000 description 2
- 241000009328 Perro Species 0.000 description 2
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 2
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102220495682 Zinc finger protein 324B_S63G_mutation Human genes 0.000 description 2
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 2
- KQNZDYYTLMIZCT-KQPMLPITSA-N brefeldin A Chemical compound O[C@@H]1\C=C\C(=O)O[C@@H](C)CCC\C=C\[C@@H]2C[C@H](O)C[C@H]21 KQNZDYYTLMIZCT-KQPMLPITSA-N 0.000 description 2
- JUMGSHROWPPKFX-UHFFFAOYSA-N brefeldin-A Natural products CC1CCCC=CC2(C)CC(O)CC2(C)C(O)C=CC(=O)O1 JUMGSHROWPPKFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 239000000306 component Substances 0.000 description 2
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 2
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 2
- 229910052805 deuterium Inorganic materials 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 150000002168 ethanoic acid esters Chemical class 0.000 description 2
- 230000036251 extravasation Effects 0.000 description 2
- 235000008434 ginseng Nutrition 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000047758 human TNFRSF18 Human genes 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012004 kinetic exclusion assay Methods 0.000 description 2
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 238000012900 molecular simulation Methods 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 230000004719 natural immunity Effects 0.000 description 2
- 210000002501 natural regulatory T cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGVLYPPODPLXMB-QXYKVGAMSA-N phorbol Natural products C[C@@H]1[C@@H](O)[C@]2(O)[C@H]([C@H]3C=C(CO)C[C@@]4(O)[C@H](C=C(C)C4=O)[C@@]13O)C2(C)C QGVLYPPODPLXMB-QXYKVGAMSA-N 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 2
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 2
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 2
- 210000001948 pro-b lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 235000013930 proline Nutrition 0.000 description 2
- 102220003294 rs267606994 Human genes 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZADWXFSZEAPBJS-SNVBAGLBSA-N (2r)-2-amino-3-(1-methylindol-3-yl)propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2N(C)C=C(C[C@@H](N)C(O)=O)C2=C1 ZADWXFSZEAPBJS-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 1
- YPBKTZBXSBLTDK-PKNBQFBNSA-N (3e)-3-[(3-bromo-4-fluoroanilino)-nitrosomethylidene]-4-[2-(sulfamoylamino)ethylamino]-1,2,5-oxadiazole Chemical compound NS(=O)(=O)NCCNC1=NON\C1=C(N=O)/NC1=CC=C(F)C(Br)=C1 YPBKTZBXSBLTDK-PKNBQFBNSA-N 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 101000642536 Apis mellifera Venom serine protease 34 Proteins 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102220533151 Baculoviral IAP repeat-containing protein 5_C57A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220533202 Baculoviral IAP repeat-containing protein 5_D71A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220533147 Baculoviral IAP repeat-containing protein 5_E65A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220586405 CDGSH iron-sulfur domain-containing protein 1_Q76A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220586401 CDGSH iron-sulfur domain-containing protein 1_S68A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220591067 Cellular tumor antigen p53_T55A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220572027 Claudin-17_R59A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 1
- 102220486588 ESF1 homolog_W70A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 description 1
- 108010021468 Fc gamma receptor IIA Proteins 0.000 description 1
- 102100027581 Forkhead box protein P3 Human genes 0.000 description 1
- 102220646023 Galectin-10_M73A_mutation Human genes 0.000 description 1
- UKKNTTCNGZLJEX-WHFBIAKZSA-N Gln-Ser Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UKKNTTCNGZLJEX-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102000051366 Glycosyltransferases Human genes 0.000 description 1
- 108700023372 Glycosyltransferases Proteins 0.000 description 1
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 description 1
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 101000861452 Homo sapiens Forkhead box protein P3 Proteins 0.000 description 1
- 101000597779 Homo sapiens Tumor necrosis factor ligand superfamily member 18 Proteins 0.000 description 1
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 1
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 1
- 102000003816 Interleukin-13 Human genes 0.000 description 1
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 description 1
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- RNKSNIBMTUYWSH-YFKPBYRVSA-N L-prolylglycine Chemical compound [O-]C(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 RNKSNIBMTUYWSH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 101100425749 Mus musculus Tnfrsf18 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000597780 Mus musculus Tumor necrosis factor ligand superfamily member 18 Proteins 0.000 description 1
- 244000270834 Myristica fragrans Species 0.000 description 1
- 235000009421 Myristica fragrans Nutrition 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 1
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 1
- 229940123751 PD-L1 antagonist Drugs 0.000 description 1
- 102220541547 PDZ domain-containing protein GIPC1_C66A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 206010036590 Premature baby Diseases 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 102220472212 Protein Wnt-2_C67A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 102220492414 Ribulose-phosphate 3-epimerase_H35A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 1
- 101100221606 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) COS7 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000220287 Sedum rubrotinctum Species 0.000 description 1
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- UCKMPCXJQFINFW-UHFFFAOYSA-N Sulphide Chemical compound [S-2] UCKMPCXJQFINFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102220617491 Syndecan-4_V75A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102100034779 TRAF family member-associated NF-kappa-B activator Human genes 0.000 description 1
- 102220607778 TYRO protein tyrosine kinase-binding protein_E64A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100035283 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 18 Human genes 0.000 description 1
- 102220481607 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 14_Y61A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220469585 Voltage-dependent L-type calcium channel subunit beta-2_P62A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220479829 Voltage-dependent L-type calcium channel subunit beta-2_R56K_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102000012086 alpha-L-Fucosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010061314 alpha-L-Fucosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000003302 anti-idiotype Effects 0.000 description 1
- 230000002155 anti-virotic effect Effects 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000006472 autoimmune response Effects 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000006287 biotinylation Effects 0.000 description 1
- 238000007413 biotinylation Methods 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 210000004970 cd4 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 229950006370 epacadostat Drugs 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 238000009313 farming Methods 0.000 description 1
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003147 glycosyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 1
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 1
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 229950009034 indoximod Drugs 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000001702 nutmeg Substances 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008380 pattern binding Effects 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 125000001500 prolyl group Chemical class [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 108010029020 prolylglycine Proteins 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 239000011435 rock Substances 0.000 description 1
- 102220277381 rs1375079282 Human genes 0.000 description 1
- 102200127268 rs137853826 Human genes 0.000 description 1
- 102220341949 rs1555450681 Human genes 0.000 description 1
- 102220044576 rs200254470 Human genes 0.000 description 1
- 102200114509 rs201382018 Human genes 0.000 description 1
- 102220133657 rs28909989 Human genes 0.000 description 1
- 102220237139 rs376184349 Human genes 0.000 description 1
- 102220085474 rs72655967 Human genes 0.000 description 1
- 102220099379 rs770702450 Human genes 0.000 description 1
- 102200109183 rs879253818 Human genes 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 238000004088 simulation Methods 0.000 description 1
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000005829 trimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
- 238000002424 x-ray crystallography Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- A61K39/464416—Receptors for cytokines
- A61K39/464417—Receptors for tumor necrosis factors [TNF], e.g. lymphotoxin receptor [LTR], CD30
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/10—Drugs for disorders of the urinary system of the bladder
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
- A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/502—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing non-proliferative effects
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
- A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterized by the route of administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/75—Agonist effect on antigen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- G01N2333/70578—NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30 CD40 or CD95
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Virology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Zoology (AREA)
Abstract
本公开提供了特异性地结合至人类糖皮质激素诱导的TNFR家族相关受体(GITR)的抗体和包含这类抗体的组合物。在一个特定方面，抗体特异性地结合至人类GITR并且调节GITR活性，例如，利用这类抗体增强、活化或诱导GITR活性。本公开还提供了通过施用特异性地结合至人类GITR并且调节GITR活性，例如，增强、活化或诱导GITR活性的抗体治疗病症，诸如癌症和感染性疾病的方法。
Description
序列表
本申请含有序列表，其已经按ASCII格式以电子方式提交并且特此以全文引用的方式并入。2015年5月27日创建的所述ASCII拷贝命名为3617.009PC02_SL_PatentIn_ST25.txt并且大小是747,129字节。
1.技术领域
本公开提供了特异性地结合至人类糖皮质激素诱导的TNFR家族相关受体(GITR)的抗体和包含这类抗体的组合物。在一个特定方面，抗体特异性地结合至人类GITR并且调节GITR活性，例如，利用这类抗体增强、活化或诱导GITR活性。本公开还提供了通过施用特异性地结合至人类GITR并且调节GITR活性，例如，增强、活化或诱导GITR活性的抗体治疗病症，诸如癌症和感染性疾病的方法。
2.背景技术
糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)，TNFR超家族的一名成员，在先天性和适应性免疫系统的许多组分中表达并且刺激获得性与先天性免疫(Nocentini G等,(1994)《美国国家科学院院刊(PNAS)》94:6216-6221；Hanabuchi S等,(2006)《血液(Blood)》107:3617-3623；Nocentini G和Riccardi C(2005)《欧洲免疫学杂志(Eur J Immunol)》35:1016-1022；Nocentini G等,(2007)《欧洲免疫学杂志(Eur J Immunol)》37:1165-1169)。GITR在包含T、B、树突状(DC)以及自然杀伤(NK)细胞的若干细胞和组织中表达并且由其配体GITRL活化，GITRL主要在抗原呈递细胞(APC)上、内皮细胞上以及肿瘤细胞中表达。GITR/GITRL系统参与自体免疫/发炎反应的发展并且加强对感染和肿瘤的反应。举例来说，用GITR-Fc融合蛋白治疗动物改善自体免疫/发炎疾病，而GITR触发有效治疗病毒、细菌和寄生虫感染以及提高对肿瘤的免疫反应(Nocentini G等,(2012)《英国药理学会杂志(Br JPharmacol)》165:2089-99)。这些作用归因于若干并行机制，包括：效应T细胞的共活化、调控性T(Treg)细胞的抑制、NK细胞的共活化、巨噬细胞的活化、树突状细胞功能的调节以及外渗过程的调控。GITR的膜表达在T细胞活化之后增加(Hanabuchi S等,(2006)同上；Nocentini G和Riccardi C同上)。GITR触发共活化效应T淋巴细胞(McHugh RS等,(2002)《免疫(Immunity)》16:311-323；Shimizu J等,(2002)《自然免疫学(Nat Immunol)》3:135-142；Roncheti S等,(2004)《欧洲免疫学杂志(Eur J Immunol)》34:613-622；Tone M等,(2003)《美国国家科学院院刊(PNAS)》100:15059-15064)。GITR活化增加对肿瘤和病毒感染的抗性，涉及于自体免疫/发炎过程中并且调控白细胞外渗(Nocentini G和Riccardi C(2005)同上；Cuzzocrea S等,(2004)《白细胞生物学杂志(J Leukoc Biol)》76:933-940；Shevach EM和Stephens GL(2006)《自然免疫学评论(Nat Rev Immunol)》6:613-618；Cuzzocrea S等,(2006)《免疫学杂志(J Immunol)》177:631-641；Cuzzocrea S等,(2007)《美国实验生物学联合会会刊(FASEB J)》21:117-129)。
人类GITR在外周(非活化)T细胞中以极低水平表达。在T细胞活化之后，GITR在CD4+与CD8+细胞中都强烈地上调数天(Kwon B等,(1999)《生物化学杂志(J Biol Chem)》274:6056-6061；Gurney AL等,(1999)《当代生物学(Curr Biol)》9:215-218；Ronchetti S等,(2004)同上；Shimizu J等,(2002)同上；Ji HB等,(2004)同上；Ronchetti S等,(2002)《血液(Blood)》100:350-352；Li Z等,(2003)《自体免疫杂志(J Autoimmun)》21:83-92)，其中CD4+细胞具有比CD8+细胞更高的GITR表达(Kober J等,(2008)《欧洲免疫学杂志(Eur JImmunol)》38(10):2678-88；Bianchini R等,(2011)《欧洲免疫学杂志(Eur J Immunol)》41(8):2269-78)。
鉴于人类GITR在调节免疫反应中的作用，本文提供了特异性地结合至GITR的抗体和那些抗体调节GITR活性的用途。
3.发明内容
在一个方面，本文提供了特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体和其片段。在一个实施方案中，如通过本领域的技术人员所知或本文所描述的方法(参看例如下文的章节6.2.5.2和6.2.5.4)评估，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其抗原结合片段部分地抑制GITR配体(例如，人类GITRL)结合至GITR。在一个特定实施方案中，相对于在悬浮阵列试验中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下0.5nM GITRL与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒的结合，抗体或其抗原结合片段在1000ng/ml的浓度下抑制小于80％的0.5nM GITRL(例如，人类GITRL)结合至以5pg/ml/珠粒的浓度偶合至珠粒的GITR(例如，偶合至珠粒的人类GITR)。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段抑制40％至70％、50％至70％、50％至80％或40％至80％的GITRL(例如，人类GITRL)结合至GITR(例如，人类GITR)。在另一个特定实施方案中，至少20％的量的在不存在抗体或其抗原结合片段的情况下结合至GITR(例如，人类GITR)的GITRL(例如，人类GITRL)在以下试验中在存在抗体或其抗原结合片段的情况下结合至GITR(例如，人类GITR)：(a)使GITR(例如，人类GITR)以5pg/ml/珠粒的浓度偶合至珠粒；(b)在孔中在存在或不存在抗体的情况下孵育40个珠粒/μl的浓度的GITR(例如，人类GITR)偶合珠粒；(c)将标记的GITRL(例如，标记的人类GITRL)添加至孔中以获得0.5nM GITRL(例如，人类GITRL)和20个珠粒/μl GITR偶合珠粒的最终浓度；以及(d)通过例如悬浮阵列试验检测结合至GITR(例如，人类GITR)偶合珠粒的标记的GITRL(例如，人类GITRL)。在一些实施方案中，20％至60％、20％至50％、30％至60％或30％至50％的量的在不存在抗体或其抗原结合片段的情况下结合至GITR(例如，人类GITR)的GITRL(例如，人类GITRL)在存在抗体或其抗原结合片段的情况下结合至GITR(例如，人类GITR)。
在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含：
(a)包含X1YX2MX3(SEQ ID NO:1)的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的重链可变区(VH)互补决定区(CDR)1，其中
X1是D、E、G或A；
X2是A、V、L、I、P、F、M或Y；并且
X3是Y、G、N、Q、S、T、C、W、F或H；
(b)包含X1IX2X3X4SGX5X6X7YX8QKFX9X10(SEQ ID NO:2)的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的VH CDR2，其中
X1是V、A、L、I、P、F、M或T；
X2是R、K、H、Q或A；
X3是T、G、N、Q、S、C、W、Y、V、I或P；
X4是Y、G、N、Q、S、T、C、W、F、H或A；
X5是D、E、G或A；
X6是V、A、L、I、P、F、M或T；
X7是T、G、N、Q、S、C、W、Y、V、I、P或A；
X8是N、G、Q、S、T、C、W、Y或A；
X9是K、R、H、Q或A；并且
X10是D、E、G或A；
(c)包含SGTVRGX1X2X3(SEQ ID NO:3)的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的VHCDR3，其中
X1是F、A、V、L、I、P、M、Y、W、H或S；
X2是A或D；并且
X3是Y、G、N、Q、S、T、C、W、F、H或V；
(d)包含KSSQSX1X2X3X4X5X6X7KX8YLX9(SEQ ID NO:4)的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的轻链可变区(VL)CDR1，其中：
X1是L、A、V、I、P、F或M；
X2是L、A、V、I、P、F、M或S；
X3是N、G、Q、S、T、C、W、Y或A；
X4是S、G、N、Q、T、C、W、Y或A；
X5是G、N、Q、S、T、C、W、Y或A；
X6是N、G、Q、S、T、C、W、Y或A；
X7是Q、G、N、S、T、C、W、Y或A；
X8是N、G、Q、S、T、C、W、Y或A；并且
X9是T、G、N、Q、S、C、W、Y、V、I或A；
(e)包含X1ASTRX2X3(SEQ ID NO:5)的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的VLCDR2，其中：
X1是W、G、N、Q、S、T、C、Y、F、H或A；
X2是E、D或A；并且
X3是S、G、N、Q、T、C、W、Y或A；以及
(f)包含QX1X2YX3X4PYT(SEQ ID NO:6)的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的VLCDR3，其中：
X1是N、G、Q、S、T、C、W或Y；
X2是D、E或Y；并且
X3是S、G、N、Q、T、C、W、Y或A；并且
X4是Y、G、N、Q、S、T、C、W、F、H、L或A。
在其它实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含：
(a)包含X1YX2MX3(SEQ ID NO:7)的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的重链可变区(VH)CDR1，其中
X1是D、E或G；
X2是A或V；并且
X3是Y或H；
(b)包含X1IX2TX3SGX4X5X6YNQKFX7X8(SEQ ID NO:8)的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的VH CDR2，其中
X1是V或L；
X2是R、K或Q；
X3是Y或F；
X4是D、E或G；
X5是V或L；
X6是T或S；
X7是K、R或Q；并且
X8是D、E或G；
(c)包含SGTVRGFAY(SEQ ID NO:9)的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的VHCDR3；
(d)包含KSSQSLLNSX1NQKNYLX2(SEQ ID NO:10)的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的轻链可变区(VL)CDR1，其中
X1是G或S；并且
X2是T或S；
(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:11)的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的VLCDR2；以及
(f)包含QNX1YSX2PYT(SEQ ID NO:12)的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的VLCDR3，其中
X1是D或E；并且
X2是Y、F或S。
在一些实施方案中，本文提供了一种特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其抗原结合片段，其包含：
(a)包含X1YX2MX3(SEQ ID NO:1)的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的重链可变区(VH)互补决定区(CDR)1，其中
X1是D、E、G或A；
X2是A、V、L、I、P、F、M或Y；并且
X3是Y、G、N、Q、S、T、C、W、F或H；
(b)包含X1IX2X3X4SGX5X6X7YX8QKFX9X10(SEQ ID NO:2)的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的VH CDR2，其中
X1是V、A、L、I、P、F、M或T；
X2是R、K、H、Q或A；
X3是T、G、N、Q、S、C、W、Y、V、I或P；
X4是Y、G、N、Q、S、T、C、W、F、H或A；
X5是D、E、G或A；
X6是V、A、L、I、P、F、M或T；
X7是T、G、N、Q、S、C、W、Y、V、I、P或A；
X8是N、G、Q、S、T、C、W、Y或A；
X9是K、R、H、Q或A；并且
X10是D、E、G或A；
(c)包含SGTVRGX1X2X3(SEQ ID NO:3)的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的VHCDR3，其中
X1是F、A、V、L、I、P、M、Y、W、H或S；
X2是A或D；并且
X3是Y、G、N、Q、S、T、C、W、F、H或V；
(d)包含KSSQSX1X2X3X4X5X6X7KX8YLX9(SEQ ID NO:4)的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的轻链可变区(VL)CDR1，其中：
X1是L、A、V、I、P、F或M；
X2是L、A、V、I、P、F、M或S；
X3是N、G、Q、S、T、C、W、Y或A；
X4是S、G、N、Q、T、C、W、Y或A；
X5是G、N、Q、S、T、C、W、Y或A；
X6是N、G、Q、S、T、C、W、Y或A；
X7是Q、G、N、S、T、C、W、Y或A；
X8是N、G、Q、S、T、C、W、Y或A；并且
X9是T、G、N、Q、S、C、W、Y、V、I或A；
(e)包含X1ASTRX2X3(SEQ ID NO:5)的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的VLCDR2，其中：
X1是W、G、N、Q、S、T、C、Y、F、H或A；
X2是E、D或A；并且
X3是S、G、N、Q、T、C、W、Y或A；以及
(f)包含QX1X2YX3X4PYT(SEQ ID NO:6)的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的VLCDR3，其中：
X1是N、G、Q、S、T、C、W或Y；
X2是D、E或Y；并且
X3是S、G、N、Q、T、C、W、Y或A；并且
X4是Y、G、N、Q、S、T、C、W、F、H、L或A。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含有包含选自由SEQ ID NO:13、19-23以及117-119组成的群组的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的VH CDR1。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含有包含选自由SEQID NO:35和SEQ ID NO:116组成的群组的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的VHCDR1。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含有包含选自由SEQ ID NO:14、24-33以及120-188组成的群组的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的VH CDR2。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含有包含选自由SEQ ID NO:114、115以及194组成的群组的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的VH CDR2。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含有包含选自由SEQ ID NO:15、34以及189组成的群组的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的VH CDR3。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含有包含选自由SEQ ID NO:16和101-104组成的群组的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的VLCDR1。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含有包含选自由SEQ ID NO:17和105组成的群组的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的VL CDR2。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含有包含选自由SEQ ID NO:18、106-109、192以及193组成的群组的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的VL CDR3。在特定实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表2中的抗体的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3的氨基酸序列。在特定实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表6中的抗体的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3的氨基酸序列。在另一个特定实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表1中的抗体的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3的氨基酸序列。在另一个特定实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表5中的抗体的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3的氨基酸序列。在一些实施方案中，如通过本领域的技术人员所知或本文所描述的方法(参看例如下文的章节6.2.5.2和6.2.5.4)评估，抗体或其抗原结合片段部分地抑制GITRL(例如，人类GITRL)结合至GITR(例如，人类GITR)。在某些实施方案中，相对于在悬浮阵列试验中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下0.5nM GITRL与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒的结合，抗体或其抗原结合片段在1000ng/ml的浓度下抑制小于80％的0.5nM GITRL(例如，人类GITRL)结合至以5pg/ml/珠粒的浓度偶合至珠粒的GITR(例如，偶合至珠粒的人类GITR)。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段抑制40％至70％、50％至70％、50％至80％或40％至80％的GITRL(例如，人类GITRL)结合至GITR(例如，人类GITR)。在特定实施方案中，至少20％的量的在不存在抗体或其抗原结合片段的情况下结合至GITR(例如，人类GITR)的GITRL(例如，人类GITRL)在包括以下步骤的试验中在存在抗体或其抗原结合片段的情况下结合至GITR(例如，人类GITR)：(a)使GITR(例如，人类GITR)以5pg/ml/珠粒的浓度偶合至珠粒；(b)在孔中在存在或不存在抗体的情况下孵育40个珠粒/μl的浓度的GITR(例如，人类GITR)偶合珠粒；(c)将标记的GITRL(例如，标记的人类GITRL)添加至孔中以获得0.5nM GITRL(例如，人类GITRL)20个珠粒/μl GITR偶合珠粒的最终浓度；以及(d)通过例如悬浮阵列试验检测结合至GITR(例如，人类GITR)偶合珠粒的标记的GITRL(例如，人类GITRL)。在一些实施方案中，20％至60％、20％至50％、30％至60％或30％至50％的量的在不存在抗体或其抗原结合片段的情况下结合至GITR(例如，人类GITR)的GITRL(例如，人类GITRL)在存在抗体或其抗原结合片段的情况下结合至GITR(例如，人类GITR)。
在另一个实施方案中，本文提供了一种特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其抗原结合片段，其包含：
(a)包含X1YX2MX3(SEQ ID NO:7)的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的重链可变区(VH)CDR1，其中
X1是D、E或G；
X2是A或V；并且
X3是Y或H；
(b)包含X1IX2TX3SGX4X5X6YNQKFX7X8(SEQ ID NO:8)的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的VH CDR2，其中
X1是V或L；
X2是R、K或Q；
X3是Y或F；
X4是D、E或G；
X5是V或L；
X6是T或S；
X7是K、R或Q；并且
X8是D、E或G；
(c)包含SGTVRGFAY(SEQ ID NO:9)的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的VHCDR3；
(d)包含KSSQSLLNSX1NQKNYLX2(SEQ ID NO:10)的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的轻链可变区(VL)CDR1，其中
X1是G或S；并且
X2是T或S；
(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:11)的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的VLCDR2；以及
(f)包含QNX1YSX2PYT(SEQ ID NO:12)的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的VLCDR3，其中
X1是D或E；并且
X2是Y、F或S。
在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含有包含选自由SEQ ID NO:13、19-23以及117-119组成的群组的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的VH CDR1。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含有包含选自由35和116组成的群组的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的VH CDR1。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含有包含选自由SEQ ID NO:14、24-33以及120-188组成的群组的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的VH CDR2。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含有包含选自由SEQ IDNO:114、115以及194组成的群组的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的VH CDR2。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含有包含选自由SEQ ID NO:15、34以及189组成的群组的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的VH CDR3。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含有包含选自由SEQ ID NO:16和101-104组成的群组的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的VL CDR1。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含有包含选自由SEQ ID NO:17和105组成的群组的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的VLCDR2。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含有包含选自由SEQ ID NO:18、106-109、192以及193组成的群组的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的VL CDR3。在特定实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表2中的抗体的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3的氨基酸序列。在另一个特定实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表1中的抗体的VLCDR1、VL CDR2以及VL CDR3的氨基酸序列。在一些实施方案中，如通过本领域的技术人员所知或本文所描述的方法(参看例如下文的章节6.2.5.2和6.2.5.4)评估，抗体或其抗原结合片段并不阻止GITRL(例如，人类GITRL)结合至GITR(例如，人类GITR)。在某些实施方案中，相对于在悬浮阵列试验中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下0.5nM GITRL与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒的结合，抗体或其抗原结合片段在1000ng/ml的浓度下抑制小于80％的0.5nM GITRL(例如，人类GITRL)结合至以5pg/ml/珠粒的浓度偶合至珠粒的GITR(例如，偶合至珠粒的人类GITR)。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段抑制40％至70％、50％至70％、50％至80％或40％至80％的GITRL(例如，人类GITRL)结合至GITR(例如，人类GITR)。在特定实施方案中，至少20％的量的在不存在抗体或其抗原结合片段的情况下结合至GITR(例如，人类GITR)的GITRL(例如，人类GITRL)在包括以下步骤的试验中在存在抗体或其抗原结合片段的情况下结合至GITR(例如，人类GITR)：(a)使GITR(例如，人类GITR)以5pg/ml/珠粒的浓度偶合至珠粒；(b)在孔中在存在或不存在抗体的情况下孵育40个珠粒/μl的浓度的GITR(例如，人类GITR)偶合珠粒；(c)将标记的GITRL(例如，标记的人类GITRL)添加至孔中以获得0.5nM GITRL(例如，人类GITRL)和20个珠粒/μl GITR偶合珠粒的最终浓度；以及(d)通过例如悬浮阵列试验检测结合至GITR(例如，人类GITR)偶合珠粒的标记的GITRL(例如，人类GITRL)。在一些实施方案中，20％至60％、20％至50％、30％至60％或30％至50％的量的在不存在抗体或其抗原结合片段的情况下结合至GITR(例如，人类GITR)的GITRL(例如，人类GITRL)在存在抗体或其抗原结合片段的情况下结合至GITR(例如，人类GITR)。
在一个特定实施方案中，本文提供了一种特异性地结合至人类GITR的抗体或其片段，其包含：(a)包含DYAMY(SEQ ID NO:13)的氨基酸序列的重链可变区(VH)CDR1；(b)包含VIRTYSGDVTYNQKFKD(SEQ ID NO:14)的氨基酸序列的VH CDR2；(c)包含SGTVRGFAY(SEQ IDNO:15)的氨基酸序列的VH CDR3；(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:16)的氨基酸序列的轻链可变区(VL)CDR1；(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:17)的氨基酸序列的VL CDR2；以及(f)包含QNDYSYPYT(SEQ ID NO:18)的氨基酸序列的VL CDR3。在另一个实施方案中，本文提供了一种特异性地结合至人类GITR的抗体或其片段，其包含表1和表2中的抗体22的VLCDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3。在一些实施方案中，如通过本领域的技术人员所知或本文所描述的方法(参看例如下文的章节6.2.5.2和6.2.5.4)评估，抗体或其抗原结合片段部分地抑制GITRL(例如，人类GITRL)结合至GITR(例如，人类GITR)。在某些实施方案中，相对于在悬浮阵列试验中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下0.5nM GITRL(例如，人类GITRL)与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒(例如，偶合至珠粒的人类GITR)的结合，抗体或其抗原结合片段在1000ng/ml的浓度下抑制小于80％的以5pg/ml/珠粒的浓度偶合至珠粒的GITR(例如，偶合至珠粒的人类GITR)。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段抑制50％至70％的人类GITRL结合至人类GITR。在特定实施方案中，至少20％的量的在不存在抗体或其抗原结合片段的情况下结合至GITR(例如，人类GITR)的GITRL(例如，人类GITRL)在包括以下步骤的试验中在存在抗体或其抗原结合片段的情况下结合至GITR(例如，人类GITR)：(a)使GITR(例如，人类GITR)以5pg/ml/珠粒的浓度偶合至珠粒；(b)在孔中在存在或不存在抗体的情况下孵育40个珠粒/μl的浓度的GITR(例如，人类GITR)偶合珠粒；(c)将标记的GITRL(例如，标记的人类GITRL)添加至孔中以获得0.5nM GITRL(例如，人类GITRL)和20个珠粒/μl GITR偶合珠粒的最终浓度；以及(d)通过例如悬浮阵列试验检测结合至GITR(例如，人类GITR)偶合珠粒的标记的GITRL(例如，人类GITRL)。在一些实施方案中，20％至60％、20％至50％、30％至60％或30％至50％的量的在不存在抗体或其抗原结合片段的情况下结合至GITR(例如，人类GITR)的GITRL(例如，人类GITRL)在存在抗体或其抗原结合片段的情况下结合至GITR(例如，人类GITR)。在一些实施方案中，30％至50％的量的在不存在抗体或其抗原结合片段的情况下结合至人类GITR的人类GITRL在存在抗体或其抗原结合片段的情况下结合至人类GITR。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是促效性的。
在某些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:203的重链可变区序列的构架区中的一者、两者、三者或四者的重链可变区序列。在一些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体或其片段包含重链可变区序列的一个、两个、三个或四个构架区，其与选自由SEQ ID NO:201、SEQ ID NO:206以及SEQ ID NO:215至389组成的群组的重链可变区序列的构架区中的一者、两者、三者或四者至少75％、80％、85％、90％、95％或100％一致。在另一个实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体或其片段包含具有源自人类的构架区的重链可变区。在另一个实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体或其抗原结合片段包含作为或来源于由人类基因编码的氨基酸序列的重链可变构架区，其中氨基酸序列选自由IGHV1-2*02(SEQ ID NO:601)、IGHV1-3*01(SEQ ID NO:602)、IGHV1-46*01(SEQ ID NO:603)、IGHV1-18*01(SEQ ID NO:604)、IGHV1-69*01(SEQ ID NO:605)以及IGHV7-4-1*02(SEQ ID NO:606)组成的群组。在特定实施方案中，来源于所述氨基酸序列的重链可变构架区由具有至多10个氨基酸取代、缺失和/或插入，优选地至多10个氨基酸取代的所述氨基酸序列组成。在一个特定实施方案中，来源于所述氨基酸序列的重链可变构架区由具有1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个氨基酸残基取代对应的非人类重链可变构架区中的类似位置中发现的氨基酸的所述氨基酸序列组成。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体或其片段包含来源于氨基酸序列SEQ ID NO:601的重链可变构架区，其中氨基酸序列SEQ ID NO:601的至少一个、两个、三个、四个或五个(在某些实施方案中至多10个)氨基酸被对应的非人类重链可变构架区中的类似位置中发现的氨基酸取代。在某些实施方案中，氨基酸取代在选自由24、48、67、71、73以及94组成的群组的氨基酸位置处，其中每个群组成员的氨基酸位置是根据Kabat编号所指示。在特定实施方案中，氨基酸取代选自由24G、48I、67A、71V、73K以及94K组成的群组，其中每个群组成员的氨基酸位置是根据Kabat编号所指示。
在另一个实施方案中，本文提供了一种特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段，其包含有包含选自由SEQ ID NO:201、206以及SEQ ID NO:215至389组成的群组的氨基酸序列的重链可变区序列。在一个特定实施方案中，本文提供了一种特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段，其包含有包含SEQ ID NO:203的氨基酸序列的重链可变区序列。在另一个特定实施方案中，本文提供了一种特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段，其包含有包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的重链可变区序列。
在另一个实施方案中，本文提供了一种特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段，其包含有包含选自由SEQ ID NO:553、554以及567至570组成的群组的氨基酸序列的重链序列。在另一个实施方案中，本文提供了一种特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段，其包含有包含选自由SEQ ID NO:581和582组成的群组的氨基酸序列的重链序列。
在另一个实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:204或SEQ ID NO:205的轻链可变区序列的一个、两个、三个或四个构架区的轻链可变区序列。在另一个实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体或其片段包含轻链可变区序列的一个、两个、三个或四个构架区，其与选自由SEQ ID NO:202、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:208以及SEQ ID NO:400-518组成的群组的轻链可变区序列的构架区中的一者、两者、三者或四者至少75％、80％、85％、90％、95％或100％一致。在另一个实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体或其片段包含轻链可变区序列的一个、两个、三个或四个构架区，其与SEQID NO:519的轻链可变区序列的构架区中的一者、两者、三者或四者至少75％、80％、85％、90％、95％或100％一致。在另一个实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体或其片段包含具有源自人类的构架区的轻链可变序列。在另一个实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体或其片段包含作为或来源于由人类基因编码的氨基酸序列的轻链可变构架区，其中氨基酸序列选自由IGKV4-1*01(SEQ ID NO:607)和IGKV3-7*02(SEQ ID NO:608)组成的群组。在特定实施方案中，来源于所述氨基酸序列的轻链可变构架区由所述氨基酸序列组成，但存在至多10个氨基酸取代、缺失和/或插入，优选地至多10个氨基酸取代。在一个特定实施方案中，来源于所述氨基酸序列的轻链可变构架区由具有1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个氨基酸残基取代对应的非人类轻链可变构架区中的类似位置中发现的氨基酸的所述氨基酸序列组成。在另一个实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体或其片段包含作为或来源于氨基酸序列SEQ ID NO:607或SEQ ID NO:608的轻链可变构架区，其中氨基酸序列SEQ ID NO:607或SEQ ID NO:608的至少一个、两个、三个、四个或五个(在某些实施方案中至多10个)氨基酸被对应的非人类轻链可变构架区中的类似位置中发现的氨基酸取代。在某些实施方案中，氨基酸取代在氨基酸位置87处，其中氨基酸位置是根据Kabat编号所指示。在特定实施方案中，氨基酸取代是87H的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据Kabat编号所指示。
在另一个实施方案中，本文提供了一种特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段，其包含有包含选自由SEQ ID NO:202、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:208以及SEQ ID NO:400至518组成的群组的氨基酸序列的轻链可变区序列。在另一个实施方案中，本文提供了一种特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段，其包含有包含SEQID NO:519的氨基酸序列的轻链可变区序列。在一个特定实施方案中，本文提供了一种特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段，其包含有包含SEQ ID NO:204或SEQ IDNO:205的氨基酸序列的轻链可变区序列。在另一个特定实施方案中，本文提供了一种特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段，其包含有包含SEQ ID NO:207的氨基酸序列的轻链可变区序列。在另一个特定实施方案中，本文提供了一种特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段，其包含有包含SEQ ID NO:208的氨基酸序列的轻链可变区序列。
在另一个实施方案中，本文提供了一种特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段，其包含有包含选自由SEQ ID NO:555、556以及571至576组成的群组的氨基酸序列的轻链序列。
在另一个实施方案中，本文提供了一种特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段，其包含有包含图23或图24A-24C中的任一者的表格中的抗体的氨基酸序列的重链可变区和轻链可变区。在另一个实施方案中，本文提供了一种特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段，其包含有包含表17中的抗体的氨基酸序列的重链可变区和轻链可变区。在一个特定实施方案中，本文提供了一种特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段，其包含(a)包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的重链可变区；以及(b)包含SEQ ID NO:207的氨基酸序列的轻链可变区。在另一个特定实施方案中，本文提供了一种特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段，其包含(a)包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的重链可变区；以及(b)包含SEQ ID NO:208的氨基酸序列的轻链可变区。
在一个特定实施方案中，本文提供了一种特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段，其包含有包含VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3以及来源于人类免疫球蛋白的构架区的重链可变区(VH)，其中VH CDR1包含DYAMY(SEQ ID NO:13)的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成，VH CDR2包含VIRTYSGDVTYNQKFKD(SEQ ID NO:14)的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成，并且VH CDR3包含SGTVRGFAY(SEQ ID NO:15)的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成。在另一个实施方案中，本文提供了一种特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段，其包含有包含VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3以及来源于人类免疫球蛋白的构架区的轻链可变区(VL)，其中VL CDR1包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ IDNO:16)的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成，VL CDR2包含WASTRES(SEQ ID NO:17)的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成，并且VL CDR3包含QNDYSYPYT(SEQ ID NO:18)的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成。在另一个实施方案中，本文提供了一种特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段，其包含有包含选自由SEQ ID NO:201、203、206以及215-389组成的群组的氨基酸序列的重链可变区(VH)。在另一个实施方案中，本文提供了一种特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段，其包含有包含选自由SEQ ID NO:202、204、205、207、208以及400-518组成的群组的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。在另一个实施方案中，本文提供了一种特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段，其包含有包含SEQ ID NO:519的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。在一些实施方案中，如通过本领域的技术人员所知或本文所描述的方法(参看例如下文的章节6.2.5.2和6.2.5.4)评估，抗体或其抗原结合片段部分地抑制GITRL(例如，人类GITRL)结合至GITR(例如，人类GITR)。在某些实施方案中，相对于在悬浮阵列试验中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下0.5nM GITRL与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒的结合，抗体或其抗原结合片段在1000ng/ml的浓度下抑制小于80％的0.5nM GITRL(例如，人类GITRL)结合至以5pg/ml/珠粒的浓度偶合至珠粒的GITR(例如，偶合至珠粒的人类GITR)。在特定实施方案中，至少20％的量的在不存在抗体或其抗原结合片段的情况下结合至GITR(例如，人类GITR)的GITRL(例如，人类GITRL)在包括以下步骤的试验中在存在抗体或其抗原结合片段的情况下结合至GITR(例如，人类GITR)：(a)使GITR(例如，人类GITR)以5pg/ml/珠粒的浓度偶合至珠粒；(b)在孔中在存在或不存在抗体的情况下孵育40个珠粒/μl的浓度的GITR(例如，人类GITR)偶合珠粒；(c)将标记的GITRL(例如，标记的人类GITRL)添加至孔中以获得0.5nM GITRL(例如，人类GITRL)和20个珠粒/μl GITR偶合珠粒的最终浓度；以及(d)通过例如悬浮阵列试验检测结合至GITR(例如，人类GITR)偶合珠粒的标记的GITRL(例如，人类GITRL)。在一些实施方案中，20％至60％、20％至50％、30％至60％或30％至50％的量的在不存在抗体或其抗原结合片段的情况下结合至GITR(例如，人类GITR)的GITRL(例如，人类GITRL)在存在抗体或其抗原结合片段的情况下结合至GITR(例如，人类GITR)。
在一个特定实施方案中，本文提供了一种特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段，其包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中VH和VL包含图23或图24A-24C中的任一者中的抗体的氨基酸序列。在一个特定实施方案中，本文提供了一种特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段，其包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中VH和VL包含表17中的抗体的氨基酸序列。
在某些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体包含重和/或轻链恒定区。在一些实施方案中，重链恒定区选自由IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1以及IgA2组成的人类免疫球蛋白的群组。在某些实施方案中，轻链恒定区选自由IgGκ和IgGλ组成的人类免疫球蛋白的群组。在一个特定实施方案中，IgG1是非岩藻糖基化IgG1。在另一个特定实施方案中，抗体是包含N297A或N297Q突变的IgG1。在另一个特定实施方案中，抗体是包含S228P突变的IgG4。在另一个特定实施方案中，抗体是包含C127S突变的IgG2。在某些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体包含有包含选自由SEQ ID NO:557-562组成的群组的氨基酸序列的重链恒定区。在某些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体包含有包含选自由SEQ ID NO:583和584组成的群组的氨基酸序列的重链恒定区。在另一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体包含有包含选自由在氨基酸位置180处具有N至A或Q的氨基酸取代的SEQ ID NO:557-560组成的群组的氨基酸序列的重链恒定区。在某些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体包含有包含选自由SEQ ID NO:588-591组成的群组的氨基酸序列的轻链恒定区。在某些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体包含有包含选自由SEQ ID NO:563-566组成的群组的氨基酸序列的轻链恒定区。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体包含(a)包含选自由SEQ ID NO:553、554以及567至570组成的群组的氨基酸序列的重链；以及(b)包含选自由SEQ ID NO:555、556以及571至576组成的群组的氨基酸序列的轻链。在另一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体包含(a)包含SEQ ID NO:553的氨基酸序列的重链；以及(b)包含SEQ ID NO:556的氨基酸序列的轻链。在另一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体包含(a)包含SEQ ID NO:554的氨基酸序列的重链；以及(b)包含SEQ ID NO:556的氨基酸序列的轻链。在另一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体包含(a)包含SEQ ID NO:581的氨基酸序列的重链；以及(b)包含SEQ ID NO:556的氨基酸序列的轻链。在另一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体包含(a)包含SEQ ID NO:582的氨基酸序列的重链；以及(b)包含SEQ ID NO:556的氨基酸序列的轻链。在另一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体包含(a)包含SEQ ID NO:553的氨基酸序列的重链；以及(b)包含SEQ ID NO:555的氨基酸序列的轻链。在另一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体包含(a)包含SEQ ID NO:554的氨基酸序列的重链；以及(b)包含SEQ ID NO:555的氨基酸序列的轻链。在另一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体包含(a)包含SEQ ID NO:567的氨基酸序列的重链；以及(b)包含SEQ ID NO:573的氨基酸序列的轻链。在另一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体包含(a)包含SEQ ID NO:567的氨基酸序列的重链；以及(b)包含SEQ ID NO:576的氨基酸序列的轻链。在另一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体包含(a)包含SEQ ID NO:554的氨基酸序列的重链；以及(b)包含SEQ ID NO:576的氨基酸序列的轻链。在另一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体包含(a)包含SEQID NO:581的氨基酸序列的重链；以及(b)包含SEQ ID NO:576的氨基酸序列的轻链。在另一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体包含(a)包含SEQ ID NO:582的氨基酸序列的重链；以及(b)包含SEQ ID NO:576的氨基酸序列的轻链。
在另一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体包含(a)包含在氨基酸位置298处具有N至A或Q的氨基酸取代的SEQ ID NO:553的氨基酸序列的重链；以及(b)包含选自由SEQ ID NO:555、556以及571至576组成的群组的氨基酸序列的轻链。在另一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体包含(a)包含在氨基酸位置298处具有N至A或Q的氨基酸取代的SEQ ID NO:553的氨基酸序列的重链；以及(b)包含SEQ ID NO:556的氨基酸序列的轻链。在另一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体包含(a)包含在氨基酸位置298处具有N至A或Q的氨基酸取代的SEQ ID NO:553的氨基酸序列的重链；以及(b)包含SEQ ID NO:555的氨基酸序列的轻链。
在另一个实施方案中，本文提供了一种与本文所描述的抗体结合至GITR(例如，人类GITR)的相同表位的抗体或其片段。在另一个实施方案中，本文提供了一种分离抗体，其特异性地结合至以下每一者：i)人类GITR，其中人类GITR包含SEQ ID NO:701的残基26-241，以及ii)包含SEQ ID NO:699的残基26-234的猕猴GITR的变体，其中这种抗体并不特异性地结合至包含SEQ ID NO:704的残基26-234的猕猴GITR。在另一个实施方案中，本文提供了一种分离抗体，其特异性地结合至以下每一者：i)人类GITR，其中人类GITR包含SEQ IDNO:701的残基26-241，以及ii)包含SEQ ID NO:699的残基26-234的猕猴GITR的变体，其中这种抗体并不展现实质性结合至包含SEQ ID NO:704的残基26-234的猕猴GITR。在另一个实施方案中，本文提供了一种特异性地结合至人类GITR的分离抗体，其中人类GITR包含SEQID NO:701的残基26-241，其中抗体与变体GITR之间的结合相对于抗体与人类GITR之间的结合实质上削弱，并且其中变体GITR除了选自由D60A和G63A组成的群组的氨基酸取代以外包含SEQ ID NO:701的残基26-241。在一个实施方案中，取代是D60A。在另一个实施方案中，取代是G63A。在另一个实施方案中，本文提供了一种特异性地结合至人类GITR的分离抗体，其中人类GITR包含SEQ ID NO:701的残基26-241，并且其中这种抗体结合至包含SEQ IDNO:701的残基60-63的表位。在另一个实施方案中，本文提供了一种特异性地结合至人类GITR的分离抗体，其中人类GITR包含SEQ ID NO:701的残基26-241，并且其中这种抗体结合至由SEQ ID NO:701的残基60-63陈列的氨基酸序列内的至少一个残基。在一个实施方案中，抗体结合至选自由SEQ ID NO:701的残基60、62以及63组成的群组的至少一个残基。在一个实施方案中，抗体结合至选自由SEQ ID NO:701的残基62和63组成的群组的至少一个残基。在一个实施方案中，抗体活化或增强人类GITR的活性。在另一个实施方案中，本文提供了一种特异性地结合人类GITR的分离抗体，其中人类GITR包含SEQ ID NO:701的残基26-241，并且其中这种抗体结合包含SEQ ID NO:701的残基60或63中的至少一者的人类GITR的表位。在另一个实施方案中，本文提供了一种特异性地结合至人类GITR的分离抗体，其中这种抗体与结合至人类GITR相比展现减少或缺乏结合至除了存在D60A或G63A氨基酸取代以外与人类GITR一致的蛋白质。在一个实施方案中，抗体诱导、活化或增强人类GITR的活性。在另一个实施方案中，本文提供了一种抗体或其抗原结合片段，其与本文所描述的抗体或其抗原结合片段竞争结合至GITR(例如，人类GITR)。在一个特定实施方案中，本文提供了一种抗体或其抗原结合片段，其与本文所描述的抗体或其抗原结合片段竞争结合至GITR(例如，人类GITR)达到本文所描述的抗体或其抗原结合片段自竞争结合至GITR(例如，人类GITR)的程度。在另一个特定实施方案中，本文提供了一种与本文所描述的抗体或其抗原结合片段竞争结合至GITR(例如，人类GITR)的第一抗体或其抗原结合片段，其中第一抗体或其抗原结合片段在包括以下步骤的试验中竞争结合：(a)在容器中孵育GITR转染的细胞与未标记形式的第一抗体或其抗原结合片段；(b)将标记形式的本文所描述的抗体或其抗原结合片段添加至容器中的细胞中并且在容器中孵育细胞；以及(c)检测标记形式的本文所描述的抗体或其抗原结合片段与细胞的结合。在另一个特定实施方案中，本文提供了一种与本文所描述的抗体或其抗原结合片段竞争结合至GITR(例如，人类GITR)的第一抗体或其抗原结合片段，其中竞争如第一抗体或其抗原结合片段与GITR(例如，人类GITR)的结合减少超过80％(例如，85％、90％、95％或98％，或介于80％至85％、80％至90％、85％至90％或85％至95％之间)所展现。
在某些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体或其片段活化、诱导或增强GITR(例如，人类GITR)的活性。在特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体是人源化抗体、鼠类抗体或嵌合抗体。在某些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体以约0.5nM至5nM范围内的KD结合至GITR(例如，人类GITR)。在某些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体包含可检测标记。在特定实施方案中，本文所提供的抗体经过分离。
在某些实施方案中，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或片段独立于TCR触发诱导、活化或增强细胞中人类GITR的活性。在特定实施方案中，细胞是T细胞。在特定实施方案中，细胞不是T细胞。在特定实施方案中，细胞选自由B细胞、浆细胞、记忆细胞、自然杀伤细胞、粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、肥大细胞、单核细胞、树突状细胞、浆细胞样树突状细胞、NKT细胞以及巨噬细胞组成的群组。在特定实施方案中，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体独立于TCR触发诱导、活化或增强NF-κB的活性。在某些实施方案中，NF-κB的活性可以在例如包括以下步骤的试验中评估：(a)在不存在抗CD3抗体的情况下孵育表达NF-κB-荧光素酶报告构建体(例如，GloResponse NF-κB-luc2P构建体)和GITR(例如，人类GITR)的T细胞(例如，Jurkat细胞)与例如12.5、10、5、2.5、1.25或0.625μg/ml的抗体浓度的本文所描述的抗体或同型对照抗体；以及(b)在例如孵育2、5、6、8或18小时后使用例如EnVision多标记读取器2100读取荧光素酶信号，其中相对于同型对照抗体的阳性荧光素酶信号指示NF-κB的活性。在一个特定实施方案中，荧光素酶信号在孵育5小时后读取。
在某些实施方案中，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或片段增加多功能性(IFNγ+TNFα+)T细胞的百分比。在特定实施方案中，多功能性(IFNγ+TNFα+)T细胞的百分比的增加可以在例如包括以下步骤的试验中评估：(a)在37℃和5％CO2下孵育例如人类PBMC与例如各种次最佳浓度(例如，0.3-5μg/ml)的抗CD3抗体，以及例如免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体(例如，5μg/ml)或同型对照抗体，持续例如3-4天；(b)在37℃和5％CO2下用例如布雷菲德菌素A(BrefeldinA)处理细胞，持续例如6小时；(c)使用例如抗CD3抗体、抗CD4抗体以及抗CD8α抗体将细胞的表面染色；(d)使用例如抗IFNγ抗体和抗TNFα抗体细胞内染色；以及(e)相对于同型对照抗体测定多功能性(IFNγ+TNFα+)T细胞的百分比。在特定实施方案中，多功能性(IFNγ+TNFα+)T细胞选自由多功能性(IFNγ+TNFα+)CD4+T细胞和多功能性(IFNγ+TNFα+)CD8+T细胞组成的群组。
在特定实施方案中，如通过本文所描述或本领域的技术人员所知的方法(例如，Fcγ受体IIIA(CD16)报告试验或如下文的实施例中所描述)评估，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体当结合至活化的调控性T细胞时，结合至选自由CD16、CD32A以及CD64组成的群组的活化Fcγ受体达到比这种抗体当结合至活化的效应T细胞时，结合至选自由CD16、CD32A以及CD64组成的群组的活化Fcγ受体更大的程度(例如，1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍)。在特定实施方案中，活化Fcγ受体在选自由源自骨髓的效应细胞和源自淋巴细胞的效应细胞组成的群组的细胞上表达。在一个特定实施方案中，活化Fcγ受体是CD16。
在特定实施方案中，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体当结合至活化的调控性T细胞时，与这种抗体当结合至活化的效应T细胞时，引起选自由CD16、CD32A以及CD64组成的群组的活化Fcγ受体的活化相比，引起选自由CD16、CD32A以及CD64组成的群组的活化Fcγ受体的更强活化。在特定实施方案中，如通过本文所描述或本领域的技术人员所知的方法(例如，Fcγ受体IIIA(CD16)报告试验或如下文的实施例中所描述)评估，当免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体结合至活化的调控性T细胞时活化Fcγ受体的活化，与当免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体结合至活化的效应T细胞时活化Fcγ受体的活化相比，强至少约1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍。在特定实施方案中，活化Fcγ受体在选自由源自骨髓的效应细胞和源自淋巴细胞的效应细胞组成的群组的细胞上表达。在一个特定实施方案中，活化Fcγ受体是CD16。
在某些实施方案中，如通过本文所描述和/或本领域的技术人员所知的方法评估，相对于不存在本文所描述的抗体的情况下活化的T细胞中OX40和/或PD-1的表面表达，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或片段使活化的T细胞中OX40和/或PD-1的表面表达增加至少约1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、600倍、700倍、800倍、900倍或1000倍。
在另一个实施方案中，本文提供了编码本文所描述的抗体的重链可变区和/或轻链可变区或者轻链和/或重链的核酸分子。在一个特定实施方案中，核酸分子编码包含SEQID NO:209的核酸序列的重链可变区。在另一个特定实施方案中，核酸分子编码包含SEQ IDNO:210或SEQ ID NO:211的核酸序列的轻链可变区。在特定实施方案中，核酸分子经过分离。在某些实施方案中，载体(例如，分离载体)包含编码本文所描述的抗体的重链可变区和/或轻链可变区或者轻链和/或重链的核酸分子。在某些实施方案中，宿主细胞包含核酸分子或载体。宿主细胞的实例包括组织培养物中的大肠杆菌(E.coli)、假单胞菌(Pseudomonas)、芽孢杆菌(Bacillus)、链霉菌(Streptomyces)、酵母、CHO、YB/20、NS0、PER-C6、HEK-293T、NIH-3T3、HeLa、BHK、Hep G2、SP2/0、R1.1、B-W、L-M、COS 1、COS7、BSC1、BSC40、BMT10细胞、植物细胞、昆虫细胞以及人类细胞。在一个特定实施方案中，本文提供了一种产生特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其抗原结合片段的方法，其包括培养宿主细胞以便表达核酸分子并且产生这种抗体。
在另一个实施方案中，本文提供了一种增强T细胞的共刺激的方法，其包括离体孵育已经用T细胞受体(TCR)复合物刺激剂(例如，植物血球凝集素(PHA)和/或佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)，或TCR复合物刺激抗体，诸如抗CD3抗体和抗CD28抗体)刺激的T细胞与本文所描述的抗体或其抗原结合片段。在另一个实施方案中，本文提供了一种活化T细胞的方法，其包括离体孵育T细胞与本文所描述的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，这种方法进一步包括在与抗GITR抗体或其抗原结合片段一起孵育之前、同时或之后，离体孵育T细胞与TCR复合物刺激剂(例如，植物血球凝集素(PHA)和/或佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)，或TCR复合物刺激抗体，诸如抗CD3抗体和抗CD28抗体)。在一些实施方案中，T细胞从受试者分离。在某些实施方案中，将刺激和/或活化的T细胞输注至受试者中。在一些实施方案中，输注至受试者中的T细胞是自体或异体的。在一个特定实施方案中，受试者是人类。在另一个实施方案中，本文提供了一种在受试者中优于T调控性细胞的扩展优先扩展效应T细胞的方法，其包括向受试者施用有效量的本文所描述的抗体或其抗原结合片段。在一个特定实施方案中，受试者是人类。
在另一个实施方案中，本文提供了一种增强T细胞(例如，CD4+和/或CD8+T细胞)的扩展和/或T细胞效应功能的方法，其包括离体孵育T细胞与本文所描述的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，这种方法进一步包括在孵育T细胞与抗体或其抗原结合片段之前、同时或之后，孵育T细胞与T细胞受体(TCR)复合物刺激剂(例如，植物血球凝集素(PHA)和/或佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)，或TCR复合物刺激抗体，诸如抗CD3抗体和抗CD28抗体)。在某些实施方案中，T细胞从受试者分离。在一些实施方案中，这种方法进一步包括将T细胞在其扩展之后和/或在其效应功能增强之后输注至受试者中。在某些实施方案中，输注至受试者中的T细胞是自体或异体的。在一个特定实施方案中，受试者是人类。
在另一个实施方案中，本文提供了一种增强CD8+T细胞的扩展的方法，其包括离体孵育T细胞与本文所描述的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，这种方法进一步包括在孵育T细胞与抗体或其抗原结合片段之前、同时或之后，孵育T细胞与T细胞受体(TCR)复合物刺激剂(例如，植物血球凝集素(PHA)和/或佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)，或TCR复合物刺激抗体，诸如抗CD3抗体和抗CD28抗体)。在某些实施方案中，T细胞从受试者分离。在一些实施方案中，这种方法进一步包括将T细胞在其扩展之后和/或在其效应功能增强之后输注至受试者中。在某些实施方案中，输注至受试者中的T细胞是自体或异体的。在一个特定实施方案中，受试者是人类。
在另一个实施方案中，本文提供了一种增强CD4+T细胞的扩展的方法，其包括离体孵育T细胞与本文所描述的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，这种方法进一步包括在孵育T细胞与抗体或其抗原结合片段之前、同时或之后，孵育T细胞与T细胞受体(TCR)复合物刺激剂(例如，植物血球凝集素(PHA)和/或佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)，或TCR复合物刺激抗体，诸如抗CD3抗体和抗CD28抗体)。在某些实施方案中，T细胞从受试者分离。在一些实施方案中，这种方法进一步包括将T细胞在其扩展之后和/或在其效应功能增强之后输注至受试者中。在某些实施方案中，输注至受试者中的T细胞是自体或异体的。在一个特定实施方案中，受试者是人类。
在另一个实施方案中，本文提供了一种活化GITR或活化NF-κB的方法，其包括离体孵育尚未用T细胞受体(TCR)复合物刺激剂(例如，植物血球凝集素(PHA)和/或佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)，或TCR复合物刺激抗体，诸如抗CD3抗体和抗CD28抗体)刺激的T细胞与本文所描述的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，T细胞从受试者分离。在某些实施方案中，将活化的T细胞输注至受试者中。在一些实施方案中，输注至受试者中的T细胞是自体或异体的。在一个特定实施方案中，受试者是人类。
在另一个实施方案中，本文提供了一种独立于TCR触发活化T细胞的方法，其包括使T细胞与本文所描述的抗体或其抗原结合片段接触。
在另一个实施方案中，本文提供了一种独立于TCR触发诱导、活化或增强NF-κB的活性的方法，其包括使T细胞与本文所描述的抗体或其抗原结合片段接触。
在另一个实施方案中，本文提供了一种增加多功能性(IFNγ+TNFα+)T细胞的百分比的方法，其包括使T细胞与本文所描述的抗体或其抗原结合片段接触。
在另一个实施方案中，本文提供了一种增加活化的T细胞中OX40和/或PD-1的表面表达的方法，其包括使T细胞与本文所描述的抗体或其抗原结合片段接触。
在另一个实施方案中，本文提供了医药组合物，其包含本文所描述的抗体或其抗原结合片段、核酸分子、载体或宿主细胞，以及医药学上可接受的载剂。医药组合物可以用于调节免疫反应和/或用于治疗和/或预防病症，诸如癌症或感染性疾病。在一个特定实施方案中，本文提供了一种在受试者中调节免疫反应的方法，其包括向受试者施用有效量的本文所描述的医药组合物。在一个特定实施方案中，免疫反应得到增强或诱导。在另一个特定实施方案中，本文提供了一种在受试者中增强T细胞的扩展和/或T细胞效应功能的方法，其包括向受试者施用有效量的本文所描述的医药组合物。在另一个特定实施方案中，本文提供了一种在受试者中增强CD8+T细胞的扩展的方法，其包括向受试者施用有效量的本文所描述的医药组合物。在一些实施方案中，本公开提供了如本文所描述的抗体制造用于治疗癌症的药剂的用途。在某些实施方案中，本公开提供了一种如本文所描述的抗体，其用于治疗癌症。在某些实施方案中，本公开提供了如本文所描述的医药组合物制造用于治疗癌症的药剂的用途。在某些实施方案中，本公开提供了一种如本文所描述的医药组合物，其用于治疗癌症。在另一个特定实施方案中，本文提供了一种在受试者中治疗癌症的方法，其包括向受试者施用有效量的本文所描述的医药组合物。在某些实施方案中，治疗癌症的方法进一步包括将抗癌剂施用于受试者。可以与本文所描述的医药组合物组合施用于受试者的抗癌剂的实例在下文的章节5.4(例如，章节5.4.1和5.4.1.1)中描述。在一个特定实施方案中，抗癌剂是疫苗。在一个特定实施方案中，疫苗包含热休克蛋白肽复合物(HSPPC)，其中HSPPC包含与一种或多种抗原肽(例如，肿瘤相关抗原肽)复合的热休克蛋白(例如，gp96蛋白)。在某些实施方案中，所治疗的癌症是鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、胃肠癌、霍奇金氏或非霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin's or non-Hodgkin's lymphoma)、胰腺癌、成胶质细胞瘤、神经胶质瘤、子宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、乳癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、骨髓瘤、唾液腺癌、肾癌、基底细胞癌、黑素瘤、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、睾丸癌、食道癌或一种类型的头或颈癌。在某些实施方案中，所治疗的癌症是促纤维增生性黑素瘤、发炎性乳癌、胸腺瘤、直肠癌、肛门癌或可手术治疗或不可手术治疗的脑干神经胶质瘤。在一个特定实施方案中，所治疗的受试者是人类。
在另一个实施方案中，本文提供了一种在受试者中独立于TCR触发活化T细胞的方法，其包括向受试者施用有效量的本文所描述的医药组合物。
在另一个实施方案中，本文提供了一种在受试者中独立于TCR触发诱导、活化或增强NF-κB的活性的方法，其包括向受试者施用有效量的本文所描述的医药组合物。
在另一个实施方案中，本文提供了一种在受试者中增加多功能性(IFNγ+TNFα+)T细胞的百分比的方法，其包括向受试者施用有效量的本文所描述的医药组合物。
在另一个实施方案中，本文提供了一种在受试者中增加活化的T细胞中OX40和/或PD-1的表面表达的方法，其包括向受试者施用有效量的本文所描述的医药组合物。
如本文所描述的抗体可以与IDO抑制剂组合用于治疗癌症。在一个实施方案中，本文提供了一种在受试者中治疗癌症的方法，其包括向受试者施用有效量的本文所描述的医药组合物，其中这种方法进一步包括向受试者施用吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)的抑制剂。如本文所描述的用于治疗癌症的IDO抑制剂以医药组合物的固体剂型存在，诸如片剂、丸剂或胶囊，其中医药组合物包括IDO抑制剂和医药学上可接受的赋形剂。这样的话，如本文所描述的抗体和如本文所描述的IDO抑制剂可以作为独立的剂型独立、依序或并行施用。在一个实施方案中，抗体经肠道外施用并且IDO抑制剂经口施用。在特定实施方案中，抑制剂选自由帕卡斯他(epacadostat)(Incyte Corporation)、F001287(Flexus Biosciences)、吲哚西莫(indoximod)(NewLink Genetics)以及NLG919(NewLink Genetics)组成的群组。帕卡斯他已经描述于PCT公布号WO 2010/005958中，其出于所有目的以全文引用的方式并入本文中。在一个实施方案中，抑制剂是帕卡斯他。在另一个实施方案中，抑制剂是F001287。在另一个实施方案中，抑制剂是吲哚西莫。在另一个实施方案中，抑制剂是NLG919。
如本文所描述的抗体可以与检查点靶向剂组合用于治疗癌症。在一个实施方案中，本文提供了一种在受试者中治疗癌症的方法，其包括向受试者施用有效量的本文所描述的医药组合物，其中这种方法进一步包括向受试者施用检查点靶向剂。在一些实施方案中，检查点靶向剂选自由PD-1的拮抗剂(例如，拮抗剂抗PD-1抗体)、PD-L1的拮抗剂(例如，拮抗剂抗PD-L1抗体)、PD-L2的拮抗剂(例如，拮抗剂抗PD-L2抗体)、CTLA-4的拮抗剂(例如，拮抗剂抗CTLA-4抗体)、TIM-3的拮抗剂(例如，拮抗剂抗TIM-3抗体)、LAG-3的拮抗剂(例如，拮抗剂抗LAG-3抗体)以及OX40的促效剂(例如，促效剂抗OX40抗体)组成的群组。在一些实施方案中，检查点靶向剂，例如PD-1的拮抗剂(例如，拮抗剂抗PD-1抗体)或OX40的促效剂(例如，促效剂抗OX40抗体)，与抗GITR抗体同时施用。在一些实施方案中，检查点靶向剂，例如PD-1的拮抗剂(例如，拮抗剂抗PD-1抗体)或OX40的促效剂(例如，促效剂抗OX40抗体)，在施用抗GITR抗体之前施用。在一些实施方案中，检查点靶向剂，例如PD-1的拮抗剂(例如，拮抗剂抗PD-1抗体)或OX40的促效剂(例如，促效剂抗OX40抗体)，继施用抗GITR抗体之后施用。
如本文所描述的抗体可以与抗CD25抗体组合使用。在一些实施方案中，抗CD25抗体与抗GITR抗体同时施用。在一些实施方案中，抗CD25抗体在施用抗GITR抗体之前施用。在一些实施方案中，抗CD25抗体继施用抗GITR抗体之后施用。
在另一个特定实施方案中，本文提供了一种在受试者中治疗癌症的方法，其包括将拮抗剂抗PD-1抗体施用于已经接受抗GITR抗体的有需要的受试者，其中PD-1抗体在抗GITR抗体相对于在施用的时间受试者中PD-1的表达已经增加受试者中PD-1的表达的时间施用。在另一个特定实施方案中，本文提供了一种在受试者中治疗癌症的方法，其包括将促效剂抗OX40抗体施用于已经接受抗GITR抗体的有需要的受试者，其中OX40抗体在抗GITR抗体相对于在施用的时间受试者中OX40的表达已经增加受试者中OX40的表达的时间施用。在某些实施方案中，抗GITR抗体诱导、活化或增强GITR的活性。
在另一个特定实施方案中，本文提供了一种在受试者中治疗癌症的方法，其包括将抗GITR抗体施用于有需要的受试者，其中抗GITR抗体相对于在施用的时间受试者中PD-1的表达增加受试者中PD-1的表达，以及当PD-1的表达增加时将拮抗剂抗PD-1抗体施用于受试者。在另一个特定实施方案中，本文提供了一种在受试者中治疗癌症的方法，其包括将抗GITR抗体施用于有需要的受试者，其中抗GITR抗体相对于在施用的时间受试者中OX40的表达增加受试者中OX40的表达，以及当OX40的表达增加时将促效剂OX40抗体施用于受试者。在某些实施方案中，抗GITR抗体诱导、活化或增强GITR的活性。
在另一个特定实施方案中，本文提供了一种在受试者中治疗癌症或病毒感染的方法，这种方法包括以下步骤：(a)离体孵育T细胞与本文所描述的抗体或其抗原结合片段；以及(b)将T细胞输注至受试者中。在一个特定实施方案中，输注至受试者中的T细胞是自体或异体的。在某些实施方案中，T细胞从受试者分离。在一些实施方案中，T细胞不与T细胞受体(TCR)复合物刺激剂(例如，植物血球凝集素(PHA)和/或佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)，或TCR复合物刺激抗体，诸如抗CD3抗体和抗CD28抗体)一起孵育。在某些实施方案中，这种方法进一步包括在步骤(a)之前：(1)针对GITR的细胞表面表达试验T细胞；以及(2)如果步骤(1)并不得到GITR高于临限值的检测，那么通过孵育T细胞与T细胞受体(TCR)复合物刺激剂(例如，植物血球凝集素(PHA)和/或佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)，或TCR复合物刺激抗体，诸如抗CD3抗体和抗CD28抗体)诱导T细胞的表面上GITR的表达。在一些实施方案中，这种方法进一步包括在步骤(a)之前、同时或之后孵育T细胞与T细胞受体(TCR)复合物刺激剂(植物血球凝集素(PHA)和/或佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)，或TCR复合物刺激抗体，诸如抗CD3抗体和抗CD28抗体)。在一个特定实施方案中，所治疗的受试者是人类。
在另一个实施方案中，本文提供了一种在受试者中治疗和/或预防感染性疾病的方法，其包括向受试者施用有效量的本文所描述的医药组合物。对于感染性疾病的实例，参看下文的章节5.4.1.2。在另一个特定实施方案中，本文提供了一种在受试者中治疗病毒感染的方法，其包括向受试者施用有效量的本文所描述的医药组合物。在某些实施方案中，所治疗的病毒感染由人乳头状瘤病毒(HPV)、单纯疱疹或其它疱疹病毒、B型肝炎病毒(HBV)、C型肝炎病毒(HCV)或其它肝炎病毒、麻疹病毒、HIV或爱泼斯坦巴尔病毒(Epstein Barrvirus)(EBV)引起。在某些实施方案中，治疗病毒感染的方法进一步包括将抗病毒剂施用于受试者。在一个特定实施方案中，所治疗的受试者是人类。
在另一个特定实施方案中，本文提供了一种鉴别在不存在TCR促效剂的情况下能够诱导、活化或增强GITR的活性的抗GITR抗体的方法，其包括在不存在TCR促效剂的情况下使表达GITR的细胞与抗GITR抗体接触以及测量GITR活性，其中与不存在抗GITR抗体的情况下的GITR活性相比增加的GITR活性指示抗GITR抗体在不存在TCR促效剂的情况下能够诱导、活化或增强GITR的活性。在某些实施方案中，GITR活性通过测量NF-κB活性来评估。在某些实施方案中，GITR活性通过测量TRAF适配子介导的信号传导路径的活化来评估，其中TRAF适配子选自由TRAF1、TRAF2、TRAF3、TRAF4以及TRAF5组成的群组。在某些实施方案中，GITR活性通过测量MAPK/ERK路径的活化来评估。在某些实施方案中，抗GITR抗体使GITR活性与不存在抗GITR抗体的情况下的GITR活性相比增加至少两倍。在某些实施方案中，抗GITR抗体使GITR活性与不存在抗GITR抗体的情况下的GITR活性相比增加两倍至二十倍。在某些实施方案中，抗GITR抗体使GITR活性与不存在抗GITR抗体的情况下的GITR活性相比增加两倍至十倍。在某些实施方案中，细胞是T细胞。在某些实施方案中，细胞不是T细胞。
在另一个特定实施方案中，本文提供了一种特异性地结合至人类GITR的抗GITR抗体，其中所述抗体在不存在TCR触发的情况下能够诱导、活化或增强细胞中GITR的活性。在另一个特定实施方案中，本文提供了一种特异性地结合至人类GITR的抗GITR抗体，其中所述抗体在不存在TCR触发的情况下诱导、活化或增强细胞中NF-κB的活性。在另一个特定实施方案中，本文提供了一种治疗癌症的方法，其包括向有需要的受试者施用特异性地结合至人类GITR的抗GITR抗体，其中所述抗体在不存在TCR触发的情况下能够诱导、活化或增强GITR和/或NF-κB的活性。
3.1术语
如本文中所使用，术语“约”和“大约”当用于修饰数值或数值范围时，指示在这个值或范围以上5％至10％和以下5％至10％的偏差仍然在所叙述的值或范围的预期含义内。
如本文中所使用，如果例如在所给出的实验中或使用来自多个实验的平均值，测试抗体与第一抗原之间的结合相对于测试抗体与第二抗原之间的结合减少至少30％、40％、50％、60％、70％或80％，那么测试抗体与第一抗原之间的结合相对于测试抗体与第二抗原之间的结合“实质上削弱”，如通过例如包括以下步骤的试验评估：(a)在细胞(例如，1624-5细胞)的表面上表达第一抗原或第二抗原；(b)在流式细胞测量术分析中使用例如2μg/ml测试抗体或多克隆抗体将表达第一抗原或第二抗原的细胞染色并且例如以来自多于一个测量的平均值记录平均荧光强度(MFI)值，其中多克隆抗体识别第一抗原与第二抗原；(c)用针对表达第二抗原的细胞的测试抗体的MFI值除以针对表达第二抗原的细胞的多克隆抗体的MFI值(MFI比率2)；(d)用针对表达第一抗原的细胞的测试抗体的MFI值除以针对表达第一抗原的细胞的多克隆抗体的MFI值(MFI比率1)；以及(e)通过计算100％×(1-(MFI比率1/MFI比率2))确定结合减少的百分比。
如本文中所使用，如果当在流式细胞测量术分析中测量时，针对抗原的抗体的平均荧光强度(MFI)值并不显著高于针对抗原的同型对照抗体的MFI值或不存在任何抗体的情况下的MFI值，那么抗体并不展现“实质性结合”至抗原。
如本文中所使用，术语“抗体(antibody/antibodies)”是专门术语并且可以在本文中互换使用并且指的是具有特异性地结合抗原的抗原结合位点的分子。
抗体可以包括例如单克隆抗体、重组产生的抗体、单特异性抗体、多特异性抗体(包括双特异性抗体)、人类抗体、人源化抗体、嵌合抗体、免疫球蛋白、合成抗体、包含两个重链和两个轻链分子的四聚抗体、抗体轻链单体、抗体重链单体、抗体轻链二聚体、抗体重链二聚体、抗体轻链-抗体重链对、胞内抗体(intrabody)、异偶联抗体、单域抗体、单价抗体、单链抗体或单链Fv(scFv)、骆驼化抗体、亲和体(affybody)、Fab片段、F(ab')2片段、二硫键连接的Fv(sdFv)、抗独特型(抗Id)抗体(包括例如抗抗Id抗体)，以及上述任一者的抗原结合片段。在某些实施方案中，本文所描述的抗体指的是多克隆抗体群体。抗体可以属于免疫球蛋白分子的任何类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY)、任何类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1或IgA2)或任何子类(例如，IgG2a或IgG2b)。在某些实施方案中，本文所描述的抗体是IgG抗体，或其类别(例如，人类IgG1或IgG4)或子类。在一个特定实施方案中，抗体是人源化单克隆抗体。在另一个特定实施方案中，抗体是人类单克隆抗体，优选地是免疫球蛋白。在某些实施方案中，本文所描述的抗体是IgG1或IgG4抗体。
如本文中所使用，术语“抗原结合域”、“抗原结合区”、“抗原结合片段”以及类似术语指的是抗体分子的一部分，其包含赋予抗体分子对抗原的特异性的氨基酸残基(例如，互补决定区(CDR))。抗原结合区可以来源于任何动物物种，诸如啮齿动物(例如小鼠、大鼠或仓鼠)和人类。
如本文中所使用，术语“可变区”或“可变域”可互换使用并且在本领域中是通用的。可变区通常指的是抗体的一部分，一般是轻或重链的一部分，通常在成熟重链中约氨基端110至120个氨基酸并且在成熟轻链中约90至115个氨基酸，其在抗体之间的序列广泛不同并且在特定抗体对其特定抗原的结合和特异性中使用。序列的可变性集中在称为互补决定区(CDR)的那些区中，而可变域中的更高保守区称为构架区(FR)。不希望受任何特定机制或理论约束，据信轻和重链的CDR主要负责抗体与抗原的相互作用和特异性。在某些实施方案中，可变区是人类可变区。在某些实施方案中，可变区包含啮齿动物或鼠类CDR和人类构架区(FR)。在特定实施方案中，可变区是灵长类动物(例如，非人类灵长类动物)可变区。在某些实施方案中，可变区包含啮齿动物或鼠类CDR和灵长类动物(例如，非人类灵长类动物)构架区(FR)。
术语“VL”和“VL域”可互换使用以指代抗体的轻链可变区。
术语“VH”和“VH域”可互换使用以指代抗体的重链可变区。
术语“Kabat编号”和类似术语在本领域中是公认的并且指的是对抗体或其抗原结合部分的重和轻链可变区中的氨基酸残基进行编号的系统。在某些方面，抗体的CDR可以根据Kabat编号系统(参看例如Kabat EA和Wu TT(1971)《纽约科学院年报(Ann NY AcadSci)》190:382-391，以及Kabat EA等,(1991)《引起免疫学关注的蛋白质的序列(Sequencesof Proteins of Immunological Interest)》,第五版,美国卫生与公众服务部(U.S.Department of Health and Human Services),NIH公布号91-3242)来确定。使用Kabat编号系统，抗体重链分子内的CDR通常存在于氨基酸位置31至35(在35(在Kabat编号方案中称作35A和35B)之后任选地可以包括一个或两个额外的氨基酸)(CDR1)、氨基酸位置50至65(CDR2)以及氨基酸位置95至102(CDR3)处。使用Kabat编号系统，抗体轻链分子内的CDR通常存在于氨基酸位置24至34(CDR1)、氨基酸位置50至56(CDR2)以及氨基酸位置89至97(CDR3)处。在一个特定实施方案中，本文所描述的抗体的CDR已经根据Kabat编号方案来确定。
如本文中所使用，术语“恒定区”或“恒定域”可互换并且具有其在本领域中通用的含义。恒定区是抗体部分，例如轻和/或重链的羧基端部分，其并不直接涉及于抗体与抗原的结合中，但可以展现各种效应功能，诸如与Fc受体的相互作用。免疫球蛋白分子的恒定区相对于免疫球蛋白可变域一般具有更保守的氨基酸序列。
如本文中所使用，术语“重链”当关于抗体使用时可以指基于恒定域的氨基酸序列的任何独特类型，例如α、δ、ε、γ以及μ，其分别产生抗体的IgA、IgD、IgE、IgG以及IgM类别，包括IgG的子类，例如IgG1、IgG2、IgG3以及IgG4。
如本文中所使用，术语“轻链”当关于抗体使用时可以指基于恒定域的氨基酸序列的任何独特类型，例如kappa(κ)或lambda(λ)。轻链氨基酸序列在本领域中是众所周知的。在特定实施方案中，轻链是人类轻链。
“结合亲和力”一般指的是分子(例如，抗体)的单一结合位点与其结合伴侣(例如，抗原)之间的非共价相互作用的总和的强度。除非另有指示，否则如本文中所使用，“结合亲和力”指的是固有结合亲和力，其反映结合对的成员(例如，抗体与抗原)之间的1:1相互作用。分子X对其伴侣Y的亲和力一般可以由离解常数(KD)表示。亲和力可以按本领域中已知的许多方式测量和/或表述，包括(但不限于)平衡离解常数(KD)和平衡缔合常数(KA)。KD从koff/kon的商计算出，而KA从kon/koff的商计算出。kon指的是例如抗体与抗原的缔合速率常数，并且koff指的是例如抗体与抗原的离解。kon和koff可以通过本领域的一般技术人员所知的技术，诸如或KinExA测定。
如本文中所使用，“保守氨基酸取代”是氨基酸残基被具有类似侧链的氨基酸残基置换的取代。具有侧链的氨基酸残基的家族已经在本领域中定义。这些家族包括以下氨基酸：具有碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、不带电极性侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、非极性侧链(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、β分支侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)以及芳香族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段的CDR内或构架区内的一个或多个氨基酸残基可以被具有类似侧链的氨基酸残基置换。
如本文中所使用，“表位”是本领域中的术语并且指的是抗体可以特异性地结合的抗原的局部区。表位可以例如是多肽的相连氨基酸(线性或相连表位)，或表位可以例如一起来自于多肽的两个或更多个非相连区(构象、非线性、不连续或非相连表位)。在某些实施方案中，抗体所结合的表位可以通过例如NMR光谱法、X射线衍射结晶学研究、ELISA试验、与质谱法(例如，液相色谱电喷雾质谱法)相结合的氢/氘交换、基于阵列的寡肽扫描试验和/或诱变定位(例如，定点诱变定位)确定。对于X射线结晶学，可以使用本领域中的已知方法中的任一者实现结晶(例如，GiegéR等,(1994)《结晶学报D辑：生物结晶学(ActaCrystallogr D Biol Crystallogr)》50(第4部分):339-350；McPherson A(1990)《欧洲生物化学杂志(Eur J Biochem)》189:1-23；Chayen NE(1997)《结构(Structure)》5:1269-1274；McPherson A(1976)《生物化学杂志(J Biol Chem)》251:6300-6303)。抗体:抗原晶体可以使用所熟知的X射线衍射技术来研究并且可以使用计算机软件细化，诸如X-PLOR(YaleUniversity,1992,由Molecular Simulations,Inc.经销；参看例如《酶学方法(MethEnzymol)》(1985)第114和115卷,Wyckoff HW等编；U.S.2004/0014194)和BUSTER(BricogneG(1993)《结晶学报D辑：生物结晶学(Acta Crystallogr D Biol Crystallogr)》49(第1部分):37-60；Bricogne G(1997)《酶学方法(Meth Enzymol)》276A:361-423,Carter CW编；Roversi P等,(2000)《结晶学报D辑：生物结晶学(Acta Crystallogr D BiolCrystallogr)》56(第10部分):1316-1323)。诱变定位研究可以使用本领域的技术人员所知的任何方法实现。对于诱变技术，包括丙氨酸扫描诱变技术的描述，参看例如Champe M等,(1995)《生物化学杂志(J Biol Chem)》270:1388-1394，以及Cunningham BC和Wells JA(1989)《科学(Science)》244:1081-1085。在一个特定实施方案中，抗体或其抗原结合片段的表位使用丙氨酸扫描诱变研究来确定，诸如下文的章节6中所描述。
如本文中所使用，术语“免疫特异性地结合”、“免疫特异性地识别”、“特异性地结合”以及“特异性地识别”在抗体的背景下是类似术语并且指的是结合至抗原的分子(例如，表位或免疫复合物)，这种结合由本领域的技术人员所了解。举例来说，特异性地结合至抗原的分子可以结合至其它肽或多肽，一般以如通过例如免疫试验、KinExA3000仪器(Sapidyne Instruments,Boise,ID)或本领域中已知的其它试验测定的更低亲和力。在一个特定实施方案中，免疫特异性地结合至抗原的分子以比当分子结合至另一个抗原时的KA大至少2个对数、2.5个对数、3个对数、4个对数或更大的KA结合至抗原。
在另一个特定实施方案中，免疫特异性地结合至抗原的分子在类似的结合条件下并不与其它蛋白质交叉反应。在另一个特定实施方案中，免疫特异性地结合至抗原的分子并不与其它非GITR蛋白交叉反应。在一个特定实施方案中，本文提供了一种抗体或其片段，其以比结合至另一个无关抗原更高的亲和力结合至GITR。在某些实施方案中，本文提供了一种抗体或其片段，如通过例如放射免疫试验、表面等离子体共振或动力学排阻试验测量，其以比结合至另一个无关抗原高20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高的亲和力结合至GITR(例如，人类GITR)。在一个特定实施方案中，如通过例如放射免疫试验测量，本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段与无关的非GITR蛋白的结合程度比抗体与GITR蛋白的结合小10％、15％或20％。
在一个特定实施方案中，本文提供了一种抗体或其片段，其以比结合至另一个种类的GITR更高的亲和力结合至人类GITR。在某些实施方案中，本文提供了一种抗体或其片段，如通过例如放射免疫试验、表面等离子体共振或动力学排阻试验测量，其以比结合至另一个种类的GITR高5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或更高的亲和力结合至人类GITR。在一个特定实施方案中，如通过例如放射免疫试验、表面等离子体共振或动力学排阻试验测量，结合至人类GITR的本文所描述的抗体或其片段将以比抗体或其片段与人类GITR蛋白的结合小10％、15％或20％结合至另一个种类的GITR蛋白。
如本文中所使用，术语“糖皮质激素诱导的TNFR家族相关受体”或“GITR”或“GITR多肽”指的是GITR，包括(但不限于)原生GITR、GITR的同种型或GITR的种间GITR同源物。GITR是26kDa第I型跨膜蛋白。GenBankTM入藏号BC152381和BC152386提供了例示性人类GITR核酸序列。Swiss-Prot入藏号Q9Y5U5-1(TNR18_HUMAN；SEQ ID NO:701)和GenBankTM入藏号NP_004186提供了同种型1的例示性人类GITR氨基酸序列。这个氨基酸序列的长度为241个氨基酸，其中前25个氨基酸残基编码信号序列。同种型1是第I型膜蛋白。人类GITR的例示性成熟氨基酸序列以SEQ ID NO:700提供。相比之下，同种型2是分泌形式的人类GITR并且长度为约255个氨基酸。Swiss-Prot入藏号Q9Y5U5-2和GenBankTM入藏号NP_683699提供了同种型2的例示性人类GITR氨基酸序列。人类GITR的同种型3的长度为约234个氨基酸。Swiss-Prot入藏号Q9Y5U5-3和GenBankTM入藏号NP_683700(同种型3前体)提供了同种型3的例示性人类GITR氨基酸序列。在一个特定实施方案中，GITR是人类GITR。在另一个特定实施方案中，GITR是人类GITR同种型1(SEQ ID NO:701)。在某些实施方案中，GITR是人类同种型2(SEQ ID NO:702)或同种型3(SEQ ID NO:703)。GITR也称为肿瘤坏死因子受体超家族成员18(TNFRSF18)、活化可诱导TNFR家族受体(AITR)、GITR-D以及CD357。人类GITR由EntrezGene指定为GeneID:8784。
来自猕猴的未成熟形式的例示性GITR蛋白的氨基酸序列提供于SEQ ID NO:704中。成熟形式的这种例示性蛋白质是SEQ ID NO:704的氨基酸26-234。
如本文中所使用，术语“GITR配体”和“GITRL”指的是糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白配体。GITRL以其它方式称为活化诱导的TNF相关配体(AITRL)和肿瘤坏死因子配体超家族成员18(TNFSF18)。GenBankTM入藏号AF125303提供了例示性人类GITRL核酸序列。GenBankTM入藏号NP_005083和Swiss-Prot入藏号Q9UNG2提供了例示性人类GITRL氨基酸序列。在一个特定实施方案中，GITRL是SEQ ID NO:716的人类GITRL。
如本文中所使用，术语“宿主细胞”可以是任何类型的细胞，例如，初级细胞、培养物中的细胞或来自细胞系的细胞。在特定实施方案中，术语“宿主细胞”指的是用核酸分子转染的细胞和这种细胞的子代或潜在子代。这种细胞的子代可能不与用核酸分子转染的亲本细胞相同，例如，归因于可能在后代中或核酸分子整合至宿主细胞基因组中发生的突变或环境影响。
如本文中所使用，术语“有效量”在将疗法施用于受试者的背景下指的是达到所需的预防或治疗作用的疗法的量。有效量的实例在下文的章节5.4.1.3中提供。
如本文中所使用，术语“受试者”和“患者”可互换使用。受试者可以是动物。在一些实施方案中，受试者是哺乳动物，诸如非灵长类动物(例如，母牛、猪、马、猫、犬、大鼠等)或灵长类动物(例如，猴或人类)，最优选地是人类。在某些实施方案中，这类术语指的是非人类动物(例如，非人类动物，诸如猪、马、母牛、猫或犬)。在一些实施方案中，这类术语指的是宠物或农畜。在特定实施方案中，这类术语指的是人类。
4.附图说明
图1是在非还原条件下的西方墨点，其示出了抗GITR抗体231-32-15对比同型对照的特异性。抗体针对人类GITR重组蛋白(Hu GITR重组蛋白)、小鼠GITR重组蛋白(Mu GITR重组蛋白)、表达重组人类GITR的CMS5A细胞(CMS5A-huGITR)、野生型CMS5A细胞(CMS5A-wt)、来自CD4+活化细胞(CD4+活化)的蛋白质以及来自CD4+未处理细胞(CD4+未处理)的蛋白质点墨。针对人类GITR、CMS5A细胞中的重组人类GITR以及活化CD4+细胞中的天然人类GITR观察231-32-15反应性。
图2A和2B示出了抗GITR抗体对比商业(R&D Systems)抗GITR mAb的竞争结合的FACS分析。在图2A中，如图中所指示使用R&D mAb和测试抗体(抗体1042-7、抗体1039-45、抗体1333-21以及抗体32-15)测试R&D Systems mAb的阻断。条件‘无抗体’示出了在不存在测试抗体的情况下单独的R&D Systems mAb的结合。图2B示出了如图中所指示使用无mAb、R&DSystems mAb以及测试抗体(抗体1042-7、抗体1039-45、抗体1333-21以及抗体32-14)的抗GITR抗体231-1039-45的阻断。条件‘无抗体’示出了在不存在测试抗体的情况下单独的抗体231-1039-45的结合。
图3A、3B以及3C：图3A描绘了不同抗体浓度的抗体1333-21批次1、1333-21批次2以及R&D抗体对CMS5A-GITR的染色。图3B图示了在用抗体1042-7、32-15、1039-45、1333-21以及R&D抗体染色时离体PBMC CD3-CD19-GITR+和CD4+CD25+GITR+细胞的荧光强度。图3C提供了由抗体1333-21和R&D Systems抗体对CD3-CD19-GITR+和CD4+CD25+GITR+细胞进行的FACS分析。
图4描绘了抗GITR抗体与不同浓度的抗CD3(OKT3)抗体组合对CD4+T细胞的共刺激作用的评估。在上图中，针对所测试的每种抗体(PBS对照、R&D、1042-7、32-15、1039-45以及1333-21)与递减浓度的OKT3抗体(5μg/ml、1μg/ml、0.2μg/ml、0.04μg/ml以及0μg/ml)组合绘制％CFSE-low细胞。在下图中，针对所测试的每种抗体(PBS对照、R&D、1042-7、32-15、1039-45以及1333-21)与递减浓度的OKT3抗体(5μg/ml、1μg/ml、0.2μg/ml、0.04μg/ml以及0μg/ml)组合绘制IFNγ的浓度(pg/ml)。
图5示出了在抗GITR抗体嵌合亲本231-32-15和m6C8存在下GITRL-PE结合至GITR。识别IL-1β的另一种抗体SK48E26用作阴性对照。在渐增抗体浓度(12、37、111、333、1000、3000以及9000ng/ml)存在下通过悬浮阵列技术(200系统)测量GITRL-PE结合的百分比。图5示出了来自一式两份进行的这种试验的四个独立重复的结果并且标准偏差从n＝8测定。
图6是与图5中所示类似的图形，其中在渐增抗体浓度(12、37、111、333、1000、3000以及9000ng/ml)存在下通过悬浮阵列技术(200系统)测量GITRL-PE结合的百分比。所测试的抗GITR抗体是嵌合亲本231-32-15抗体以及两种人源化变体Hum231#1和Hum231#2。这个图示出了来自一式两份进行的一个实验的结果。
图7示出了如通过表面等离子体共振(T100/200)测量在mAb存在下GITR配体结合至GITR。所测试的抗GITR抗体是嵌合亲本231-32-15、人源化变体Hum231#1和Hum231#2以及m6C8。阴性对照是抗IL-1β抗体SK48E26。
图8A和8B示出了用以评估抗GITR抗体的刺激对从两种不同血沉棕黄层富集的CD4+T细胞的影响的次最佳CD3刺激试验的结果的FACS图。图8A示出了来自对刺激的高响应者(血沉棕黄层6)的CD4T细胞的细胞数目和增殖的FACS分析，而图8B示出了低响应者(血沉棕黄层8)的FACS分析。针对10μg/ml抗GITR抗体(嵌合亲本231-32-15抗体以及人源化变体Hum231#1和Hum231#2)示出细胞增殖(CFSE；x轴)。所使用的对照是单独的抗CD3/抗CD28抗体或无刺激。试验一式三份进行。
图9A和9B是示出在次最佳CD3刺激试验中与抗体m6C8相比抗GITR人源化变体抗体Hum231#1和Hum231#2对富集的CD4T细胞增殖(图9A)和细胞数目(图9B)的影响的直方图。抗体以10μg/ml的浓度使用。末尾柱(实心黑色填充；图9A和9B)指示不添加任何抗GITR抗体的抗CD3/抗CD28模拟。
图10A、10B、10C以及10D示出了在次最佳CD3刺激试验中通过施用抗GITR抗体分别诱导的IFNγ、IL-6、IL-10以及TNFα的细胞因子产生的分析。所测试的抗GITR抗体是10μg/ml和5μg/ml浓度的嵌合亲本231-32-15以及人源化变体Hum231#1和Hum231#2。
图11是示出抗GITR抗体的进一步滴定以及其在次最佳CD3刺激试验中对细胞增殖的影响的直方图。嵌合亲本231-32-15抗体以及人源化变体Hum231#1和Hum231#2以10μg/ml、5μg/ml以及2.5μg/ml的浓度使用。
图12A和12B示出了抗GITR抗体的进一步滴定以及其在次最佳CD3刺激试验中对IFNγ产生的影响。嵌合亲本231-32-15抗体以及人源化变体Hum231#1和Hum231#2以10μg/ml、5μg/ml以及2.5μg/ml的浓度作为板结合的使用(图12A)或以20μg/ml、10μg/ml以及5μg/ml作为可溶性抗体使用(图12B)。
图13是示出在次最佳CD3刺激试验中用5μg/ml板结合的Hum231#2对PBMC的细胞因子分泌共刺激的结果的一组条形图。图13中所示的数据来自刺激后第2天和第4天测试的两个供体。针对六种不同细胞因子(IFNγ、IL-2、TNFα、IL-10、IL-13以及IL-4)绘制超过同型对照的最大倍数诱导。误差条代表每种细胞因子的两次重复的标准偏差。每个供体已经在至少三个个别的实验中测试。
图14A、14B以及14C是测量在次最佳CD3刺激下由板结合的Hum231#2、Hum231#2w或pab1989(Hum231#2w的IgG4配对物)诱导的IFNγ和TNFα产生的细胞内细胞因子染色试验的结果。图14A是示出CD4+和CD8+T细胞的IFNγ和TNFα的共染色的一组流式细胞测量图。针对一定范围的次最佳抗CD3抗体浓度的Hum231#2、Hum231#2w、pab1989或同型对照绘制IFNγ+单功能性T细胞、TNFα+单功能性T细胞或IFNγ+TNFα+多功能性T细胞的百分比(图14B和14C)。图14B和14C中的每个点代表所测试的条件的两次重复。误差条代表标准偏差。抗GITR抗体以5μg/ml的浓度使用。这些图形分别代表使用来自六个(图14A和14B)和四个(图14C)不同供体的PBMC的实验。
图15A、15B以及15C是示出在不同交联条件下比较抗GITR抗体Hum231#2的实验的结果的一组条形图。图15A是示出使用由5μg/ml板结合(PB)的或可溶性Hum231#2或同型对照共刺激的PBMC对于IFNγ+TNFα+多功能性CD8+T细胞的百分比从同型对照的最大倍数诱导的条形图。误差条代表标准偏差。*代表p<0.05并且**代表p<0.005(未配对T检验)。在图15B和15C中，针对板结合的Hum231#(图15B)或抗Fc交联的Hum231#2(图15C)绘制六种不同细胞因子的超过同型对照的最大倍数诱导。误差条代表来自每种细胞因子的两次重复的标准偏差。
图16A和16B示出了抗CD3/抗CD28和抗GITR抗体对T效应(T-eff)和T调控性细胞(Treg)刺激的结果。图16A示出了活化的T效应和T调控性细胞在用单独或与抗GITR抗体联合的抗CD3/抗CD28刺激之后在其细胞表面上表达GITR。然而，如图16B中所示，用抗GITR抗体共刺激优于T调控性细胞优先扩展效应T细胞。在血沉棕黄层8上针对10μg/ml抗GITR抗体(嵌合亲本231-32-15抗体以及人源化变体Hum231#1和Hum231#2)示出细胞扩展/增殖(CFSE；y轴)。所使用的对照是单独的125ng/ml抗CD3/抗CD28抗体或无刺激。
图17A和17B示出了由所测试的抗GITR抗体对T细胞增殖的结果。在用31.25ng/ml抗CD3抗体刺激的总PBMC中，图17A示出了CD4细胞的增殖并且图17B示出了CD8细胞的增殖。嵌合亲本231-32-15抗体以及人源化变体Hum231#1和Hum231#2以10μg/ml的浓度测试。
图18A、18B以及18C是示出在不存在或存在0.3μg/ml板结合的抗CD3抗体(克隆体SP34)的情况下GITR NF-κB-荧光素酶报告试验的结果的图形。图18A是示出在存在抗CD3抗体的情况下在刺激后18小时在一定范围的抗GITR抗体浓度下荧光素酶相对光单位(RLU)的图形。图18B是示出在不存在抗CD3抗体的情况下在刺激后5小时在不同抗GITR抗体浓度下荧光素酶RLU的图形。图18C是示出在刺激后0、2、5、6、8以及18小时荧光素酶表达(GITR Ab/同型对照)的最高比率的图形。误差条代表来自重复的标准偏差。所测试的抗GITR抗体是Hum231#2w和m6C8。所示的数据代表使用抗CD3抗体的四个实验或不使用抗CD3抗体的两个实验。
图19A是示出如通过流式细胞测量术测量在活化的nTreg、CD4+T细胞或CD8+T细胞上人类GITR的正规化受体密度的条形图。所使用的抗GITR抗体是PE偶联的小鼠抗人类GITR抗体(Biolegend：621；311604/B171072)。误差条代表标准偏差。图19B是使用Fcγ受体IIIA(CD16)报告细胞系检查抗GITR抗体Hum231#2w的图形。在37℃下在Hum231#2w或同型对照存在下将过度表达具有高亲和力158V/V多态性的CD16A的Jurkat NFAT-荧光素酶报告细胞与活化的初级nTreg和T效应细胞共培养20小时。20小时后记录相对光单位(RLU)，其代表CD16A结合。ΔRLU代表抗GITR抗体的RLU减去同型对照的RLU。误差条代表标准偏差(n＝2)。所示的数据代表使用来自三个供体的细胞的实验。图19C是示出通过流式细胞测量术测量的GITR的表面表达的一组直方图。从健康人类供体(a-c，n＝3)的血液或从非小细胞肺癌患者(NSCLC)(d-f，n＝3)的肿瘤组织收集样品。细胞群体定义如下：Tconv(CD3+、CD4+、CD8a-、CD25low、FOXP3-)或Treg(CD3+、CD4+、CD8a-、CD25high、FOXP3+)。
图20A、20B以及20C是使用来自非洲绿猴(AGM)的PBMC的实验的结果。图20A是使用抗GITR抗体Hum231#2和抗PD-1抗体对来自非洲绿猴(AGM)的活化的CD4+和CD8+T细胞的染色的一组流式细胞测量图。健康的AGM PBMC用抗CD3抗体(克隆体SP34.2)或ConA加上IL-2(20U/ml)活化3天。流式细胞测量图代表使用来自三个不同AGM的PBMC的实验。图20B和20C是使用AGM PBMC的CD3次刺激试验的结果。图20B是示出由Hum231#2w或同型对照共刺激的细胞的CD8和IFNγ的共染色的一对流式细胞测量图。在图20C中，针对不同抗GITR抗体浓度绘制IFNγ+AGM CD8+T细胞的百分比。每个点代表两个孔的重复并且误差条代表标准偏差。图20B和20C中所示的数据代表使用来自两个AGM的PBMC的实验。
图21A和21B是来自用板结合的0.8μg/ml抗CD3抗体和5μg/ml抗GITR抗体Hum231#2刺激的CD4+和CD8+T细胞上的表面OX40和PD-1的染色的结果。图21A是示出OX40和PD-1的共染色的一组流式细胞测量图和直方图。在图21B中，每个条代表用Hum231#2(黑色条)、同型对照(灰色条)或仅培养基(白色条)刺激的CD4+和CD8+T细胞上的PD-1和OX40的MFI值。误差条代表标准偏差。流式细胞测量图和图形代表使用来自一个供体的PBMC的实验。
图22A和22B示出了用于产生种系化抗体变体的突变文库的设计。基于IGHV1-2*02VH人类种系的文库中所包括的不同构架和CDR位置示于图22A中(分别是SEQ ID NO 37-53，按出现顺序)并且对于基于IGKV4-1*01VL人类种系的文库示于图22B中(分别是SEQ IDNO54-71，按出现顺序)。
图23是列出17个种系化抗体变体并且详述其具有对应的SEQ ID编号的重和轻链可变区的表格。这个表格示出了额外种系氨基酸的数目和变体抗体与嵌合亲本231-32-15抗体相比的平均相对亲和力。
图24A-C是列出107个种系化抗体变体并且详述其具有对应的SEQ ID编号的重和轻链可变区的表格。
图25A和25B示出了在所选择的抗GITR种系化抗体变体存在下GITRL-PE结合至GITR。在渐增抗体浓度(12、37、111、333、1000、3000以及9000ng/ml)存在下通过悬浮阵列技术(200系统)测量GITRL-PE结合的百分比。
图26A和26B示出了在从两种血沉棕黄层BC4(图26A)和BC9(图26B)富集的CD4T细胞上种系化抗体变体与嵌合亲本231-32-15抗体以及人源化变体Hum231#1和Hum231#2相比对细胞增殖(％CFSE Low)的影响。使用125ng/ml板结合的抗CD3抗体与板结合的或可溶性同型对照进行次最佳CD3刺激试验。抗GITR抗体以10μg/ml的浓度使用。
图27A和27B分别示出了在从血沉棕黄层BC4富集的CD4T细胞上种系化抗体变体与嵌合亲本231-32-15抗体以及人源化变体Hum231#1和Hum231#2相比对IFNγ和IL-10的细胞因子释放的影响。使用125ng/ml板结合的抗CD3抗体与板结合的或可溶性同型对照进行次最佳CD3刺激试验。抗GITR抗体以10μg/ml的浓度使用并且在培养上清液中测量细胞因子水平。
图28A和28B分别示出了在从血沉棕黄层BC9富集的CD4T细胞上种系化抗体变体与嵌合亲本231-32-15抗体以及人源化变体Hum231#1和Hum231#2相比对IFNγ和IL-10的细胞因子释放的影响。使用125ng/ml板结合的抗CD3抗体与板结合的或可溶性同型对照进行次最佳CD3刺激试验。抗GITR抗体以10μg/ml的浓度使用并且在培养上清液中测量细胞因子水平。
图29A和29B示出了在从两种血沉棕黄层富集的CD4T细胞上种系化抗体变体与嵌合亲本231-32-15抗体以及人源化变体Hum231#1和Hum231#2相比的IFNγ阳性CD4+T细胞的百分比(如通过细胞内染色测量)。图29A示出了来自血沉棕黄层13(BC13)的结果并且图29B示出了来自血沉棕黄层18(BC18)的结果。
图30A-C是示出在存在0.3μg/ml抗CD3抗体的情况下GITR NF-κB-荧光素酶报告试验的结果的一组图形。在这个试验中测试的抗GITR抗体是Hum231#2w和20个种系变体：pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、pab2159、pab2160以及pab2161。在图30A-C中，针对所测试的不同抗GITR抗体浓度绘制在刺激后18小时的荧光素酶RLU。误差条代表标准偏差。图30D-F是示出在不存在抗CD3抗体的情况下GITRNF-κB-荧光素酶报告试验的结果的一组图形。在这个试验中测试的抗GITR抗体是m6C8、Hum231#2w以及20个种系变体：pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、pab2159、pab2160以及pab2161。在图30D-F中，针对所测试的不同抗GITR抗体浓度绘制在刺激后6小时的荧光素酶RLU。误差条代表标准偏差。这些图形和图代表来自两个实验(图30A-C)或一个实验(图30D-F)的数据。
图31示出了当GITR-bio与嵌合亲本231-32-15、Hum231#1或Hum231#2抗体一起预孵育时表达嵌合亲本231-32-15抗体的1624-5前B细胞与生物素化GITR(GITR-bio)的结合的损失。图31右手边型态描绘了表达嵌合亲本231-32-15抗体的1624-5前B细胞与GITR-bio的结合。然而，在左手边型态中，在GITR-bio与嵌合亲本231-32-15、Hum231#1或Hum231#2抗体一起预孵育之后表达嵌合亲本231-32-15抗体的1624-5细胞与GITR-bio的结合存在损失。
图32示出了通过表面等离子体共振(T100/200)测量的表位竞争试验的结果。将GITR抗原固定于CM5传感器芯片上并且以300nM的浓度施加抗GITR抗体。首先施加嵌合亲本231-32-15抗体，随之施加鼠类抗体6C8。
图33A和33B是使用表达通过易错PCR产生的GITR变体的细胞文库的表位定位实验的结果。图33A和33B中示出了来自结合至多克隆抗GITR抗体，但不结合至抗GITR嵌合亲本231-32-15抗体的GITR变体的序列的比对。
图34A和B是使用丙氨酸扫描的表位定位实验的结果。人类GITR中的以下位置(根据SEQ ID NO:701编号)独立地突变为丙氨酸：P28A、T29A、G30A、G31A、P32A、T54A、T55A、R56A、C57A、C58A、R59A、D60A、Y61A、P62A、G63A、E64A、E65A、C66A、C67A、S68A、E69A、W70A、D71A、C72A、M73A、C74A、V75A以及Q76A。在图34A中所示的实验中测试的抗体包括：单克隆抗GITR抗体Hum231#2、三个种系变体(pab1967、pab1975和pab1979)以及m6C8抗体；以及多克隆抗GITR抗体(AF689,R&D systems)。图34A是概括Hum231#2、三个种系变体(pab1967、pab1975和pab1979)以及参考抗体m6C8与表达人类GITR丙氨酸突变体的1624-5细胞的结合的表格。图34B是示出使用单克隆抗体231-32-15、Hum231#2或m6C8或多克隆抗体对表达野生型人类GITR、D60A突变体或G63A突变体的1624-5细胞的染色的一组流式细胞测量图。在每个图中指示GITR阳性细胞的百分比。
图35A是人类GITR、V1M猕猴GITR以及V1M/Q62P/S63G猕猴GITR的序列比对，其突出了来自猕猴GITR的两个氨基酸(GlnSer)被人类GITR中的对应残基(ProGly)置换的位置62和63。图35B是示出使用单克隆抗体231-32-15、Hum231#2或m6C8或多克隆抗GITR抗体对表达人类GITR、V1M猕猴GITR或V1M/Q62P/S63G猕猴GITR的1624-5细胞的染色的一组流式细胞测量图。
5.具体实施方式
本文提供了特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)并且调节GITR活性的抗体(例如，单克隆抗体)和其抗原结合片段。举例来说，在一个方面，本文提供了特异性地结合至GITR并且增强、诱导或增加一种或多种GITR活性的抗体或其片段。在一个特定实施方案中，抗体或抗原结合片段经过分离。
还提供了编码这类抗体和其抗原结合片段的分离核酸(多核苷酸)，诸如互补DNA(cDNA)。进一步提供了包含编码这类抗体或其抗原结合片段的核酸(多核苷酸)的载体(例如，表达载体)和细胞(例如，宿主细胞)。还提供了制造这类抗体的方法。在其它方面，本文提供了诱导、增加或增强GITR活性以及治疗某些病状，诸如癌症和感染性疾病的方法和用途。还提供了相关组合物(例如，医药组合物)、试剂盒以及检测方法。
5.1抗体
在一个特定方面，本文提供了特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体(例如，单克隆抗体，诸如嵌合或人源化抗体)和其片段。在一些实施方案中，本文所描述的抗体或其抗原结合片段部分地抑制GITRL(例如，人类GITRL)结合至GITR(例如，人类GITR)。在某些实施方案中，如通过本领域的技术人员所知或本文所描述的试验评估，本文所描述的抗体或其抗原结合片段使GITRL(例如，人类GITRL)与GITR(例如，人类GITR)的结合抑制小于85％、80％、75％、70％、65％、60％、55％、50％、45％、40％、35％、30％、25％、20％或10％。在一个特定实施方案中，如通过下文的实施例2(例如，下文的章节6.2.5.2或6.2.5.4)中所描述的试验评估，本文所描述的抗体或其抗原结合片段使GITRL(例如，人类GITRL)与GITR(例如，人类GITR)的结合抑制小于85％、80％、75％、70％、65％、60％、55％、50％、45％、40％、35％、30％、25％、20％或10％。在另一个特定实施方案中，相对于在悬浮阵列试验(例如，200系统)中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下1.5nM、1.4nM、1.3nM、1.2nM、1.1nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM或0.1nM标记的GITRL与每个珠粒9pg/ml、8pg/ml、7pg/ml、6pg/ml、5pg/ml、4pg/ml或3pg/ml的浓度的GITR偶合珠粒的结合，本文所描述的抗体或其抗原结合片段在1000ng/ml、950ng/ml、900ng/ml、850ng/ml、800ng/ml、750ng/ml、700ng/ml、650ng/ml、600ng/ml、550ng/ml、500ng/ml、450ng/ml、400ng/ml、350ng/ml、333ng/ml、300ng/ml、250ng/ml、200ng/ml、100ng/ml、50ng/ml或10ng/ml的浓度下使1.5nM、1.4nM、1.3nM、1.2nM、1.1nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM或0.1nM标记的GITRL(例如，GITRL-PE)与以每个珠粒9pg/ml、8pg/ml、7pg/ml、6pg/ml、5pg/ml、4pg/ml或3pg/ml的浓度偶合至珠粒的GITR(例如，偶合至珠粒的人类GITR)的结合抑制小于85％、80％、75％、70％、65％、60％、55％、50％、45％、40％、35％、30％、25％、20％或10％。在另一个特定实施方案中，相对于在悬浮阵列试验(例如，200系统)中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下1.5nM、1.4nM、1.3nM、1.2nM、1.1nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM或0.1nM标记的GITRL与每个珠粒9pg/ml、8pg/ml、7pg/ml、6pg/ml、5pg/ml、4pg/ml或3pg/ml的浓度的GITR偶合珠粒的结合，本文所描述的抗体或其抗原结合片段在1000ng/ml至750ng/ml、1000ng/ml至500ng/ml、850ng/ml至500ng/ml、750ng/ml至500ng/ml、600ng/ml至500ng/ml、500ng/ml至400ng/ml、400ng/ml至300ng/ml或300ng/ml至200ng/ml的浓度下使1.5nM、1.4nM、1.3nM、1.2nM、1.1nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM、0.1nM标记的GITRL(例如，GITRL-PE)与以每个珠粒9pg/ml、8pg/ml、7pg/ml、6pg/ml、5pg/ml、4pg/ml或3pg/ml的浓度偶合至珠粒的GITR(例如，偶合至珠粒的人类GITR)的结合抑制小于85％、80％、75％、70％、65％、60％、55％、50％、45％、40％、35％、30％、25％、20％或10％。在另一个特定实施方案中，相对于在悬浮阵列试验中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下0.5nM标记的GITRL与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒的结合，抗体或其抗原结合片段在1000ng/ml的浓度下抑制小于80％(在一些实施方案中，40％至70％、50％至80％或40％至80％)的0.5nM标记的GITRL(例如，人类GITRL)结合至以5pg/ml/珠粒的浓度偶合至珠粒的GITR(例如，偶合至珠粒的人类GITR)。
在另一个特定实施方案中，相对于在悬浮阵列试验(例如，200系统)中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下1.5nM、1.4nM、1.3nM、1.2nM、1.1nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM或0.1nM标记的GITRL与每个珠粒9pg/ml、8pg/ml、7pg/ml、6pg/ml、5pg/ml、4pg/ml或3pg/ml的浓度的GITR偶合珠粒的结合，本文所描述的抗体或其抗原结合片段在3500ng/ml、3400ng/ml、3300ng/ml、3200ng/ml、3100ng/ml、3000ng/ml、2900ng/ml、2800ng/ml、2700ng/ml、2600ng/ml、2500ng/ml、2400ng/ml、2300ng/ml、2200ng/ml、2100ng/ml、2000ng/ml、1900ng/ml、1800ng/ml、1700ng/ml、1600ng/ml、1500ng/ml、1400ng/ml、1300ng/ml、1200ng/ml或1100ng/ml的浓度下使1.5nM、1.4nM、1.3nM、1.2nM、1.1nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM或0.1nM标记的GITRL(例如，GITRL-PE)与以每个珠粒9pg/ml、8pg/ml、7pg/ml、6pg/ml、5pg/ml、4pg/ml或3pg/ml的浓度偶合至珠粒的GITR(例如，偶合至珠粒的人类GITR)的结合抑制小于85％、80％、75％、70％、65％、60％、55％、50％、45％、40％、35％、30％、25％、20％或10％。在另一个特定实施方案中，相对于在悬浮阵列试验(例如，200系统)中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下1.5nM、1.4nM、1.3nM、1.2nM、1.1nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM或0.1nM标记的GITRL与每个珠粒9pg/ml、8pg/ml、7pg/ml、6pg/ml、5pg/ml、4pg/ml或3pg/ml的浓度的GITR偶合珠粒的结合，本文所描述的抗体或其抗原结合片段在3500ng/ml至3200ng/ml、3500ng/ml至3000ng/ml、3200ng/ml至2500ng/ml、3000至2200ng/ml、2500ng/ml至1800ng/ml、2000ng/ml至1500ng/ml、1700ng/ml至1200ng/ml或1500ng/ml至1000ng/ml的浓度下使1.5nM、1.4nM、1.3nM、1.2nM、1.1nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM或0.1nM标记的GITRL(例如，GITRL-PE)与以每个珠粒9pg/ml、8pg/ml、7pg/ml、6pg/ml、5pg/ml、4pg/ml或3pg/ml的浓度偶合至珠粒的GITR(例如，偶合至珠粒的人类GITR)的结合抑制小于85％、80％、75％、70％、65％、60％、55％、50％、45％、40％、35％、30％、25％、20％或10％。
在某个实施方案中，相对于在悬浮阵列试验(例如，200系统)中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下0.5nM标记的GITRL与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒的结合，当GITR(例如，人类GITR)以每个珠粒5pg/ml的浓度偶合至珠粒(例如，珠粒)时，本文所描述的抗体或其抗原结合片段在3000ng/ml的浓度下使0.5nMGITRL(例如，人类GITRL)与GITR(例如，人类GITR)的结合抑制小于85％或小于80％(在一些实施方案中，60％至85％、60％至80％、70％至85％或70％至80％)。在某个实施方案中，相对于在悬浮阵列试验(例如，200系统)中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下0.5nM标记的GITRL与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒的结合，当GITR(例如，人类GITR)以每个珠粒5pg/ml的浓度偶合至珠粒(例如，珠粒)时，本文所描述的抗体或其抗原结合片段在1000ng/ml的浓度下使0.5nM GITRL(例如，人类GITRL)与GITR(例如，人类GITR)的结合抑制小于85％、小于80％或小于75％(在一些实施方案中，60％至85％、60％至80％、70％至85％或70％至80％)。在某个实施方案中，相对于在悬浮阵列试验(例如，200系统)中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下0.5nM标记的GITRL与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒的结合，当GITR(例如，人类GITR)以每个珠粒5pg/ml的浓度偶合至珠粒(例如，珠粒)时，本文所描述的抗体或其抗原结合片段在333ng/ml的浓度下使0.5nM GITRL(例如，人类GITRL)与GITR(例如，人类GITR)的结合抑制小于70％或小于65％(在一些实施方案中，50％至70％、55％至70％、50％至65％或50％至60％)。在某个实施方案中，相对于在悬浮阵列试验(例如，200系统)中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下0.5nM标记的GITRL与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒的结合，当GITR(例如，人类GITR)以每个珠粒5pg/ml的浓度偶合至珠粒(例如，珠粒)时，本文所描述的抗体或其抗原结合片段在111ng/ml的浓度下使0.5nM GITRL(例如，人类GITRL)与GITR(例如，人类GITR)的结合抑制小于65％、小于60％或小于55％(在一些实施方案中，40％至65％、40％至60％、40％至55％或30％至60％)。在某个实施方案中，相对于在悬浮阵列试验(例如，200系统)中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下0.5nM标记的GITRL与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒的结合，当GITR(例如，人类GITR)以每个珠粒5pg/ml的浓度偶合至珠粒(例如，珠粒)时，本文所描述的抗体或其抗原结合片段在37ng/ml的浓度下使0.5nMGITRL(例如，人类GITRL)与GITR(例如，人类GITR)的结合抑制小于40％(在一些实施方案中，20％至40％、20％至30％或15％至35％)。在某个实施方案中，相对于在悬浮阵列试验(例如，200系统)中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下0.5nM标记的GITRL与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒的结合，当GITR(例如，人类GITR)以每个珠粒5pg/ml的浓度偶合至珠粒(例如，珠粒)时，本文所描述的抗体或其抗原结合片段在12ng/ml的浓度下使0.5nM GITRL(例如，人类GITRL)与GITR(例如，人类GITR)的结合抑制小于20％(在一些实施方案中，10％至20％)。
在某些实施方案中，通过本领域的技术人员所知或本文所描述的试验评估，在存在本文所描述的抗体或其抗原结合片段的情况下至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或75％的GITRL(例如，人类GITRL)结合至GITR(例如，人类GITR)。在一个特定实施方案中，如通过下文的实施例2(例如，下文的章节6.2.5.2或6.2.5.4)中所描述的试验评估，在存在本文所描述的抗体或其抗原结合片段的情况下至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或75％的GITRL(例如，人类GITRL)结合至GITR(例如，人类GITR)。在另一个特定实施方案中，相对于在悬浮阵列试验(例如，200系统)中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下1.5nM、1.4nM、1.3nM、1.2nM、1.1nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM或0.1nM标记的GITRL与每个珠粒9pg/ml、8pg/ml、7pg/ml、6pg/ml、5pg/ml、4pg/ml或3pg/ml的浓度的GITR偶合珠粒的结合，在存在1000ng/ml、950ng/ml、900ng/ml、850ng/ml、800ng/ml、750ng/ml、700ng/ml、650ng/ml、600ng/ml、550ng/ml、500ng/ml、450ng/ml、400ng/ml、350ng/ml、333ng/ml、300ng/ml、250ng/ml或200ng/ml本文所描述的抗体或其抗原结合片段的情况下至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或75％的1.5nM、1.4nM、1.3nM、1.2nM、1.1nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM或0.1nM标记的GITRL(例如，标记的人类GITRL，诸如hGITRL-PE)结合至以每个珠粒9pg/ml、8pg/ml、7pg/ml、6pg/ml、5pg/ml、4pg/ml或3pg/ml的浓度偶合至珠粒的GITR(例如，偶合至珠粒的人类GITR)。在另一个特定实施方案中，相对于在悬浮阵列试验(例如，200系统)中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下1.5nM、1.4nM、1.3nM、1.2nM、1.1nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM或0.1nM标记的GITRL与每个珠粒9pg/ml、8pg/ml、7pg/ml、6pg/ml、5pg/ml、4pg/ml或3pg/ml的浓度的GITR偶合珠粒的结合，在存在1000ng/ml至900ng/ml、1000ng/ml至850ng/ml、900ng/ml至800ng/ml、或850ng/ml至750ng/ml、或800至750ng/ml的情况下至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或75％的1.5nM、1.4nM、1.3nM、1.2nM、1.1nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM或0.1nM标记的GITRL(例如，标记的人类GITRL，诸如hGITRL-PE)结合至以每个珠粒9pg/ml、8pg/ml、7pg/ml、6pg/ml、5pg/ml、4pg/ml或3pg/ml的浓度偶合至珠粒的GITR(例如，偶合至珠粒的人类GITR)。在另一个特定实施方案中，相对于在悬浮阵列试验中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下0.5nM标记的GITRL与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒的结合，在存在1000ng/ml抗体或其抗原结合片段的情况下至少20％、至少25％或至少30％的0.5nM标记的GITRL(例如，标记的人类GITRL，诸如hGITRL-PE)结合至以5pg/ml/珠粒的浓度偶合至珠粒的GITR(例如，偶合至珠粒的人类GITR)。
在另一个特定实施方案中，相对于在悬浮阵列试验(例如，200系统)中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下1.5nM、1.4nM、1.3nM、1.2nM、1.1nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM或0.1nM标记的GITRL与每个珠粒9pg/ml、8pg/ml、7pg/ml、6pg/ml、5pg/ml、4pg/ml或3pg/ml的浓度的GITR偶合珠粒的结合，在存在3500ng/ml、3400ng/ml、3300ng/ml、3200ng/ml、3100ng/ml、3000ng/ml、2900ng/ml、2800ng/ml、2700ng/ml、2600ng/ml、2500ng/ml、2400ng/ml、2300ng/ml、2200ng/ml、2100ng/ml、2000ng/ml、1900ng/ml、1800ng/ml、1700ng/ml、1600ng/ml、1500ng/ml、1400ng/ml、1300ng/ml、1200ng/ml、1100ng/ml或1000ng/ml本文所描述的抗体或其抗原结合片段的情况下至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或75％的1.5nM、1.4nM、1.3nM、1.2nM、1.1nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM、0.1nM标记的GITRL(例如，标记的人类GITRL，诸如hGITRL-PE)结合至以每个珠粒9pg/ml、8pg/ml、7pg/ml、6pg/ml、5pg/ml、4pg/ml或3pg/ml的浓度偶合至珠粒的GITR(例如，偶合至珠粒的人类GITR)。在另一个特定实施方案中，相对于在悬浮阵列试验(例如，200系统)中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下1.5nM、1.4nM、1.3nM、1.2nM、1.1nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM或0.1nM标记的GITRL与每个珠粒9pg/ml、8pg/ml、7pg/ml、6pg/ml、5pg/ml、4pg/ml或3pg/ml的浓度的GITR偶合珠粒的结合，在存在3500ng/ml至3200ng/ml、3500ng/ml至3000ng/ml、3200ng/ml至2500ng/ml、3000至2200ng/ml、2500ng/ml至1800ng/ml、2000ng/ml至1500ng/ml、1700ng/ml至1200ng/ml或1500ng/ml至1000ng/ml本文所描述的抗体或其抗原结合片段的情况下至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或75％的1.5nM、1.4nM、1.3nM、1.2nM、1.1nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM或0.1nM标记的GITRL(例如，标记的人类GITRL，诸如hGITRL-PE)结合至以每个珠粒9pg/ml、8pg/ml、7pg/ml、6pg/ml、5pg/ml、4pg/ml或3pg/ml的浓度偶合至珠粒的GITR(例如，偶合至珠粒的人类GITR)。
在另一个特定实施方案中，相对于在悬浮阵列试验中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下0.5nM标记的GITRL与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒的结合，在存在3000ng/ml抗体或其抗原结合片段的情况下至少20％、至少25％或至少30％的0.5nM标记的GITRL(例如，标记的人类GITRL，诸如hGITRL-PE)结合至以5pg/ml/珠粒的浓度偶合至珠粒的GITR(例如，偶合至珠粒的人类GITR)。在另一个特定实施方案中，相对于在悬浮阵列试验中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下0.5nM标记的GITRL与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒的结合，在存在1000ng/ml抗体或其抗原结合片段的情况下至少25％、至少30％、至少40％或至少50％(在一些实施方案中，25％至60％、40％至60％、40％至70％或25％至50％)的0.5nM标记的GITRL(例如，标记的人类GITRL，诸如hGITRL-PE)结合至以5pg/ml/珠粒的浓度偶合至珠粒的GITR(例如，偶合至珠粒的人类GITR)。在另一个特定实施方案中，相对于在悬浮阵列试验中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下0.5nM标记的GITRL与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒的结合，在存在333ng/ml抗体或其抗原结合片段的情况下至少30％、至少40％、至少50％或至少60％(在一些实施方案中，30％至60％、40％至60％、40％至70％或30％至50％)的0.5nM标记的GITRL(例如，标记的人类GITRL，诸如hGITRL-PE)结合至以5pg/ml/珠粒的浓度偶合至珠粒的GITR(例如，偶合至珠粒的人类GITR)。在另一个特定实施方案中，相对于在悬浮阵列试验中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下0.5nM标记的GITRL与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒的结合，在存在111ng/ml抗体或其抗原结合片段的情况下至少40％、至少50％、至少60％或至少65％(在一些实施方案中，40％至70％、40％至60％、40％至65％或40％至50％)的0.5nM标记的GITRL(例如，标记的人类GITRL，诸如hGITRL-PE)结合至以5pg/ml/珠粒的浓度偶合至珠粒的GITR(例如，偶合至珠粒的人类GITR)。在另一个特定实施方案中，相对于在悬浮阵列试验中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下0.5nM标记的GITRL与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒的结合，在存在37ng/ml抗体或其抗原结合片段的情况下至少60％、至少70％或至少80％(在一些实施方案中60％至80％、70％至80％或75％至85％)的0.5nM标记的GITRL(例如，标记的人类GITRL，诸如hGITRL-PE)结合至以5pg/ml/珠粒的浓度偶合至珠粒的GITR(例如，偶合至珠粒的人类GITR)。在另一个特定实施方案中，相对于在悬浮阵列试验中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下0.5nM标记的GITRL与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒的结合，在存在12ng/ml抗体或其抗原结合片段的情况下至少80％、至少85％或至少90％(在一些实施方案中80％至90％或85％至95％)的0.5nM标记的GITRL(例如，标记的人类GITRL，诸如hGITRL-PE)结合至以5pg/ml/珠粒的浓度偶合至珠粒的GITR(例如，偶合至珠粒的人类GITR)。
在某个实施方案中，相对于在悬浮阵列试验(例如，200系统)中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下0.5nM标记的GITRL与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒的结合，当GITR(例如，人类GITR)以每个珠粒5pg/ml的浓度偶合至珠粒(例如，珠粒)时，本文所描述的抗体或其抗原结合片段在3000ng/ml的浓度下并不使0.5nM GITRL(例如，人类GITRL)与GITR(例如，人类GITR)的结合抑制大于15％或大于20％。在某个实施方案中，相对于在悬浮阵列试验(例如，200系统)中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下0.5nM标记的GITRL与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒的结合，当GITR(例如，人类GITR)以每个珠粒5pg/ml的浓度偶合至珠粒(例如，珠粒)时，本文所描述的抗体或其抗原结合片段在1000ng/ml的浓度下并不使0.5nM GITRL(例如，人类GITRL)与GITR(例如，人类GITR)的结合抑制大于15％、大于20％或大于25％。在某个实施方案中，相对于在悬浮阵列试验(例如，200系统)中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下0.5nM标记的GITRL与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒的结合，当GITR(例如，人类GITR)以每个珠粒5pg/ml的浓度偶合至珠粒(例如，珠粒)时，本文所描述的抗体或其抗原结合片段在333ng/ml的浓度下并不使0.5nM GITRL(例如，人类GITRL)与GITR(例如，人类GITR)的结合抑制大于30％或大于35％。在某个实施方案中，相对于在悬浮阵列试验(例如，200系统)中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下0.5nM标记的GITRL与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒的结合，当GITR(例如，人类GITR)以每个珠粒5pg/ml的浓度偶合至珠粒(例如，珠粒)时，本文所描述的抗体或其抗原结合片段在111ng/ml的浓度下并不使0.5nM GITRL(例如，人类GITRL)与GITR(例如，人类GITR)的结合抑制大于35％、大于40％或大于45％。在某个实施方案中，相对于在悬浮阵列试验(例如，200系统)中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下0.5nM标记的GITRL与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒的结合，当GITR(例如，人类GITR)以每个珠粒5pg/ml的浓度偶合至珠粒(例如，珠粒)时，本文所描述的抗体或其抗原结合片段在37ng/ml的浓度下并不使0.5nM GITRL(例如，人类GITRL)与GITR(例如，人类GITR)的结合抑制大于60％。在某个实施方案中，相对于在悬浮阵列试验(例如，200系统)中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下0.5nM标记的GITRL与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒的结合，当GITR(例如，人类GITR)以每个珠粒5pg/ml的浓度偶合至珠粒(例如，珠粒)时，本文所描述的抗体或其抗原结合片段在12ng/ml的浓度下并不使0.5nM GITRL(例如，人类GITRL)与GITR(例如，人类GITR)的结合抑制大于80％。
在另一个实施方案中，一定量的标记的GITRL(例如，人类GITRL-PE)在包括以下的方法中在存在本文所描述的抗体或其抗原结合片段的情况下结合至偶合至珠粒的GITR(例如，偶合至珠粒的人类GITR)：(a)使GITR(例如，人类GITR)以每个珠粒约9pg/ml、8pg/ml、7pg/ml、6pg/ml、5pg/ml、4pg/ml或3pg/ml的浓度偶合至珠粒；(b)在孔中孵育约30个珠粒/μl、40个珠粒/μl或50个珠粒/μl的浓度的GITR偶合珠粒与3000ng/ml、2500ng/ml、2000ng/ml、1500ng/ml、1000ng/ml、750ng/ml、500ng/ml、250ng/ml、100ng/ml、50ng/ml、25ng/ml或10ng/ml本文所描述的抗体或其抗原结合片段，持续第一时段(例如，30分钟、60分钟、1.5小时、2小时、2.5小时或3小时)；(c)将标记的GITRL(例如，人类GITRL-PE)添加至孔中以获得约1.5nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM或0.1nM标记的GITRL和约15个珠粒/μl、20个珠粒/μl或25个珠粒/μl的最终浓度，并且孵育持续第二时段(例如，30分钟、1小时、1.5小时、2小时、2.5小时或3小时)；以及(d)在例如悬浮阵列试验，诸如200系统中检测结合至GITR偶合珠粒的标记的GITRL。在特定实施方案中，相对于在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下结合至GITR偶合珠粒的标记的GITRL的量测定在存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下结合至GITR偶合珠粒的标记的GITRL的量。在某些实施方案中，不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段意指没有抗体或其抗原结合片段存在于孔中。在其它实施方案中，不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段意指不结合至GITR的同型对照抗体存在于孔中。根据这些实施方案，在存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下结合至GITR偶合珠粒的标记的GITRL的量在一些实施方案中经测定是在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下结合至GITR偶合珠粒的标记的GITRL的量的至少15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％或60％或15％至60％、20％至60％、30％至70％或20％至50％。
在另一个实施方案中，一定量的标记的GITRL(例如，人类GITRL-PE)在包括以下的方法中在存在本文所描述的抗体或其抗原结合片段的情况下结合至偶合至珠粒的GITR(例如，偶合至珠粒的人类GITR)：(a)使GITR(例如，人类GITR)以每个珠粒约5pg/ml的浓度偶合至珠粒；(b)在孔中孵育约40个珠粒/μl的浓度的GITR偶合珠粒与3000ng/ml、2500ng/ml、2000ng/ml、1500ng/ml、1000ng/ml、750ng/ml、500ng/ml、250ng/ml、100ng/ml、50ng/ml或10ng/ml本文所描述的抗体或其抗原结合片段，持续第一时段(例如，30分钟、60分钟、1.5小时、2小时、2.5小时或3小时)；(c)将标记的GITRL(例如，人类GITRL-PE)添加至孔中以获得0.5nM标记的GITRL和约20个珠粒/μl的最终浓度，并且孵育持续第二时段(例如，30分钟、1小时、1.5小时、2小时、2.5小时或3小时)；以及(d)在例如悬浮阵列试验，诸如200系统中检测结合至GITR偶合珠粒的标记的GITRL。在特定实施方案中，相对于在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下结合至GITR偶合珠粒的标记的GITRL的量测定在存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下结合至GITR偶合珠粒的标记的GITRL的量。在某些实施方案中，不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段意指没有抗体或其抗原结合片段存在于孔中。在其它实施方案中，不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段意指不结合至GITR的同型对照抗体存在于孔中。根据这些实施方案，在存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下结合至GITR偶合珠粒的标记的GITRL的量在一些实施方案中经测定是在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下结合至GITR偶合珠粒的标记的GITRL的量的至少20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％或60％或20至70％、20％至60％、30％至70％或20％至50％。
在某些实施方案中，在150nM、145nM、140nM、135nM、130nM、125nM、120nM、115nM、110nM、105nM或100nM的浓度下结合至固定于芯片(例如，CM5传感器芯片)上的GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其抗原结合片段使150nM、145nM、140nM、135nM、130nM、125nM、120nM、115nM、110nM、105nM或100nM GITRL(例如，人类GITRL的非共价连接的三聚体)与固定于芯片上的GITR的结合抑制小于60％、小于55％、小于50％、小于45％、小于40％、小于35％、小于30％、小于25％、小于20％或小于15％。在某些实施方案中，在125nM的浓度下结合至固定于芯片(例如，CM5传感器芯片)上的GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其抗原结合片段使125nM GITRL(例如，人类GITRL的非共价连接的三聚体)与固定于芯片上的GITR的结合抑制小于60％、小于55％、小于50％、小于45％、小于40％、小于35％、小于30％、小于25％、小于20％或小于15％。
在某些实施方案中，本文所描述的抗体或其片段以8.5×10-3s-1或更小、3.5×10- 3s-1或更小、5×10-3s-1或更小、2.5×10-3s-1或更小、1×10-3s-1或更小、8.5×10-4s-1或更小、5×10-4s-1或更小、3.5×10-4s-1或更小、2.5×10-4s-1或更小、1×10-4s-1或更小、8.5×10-5-s-1或更小、3.5×10-5-s-1或更小、5×10-5-s-1或更小、2.5×10-5-s-1或更小、1×10-5-s-1或更小、8.5×10-6-s-1或更小、5×10-6-s-1或更小、3.5×10-6-s-1或更小、2.5×10-6-s-1或更小、1×10-6-s-1或更小、8.5×10-7-s-1或更小、5×10-7-s-1或更小、2.5×10-7-s-1或更小、1×10-7-s-1或更小、8.5×10-8-s-1或更小、5×10-8-s-1或更小、2.5×10-8-s-1或更小、1×10-8-s-1或更小、8.5×10-9-s-1或更小、5×10-9s-1或更小、2.5×10-9-s-1或更小、或1×10-9-s-1或更小的离解速率常数(koff)结合至GITR(例如，人类GITR)。在一些实施方案中，本文所描述的抗体或其片段以介于9.5×10-5-s-1至1×10-9-s-1、8.5×10-5-s-1至1×10-9-s-1、5×10-5-s-1至1×10-9-s-1、9.5×10-5-s-1至1×10-8-s-1、5×10-5s-1至1×10-8-s-1、9.5×10-5-s-1至1×10-7-s-1、5×10-5-s-1至1×10-7-s-1、9.5×10-5-s-1至5×10-6-s-1、9.5×10-5-s-1至1×10-5-s-1、8.5×10-3s-1至1×10-4s-1、5×10-3s-1至2.5×10-4s-1、8.5×10-3s-1至1×10-5s-1、8.5×10-5-s-1至5×10-5-s-1之间的koff结合至GITR(例如，人类GITR)。在某些实施方案中，如通过例如表面等离子体共振技术测量，使用单价抗体，诸如Fab片段测定koff。在其它实施方案中，如通过例如表面等离子体共振技术测量，使用二价抗体测定koff。在一个特定实施方案中，使用下文的章节6中所描述的试验测定koff。
在某些实施方案中，本文所描述的抗体或其片段以至少105M-1s-1、至少2.5×105M- 1s-1、至少3.5×105M-1s-1、至少5×105M-1s-1、至少106M-1s-1、至少2.5×106M-1s-1、至少3.5×106M-1s-1、至少5×106M-1s-1、至少107M-1s-1、至少5×107M-1s-1、至少108M-1s-1、至少5 108M-1s-1或至少109M-1s-1的缔合速率常数(kon)结合至GITR(例如，人类GITR)。在一些实施方案中，本文所描述的抗体或其片段以介于1×105M-1s-1至5×105M-1s-1、1×105M-1s-1至1×106M-1s-1、3.5×105M-1s-1至2.5×106M-1s-1、3.5×105M-1s-1至3.5×106M-1s-1、1×105M-1s-1至5×106M-1s-1、1×105M-1s-至1×107M-1s-1、1×105M-1s-1至5×107M-1s-1、1×105M-1s-1至108M-1s-1、1×105M-1s-1至1×109M-1s-1、1×106M-1s-至1×107M-1s-1、1×106M-1s-1至1×108M-1s-1、1×106M-1s-1至1×109M-1s-1、1×107M-1s-1至1×108M-1s-1、1×107M-1s-1至1×109M-1s-1、1×108M-1s-1至1×109M-1s-1之间的kon结合至GITR(例如，人类GITR)。在某些实施方案中，如通过例如表面等离子体共振技术测量，使用单价抗体，诸如Fab片段测定kon。在其它实施方案中，如通过例如表面等离子体共振技术测量，使用二价抗体测定kon。在一个特定实施方案中，使用下文的章节6中所描述的试验测定kon。
在某些实施方案中，本文所描述的抗体或其片段以小于7nM、6nM、5nM、4.5nM、4nM、3.5nM、3nM、2.5nM、2nM、1.5nM、1nM、0.75nM、0.5nM、0.25nM或0.1nM的KD结合至GITR(例如，人类GITR)。在一些实施方案中，本文所描述的抗体或其片段以约7nM、6nM、5nM、4.5nM、4nM、3.5nM、3nM、2.5nM、2nM、1.5nM、1nM、0.75nM、0.5nM、0.25nM或0.1nM的KD结合至GITR(例如，人类GITR)。在某些实施方案中，本文所描述的抗体或其片段以7nM至2nM、5nM至3nM、5nM至1nM、4nM至3nM、4nM至2nM、3nM至2nM、3nM至1nM、2nM至1nM、3nM至0.1nM、2nM至0.1nM、1nM至0.1nM或0.5nM至0.1nM的KD结合至GITR(例如，人类GITR)。在某些实施方案中，以koff/kon的商计算KD，并且如通过例如表面等离子体共振技术测量，使用单价抗体，诸如Fab片段测定kon和koff。在其它实施方案中，以koff/kon的商计算KD，并且如通过例如表面等离子体共振技术测量，使用二价抗体，诸如Fab片段测定kon和koff。在一个特定实施方案中，如下文的章节6中的实施例(例如，实施例2)中所陈述测定KD。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含有包含以下的轻链可变区(VL)：
(a)包含氨基酸序列KSSQSX1X2X3X4X5X6X7KX8YLX9(SEQ ID NO:4)、由其组成或基本上由其组成的VL CDR1，其中：
X1是L、A、V、I、P、F或M
X2是L、A、V、I、P、F、M或S
X3是N、G、Q、S、T、C、W、Y或A
X4是S、G、N、Q、T、C、W、Y或A
X5是G、N、Q、S、T、C、W、Y或A
X6是N、G、Q、S、T、C、W、Y或A
X7是Q、G、N、S、T、C、W、Y或A
X8是N、G、Q、S、T、C、W、Y或A
X9是T、G、N、Q、S、C、W、Y、V、I或A；和/或
(b)包含氨基酸序列X1ASTRX2X3(SEQ ID NO:5)、由其组成或基本上由其组成的VLCDR2，其中：
X1是W、G、N、Q、S、T、C、Y、F、H或A
X2是E、D或A
X3是S、G、N、Q、T、C、W、Y或A；和/或
(c)包含氨基酸序列QX1X2YX3X4PYT(SEQ ID NO:6)、由其组成或基本上由其组成的VLCDR3，其中：
X1是N、G、Q、S、T、C、W或Y
X2是D、E或Y
X3是S、G、N、Q、T、C、W、Y或A
X4是Y、G、N、Q、S、T、C、W、F、H、L或A。
在特定实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含上述VL CDR中的一者、两者或全部三者。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表1中的抗体之一的VL CDR1。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表1中的抗体之一的VL CDR2。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表1中的抗体之一的VL CDR3。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表1中的抗体之一的VL CDR中的一者、两者或全部三者(例如，表1的一行中的VL CDR，例如，全部VL CDR都来自抗体231-32-15)。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含本文所描述的VL构架区。在特定实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表3中所陈列的抗体的VL构架区(FR)(例如，表3的一行中的构架区中的一者、两者、三者或四者)。
在另一个实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其抗原结合片段包含有包含以下的重链可变区(VH)：
(a)包含氨基酸序列X1YX2MX3(SEQ ID NO:1)、由其组成或基本上由其组成的VH CDR1，其中
X1是D、E、G或A
X2是A、V、L、I、P、F、M或Y
X3是Y、G、N、Q、S、T、C、W、F或H；和/或
(b)包含氨基酸序列X1IX2X3X4SGX5X6X7YX8QKFX9X10(SEQ ID NO:2)、由其组成或基本上由其组成的VH CDR2，其中
X1是V、A、L、I、P、F、M或T
X2是R、K、H、Q或A
X3是T、G、N、Q、S、C、W、Y、V、I或P
X4是Y、G、N、Q、S、T、C、W、F、H或A
X5是D、E、G或A
X6是V、A、L、I、P、F、M或T
X7是T、G、N、Q、S、C、W、Y、V、I、P或A
X8是N、G、Q、S、T、C、W、Y或A
X9是K、R、H、Q或A
X10是D、E、G或A；和/或
(c)包含氨基酸序列SGTVRGX1X2X3(SEQ ID NO:3)、由其组成或基本上由其组成的VHCDR3，其中
X1是F、A、V、L、I、P、M、Y、W、H或S
X2是A或D
X3是Y、G、N、Q、S、T、C、W、F、H或V。
在特定实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含上述VH CDR中的一者、两者或全部三者。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表2中的抗体之一的VH CDR1。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表2中的抗体之一的VH CDR2。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表2中的抗体之一的VH CDR3。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表2中的抗体之一的VH CDR中的一者、两者或全部三者(例如，表2的一行中的VH CDR，例如，全部VH CDR都来自抗体231-32-15)。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含本文所描述的VH构架。在特定实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表4中所陈列的抗体的VH构架区(例如，表4的一行中的构架区中的一者、两者、三者或四者)。
表1.VL CDR氨基酸序列1
1表1中的VL CDR是根据Kabat确定。
表2.VH CDR氨基酸序列2
2表2中的VH CDR是根据Kabat确定。
表3.VL FR氨基酸序列3
3表3中所描述的VL构架区是基于CDR的Kabat编号系统的边界确定。换句话说，VL CDR由Kabat确定并且构架区是以格局FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3以及FR4包围可变区中的CDR的氨基酸残基。
表4.VH FR氨基酸序列4
4表4中所描述的VH构架区是基于CDR的Kabat编号系统的边界确定。换句话说，VH CDR由Kabat确定并且构架区是以格局FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3以及FR4包围可变区中的CDR的氨基酸残基。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含有包含以下的轻链可变区(VL)：
(a)包含氨基酸序列KSSQSX1X2X3X4X5X6X7KX8YLX9(SEQ ID NO:4)、由其组成或基本上由其组成的VL CDR1，其中：
X1是L、A、V、I、P、F或M
X2是L、A、V、I、P、F、M或S
X3是N、G、Q、S、T、C、W、Y或A
X4是S、G、N、Q、T、C、W、Y或A
X5是G、N、Q、S、T、C、W、Y或A
X6是N、G、Q、S、T、C、W、Y或A
X7是Q、G、N、S、T、C、W、Y或A
X8是N、G、Q、S、T、C、W、Y或A
X9是T、G、N、Q、S、C、W、Y、V、I或A；和/或
(b)包含氨基酸序列X1ASTRX2X3(SEQ ID NO:5)、由其组成或基本上由其组成的VLCDR2，其中：
X1是W、G、N、Q、S、T、C、Y、F、H或A
X2是E、D或A
X3是S、G、N、Q、T、C、W、Y或A；和/或
(c)包含氨基酸序列QX1X2YX3X4PYT(SEQ ID NO:6)、由其组成或基本上由其组成的VLCDR3，其中：
X1是N、G、Q、S、T、C、W或Y
X2是D、E或Y
X3是S、G、N、Q、T、C、W、Y或A
X4是Y、G、N、Q、S、T、C、W、F、H、L或A。
在特定实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含上述VL CDR中的一者、两者或全部三者。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表5中的抗体之一的VL CDR1。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表5中的抗体之一的VL CDR2。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表5中的抗体之一的VL CDR3。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表5中的抗体之一的VL CDR中的一者、两者或全部三者(例如，表5的一行中的VL CDR，例如，全部VL CDR都来自抗体231-32-15)。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含本文所描述的VL构架区。在特定实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表7中所陈列的抗体的VL构架区(FR)(例如，表7的一行中的构架区中的一者、两者、三者或四者)。
在另一个实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其抗原结合片段包含有包含以下的重链可变区(VH)：
(a)包含氨基酸序列X1YX2MX3(SEQ ID NO:1)、由其组成或基本上由其组成的VH CDR1，其中
X1是D、E、G或A
X2是A、V、L、I、P、F、M或Y
X3是Y、G、N、Q、S、T、C、W、F或H；和/或
(b)包含氨基酸序列X1IX2X3X4SGX5X6X7YX8QKFX9X10(SEQ ID NO:2)、由其组成或基本上由其组成的VH CDR2，其中
X1是V、A、L、I、P、F、M或T
X2是R、K、H、Q或A
X3是T、G、N、Q、S、C、W、Y、V、I或P
X4是Y、G、N、Q、S、T、C、W、F、H或A
X5是D、E、G或A
X6是V、A、L、I、P、F、M或T
X7是T、G、N、Q、S、C、W、Y、V、I、P或A
X8是N、G、Q、S、T、C、W、Y或A
X9是K、R、H、Q或A
X10是D、E、G或A；和/或
(c)包含氨基酸序列SGTVRGX1X2X3(SEQ ID NO:3)、由其组成或基本上由其组成的VHCDR3，其中
X1是F、A、V、L、I、P、M、Y、W、H或S
X2是A或D
X3是Y、G、N、Q、S、T、C、W、F、H或V。
在特定实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含上述VH CDR中的一者、两者或全部三者。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表6中的抗体之一的VH CDR1。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表6中的抗体之一的VH CDR2。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表6中的抗体之一的VH CDR3。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表6中的抗体之一的VH CDR中的一者、两者或全部三者(例如，表6的一行中的VH CDR，例如，全部VH CDR都来自抗体231-32-15)。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含本文所描述的VH构架。在特定实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表8中所陈列的抗体的VH构架区(例如，表8的一行中的构架区中的一者、两者、三者或四者)。
表5.VL CDR氨基酸序列1
1表5中的VL CDR是根据Kabat确定。
表6.VH CDR氨基酸序列2
2表6中的VH CDR是根据Kabat确定。
表7.VL FR氨基酸序列3
3表7中所描述的VL构架区是基于CDR的Kabat编号系统的边界确定。换句话说，VL CDR由Kabat确定并且构架区是以格局FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3以及FR4包围可变区中的CDR的氨基酸残基。
表8.VH FR氨基酸序列4
4表8中所描述的VH构架区是基于CDR的Kabat编号系统的边界确定。换句话说，VH CDR由Kabat确定并且构架区是以格局FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3以及FR4包围可变区中的CDR的氨基酸残基。
在另一个实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其抗原结合片段包含：
(a)包含氨基酸序列KSSQSX1X2X3X4X5X6X7KX8YLX9(SEQ ID NO:4)、由其组成或基本上由其组成的VL CDR1，其中：
X1是L、A、V、I、P、F或M
X2是L、A、V、I、P、F、M或S
X3是N、G、Q、S、T、C、W、Y或A
X4是S、G、N、Q、T、C、W、Y或A
X5是G、N、Q、S、T、C、W、Y或A
X6是N、G、Q、S、T、C、W、Y或A
X7是Q、G、N、S、T、C、W、Y或A
X8是N、G、Q、S、T、C、W、Y或A
X9是T、G、N、Q、S、C、W、Y、V、I或A；和/或
(b)包含氨基酸序列X1ASTRX2X3(SEQ ID NO:5)、由其组成或基本上由其组成的VLCDR2，其中：
X1是W、G、N、Q、S、T、C、Y、F、H或A
X2是E、D或A
X3是S、G、N、Q、T、C、W、Y或A；和/或
(c)包含氨基酸序列QX1X2YX3X4PYT(SEQ ID NO:6)、由其组成或基本上由其组成的VLCDR3，其中：
X1是N、G、Q、S、T、C、W或Y
X2是D、E或Y
X3是S、G、N、Q、T、C、W、Y或A
X4是Y、G、N、Q、S、T、C、W、F、H、L或A；和/或
(d)包含氨基酸序列X1YX2MX3(SEQ ID NO:1)、由其组成或基本上由其组成的VH CDR1，其中
X1是D、E、G或A
X2是A、V、L、I、P、F、M或Y
X3是Y、G、N、Q、S、T、C、W、F或H；和/或
(e)包含氨基酸序列X1IX2X3X4SGX5X6X7YX8QKFX9X10(SEQ ID NO:2)、由其组成或基本上由其组成的VH CDR2，其中
X1是V、A、L、I、P、F、M或T
X2是R、K、H、Q或A
X3是T、G、N、Q、S、C、W、Y、V、I或P
X4是Y、G、N、Q、S、T、C、W、F、H或A
X5是D、E、G或A
X6是V、A、L、I、P、F、M或T
X7是T、G、N、Q、S、C、W、Y、V、I、P或A
X8是N、G、Q、S、T、C、W、Y或A
X9是K、R、H、Q或A
X10是D、E、G或A；和/或
(f)包含氨基酸序列SGTVRGX1X2X3(SEQ ID NO:3)、由其组成或基本上由其组成的VHCDR3，其中
X1是F、A、V、L、I、P、M、Y、W、H或S
X2是A或D
X3是Y、G、N、Q、S、T、C、W、F、H或V。
在特定实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含上述CDR中的一者、两者、三者、四者、五者或全部六者。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表1中的抗体之一的VLCDR1。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表1中的抗体之一的VL CDR2。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表1中的抗体之一的VL CDR3。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表2中的抗体之一的VH CDR1。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表2中的抗体之一的VH CDR2。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表2中的抗体之一的VH CDR3。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表2中的抗体之一的VH CDR中的一者、两者或全部三者(例如，表2的一行中的VH CDR，例如，全部VHCDR都来自抗体231-32-15)。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表1中的抗体之一的VL CDR中的一者、两者或全部三者(例如，表1的一行中的VL CDR，例如，全部VLCDR都来自抗体231-32-15)。
在另一个实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中
(i)VL包含：
(a)包含氨基酸序列KSSQSX1X2X3X4X5X6X7KX8YLX9(SEQ ID NO:4)、由其组成或基本上由其组成的VL CDR1，其中：
X1是L、A、V、I、P、F或M
X2是L、A、V、I、P、F、M或S
X3是N、G、Q、S、T、C、W、Y或A
X4是S、G、N、Q、T、C、W、Y或A
X5是G、N、Q、S、T、C、W、Y或A
X6是N、G、Q、S、T、C、W、Y或A
X7是Q、G、N、S、T、C、W、Y或A
X8是N、G、Q、S、T、C、W、Y或A
X9是T、G、N、Q、S、C、W、Y、V、I或A；和/或
(b)包含氨基酸序列X1ASTRX2X3(SEQ ID NO:5)、由其组成或基本上由其组成的VLCDR2，其中：
X1是W、G、N、Q、S、T、C、Y、F、H或A
X2是E、D或A
X3是S、G、N、Q、T、C、W、Y或A；和/或
(c)包含氨基酸序列QX1X2YX3X4PYT(SEQ ID NO:6)、由其组成或基本上由其组成的VLCDR3，其中：
X1是N、G、Q、S、T、C、W或Y
X2是D、E或Y
X3是S、G、N、Q、T、C、W、Y或A
X4是Y、G、N、Q、S、T、C、W、F、H、L或A；以及
(ii)VH包含：
(a)包含氨基酸序列X1YX2MX3(SEQ ID NO:1)、由其组成或基本上由其组成的VH CDR1，其中
X1是D、E、G或A
X2是A、V、L、I、P、F、M或Y
X3是Y、G、N、Q、S、T、C、W、F或H；和/或
(b)包含氨基酸序列X1IX2X3X4SGX5X6X7YX8QKFX9X10(SEQ ID NO:2)、由其组成或基本上由其组成的VH CDR2，其中
X1是V、A、L、I、P、F、M或T
X2是R、K、H、Q或A
X3是T、G、N、Q、S、C、W、Y、V、I或P
X4是Y、G、N、Q、S、T、C、W、F、H或A
X5是D、E、G或A
X6是V、A、L、I、P、F、M或T
X7是T、G、N、Q、S、C、W、Y、V、I、P或A
X8是N、G、Q、S、T、C、W、Y或A
X9是K、R、H、Q或A
X10是D、E、G或A；和/或
(c)包含氨基酸序列SGTVRGX1X2X3(SEQ ID NO:3)、由其组成或基本上由其组成的VHCDR3，其中
X1是F、A、V、L、I、P、M、Y、W、H或S
X2是A或D
X3是Y、G、N、Q、S、T、C、W、F、H或V。
在特定实施方案中，VL包含上述VL CDR中的两者或全部三者和/或VH包含上述VH CDR中的两者或全部三者。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表1中的抗体之一的VL CDR1。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表1中的抗体之一的VL CDR2。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表1中的抗体之一的VL CDR3。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表2中的抗体之一的VH CDR1。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表2中的抗体之一的VH CDR2。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表2中的抗体之一的VH CDR3。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表2中的抗体之一的VH CDR中的一者、两者或全部三者(例如，表2的一行中的VH CDR)。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表1中的抗体之一的VL CDR中的一者、两者或全部三者(例如，表1的一行中的VL CDR)。
在另一个实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含有包含以下的轻链可变区(VL)：
(a)包含氨基酸序列KSSQSLLNSX1NQKNYLX2(SEQ ID NO:10)、由其组成或基本上由其组成的VL CDR1，其中
X1是G或S
X2是T或S；和/或
(b)包含氨基酸序列WASTRES(SEQ ID NO:11)、由其组成或基本上由其组成的VL CDR2；和/或
(c)包含氨基酸序列QNX1YSX2PYT(SEQ ID NO:12)、由其组成或基本上由其组成的VLCDR3，其中
X1是D或E
X2是Y、F或S。
在特定实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含上述VL CDR中的一者、两者或全部三者。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表1中的抗体之一的VL CDR1。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表1中的抗体之一的VL CDR2。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表1中的抗体之一的VL CDR3。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表1中的抗体之一的VL CDR中的一者、两者或全部三者(例如，表1的一行中的VL CDR)。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含本文所描述的VL构架区。在特定实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表3中所陈列的抗体的VL构架区(FR)(例如，表3的一行中的构架区中的一者、两者、三者或四者)。
在另一个实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含有包含以下的重链可变区(VH)：
(a)包含氨基酸序列X1YX2MX3(SEQ ID NO:7)、由其组成或基本上由其组成的VH CDR1，其中
X1是D、E或G
X2是A或V
X3是Y或H；和/或
(b)包含氨基酸序列X1IX2TX3SGX4X5X6YNQKFX7X8(SEQ ID NO:8)、由其组成或基本上由其组成的VH CDR2，其中
X1是V或L
X2是R、K或Q
X3是Y或F
X4是D、E或G
X5是V或L
X6是T或S
X7是K、R或Q
X8是D、E或G；和/或
(c)包含氨基酸序列SGTVRGFAY(SEQ ID NO:9)、由其组成或基本上由其组成的VHCDR3。
在特定实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含上述VH CDR中的一者、两者或全部三者。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表2中的抗体之一的VH CDR1。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表2中的抗体之一的VH CDR2。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表2中的抗体之一的VH CDR3。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表2中的抗体之一的VH CDR中的一者、两者或全部三者(例如，表2的一行中的VH CDR)。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表2中的抗体之一的VH CDR中的一者、两者或全部三者。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含本文所描述的VH构架。在特定实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表4中所陈列的抗体的VH构架区(例如，表4的一行中的构架区中的一者、两者、三者或四者)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其抗原结合片段包含：
(a)包含氨基酸序列KSSQSLLNSX1NQKNYLX2(SEQ ID NO:10)、由其组成或基本上由其组成的VL CDR1，其中
X1是G或S
X2是T或S；和/或
(b)包含氨基酸序列WASTRES(SEQ ID NO:11)、由其组成或基本上由其组成的VL CDR2；和/或
(c)包含氨基酸序列QNX1YSX2PYT(SEQ ID NO:12)、由其组成或基本上由其组成的VLCDR3，其中
X1是D或E
X2是Y、F或S。
(d)包含氨基酸序列X1YX2MX3(SEQ ID NO:7)、由其组成或基本上由其组成的VH CDR1，其中
X1是D、E或G
X2是A或V
X3是Y或H；和/或
(e)包含氨基酸序列X1IX2TX3SGX4X5X6YNQKFX7X8(SEQ ID NO:8)、由其组成或基本上由其组成的VH CDR2，其中
X1是V或L
X2是R、K或Q
X3是Y或F
X4是D、E或G
X5是V或L
X6是T或S
X7是K、R或Q
X8是D、E或G；和/或
(f)包含氨基酸序列SGTVRGFAY(SEQ ID NO:9)、由其组成或基本上由其组成的VHCDR3。
在特定实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含上述CDR中的一者、两者、三者、四者、五者或全部六者。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表1中的抗体之一的VLCDR1。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表1中的抗体之一的VL CDR2。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表1中的抗体之一的VL CDR3。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表2中的抗体之一的VH CDR1。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表2中的抗体之一的VH CDR2。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表2中的抗体之一的VH CDR3。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表2中的抗体之一的VH CDR中的一者、两者或全部三者(例如，表2的一行中的VH CDR)。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表1中的抗体之一的VL CDR中的一者、两者或全部三者(例如，表1的一行中的VL CDR)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中
(i)VL包含：
(a)包含氨基酸序列KSSQSLLNSX1NQKNYLX2(SEQ ID NO:10)、由其组成或基本上由其组成的VL CDR1，其中
X1是G或S
X2是T或S；和/或
(b)包含氨基酸序列WASTRES(SEQ ID NO:11)、由其组成或基本上由其组成的VL CDR2；和/或
(c)包含氨基酸序列QNX1YSX2PYT(SEQ ID NO:12)、由其组成或基本上由其组成的VLCDR3，其中
X1是D或E
X2是Y、F或S；以及
(ii)VH包含：
(a)包含氨基酸序列X1YX2MX3(SEQ ID NO:7)、由其组成或基本上由其组成的VH CDR1，其中
X1是D、E或G
X2是A或V
X3是Y或H；和/或
(b)包含氨基酸序列X1IX2TX3SGX4X5X6YNQKFX7X8(SEQ ID NO:8)、由其组成或基本上由其组成的VH CDR2，其中
X1是V或L
X2是R、K或Q
X3是Y或F
X4是D、E或G
X5是V或L
X6是T或S
X7是K、R或Q
X8是D、E或G；和/或
(c)包含氨基酸序列SGTVRGFAY(SEQ ID NO:9)、由其组成或基本上由其组成的VHCDR3。
在特定实施方案中，VL包含上述VL CDR中的两者或全部三者和/或VH包含上述VH CDR中的两者或全部三者。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表1中的抗体之一的VL CDR1。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表1中的抗体之一的VL CDR2。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表1中的抗体之一的VL CDR3。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表2中的抗体之一的VH CDR1。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表2中的抗体之一的VH CDR2。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表2中的抗体之一的VH CDR3。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表2中的抗体之一的VH CDR中的一者、两者或全部三者(例如，表2的一行中的VH CDR)。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表1中的抗体之一的VL CDR中的一者、两者或全部三者(例如，表1的一行中的VL CDR)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中
(i)VL包含：
(a)包含氨基酸序列KSSQSLLNSX1NQKNYLX2(SEQ ID NO:10)、由其组成或基本上由其组成的VL CDR1，其中
X1是G或S
X2是T或S；和/或
(b)包含氨基酸序列WASTRES(SEQ ID NO:11)、由其组成或基本上由其组成的VL CDR2；和/或
(c)包含氨基酸序列QNX1YSX2PYT(SEQ ID NO:12)、由其组成或基本上由其组成的VLCDR3，其中
X1是D或E
X2是Y、F或S；以及
(ii)VH包含：
(a)包含氨基酸序列X1YX2MX3(SEQ ID NO:7)、由其组成或基本上由其组成的VH CDR1，其中
X1是D、E或G
X2是A或V
X3是Y或H；和/或
(b)包含氨基酸序列X1IX2TX3SGX4X5X6YNQKFX7X8(SEQ ID NO:8)、由其组成或基本上由其组成的VH CDR2，其中
X1是V或L
X2是R、K或Q
X3是Y或F
X4是D、E或G
X5是V或L
X6是T或S
X7是K、R或Q
X8是D、E或G；和/或
(c)包含SGTVRGX1X2X3(SEQ ID NO:3)的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成的VHCDR3，其中
X1是F、A、V、L、I、P、M、Y、W、H或S
X2是A或D
X3是Y、G、N、Q、S、T、C、W、F、H或V。
在某些实施方案中，本文提供了一种抗体或其片段，其特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)并且包含表1中的抗体的轻链可变区(VL)互补决定区(CDR)中的一者、两者或三者(例如，表1的一行中的VL CDR)。在一些实施方案中，本文提供了一种抗体或其片段，其特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)并且包含表2中的抗体中的任一者的重链可变区(VH)CDR中的一者、两者或三者(例如，表2的一行中的VH CDR)。
在某些实施方案中，本文提供了一种抗体或其片段，其特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)并且包含有包含表1中的抗体的VL CDR中的一者、两者或全部三者(例如，表1的一行中的VL CDR)的轻链可变区(VL)。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含本文所描述的VL构架区中的一者、两者、三者或全部四者。在特定实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表3中所陈列的VL构架区(FR)中的一者、两者、三者或全部四者(例如，表3的一行中的构架区中的一者、两者、三者或四者)。
在某些实施方案中，本文提供了一种抗体或其片段，其特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)并且包含有包含表2中的抗体的VH CDR中的一者、两者或全部三者(例如，表2的一行中的VH CDR)的重链可变区(VH)。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含本文所描述的VH构架区中的一者、两者、三者或全部四者。在特定实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表4中所陈列的VH构架区(FR)中的一者、两者、三者或全部四者(例如，表4的一行中的构架区中的一者、两者、三者或四者)。
在某些实施方案中，本文提供了一种抗体或其片段，其特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)并且包含抗体Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、Hum231#1、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者的轻链可变区(VL)CDR和重链可变区(VH)CDR，例如，如表1和2中所陈列(例如，同一行中的VH CDR和VL CDR全部来自如由表1和2的第一列中的抗体的名称指定的相同抗体，例如，表1和2的第一行中的VL CDR和VH CDR分别全部来自抗体231-32-15)。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含本文所描述的VL构架区和VH构架。在特定实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表3和4中所陈列的VL构架区(FR)和VH构架区(例如，VLFR和VH FR全部来自相同抗体)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其抗原结合片段包含有包含如表1中所陈列的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3的轻链可变区(VL)，例如，抗体Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、Hum231#1、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3(例如，VL CDR在表1的一行中)。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表3中所陈列的抗体的VL构架区(例如，表3的一行中的构架区中的一者、两者、三者或四者)。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含有包含SEQ ID NO:204或SEQ ID NO:205的轻链可变区序列的构架区中的一者、两者、三者或四者的轻链可变区序列。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区序列的构架区中的一者、两者、三者或四者，其与选自由SEQ ID NO:202、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:208以及SEQ ID NO:400-518组成的群组的轻链可变区序列的构架区中的一者、两者、三者或四者至少75％、80％、85％、90％、95％或100％一致。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区序列的构架区中的一者、两者、三者或四者，其与SEQ ID NO:519的轻链可变区序列的构架区中的一者、两者、三者或四者至少75％、80％、85％、90％、95％或100％一致。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含作为或来源于由人类基因编码的氨基酸序列的轻链可变构架区，其中氨基酸序列选自由IGKV4-1*01(SEQ ID NO:607)和IGKV3-7*02(SEQ ID NO:608)组成的群组。在特定实施方案中，来源于所述氨基酸序列的轻链可变构架区由所述氨基酸序列组成，但存在至多10个氨基酸取代、缺失和/或插入，优选地至多10个氨基酸取代。在一个特定实施方案中，来源于所述氨基酸序列的轻链可变构架区由具有1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个氨基酸残基取代对应的非人类轻链可变构架区中的类似位置中发现的氨基酸的所述氨基酸序列组成。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含来源于氨基酸序列SEQ ID NO:607或SEQ ID NO:608的轻链可变构架区，其中氨基酸序列SEQ ID NO:607或SEQ ID NO:608中的至少一个氨基酸被对应的非人类轻链可变构架区中的类似位置中的氨基酸取代。在一个特定实施方案中，氨基酸取代在氨基酸位置87处，其中氨基酸位置是根据Kabat编号所指示。在特定实施方案中，氨基酸取代是87H，其中氨基酸位置是根据Kabat编号所指示。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含Hum231#1的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3，例如，如表1中所陈列的Hum231#1的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3(分别是SEQ ID NO:16、17以及18)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类轻链可变κ亚家族的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表3中所陈列的抗体的VL构架区(例如，Hum231#1的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含Hum231#2的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3，例如，如表1中所陈列的Hum231#2的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3(分别是SEQ ID NO:16、17以及18)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类轻链可变κ亚家族的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表3中所陈列的抗体的VL构架区(例如，Hum231#2的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1964的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3，例如，如表1中所陈列的pab1964的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3(分别是SEQ ID NO:101、105以及106)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类轻链可变κ亚家族的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表3中所陈列的抗体的VL构架区(例如，pab1964的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1965的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3，例如，如表1中所陈列的pab1965的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3(分别是SEQ ID NO:102、105以及107)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类轻链可变κ亚家族的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表3中所陈列的抗体的VL构架区(例如，pab1965的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1966的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3，例如，如表1中所陈列的pab1966的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3(分别是SEQ ID NO:102、105以及107)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类轻链可变κ亚家族的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表3中所陈列的抗体的VL构架区(例如，pab1966的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1967的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3，例如，如表1中所陈列的pab1967的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3(分别是SEQ ID NO:103、105以及108)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类轻链可变κ亚家族的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表3中所陈列的抗体的VL构架区(例如，pab1967的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1968的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3，例如，如表1中所陈列的pab1968的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3(分别是SEQ ID NO:101、105以及107)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类轻链可变κ亚家族的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表3中所陈列的抗体的VL构架区(例如，pab1968的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1969的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3，例如，如表1中所陈列的pab1969的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3(分别是SEQ ID NO:103、105以及109)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类轻链可变κ亚家族的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表3中所陈列的抗体的VL构架区(例如，pab1969的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1970的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3，例如，如表1中所陈列的pab1970的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3(分别是SEQ ID NO:101、105以及109)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类轻链可变κ亚家族的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表3中所陈列的抗体的VL构架区(例如，pab1970的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1971的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3，例如，如表1中所陈列的pab1971的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3(分别是SEQ ID NO:103、105以及107)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类轻链可变κ亚家族的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表3中所陈列的抗体的VL构架区(例如，pab1971的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1972的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3，例如，如表1中所陈列的pab1972的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3(分别是SEQ ID NO:104、105以及107)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类轻链可变κ亚家族的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表3中所陈列的抗体的VL构架区(例如，pab1972的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1973的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3，例如，如表1中所陈列的pab1973的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3(分别是SEQ ID NO:103、105以及107)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类轻链可变κ亚家族的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表3中所陈列的抗体的VL构架区(例如，pab1973的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1975的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3，例如，如表1中所陈列的pab1975的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3(分别是SEQ ID NO:102、105以及107)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类轻链可变κ亚家族的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表3中所陈列的抗体的VL构架区(例如，pab1975的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1976的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3，例如，如表1中所陈列的pab1976的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3(分别是SEQ ID NO:101、105以及107)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类轻链可变κ亚家族的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表3中所陈列的抗体的VL构架区(例如，pab1976的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1977的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3，例如，如表1中所陈列的pab1977的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3(分别是SEQ ID NO:103、105以及107)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类轻链可变κ亚家族的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表3中所陈列的抗体的VL构架区(例如，pab1977的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1979的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3，例如，如表1中所陈列的pab1979的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3(分别是SEQ ID NO:102、105以及107)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类轻链可变κ亚家族的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表3中所陈列的抗体的VL构架区(例如，pab1979的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1980的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3，例如，如表1中所陈列的pab1980的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3(分别是SEQ ID NO:101、105以及107)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类轻链可变κ亚家族的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表3中所陈列的抗体的VL构架区(例如，pab1980的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1981的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3，例如，如表1中所陈列的pab1981的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3(分别是SEQ ID NO:103、105以及107)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类轻链可变κ亚家族的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表3中所陈列的抗体的VL构架区(例如，pab1981的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1983的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3，例如，如表1中所陈列的pab1983的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3(分别是SEQ ID NO:102、105以及107)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类轻链可变κ亚家族的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表3中所陈列的抗体的VL构架区(例如，pab1983的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab2159的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3，例如，如表1中所陈列的pab2159的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3(分别是SEQ ID NO:102、105以及109)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类轻链可变κ亚家族的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表3中所陈列的抗体的VL构架区(例如，pab2159的构架区)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab2160的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3，例如，如表1中所陈列的pab2160的VL CDR1、VLCDR2以及VL CDR3(分别是SEQ ID NO:102、105以及107)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类轻链可变κ亚家族的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表3中所陈列的抗体的VL构架区(例如，pab2160的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab2161的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3，例如，如表1中所陈列的pab2161的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3(分别是SEQ ID NO:103、105以及109)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类轻链可变κ亚家族的一个、两个、三个或全部四个VL构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表3中所陈列的抗体的VL构架区(例如，pab2161的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其抗原结合片段包含有包含如表2中所陈列的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3的重链可变区(VH)，例如，抗体Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3(例如，表2的一行中的VH CDR)。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表4中所陈列的抗体的VH构架区(例如，表4的一行中的构架区中的一者、两者、三者或四者)。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:203的重链可变区序列的构架区中的一者、两者、三者或全部四者。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区序列的构架区中的一者、两者、三者或四者，其与选自由SEQ ID NO:201、SEQ ID NO:206以及SEQ ID NO:215至389组成的群组的重链可变区序列的构架区中的一者、两者、三者或四者至少75％、80％、85％、90％、95％或100％一致。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含作为或来源于由人类基因编码的氨基酸序列的重链可变构架区，其中氨基酸序列选自由IGHV1-2*02(SEQ ID NO:601)、IGHV1-3*01(SEQ ID NO:602)、IGHV1-46*01(SEQ ID NO:603)、IGHV1-18*01(SEQ ID NO:604)、IGHV1-69*01(SEQ ID NO:605)以及IGHV7-4-1*02(SEQ ID NO:606)组成的群组。在特定实施方案中，来源于所述氨基酸序列的重链可变构架区由所述氨基酸序列组成，但存在至多10个氨基酸取代、缺失和/或插入，优选地至多10个氨基酸取代。在一个特定实施方案中，来源于所述氨基酸序列的重链可变构架区由具有1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个氨基酸残基取代对应的非人类重链可变构架区中的类似位置中发现的氨基酸的所述氨基酸序列组成。在特定实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含来源于氨基酸序列SEQ ID NO:601的重链可变构架区，其中氨基酸序列SEQ ID NO:601的至少一个氨基酸被对应的非人类重链可变构架区中的类似位置中的氨基酸取代。在某些实施方案中，氨基酸取代在选自由24、48、67、71、73以及94组成的群组的氨基酸位置处，其中每个群组成员的氨基酸位置是根据Kabat编号所指示。在特定实施方案中，氨基酸取代选自由24G、48I、67A、71V、73K以及94K组成的群组，其中每个群组成员的氨基酸位置是根据Kabat编号所指示。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含Hum231#1的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表2中所陈列的Hum231#1的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3(分别是SEQ ID NO:13、14以及15)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类重链可变亚家族(例如，亚家族1至7之一)的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表4中所陈列的抗体的VH构架区(例如，Hum231#1的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含Hum231#2的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表2中所陈列的Hum231#2的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3(分别是SEQ ID NO:13、14以及15)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类重链可变亚家族(例如，亚家族1至7之一)的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表4中所陈列的抗体的VH构架区(例如，Hum231#2的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1964的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表2中所陈列的pab1964的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3(分别是SEQ ID NO:19、24以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类重链可变亚家族(例如，亚家族1至7之一)的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表4中所陈列的抗体的VH构架区(例如，pab1964的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1965的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表2中所陈列的pab1965的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3(分别是SEQ ID NO:19、25以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类重链可变亚家族(例如，亚家族1至7之一)的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表4中所陈列的抗体的VH构架区(例如，pab1965的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1966的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表2中所陈列的pab1966的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3(分别是SEQ ID NO:19、26以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类重链可变亚家族(例如，亚家族1至7之一)的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表4中所陈列的抗体的VH构架区(例如，pab1966的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1967的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表2中所陈列的pab1967的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3(分别是SEQ ID NO:20、27以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类重链可变亚家族(例如，亚家族1至7之一)的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表4中所陈列的抗体的VH构架区(例如，pab1967的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1968的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表2中所陈列的pab1968的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3(分别是SEQ ID NO:21、28以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类重链可变亚家族(例如，亚家族1至7之一)的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表4中所陈列的抗体的VH构架区(例如，pab1968的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1969的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表2中所陈列的pab1969的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3(分别是SEQ ID NO:22、29以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类重链可变亚家族(例如，亚家族1至7之一)的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表4中所陈列的抗体的VH构架区(例如，pab1969的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1970的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表2中所陈列的pab1970的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3(分别是SEQ ID NO:21、24以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类重链可变亚家族(例如，亚家族1至7之一)的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表4中所陈列的抗体的VH构架区(例如，pab1970的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1971的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表2中所陈列的pab1971的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3(分别是SEQ ID NO:21、177以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类重链可变亚家族(例如，亚家族1至7之一)的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表4中所陈列的抗体的VH构架区(例如，pab1971的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1972的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表2中所陈列的pab1972的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3(分别是SEQ ID NO:23、31以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类重链可变亚家族(例如，亚家族1至7之一)的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表4中所陈列的抗体的VH构架区(例如，pab1972的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1973的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表2中所陈列的pab1973的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3(分别是SEQ ID NO:19、32以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类重链可变亚家族(例如，亚家族1至7之一)的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表4中所陈列的抗体的VH构架区(例如，pab1973的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1975的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表2中所陈列的pab1975的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3(分别是SEQ ID NO:22、29以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类重链可变亚家族(例如，亚家族1至7之一)的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表4中所陈列的抗体的VH构架区(例如，pab1975的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1976的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表2中所陈列的pab1976的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3(分别是SEQ ID NO:22、29以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类重链可变亚家族(例如，亚家族1至7之一)的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表4中所陈列的抗体的VH构架区(例如，pab1976的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1977的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表2中所陈列的pab1977的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3(分别是SEQ ID NO:22、29以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类重链可变亚家族(例如，亚家族1至7之一)的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表4中所陈列的抗体的VH构架区(例如，pab1977的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1979的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表2中所陈列的pab1979的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3(分别是SEQ ID NO:22、33以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类重链可变亚家族(例如，亚家族1至7之一)的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表4中所陈列的抗体的VH构架区(例如，pab1979的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1980的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表2中所陈列的pab1980的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3(分别是SEQ ID NO:22、33以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类重链可变亚家族(例如，亚家族1至7之一)的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表4中所陈列的抗体的VH构架区(例如，pab1980的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1981的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表2中所陈列的pab1981的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3(分别是SEQ ID NO:22、33以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类重链可变亚家族(例如，亚家族1至7之一)的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表4中所陈列的抗体的VH构架区(例如，pab1981的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1983的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表2中所陈列的pab1983的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3(分别是SEQ ID NO:19、24以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类重链可变亚家族(例如，亚家族1至7之一)的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表4中所陈列的抗体的VH构架区(例如，pab1983的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab2159的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表2中所陈列的pab2159的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3(分别是SEQ ID NO:19、144以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类重链可变亚家族(例如，亚家族1至7之一)的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表4中所陈列的抗体的VH构架区(例如，pab2159的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab2160的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表2中所陈列的pab2160的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3(分别是SEQ ID NO:119、162以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类重链可变亚家族(例如，亚家族1至7之一)的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表4中所陈列的抗体的VH构架区(例如，pab2160的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab2161的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表2中所陈列的pab2161的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3(分别是SEQ ID NO:22、121以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类重链可变亚家族(例如，亚家族1至7之一)的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含表4中所陈列的抗体的VH构架区(例如，pab2161的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其抗原结合片段包含(i)包含如表2中所陈列的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3的重链可变区(VH)，例如，抗体Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3(例如，表2的一行中的VH CDR)，以及(ii)包含如表1中所陈列的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3的轻链可变区(VL)，例如，抗体Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者的VLCDR1、VL CDR2以及VL CDR3(例如，表1的一行中的VL CDR)。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含分别在表3和4中所陈列的抗体的VL构架区和VH构架区(例如，如由其名称指定的单一抗体的构架区，例如，全部FR都来自Hum231#1或Hum231#2)。
在一些实施方案中，本文所描述的抗体或其抗原结合片段包含重链可变区序列的一个、两个、三个或四个构架区，其与选自由SEQ ID NO:201、SEQ ID NO:206以及SEQ IDNO:215至389组成的群组的重链可变区序列的构架区中的一者、两者、三者或四者至少75％、80％、85％、90％、95％或100％一致。在某些实施方案中，本文所描述的抗体或其抗原结合片段包含作为或来源于由人类基因编码的氨基酸序列的重链可变构架区，其中氨基酸序列选自由IGHV1-2*02(SEQ ID NO:601)、IGHV1-3*01(SEQ ID NO:602)、IGHV1-46*01(SEQID NO:603)、IGHV1-18*01(SEQ ID NO:604)、IGHV1-69*01(SEQ ID NO:605)以及IGHV7-4-1*02(SEQ ID NO:606)组成的群组。在特定实施方案中，来源于所述氨基酸序列的重链可变构架区由所述氨基酸序列组成，但存在至多10个氨基酸取代、缺失和/或插入，优选地至多10个氨基酸取代。在一个特定实施方案中，来源于所述氨基酸序列的重链可变构架区由具有1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个氨基酸残基取代对应的非人类重链可变构架区中的类似位置中发现的氨基酸的所述氨基酸序列组成。在特定实施方案中，本文所描述的抗体或其抗原结合片段包含来源于氨基酸序列SEQ ID NO:601的重链可变构架区，其中氨基酸序列SEQ ID NO:601中的至少一个氨基酸被对应的非人类轻链可变构架区中的类似位置中的氨基酸取代。在某些实施方案中，氨基酸取代在选自由24、48、67、71、73以及94组成的群组的氨基酸位置处，其中每个群组成员的氨基酸位置是根据Kabat编号所指示。在特定实施方案中，氨基酸取代选自由24G、48I、67A、71V、73K以及94K组成的群组，其中每个群组成员的氨基酸位置是根据Kabat编号所指示。
在一些实施方案中，本文所描述的抗体或其抗原结合片段包含表3中所陈列的抗体的VL构架区。在某些实施方案中，本文所描述的抗体或其抗原结合片段包含有包含SEQID NO:204或SEQ ID NO:205的轻链可变区序列的构架区中的一者、两者、三者或四者的轻链可变区序列。在一些实施方案中，本文所描述的抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区序列的一个、两个、三个或四个构架区，其与选自由SEQ ID NO:202、SEQ ID NO:207、SEQ IDNO:208以及SEQ ID NO:400-518组成的群组的轻链可变区序列的构架区中的一者、两者、三者或四者至少75％、80％、85％、90％、95％或100％一致。在一些实施方案中，本文所描述的抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区序列的一个、两个、三个或四个构架区，其与SEQ IDNO:519的轻链可变区序列的构架区中的一者、两者、三者或四者至少75％、80％、85％、90％、95％或100％一致。在某些实施方案中，本文所描述的抗体或其抗原结合片段包含作为或来源于由人类基因编码的氨基酸序列的轻链可变构架区，其中氨基酸序列选自由IGKV4-1*01(SEQ ID NO:607)和IGKV3-7*02(SEQ ID NO:608)组成的群组。在特定实施方案中，来源于所述氨基酸序列的轻链可变构架区由所述氨基酸序列组成，但存在至多10个氨基酸取代、缺失和/或插入，优选地至多10个氨基酸取代。在一个特定实施方案中，来源于所述氨基酸序列的轻链可变构架区由具有1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个氨基酸残基取代对应的非人类轻链可变构架区中的类似位置中发现的氨基酸的所述氨基酸序列组成。在一些实施方案中，本文所描述的抗体或其抗原结合片段包含来源于氨基酸序列SEQ ID NO:607或SEQ ID NO:608的轻链可变构架区，其中氨基酸序列SEQ ID NO:607或SEQ ID NO:608的至少一个氨基酸被对应的非人类轻链可变构架区中的类似位置中的氨基酸取代。在一个特定实施方案中，氨基酸取代在氨基酸位置87处，其中氨基酸位置是根据Kabat编号所指示。在特定实施方案中，氨基酸取代是87H，其中氨基酸位置是根据Kabat编号所指示。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含Hum231#1的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表1和2中所陈列的Hum231#1的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3(分别是SEQ ID NO:16、17、18、13、14以及15)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VL构架区和来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含分别在表3和4中所陈列的抗体的VL构架区和VH构架区(例如，Hum231#1的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含Hum231#2的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表1和2中所陈列的Hum231#2的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3(分别是SEQ ID NO:16、17、18、13、14以及15)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区和来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含分别在表3和4中所陈列的抗体的VL构架区和VH构架区(例如，如由其名称指定的单一抗体的构架，例如，Hum231#1或Hum231#2的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1964的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表1和2中所陈列的pab1964的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VHCDR3(分别是SEQ ID NO:101、105、106、19、24以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区和来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含分别在表3和4中所陈列的抗体的VL构架区和VH构架区(例如，pab1964的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1965的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表1和2中所陈列的pab1965的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VHCDR3(分别是SEQ ID NO:102、105、107、19、25以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区和来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含分别在表3和4中所陈列的抗体的VL构架区和VH构架区(例如，pab1965的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1966的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表1和2中所陈列的pab1966的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VHCDR3(分别是SEQ ID NO:102、105、107、19、26以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区和来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含分别在表3和4中所陈列的抗体的VL构架区和VH构架区(例如，pab1966的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1967的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表1和2中所陈列的pab1967的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VHCDR3(分别是SEQ ID NO:103、105、108、20、27以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区和来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含分别在表3和4中所陈列的抗体的VL构架区和VH构架区(例如，pab1967的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1968的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表1和2中所陈列的pab1968的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VHCDR3(分别是SEQ ID NO:101、105、107、21、28以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区和来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含分别在表3和4中所陈列的抗体的VL构架区和VH构架区(例如，pab1968的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1969的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表1和2中所陈列的pab1969的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VHCDR3(分别是SEQ ID NO:103、105、109、22、29以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区和来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含分别在表3和4中所陈列的抗体的VL构架区和VH构架区(例如，pab1969的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1970的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表1和2中所陈列的pab1970的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VHCDR3(分别是SEQ ID NO:101、105、109、21、24以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区和来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含分别在表3和4中所陈列的抗体的VL构架区和VH构架区(例如，pab1970的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1971的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表1和2中所陈列的pab1971的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VHCDR3(分别是SEQ ID NO:103、105、107、21、177以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区和来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含分别在表3和4中所陈列的抗体的VL构架区和VH构架区(例如，pab1971的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1972的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表1和2中所陈列的pab1972的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VHCDR3(分别是SEQ ID NO:104、105、107、23、31以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区和来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含分别在表3和4中所陈列的抗体的VL构架区和VH构架区(例如，pab1972的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1973的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表1和2中所陈列的pab1973的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VHCDR3(分别是SEQ ID NO:103、105、107、19、32以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区和来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含分别在表3和4中所陈列的抗体的VL构架区和VH构架区(例如，pab1973的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1975的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表1和2中所陈列的pab1975的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VHCDR3(分别是SEQ ID NO:102、105、107、22、29以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区和来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含分别在表3和4中所陈列的抗体的VL构架区和VH构架区(例如，pab1975的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1976的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表1和2中所陈列的pab1976的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VHCDR3(分别是SEQ ID NO:101、105、107、22、29以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区和来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含分别在表3和4中所陈列的抗体的VL构架区和VH构架区(例如，pab1976的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1977的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表1和2中所陈列的pab1977的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VHCDR3(分别是SEQ ID NO:103、105、107、22、29以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区和来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含分别在表3和4中所陈列的抗体的VL构架区和VH构架区(例如，pab1977的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1979的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表1和2中所陈列的pab1979的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VHCDR3(分别是SEQ ID NO:102、105、107、22、33以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区和来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含分别在表3和4中所陈列的抗体的VL构架区和VH构架区(例如，pab1979的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1980的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表1和2中所陈列的pab1980的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VHCDR3(分别是SEQ ID NO:101、105、107、22、33以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区和来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含分别在表3和4中所陈列的抗体的VL构架区和VH构架区(例如，pab1980的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1981的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表1和2中所陈列的pab1981的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VHCDR3(分别是SEQ ID NO:103、105、107、22、33以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区和来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含分别在表3和4中所陈列的抗体的VL构架区和VH构架区(例如，pab1981的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab1983的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表1和2中所陈列的pab1983的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VHCDR3(分别是SEQ ID NO:102、105、107、19、24以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区和来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含分别在表3和4中所陈列的抗体的VL构架区和VH构架区(例如，pab1983的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab2159的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表1和2中所陈列的pab2159的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VHCDR3(分别是SEQ ID NO:102、105、109、19、144以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区和来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含分别在表3和4中所陈列的抗体的VL构架区和VH构架区(例如，pab2159的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab2160的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表1和2中所陈列的pab2160的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VHCDR3(分别是SEQ ID NO:102、105、107、119、162以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区和来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含分别在表3和4中所陈列的抗体的VL构架区和VH构架区(例如，pab2160的构架区)。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含pab2161的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3，例如，如表1和2中所陈列的pab2161的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VHCDR3(分别是SEQ ID NO:103、105、109、22、121以及34)。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段进一步包含来源于人类或灵长类动物抗体的VL的一个、两个、三个或全部四个VL构架区和来源于人类或灵长类动物抗体的VH的一个、两个、三个或全部四个VH构架区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含分别在表3和4中所陈列的抗体的VL构架区和VH构架区(例如，pab2161的构架区)。
在某些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含图23或图24A-24C中的任一者中所列的抗体的VL域(例如，图23或图24A-24C中的任一者的一行中的VL域)的氨基酸序列的VL域。在某些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含表17中所列的抗体的VL域(例如，表17的一行中的VL域)的氨基酸序列的VL域。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:207的VL域(例如，抗体Hum231#1)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ IDNO:208的VL域(例如，抗体Hum231#2)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:435的VL域(例如，抗体pab1964)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQID NO:437的VL域(例如，抗体pab1965)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:440的VL域(例如，抗体pab1966)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:441的VL域(例如，抗体pab1967)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:444的VL域(例如，抗体pab1968)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:458的VL域(例如，抗体pab1969)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:459的VL域(例如，抗体pab1970)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:453的VL域(例如，抗体pab1971)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:463的VL域(例如，抗体pab1972)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:519的VL域(例如，抗体pab1973)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:440的VL域(例如，抗体pab1975)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:444的VL域(例如，抗体pab1976)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:453的VL域(例如，抗体pab1977)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:440的VL域(例如，抗体pab1979)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:444的VL域(例如，抗体pab1980)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:453的VL域(例如，抗体pab1981)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:440的VL域(例如，抗体pab1983)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:408的VL域(例如，抗体pab2159)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:423的VL域(例如，抗体pab2160)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:486的VL域(例如，抗体pab2161)。
在一些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由图23或图24A-24C中的任一者中所列的抗体的VL域(例如，图23或图24A-24C中的任一者的一行中的VL域)的氨基酸序列组成或基本上由其组成的VL域。在一些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由表17中所列的抗体的VL域(例如，表17的一行中的VL域)的氨基酸序列组成或基本上由其组成的VL域。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:207组成或基本上由其组成的VL域(例如，抗体Hum231#1)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:208组成或基本上由其组成的VL域(例如，抗体Hum231#2)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:435组成或基本上由其组成的VL域(例如，抗体pab1964)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ IDNO:437组成或基本上由其组成的VL域(例如，抗体pab1965)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:440组成或基本上由其组成的VL域(例如，抗体pab1966)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:441组成或基本上由其组成的VL域(例如，抗体pab1967)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:444组成或基本上由其组成的VL域(例如，抗体pab1968)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ IDNO:458的VL域(例如，抗体pab1969)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:459组成或基本上由其组成的VL域(例如，抗体pab1970)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:453组成或基本上由其组成的VL域(例如，抗体pab1971)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:463组成或基本上由其组成的VL域(例如，抗体pab1972)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:519组成或基本上由其组成的VL域(例如，抗体pab1973)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:440组成或基本上由其组成的VL域(例如，抗体pab1975)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:444组成或基本上由其组成的VL域(例如，抗体pab1976)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:453组成或基本上由其组成的VL域(例如，抗体pab1977)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:440组成或基本上由其组成的VL域(例如，抗体pab1979)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:444组成或基本上由其组成的VL域(例如，抗体pab1980)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:453组成或基本上由其组成的VL域(例如，抗体pab1981)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:440组成或基本上由其组成的VL域(例如，抗体pab1983)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:408组成或基本上由其组成的VL域(例如，抗体pab2159)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:423组成或基本上由其组成的VL域(例如，抗体pab2160)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:486组成或基本上由其组成的VL域(例如，抗体pab2161)。
在某些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含图23或图24A-24C中的任一者中所列的抗体的VH域(例如，图23或图24A-24C中的任一者的一行中的VH域)的氨基酸序列的VH域。在某些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含表17中所列的抗体的VH域(例如，表17的一行中的VH域)的氨基酸序列的VH域。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:206的VH域(例如，抗体Hum231#1)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ IDNO:206的VH域(例如，抗体Hum231#2)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:249的VH域(例如，抗体pab1964)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQID NO:251的VH域(例如，抗体pab1965)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:254的VH域(例如，抗体pab1966)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:255的VH域(例如，抗体pab1967)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:259的VH域(例如，抗体pab1968)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:276的VH域(例如，抗体pab1969)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:277的VH域(例如，抗体pab1970)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:280的VH域(例如，抗体pab1971)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:284的VH域(例如，抗体pab1972)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:304的VH域(例如，抗体pab1973)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:276的VH域(例如，抗体pab1975)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:276的VH域(例如，抗体pab1976)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:276的VH域(例如，抗体pab1977)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:345的VH域(例如，抗体pab1979)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:345的VH域(例如，抗体pab1980)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:345的VH域(例如，抗体pab1981)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:249的VH域(例如，抗体pab1983)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:224的VH域(例如，抗体pab2159)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:237的VH域(例如，抗体pab2160)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:315的VH域(例如，抗体pab2161)。
在一些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由图23或图24A-24C中的任一者中所列的抗体的VH域(例如，图23或图24A-24C中的任一者的一行中的VH域)的氨基酸序列组成或基本上由其组成的VH域。在一些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由表17中所列的抗体的VH域(例如，表17的一行中的VH域)的氨基酸序列组成或基本上由其组成的VH域。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:206组成或基本上由其组成的VH域(例如，抗体Hum231#1)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:206组成或基本上由其组成的VH域(例如，抗体Hum231#2)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:249组成或基本上由其组成的VH域(例如，抗体pab1964)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ IDNO:251组成或基本上由其组成的VH域(例如，抗体pab1965)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:254组成或基本上由其组成的VH域(例如，抗体pab1966)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:255组成或基本上由其组成的VH域(例如，抗体pab1967)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:259组成或基本上由其组成的VH域(例如，抗体pab1968)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:276组成或基本上由其组成的VH域(例如，抗体pab1969)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:277组成或基本上由其组成的VH域(例如，抗体pab1970)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:280组成或基本上由其组成的VH域(例如，抗体pab1971)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:284组成或基本上由其组成的VH域(例如，抗体pab1972)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:304组成或基本上由其组成的VH域(例如，抗体pab1973)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:276组成或基本上由其组成的VH域(例如，抗体pab1975)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:276组成或基本上由其组成的VH域(例如，抗体pab1976)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:276组成或基本上由其组成的VH域(例如，抗体pab1977)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:345组成或基本上由其组成的VH域(例如，抗体pab1979)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:345组成或基本上由其组成的VH域(例如，抗体pab1980)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:345组成或基本上由其组成的VH域(例如，抗体pab1981)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:249组成或基本上由其组成的VH域(例如，抗体pab1983)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:224组成或基本上由其组成的VH域(例如，抗体pab2159)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:237组成或基本上由其组成的VH域(例如，抗体pab2160)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含由SEQ ID NO:315组成或基本上由其组成的VH域(例如，抗体pab2161)。
在某些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含VH域和VL域，其中VH域和VL域包含图23或图24A-24C中的任一者中所列的抗体的VH域和VL域(例如，图23或图24A-24C中的任一者的一行中的VH域和VL域)的氨基酸序列。在某些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含VH域和VL域，其中VH域和VL域包含表17中所列的抗体的VH域和VL域(例如，表17的一行中的VH域和VL域)的氨基酸序列。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:207的VL域和包含SEQ ID NO:206的VH域(例如，抗体Hum231#1)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQID NO:208的VL域和包含SEQ ID NO:206的VH域(例如，抗体Hum231#2)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:435的VL域和包含SEQ ID NO:249的VH域(例如，抗体pab1964)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:437的VL域和包含SEQID NO:251的VH域(例如，抗体pab1965)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:440的VL域和包含SEQ ID NO:254的VH域(例如，抗体pab1966)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:441的VL域和包含SEQ ID NO:255的VH域(例如，抗体pab1967)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:444的VL域和包含SEQ ID NO:259的VH域(例如，抗体pab1968)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:458的VL域和包含SEQ ID NO:276的VH域(例如，抗体pab1969)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:459的VL域和包含SEQ ID NO:277的VH域(例如，抗体pab1970)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:453的VL域和包含SEQ ID NO:280的VH域(例如，抗体pab1971)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:463的VL域和包含SEQ ID NO:284的VH域(例如，抗体pab1972)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:519的VL域和包含SEQ ID NO:304的VH域(例如，抗体pab1973)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:440的VL域和包含SEQ ID NO:276的VH域(例如，抗体pab1975)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:444的VL域和包含SEQ ID NO:276的VH域(例如，抗体pab1976)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQID NO:453的VL域和包含SEQ ID NO:276的VH域(例如，抗体pab1977)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:440的VL域和包含SEQ ID NO:345的VH域(例如，抗体pab1979)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:444的VL域和包含SEQID NO:345的VH域(例如，抗体pab1980)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:453的VL域和包含SEQ ID NO:345的VH域(例如，抗体pab1981)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:440的VL域和包含SEQ ID NO:249的VH域(例如，抗体pab1983)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:408的VL域和包含SEQ ID NO:224的VH域(例如，抗体pab2159)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:423的VL域和包含SEQ ID NO:237的VH域(例如，抗体pab2160)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:486的VL域和包含SEQ ID NO:315的VH域(例如，抗体pab2161)。
在某些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含VH域和VL域，其中VH域和VL域由图23或图24A-24C中的任一者中所列的抗体的VH域和VL域(例如，图23或图24A-24C中的任一者的一行中的VH域和VL域)的氨基酸序列组成或基本上由其组成。在某些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含VH域和VL域，其中VH域和VL域由表17中所列的抗体的VH域和VL域(例如，表17的一行中的VH域和VL域)的氨基酸序列组成或基本上由其组成。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含VL域和VH域，其中VL域由SEQ ID NO:207组成或基本上由其组成并且VH域由SEQ ID NO:206组成或基本上由其组成(例如，抗体Hum231#1)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含VL域和VH域，其中VL域由SEQ ID NO:208组成或基本上由其组成并且VH域由SEQ ID NO:206组成或基本上由其组成(例如，抗体Hum231#2)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含VL域和VH域，其中VL域由SEQ ID NO:435组成或基本上由其组成并且VH域由SEQ ID NO:249组成或基本上由其组成(例如，抗体pab1964)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含VL域和VH域，其中VL域由SEQ ID NO:437组成或基本上由其组成并且VH域由SEQ ID NO:251组成或基本上由其组成(例如，抗体pab1965)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含VL域和VH域，其中VL域由SEQ ID NO:440组成或基本上由其组成并且VH域由SEQ ID NO:254组成或基本上由其组成(例如，抗体pab1966)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含VL域和VH域，其中VL域由SEQ ID NO:441组成或基本上由其组成并且VH域由SEQ ID NO:255组成或基本上由其组成(例如，抗体pab1967)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含VL域和VH域，其中VL域由SEQ ID NO:444组成或基本上由其组成并且VH域由SEQ ID NO:259组成或基本上由其组成(例如，抗体pab1968)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含VL域和VH域，其中VL域由SEQ ID NO:458组成或基本上由其组成并且VH域由SEQ ID NO:276组成或基本上由其组成(例如，抗体pab1969)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含VL域和VH域，其中VL域由SEQ ID NO:459组成或基本上由其组成并且VH域由SEQ ID NO:277组成或基本上由其组成(例如，抗体pab1970)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含VL域和VH域，其中VL域由SEQID NO:453组成或基本上由其组成并且VH域由SEQ ID NO:280组成或基本上由其组成(例如，抗体pab1971)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含VL域和VH域，其中VL域由SEQ ID NO:463组成或基本上由其组成并且VH域由SEQ ID NO:284组成或基本上由其组成(例如，抗体pab1972)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含VL域和VH域，其中VL域由SEQ IDNO:519组成或基本上由其组成并且VH域由SEQ ID NO:304组成或基本上由其组成(例如，抗体pab1973)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含VL域和VH域，其中VL域由SEQ ID NO:440组成或基本上由其组成并且VH域由SEQ IDNO:276组成或基本上由其组成(例如，抗体pab1975)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含VL域和VH域，其中VL域由SEQ ID NO:444组成或基本上由其组成并且VH域由SEQ ID NO:276组成或基本上由其组成(例如，抗体pab1976)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含VL域和VH域，其中VL域由SEQ ID NO:453组成或基本上由其组成并且VH域由SEQ IDNO:276组成或基本上由其组成(例如，抗体pab1977)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含VL域和VH域，其中VL域由SEQ ID NO:440组成或基本上由其组成并且VH域由SEQ ID NO:345组成或基本上由其组成(例如，抗体pab1979)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含VL域和VH域，其中VL域由SEQ ID NO:444组成或基本上由其组成并且VH域由SEQ IDNO:345组成或基本上由其组成(例如，抗体pab1980)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含VL域和VH域，其中VL域由SEQ ID NO:453组成或基本上由其组成并且VH域由SEQ ID NO:345组成或基本上由其组成(例如，抗体pab1981)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含VL域和VH域，其中VL域由SEQ ID NO:440组成或基本上由其组成并且VH域由SEQ IDNO:249组成或基本上由其组成(例如，抗体pab1983)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含VL域和VH域，其中VL域由SEQ ID NO:408组成或基本上由其组成并且VH域由SEQ ID NO:224组成或基本上由其组成(例如，抗体pab2159)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含VL域和VH域，其中VL域由SEQ ID NO:423组成或基本上由其组成并且VH域由SEQ IDNO:237组成或基本上由其组成(例如，抗体pab2160)。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含VL域和VH域，其中VL域由SEQ ID NO:486组成或基本上由其组成并且VH域由SEQ ID NO:315组成或基本上由其组成(例如，抗体pab2161)。
在某些方面，本文所描述的抗体可以由其单独的VL域或其单独VH域，或由其单独的3个VL CDR或其单独的3个VH CDR描述。参看例如Rader C等,(1998)《美国国家科学院院刊(PNAS)》95:8910-8915，其以全文引用的方式并入本文中，描述了通过分别从人类轻链或重链文库鉴别互补轻链或重链，得到具有与原始抗体的亲和力一样高或更高的亲和力的人源化抗体变体进行的小鼠抗αvβ3抗体的人源化。还参看Clackson T等,(1991)《自然(Nature)》352:624-628，其以全文引用的方式并入本文中，描述了通过使用特异性VL域(或VH域)并且针对互补可变域筛选文库来产生结合特异性抗原的抗体的方法。筛选产生特异性VH域的14个新伴侣和特异性VL域的13个新伴侣，如通过ELISA测定，其为强结合子。还参看Kim SJ和Hong HJ,(2007)《微生物学杂志(J Microbiol)》45:572-577，其以全文引用的方式并入本文中，描述了通过使用特异性VH域并且针对互补VL域筛选文库(例如，人类VL文库)来产生结合特异性抗原的抗体的方法；所选的VL域继而可以用于指导额外互补(例如，人类)VH域的选择。
在某些方面，抗体的CDR可以根据Chothia编号方案确定，这个方案涉及免疫球蛋白结构环的定位(参看例如Chothia C和Lesk AM,(1987),《分子生物学杂志(J Mol Biol)》196:901-917；Al-Lazikani B等,(1997)《分子生物学杂志(J Mol Biol)》273:927-948；Chothia C等,(1992)《分子生物学杂志(J Mol Biol)》227:799-817；Tramontano A等,(1990)《分子生物学杂志(J Mol Biol)》215(1):175-82；以及美国专利号7,709,226)。通常，当使用Kabat编号规则时，Chothia CDR-H1环存在于重链氨基酸26至32、33或34处，Chothia CDR-H2环存在于重链氨基酸52至56处，并且Chothia CDR-H3环存在于重链氨基酸95至102处，而Chothia CDR-L1环存在于轻链氨基酸24至34处，Chothia CDR-L2环存在于轻链氨基酸50至56处，并且Chothia CDR-L3环存在于轻链氨基酸89至97处。当使用Kabat编号规则编号时Chothia CDR-HI环的末端在H32与H34之间变化，这取决于环的长度(这是因为Kabat编号方案将插入置于H35A和H35B处；如果35A和35B都不存在，那么环在32处封端；如果只有35A存在，那么环在33处封端；如果35A和35B都存在，那么环在34处封端)。
在某些方面，本文提供了抗体或其片段，其特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)并且包含本文所描述的抗体中的任一者(例如，Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者)的VL的一个或多个Chothia VL CDR和/或本文所描述的抗体中的任一者(例如，抗体Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者)的VH的一个或多个Chothia VH CDR。在某些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含一个或多个CDR，其中Chothia和Kabat CDR具有相同的氨基酸序列。在某些实施方案中，本文提供了抗体或其片段，其特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)并且包含Kabat CDR和Chothia CDR的组合。在一个特定实施方案中，本文提供了抗体或其片段，其特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)并且包含本文所描述的抗体(例如，Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161)中的任一者的Chothia CDR。
在某些方面，抗体的CDR可以根据如Lefranc M-P,(1999)《免疫学家(TheImmunologist)》7:132-136和Lefranc M-P等,(1999)《核酸研究(Nucleic Acids Res)》27:209-212中所描述的IMGT编号系统确定。根据IMGT编号方案，VH-CDR1在位置26至35处，VH-CDR2在位置51至57处，VH-CDR3在位置93至102处，VL-CDR1在位置27至32处，VL-CDR2在位置50至52处，并且VL-CDR3在位置89至97处。在一个特定实施方案中，本文提供了抗体或其片段，其特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)并且包含本文所描述的抗体中的任一者(例如，抗体Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者)的CDR，CDR由IMGT编号系统确定，例如，如Lefranc M-P(1999)同上和Lefranc M-P等,(1999)同上中所描述。
在某些方面，抗体的CDR可以根据MacCallum RM等,(1996)《分子生物学杂志(JMol Biol)》262:732-745确定。还参看例如Martin A.“抗体可变域的蛋白质序列和结构分析(Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains)”,《抗体工程(Antibody Engineering)》,Kontermann和Dübel编,第31章,第422-439页,Springer-Verlag,Berlin(2001)。在一个特定实施方案中，本文提供了抗体或其片段，其特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)并且包含本文所描述的抗体中的任一者(例如，抗体Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者)的CDR，CDR由MacCallum RM等的方法确定。
在某些方面，抗体的CDR可以根据AbM编号方案确定，这个方案涉及AbM高变区，其代表Kabat CDR与Chothia结构环之间的折中，并且由Oxford Molecular的AbM抗体建模软件(Oxford Molecular Group,Inc.)使用。在一个特定实施方案中，本文提供了抗体或其片段，其特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)并且包含本文所描述的抗体中的任一者(例如，抗体Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者)的CDR，CDR由AbM编号方案确定。
在一个特定实施方案中，本文所描述的抗体的一个或多个CDR沿着VH(例如，CDR1、CDR2或CDR3)和/或VL(例如，CDR1、CDR2或CDR3)区的位置可以变化一个、两个、三个、四个、五个或六个氨基酸位置，只要免疫特异性结合至GITR(例如，人类GITR)得以维持即可(例如，实质上维持例如至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％)。举例来说，在一个实施方案中，相对于本文所描述的抗体(例如，Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161，例如表1中所鉴别)中的任一者的CDR位置，界定本文所描述的抗体(例如，Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161)中的任一者的CDR的位置可以通过偏移CDR的N端和/或C端边界而变化一个、两个、三个、四个、五个或六个氨基酸，只要免疫特异性结合至GITR(例如，人类GITR)得以维持即可(例如，实质上维持例如至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％)。在另一个实施方案中，本文所描述的抗体的一个或多个CDR沿着VH(例如，CDR1、CDR2或CDR3)和/或VL(例如，CDR1、CDR2或CDR3)区的长度可以变化(例如，缩短或加长)一个、两个、三个、四个、五个或更多个氨基酸，只要免疫特异性结合至GITR(例如，人类GITR)得以维持即可(例如，实质上维持例如至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％)。
在一个实施方案中，本文所描述的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3可以比本文所描述的CDR(例如，SEQ ID NO:1-34、101-109或114-189，或SEQID NO:35或191-194)中的一者或多者短一个、两个、三个、四个、五个或更多个氨基酸，只要免疫特异性结合至GITR(例如，人类GITR)得以维持即可(例如，实质上维持例如至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％)。在另一个实施方案中，本文所描述的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3可以比本文所描述的CDR(例如，SEQ ID NO:1-34、101-109或114-189，或SEQ ID NO:35或191-194)中的一者或多者长一个、两个、三个、四个、五个或更多个氨基酸，只要免疫特异性结合至GITR(例如，人类GITR)得以维持即可(例如，实质上维持例如至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％)。在另一个实施方案中，本文所描述的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VHCDR2和/或VH CDR3的氨基端与本文所描述的CDR(例如，SEQ ID NO:1-34、101-109或114-189，或SEQ ID NO:35或191-194)中的一者或多者相比可以延长一个、两个、三个、四个、五个或更多个氨基酸，只要免疫特异性结合至GITR(例如，人类GITR)得以维持即可(例如，实质上维持例如至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％)。在另一个实施方案中，本文所描述的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3的羧基端与本文所描述的CDR(例如，SEQ ID NO:1-34、101-109或114-189，或SEQ ID NO:35或191-194)中的一者或多者相比可以延长一个、两个、三个、四个、五个或更多个氨基酸，只要免疫特异性结合至GITR(例如，人类GITR)得以维持即可(例如，实质上维持例如至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％)。在另一个实施方案中，本文所描述的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3的氨基端与本文所描述的CDR(例如，SEQ ID NO:1-34、101-109或114-189，或SEQ ID NO:35或191-194)中的一者或多者相比可以缩短一个、两个、三个、四个、五个或更多个氨基酸，只要免疫特异性结合至GITR(例如，人类GITR)得以维持即可(例如，实质上维持例如至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％)。在一个实施方案中，本文所描述的VL CDR1、VL CDR2、VLCDR3、VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3的羧基端与本文所描述的CDR(例如，SEQ ID NO:1-34、101-109或114-189，或SEQ ID NO:35或191-194)中的一者或多者相比可以缩短一个、两个、三个、四个、五个或更多个氨基酸，只要免疫特异性结合至GITR(例如，人类GITR)得以维持即可(例如，实质上维持例如至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％)。本领域中已知的任何方法可以用于确认免疫特异性结合至GITR(例如，人类GITR)是否得以维持，例如，本文所提供的“实施例”章节(章节6)中所描述的结合试验和条件。
在特定方面，本文提供了一种包含抗体轻链和重链，例如独立的轻链和重链的抗体。关于轻链，在一个特定实施方案中，本文所描述的抗体的轻链是κ轻链。在另一个特定实施方案中，本文所描述的抗体的轻链是λ轻链。在另一个特定实施方案中，本文所描述的抗体的轻链是人类κ轻链或人类λ轻链。在一个特定实施方案中，免疫特异性地结合至GITR多肽(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体包含轻链，其中VL域的氨基酸序列包含本文所描述的任何氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:202、204、205、207、208或400-518)，并且其中轻链的恒定区包含人类κ轻链恒定区的氨基酸序列。在一个特定实施方案中，免疫特异性地结合至GITR多肽(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体包含轻链，其中VL域的氨基酸序列包含本文所描述的任何氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:519)，并且其中轻链的恒定区包含人类κ轻链恒定区的氨基酸序列。在另一个特定实施方案中，免疫特异性地结合GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体包含轻链，其中VL域的氨基酸序列可以包含本文所描述的任何氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:202、204、205、207、208或400-518)，并且其中轻链的恒定区包含人类λ轻链恒定区的氨基酸序列。在另一个特定实施方案中，免疫特异性地结合GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体包含轻链，其中VL域的氨基酸序列可以包含本文所描述的任何氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:519)，并且其中轻链的恒定区包含人类λ轻链恒定区的氨基酸序列。在一个特定实施方案中，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体包含轻链，其中VL域的氨基酸包含(SEQ ID NO:207或208)，并且其中轻链的恒定区包含人类κ或λ轻链恒定区的氨基酸序列。人类恒定区序列的非限制性实例已经在本领域中描述，例如，参看美国专利号5,693,780和Kabat EA等,(1991)同上。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含有包含选自由SEQ ID NO:555、556、571-576以及580组成的群组的氨基酸序列的轻链。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含有包含选自由SEQ ID NO:571-576组成的群组的氨基酸序列轻链。
关于重链，在一个特定实施方案中，本文所描述的抗体的重链可以是α、δ、ε、γ或μ重链。在另一个特定实施方案中，所描述的抗体的重链可以包含人类α、δ、ε、γ或μ重链。在一个特定实施方案中，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体包含重链，其中VH域的氨基酸序列可以包含本文所描述的任何氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:201、203、206或215-389中的任一者)，并且其中重链的恒定区包含人类γ重链恒定区的氨基酸序列。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体包含重链，其中VH域的氨基酸序列包含选自由SEQ ID NO:553、554、567-570以及579组成的群组的氨基酸序列，并且其中重链的恒定区包含本文所描述或本领域中已知的人类重链的氨基酸。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体包含重链，其中VH域的氨基酸序列包含选自由SEQ ID NO:581和582组成的群组的氨基酸序列，并且其中重链的恒定区包含本文所描述或本领域中已知的人类重链的氨基酸。人类恒定区序列的非限制性实例已经在本领域中描述，例如，参看美国专利号5,693,780和Kabat EA等,(1991)同上。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含有包含选自由SEQ ID NO:553、554、567-570以及579组成的群组的氨基酸序列的重链。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含有包含选自由SEQ ID NO:581和582组成的群组的氨基酸序列的重链。在一个特定实施方案中，结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQID NO:567-570的氨基酸序列的重链。
在一个特定实施方案中，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体包含有包含本文所描述的任何氨基酸序列的VL域和VH域，并且其中恒定区包含IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY免疫球蛋白分子或人类IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY免疫球蛋白分子的恒定区的氨基酸序列。在另一个特定实施方案中，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体包含有包含本文所描述的任何氨基酸序列的VL域和VH域，并且其中恒定区包含IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY免疫球蛋白分子、免疫球蛋白分子的任何类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1以及IgA2)或任何子类(例如，IgG2a和IgG2b)的恒定区的氨基酸序列。在一个特定实施方案中，恒定区包含人类IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY免疫球蛋白分子、免疫球蛋白分子的任何类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1以及IgA2)或任何子类(例如，IgG2a和IgG2b)的恒定区的氨基酸序列。
在另一个特定实施方案中，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体包含有包含本文所描述的任何氨基酸序列的VL域和VH域，并且其中恒定区包含人类IgG1(例如，同种异型G1m3、G1m17,1或G1m17,1,2)或人类IgG4的恒定区的氨基酸序列。在一个特定实施方案中，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体包含有包含本文所描述的任何氨基酸序列的VL域和VH域，并且其中恒定区包含人类IgG1(同种异型Glm3)的恒定区的氨基酸序列。人类恒定区的非限制性实例在本领域中描述，例如，参看Kabat EA等,(1991)同上。
在另一个实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含有包含选自由SEQ ID NO:555、556、571-576以及580组成的群组的氨基酸序列的轻链和包含选自由SEQ ID NO:553、554、567-570以及579组成的群组的氨基酸序列的重链。在另一个实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:576的氨基酸序列的轻链和包含选自由SEQ ID NO:581和582组成的群组的氨基酸序列的重链。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含SEQ ID NO:555或556的氨基酸序列的轻链和包含SEQ ID NO:554的氨基酸序列的重链。
在某些实施方案中，将一个、两个或更多个突变(例如，氨基酸取代)引入本文所描述的抗体或其片段的Fc区(例如，CH2域(人类IgG1的残基231-340)和/或CH3域(人类IgG1的残基341-447)和/或铰链区，其中编号根据Kabat编号系统(例如，Kabat中的EU索引))中以改变抗体的一种或多种功能特性，诸如血清半衰期、补体固定、Fc受体结合和/或抗原依赖性细胞毒性。
在某些实施方案中，如在例如美国专利号5,677,425中所描述将一个、两个或更多个突变(例如，氨基酸取代)引入Fc区(CH1域)的铰链区中以使得铰链区中半胱氨酸残基的数目改变(例如，增加或减小)。CH1域的铰链区中半胱氨酸残基的数目可以改变以例如有助于轻和重链的组装，或以改变(例如，增加或减小)抗体的稳定性。
在一些实施方案中，将一个、两个或更多个突变(例如，氨基酸取代)引入本文所描述的抗体或其片段的Fc区(例如，CH2域(人类IgG1的残基231-340)和/或CH3域(人类IgG1的残基341-447)和/或铰链区，其中编号根据Kabat编号系统(例如，Kabat中的EU索引))中以增加或减小抗体对效应细胞的表面上的Fc受体(例如，活化的Fc受体)的亲和力。减小或增加抗体对Fc受体的亲和力的抗体或其片段的Fc区中的突变和将这类突变引入Fc受体或其片段中的技术为本领域的技术人员所知。可以制造以改变抗体对Fc受体的亲和力的抗体的Fc受体中的突变的实例描述于例如Smith P等,(2012)《美国国家科学院院刊(PNAS)》109:6181-6186，美国专利号6,737,056，以及国际公布号WO 02/060919、WO98/23289和WO 97/34631中，其以引用的方式并入本文中。
在一个特定实施方案中，将一个、两个或更多个氨基酸突变(即，取代、插入或缺失)引入IgG恒定域或其FcRn结合片段(优选地是Fc或铰链-Fc域片段)中以改变(例如，减小或增加)体内抗体的半衰期。对于将改变(例如，减小或增加)体内抗体的半衰期的突变的实例，参看例如国际公布号WO 02/060919、WO 98/23289和WO 97/34631；以及美国专利号5,869,046、6,121,022、6,277,375和6,165,745。在一些实施方案中，将一个、两个或更多个氨基酸突变(即，取代、插入或缺失)引入IgG恒定域或其FcRn结合片段(优选地是Fc或铰链-Fc域片段)中以减小体内抗体的半衰期。在其它实施方案中，将一个、两个或更多个氨基酸突变(即，取代、插入或缺失)引入IgG恒定域或其FcRn结合片段(优选地是Fc或铰链-Fc域片段)中以增加体内抗体的半衰期。在一个特定实施方案中，抗体可以具有第二恒定(CH2)域(人类IgG1的残基231-340)和/或第三恒定(CH3)域(人类IgG1的残基341-447)中的一个或多个氨基酸突变(例如，取代)，其中编号根据Kabat中的EU索引(Kabat EA等,(1991)同上)。在一个特定实施方案中，本文所描述的抗体或其抗原结合片段的IgG1的恒定区包含位置252中的甲硫氨酸(M)至酪氨酸(Y)取代、位置254中的丝氨酸(S)至苏氨酸(T)取代以及位置256中的苏氨酸(T)至谷氨酸(E)取代，根据如Kabat中的EU索引编号。参看美国专利号7,658,921，其以引用的方式并入本文中。这种类型的突变体IgG，称作“YTE突变体”，已经显示与野生型型式的相同抗体相比展现四倍增加的半衰期(参看Dall'Acqua WF等,(2006)《生物化学杂志(J Biol Chem)》281:23514-24)。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含有包含位置251-257、285-290、308-314、385-389以及428-436处的氨基酸残基的一个、两个、三个或更多个氨基酸取代的IgG恒定域，根据如Kabat中的EU索引编号。
在另一个实施方案中，将一个、两个或更多个氨基酸取代引入IgG恒定域Fc区中以改变抗体的效应功能。举例来说，选自根据如Kabat中的EU索引编号的氨基酸残基234、235、236、237、297、318、320以及322的一个或多个氨基酸可以被不同氨基酸残基置换以使得抗体对效应配体具有改变的亲和力，但保留亲本抗体的抗原结合能力。亲和力改变的效应配体可以是例如Fc受体或补体的C1组分。这种方法进一步详细描述于美国专利号5,624,821和5,648,260中。在一些实施方案中，恒定区域的缺失或灭活(经由点突变或其它方式)可以减少循环抗体的Fc受体结合，从而增加肿瘤定位。对于使恒定域缺失或灭活并且从而增加肿瘤定位的突变的描述，参看例如美国专利号5,585,097和8,591,886。在某些实施方案中，可以将一个或多个氨基酸取代引入本文所描述的抗体的Fc区中以去除Fc区上的潜在糖基化位点，这可以减少Fc受体结合(参看例如Shields RL等,(2001)《生物化学杂志(J BiolChem)》276:6591-604)。在各种实施方案中，可以在本文所描述的抗体的恒定区中制造以下突变中的一者或多者：N297A取代；N297Q取代；L235A取代和L237A取代；L234A取代和L235A取代；E233P取代；L234V取代；L235A取代；C236缺失；P238A取代；D265A取代；A327Q取代；或P329A取代，根据如Kabat中的EU索引编号。
在一个特定实施方案中，本文所描述的抗体或其抗原结合片段包含具有N297Q或N297A氨基酸取代的IgG1的恒定域。
在某些实施方案中，选自本文所描述的抗体的恒定区中的氨基酸残基329、331以及322(根据如Kabat中的EU索引编号)的一个或多个氨基酸可以被不同氨基酸残基置换以使得抗体具有改变的C1q结合和/或减少或消除的补体依赖性细胞毒性(CDC)。这种方法进一步详细描述于美国专利号6,194,551(Idusogie等)中。在一些实施方案中，改变本文所描述的抗体的CH2域的N端区中的氨基酸位置231至238内的一个或多个氨基酸残基，从而改变抗体固定补体的能力。这种方法进一步描述于国际公布号WO 94/29351中。在某些实施方案中，修饰本文所描述的抗体的Fc区以增加抗体介导抗体依赖性细胞毒性(ADCC)的能力和/或增加抗体对Fcγ受体的亲和力，这是通过在以下位置处使一个或多个氨基酸突变(例如，引入氨基酸取代)：238、239、248、249、252、254、255、256、258、265、267、268、269、270、272、276、278、280、283、285、286、289、290、292、293、294、295、296、298、301、303、305、307、309、312、315、320、322、324、326、327、329、330、331、333、334、335、337、338、340、360、373、376、378、382、388、389、398、414、416、419、430、434、435、437、438或439，根据如Kabat中的EU索引编号。这种方法进一步描述于国际公布号WO 00/42072中。
在某些实施方案中，本文所描述的抗体包含IgG4抗体的恒定区并且在重链的氨基酸残基228(根据如Kabat中的EU索引编号)处的丝氨酸取代脯氨酸。
已经报道具有降低的岩藻糖含量的抗体对Fc受体，诸如FcγRIIIa具有增加的亲和力。因此，在某些实施方案中，本文所描述的抗体或其抗原结合片段具有降低的岩藻糖含量或无岩藻糖含量。这类抗体可以使用本领域的技术人员所知的技术产生。举例来说，抗体可以在岩藻糖基化的能力有缺陷或缺乏的细胞中表达。在一个特定实例中，具有α1,6-岩藻糖基转移酶的两个等位基因敲除的细胞系可以用于产生具有降低的岩藻糖含量的抗体。系统(Lonza)是可以用于产生具有降低的岩藻糖含量的抗体的这种系统的一个实例。或者，具有降低的岩藻糖含量或无岩藻糖含量的抗体或抗原结合片段可以通过例如以下产生：(i)在阻止或减少岩藻糖基化的条件下培养细胞；(ii)岩藻糖的翻译后去除(例如，用岩藻糖苷酶)；(iii)所需碳水化合物的翻译后添加，例如，在非糖基化糖蛋白的重组表达之后；或(iv)糖蛋白的纯化以选择非岩藻糖基化的抗体或其抗原结合片段。对于产生无岩藻糖含量或具有降低的岩藻糖含量的抗体或其抗原结合片段的方法，参看例如Longmore GD和Schachter H(1982)《碳水化合物研究(Carbohydr Res)》100:365-92以及Imai-Nishiya H等,(2007)《BMC生物技术(BMC Biotechnol)》.7:84。
在某些实施方案中，本文所描述的抗体或其抗原结合片段对CD32B(也称为FcγRIIB或FCGR2B)具有增加的亲和力，例如，如与具有野生型Fc区，例如IgG1Fc的抗体相比。在某些实施方案中，本文所描述的抗体或其抗原结合片段对CD32B(FcγRIIB)具有超过CD32A(FcγRIIA)与CD16(FcγRIIIA)选择性增加的亲和力。引起对CD32B的亲和力增加的序列变异提供于例如Mimoto等,《蛋白质工程、设计和选择(Protein Engineering,Design&Selection)》10:589-598(2013)，Chu等,《分子免疫学(Molecular Immunology)》45:3926-3933(2008)，以及Strohl,《当代生物学观点(Current Opinion in Biology)》20:685-691(2009)中，其各自以全文引用的方式并入本文中。在一些实施方案中，对CD32B具有增加的亲和力的抗体或抗原结合片段包含有包含选自由以下组成的群组的突变的重链恒定区(例如，IgG1恒定区)或其片段：G236D、P238D、S239D、S267E、L328F、L328E、在位置236之后插入的精氨酸以及其组合，根据EU索引编号(Kabat等,《引起免疫学关注的蛋白质的序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest)》,美国卫生与公众服务部(U.S.Department of Health and Human Services),Bethesda(1991))。在一些实施方案中，对CD32B具有增加的亲和力的抗体或抗原结合片段包含有包含S267E和L328F取代的重链恒定区(例如，IgG1恒定区)或其片段。在一些实施方案中，对CD32B具有增加的亲和力的抗体或抗原结合片段包含有包含P238D和L328E取代的重链恒定区(例如，IgG1恒定区)或其片段。在一些实施方案中，对CD32B具有增加的亲和力的抗体或抗原结合片段包含有包含P238D取代和选自由E233D、G237D、H268D、P271G、A330R以及其组合组成的群组的取代的重链恒定区(例如，IgG1恒定区)或其片段。在一些实施方案中，对CD32B具有增加的亲和力的抗体或抗原结合片段包含有包含P238D、E233D、G237D、H268D、P271G以及A330R取代的重链恒定区(例如，IgG1恒定区)或其片段。在一些实施方案中，对CD32B具有增加的亲和力的抗体或抗原结合片段包含有包含G236D和S267E的重链恒定区(例如，IgG1恒定区)或其片段。在一些实施方案中，对CD32B具有增加的亲和力的抗体或抗原结合片段包含有包含S239D和S267E的重链恒定区(例如，IgG1恒定区)或其片段。在一些实施方案中，对CD32B具有增加的亲和力的抗体或抗原结合片段包含有包含S267E和L328F的重链恒定区(例如，IgG1恒定区)或其片段。在一些实施方案中，对CD32B具有增加的亲和力的抗体或抗原结合片段包含有包含在位置236之后插入的精氨酸和L328R的重链恒定区(例如，IgG1恒定区)或其片段。
在另一个特定实施方案中，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体包含轻链和重链，其中(i)轻链包含有包含具有Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、Hum231#1、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2以及VLCDR3(例如，表1中所列的那些)的VL域；(ii)重链包含有包含具有Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、Hum231#1、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者的氨基酸序列的VH CDR1、VHCDR2以及VH CDR3(例如，表2中所列的那些)的VH域；(iii)轻链进一步包含有包含人类κ轻链的恒定域的氨基酸序列的恒定轻链域；以及(iv)重链进一步包含有包含人类IgG1(任选地是IgG1(同种异型Glm3))重链的恒定域的氨基酸序列的恒定重链域。
在另一个特定实施方案中，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体包含轻链和重链，其中(i)轻链包含有包含抗体Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、Hum231#1、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:202、204、205、207、208或400-518或SEQ ID NO:519)的VL域；(ii)重链包含有包含抗体Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、Hum231#1、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者的氨基酸序列(例如，SEQID NO:201、203、206或215-389)的VH域；(iii)轻链进一步包含有包含人类κ轻链的恒定域的氨基酸序列的恒定域；以及(iv)重链进一步包含有包含人类IgG1(任选地是IgG1(同种异型Glm3))重链的恒定域的氨基酸序列的恒定域。
在另一个特定实施方案中，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体包含轻链和重链，其中(i)轻链包含有包含Hum231#1或Hum231#2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:207或208)的VL域；(ii)重链包含有包含Hum231#1或Hum231#2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:206)的VH域；(iii)轻链进一步包含有包含人类κ轻链的恒定域的氨基酸序列的恒定域；以及(iv)重链进一步包含有包含人类IgG1(任选地是IgG1(同种异型Glm3))重链的恒定域的氨基酸序列的恒定域。
在另一个特定实施方案中，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体包含轻链和重链，其中(i)轻链包含有包含具有本文所描述的抗体，例如Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、Hum231#1、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3(例如，表1中所列的那些)的VL域；(ii)重链包含有包含具有本文所描述的抗体，例如Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、Hum231#1、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3(例如，表2中所列的那些)的VH域；(iii)轻链进一步包含有包含人类IgG4的恒定域的氨基酸序列的恒定轻链域；以及(iv)重链进一步包含有包含人类IgG4重链的恒定域的氨基酸序列的恒定重链域。
在另一个特定实施方案中，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体包含轻链和重链，其中(i)轻链包含有包含本文所描述的抗体，例如Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、Hum231#1、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者的氨基酸序列(例如，SEQID NO:202、204、205、207、208或400-518或SEQ ID NO:519)的VL域；(ii)重链包含有包含本文所描述的抗体，例如Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、Hum231#1、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:201、203、206或215-389)的VH域；(iii)轻链进一步包含有包含人类IgG4轻链的恒定域的氨基酸序列的恒定域；以及(iv)重链进一步包含有包含人类IgG4重链的恒定域的氨基酸序列的恒定域。
在另一个特定实施方案中，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体包含轻链和重链，其中(i)轻链包含有包含Hum231#1或Hum231#2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:207或208)的VL域；(ii)重链包含有包含Hum231#1或Hum231#2的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:206)的VH域；(iii)轻链进一步包含有包含人类IgG4轻链的恒定域的氨基酸序列的恒定域；以及(iv)重链进一步包含有包含人类IgG4重链的恒定域的氨基酸序列的恒定域。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体包含(a)包含选自由SEQ ID NO:553、554以及567至570组成的群组的氨基酸序列的重链；以及(b)包含选自由SEQ ID NO:555、556以及571至576组成的群组的氨基酸序列的轻链。在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体包含(a)包含选自由SEQ ID NO:581或582组成的群组的氨基酸序列的重链；以及(b)包含SEQID NO:576的氨基酸序列的轻链。在另一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体包含(a)包含SEQ ID NO:553的氨基酸序列的重链；以及(b)包含SEQ ID NO:556的氨基酸序列的轻链。在另一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体包含(a)包含SEQ ID NO:554的氨基酸序列的重链；以及(b)包含SEQ ID NO:556的氨基酸序列的轻链。在另一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体包含(a)包含SEQ ID NO:581的氨基酸序列的重链；以及(b)包含SEQ ID NO:556的氨基酸序列的轻链。在另一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体包含(a)包含SEQ ID NO:582的氨基酸序列的重链；以及(b)包含SEQ ID NO:556的氨基酸序列的轻链。在另一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体包含(a)包含SEQ ID NO:553的氨基酸序列的重链；以及(b)包含SEQ ID NO:555的氨基酸序列的轻链。在另一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体包含(a)包含SEQID NO:554的氨基酸序列的重链；以及(b)包含SEQ ID NO:555的氨基酸序列的轻链。在另一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体包含(a)包含SEQ ID NO:567的氨基酸序列的重链；以及(b)包含SEQ ID NO:573的氨基酸序列的轻链。在另一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体包含(a)包含SEQ ID NO:567的氨基酸序列的重链；以及(b)包含SEQ ID NO:576的氨基酸序列的轻链。在另一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体包含(a)包含SEQ ID NO:554的氨基酸序列的重链；以及(b)包含SEQ ID NO:576的氨基酸序列的轻链。在另一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体包含(a)包含SEQ ID NO:581的氨基酸序列的重链；以及(b)包含SEQ ID NO:576的氨基酸序列的轻链。在另一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体包含(a)包含SEQ ID NO:582的氨基酸序列的重链；以及(b)包含SEQ IDNO:576的氨基酸序列的轻链。
在另一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体包含(a)包含在氨基酸位置298处具有N至A或Q的氨基酸取代的SEQ ID NO:553的氨基酸序列的重链；以及(b)包含选自由SEQ ID NO:555、556以及571至576组成的群组的氨基酸序列的轻链。在另一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体包含(a)包含在氨基酸位置298处具有N至A或Q的氨基酸取代的SEQ ID NO:553的氨基酸序列的重链；以及(b)包含SEQ ID NO:556的氨基酸序列的轻链。在另一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所提供的抗体包含(a)包含在氨基酸位置298处具有N至A或Q的氨基酸取代的SEQ ID NO:553的氨基酸序列的重链；以及(b)包含SEQ ID NO:555的氨基酸序列的轻链。
在某些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含具有本文中对于本文所描述的抗体，例如Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者所描述的氨基酸序列的一个、两个、三个或四个VL构架区(FR)(例如，参看表3)。在一些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含具有本文中对于本文所描述的抗体，例如Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者所描述的氨基酸序列的一个、两个、三个或四个VH构架区(FR)(例如，参看表4)。在某些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含本文所描述的抗体(例如，Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161)之一的FR中的一者、两者、三者、四者、五者、六者、七者或八者。在特定实施方案中，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含作为人类构架区或来源于人类构架区的构架区(例如，VL域和/或VH域的构架区)。人类构架区的非限制性实例在本领域中描述，例如，参看Kabat EA等,(1991)同上。在某个实施方案中，本文所描述的抗体包含作为灵长类动物(例如，非人类灵长类动物)构架区或来源于灵长类动物(例如，非人类灵长类动物)构架区的构架区(例如，VL域和/或VH域的构架区)。
举例来说，将来自通常具有啮齿动物来源(例如，小鼠或大鼠)的抗原特异性非人类抗体的CDR移植至同源人类或非人类灵长类动物接受体构架上。在一个实施方案中，非人类灵长类动物接受体构架来自旧世界猿。在一个特定实施方案中，旧世界猿接受体构架来自黑猩猩(Pan troglodytes)、倭黑猩猩(Pan paniscus)或大猩猩(Gorilla gorilla)。在一个特定实施方案中，非人类灵长类动物接受体构架来自黑猩猩属黑猩猩。在一个特定实施方案中，非人类灵长类动物接受体构架是旧世界猴接受体构架。在一个特定实施方案中，旧世界猴接受体构架来自猕猴属(Macaca)。在某个实施方案中，非人类灵长类动物接受体构架来源于猕猴属食蟹猴(Macaca cynomolgus)。非人类灵长类动物构架序列描述于美国专利申请公布号US 2005/0208625中。
在某些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含具有本文中对于表3(同上)中所陈列的抗体中的任一者所描述的氨基酸序列的一个、两个或更多个VL构架区(FR)。在一些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含具有本文中对于表4(同上)中所陈列的抗体中的任一者所描述的氨基酸序列的一个、两个或更多个VH构架区(FR)。在特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含具有本文中对于表3(同上)中所陈列的抗体中的任一者所描述的氨基酸序列的一个、两个或更多个VL构架区和具有本文中对于表4(同上)中所陈列的抗体所描述的氨基酸序列的一个、两个或更多个VH构架区。
在某些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含具有选自由SEQ ID NO:202、207、208、400-411、413-416、418-421、423-448、450-452、454-464、467-477、481-486、488-513或515-518组成的群组的氨基酸序列的VL域的构架区和/或具有选自由SEQ ID NO:201、206、215、217-234、236-256、258、259、261-265、267、268、271-273、276、277、280、281、283-285、287、288、290、291、294、296-299、301、304-306、308、313-316、319、320、322-325、327、328、333、336、338-340、342、343、345、350、354-356、358-360、362-368、380、384或387组成的群组的氨基酸序列的VH域的构架区。在某些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含具有选自由SEQ ID NO:202、207、208、400-411、413-416、418-421、423-448、450-464、467-477、481-486、488-513或515-519组成的群组的氨基酸序列的VL域的构架区和/或具有选自由SEQ ID NO:201、206、215、217-234、236-256、258、259、261-265、267、268、270-273、276、277、280、281、283-285、287、288、290、291、294、296-299、301、304-306、308、313-316、319、320、322-325、327、328、333、336、338-340、342、343、345、350、354-356、358-360或362-368组成的群组的氨基酸序列的VH域的构架区。在一些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含具有本文所描述的抗体，例如Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107中的任一者的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:202、207、208、400-411、413-416、418-421、423-448、450-452、454-464、467-477、481-486、488-513或515-518)并且具有1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或更多个氨基酸突变(例如，氨基酸取代，诸如保守氨基酸取代)的VL域的一个、两个、三个或四个构架区和/或具有本文所描述的抗体，例如Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107中的任一者的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:201、206、215、217-234、236-256、258、259、261-265、267、268、271-273、276、277、280、281、283-285、287、288、290、291、294、296-299、301、304-306、308、313-316、319、320、322-325、327、328、333、336、338-340、342、343、345、350、354-356、358-360、362-368、380、384或387)的VH域的构架区。在一些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含具有本文所描述的抗体，例如Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:202、207、208、400-411、413-416、418-421、423-448、450-464、467-477、481-486、488-513或515-519)并且具有1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或更多个氨基酸突变(例如，氨基酸取代，诸如保守氨基酸取代)的VL域的一个、两个、三个或四个构架区和/或具有本文所描述的抗体，例如Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:201、206、215、217-234、236-256、258、259、261-265、267、268、270-273、276、277、280、281、283-285、287、288、290、291、294、296-299、301、304-306、308、313-316、319、320、322-325、327、328、333、336、338-340、342、343、345、350、354-356、358-360或362-368)的VH域的构架区。在某些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含具有本文所描述的抗体，例如Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160、pab2161中的任一者的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:201、203、206或215-389)并且具有1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或更多个氨基酸突变(例如，氨基酸取代，诸如保守氨基酸取代)的VH域的一个、两个、三个或四个构架区和/或具有本文所描述的抗体，例如Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:201、203、206或215-389)的VL域的构架区。在一些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含具有本文所描述的抗体，例如Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107中的任一者的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:202、207、208、400-411、413-416、418-421、423-448、450-452、454-464、467-477、481-486、488-513或515-518)并且具有1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或更多个氨基酸突变(例如，氨基酸取代，诸如保守氨基酸取代)的VL域的一个、两个、三个或四个构架区和/或具有SEQ ID NO:201、203、206或215-389的氨基酸序列并且具有1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或更多个氨基酸突变(例如，氨基酸取代，诸如保守氨基酸取代)的VH域的一个、两个、三个或四个构架区。在一些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含具有本文所描述的抗体，例如Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:202、207、208、400-411、413-416、418-421、423-448、450-464、467-477、481-486、488-513或515-519)并且具有1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或更多个氨基酸突变(例如，氨基酸取代，诸如保守氨基酸取代)的VL域的一个、两个、三个或四个构架区和/或具有SEQ ID NO:201、203、206或215-389的氨基酸序列并且具有1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或更多个氨基酸突变(例如，氨基酸取代，诸如保守氨基酸取代)的VH域的一个、两个、三个或四个构架区。
在某些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含与表3(同上)中的本文所描述的VL构架区具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列一致性的VL构架区(FR)。在某些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含与表4(同上)中的本文所描述的VH构架区具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列一致性的VH构架区(FR)。在一些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含与表4(同上)中的本文所描述的VH构架区具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列一致性的VH构架区(FR)和与表3(同上)中的本文所描述的VL构架区具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列一致性的VL构架区(FR)。
在某些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含与本文中对于抗体Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161(例如，如表3中所陈列)所描述的VL构架区具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列一致性的VL构架区(FR)。在一些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含与本文中对于抗体Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161(例如，如表4中所陈列)所描述的VH构架区具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列一致性的VH构架区(FR)。在某些实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段包含：(i)与本文中对于Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161(例如，如表3中所陈列)所描述的VL构架区具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列一致性的VL构架区(FR)；以及(ii)与本文中对于Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161(例如，如表4中所陈列)所描述的VH构架区具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列一致性的VH构架区(FR)。
两个序列(例如，氨基酸序列或核酸序列)之间的一致性百分比的确定还可以使用数学算法实现。用于比较两个序列的数学算法的一个特定非限制性实例是Karlin S和Altschul SF(1990)《美国国家科学院院刊(PNAS)》87:2264-2268的算法，如Karlin S和Altschul SF(1993)《美国国家科学院院刊(PNAS)》90:5873-5877中所修改。这种算法并入Altschul SF等,(1990)《分子生物学杂志(J Mol Biol)》215:403的NBLAST和XBLAST程序中。BLAST核苷酸搜索可以用NBLAST核苷酸程序参数组(例如，对于得分＝100，字长＝12)进行以获得与本文所描述的核酸分子同源的核苷酸序列。BLAST蛋白质搜索可以用XBLAST程序参数组(例如，对于得分50，字长＝3)进行以获得与本文所描述的蛋白质分子同源的氨基酸序列。为了获得用于比较目的的空位比对，空位BLAST可以如Altschul SF等,(1997)《核酸研究(Nuc Acids Res)》25:3389 3402中所描述而利用。或者，PSI BLAST可以用于进行迭代搜索，其检测分子之间的远缘关系(同上)。当利用BLAST、空位BLAST以及PSI Blast程序时，可以使用相应的程序(例如，XBLAST和NBLAST)的默认参数(参看例如万维网ncbi.nlm.nih.gov上的国家生物技术信息中心(National Center for BiotechnologyInformation)(NCBI))。用于比较序列的数学算法的另一个特定非限制性实例是Myers和Miller,1988,《计算机在生物科学中的应用(CABIOS)》4:11 17的算法。这种算法并入ALIGN程序(版本2.0)中，其为GCG序列比对软件包的一部分。当利用ALIGN程序用于比较氨基酸序列时，可以使用PAM120权重残差表、空位长度罚分12以及空位罚分4。
两个序列之间的一致性百分比可以使用类似于上文所描述的那些的技术在允许或不允许空位的情况下确定。在计算一致性百分比中，通常仅对精确匹配计数。
在某些实施方案中，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含与抗体Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、Hum231#1、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者的VL域的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:202、204、205、207、208或400-518或SEQ ID NO:519)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列一致性的VL域。在某些实施方案中，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含与抗体Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、Hum231#1、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者的VL域的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:202、204、205、207、208或400-518或SEQ ID NO:519)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列一致性的VL域，其中抗体或抗原结合片段包含与表1和/或表2中所陈列的抗体的CDR(例如，VL CDR)一致的CDR(例如，VL CDR)(例如，CDR与由表1和/或2中的名称提及的特定抗体的CDR一致)。
在某些实施方案中，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含与选自由SEQ ID NO:202、204、205、207、208以及400-518组成的群组的构架区的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列一致性的VL构架区的VL域。在某些实施方案中，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含与SEQ ID NO:519的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列一致性的VL构架区的VL域。在一个特定实施方案中，抗体包含与表1中所陈列的抗体的VL CDR(例如，表1的一行中的VL CDR)一致的VL CDR。
在某些实施方案中，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含与SEQ ID NO:201、203、206或215-389的VH域的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列一致性的VH域。在某些实施方案中，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含与SEQ ID NO:201、203、206或215-389的VH域的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列一致性的VH域，其中抗体或抗原结合片段包含与表1和/或表2中所陈列的抗体的CDR(例如，VL CDR)一致的CDR(例如，VL CDR)(例如，CDR与由表1和/或2中的名称提及的特定命名抗体的CDR一致)。
在某些实施方案中，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含与选自由SEQ ID NO:201、203、206以及215-389组成的群组的构架区的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列一致性的VH构架区的VH域。在一个特定实施方案中，抗体包含与表2中所陈列的抗体的VH CDR(例如，表2的一行中的VH CDR)一致的VH CDR。
在某些实施方案中，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含：(i)与选自由SEQ ID NO:202、204、205、207、208以及400-518组成的群组的VL域的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列一致性的VL域；以及(ii)与SEQ ID NO:201、203、206或215-389的VH域的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列一致性的VL域。在某些实施方案中，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含：(i)与SEQ ID NO:519的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列一致性的VL域；以及(ii)与SEQ ID NO:304的VH域的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列一致性的VL域。在某些实施方案中，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含：(i)与选自由SEQ ID NO:202、204、205、207、208以及400-518组成的群组的VL域的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列一致性的VL域；以及(ii)与选自SEQ ID NO:201、203、206以及215-389的群组的VH域的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列一致性的VH域，其中抗体或抗原结合片段包含与表1和/或表2中所陈列的抗体的CDR(例如，VL CDR)一致的CDR(例如，VL CDR)(例如，CDR与由表1和/或2中的名称提及的特定抗体的CDR一致)。在某些实施方案中，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含：(i)与SEQ ID NO:519的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列一致性的VL域；以及(ii)与SEQ ID NO:304的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列一致性的VH域，其中抗体或抗原结合片段包含与表1和/或表2中所陈列的抗体的CDR(例如，VL CDR)一致的CDR(例如，VL CDR)(例如，CDR与由表1和/或2中的名称提及的特定抗体的CDR一致)。
在某些实施方案中，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含：(i)包含与选自由SEQ ID NO:202、204、205、207以及208组成的群组的构架区的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列一致性的VL构架区的VL域；以及(ii)包含与选自由SEQ ID NO:201、203、206以及215-389组成的群组的构架区的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列一致性的VH构架区的VH域。在一个特定实施方案中，抗体包含与表3中所陈列的抗体的VL CDR一致的VL CDR和/或与表4中所陈列的抗体的VH CDR一致的VH CDR。
在某些实施方案中，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含与选自SEQ ID NO:201、203、206以及215-389的群组的VH域的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列一致性的VH域。在某些实施方案中，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含与选自SEQ ID NO:201、203、206以及215-389的群组的VH域的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列一致性的VH域，其中抗体或抗原结合片段包含与表1和/或表2中所陈列的抗体的CDR(例如，VL CDR)一致的CDR(例如，VL CDR)(例如，CDR与表1和/或2中所提及的特定抗体的CDR一致)。
在某些实施方案中，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段包含有包含与选自由SEQ ID NO:201、203、206以及215-389组成的群组的构架区的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列一致性的VH构架区的VH域。在一个特定实施方案中，抗体包含与表2中所陈列的抗体的VH CDR(例如，表2的一行中的VH CDR)一致的VH CDR。
在另一个方面，本文提供了与本文所描述的抗体(例如，抗体Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107)或抗体pab2159、pab2160、pab2161或Hum231#2w结合GITR的相同或重叠表位(例如，人类GITR的表位)的抗体。在某些实施方案中，抗体的表位可以通过例如NMR光谱法、X射线衍射结晶学研究、ELISA试验、与质谱法(例如，液相色谱电喷雾质谱法)相结合的氢/氘交换、基于阵列的寡肽扫描试验和/或诱变定位(例如，定点诱变定位)确定。对于X射线结晶学，可以使用本领域中的已知方法中的任一者实现结晶(例如，GiegéR等,(1994)《结晶学报D辑：生物结晶学(Acta Crystallogr D Biol Crystallogr)》50(第4部分):339-350；McPherson A(1990)《欧洲生物化学杂志(Eur J Biochem)》189:1-23；Chayen NE(1997)《结构(Structure)》5:1269-1274；McPherson A(1976)《生物化学杂志(J Biol Chem)》251:6300-6303)。抗体:抗原晶体可以使用所熟知的X射线衍射技术来研究并且可以使用计算机软件细化，诸如X-PLOR(Yale University,1992,由Molecular Simulations,Inc.经销；参看例如《酶学方法(Meth Enzymol)》(1985)第114和115卷,Wyckoff HW等编；美国专利申请号2004/0014194)和BUSTER(Bricogne G(1993)《结晶学报D辑：生物结晶学(ActaCrystallogr D Biol Crystallogr)》49(第1部分):37-60；Bricogne G(1997)《酶学方法(Meth Enzymol)》276A:361-423,Carter CW编；Roversi P等,(2000)《结晶学报D辑：生物结晶学(Acta Crystallogr D Biol Crystallogr)》56(第10部分):1316-1323)。诱变定位研究可以使用本领域的技术人员所知的任何方法实现。对于诱变技术，包括丙氨酸扫描诱变技术的描述，参看例如Champe M等,(1995)同上，以及Cunningham BC和Wells JA(1989)同上。在一个特定实施方案中，抗体或其抗原结合片段的表位使用丙氨酸扫描诱变研究来确定，诸如下文的章节6中所描述。另外，识别并结合至GITR(例如，人类GITR)的相同或重叠表位的抗体可以使用常规技术，诸如免疫试验来鉴别，例如，通过显示一种抗体阻断另一种抗体与靶抗原结合的能力，即，竞争结合试验。竞争结合试验还可以用于确定两种抗体对表位是否具有类似的结合特异性。竞争结合可以在测试下的免疫球蛋白抑制参考抗体与通用抗原(诸如GITR)的特异性结合的试验中确定。众多类型的竞争结合试验是已知的，例如：固相直接或间接放射免疫试验(RIA)、固相直接或间接酶免疫试验(EIA)、夹心竞争试验(参看Stahli C等,(1983)《酶学方法(Methods Enzymol)》9:242-253)；固相直接生物素-亲和素EIA(参看Kirkland TN等,(1986)《免疫学杂志(J Immunol)》137:3614-9)；固相直接标记试验、固相直接标记夹心试验(参看Harlow E和Lane D,(1988)《抗体：实验室手册(Antibodies:A Laboratory Manual)》,Cold Spring Harbor Press)；使用I-125标记的固相直接标记RIA(参看Morel GA等,(1988)《分子免疫学(Mol Immunol)》25(1):7-15)；固相直接生物素-亲和素EIA(Cheung RC等,(1990)《病毒学(Virology)》176:546-52)；以及直接标记RIA(Moldenhauer G等,(1990)《斯堪的纳维亚免疫学杂志(Scand J Immunol)》32:77-82)。通常，这种试验涉及使用结合至固体表面的纯化抗原(例如，GITR，诸如人类GITR)或带有这些中的任一者的细胞、未标记的测试免疫球蛋白以及标记的参考免疫球蛋白。竞争抑制可以通过测定在测试免疫球蛋白存在下结合至固体表面或细胞的标记的量来测量。通常，测试免疫球蛋白过量存在。通常，当竞争抗体过量存在时，其将使参考抗体与通用抗原的特异性结合抑制至少50-55％、55-60％、60-65％、65-70％、70-75％或更高。竞争结合试验可以按大量不同的格局使用标记的抗原或标记的抗体配置。在这种试验的一个通用型式中，将抗原固定于96孔板上。然后使用放射性或酶标记测量未标记的抗体阻断标记的抗体与抗原结合的能力。对于进一步细节，参看例如Wagener C等,(1983)《免疫学杂志(JImmunol)》130:2308-2315；Wagener C等,(1984)《免疫学方法杂志(J Immunol Methods)》68:269-274；Kuroki M等,(1990)《癌症研究(Cancer Res)》50:4872-4879；Kuroki M等,(1992)《免疫学研究(Immunol Invest)》21:523-538；Kuroki M等,(1992)《杂交瘤(Hybridoma)》11:391-407；以及《抗体：实验室手册(Antibodies:A Laboratory Manual)》,Harlow E和Lane D编辑编同上,第386-389页。
在一个实施方案中，竞争试验使用表面等离子体共振进行，例如，通过诸如由Abdiche YN等,(2009)《分析生物化学(Analytical Biochem)》386:172-180描述的‘串联方法’，借此将GITR抗原固定于芯片表面(例如，CM5传感器芯片)上并且然后使抗GITR抗体遍布芯片。为了确定抗体是否与本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段竞争，首先使抗GITR抗体遍布芯片表面以达到饱和并且然后添加潜在的竞争抗体。然后可以测定竞争抗体的结合并且相对于非竞争对照定量。
在某些方面，竞争结合试验可以用于确定抗体是否例如以剂量依赖性方式被另一种抗体竞争性地阻断，例如，当两种抗体在竞争结合试验，诸如竞争ELISA试验中识别一致或空间上重叠的表位时，抗体与参考抗体结合基本上相同的表位或重叠表位，这些试验可以按许多不同的格局使用标记的抗原或标记的抗体配置。在一个特定实施方案中，抗体可以在竞争结合试验中用本文所描述的抗体(例如，抗体Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160、pab2161或Hum231#2w)或其嵌合或Fab抗体，或包含本文所描述的抗体(例如，Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160、pab2161或Hum231#2w)的VH CDR和VL CDR的抗体测试。
在另一个方面，本文提供了与本文所描述的抗体(例如，Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107)或抗体pab2159、pab2160、pab2161或Hum231#2w竞争(例如，以剂量依赖性方式)结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体，如使用本领域的技术人员所知或本文所描述的试验(例如，ELISA竞争试验或表面等离子体共振)确定。在另一个方面，本文提供了竞争性地抑制(例如，以剂量依赖性方式)本文所描述的抗体(例如，Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160、pab2161或Hum231#2w)结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体，如使用本领域的技术人员所知或本文所描述的试验(例如，ELISA竞争试验，或下文的实施例6中所描述的悬浮阵列或表面等离子体共振试验)确定。在特定实施方案中，这样竞争性地阻断抗体活化、诱导或增强一种或多种GITR活性。在特定方面，本文提供了一种与包含本文所描述的氨基酸序列(例如，抗体Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161或Hum231#2w的VL和/或VH氨基酸序列)的抗体竞争(例如，以剂量依赖性方式)特异性结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体，如使用本领域的技术人员所知或本文所描述的试验(例如，ELISA竞争试验，或下文的实施例6中所描述的悬浮阵列或表面等离子体共振试验)确定。
在某些实施方案中，本文提供了一种与本文所描述的抗体竞争结合至GITR(例如，人类GITR)达到本文所描述的抗体自竞争结合至GITR(例如，人类GITR)的相同程度的抗体。在一些实施方案中，本文提供了一种与本文所描述的抗体竞争结合至GITR(例如，人类GITR)的第一抗体，其中第一抗体在包括以下步骤的试验中竞争结合：(a)在容器中孵育GITR转染的细胞与未标记形式的第一抗体；以及(b)将标记形式的本文所描述的抗体添加至容器中并且在容器中孵育细胞；以及(c)检测标记形式的本文所描述的抗体与细胞的结合。在某些实施方案中，本文提供了一种与本文所描述的抗体竞争结合至GITR(例如，人类GITR)的第一抗体，其中竞争如第一抗体与GITR的结合减少超过80％(例如，85％、90％、95％或98％，或介于80％至85％、80％至90％、85％至90％或85％至95％之间)所展现。
在特定方面，本文提供了一种与包含具有选自由SEQ ID 202、207、208、400-411、413-416、418-421、423-448、450-452、454-464、467-477、481-486、488-513以及515-518组成的群组的氨基酸序列的VL域和具有选自由SEQ ID NO:201、206、215、217-234、236-256、258、259、261-265、267、268、271-273、276、277、280、281、283-285、287、288、290、291、294、296-299、301、304-306、308、313-316、319、320、322-325、327、328、333、336、338-340、342、343、350、354-356、358-360、362-368、380、384以及387组成的群组的氨基酸序列的VH域的抗体竞争(例如，以剂量依赖性方式)特异性结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体。在特定方面，本文提供了一种与包含具有选自由SEQ ID 202、207、208、400-411、413-416、418-421、423-448、450-452、454-464、467-477、481-486、488-513以及515-519组成的群组的氨基酸序列的VL域和具有选自由SEQ ID NO:201、206、215、217-234、236-256、258、259、261-265、267、268、270-273、276、277、280、281、283-285、287、288、290、291、294、296-299、301、304-306、308、313-316、319、320、322-325、327、328、333、336、338-340、342、343、345、350、354-356、358-360以及362-368组成的群组的氨基酸序列的VH域的抗体竞争(例如，以剂量依赖性方式)特异性结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体。
在特定方面，本文提供了一种与包含(i)包含具有表1中所列的抗体的VL CDR的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3的VL域；以及(ii)包含具有表2中所列的抗体的CDR(例如，由表1中的名称提及的特定抗体，诸如231-32-15、Hum231#1或Hum231#2的VHCDR)的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3的VH域的抗体竞争(例如，以剂量依赖性方式)特异性结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体。
在一个特定实施方案中，本文提供了一种与包含231-32-15的VH和VL CDR(SEQ IDNO:201和202)的抗体竞争(例如，以剂量依赖性方式)特异性结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体。
在一个特定实施方案中，本文所描述的抗体是被包含具有选自由SEQ ID NO:202、207、208、400-411、413-416、418-421、423-448、450-452、454-464、467-477、481-486、488-513以及515-518组成的群组的氨基酸序列的VL域和具有选自由SEQ ID NO:201、206、215、217-234、236-256、258、259、261-265、267、268、271-273、276、277、280、281、283-285、287、288、290、291、294、296-299、301、304-306、308、313-316、319、320、322-325、327、328、333、336、338-340、342、343、345、350、354-356、358-360、362-368、380、384以及387组成的群组的氨基酸序列的VH域的抗体竞争性地阻断(例如，以剂量依赖性方式)特异性结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体。在一个特定实施方案中，本文所描述的抗体是被包含具有选自由SEQ ID NO:202、207、208、400-411、413-416、418-421、423-448、450-464、467-477、481-486、488-513以及515-519组成的群组的氨基酸序列的VL域和具有选自由SEQ ID NO:201、206、215、217-234、236-256、258、259、261-265、267、268、270-273、276、277、280、281、283-285、287、288、290、291、294、296-299、301、304-306、308、313-316、319、320、322-325、327、328、333、336、338-340、342、343、345、350、354-356、358-360以及362-368组成的群组的氨基酸序列的VH域的抗体竞争性地阻断(例如，以剂量依赖性方式)特异性结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体。
在一个实施方案中，本文所描述的抗体是被包含具有SEQ ID NO:207或208的氨基酸序列的VL域和具有SEQ ID NO:206的氨基酸序列的VH域的抗体竞争性地阻断特异性结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体。
在另一个特定实施方案中，本文所描述的抗体是被包含(i)包含具有表1中所列的抗体的CDR(例如，由表1中的名称提及的特定抗体的VL CDR)的氨基酸序列的VL CDR1、VLCDR2以及VL CDR3的VL域；以及(ii)包含具有表2中所列的抗体的CDR的氨基酸序列的VHCDR1、VH CDR2以及VH CDR3的VH域的抗体竞争性地阻断(例如，以剂量依赖性方式)的抗体。
在特定方面，本文提供了一种抗体或其抗原结合片段，其与特异性结合至GITR(例如，人类GITR)的包含本文所描述的氨基酸序列(参看例如表1-4)的抗体(例如，抗体Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160、pab2161或Hum231#2w中的任一者)免疫特异性地结合至相同表位。本领域的技术人员所知或本文所描述的试验(例如，X射线结晶学、ELISA试验等等)可以用于确定两种抗体是否结合至相同表位。
在一个特定实施方案中，本文所描述的抗体或其抗原结合片段与包含具有选自由SEQ ID NO:202、207、208、400-411、413-416、418-421、423-448、450-452、454-464、467-477、481-486、488-513以及515-518组成的群组的氨基酸序列的VL域和具有选自由SEQ IDNO:201、206、215、217-234、236-256、258、259、261-265、267、268、271-273、276、277、280、281、283-285、287、288、290、291、294、296-299、301、304-306、308、313-316、319、320、322-325、327、328、333、336、338-340、342、343、345、350、354-356、358-360、362-368、380、384以及387组成的群组的氨基酸序列的VH域的抗体(例如，抗体Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107中的任一者)免疫特异性地结合至相同表位。在一个特定实施方案中，本文所描述的抗体或其抗原结合片段与包含具有选自由SEQ ID NO:202、207、208、400-411、413-416、418-421、423-448、450-464、467-477、481-486、488-513以及515-519组成的群组的氨基酸序列的VL域和具有选自由SEQ ID NO:201、206、215、217-234、236-256、258、259、261-265、267、268、270-273、276、277、280、281、283-285、287、288、290、291、294、296-299、301、304-306、308、313-316、319、320、322-325、327、328、333、336、338-340、342、343、345、350、354-356、358-360以及362-368组成的群组的氨基酸序列的VH域的抗体(例如，抗体Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160、pab2161或Hum231#2w中的任一者)免疫特异性地结合至相同表位。
在一个特定实施方案中，本文所描述的抗体或其抗原结合片段免疫特异性地结合至与由包含抗体Hum231#1或Hum231#2的VH域和VL域(分别是SEQ ID NO:206和207或SEQ IDNO:206和208)的抗体结合的表位相同的表位，或与包含抗体Hum231#1或Hum231#2的VH域和VL域(分别是SEQ ID NO:206和207或SEQ ID NO:206和208)的抗体的表位重叠的表位。
在另一个特定实施方案中，本文所描述的抗体或其抗原结合片段与包含(i)包含具有表1中所列的抗体的CDR(例如，由表1中的名称提及的特定抗体的VL CDR)的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3的VL域以及(ii)包含具有表2中所列的抗体的CDR(例如，由表2中的名称提及的特定抗体的VH CDR)的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2以及VHCDR3的VH域的抗体免疫特异性地结合至相同表位。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)并且竞争性地阻断(例如，以剂量依赖性方式)抗体231-32-15、Hum231#1、Hum231#2或Hum231#2w结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中
(i)VL包含：
(a)包含氨基酸序列KSSQSX1X2X3X4X5X6X7KX8YLX9(SEQ ID NO:4)的VL CDR1，其中：
X1是L、A、V、I、P、F或M
X2是L、A、V、I、P、F、M或S
X3是N、G、Q、S、T、C、W、Y或A
X4是S、G、N、Q、T、C、W、Y或A
X5是G、N、Q、S、T、C、W、Y或A
X6是N、G、Q、S、T、C、W、Y或A
X7是Q、G、N、S、T、C、W、Y或A
X8是N、G、Q、S、T、C、W、Y或A
X9是T、G、N、Q、S、C、W、Y、V、I或A；和/或
(b)包含氨基酸序列X1ASTRX2X3(SEQ ID NO:5)的VL CDR2，其中：
X1是W、G、N、Q、S、T、C、Y、F、H或A
X2是E、D或A
X3是S、G、N、Q、T、C、W、Y或A；和/或
(c)包含氨基酸序列QX1X2YX3X4PYT(SEQ ID NO:6)的VL CDR3，其中：
X1是N、G、Q、S、T、C、W或Y
X2是D、E或Y
X3是S、G、N、Q、T、C、W、Y或A
X4是Y、G、N、Q、S、T、C、W、F、H、L或A；以及(ii)VH包含：
(a)包含氨基酸序列X1YX2MX3(SEQ ID NO:1)的VH CDR1，其中
X1是D、E、G或A
X2是A、V、L、I、P、F、M或Y
X3是Y、G、N、Q、S、T、C、W、F或H；和/或
(b)包含氨基酸序列X1IX2X3X4SGX5X6X7YX8QKFX9X10(SEQ ID NO:2)的VH CDR2，其中
X1是V、A、L、I、P、F、M或T
X2是R、K、H、Q或A
X3是T、G、N、Q、S、C、W、Y、V、I或P
X4是Y、G、N、Q、S、T、C、W、F、H或A
X5是D、E、G或A
X6是V、A、L、I、P、F、M或T
X7是T、G、N、Q、S、C、W、Y、V、I、P或A
X8是N、G、Q、S、T、C、W、Y或A
X9是K、R、H、Q或A
X10是D、E、G或A；和/或
(c)包含氨基酸序列SGTVRGX1X2X3(SEQ ID NO:3)的VH CDR3，其中
X1是F、A、V、L、I、P、M、Y、W、H或S
X2是A或D
X3是Y、G、N、Q、S、T、C、W、F、H或V。
在一个特定实施方案中，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)并且竞争性地阻断(例如，以剂量依赖性方式)抗体231-32-15、Hum231#1、Hum231#2或Hum231#2w结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中
(i)VL包含：
(a)包含氨基酸序列KSSQSLLNSX1NQKNYLX2(SEQ ID NO:10)的VL CDR1，其中
X1是G或S
X2是T或S；和/或
(b)包含氨基酸序列WASTRES(SEQ ID NO:11)的VL CDR2；和/或
(c)包含氨基酸序列QNX1YSX2PYT(SEQ ID NO:12)的VL CDR3，其中
X1是D或E
X2是Y、F或S；以及(ii)VH包含：
(a)包含氨基酸序列X1YX2MX3(SEQ ID NO:7)的VH CDR1，其中
X1是D、E或G
X2是A或V
X3是Y或H；和/或
(b)包含氨基酸序列X1IX2TX3SGX4X5X6YNQKFX7X8(SEQ ID NO:8)的VH CDR2，其中
X1是V或L
X2是R、K或Q
X3是Y或F
X4是D、E或G
X5是V或L
X6是T或S
X7是K、R或Q
X8是D、E或G；和/或
(c)包含氨基酸序列SGTVRGFAY(SEQ ID NO:9)的VH CDR3。
在一些实施方案中，如通过本领域的技术人员所知或本文所描述的试验评估，与结合GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体竞争结合或结合至本文所描述的抗体(例如，Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160、pab2161或Hum231#2w)的相同或重叠表位的抗体使GITRL(例如，人类GITRL)与GITR(例如，人类GITR)的结合受阻小于85％、80％、75％、70％、65％、60％、55％、50％、45％、40％、35％、30％、25％、20％或10％。在一个特定实施方案中，如通过下文的实施例2(例如，下文的章节6.2.5.2或6.2.5.4)中所描述的试验评估，与本文所描述的抗体竞争结合至GITR(例如，人类GITR)或结合至本文所描述的抗体的相同表位或重叠表位的抗体或其抗原结合片段使GITRL(例如，人类GITRL)与GITR(例如，人类GITR)的结合抑制小于85％、80％、75％、70％、65％、60％、55％、50％、45％、40％、35％、30％、25％、20％或10％。在另一个特定实施方案中，相对于在悬浮阵列试验(例如，200系统)中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下1.5nM、1.4nM、1.3nM、1.2nM、1.1nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM或0.1nM标记的GITRL与每个珠粒9pg/ml、8pg/ml、7pg/ml、6pg/ml、5pg/ml、4pg/ml或3pg/ml的浓度的GITR偶合珠粒的结合，与本文所描述的抗体竞争结合至GITR(例如，人类GITR)或结合至本文所描述的抗体的相同表位或重叠表位的抗体或其抗原结合片段在1000ng/ml、950ng/ml、900ng/ml、850ng/ml、800ng/ml、750ng/ml、700ng/ml、650ng/ml、600ng/ml、550ng/ml、500ng/ml、450ng/ml、400ng/ml、350ng/ml、333ng/ml、300ng/ml、250ng/ml、200ng/ml、100ng/ml、50ng/ml或10ng/ml的浓度下使1.5nM、1.4nM、1.3nM、1.2nM、1.1nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM或0.1nM标记的GITRL(例如，GITRL-PE)与以每个珠粒9pg/ml、8pg/ml、7pg/ml、6pg/ml、5pg/ml、4pg/ml或3pg/ml的浓度偶合至珠粒的GITR(例如，偶合至珠粒的人类GITR)的结合抑制小于85％、80％、75％、70％、65％、60％、55％、50％、45％、40％、35％、30％、25％、20％或10％。在另一个特定实施方案中，相对于在悬浮阵列试验(例如，200系统)中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下1.5nM、1.4nM、1.3nM、1.2nM、1.1nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM或0.1nM标记的GITRL与每个珠粒9pg/ml、8pg/ml、7pg/ml、6pg/ml、5pg/ml、4pg/ml或3pg/ml的浓度的GITR偶合珠粒的结合，与本文所描述的抗体竞争结合至GITR(例如，人类GITR)或结合至本文所描述的抗体的相同表位或重叠表位的抗体或其抗原结合片段在1000ng/ml至750ng/ml、1000ng/ml至500ng/ml、850ng/ml至500ng/ml、750ng/ml至500ng/ml、600ng/ml至500ng/ml、500ng/ml至400ng/ml、400ng/ml至300ng/ml或300ng/ml至200ng/ml的浓度下使1.5nM、1.4nM、1.3nM、1.2nM、1.1nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM或0.1nM标记的GITRL(例如，GITRL-PE)与以每个珠粒9pg/ml、8pg/ml、7pg/ml、6pg/ml、5pg/ml、4pg/ml或3pg/ml的浓度偶合至珠粒的GITR(例如，偶合至珠粒的人类GITR)的结合抑制小于85％、80％、75％、70％、65％、60％、55％、50％、45％、40％、35％、30％、25％、20％或10％。
在另一个特定实施方案中，相对于在悬浮阵列试验(例如，200系统)中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下1.5nM、1.4nM、1.3nM、1.2nM、1.1nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM或0.1nM标记的GITRL与每个珠粒9pg/ml、8pg/ml、7pg/ml、6pg/ml、5pg/ml、4pg/ml或3pg/ml的浓度的GITR偶合珠粒的结合，与本文所描述的抗体竞争结合至GITR(例如，人类GITR)或结合至本文所描述的抗体的相同表位或重叠表位的抗体或其抗原结合片段在3500ng/ml、3400ng/ml、3300ng/ml、3200ng/ml、3100ng/ml、3000ng/ml、2900ng/ml、2800ng/ml、2700ng/ml、2600ng/ml、2500ng/ml、2400ng/ml、2300ng/ml、2200ng/ml、2100ng/ml、2000ng/ml、1900ng/ml、1800ng/ml、1700ng/ml、1600ng/ml、1500ng/ml、1400ng/ml、1300ng/ml、1200ng/ml或1100ng/ml的浓度下使1.5nM、1.4nM、1.3nM、1.2nM、1.1nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM或0.1nM标记的GITRL(例如，GITRL-PE)与以每个珠粒9pg/ml、8pg/ml、7pg/ml、6pg/ml、5pg/ml、4pg/ml或3pg/ml的浓度偶合至珠粒的GITR(例如，偶合至珠粒的人类GITR)的结合抑制小于85％、80％、75％、70％、65％、60％、55％、50％、45％、40％、35％、30％、25％、20％或10％。在另一个特定实施方案中，相对于在悬浮阵列试验(例如，200系统)中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下1.5nM、1.4nM、1.3nM、1.2nM、1.1nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM或0.1nM标记的GITRL与每个珠粒9pg/ml、8pg/ml、7pg/ml、6pg/ml、5pg/ml、4pg/ml或3pg/ml的浓度的GITR偶合珠粒的结合，与本文所描述的抗体竞争结合至GITR(例如，人类GITR)或结合至本文所描述的抗体的相同表位或重叠表位的抗体或其抗原结合片段在3500ng/ml至3200ng/ml、3500ng/ml至3000ng/ml、3200ng/ml至2500ng/ml、3000至2200ng/ml、2500ng/ml至1800ng/ml、2000ng/ml至1500ng/ml、1700ng/ml至1200ng/ml或1500ng/ml至1000ng/ml的浓度下使1.5nM、1.4nM、1.3nM、1.2nM、1.1nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM或0.1nM标记的GITRL(例如，GITRL-PE)与以每个珠粒9pg/ml、8pg/ml、7pg/ml、6pg/ml、5pg/ml、4pg/ml或3pg/ml的浓度偶合至珠粒的GITR(例如，偶合至珠粒的人类GITR)的结合抑制小于85％、80％、75％、70％、65％、60％、55％、50％、45％、40％、35％、30％、25％、20％或10％。
在某些实施方案中，相对于在悬浮阵列试验(例如，200系统)中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下0.5nM标记的GITRL与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒的结合，当GITR(例如，人类GITR)以每个珠粒5pg/ml的浓度偶合至珠粒(例如，珠粒)时，与结合GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体竞争结合或结合至本文所描述的抗体的相同或重叠表位的抗体在3000ng/ml的浓度下使0.5nM GITRL(例如，人类GITRL)与GITR(例如，人类GITR)的结合受阻小于85％或小于80％。在某些实施方案中，相对于在悬浮阵列试验(例如，200系统)中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下0.5nM标记的GITRL与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒的结合，当GITR(例如，人类GITR)以每个珠粒5pg/ml的浓度偶合至珠粒(例如，珠粒)时，与结合GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体竞争结合或结合至本文所描述的抗体的相同或重叠表位的抗体在1000ng/ml的浓度下使0.5nM GITRL(例如，人类GITRL)与GITR(例如，人类GITR)的结合受阻小于85％、小于80％或小于75％。在某些实施方案中，相对于在悬浮阵列试验(例如，200系统)中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下0.5nM标记的GITRL与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒的结合，当GITR(例如，人类GITR)以每个珠粒5pg/ml的浓度偶合至珠粒(例如，珠粒)时，与结合GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体竞争结合或结合至本文所描述的抗体的相同或重叠表位的抗体在333ng/ml的浓度下使0.5nM GITRL(例如，人类GITRL)与GITR(例如，人类GITR)的结合受阻小于70％或小于65％。在某些实施方案中，相对于在悬浮阵列试验(例如，200系统)中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下0.5nM标记的GITRL与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒的结合，当GITR(例如，人类GITR)以每个珠粒5pg/ml的浓度偶合至珠粒(例如，珠粒)时，与结合GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体竞争结合或结合至本文所描述的抗体的相同或重叠表位的抗体在111ng/ml的浓度下使0.5nMGITRL(例如，人类GITRL)与GITR(例如，人类GITR)的结合受阻小于65％、小于60％或小于55％。在某些实施方案中，相对于在悬浮阵列试验(例如，200系统)中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下0.5nM标记的GITRL与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒的结合，当GITR(例如，人类GITR)以每个珠粒5pg/ml的浓度偶合至珠粒(例如，珠粒)时，与结合GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体竞争结合或结合至本文所描述的抗体的相同或重叠表位的抗体在37ng/ml的浓度下使0.5nM GITRL(例如，人类GITRL)与GITR(例如，人类GITR)的结合受阻小于40％。在某些实施方案中，相对于在悬浮阵列试验(例如，200系统)中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下0.5nM标记的GITRL与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒的结合，当GITR(例如，人类GITR)以每个珠粒5pg/ml的浓度偶合至珠粒(例如，珠粒)时，与结合GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体竞争结合或结合至本文所描述的抗体的相同或重叠表位的抗体在12ng/ml的浓度下使0.5nM GITRL(例如，人类GITRL)与GITR(例如，人类GITR)的结合受阻小于20％。
在另一个实施方案中，一定量的标记的GITRL(例如，人类GITRL-PE)在包括以下的方法中在存在与结合至GITR的本文所描述的抗体竞争结合或结合至本文所描述的抗体的相同或重叠表位的抗体的情况下结合至偶合至珠粒的GITR(例如，偶合至珠粒的人类GITR)：(a)使GITR(例如，人类GITR)以每个珠粒5pg/ml的浓度偶合至珠粒(例如，偶合至珠粒的人类GITR)；(b)在孔中孵育40个珠粒/μl的浓度的GITR偶合珠粒与3000ng/ml、2500ng/ml、2000ng/ml、1500ng/ml、1000ng/ml、750ng/ml、500ng/ml、250ng/ml、100ng/ml、50ng/ml或10ng/ml竞争抗体或结合至相同或重叠表位的抗体，持续第一时段(例如，30分钟、60分钟、1.5小时、2小时、2.5小时或3小时)，其中孔含有700、750、800、850、900、950、1000、1100、1200、1300、1400或1500个珠粒；(c)将标记的GITRL(例如，人类GITRL-PE)添加至孔中以获得1.5nM、1.4nM、1.3nM、1.2nM、1.1nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM或0.1nM(在特定实施方案中，0.5nM)标记的GITRL和20个珠粒/μl GITR偶合珠粒的最终浓度，并且孵育持续第二时段(例如，30分钟、1小时、1.5小时、2小时、2.5小时或3小时)；以及(d)在例如悬浮阵列试验，诸如200系统中检测结合至GITR偶合珠粒的标记的GITRL。在特定实施方案中，相对于在不存在竞争抗体或结合至相同或重叠表位的抗体的情况下结合至GITR偶合珠粒的标记的GITRL的量测定在存在竞争抗体或结合至相同或重叠表位的抗体的情况下结合至GITR偶合珠粒的标记的GITRL的量。在某些实施方案中，不存在竞争抗体或结合至相同或重叠表位的抗体意指没有抗体或其抗原结合片段存在于孔中。在其它实施方案中，不存在竞争抗体或结合至相同或重叠表位的抗体意指不结合至GITR的同型对照抗体存在于孔中。根据这些实施方案，在存在竞争抗体或结合至相同或重叠表位的抗体的情况下结合至GITR偶合珠粒的标记的GITRL的量在一些实施方案中经测定是在不存在竞争抗体或结合至相同或重叠表位的抗体的情况下结合至GITR偶合珠粒的标记的GITRL的量的至少20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％或60％或20％至60％、30％至50％或20％至70％。
在某些实施方案中，通过本领域的技术人员所知或本文所描述的试验评估，在存在与本文所描述的抗体竞争结合至GITR(例如，人类GITR)或结合至本文所描述的抗体的相同表位或重叠表位的抗体或其抗原结合片段的情况下至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或75％的GITRL(例如，人类GITRL)结合至GITR(例如，人类GITR)。在一个特定实施方案中，如通过下文的实施例2(例如，下文的章节6.2.5.2或6.2.5.4)中所描述的试验评估，在存在与本文所描述的抗体竞争结合至GITR(例如，人类GITR)或结合至本文所描述的抗体的相同表位或重叠表位的抗体或其抗原结合片段的情况下至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或75％的GITRL(例如，人类GITRL)结合至GITR(例如，人类GITR)。在另一个特定实施方案中，相对于在悬浮阵列试验(例如，200系统)中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下1.5nM、1.4nM、1.3nM、1.2nM、1.1nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM或0.1nM标记的GITRL与每个珠粒9pg/ml、8pg/ml、7pg/ml、6pg/ml、5pg/ml、4pg/ml或3pg/ml的浓度的GITR偶合珠粒的结合，在存在1000ng/ml、950ng/ml、900ng/ml、850ng/ml、800ng/ml、750ng/ml、700ng/ml、650ng/ml、600ng/ml、550ng/ml、500ng/ml、450ng/ml、400ng/ml、350ng/ml、333ng/ml、300ng/ml、250ng/ml、200ng/ml、100ng/ml、50ng/ml或10ng/ml与本文所描述的抗体竞争结合至GITR(例如，人类GITR)或结合至本文所描述的抗体的相同表位或重叠表位的抗体或其抗原结合片段的情况下至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或75％的1.5nM、1.4nM、1.3nM、1.2nM、1.1nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM或0.1nM标记的GITRL(例如，标记的人类GITRL，诸如hGITRL-PE)结合至以每个珠粒9pg/ml、8pg/ml、7pg/ml、6pg/ml、5pg/ml、4pg/ml或3pg/ml的浓度偶合至珠粒的GITR(例如，偶合至珠粒的人类GITR)。在另一个特定实施方案中，相对于在悬浮阵列试验(例如，200系统)中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下1.5nM、1.4nM、1.3nM、1.2nM、1.1nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM或0.1nM标记的GITRL与每个珠粒9pg/ml、8pg/ml、7pg/ml、6pg/ml、5pg/ml、4pg/ml或3pg/ml的浓度的GITR偶合珠粒的结合，在存在3500ng/ml、3400ng/ml、3300ng/ml、3200ng/ml、3100ng/ml、3000ng/ml、2900ng/ml、2800ng/ml、2700ng/ml、2600ng/ml、2500ng/ml、2400ng/ml、2300ng/ml、2200ng/ml、2100ng/ml、2000ng/ml、1900ng/ml、1800ng/ml、1700ng/ml、1600ng/ml、1500ng/ml、1400ng/ml、1300ng/ml、1200ng/ml或1100ng/ml与本文所描述的抗体竞争结合至GITR(例如，人类GITR)或结合至本文所描述的抗体的相同表位或重叠表位的抗体或其抗原结合片段的情况下至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或75％的1.5nM、1.4nM、1.3nM、1.2nM、1.1nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM或0.1nM标记的GITRL(例如，标记的人类GITRL，诸如hGITRL-PE)结合至以每个珠粒9pg/ml、8pg/ml、7pg/ml、6pg/ml、5pg/ml、4pg/ml或3pg/ml的浓度偶合至珠粒的GITR(例如，偶合至珠粒的人类GITR)。
在某些实施方案中，相对于在悬浮阵列试验(例如，200系统)中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下0.5nM标记的GITRL与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒的结合，当GITR(例如，人类GITR)以每个珠粒5pg/ml的浓度偶合至珠粒(例如，珠粒)时，与结合GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体竞争结合或结合至本文所描述的抗体的相同或重叠表位的抗体在3000ng/ml的浓度下并不使0.5nM GITRL(例如，人类GITRL)与GITR(例如，人类GITR)的结合受阻大于15％或大于20％。在某些实施方案中，相对于在悬浮阵列试验(例如，200系统)中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下0.5nM标记的GITRL与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒的结合，当GITR(例如，人类GITR)以每个珠粒5pg/ml的浓度偶合至珠粒(例如，珠粒)时，与结合GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体竞争结合或结合至本文所描述的抗体的相同或重叠表位的抗体在1000ng/ml的浓度下并不使0.5nM GITRL(例如，人类GITRL)与GITR(例如，人类GITR)的结合受阻大于15％、大于20％或大于25％。在某些实施方案中，相对于在悬浮阵列试验(例如，200系统)中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下0.5nM标记的GITRL与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒的结合，当GITR(例如，人类GITR)以每个珠粒5pg/ml的浓度偶合至珠粒(例如，珠粒)时，与结合GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体竞争结合或结合至本文所描述的抗体的相同或重叠表位的抗体在333ng/ml的浓度下并不使0.5nM GITRL(例如，人类GITRL)与GITR(例如，人类GITR)的结合受阻大于30％或大于35％。在某些实施方案中，相对于在悬浮阵列试验(例如，200系统)中在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下0.5nM标记的GITRL与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒的结合，当GITR(例如，人类GITR)以每个珠粒5pg/ml的浓度偶合至珠粒(例如，珠粒)时，与结合GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体竞争结合或结合至本文所描述的抗体的相同或重叠表位的抗体在111ng/ml的浓度下并不使0.5nM GITRL(例如，人类GITRL)与GITR(例如，人类GITR)的结合受阻大于35％、大于40％或大于45％。在某些实施方案中，相对于在悬浮阵列试验(例如，200系统)中对于每个珠粒在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下0.5nM标记的GITRL与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒的结合，当GITR(例如，人类GITR)以5pg/ml的浓度偶合至珠粒(例如，珠粒)时，与结合GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体竞争结合或结合至本文所描述的抗体的相同或重叠表位的抗体在37ng/ml的浓度下并不使0.5nM GITRL(例如，人类GITRL)与GITR(例如，人类GITR)的结合受阻大于60％。在某些实施方案中，相对于在悬浮阵列试验(例如，200系统)中对于每个珠粒在不存在抗GITR抗体或其抗原结合片段的情况下0.5nM标记的GITRL与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒的结合，当GITR(例如，人类GITR)以5pg/ml的浓度偶合至珠粒(例如，珠粒)时，与结合GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体竞争结合或结合至本文所描述的抗体的相同或重叠表位的抗体在12ng/ml的浓度下并不使0.5nM GITRL(例如，人类GITRL)与GITR(例如，人类GITR)的结合受阻大于85％。
在某些实施方案中，本文提供了一种与结合GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体竞争结合或结合至本文所描述的抗体的相同或重叠表位的抗体，其在150nM、145nM、140nM、135nM、130nM、125nM、120nM、115nM、110nM、105nM或100nM的浓度下结合至固定于芯片(例如，CM5传感器芯片)上的GITR(例如，人类GITR)，使150nM、145nM、140nM、135nM、130nM、125nM、120nM、115nM、110nM、105nM或100nM GITRL(例如，人类GITRL的非共价连接的三聚体)与固定于芯片上的GITR的结合抑制小于60％、小于55％、小于50％、小于45％、小于40％、小于35％、小于30％、小于25％、小于20％或小于15％。在某些实施方案中，本文提供了一种与结合GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体竞争结合或结合至本文所描述的抗体的相同或重叠表位的抗体，其中在125nM的浓度下结合至固定于芯片(例如，CM5传感器芯片)上的GITR(例如，人类GITR)的竞争抗体或结合至相同或重叠表位的抗体使125nMGITRL(例如，人类GITRL的非共价连接的三聚体)与固定于芯片上的GITR的结合抑制小于60％、小于55％、小于50％、小于45％、小于40％、小于35％、小于30％、小于25％、小于20％或小于15％。
在某些实施方案中，与本文所描述的抗体竞争结合至GITR(例如，人类GITR)或结合至本文所描述的抗体的相同表位或重叠表位的抗体或其片段以8.5×10-3s-1或更小、3.5×10-3s-1或更小、5×10-3s-1或更小、2.5×10-3s-1或更小、1×10-3s-1或更小、8.5×10-4s-1或更小、5×10-4s-1或更小、3.5×10-4s-1或更小、2.5×10-4s-1或更小、1×10-4s-1或更小、8.5×10-5-s-1或更小、3.5×10-5-s-1或更小、5×10-5-s-1或更小、2.5×10-5-s-1或更小、1×10-5-s-1或更小、8.5×10-6-s-1或更小、5×10-6-s-1或更小、3.5×10-6-s-1或更小、2.5×10-6-s-1或更小、1×10-6-s-1或更小、8.5×10-7-s-1或更小、5×10-7-s-1或更小、2.5×10-7-s-1或更小、1×10-7-s-1或更小、8.5×10-8-s-1或更小、5×10-8-s-1或更小、2.5×10-8-s-1或更小、1×10-8-s-1或更小、8.5×10-9-s-1或更小、5×10-9s-1或更小、2.5×10-9-s-1或更小、或1×10-9-s-1或更小的离解速率常数(koff)结合至GITR(例如，人类GITR)。在一些实施方案中，与本文所描述的抗体竞争结合至GITR(例如，人类GITR)或结合至本文所描述的抗体的相同表位或重叠表位的抗体或其片段以介于9.5×10-5-s-1至1×10-9-s-1、8.5×10-5-s-1至1×10-9-s-1、5×10-5-s-1至1×10-9-s-1、9.5×10-5-s-1至1×10-8-s-1、5×10-5s-1至1×10-8-s-1、9.5×10-5-s-1至1×10-7-s-1、5×10-5-s-1至1×10-7-s-1、9.5×10-5-s-1至5×10-6-s-1、9.5×10-5-s-1至1×10-5-s-1、8.5×10-3s-1至1×10-4s-1、5×10-3s-1至2.5×10-4s-1、8.5×10-3s-1至1×10-5s-1、8.5×10-5-s-1至5×10-5-s-1之间的koff结合至GITR(例如，人类GITR)。在某些实施方案中，如通过例如表面等离子体共振技术测量，使用单价抗体，诸如Fab片段测定koff。在其它实施方案中，如通过例如表面等离子体共振技术测量，使用二价抗体测定koff。在一个特定实施方案中，使用下文的章节6中所描述的试验测定koff。
在某些实施方案中，与本文所描述的抗体竞争结合至GITR(例如，人类GITR)或结合至本文所描述的抗体的相同表位或重叠表位的抗体或其片段以至少105M-1s-1、至少2.5×105M-1s-1、至少3.5×105M-1s-1、至少5×105M-1s-1、至少106M-1s-1、至少2.5×106M-1s-1、至少3.5×106M-1s-1、至少5×106M-1s-1、至少107M-1s-1、至少5×107M-1s-1、至少108M-1s-1、至少5108M-1s-1或至少109M-1s-1的缔合速率常数(kon)结合至GITR(例如，人类GITR)。在一些实施方案中，与本文所描述的抗体竞争结合至GITR(例如，人类GITR)或结合至本文所描述的抗体的相同表位或重叠表位的抗体或其片段以介于1×105M-1s-1至5×105M-1s-1、1×105M-1s-1至1×106M-1s-1、3.5×105M-1s-1至2.5×106M-1s-1、3.5×105M-1s-1至3.5×106M-1s-1、1×105M-1s-1至5×106M-1s-1、1×105M-1s-至1×107M-1s-1、1×105M-1s-1至5×107M-1s-1、1×105M-1s-1至108M- 1s-1、1×105M-1s-1至1×109M-1s-1、1×106M-1s-至1×107M-1s-1、1×106M-1s-1至1×108M-1s-1、1×106M-1s-1至1×109M-1s-1、1×107M-1s-1至1×108M-1s-1、1×107M-1s-1至1×109M-1s-1、1×108M- 1s-1至1×109M-1s-1之间的kon结合至GITR(例如，人类GITR)。在某些实施方案中，如通过例如表面等离子体共振技术测量，使用单价抗体，诸如Fab片段测定kon。在其它实施方案中，如通过例如表面等离子体共振技术测量，使用二价抗体测定kon。在一个特定实施方案中，使用下文的章节6中所描述的试验测定kon。
在某些实施方案中，与本文所描述的抗体竞争结合至GITR(例如，人类GITR)或结合至本文所描述的抗体的相同表位或重叠表位的抗体或其片段以小于7nM、6nM、5nM、4.5nM、4nM、3.5nM、3nM、2.5nM、2nM、1.5nM、1nM、0.75nM、0.5nM、0.25nM或0.1nM的KD结合至GITR(例如，人类GITR)。在一些实施方案中，与本文所描述的抗体竞争结合至GITR(例如，人类GITR)或结合至本文所描述的抗体的相同表位或重叠表位的抗体或其片段以约7nM、6nM、5nM、4.5nM、4nM、3.5nM、3nM、2.5nM、2nM、1.5nM、1nM、0.75nM、0.5nM、0.25nM或0.1nM的KD结合至GITR(例如，人类GITR)。在某些实施方案中，与本文所描述的抗体竞争结合至GITR(例如，人类GITR)或结合至本文所描述的抗体的相同表位或重叠表位的本文所描述的抗体或其片段以7nM至4nM、7nM至5nM、6nM至4nM、5nM至3nM、5nM至1nM、5nM至0.5nM、4nM至3nM、4nM至2nM、4nM至1nM、4nM至0.5nM、3nM至2nM、3nM至1nM、3nM至0.5nM、2nM至1nM、2nM至0.5nM、3nM至0.1nM、2nM至0.1nM、1nM至0.1nM或0.5nM至0.1nM的KD结合至GITR(例如，人类GITR)。在某些实施方案中，以koff/kon的商计算KD，并且如通过例如表面等离子体共振技术测量，使用单价抗体，诸如Fab片段测定kon和koff。在其它实施方案中，以koff/kon的商计算KD，并且如通过例如表面等离子体共振技术测量，使用二价抗体，诸如Fab片段测定kon和koff。在一个特定实施方案中，如下文的章节6中的实施例(例如，实施例2)中所陈述测定KD。
在某些实施方案中，本文所描述的抗体的表位用作免疫原以产生抗体。对于产生抗体的方法，参看例如下文的章节5.2。
在特定方面，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的所描述的抗体或其片段在本领域的技术人员所知或本文所描述的试验中并不抑制(例如，以剂量依赖性方式)鼠类抗体6C8与GITR(例如，人类GITR)的结合。对于鼠类抗体6C8的描述，参看例如美国专利号7,812,135。在某些实施方案中，如本领域的技术人员所知或本文所描述的试验中评估，至少20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更多的鼠类抗体6C8在存在特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的所描述的抗体或其片段的情况下结合至GITR(例如，人类GITR)。在一个特定实施方案中，如下文的实施例6中所描述的试验中评估，特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的所描述的抗体或其片段并不抑制(例如，以剂量依赖性方式)鼠类抗体6C8与GITR(例如，人类GITR)的结合。在某些实施方案中，如下文的实施例6中所描述的试验中评估，至少20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更多的鼠类抗体6C8在存在特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的所描述的抗体或其片段的情况下结合至GITR(例如，人类GITR)。
在一些实施方案中，本文所描述的抗GITR抗体可以是多特异性抗体，例如，双特异性抗体。在一个特定实施方案中，本文所描述的抗GITR抗体是双特异性抗体，其中抗体对至少两种不同的，通常是非重叠表位具有特异性。在一个特定实施方案中，双特异性抗体包含有包含对GITR(例如，人类GITR)具有特异性的本文所描述的抗体的一个臂，和包含对GITR(例如，人类GITR)上的不同表位或不同分子，例如PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、TIM-3、LAG-3或OX40上的表位具有特异性的抗体的第二臂。举例来说，双特异性抗体可以包含有包含对GITR(例如，人类GITR)具有特异性的本文所描述的抗体的一个臂和包含对CTLA-4具有特异性的抗体的第二臂，这种抗体诸如曲美木单抗(tremelimumab)(Pfizer)、伊匹单抗(ipilimumab)(Bristol-Meyers Squibb)、结合至与曲美木单抗相同的表位或其重叠表位的抗体、或结合至与伊匹单抗相同的表位或其重叠表位的抗体。
在特定方面，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段起到促效剂的功能。
在某些实施方案中，如通过本文所描述和/或本领域的技术人员所知的方法评估，相对于在存在或不存在GITRL(例如，人类GITRL)刺激的情况下在没有任何抗体或有无关抗体(例如，并不免疫特异性地结合至GITR的抗体)的情况下的GITR(例如，人类GITR)活性，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段使GITR(例如，人类GITR)活性增加至少约1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍。在某些实施方案中，如通过本文所描述和/或本领域的技术人员所知的方法评估，相对于在存在或不存在GITRL(例如，人类GITRL)刺激的情况下在没有任何抗体或有无关抗体(例如，并不免疫特异性地结合至GITR的抗体)的情况下的GITR(例如，人类GITR)活性，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段使GITR(例如，人类GITR)活性增加至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％。GITR(例如，人类GITR)活性的非限制性实例可以包括细胞增殖、GITR(例如，人类GITR)信号传导、细胞存活以及细胞因子产生(例如，IL-2、IL-6、IL-10、TNF-α以及IFN-γ)。在特定实施方案中，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段连同GITRL(例如，人类GITRL)一起诱导或增加GITR(例如，人类GITR)活性。在某些实施方案中，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段在不存在GITRL(例如，人类GITRL)的情况下诱导、增强或增加GITR(例如，人类GITR)活性。在特定实施方案中，抗体或抗体结合片段诱导、增强或增加GITR活性并且不抑制(例如，不完全抑制或仅部分抑制)GITRL结合至GITR。在特定实施方案中，如下文的实施例中所描述评估GITR活性的增加。
在某些方面，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段诱导、增强或增加表达GITR并且响应GITR信号传导的细胞(例如，响应于GITR刺激和GITR信号传导而增殖的细胞，诸如T细胞)的细胞增殖。细胞增殖试验在本领域中描述，诸如3H-胸苷并入试验、BrdU并入试验或CFSE试验(诸如实施例3中所描述)，并且可以由本领域的技术人员容易地进行。在特定实施方案中，相对于仅用T细胞有丝分裂原或T细胞受体复合物刺激剂(植物血球凝集素(PHA)和/或佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)，或TCR复合物刺激抗体，诸如抗CD3抗体和抗CD28抗体)刺激的T细胞，在存在免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段的情况下用T细胞有丝分裂原或T细胞受体复合物刺激剂(例如，植物血球凝集素(PHA)和/或佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)，或TCR复合物刺激抗体，诸如抗CD3抗体和抗CD28抗体)刺激的T细胞(例如，CD4+或CD8+效应T细胞)具有增加的细胞增殖。参看下文的实施例3，其展示在存在免疫特异性地结合至GITR的本文所描述的抗体的情况下T细胞增殖的增加。
在一个实施方案中，相对于仅用T细胞有丝分裂原或T细胞受体复合物刺激剂(例如，植物血球凝集素(PHA)和/或佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)，或TCR复合物刺激抗体，诸如抗CD3抗体和抗CD28抗体)刺激的T细胞，在存在免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段的情况下用T细胞有丝分裂原或T细胞受体复合物刺激剂(例如，植物血球凝集素(PHA)和/或佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)，或TCR复合物刺激抗体，诸如抗CD3抗体和抗CD28抗体)刺激的CD8+T细胞具有增加的细胞增殖。在另一个实施方案中，相对于仅用T细胞有丝分裂原或T细胞受体复合物刺激剂(例如，植物血球凝集素(PHA)和/或佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)，或TCR复合物刺激抗体，诸如抗CD3抗体和抗CD28抗体)刺激的T细胞，在存在免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段的情况下用T细胞有丝分裂原或T细胞受体复合物刺激剂(例如，植物血球凝集素(PHA)和/或佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)，或TCR复合物刺激抗体，诸如抗CD3抗体和抗CD28抗体)刺激的CD4+T细胞具有增加的细胞增殖。在另一个实施方案中，相对于仅用T细胞有丝分裂原或T细胞受体复合物刺激剂(例如，植物血球凝集素(PHA)和/或佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)，或TCR复合物刺激抗体，诸如抗CD3抗体和抗CD28抗体)刺激的T细胞，在存在免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段的情况下用T细胞有丝分裂原或T细胞受体复合物刺激剂(例如，植物血球凝集素(PHA)和/或佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)，或TCR复合物刺激抗体，诸如抗CD3抗体和抗CD28抗体)刺激的CD4+T细胞和CD8+T细胞具有增加的细胞增殖。在一些实施方案中，相对于不存在免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段的情况下的T细胞，在存在免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段的情况下尚未用T细胞有丝分裂原或T细胞受体复合物刺激剂(例如，植物血球凝集素(PHA)和/或佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)，或TCR复合物刺激抗体，诸如抗CD3抗体和抗CD28抗体)刺激的T细胞具有增加的GITR活性和/或增加的NF-κB活性。
在特定实施方案中，如通过本文所描述或本领域的技术人员所知的方法(例如，3H-胸苷并入试验、BrdU并入试验或CFSE试验，诸如下文的实施例3中所描述)评估，相对于在存在或不存在GITRL(例如，人类GITRL)刺激的情况下在没有任何抗体或有无关抗体(例如，并不免疫特异性地结合至GITR的抗体)的情况下的GITR(例如，人类GITR)活性，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段使细胞增殖(例如，T细胞，诸如CD4和CD8效应T细胞)增加至少约1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍。在特定实施方案中，如通过本文所描述或本领域的技术人员所知的方法(例如，3H-胸苷并入试验、BrdU并入试验或CFSE试验，诸如下文的实施例3中所描述)评估，相对于在存在或不存在GITRL(例如，人类GITRL)刺激的情况下在没有任何抗体或有无关抗体(例如，并不免疫特异性地结合至GITR的抗体)的情况下的GITR(例如，人类GITR)活性，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段使细胞增殖(例如，T细胞，诸如CD4和CD8效应T细胞)增加至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％。
在一些实施方案中，如通过本文所描述或本领域的技术人员所知的方法(例如，3H-胸苷并入试验、BrdU并入试验或CFSE试验，诸如下文的实施例3中所描述)评估，相对于仅用T细胞有丝分裂原刺激的T细胞，在存在免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段的情况下用T细胞有丝分裂原(例如，抗CD3抗体或佛波醇酯)刺激的T细胞(例如，CD4+或CD8+效应T细胞)具有增加至少约1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍的细胞增殖。在一些实施方案中，如通过本文所描述或本领域的技术人员所知的方法(例如，3H-胸苷并入试验、BrdU并入试验或CFSE试验，诸如下文的实施例3中所描述)评估，相对于仅用T细胞有丝分裂原或T细胞受体复合物刺激剂(例如，植物血球凝集素(PHA)和/或佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)，或TCR复合物刺激抗体，诸如抗CD3抗体和抗CD28抗体)刺激的T细胞，在存在免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段的情况下用T细胞有丝分裂原或T细胞受体复合物刺激剂(例如，植物血球凝集素(PHA)和/或佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)，或TCR复合物刺激抗体，诸如抗CD3抗体和抗CD28抗体)刺激的T细胞(例如，CD4+或CD8+效应T细胞)具有增加至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％的细胞增殖。在一个特定实施方案中，如下文的实施例3中所描述评估细胞增殖。
在某些方面，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段增加细胞(例如，T细胞，诸如CD4和CD8效应T细胞)的存活。在一个特定实施方案中，相对于仅用T细胞有丝分裂原刺激的T细胞，在存在免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段的情况下用T细胞有丝分裂原或T细胞受体复合物刺激剂(例如，植物血球凝集素(PHA)和/或佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)，或TCR复合物刺激抗体，诸如抗CD3抗体和抗CD28抗体)刺激的T细胞(例如，CD4+或CD8+效应T细胞)具有增加的存活。细胞存活试验在本领域中描述(例如，锥虫蓝排除试验)并且可以由本领域的技术人员容易地进行。
在特定实施方案中，如通过本文所描述或本领域的技术人员所知的方法(例如，锥虫蓝排除试验)评估，相对于在存在或不存在GITRL(例如，人类GITRL)刺激的情况下在没有任何抗体或有无关抗体(例如，并不免疫特异性地结合至GITR的抗体)的情况下的细胞存活，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段使细胞存活(例如，T细胞，诸如CD4和CD8效应T细胞)增加至少约1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍。在特定实施方案中，如通过本文所描述或本领域的技术人员所知的方法(例如，锥虫蓝排除试验)评估，相对于在存在或不存在GITRL(例如，人类GITRL)刺激的情况下在没有任何抗体或有无关抗体(例如，并不免疫特异性地结合至GITR的抗体)的情况下的细胞存活，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段使细胞存活(例如，T细胞，诸如CD4和CD8效应T细胞)增加至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％。
在一些实施方案中，如通过本文所描述或本领域的技术人员所知的方法(例如，锥虫蓝排除试验)评估，相对于仅用T细胞有丝分裂原或T细胞受体复合物刺激剂(例如，植物血球凝集素(PHA)和/或佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)，或TCR复合物刺激抗体，诸如抗CD3抗体和抗CD28抗体)刺激的T细胞，在存在免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段的情况下用T细胞有丝分裂原(例如，抗CD3抗体或佛波醇酯)刺激的T细胞(例如，CD4+或CD8+效应T细胞)具有增加至少约1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍的细胞存活。在一些实施方案中，如通过本文所描述或本领域的技术人员所知的方法(例如，锥虫蓝排除试验)评估，相对于仅用T细胞有丝分裂原刺激的T细胞，在存在免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段的情况下用T细胞有丝分裂原或T细胞受体复合物刺激剂(例如，植物血球凝集素(PHA)和/或佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)，或TCR复合物刺激抗体，诸如抗CD3抗体和抗CD28抗体)刺激的T细胞(例如，CD4+或CD8+效应T细胞)具有增加至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％的细胞存活。
在某些实施方案中，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段保护效应T细胞(例如，CD4+和CD8+效应T细胞)免于活化诱导的细胞死亡。在一些实施方案中，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段诱导效应T细胞(例如，CD4+和CD8+效应T细胞)对Treg介导的抑制的抗性。
在特定实施方案中，如通过本文所描述(参看下文的实施例，诸如实施例3)或本领域的技术人员所知的方法评估，相对于在存在或不存在GITRL(例如，人类GITRL)刺激的情况下在没有任何抗体或有无关抗体(例如，并不免疫特异性地结合至GITR的抗体)的情况下的细胞因子产生，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段诱导、增强或增加细胞因子产生(例如，IL-2、IL-6、IL-10、TNF-α以及IFN-γ)至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％。在特定实施方案中，如通过本文所描述(参看下文的实施例，诸如实施例3)或本领域的技术人员所知的方法评估，相对于在存在或不存在GITRL(例如，人类GITRL)刺激的情况下在没有任何抗体或有无关抗体(例如，并不免疫特异性地结合至GITR的抗体)的情况下的细胞因子产生，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段诱导或增强细胞因子产生(例如，IL-2、IL-6、IL-10、TNF-α以及IFN-γ)至少约1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍。
在某些实施方案中，如通过本文所描述或本领域的技术人员所知的方法(例如，ELISA试验或如下文的实施例中所描述)评估，相对于仅用T细胞有丝分裂原或T细胞受体复合物刺激剂(例如，植物血球凝集素(PHA)和/或佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)，或TCR复合物刺激抗体，诸如抗CD3抗体和抗CD28抗体)刺激的T细胞，在存在免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段的情况下用T细胞有丝分裂原或T细胞受体复合物刺激剂(例如，植物血球凝集素(PHA)和/或佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)，或TCR复合物刺激抗体，诸如抗CD3抗体和抗CD28抗体)刺激的T细胞(例如，CD4+或CD8+效应T细胞)具有增加至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％的细胞因子产生(例如，IL-2、IL-6、IL-10、TNF-α以及IFN-γ)。在一些实施方案中，如通过本文所描述或本领域的技术人员所知的方法(例如，ELISA试验或如下文的实施例中所描述)评估，相对于仅用T细胞有丝分裂原或T细胞受体复合物刺激剂(例如，植物血球凝集素(PHA)和/或佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)，或TCR复合物刺激抗体，诸如抗CD3抗体和抗CD28抗体)刺激的T细胞，在存在免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体或其片段的情况下用T细胞有丝分裂原或T细胞受体复合物刺激剂(例如，植物血球凝集素(PHA)和/或佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)，或TCR复合物刺激抗体，诸如抗CD3抗体和抗CD28抗体)刺激的T细胞(例如，CD4+或CD8+效应T细胞)具有增加至少约1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍的细胞因子产生(例如，IL-2、IL-6、IL-10、TNF-α以及IFN-γ)。
在某些实施方案中，抗GITR抗体或其抗原结合片段在不存在TCR促效剂(例如，抗CD3抗体)的情况下诱导、增强或活化GITR的活性。通过测量经典和非经典NF-κB路径的活化评估GITR活性。通过测量TRAF适配子介导的信号传导路径的活化评估GITR活性。TRAF适配子选自由TRAF1、TRAF2、TRAF3、TRAF4以及TRAF5组成的群组。可以通过测量MAPK/ERK路径(也称为Ras-Raf-MEK-ERK路径)的活化评估GITR活性。“TCR促效剂”的实例包括(但不限于)靶向T细胞受体复合物的抗体(例如，抗CD3抗体)和结合至人类白细胞抗原，例如I类MHC和II类MHC的肽，其中这些肽来源于自身、突变自身或病原体相关蛋白(例如，病毒或细菌)。
抗GITR抗体或其抗原结合片段可以融合或偶联(例如，共价或非共价连接)至可检测标记或物质。可检测标记或物质的实例包括酶标记，诸如葡萄糖氧化酶；放射性同位素，诸如碘(125I、121I)、碳(14C)、硫(35S)、氚(3H)、铟(121In)以及锝(99Tc)；发光标记，诸如鲁米诺(luminol)；以及荧光标记，诸如荧光素和罗丹明(rhodamine)，以及生物素。这类标记的抗体或抗原结合片段可以用于检测GITR(例如，人类GITR)蛋白。参看例如下文的章节5.4.2。
5.2抗体产生
免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其片段可以通过本领域中已知用于合成抗体的任何方法，例如通过化学合成或通过重组表达技术产生。除非另有指示，否则本文所描述的方法采用在艺术技能内的分子生物学、微生物学、遗传分析、重组DNA、有机化学、生物化学、PCR、寡核苷酸合成和修饰、核酸杂交以及相关领域中的常规技术。这些技术描述于例如本文所引用的参考文献中并且在文献中充分解释。参看例如Maniatis T等,(1982)《分子克隆：实验室手册(Molecular Cloning:A Laboratory Manual)》,ColdSpring Harbor Laboratory Press；Sambrook J等,(1989),《分子克隆：实验室手册(Molecular Cloning:A Laboratory Manual)》,第二版,Cold Spring Harbor LaboratoryPress；Sambrook J等,(2001)《分子克隆：实验室手册(Molecular Cloning:A LaboratoryManual)》,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NY；Ausubel FM等,《分子生物学实验指南(Current Protocols in Molecular Biology)》,John Wiley&Sons(1987和每年更新)；《免疫学实验指南(Current Protocols in Immunology)》,JohnWiley&Sons(1987和每年更新)；Gait(编)(1984)《寡核苷酸合成：实用方法(Oligonucleotide Synthesis:A Practical Approach)》,IRL Press；Eckstein(编)(1991)《寡核苷酸和类似物：实用方法(Oligonucleotides and Analogues:A PracticalApproach)》,IRL Press；Birren B等,(编)(1999)《基因组分析：实验室手册(GenomeAnalysis:A Laboratory Manual)》,Cold Spring Harbor Laboratory Press。
在一个特定实施方案中，本文所描述的抗体是通过涉及创造的任何方式，例如经由DNA序列的合成、遗传工程而制备、表达、创造或分离的抗体(例如，重组抗体)。在某些实施方案中，这种抗体包含并不天然存在于动物或哺乳动物(例如，人类)体内的抗体种系谱内的序列(例如，DNA序列或氨基酸序列)。
在某个方面，本文提供了一种制造免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其抗原结合片段的方法，其包括培养本文所描述的细胞或宿主细胞。在某个方面，本文提供了一种制造免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的抗体或其抗原结合片段的方法，其包括使用本文所描述的细胞或宿主细胞(例如，包含编码本文所描述的抗体的多核苷酸的细胞或宿主细胞)表达(例如，重组表达)抗体或其抗原结合片段。在一个特定实施方案中，细胞是分离的细胞。在一个特定实施方案中，已经将外源多核苷酸引入细胞中。在一个特定实施方案中，这种方法进一步包括纯化获自细胞或宿主细胞的抗体或其抗原结合片段的步骤。
产生多克隆抗体的方法在本领域中是已知的(参看例如《精编分子生物学实验指南(Short Protocols in Molecular Biology)》,(2002)第5版,Ausubel FM等编,JohnWiley and Sons,New York中的第11章)。
单克隆抗体可以使用本领域中已知的多种技术制备，包括使用杂交瘤、重组以及噬菌体展示技术或其组合。举例来说，单克隆抗体可以使用杂交瘤技术产生，包括本领域中已知并且例如在Harlow E和Lane D,《抗体：实验室手册(Antibodies:A LaboratoryManual)》,(Cold Spring Harbor Laboratory Press,第2版1988)；Hammerling GJ等,《单克隆抗体和T细胞杂交瘤(Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas)》563 681(Elsevier,N.Y.,1981)中教导的那些。如本文中所使用，术语“单克隆抗体”并不限于经由杂交瘤技术产生的抗体。举例来说，单克隆抗体可以从外源表达本文所描述的抗体或其片段，例如这种抗体的轻链和/或重链的宿主细胞重组产生。
在特定实施方案中，如本文中所使用，“单克隆抗体”是由单一细胞(例如，产生重组抗体的杂交瘤或宿主细胞)产生的抗体，其中如例如通过本领域中已知或本文所提供的实施例中的ELISA或其它抗原结合或竞争结合试验测定，抗体免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)。在特定实施方案中，单克隆抗体可以是嵌合抗体或人源化抗体。在某些实施方案中，单克隆抗体是单价抗体或多价(例如，二价)抗体。在特定实施方案中，单克隆抗体是单特异性或多特异性抗体(例如，双特异性抗体)。举例来说，本文所描述的单克隆抗体可以例如通过如Kohler G和Milstein C(1975)《自然(Nature)》256:495中所描述的杂交瘤方法制造，或可以例如使用如本文所描述的技术从噬菌体文库分离。制备克隆细胞系和由其表达的单克隆抗体的其它方法在本领域中是众所周知的(参看例如《精编分子生物学实验指南(Short Protocols in Molecular Biology)》,(2002)第5版,Ausubel FM等,同上中的第11章)。
使用杂交瘤技术产生和筛选特异性抗体的方法在本领域中是常规的和众所周知的。举例来说，在杂交瘤方法中，使小鼠或其它适当的宿主动物，诸如绵羊、山羊、兔、大鼠、仓鼠或猕猴免疫以引出产生或能够产生将特异性地结合至蛋白质(例如，GITR(例如，人类GITR))的抗体用于免疫的淋巴细胞。或者，可以使淋巴细胞体外免疫。然后使用适合的融合剂，诸如聚乙二醇使淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合以形成杂交瘤细胞(Goding JW(编),《单克隆抗体：原理和实践(Monoclonal Antibodies:Principles and Practice)》,第59-103页(Academic Press,1986))。另外，RIMMS(反复免疫多位点)技术可以用于使动物免疫(Kilpatrick KE等,(1997)《杂交瘤(Hybridoma)》16:381-9，以全文引用的方式并入)。
在一些实施方案中，可以用抗原(例如，GITR(例如，人类GITR))使小鼠(或其它动物，诸如大鼠、猴、驴、猪、绵羊、仓鼠或犬)免疫并且一旦检测到免疫反应，例如，在小鼠血清中检测到对抗原具特异性的抗体，即收获小鼠的脾并且分离脾细胞。然后通过所熟知的技术使脾细胞融合至任何适合的骨髓瘤细胞，例如来自可获自美国菌种保藏中心(AmericanType Culture Collection)()(Manassas,VA)的细胞系SP20的细胞，以形成杂交瘤。选择杂交瘤并且通过有限稀释克隆。在某些实施方案中，收获免疫的小鼠的淋巴结并且与NS0骨髓瘤细胞融合。
接种由此制备的杂交瘤细胞并且在优选地含有一种或多种抑制未融合的亲本骨髓瘤细胞的生长或存活的物质的适合培养基中生长。举例来说，如果亲本骨髓瘤细胞缺乏酶类次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核酸转移酶(HGPRT或HPRT)，那么杂交瘤的培养基通常将包括次黄嘌呤、氨喋呤以及胸苷(HAT培养基)，这些物质阻止HGPRT缺陷细胞的生长。
特定实施方案采用有效融合，支持由所选的抗体产生细胞稳定高水平产生抗体，并且对诸如HAT培养基的培养基敏感的骨髓瘤细胞。这些骨髓瘤细胞系当中有鼠类骨髓瘤系，诸如NS0细胞系，或来源于可获自索尔克研究所细胞分配中心(Salk Institute CellDistribution Center)(San Diego,CA,USA)的MOPC-21和MPC-11小鼠肿瘤的那些，以及可获自美国菌种保藏中心(Rockville,MD,USA)的SP-2或X63-Ag8.653细胞。还已经描述了人类骨髓瘤和小鼠-人类异源骨髓瘤细胞系用于产生人类单克隆抗体(Kozbor D(1984)《免疫学杂志(J Immunol)》133:3001-5；Brodeur等,《单克隆抗体产生技术和应用(MonoclonalAntibody Production Techniques and Applications)》,第51-63页(Marcel Dekker,Inc.,New York,1987))。
对于针对GITR(例如，人类GITR)的单克隆抗体的产生化验杂交瘤细胞生长的培养基。通过本领域中已知的方法，例如免疫沉淀或通过体外结合试验，诸如放射免疫试验(RIA)或酶联免疫吸试试验(ELISA)测定由杂交瘤细胞产生的单克隆抗体的结合特异性。
在鉴别产生所需特异性、亲和力和/或活性的抗体的杂交瘤细胞之后，通过有限稀释程序对克隆体进行亚克隆并且通过标准方法使其生长(Goding JW(编),《单克隆抗体：原理和实践(Monoclonal Antibodies:Principles and Practice)》,同上)。用于这种目的的适合培养基包括例如D-MEM或RPMI 1640培养基。另外，杂交瘤细胞可以在动物中体内生长成腹水肿瘤。
通过常规免疫球蛋白纯化程序，诸如蛋白A-琼脂糖、羟基磷灰石色谱法、凝胶电泳、透析或亲和色谱法从培养基、腹水液或血清适合地分离由亚克隆体分泌的单克隆抗体。
本文所描述的抗体包括识别特异性GITR(例如，人类GITR)并且可以通过本领域的技术人员所知的任何技术产生的抗体片段。举例来说，可以通过使用诸如木瓜蛋白酶(以产生Fab片段)或胃蛋白酶(以产生F(ab')2片段)的酶使免疫球蛋白分子溶蛋白性裂解来产生本文所描述的Fab和F(ab')2片段。Fab片段对应于抗体分子的两个相同臂之一并且含有与重链的VH和CH1域配对的完整轻链。F(ab')2片段含有由铰链区中的二硫键连接的抗体分子的两个抗原结合臂。
此外，还可以使用本领域中已知的各种噬菌体展示方法产生本文所描述的抗体或其抗原结合片段。在噬菌体展示方法中，使功能性抗体域在携带编码其的多核苷酸序列的噬菌体粒子的表面上展示。详细地说，从动物cDNA文库(例如，受影响组织的人类或鼠类cDNA文库)扩增编码VH和VL域的DNA序列。通过PCR使编码VH和VL域的DNA与scFv连接子一起重组并且克隆至噬菌粒载体中。在大肠杆菌中对载体进行电穿孔并且用辅助噬菌体感染大肠杆菌。这些方法中所用的噬菌体通常是包括fd和M13的丝状噬菌体，并且通常使VH和VL域重组融合至噬菌体基因III或基因VIII。可以用抗原，例如使用标记的抗原或结合至或捕获至固体表面或珠粒的抗原选择或鉴别表达结合至特定抗原的抗原结合域的噬菌体。可以用于制造本文所描述的抗体的噬菌体展示方法的实例包括以下所公开的那些：Brinkman U等,(1995)《免疫学方法杂志(J Immunol Methods)》182:41-50；Ames RS等,(1995)《免疫学方法杂志(J Immunol Methods)》184:177-186；Kettleborough CA等,(1994)《欧洲免疫学杂志(Eur J Immunol)》24:952-958；Persic L等,(1997)《基因(Gene)》187:9-18；BurtonDR和Barbas CF(1994)《免疫学进展(Advan Immunol)》57:191-280；PCT申请号PCT/GB91/001134；国际公布号WO 90/02809、WO 91/10737、WO 92/01047、WO 92/18619、WO 93/11236、WO 95/15982、WO 95/20401和WO 97/13844；以及美国专利号5,698,426、5,223,409、5,403,484、5,580,717、5,427,908、5,750,753、5,821,047、5,571,698、5,427,908、5,516,637、5,780,225、5,658,727、5,733,743和5,969,108。
如上述参考文献中所描述，在噬菌体选择之后，可以分离来自噬菌体的抗体编码区并且用于产生全抗体，包括人类抗体，或任何其它所需的抗原结合片段，并且在任何所需的宿主，包括哺乳动物细胞、昆虫细胞、植物细胞、酵母以及细菌中表达，例如，如下文所描述。还可以使用本领域中已知的方法，诸如PCT公布号WO 92/22324；Mullinax RL等,(1992)《生物技术(BioTechniques)》12(6):864-9；Sawai H等,(1995)《美国生殖免疫学杂志(Am JReprod Immunol)》34:26-34；以及Better M等,(1988)《科学(Science)》240:1041-1043中所公开的那些来采用重组产生诸如Fab、Fab'以及F(ab')2片段的抗体片段的技术。
在一个方面，为了产生全抗体，包括VH或VL核苷酸序列、限制位点以及用以保护限制位点的侧翼序列的PCR引物可以用于从模板，例如scFv克隆体扩增VH或VL序列。利用本领域的技术人员所知的克隆技术，可以将PCR扩增的VH域克隆至表达VH恒定区的载体中，并且将PCR扩增的VL域克隆至表达VL恒定区，例如人类κ或λ恒定区的载体中。还可以将VH和VL域克隆至表达必要的恒定区的一个载体中。然后使用本领域的技术人员所知的技术将重链转换载体和轻链转换载体共转染至细胞系中以产生表达全长抗体，例如IgG的稳定或暂态细胞系。
嵌合抗体是抗体的不同部分来源于不同免疫球蛋白分子的分子。举例来说，嵌合抗体可以含有融合至人类抗体的恒定区的小鼠或大鼠单克隆抗体的可变区。产生嵌合抗体的方法在本领域中是已知的。参看例如Morrison SL(1985)《科学(Science)》229:1202-7；Oi VT和Morrison SL(1986)《生物技术(BioTechniques)》4:214-221；Gillies SD等,(1989)《免疫学方法杂志(J Immunol Methods)》125:191-202；以及美国专利号5,807,715、4,816,567、4,816,397和6,331,415。
人源化抗体能够结合至预定抗原并且包含实质上具有人类免疫球蛋白的氨基酸序列的构架区和实质上具有非人类免疫球蛋白(例如，鼠类免疫球蛋白)的氨基酸序列的CDR。在特定实施方案中，人源化抗体还包含通常人类免疫球蛋白的免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分。抗体还可以包括重链的CH1、铰链、CH2、CH3以及CH4区。人源化抗体可以选自免疫球蛋白的任何类别，包括IgM、IgG、IgD、IgA以及IgE，和任何同型，包括IgG1、IgG2、IgG3以及IgG4。人源化抗体可以使用本领域中已知的多种技术产生，包括(但不限于)CDR移植(欧洲专利号EP 239400；国际公布号WO 91/09967；以及美国专利号5,225,539、5,530,101和5,585,089)、镶饰或表面重塑(欧洲专利号EP 592106和EP 519596；Padlan EA(1991)《分子免疫学(Mol Immunol)》28(4/5):489-498；Studnicka GM等,(1994)《蛋白质工程(ProtEngineering)》7(6):805-814；以及Roguska MA等,(1994)《美国国家科学院院刊(PNAS)》91:969-973)、链改组(美国专利号5,565,332)，以及以下所公开的技术：例如，美国专利号6,407,213；美国专利号5,766,886；国际公布号WO 93/17105；Tan P等,(2002)《免疫学杂志(J Immunol)》169:1119-25；Caldas C等,(2000)《蛋白质工程(Protein Eng)》.13(5):353-60；Morea V等,(2000)《方法(Methods)》20(3):267-79；Baca M等,(1997)《生物化学杂志(JBiol Chem)》272(16):10678-84；Roguska MA等,(1996)《蛋白质工程(Protein Eng)》9(10):895 904；Couto JR等,(1995)《癌症研究(Cancer Res)》.55(23增刊):5973s-5977s；Couto JR等,(1995)《癌症研究(Cancer Res)》55(8):1717-22；Sandhu JS(1994)《基因(Gene)》150(2):409-10；以及Pedersen JT等,(1994)《分子生物学杂志(J Mol Biol)》235(3):959-73。还参看美国申请公布号US 2005/0042664A1(2005年2月24日)，其以全文引用的方式并入本文中。
已经描述了制造多特异性(例如，双特异性抗体)的方法，参看例如美国专利号7,951,917、7,183,076、8,227,577、5,837,242、5,989,830、5,869,620、6,132,992以及8,586,713。
单域抗体，例如缺乏轻链的抗体，可以通过本领域中所熟知的方法产生。参看Riechmann L和Muyldermans S(1999)《免疫学杂志(J Immunol)》231:25-38；Nuttall SD等,(2000)《当代药物生物技术(Curr Pharm Biotechnol)》1(3):253-263；Muyldermans S,(2001)《生物技术杂志(J Biotechnol)》74(4):277-302；美国专利号6,005,079；以及国际公布号WO 94/04678、WO 94/25591和WO 01/44301。
此外，免疫特异性地结合至GITR抗原的抗体继而可以用于使用本领域的技术人员所熟知的技术产生“模拟”抗原的抗独特型抗体。(参看例如Greenspan NS和Bona CA(1989)《美国实验生物学联合会会刊(FASEB J)》7(5):437-444；和Nissinoff A(1991)《免疫学杂志(J Immunol)》147(8):2429-2438)。
在特定实施方案中，与本文所描述的抗GITR抗体结合至GITR(例如，人类GITR)的相同表位的本文所描述的抗体是人类抗体或其抗原结合片段。在特定实施方案中，竞争性地阻断(例如，以剂量依赖性方式)本文所描述的抗体(例如，Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160、pab2161或Hum231#2w)中的任一者结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体是人类抗体或其抗原结合片段。人类抗体可以使用本领域中已知的任何方法产生。举例来说，可以使用不能表达功能性内源免疫球蛋白，但可以表达人类免疫球蛋白基因的转基因小鼠。详细地说，可以将人类重和轻链免疫球蛋白基因复合物随机地或通过同源重组引入小鼠胚胎干细胞中。或者，除了人类重和轻链基因以外可以将人类可变区、恒定区以及多变区引入小鼠胚胎干细胞中。可以独立地或与通过同源重组引入人类免疫球蛋白基因座同时促使小鼠重和轻链免疫球蛋白呈非功能性的。详细地说，JH区的纯合缺失阻止内源抗体产生。扩展经过修饰的胚胎干细胞并且显微注射至胚泡中以产生嵌合小鼠。然后育种嵌合小鼠以产生表达人类抗体的纯合后代。以正常方式用所选的抗原，例如抗原(例如，GITR)的全部或一部分使转基因小鼠免疫。可以使用常规杂交瘤技术从免疫的转基因小鼠获得针对抗原的单克隆抗体。转基因小鼠所具有的人类免疫球蛋白转基因在B细胞分化期间重排，并且随后经历类别转换和体细胞突变。因此，使用这种技术，可能产生治疗上适用的IgG、IgA、IgM以及IgE抗体。对于产生人类抗体的这种技术的综述，参看LonbergN和Huszar D(1995)《国际免疫学评论(Int Rev Immunol)》13:65-93。对于产生人类抗体和人类单克隆抗体的这种技术以及产生这类抗体的方案的详细论述，参看例如国际公布号WO98/24893、WO 96/34096和WO 96/33735；以及美国专利号5,413,923、5,625,126、5,633,425、5,569,825、5,661,016、5,545,806、5,814,318和5,939,598。能够产生人类抗体的小鼠的实例包括XenomouseTM(Abgenix,Inc.；美国专利号6,075,181和6,150,184)、HuAb-MouseTM(Mederex,Inc./Gen Pharm；美国专利号5,545,806和5,569,825)、Trans ChromoMouseTM(Kirin)以及KM MouseTM(Medarex/Kirin)。
特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的人类抗体可以通过本领域中已知的多种方法制造，包括上文所描述的使用来源于人类免疫球蛋白序列的抗体文库的噬菌体展示方法。还参看美国专利号4,444,887、4,716,111和5,885,793；以及国际公布号WO 98/46645、WO 98/50433、WO 98/24893、WO 98/16654、WO 96/34096、WO 96/33735和WO 91/10741。
在一些实施方案中，人类抗体可以使用小鼠-人类杂交瘤产生。举例来说，用爱泼斯坦-巴尔病毒(Epstein-Barr virus)(EBV)转化的人外周血淋巴细胞可以与小鼠骨髓瘤细胞融合以产生分泌人类单克隆抗体的小鼠-人类杂交瘤，并且可以筛选这些小鼠-人类杂交瘤以确定分泌免疫特异性地结合至靶抗原(例如，GITR(例如，人类GITR))的人类单克隆抗体的杂交瘤。这类方法是已知的并且在本领域中描述，参看例如Shinmoto H等,(2004)《细胞技术学(Cytotechnology)》46:19-23；Naganawa Y等,(2005)《人类抗体(HumanAntibodies)》14:27-31。
5.2.1多核苷酸
在某些方面，本文提供了包含编码免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)抗原的本文所描述的抗体或其片段(例如，可变轻链区和/或可变重链区)的核苷酸序列的多核苷酸，以及载体，例如包含这类多核苷酸用于在宿主细胞(例如，大肠杆菌和哺乳动物细胞)中重组表达的载体。本文提供了包含编码本文所提供的抗体中的任一者的核苷酸序列的多核苷酸，以及包含这类多核苷酸序列的载体，例如用于抗体在宿主细胞，例如哺乳动物细胞中的有效表达的表达载体。
如本文中所使用，“分离的”多核苷酸或核酸分子是与存在于核酸分子的天然来源中(例如，小鼠或人类中)的其它核酸分子分离的分子。此外，“分离的”核酸分子，诸如cDNA分子，当通过重组技术产生时可以实质上不含其它细胞物质或培养基，或当化学合成时实质上不含化学前体或其它化学品。举例来说，语言“实质上不含”包括具有小于约15％、10％、5％、2％、1％、0.5％或0.1％(特别是小于约10％)的其它物质，例如细胞物质、培养基、其它核酸分子、化学前体和/或其它化学品的多核苷酸或核酸分子的制剂。在一个特定实施方案中，分离或纯化编码本文所描述的抗体的核酸分子。
在特定方面，本文提供了包含编码免疫特异性地结合至GITR多肽(例如，人类GITR)并且包含如本文所描述的氨基酸序列的抗体或其抗原结合片段，以及与这类抗体竞争结合至GITR多肽(例如，以剂量依赖性方式)或结合至这类抗体的相同表位的抗体的核苷酸序列的多核苷酸。
在某些方面，本文提供了包含编码本文所描述的抗体的轻链或重链的核苷酸序列的多核苷酸。多核苷酸可以包含编码包含本文所描述的抗体的VL FR和CDR(参看例如表1和3)的轻链的核苷酸序列。多核苷酸可以包含编码包含本文所描述的抗体的VH FR和CDR(参看例如表2和4)的重链的核苷酸序列。在特定实施方案中，本文所描述的多核苷酸编码包含选自由SEQ ID NO:202、204、205、207、208以及400-518组成的群组的氨基酸序列的VL域。在特定实施方案中，本文所描述的多核苷酸编码包含SEQ ID NO:519的氨基酸序列的VL域。在特定实施方案中，本文所描述的多核苷酸编码包含选自由SEQ ID NO:201、203、206以及215-389组成的群组的氨基酸序列的VH域。在特定实施方案中，本文所描述的多核苷酸编码包含抗体231-32-15、Hum231#1或Hum231#2中的任一者的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:202、207或208)的VL域。在特定实施方案中，本文所描述的多核苷酸编码包含抗体231-32-15、Hum231#1或Hum231#2中的任一者的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:201或206)的VH域。在特定实施方案中，本文所描述的多核苷酸编码包含抗体231-32-15、Hum231#1或Hum231#2中的任一者的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:201-202和/或206-208)的VL域和VH域。
在特定实施方案中，本文提供了包含编码包含三个VL链CDR，例如含有本文所描述的抗体中的任一者的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3(例如，参看表1，例如表1的一行中的VLCDR)的抗GITR抗体的核苷酸序列的多核苷酸。在特定实施方案中，本文提供了包含三个VH链CDR，例如含有本文所描述的抗体中的任一者的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3(例如，参看表2，例如表2的一行中的VH CDR)的多核苷酸。在特定实施方案中，本文提供了包含编码包含三个VH链CDR，例如含有本文所描述的抗体中的任一者的VL CDR1、VL CDR2以及VLCDR3(例如，参看表1，例如表1的一行中的VL CDR)和三个VH链CDR，例如含有本文所描述的抗体中的任一者的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3(例如，参看表2，例如表2的一行中的VHCDR)的抗GITR抗体的核苷酸序列的多核苷酸。在特定实施方案中，本文所描述的多核苷酸编码抗体231-32-15、Hum231#1或Hum231#2中的任一者的VL CDR(例如，SEQ ID NO:16、17或18)。在特定实施方案中，本文所描述的多核苷酸编码抗体231-32-15、Hum231#1或Hum231#2中的任一者的VH CDR(例如，SEQ ID NO:13、14或15)。在特定实施方案中，本文所描述的多核苷酸编码抗体231-32-15、Hum231#1或Hum231#2中的任一者的VL CDR和VH CDR(例如，SEQID NO:13-18)。
在特定实施方案中，本文提供了包含编码包含VL域，例如含有包含本文所描述的氨基酸序列的FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4(例如，参看表1和3，例如由表格中的名称鉴别的特定抗体的VL CDR和VLFR)的抗GITR抗体的核苷酸序列的多核苷酸。在特定实施方案中，本文提供了包含编码包含VH域，例如含有包含本文所描述的氨基酸序列的FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4(例如，参看表2和4，例如由表格中的名称鉴别的特定抗体的VHCDR和VH FR)的抗GITR抗体的核苷酸序列的多核苷酸。
在某些实施方案中，本文所描述的多核苷酸包含编码包含有包含本文所描述的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:202、204、205、207、208以及400-518或SEQ ID NO:519)的轻链可变区的本文所提供的抗体的核苷酸序列，其中抗体免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)。在某个实施方案中，本文所描述的多核苷酸包含编码包含有包含本文所描述的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:207或208)的轻链可变区的本文所提供的抗体Hum231#1或Hum231#2或Hum231#2w的核苷酸序列。
在某些实施方案中，本文所描述的多核苷酸包含编码包含有包含本文所描述的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:201、203、206以及215-389)的重链可变区的本文所提供的抗体的核苷酸序列，其中抗体免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)。在某个实施方案中，本文所描述的多核苷酸包含编码包含有包含本文所描述的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:206)的重链可变区的本文所提供的抗体Hum231#1、Hum231#2或Hum231#2w的核苷酸序列。
在某些方面，多核苷酸包含编码包含有包含具有本文所描述的氨基酸序列的一个或多个VL FR(例如，参看表3，例如表格的一行中的构架区)的VL域的本文所描述的抗体的核苷酸序列，其中抗体免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)。在某些方面，多核苷酸包含编码包含有包含具有本文所描述的氨基酸序列的一个或多个VH FR(例如，参看表4，例如表格的一行中的构架区)的VH域的本文所描述的抗体的核苷酸序列，其中抗体免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)。
在特定实施方案中，本文所提供的多核苷酸包含编码本文所描述的抗体的核苷酸序列，这种抗体包含：作为人类构架区的构架区(例如，VL域和VH域的构架区)，其中抗体免疫特异性地结合GITR(例如，人类GITR)。在某些实施方案中，本文所提供的多核苷酸包含编码上述章节5.1中所描述的抗体或其片段(例如，CDR或可变域)的核苷酸序列。
在特定方面，本文提供了一种包含编码包含轻链和重链，例如独立的轻链和重链的抗体的核苷酸序列的多核苷酸。关于轻链，在一个特定实施方案中，本文所提供的多核苷酸包含编码κ轻链的核苷酸序列。在另一个特定实施方案中，本文所提供的多核苷酸包含编码λ轻链的核苷酸序列。在另一个特定实施方案中，本文所提供的多核苷酸包含编码包含人类κ轻链或人类λ轻链的本文所描述的抗体的核苷酸序列。在一个特定实施方案中，本文所提供的多核苷酸包含编码免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体的核苷酸序列，其中抗体包含轻链，并且其中VL域的氨基酸序列可以包含本文所描述的任何氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:202、204、205、207、208以及400-518或SEQ ID NO:519)，并且其中轻链的恒定区包含人类κ轻链恒定区的氨基酸序列。在另一个特定实施方案中，本文所提供的多核苷酸包含编码免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)并且包含轻链的本文所描述的抗体的核苷酸序列，其中VL域的氨基酸序列可以包含本文所描述的任何氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:202、204、205、207、208以及400-518或SEQ ID NO:519)，并且其中轻链的恒定区包含人类λ轻链恒定区的氨基酸序列。举例来说，人类恒定区序列可以是美国专利号5,693,780中所描述的那些。
在一个特定实施方案中，本文所提供的多核苷酸包含编码免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体的核苷酸序列，其中抗体包含重链，其中VH域的氨基酸序列可以包含本文所描述的任何氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:201、203、206以及215-389)，并且其中重链的恒定区包含人类γ重链恒定区的氨基酸序列。
在某个实施方案中，本文所提供的多核苷酸包含编码免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体(例如，Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107，诸如对于VH域是SEQ ID NO:209或800-974，或对于VL域是SEQ ID NO:210、211或1001-1126)的VH域和/或VL域的核苷酸序列。在某个实施方案中，本文所提供的多核苷酸包含编码免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体(例如，Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161，诸如对于VH域是SEQ ID NO:209或800-974，或对于VL域是SEQ ID NO:210、211或1000-1118)的VH域和/或VL域的核苷酸序列。在某个实施方案中，本文所提供的多核苷酸包含编码抗体Hum231#1或Hum231#(例如，SEQ ID NO:209-211)的VH域和/或VL域的核苷酸序列。
在另一个特定实施方案中，本文所提供的多核苷酸包含编码免疫特异性地结合GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体(或其抗原结合片段)的核苷酸序列，其中抗体包含有包含本文所描述的任何氨基酸序列的VL域和VH域，并且其中恒定区包含人类IgG1(例如，同种异型1、17或3)或人类IgG4的恒定区的氨基酸序列。
在一个特定实施方案中，本文提供了包含编码本文所指定(参看例如表1-4)的抗GITR抗体或其抗原结合片段或域，例如抗体Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160、pab2161或Hum231#2w的核苷酸序列的多核苷酸。
本文还提供了例如通过密码子/RNA优化、用异源信号序列置换以及消除mRNA不稳定元件而优化的编码抗GITR抗体或其片段的多核苷酸。通过在mRNA中引入密码子变化和/或消除抑制区产生用于重组表达的编码抗GITR抗体或其片段(例如，轻链、重链、VH域或VL域)的优化核酸的方法可以通过相应地修改例如美国专利号5,965,726、6,174,666、6,291,664、6,414,132以及6,794,498中所描述的优化方法来进行。举例来说，可以使RNA内的潜在剪接位点和不稳定元件(例如，A/T或A/U富含元件)突变而不改变由核酸序列编码的氨基酸以增加用于重组表达的RNA的稳定性。变异利用遗传密码的简并，例如，使用相同氨基酸的替代性密码子。在一些实施方案中，可能需要改变一个或多个密码子以编码保守突变，例如，具有与原始氨基酸类似的化学结构和特性和/或功能的类似氨基酸。这类方法可以使抗GITR抗体或其片段的表达相对于由尚未优化的多核苷酸编码的抗GITR抗体的表达增加至少1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍或更多倍。
在某些实施方案中，编码本文所描述的抗GITR抗体或其片段(例如，VL域和/或VH域)的优化多核苷酸序列可以杂交至编码本文所描述的抗GITR抗体或其片段(例如，VL域和/或VH域)的未优化多核苷酸序列的反义(例如，互补)多核苷酸。在特定实施方案中，编码本文所描述的抗GITR抗体或片段的优化核苷酸序列在高严格度条件下杂交至编码本文所描述的抗GITR抗体或其片段的未优化多核苷酸序列的反义多核苷酸。在一个特定实施方案中，编码本文所描述的抗GITR抗体或其片段的优化核苷酸序列在高严格度、中等或更低严格度杂交条件下杂交至编码本文所描述的抗GITR抗体或其片段的未优化核苷酸序列的反义多核苷酸。已经描述了关于杂交条件的信息，参看例如美国专利申请公布号US2005/0048549(例如，第72-73页)，其以引用的方式并入本文中。
可以通过本领域中已知的任何方法获得多核苷酸，并且测定多核苷酸的核苷酸序列。可以使用本领域中所熟知的方法测定编码本文所描述的抗体，例如表1-4中所描述的抗体和这些抗体的修饰型式的核苷酸序列，即，以产生编码抗体的核酸的方式组装已知编码特定氨基酸的核苷酸密码子。这种编码抗体的多核苷酸可以从化学合成的寡核苷酸组装(例如，如Kutmeier G等,(1994),《生物技术(BioTechniques)》17:242-6中所描述)，其简单地说涉及合成含有编码抗体的序列部分的重叠寡核苷酸，粘接和接合那些寡核苷酸，以及然后通过PCR扩增接合的寡核苷酸。
或者，可以使用本领域中所熟知的方法(例如，PCR和其它分子克隆方法)从来自适合来源(例如，杂交瘤)的核酸产生编码本文所描述的抗体的多核苷酸。举例来说，可以使用获自产生所关注的抗体的杂交瘤细胞的基因组DNA进行使用可杂交至已知序列的3'和5'末端的合成引物的PCR扩增。这类PCR扩增方法可以用于获得包含编码抗体的轻链和/或重链的序列的核酸。这类PCR扩增方法可以用于获得包含编码抗体的可变轻链区和/或可变重链区的序列的核酸。可以将扩增的核酸克隆至载体中用于在宿主细胞中表达并且用于进一步克隆，例如，以产生嵌合和人源化抗体。
如果含有编码特定抗体的核酸的克隆体不可用，但抗体分子的序列是已知的，那么编码免疫球蛋白的核酸可以化学合成或获自适合的来源(例如，从表达抗体的任何组织或细胞，诸如选择用于表达本文所描述的抗体的杂交瘤细胞产生的抗体cDNA文库或cDNA文库，或从这类组织或细胞分离的核酸，优选地是多聚A+RNA)，这是通过使用可杂交至序列的3'和5'末端的合成引物的PCR扩增或通过使用对特定基因序列具特异性的寡核苷酸探针克隆以鉴别例如来自编码抗体的cDNA文库的cDNA克隆体。然后可以使用本领域中所熟知的任何方法将通过PCR产生的扩增核酸克隆至可复制克隆载体中。
编码本文所描述的抗GITR抗体的DNA可以使用常规程序(例如，通过使用能够特异性地结合至编码抗GITR抗体的重和轻链的基因的寡核苷酸探针)而容易地分离并测序。杂交瘤细胞可以充当这种DNA的来源。一旦分离，即可以将DNA置于表达载体中，然后将其转染至宿主细胞中，诸如大肠杆菌细胞、猿COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞(例如，来自CHO GSSystemTM(Lonza)的CHO细胞)或不以其它方式产生免疫球蛋白的骨髓瘤细胞，以获得重组宿主细胞中抗GITR抗体的合成。
为了产生全抗体，包括VH或VL核苷酸序列、限制位点以及用以保护限制位点的侧翼序列的PCR引物可以用于在scFv克隆体中扩增VH或VL序列。利用本领域的技术人员所知的克隆技术，可以将PCR扩增的VH域克隆至表达重链恒定区，例如人类γ4恒定区的载体中，并且可以将PCR扩增的VL域克隆至表达轻链恒定区，例如人类κ或λ恒定区的载体中。在某些实施方案中，用于表达VH或VL域的载体包含EF-1α启动子，分泌信号，用于可变域、恒定域的克隆位点，以及选择标志物，诸如新霉素。还可以将VH和VL域克隆至表达必要的恒定区的一个载体中。然后使用本领域的技术人员所知的技术将重链转换载体和轻链转换载体共转染至细胞系中以产生表达全长抗体，例如IgG的稳定或暂态细胞系。
还可以例如通过用人类重和轻链恒定域的编码序列取代鼠类序列，或通过使非免疫球蛋白多肽的编码序列的全部或一部分共价连接至免疫球蛋白编码序列来修饰DNA。
还提供了在高严格度、中等或更低严格度杂交条件下杂交至编码本文所描述的抗体的多核苷酸的多核苷酸。在特定实施方案中，本文所描述的多核苷酸在高严格度、中等或更低严格度杂交条件下杂交至编码本文所提供的VH域(例如，SEQ ID NO:201、203、206以及215-389)和/或VL域(例如，202、204、205、207、208以及400-518或SEQ ID NO:519)的多核苷酸。
杂交条件已经在本领域中描述并且为本领域的技术人员所知。举例来说，在严格条件下杂交可以涉及在约45℃下在6x氯化钠/柠檬酸钠(SSC)中杂交至过滤器结合的DNA，随之在约50-65℃下在0.2xSSC/0.1％SDS中进行一次或多次洗涤；在高度严格条件下杂交可以涉及在约45℃下在6xSSC中杂交至过滤器结合的核酸，随之在约68℃下在0.1×SSC/0.2％SDS中进行一次或多次洗涤。在其它严格杂交条件下杂交为本领域的技术人员所知并且已有描述，参看例如Ausubel FM等编,(1989)《分子生物学实验指南(Current Protocolsin Molecular Biology)》,第I卷,Green Publishing Associates,Inc.和John Wiley&Sons,Inc.,New York第6.3.1-6.3.6和2.10.3页。
5.2.2细胞和载体
在某些方面，本文提供了表达(例如，以重组方式)特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体(或其抗原结合片段)的细胞(例如，宿主细胞)以及相关多核苷酸和表达载体。本文提供了用于在宿主细胞中，优选地在哺乳动物细胞中重组表达的包含有包含编码抗GITR抗体或片段的核苷酸序列的多核苷酸的载体(例如，表达载体)。本文还提供了用于重组表达本文所描述的抗GITR抗体(例如，人类或人源化抗体)的包含这类载体的宿主细胞。在一个特定方面，本文提供了产生本文所描述的抗体的方法，其包括从宿主细胞表达这种抗体。
特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体(例如，本文所描述的全长抗体、抗体的重和/或轻链、或单链抗体)的重组表达涉及含有编码抗体的多核苷酸的表达载体的构建。一旦已经获得编码本文所描述的抗体分子、抗体的重和/或轻链或其片段(例如，重和/或轻链可变域)的多核苷酸，即可以通过重组DNA技术使用本领域中所熟知的技术产生用于产生抗体分子的载体。因此，本文描述了通过表达含有编码核苷酸序列的抗体或抗体片段(例如，轻链或重链)的多核苷酸制备蛋白质的方法。本领域的技术人员所熟知的方法可以用于构建含有抗体或抗体片段(例如，轻链或重链)编码序列以及适当的转录和翻译控制信号的表达载体。这些方法包括例如体外重组DNA技术、合成技术以及体内遗传重组。还提供了包含编码本文所描述的抗体分子、抗体的重或轻链、抗体或其片段的重或轻链可变域、或重或轻链CDR的核苷酸序列的可复制载体，其可操作地连接至启动子。这类载体可以例如包括编码抗体分子的恒定区的核苷酸序列(参看例如国际公布号WO 86/05807和WO 89/01036；以及美国专利号5,122,464)，并且可以将抗体的可变域克隆至这种载体中用于整个重链、整个轻链、或整个重链与轻链的表达。
可以通过常规技术将表达载体转移至细胞(例如，宿主细胞)中，并且然后可以通过常规技术培养所得细胞以产生本文所描述的抗体(例如，包含抗体Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者的CDR的抗体)或其片段。因此，本文提供了含有编码本文所描述的抗体或其片段、或其重或轻链、或其片段、或本文所描述的单链抗体(例如，包含抗体Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者的CDR的抗体)的多核苷酸的宿主细胞，这种多核苷酸可操作地连接至启动子用于在宿主细胞中表达这类序列。在某些实施方案中，如下文所详述，为了表达双链抗体，可以将编码重链与轻链的载体个别地在宿主细胞中共表达用于整个免疫球蛋白分子的表达。在某些实施方案中，宿主细胞含有包含编码本文所描述的抗体(例如，包含抗体Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者的CDR的抗体)或其片段的重链与轻链的多核苷酸的载体。在特定实施方案中，宿主细胞含有两个不同的载体，第一载体包含编码本文所描述的抗体(例如，包含抗体Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者的CDR的抗体)或其片段的重链或重链可变区的多核苷酸，并且第二载体包含编码本文所描述的抗体(例如，包含抗体Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者的CDR的抗体)或其片段的轻链或轻链可变区的多核苷酸。在其它实施方案中，第一宿主细胞包含有包含编码本文所描述的抗体(例如，包含抗体Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者的CDR的抗体)或其片段的重链或重链可变区的多核苷酸的第一载体，并且第二宿主细胞包含有包含编码本文所描述的抗体(例如，包含抗体Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者的CDR的抗体)的轻链或轻链可变区的多核苷酸的第二载体。在特定实施方案中，由第一细胞表达的重链/重链可变区与第二细胞的轻链/轻链可变区缔合以形成本文所描述的抗GITR抗体(例如，包含抗体Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者的CDR的抗体)或其抗原结合片段。在某些实施方案中，本文提供了包含这种第一宿主细胞和这种第二宿主细胞的宿主细胞的群体。
在一个特定实施方案中，本文提供了载体的群体，其包含有包含编码本文所描述的抗GITR抗体(例如，包含抗体Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者的CDR的抗体)的轻链/轻链可变区的多核苷酸的第一载体，和包含编码本文所描述的抗GITR抗体(例如，包含抗体Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者的CDR的抗体)的重链/重链可变区的多核苷酸的第二载体。
多种宿主-表达载体系统可以用于表达本文所描述的抗体分子(例如，包含抗体Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者的CDR的抗体)(参看例如美国专利号5,807,715)。这类宿主-表达系统代表可以产生所关注的编码序列并且随后纯化的媒介，而且代表当用适当的核苷酸编码序列转化或转染时可以原位表达本文所描述的抗体分子的细胞。这些包括(但不限于)微生物，诸如用含有抗体编码序列的重组噬菌体DNA、质粒DNA或粘粒DNA表达载体转化的细菌(例如，大肠杆菌和枯草芽孢杆菌(B.subtilis))；用含有抗体编码序列的重组酵母表达载体转化的酵母(例如，毕赤酵母(Saccharomyces Pichia))；用含有抗体编码序列的重组病毒表达载体(例如，杆状病毒)感染的昆虫细胞系统；用重组病毒表达载体(例如，花椰菜花叶病毒，CaMV；烟草花叶病毒，TMV)感染或用含有抗体编码序列的重组质粒表达载体(例如，Ti质粒)转化的植物细胞系统(例如，绿藻，诸如莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii))；或具有含有来源于哺乳动物细胞的基因组的启动子(例如，金属硫蛋白启动子)或来自哺乳动物病毒的启动子(例如，腺病毒晚期启动子；牛痘病毒7.5K启动子)的重组表达构建体的哺乳动物细胞系统(例如，COS(例如，COS1或COS)、CHO、BHK、MDCK、HEK 293、NS0、PER.C6、VERO、CRL7O3O、HsS78Bst、HeLa和NIH 3T3、HEK-293T、HepG2、SP210、R1.1、B-W、L-M、BSC1、BSC40、YB/20以及BMT10细胞)。在一个特定实施方案中，用于表达本文所描述的抗体(例如，包含抗体Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者的CDR的抗体)或其抗原结合片段的细胞是CHO细胞，例如，来自CHO GS SystemTM(Lonza)的CHO细胞。在一个特定实施方案中，用于表达本文所描述的抗体的细胞是人类细胞，例如，人类细胞系。在一个特定实施方案中，哺乳动物表达载体是pOptiVECTM或pcDNA3.3。在一个特定实施方案中，尤其对于整个重组抗体分子的表达，诸如大肠杆菌(Escherichia coli)的细菌细胞或真核细胞(例如，哺乳动物细胞)用于表达重组抗体分子。举例来说，与诸如来自人类巨细胞病毒的主要即刻早期基因启动子元件的载体联合的诸如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞的哺乳动物细胞是用于抗体的有效表达系统(Foecking MK和Hofstetter H(1986)《基因(Gene)》45:101-5；和Cockett MI等,(1990)《生物技术(Biotechnology)》8(7):662-7)。在某些实施方案中，本文所描述的抗体由CHO细胞或NS0细胞产生。在一个特定实施方案中，编码免疫特异性地结合GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体的核苷酸序列的表达由组成性启动子、可诱导启动子或组织特异性启动子调控。
在细菌系统中，可以有利地选择许多表达载体，这取决于所表达的抗体分子预期的用途。举例来说，当有待产生大量的这种抗体时，为了产生抗体分子的医药组合物，引导易于纯化的高水平融合蛋白产物的表达的载体可能是需要的。这类载体包括(但不限于)大肠杆菌表达载体pUR278(Ruether U和Mueller-Hill B(1983)《欧洲分子生物学组织期刊(EMBO J)》2:1791-1794)，其中抗体编码序列可以个别地与lac Z编码区框内接合至载体中以便产生融合蛋白；pIN载体(Inouye S和Inouye M(1985)《核酸研究(Nuc Acids Res)》13:3101-3109；Van Heeke G和Schuster SM(1989)《生物化学杂志(J Biol Chem)》24:5503-5509)；等等。举例来说，pGEX载体还可以用于用谷胱甘肽5-转移酶(GST)将外来多肽表达为融合蛋白。一般来说，这类融合蛋白是可溶性的并且可以通过吸附并且结合至基质谷胱甘肽琼脂糖珠粒，随之在游离谷胱甘肽存在下洗脱而容易地从溶解的细胞纯化。设计pGEX载体以包括凝血酶或因子Xa蛋白酶裂解位点以便可以从GST部分释放克隆的靶基因产物。
在昆虫系统中，举例来说，苜蓿银纹夜蛾(Autographa californica)核型多角体病毒(AcNPV)可以用作载体以表达外来基因。病毒在草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞中生长。可以将抗体编码序列个别地克隆至病毒的非必需区(例如，多角体基因)中并且置于AcNPV启动子(例如，多角体启动子)的控制下。
在哺乳动物宿主细胞中，可以利用许多基于病毒的表达系统。在腺病毒用作表达载体的情况下，可以将所关注的抗体编码序列接合至腺病毒转录/翻译控制复合物，例如，晚期启动子和三联体前导序列。然后可以通过体外或体内重组将这个嵌合基因插入腺病毒基因组中。插入病毒基因组的非必需区(例如，区El或E3)中将得到活的并且能够在感染的宿主中表达抗体分子的重组病毒(例如，参看Logan J和Shenk T(1984)《美国国家科学院院刊(PNAS)》81(12):3655-9)。还可能需要特定起始信号用于插入的抗体编码序列的有效翻译。这些信号包括ATG起始密码子和相邻序列。此外，起始密码子必须与所需编码序列的阅读框同相以确保整个插入物的翻译。这些外源翻译控制信号和起始密码子可以具有多种来源，即天然的与合成的。表达的效率可以通过包括适当的转录增强子元件、转录终止子等等来增强(参看例如Bitter G等,(1987)《酶学方法(Methods Enzymol)》.153:516-544)。
另外，可以选择调节插入的序列的表达，或以所需的特定方式修饰并加工基因产物的宿主细胞株。蛋白质产物的这类修饰(例如，糖基化)和加工(例如，裂解)对于蛋白质的功能可能是重要的。不同宿主细胞具有特征性和特定的机制用于蛋白质和基因产物的翻译后加工和修饰。可以选择适当的细胞系或宿主系统以确保所表达的外来蛋白质的正确修饰和加工。为此目的，可以使用具有用于初级转录物的适当加工、基因产物的糖基化和磷酸化的细胞机器的真核宿主细胞。这类哺乳动物宿主细胞包括(但不限于)CHO、VERO、BHK、Hela、MDCK、HEK 293、NIH3T3、W138、BT483、Hs578T、HTB2、BT2O和T47D、NS0(并不内源产生任何免疫球蛋白链的鼠类骨髓瘤细胞系)、CRL7O3O、COS(例如，COS1或COS)、PER.C6、VERO、HsS78Bst、HEK-293T、HepG2、SP210、R1.1、B-W、L-M、BSC1、BSC40、YB/20、BMT10以及HsS78Bst细胞。在某些实施方案中，本文所描述的抗GITR抗体(例如，包含抗体Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者的CDR的抗体)在哺乳动物细胞，诸如CHO细胞中产生。
在一个特定实施方案中，本文所描述的抗体或其抗原结合片段具有降低的岩藻糖含量或无岩藻糖含量。这类抗体可以使用本领域的技术人员所知的技术产生。举例来说，抗体可以在岩藻糖基化的能力有缺陷或缺乏的细胞中表达。在一个特定实例中，具有α1,6-岩藻糖基转移酶的两个等位基因敲除的细胞系可以用于产生具有降低的岩藻糖含量的抗体或其抗原结合片段。系统(Lonza)是可以用于产生具有降低的岩藻糖含量的抗体或其抗原结合片段的这种系统的一个实例。
对于重组蛋白的长期、高产量生产，可以产生稳定表达细胞。举例来说，可以工程改造稳定表达本文所描述的抗GITR抗体(例如，包含抗体Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者的CDR的抗体)或其抗原结合片段的细胞系。在特定实施方案中，本文所提供的细胞稳定表达轻链/轻链可变域和重链/重链可变域，其缔合形成本文所描述的抗体(例如，包含抗体Hum231#1、Hum231#2、pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、231-32-15或抗体1-107或抗体pab2159、pab2160或pab2161中的任一者的CDR的抗体)或其抗原结合片段。
在某些方面，胜于使用含有病毒复制起点的表达载体，可以用由适当的表达控制元件(例如，启动子、增强子、序列、转录终止子、多腺苷酸化位点等等)和可选择标志物控制的DNA转化宿主细胞。在引入外来DNA/多核苷酸之后，可以使工程改造的细胞在富集的培养基中生长1-2天，并且然后切换至选择性培养基。重组质粒中的可选择标志物赋予对选择的抗性并且使细胞稳定地将质粒整合至其染色体中并且生长形成集落，继而可以将集落克隆并扩展至细胞系中。这种方法可以有利地用于工程改造表达本文所描述的抗GITR抗体或其片段的细胞系。这类工程改造的细胞系可以特别适用于与抗体分子直接或间接相互作用的组合物的筛选和评价。
可以使用许多选择系统，包括(但不限于)单纯疱疹病毒胸苷激酶(Wigler M等,(1977)《细胞(Cell)》11(1):223-32)、次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核酸转移酶(Szybalska EH和Szybalski W(1962)《美国国家科学院院刊(PNAS)》48(12):2026-2034)以及腺嘌呤磷酸核糖转移酶(Lowy I等,(1980)《细胞(Cell)》22(3):817-23)基因可以分别在tk、hgprt或aprt细胞中采用。而且，抗代谢物抗性可以用作选择以下基因的基础：dhfr，其赋予对甲氨蝶呤(methotrexate)的抗性(Wigler M等,(1980)《美国国家科学院院刊(PNAS)》77(6):3567-70；O'Hare K等,(1981)《美国国家科学院院刊(PNAS)》78:1527-31)；gpt，其赋予对霉酚酸的抗性(Mulligan RC和Berg P(1981)《美国国家科学院院刊(PNAS)》78(4):2072-6)；neo，其赋予对氨基糖苷G-418的抗性(Wu GY和Wu CH(1991)《生物疗法(Biotherapy)》3:87-95；Tolstoshev P(1993)《药理学和毒理学年度综述(Ann Rev Pharmacol Toxicol)》32:573-596；Mulligan RC(1993)《科学(Science)》260:926-932；以及Morgan RA和Anderson WF(1993)《生物化学年度综述(Ann Rev Biochem)》62:191-217；Nabel GJ和Felgner PL(1993)《生物技术趋势(Trends Biotechnol)》11(5):211-5)；以及hygro，其赋予对潮霉素的抗性(Santerre RF等,(1984)《基因(Gene)》30(1-3):147-56)。可以常规地应用重组DNA技术的领域中通常已知的方法以选择所需的重组克隆体，并且这类方法描述于例如Ausubel FM等,(编),《分子生物学实验指南(Current Protocols in MolecularBiology)》,John Wiley&Sons,NY(1993)；Kriegler M,《基因转移和表达：实验室手册(GeneTransfer and Expression,A Laboratory Manual)》,Stockton Press,NY(1990)；以及第12和13章,Dracopoli NC等,(编),《人类遗传学实验指南(Current Protocols in HumanGenetics)》,John Wiley&Sons,NY(1994)；Colbère-Garapin F等,(1981)《分子生物学杂志(J Mol Biol)》150:1-14中，其以全文引用的方式并入本文中。
抗体分子的表达水平可以通过载体扩增而增加(对于综述，参看Bebbington CR和Hentschel CCG,《基于在DNA克隆中用于哺乳动物细胞中克隆基因的表达的基因扩增的载体的用途(The use of vectors based on gene amplification for the expression ofcloned genes in mammalian cells in DNA cloning)》,第3卷(Academic Press,NewYork,1987))。当表达抗体的载体系统中的标志物可扩增时，存在于宿主细胞培养物中的抑制剂水平的增加将增加标志物基因的拷贝数。因为扩增区与抗体基因相关，所以抗体的产生也将增加(Crouse GF等,(1983)《分子细胞生物学(Mol Cell Biol)》3:257-66)。
宿主细胞可以与两个或更多个本文所描述的表达载体共转染，第一载体编码源自重链的多肽并且第二载体编码源自轻链的多肽。两个载体可以含有相同的可选择标志物，其能够同等表达重和轻链多肽。宿主细胞可以与不同量的两个或更多个表达载体共转染。举例来说，可以按第一表达载体与第二表达载体的以下比率中的任一者转染宿主细胞：1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:12、1:15、1:20、1:25、1:30、1:35、1:40、1:45或1:50。
或者，可以使用编码并且能够表达重链与轻链多肽的单一载体。在这类情形中，轻链应置于重链之前以避免过量的毒性游离重链(Proudfoot NJ(1986)《自然(Nature)》322:562-565；和G(1980)《美国国家科学院院刊(PNAS)》77:2197-2199)。重和轻链的编码序列可以包含cDNA或基因组DNA。表达载体可以是单顺反子的或多顺反子的。多顺反子核酸构建体可以编码2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或更多个，或在2-5个、5-10个或10-20个范围内的基因/核苷酸序列。举例来说，双顺反子核酸构建体可以按以下顺序包含：启动子、第一基因(例如，本文所描述的抗体的重链)以及第二基因(例如，本文所描述的抗体的轻链)。在这种表达载体中，两个基因的转录可以由启动子驱动，而来自第一基因的mRNA的翻译可以通过帽依赖性扫描机制并且来自第二基因的mRNA的翻译可以通过帽非依赖性机制，例如，通过IRES。
一旦已经通过重组表达产生本文所描述的抗体分子，即可以通过本领域中已知用于纯化免疫球蛋白分子的任何方法纯化，例如，通过色谱法(例如，离子交换色谱法，亲和色谱法、特别是在蛋白A之后对于特异性抗原通过亲和色谱法，以及筛分柱色谱法)、离心、差异性溶解度，或通过用于蛋白质纯化的任何其它标准技术。此外，本文所描述的抗体可以融合至本文所描述或在本领域中以其它方式已知有助于纯化的异源多肽序列。
在特定实施方案中，本文所描述的抗体或其抗原结合片段经过分离或纯化。一般来说，分离抗体是实质上不含与分离抗体具有不同抗原特异性的其它抗体。举例来说，在一个特定实施方案中，本文所描述的抗体的制剂实质上不含细胞物质和/或化学前体。语言“实质上不含细胞物质”包括如下抗体制剂：其中抗体与分离或重组产生其的细胞的细胞组分分离。因此，实质上不含细胞物质的抗体包括具有小于约30％、20％、10％、5％、2％、1％、0.5％或0.1％(以干重计)的异源蛋白(本文中也称作“污染蛋白”)和/或抗体变体，例如抗体的不同翻译后修饰形式或抗体的其它不同型式(例如，抗体片段)的抗体制剂。当重组产生抗体时，其一般也实质上不含培养基，即，培养基代表小于约20％、10％、2％、1％、0.5％或0.1％的蛋白制剂体积。当通过化学合成产生抗体时，其一般实质上不含化学前体或其它化学品，即，其与蛋白质合成中所涉及的化学前体或其它化学品分离。因此，这类抗体制剂除了所关注的抗体之外具有小于约30％、20％、10％或5％(以干重计)的化学前体或化合物。在一个特定实施方案中，本文所描述的抗体经过分离或纯化。
5.3医药组合物
本文提供了包含在生理学上可接受的载剂、赋形剂或稳定剂中具有所需纯度的本文所描述的抗体或其抗原结合片段的组合物(《雷明顿氏医药科学(Remington'sPharmaceutical Sciences)》(1990)Mack Publishing Co.,Easton,PA)。可接受的载剂、赋形剂或稳定剂在所采用的剂量和浓度下对接受者是无毒的，并且包括缓冲剂，诸如磷酸盐、柠檬酸盐以及其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(诸如十八烷基二甲基苯甲基氯化铵；氯化六烃季铵(hexamethonium chloride)；氯化苯甲烃铵(benzalkonium chloride)、苄索氯铵(benzethonium chloride)；苯酚、丁醇或苯甲醇；对羟基苯甲酸烷酯，诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；以及间甲酚)；低分子量(小于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖以及其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖，诸如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐平衡离子，诸如钠；金属复合物(例如，Zn-蛋白质复合物)；和/或无毒表面活性剂，诸如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。
在一个特定实施方案中，医药组合物包含医药学上可接受的载剂中的本文所描述的抗体或其抗原结合片段，以及任选地一种或多种额外预防或治疗剂。在一个特定实施方案中，医药组合物包含医药学上可接受的载剂中的有效量的本文所描述的抗体或其抗原结合片段，以及任选地一种或多种额外预防或治疗剂。对于预防或治疗剂的实例，参看下文的章节5.4。在一些实施方案中，抗体是医药组合物中所包括的唯一活性成分。本文所描述的医药组合物可以适用于增强、诱导或活化GITR活性并且治疗病状，诸如癌症和感染性疾病。
肠道外制剂中所用的医药学上可接受的载剂包括水性媒剂、非水性媒剂、抗微生物剂、等张剂、缓冲剂、抗氧化剂、局部麻醉剂、悬浮和分散剂、乳化剂、掩蔽或螯合剂以及其它医药学上可接受的物质。水性媒剂的实例包括氯化钠注射液、林格氏注射液(RingersInjection)、等张右旋糖注射液、无菌水注射液、右旋糖和乳酸化林格氏注射液。非水性肠道外媒剂包括植物来源的非挥发性油、棉籽油、玉米油、芝麻油以及花生油。可以将细菌抑制或真菌抑制浓度的抗微生物剂添加至包装于多剂量容器中的肠道外制剂中，这些抗微生物剂包括苯酚或甲酚、汞剂、苯甲醇、氯丁醇、对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯、硫柳汞(thimerosal)、氯化苯甲烃铵以及苄索氯铵。等张剂包括氯化钠和右旋糖。缓冲剂包括磷酸盐和柠檬酸盐。抗氧化剂包括硫酸氢钠。局部麻醉剂包括盐酸普鲁卡因(procainehydrochloride)。悬浮和分散剂包括羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素以及聚乙烯吡咯烷酮。乳化剂包括聚山梨醇酯80(80)。金属离子的掩蔽或螯合剂包括EDTA。医药载剂还包括用于水可混溶媒剂的乙醇、聚乙二醇以及丙二醇；以及用于pH调整的氢氧化钠、盐酸、柠檬酸或乳酸。
可以配制医药组合物用于任何途径施用于受试者。施用途径的特定实例包括鼻内、经口、经肺、经皮、皮内以及肠道外。本文还涵盖肠道外施用，特征在于皮下、肌肉内或静脉内注射。可注射液可以按常规形式制备成液体溶液或悬浮液，适合于在注射前溶解或悬浮于液体中的固体形式，或乳液。可注射液、溶液以及乳液还含有一种或多种赋形剂。适合的赋形剂是例如水、盐水、右旋糖、甘油或乙醇。另外，如有需要，有待施用的医药组合物还可以含有较少量的无毒辅助物质，诸如湿润或乳化剂、pH缓冲剂、稳定剂、溶解增强剂以及其它这类试剂，诸如乙酸钠、脱水山梨糖醇单月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯以及环糊精。
用于抗体的肠道外施用的制剂包括准备用于注射的无菌溶液；准备在临用前与溶剂组合的无菌干燥可溶性产品，诸如冻干粉末，包括皮下用片剂；准备用于注射的无菌悬浮液；准备在临用前与媒剂组合的无菌干燥不溶性产品；以及无菌乳液。溶液可以是水性或非水性的。
如果静脉内施用的话，那么适合的载剂包括生理盐水或磷酸盐缓冲盐水(PBS)，以及含有诸如葡萄糖、聚乙二醇和聚丙二醇以及其混合物的增稠和增溶剂的溶液。
如所描述制备包含抗体的表面混合物用于局部和全身施用。所得混合物可以是溶液、悬浮液、乳液等等，并且可以配制成乳膏、凝胶、软膏、乳液、溶液、酏剂、洗剂、悬浮液、酊剂、糊剂、泡沫、气雾剂、冲洗剂、喷雾、栓剂、绷带、皮肤贴片，或适合于表面施用的任何其它配方。
本文所描述的抗体或其抗原结合片段可以配制成用于表面施加的气雾剂，诸如通过吸入(参看例如美国专利号4,044,126、4,414,209以及4,364,923，其描述了用于递送适用于治疗发炎疾病，特别是哮喘的类固醇的气雾剂)。用于施用于呼吸道的这些配方可以呈用于喷雾器的气雾剂或溶液的形式，或作为用于吹入的微细粉末，单独或与诸如乳糖的惰性载剂组合。在这种情况下，配方的粒子将在一个实施方案中具有小于50微米、在一个实施方案中小于10微米的直径。
可以配制本文所描述的抗体或其抗原结合片段用于局部或表面施加，诸如用于以凝胶、乳膏以及洗剂的形式表面施加至皮肤和粘膜，诸如眼睛中，以及用于施加至眼睛或用于脑池内或脊柱内施加。表面施用预期用于经皮递送，而且用于施用于眼睛或粘膜，或用于吸入疗法。还可以施用单独或与其它医药学上可接受的赋形剂组合的抗体的鼻用溶液。
经皮贴片，包括离子电渗和电泳装置，为本领域的技术人员所熟知，并且可以用于施用抗体。举例来说，这类贴片在美国专利号6,267,983、6,261,595、6,256,533、6,167,301、6,024,975、6,010715、5,985,317、5,983,134、5,948,433以及5,860,957中公开。
在某些实施方案中，包含本文所描述的抗体或其抗原结合片段的医药组合物是冻干粉末，其可以重构用于作为溶液、乳液以及其它混合物施用。其还可以重构并配制成固体或凝胶。冻干粉末通过将本文所描述的抗体或其抗原结合片段或其医药学上可接受的衍生物溶解于适合的溶剂中来制备。在一些实施方案中，冻干粉末是无菌的。溶剂可以含有改善粉末或从粉末制备的重构溶液的稳定性或其它药理学组分的赋形剂。可以使用的赋形剂包括(但不限于)右旋糖、山梨糖醇、果糖、玉米糖浆、木糖醇、甘油、葡萄糖、蔗糖或其它适合的试剂。溶剂还可以含有缓冲剂，诸如柠檬酸盐、磷酸钠或磷酸钾，或本领域的技术人员所知的其它这种缓冲剂，在一个实施方案中，处于约中性pH下。在本领域的技术人员所知的标准条件下溶液的后续无菌过滤、随之冻干提供了所需的配方。在一个实施方案中，所得溶液将分配至小瓶中用于冻干。每个小瓶将含有化合物的单个剂量或多个剂量。冻干粉末可以在适当的条件下，诸如在约4℃至室温下储存。
用注射用水重构这种冻干粉末提供了用于肠道外施用的配方。为了重构，将冻干粉末添加至无菌水或其它适合的载剂中。精确量取决于所选的化合物。这种量可以凭经验确定。
还可以配制本文所描述的抗体或其抗原结合片段和本文所提供的其它组合物以靶向有待治疗的受试者的特定组织、受体或其它身体区域。许多这类靶向方法为本领域的技术人员所熟知。所有这类靶向方法在本文中预期用于本发明组合物中。对于靶向方法的非限制性实例，参看例如美国专利号6,316,652、6,274,552、6,271,359、6,253,872、6,139,865、6,131,570、6,120,751、6,071,495、6,060,082、6,048,736、6,039,975、6,004,534、5,985,307、5,972,366、5,900,252、5,840,674、5,759,542以及5,709,874。在一个特定实施方案中，本文所描述的抗体或其抗原结合片段靶向肿瘤。
有待用于体内施用的组合物可以是无菌的。这容易通过经由例如无菌滤膜过滤来实现。
5.4用途和方法
5.4.1治疗用途和方法
在一个方面，本文呈现了在受试者中调节一种或多种免疫功能或反应的方法，其包括向有需要的受试者施用本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段或其组合物。在一个特定方面，本文呈现了在受试者中活化、增强或诱导一种或多种免疫功能或反应的方法，其包括向有需要的受试者施用抗GITR抗体或其抗原结合片段或其组合物。在一个特定实施方案中，本文呈现了预防和/或治疗需要活化或增强一种或多种免疫功能或反应的疾病的方法，其包括向有需要的受试者施用本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段或其组合物。在其它特定实施方案中，这种方法包括组合疗法，其中将抗GITR抗体或其抗原结合片段与另一种疗法，诸如下文所描述的那些组合施用于受试者，以活化或增强一种或多种免疫功能或反应。在某些实施方案中，将抗GITR抗体或其抗原结合片段作为佐剂与抗原组合物组合施用。在某些实施方案中，抗原组合物包含癌症或肿瘤抗原(例如，白血病中的bcr/abl抗原、与子宫颈癌相关的致癌病毒的HPVE6和E7抗原、黑素瘤中或与黑素瘤相关的MAGE1和MZ2-E抗原、或乳癌中或与乳癌相关的MVC-1和HER-2抗原)。在一些实施方案中，抗原组合物包含来源于病原体的抗原(例如，病毒抗原、寄生虫抗原、细菌抗原或真菌抗原)。病毒抗原的实例包括流感病毒的核蛋白(NP)、HIV抗原(例如，HIV的gag蛋白、HIV外膜蛋白(例如，gp120和/或gp41)、HIV Nef蛋白、HIV Pol蛋白、HIV逆转录酶或HIV蛋白酶)、埃博拉病毒(Ebola virus)(EBOV)抗原(例如，EBOV NP或糖蛋白)、天花抗原、A型、B型或C型肝炎病毒抗原、人鼻病毒抗原、单纯疱疹病毒抗原、脊髓灰质炎病毒抗原、口蹄疫病毒(FMDV)抗原、狂犬病病毒抗原、轮状病毒抗原、柯萨奇病毒抗原以及人乳头状瘤病毒(HPV)抗原。细菌抗原的实例包括百日咳鲍特菌(Bordetella pertussis)(例如，P69蛋白和丝状血球凝集素(FHA)抗原)、霍乱弧菌(Vibrio cholerae)、炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis)以及大肠杆菌抗原，诸如大肠杆菌不耐热毒素B亚单位(LT-B)、大肠杆菌K88抗原以及肠毒性大肠杆菌抗原。
如本文中所使用，术语“组合”指的是多于一种疗法(例如，一种或多种预防和/或治疗剂)的使用。术语“组合”的使用并不限制将疗法施用于患有疾病或病症的受试者的顺序，或施用途径。第一疗法(例如，预防或治疗剂)可以在将第二疗法(例如，预防或治疗剂)施用于患有疾病或病症或其症状的受试者之前(例如，之前5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周)、同时或之后(例如，之后5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周)施用。在某些实施方案中，与抗GITR抗体或其抗原结合片段组合施用于受试者的疗法(例如，药剂)在相同组合物(例如，医药组合物)中施用。在其它实施方案中，与抗GITR抗体或其抗原结合片段组合施用的疗法(例如，药剂)在不同组合物(例如，两种或更多种医药组合物)中施用于受试者。两种组合物可以在相同或不同时间和/或通过相同或不同施用途径施用。在一个特定实施方案中，本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段与疫苗组合物组合施用于受试者以诱导、活化或增强由疫苗组合物引出的免疫反应。在一个实施方案中，疫苗组合物是癌症疫苗。癌症疫苗是在个体或受试者中针对一种或多种癌症抗原刺激或引出内源免疫反应的作用物、分子或免疫原。癌症抗原可以是肿瘤相关肽，或诱导或增强免疫反应并且来源于肿瘤相关基因和编码蛋白的蛋白质，包括例如MAGE-A1、MAGE-A2、MAGE-A3、MAGE-A4、MAGE-A5、MAGE-A6、MAGE-A7、MAGE-A8、MAGE-A9、MAGE-A10、MAGE-A11、MAGE-A12、MAGE-A13、GAGE-1、GAGE-2、GAGE-3、GAGE-4、GAGE-5、GAGE-6、GAGE-7、GAGE-8、BAGE-1、RAGE-1、LB33/MUM-1、PRAME、NAG、MAGE-Xp2(MAGE-B2)、MAGEXp3(MAGE-B3)、MAGE-Xp4(AGE-B4)、酪氨酸酶、脑糖原磷酸化酶、Melan-A、MAGE-C1、MAGE-C2、NY-ESO-1、LAGE-1、SSX-1、SSX-2(HOM-MEL-40)、SSX-1、SSX-4、SSX-5、SCP-1、CT-7、α-辅肌动蛋白-4、Bcr-Abl融合蛋白、Casp-8、β-连环蛋白、cdc27、cdk4、cdkn2a、coa-1、dek-can融合蛋白、EF2、ETV6-AML1融合蛋白、LDLR-岩藻糖基转移酶AS融合蛋白、HLA-A2、HLA-A11、hsp70-2、KIAAO205、Mart2、Mum-2和3、neo-PAP、I类肌球蛋白、OS-9、pml-RARα融合蛋白、PTPRK、K-ras、N-ras、磷酸丙糖异构酶、GnTV、Herv-K-mel、Lage-1、Mage-C2、NA-88、/Lage-2、SP17以及TRP2-Int2、(MART-I)、gp100(Pmel 17)、TRP-1、TRP-2、MAGE-1、MAGE-3、p15(58)、CEA、NY-ESO(LAGE)、SCP-1、Hom/Mel-40、p53、H-Ras、HER-2/neu、BCR-ABL、E2A-PRL、H4-RET、IGH-IGK、MYL-RAR、爱泼斯坦巴尔病毒抗原、EBNA、人乳头状瘤病毒(HPV)抗原E6和E7、TSP-180、MAGE-4、MAGE-5、MAGE-6、p185erbB2、p180erbB-3、c-met、nm-23H1、PSA、TAG-72-4、CA 19-9、CA 72-4、CAM 17.1、NuMa、K-ras、β-连环蛋白、CDK4、Mum-1、p16、TAGE、PSMA、PSCA、CT7、端粒酶、43-9F、5T4、791Tgp72、α-胎蛋白、13HCG、BCA225、BTAA、CA 125、CA 15-3(CA 27.29\BCAA)、CA 195、CA242、CA-50、CAM43、CD68\KP1、CO-029、FGF-5、G250、Ga733(EpCAM)、HTgp-175、M344、MA-50、MG7-Ag、MOV18、NB\170K、NYCO-1、RCAS1、SDCCAG16、TA-90(Mac-2结合蛋白\亲环素C相关蛋白)、TAAL6、TAG72、TLP以及TPS。癌症疫苗适用于增加免疫系统对癌细胞的识别或经由淋巴细胞活化增强抗肿瘤反应。效应T细胞已经通过用完整肿瘤细胞或提取物、纯化的抗原、使用针对结合至MHC与TcR而优化的肽、免疫显性肽、编码肿瘤抗原的DNA、编码肿瘤抗原的重组病毒或抗原脉冲的抗原呈递细胞免疫而成功地产生。在一些实施方案中，免疫识别和细胞扩展的增强可以通过使用共刺激因子和细胞因子、注射载体以表达细胞因子、体外抗原脉冲和活化的自体树突状细胞以及通过阻断负性调节因子(例如，使用免疫检查点靶向剂)并且通过耗尽T调控性细胞来改善。
在一个特定实施方案中，本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段与基于热休克蛋白的肿瘤疫苗或基于热休克蛋白的病原体疫苗组合施用于受试者。关于与本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段组合使用的基于热休克蛋白的肿瘤疫苗或基于热休克蛋白的病原体疫苗，参看下文的章节5.4.1.1和5.4.1.2。
在一个特定实施方案中，本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段与佐剂组合施用以诱导、活化或增强抗GITR抗体的促效作用。取决于治疗情形可以使用各种佐剂。适当佐剂的非限制性实例包括例如完全弗氏佐剂(Complete Freund's Adjuvant)(CFA)、不完全弗氏佐剂(Incomplete Freund's Adjuvant)(IFA)、motanide ISA(不完全赛比克佐剂(incomplete seppic adjuvant))、Ribi佐剂系统(RAS)、Titer Max、胞壁酰肽、Syntex佐剂配方(SAF)、明矾(氢氧化铝和/或磷酸铝)、铝盐佐剂、佐剂、硝化纤维素吸收的抗原、囊封或圈闭的抗原、免疫刺激复合物(诸如皂苷)、Quil A、QS-21以及其它。其它佐剂包括CpG寡核苷酸和双股RNA分子，诸如多聚(A)、多聚(U)。还可以使用上述佐剂的组合。在一些实施方案中，一种或多种佐剂是皂苷，诸如QS-21、QS-21和3De-O-酰化单磷酰脂质A(3D-MPL)，以及免疫刺激性寡核苷酸和皂苷佐剂，分别如美国专利号6,645,495、7,029,678和7,858,589中所公开。
在某些实施方案中，本文提供了增强GITR响应细胞(例如，T细胞，诸如效应T细胞)的刺激的方法，其包括离体孵育GITR响应细胞(例如，T细胞)与本文所描述的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，GITR响应细胞在与抗GITR抗体或其抗原结合片段一起孵育之前、同时或之后与刺激剂(例如，植物血球凝集素(PHA)和/或佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)，或TCR复合物刺激抗体，诸如抗CD3抗体和抗CD28抗体)一起孵育。在某些实施方案中，GITR响应细胞(例如，T细胞)从受试者(例如，人类)分离。在一些实施方案中，GITR响应细胞在用抗GITR抗体或其抗原结合片段刺激之后施用于受试者(例如，人类)。GITR响应细胞(例如，T细胞)可以施用于与原始分离出细胞的受试者相同或不同的受试者。
在一些实施方案中，本文提供了活化GITR响应细胞(例如，T细胞)的方法，其包括孵育GITR响应细胞(例如，T细胞)与本文所描述的抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，GITR响应细胞在与抗GITR抗体或其抗原结合片段一起孵育之前、同时或之后与刺激剂(例如，T细胞受体复合物刺激剂，诸如植物血球凝集素(PHA)和/或佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)，或TCR复合物刺激抗体，诸如抗CD3抗体和抗CD28抗体)一起孵育。在一些实施方案中，GITR响应细胞(例如，T细胞)从受试者(例如，人类)分离。在某些实施方案中，GITR响应细胞在用抗GITR抗体或其抗原结合片段活化之后施用于受试者(例如，人类)。GITR响应细胞(例如，T细胞)可以施用于与原始分离出细胞的受试者相同或不同的受试者。
在一些实施方案中，响应GITR的细胞(即，GITR响应细胞)在细胞培养物中与本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段一起孵育，并且施用于受试者以增强免疫功能(例如，以增强GITR响应细胞，诸如T细胞的扩展/增殖，和/或增强T细胞效应功能)和/或以治疗癌症和/或预防或治疗感染性疾病。癌症和感染性疾病的实例提供于本文中。对于例示性方法，参看例如下文的实施例7。在特定实施方案中，GITR响应细胞是效应T细胞(例如，CD4+和CD8+)。在一些实施方案中，GITR响应细胞从受试者分离。在一些实施方案中，GITR响应细胞在与本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段一起孵育之前针对GITR表达进行评估。在某些实施方案中，GITR响应细胞在与本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段一起孵育之前、同时或之后与有丝分裂原(例如，T细胞有丝分裂原，诸如植物血球凝集素(PHA)和/或佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)，或TCR复合物刺激抗体，诸如抗CD3抗体和抗CD28抗体)一起孵育。GITR响应细胞可以与本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段一起孵育例如5分钟、10分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、8小时、12小时、18小时、24小时或更长时间。在某些实施方案中，施用于受试者的GITR响应细胞来源于这个受试者(即，GITR响应细胞是自体的)。在其它实施方案中，施用于受试者的GITR响应细胞来源于不同受试者。GITR响应细胞在与抗GITR抗体或其抗原结合片段一起孵育之后可以经由本领域的技术人员所知的任何途径(例如，肠道外施用，诸如皮下、静脉内或肌肉内施用，或肿瘤内施用)局部或全身施用于受试者。在某些实施方案中，GITR响应细胞在与抗GITR抗体或其抗原结合片段一起孵育之后施用于受试者的适合剂量可以是至少100个、200个、300个、400个、500个、700个、1,000个、5,000个、10,000个、25,000个、50,000个、100,000个、1×106个、1×107个或1×108个细胞。GITR响应细胞在与抗GITR抗体或其抗原结合片段一起孵育之后可以施用1、2、3、4、5、6、7、8次或更多次。GITR响应细胞在与抗GITR抗体或其抗原结合片段一起孵育之后施用于受试者的频率和剂量将取决于若干因素而变化，包括例如患者的病状。在另一个实施方案中，本文提供了一种在受试者中增强T细胞(例如，CD4+和/或CD8+T细胞)的扩展的方法，其包括向受试者施用有效量的本文所描述的抗体或其抗原结合片段，或本文所描述的医药组合物。在另一个实施方案中，本文提供了一种在受试者中增强CD8+T细胞的扩展的方法，其包括向受试者施用有效量的本文所描述的抗体或其抗原结合片段，或本文所描述的医药组合物。在另一个实施方案中，本文提供了一种在受试者中增强CD4+T细胞的扩展的方法，其包括向受试者施用有效量的本文所描述的抗体或其抗原结合片段，或本文所描述的医药组合物。在一个特定实施方案中，受试者是人类。
在另一个实施方案中，本文提供了一种在受试者中增强T细胞(例如，CD4+和/或CD8+T细胞)的扩展和/或T细胞效应功能的方法，其包括向受试者施用有效量的本文所描述的抗体或其抗原结合片段，或本文所描述的医药组合物。在另一个实施方案中，本文提供了一种在受试者中增强CD8+T细胞的扩展和/或T细胞效应功能的方法，其包括向受试者施用有效量的本文所描述的抗体或其抗原结合片段，或本文所描述的医药组合物。在另一个实施方案中，本文提供了一种在受试者中增强CD4+T细胞的扩展和/或T细胞效应功能的方法，其包括向受试者施用有效量的本文所描述的抗体或其抗原结合片段，或本文所描述的医药组合物。在一个特定实施方案中，受试者是人类。
在另一个实施方案中，本文提供了一种优于T调控性细胞的扩展优先扩展效应T细胞的方法，其包括离体孵育T细胞与本文所描述的抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，抗GITR抗体或其抗原结合片段扩展效应T细胞优于T调控性细胞10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％或更大。在一些实施方案中，抗GITR抗体或其抗原结合片段扩展效应T细胞优于T调控性细胞10％至20％、15％至25％、25％至50％、30％至60％、50％至75％或65％至85％。效应T细胞和T调控性细胞可以由细胞表面标志物，诸如下文的实施例中所公开的那些彼此区分。在一些实施方案中，T细胞从受试者(例如，人类)分离。在某些实施方案中，T细胞在扩展之后施用于受试者(例如，人类)。
在另一个实施方案中，本文提供了一种在受试者中优于T调控性细胞的扩展优先扩展效应T细胞的方法，其包括向受试者施用有效量的本文所描述的抗体或其抗原结合片段或其组合物。在某些实施方案中，抗GITR抗体或其抗原结合片段扩展效应T细胞优于T调控性细胞10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％或更大。在一些实施方案中，抗GITR抗体或其抗原结合片段扩展效应T细胞优于T调控性细胞10％至20％、15％至25％、25％至50％、30％至60％、50％至75％或65％至85％。效应T细胞和T调控性细胞可以由细胞表面标志物和/或细胞内标志物，诸如下文的实施例中所公开的那些彼此区分。在一个特定实施方案中，受试者是人类。
在某些实施方案中，用本文所描述的抗GITR抗体或抗原结合片段或其组合物治疗受试者达成以下作用中的一者、两者、三者、四者或更多者：(i)减轻或改善疾病或与其相关的症状的严重度；(ii)减小与疾病相关的症状的持续时间；(iii)抑制疾病或与其相关的症状的进展；(iv)疾病或与其相关的症状消退；(v)预防与存在于患者中的疾病相关的症状的发展或发作；(vi)抑制与疾病相关的症状的复发；(vii)减少受试者的住院治疗；(viii)减小住院治疗时长；(ix)增加患有疾病的受试者的存活；(x)减小与疾病相关的症状的数目；以及(xi)增强、改善、增补、补充或强化另一种疗法的治疗作用。在一个替代性实施方案中，抗GITR抗体或其抗原结合片段用于预防病症，诸如感染性疾病。
在一些实施方案中，抗GITR抗体或其抗原结合片段或其组合物与免疫治疗剂组合施用于受试者。在本文所公开的组合疗法中使用的免疫治疗剂包括(但不限于)Her2/neu受体抗体，诸如曲妥珠单抗(trastuzumab)(以销售)；抗CD52抗体，诸如阿仑单抗(alemtuzumab)(以或Campath-1H销售)；抗CD33抗体，诸如连接至卡奇霉素(calicheamicin)的吉妥珠单抗(gemtuzumab)(以销售)；抗CD20抗体，诸如利妥昔单抗(rituximab)(以和销售)；替伊莫单抗(Ibritumomab tiuxetan)(以销售)；抗TNFα抗体，诸如英利昔单抗(infliximab)(以销售)或阿达木单抗(adalimmumab)(以销售)；可溶性TNFR2分子，诸如依那西普(etanercept)(以销售)；针对IL-2受体的CD25链的抗体，诸如巴利昔单抗(basiliximab)(以销售)；抗CD40/CD40L抗体，诸如人源化IgG1抗人类CD40抗体(SGN-40)；Toll样受体促效剂，诸如单磷酰脂质ACpG；单股RNA；核苷酸；核苷酸类似物；CL087(TLR7特异性配体)；洛索立宾(loxoribine)；聚肌苷聚胞苷酸；鞭毛蛋白；雷西莫特(resiquimod)；咪喹莫特(immiquimod)；嘎德莫特(gardiquimod)；NOD配体，诸如胞壁酰二肽、莫拉丁酯(murabutide)、肽聚糖以及胞壁酰二肽；CD1d促效剂，诸如α-半乳糖苷神经酰胺(α-GalCer)和苏糖醇神经酰胺(ThrCer)；抗体，诸如(GC1008)；靶向抑制TGF-β同种型1、2或3的抗体；Fc融合体；达安特普(Dalantercept)(Alk-Fc)；以及小分子LY2157299(受体激酶抑制剂)。
可以通过增强免疫功能而治疗的疾病包括癌症和感染性疾病。各种癌症和感染性疾病描述于下文。在一个特定实施方案中，本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段可以用于治疗与癌症相关的病状或由施用抗癌疗法引起的病状(诸如化学疗法或放射线)。在一个特定实施方案中，抗GITR抗体或其抗原结合片段可以用于治疗或管理淋巴细胞减少症。在另一个实施方案中，将抗GITR抗体或其抗原结合片段施用于诊断患有癌症的患者以增加患者中一个或多个免疫细胞群体(例如，T细胞效应细胞，诸如CD4+和CD8+T细胞)的增殖和/或效应功能。
在一个特定实施方案中，使用本领域中所熟知的试验，例如ELISPOT、ELISA以及细胞增殖试验，相对于未施用本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段的受试者中的免疫功能，本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段活化或增强或诱导受试者中的一种或多种免疫功能或反应至少99％、至少98％、至少95％、至少90％、至少85％、至少80％、至少75％、至少70％、至少60％、至少50％、至少45％、至少40％、至少45％、至少35％、至少30％、至少25％、至少20％或至少10％，或在介于10％至25％、25％至50％、50％至75％或75％至95％之间的范围内。在一个特定实施方案中，免疫功能是细胞因子产生(例如，干扰素γ、IL-2、IL-5、IL-10、IL-12或转化生长因子(TGF)α产生)。在另一个实施方案中，免疫功能是T细胞增殖/扩展，其可以例如通过流式细胞测量术化验以检测表达T细胞的标志物(例如，CD3、CD4或CD8)的细胞的数目。在另一个实施方案中，免疫功能是抗体产生，其可以例如通过ELISA化验。在一些实施方案中，免疫功能是效应功能，其可以例如通过细胞毒性试验或本领域中所熟知的其它试验化验。在另一个实施方案中，免疫功能是Th1反应。在另一个实施方案中，免疫功能是Th2反应。在另一个实施方案中，免疫功能是记忆反应。
在特定实施方案中，可以由抗GITR抗体或其抗原结合片段增强或诱导的免疫功能的非限制性实例是效应淋巴细胞的增殖/扩展(例如，效应T淋巴细胞数目的增加)、效应淋巴细胞(例如，效应T淋巴细胞)凋亡的抑制以及Treg的抑制。在特定实施方案中，由本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段增强或诱导的免疫功能是CD4+T细胞(例如，Th1和Th2辅助T细胞)、CD8+T细胞(例如，细胞毒性T淋巴细胞、α/βT细胞以及γ/δT细胞)、B细胞(例如，浆细胞)、记忆T细胞、记忆B细胞、肿瘤驻留T细胞、CD122+T细胞、自然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞、单核细胞、树突状细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞或多形核白细胞的数目增殖/扩展或活化。在一个实施方案中，本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段活化或增强淋巴细胞祖细胞的增殖/扩展或数目。在一些实施方案中，相对于阴性对照(例如，未处理、培养或与本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段接触的相应细胞的数目)，本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段使CD4+T细胞(例如，Th1和Th2辅助T细胞)、CD8+T细胞(例如，细胞毒性T淋巴细胞、α/βT细胞以及γ/δT细胞)、B细胞(例如，浆细胞)、记忆T细胞、记忆B细胞、肿瘤驻留T细胞、CD122+T细胞、自然杀伤细胞(NK细胞)、巨噬细胞、单核细胞、树突状细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞或多形核白细胞的数目增加约至少99％、至少98％、至少95％、至少90％、至少85％、至少80％、至少75％、至少70％、至少60％、至少50％、至少45％、至少40％、至少45％、至少35％、至少30％、至少25％、至少20％或至少10％，或在介于10％至25％、25％至50％、50％至75％或75％至95％之间的范围内。
在特定实施方案中，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体独立于TCR触发诱导、活化或增强人类GITR的活性。在特定实施方案中，免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体独立于TCR触发诱导、活化或增强NF-κB的活性。在某些实施方案中，NF-κB的活性可以在例如包括以下步骤的试验中评估：(a)在不存在抗CD3抗体的情况下孵育表达NF-κB-荧光素酶报告构建体(例如，GloResponse NF-κB-luc2P构建体)和GITR(例如，人类GITR)的T细胞(例如，Jurkat细胞)与例如12.5、10、5、2.5、1.25或0.625μg/ml的抗体浓度的本文所描述的抗体或同型对照抗体；以及(b)在例如孵育2、5、6、8或18小时后使用例如EnVision多标记读取器2100读取荧光素酶信号，其中相对于同型对照抗体的阳性荧光素酶信号指示NF-κB的活性。在一个特定实施方案中，荧光素酶信号在孵育5小时后读取。
在另一个实施方案中，本文提供了一种独立于TCR触发活化T细胞的方法，其包括使T细胞与本文所描述的抗体或其抗原结合片段接触。在特定实施方案中，本文提供了一种独立于TCR触发诱导、活化或增强NF-κB的活性的方法，其包括使T细胞与本文所描述的抗体或其抗原结合片段接触。在某些实施方案中，NF-κB的活性可以在例如包括以下步骤的试验中评估：(a)在不存在抗CD3抗体的情况下孵育表达NF-κB-荧光素酶报告构建体(例如，GloResponse NF-κB-luc2P构建体)和GITR(例如，人类GITR)的T细胞(例如，Jurkat细胞)与例如12.5、10、5、2.5、1.25或0.625μg/ml的抗体浓度的本文所描述的抗体或同型对照抗体；以及(b)在例如孵育2、5、6、8或18小时后使用例如EnVision多标记读取器2100读取荧光素酶信号，其中相对于同型对照抗体的阳性荧光素酶信号指示NF-κB的活性。在一个特定实施方案中，荧光素酶信号在孵育5小时后读取。
在特定实施方案中，本文提供了一种增加多功能性(IFNγ+TNFα+)T细胞的百分比的方法，其包括使T细胞与本文所描述的抗体或其抗原结合片段接触。多功能性(IFNγ+TNFα+)T细胞的百分比的增加可以在例如包括以下步骤的试验中评估：(a)在37℃和5％CO2下孵育例如人类PBMC与例如各种次最佳浓度(例如，0.3-5μg/ml)的抗CD3抗体，以及例如免疫特异性地结合至GITR(例如，人类GITR)的本文所描述的抗体(例如，5μg/ml)或同型对照抗体，持续例如3-4天；(b)在37℃和5％CO2下用例如布雷菲德菌素A处理细胞，持续例如6小时；(c)使用例如抗CD3抗体、抗CD4抗体以及抗CD8α抗体将细胞的表面染色；(d)使用例如抗IFNγ抗体和抗TNFα抗体细胞内染色；以及(e)相对于同型对照抗体测定多功能性(IFNγ+TNFα+)T细胞的百分比。在特定实施方案中，多功能性(IFNγ+TNFα+)T细胞选自由多功能性(IFNγ+TNFα+)CD4+T细胞和多功能性(IFNγ+TNFα+)CD8+T细胞组成的群组。
在特定实施方案中，本文提供了一种增加活化的T细胞中OX40和PD-1的表面表达的方法，其包括使T细胞与本文所描述的抗体或其抗原结合片段接触。如通过本文所描述和/或本领域的技术人员所知的方法评估，相对于不存在本文所描述的抗体的情况下活化的T细胞中OX40和PD-1的表面表达，活化的T细胞中OX40和PD-1的表面表达可以增加至少约1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、600倍、700倍、800倍、900倍或1000倍。
5.4.1.1癌症
在一个特定方面，本文呈现了治疗癌症的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段或其组合物。在一个特定实施方案中，本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段或其组合物是施用于受试者的唯一活性剂。
本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段对癌细胞增殖的影响可以通过常规试验，诸如通过测量放射性标记的胸苷的摄取的试验来检测。或者，可以通过测量乳酸脱氢酶(LDH)，一种在细胞溶解后释放的稳定胞浆酶的试验，或通过细胞溶解后[51Cr]的释放来测量细胞生存力。在一个实施方案中，通过细胞有能力或无能力摄取诸如中性红、锥虫蓝或ALAMARTM蓝的染料来测量坏死(Page B等,(1993)《国际肿瘤学杂志(Intl J Oncology)》3:473-6)。在这种试验中，在含有染料的培养基中孵育细胞，洗涤细胞，并且以分光光度法测量剩余的染料，其反映染料的细胞摄取。
在另一个实施方案中，染料是磺酰罗丹明B(sulforhodamine B)(SRB)，其与蛋白质的结合可以用作细胞毒性的量度(Skehan P等,(1990)《国家癌症研究所杂志(J NatCancer Inst)》82:1107-12)。在另一个实施方案中，四唑盐，诸如MTT在通过检测活的而不是死的细胞用于哺乳动物细胞存活和增殖的定量比色试验中使用(参看例如Mosmann T(1983)《免疫学方法杂志(J Immunol Methods)》65:55-63)。
在其它实施方案中，在培养物的附着与“漂浮”区室中测量凋亡细胞。通过移出上清液，使附着细胞胰蛋白酶化，并且在离心洗涤步骤(10分钟，2000rpm)之后组合两种制剂来收集两个区室。用舒林酸(sulindac)和相关化合物处理肿瘤细胞培养物以获得大量凋亡的方案已经描述于文献中(参看例如Piazza GA等,(1995)《癌症研究(Cancer Res)》55:3110-6)。这种方法的特征包括收集漂浮与附着细胞，鉴别用于观测凋亡的最佳处理时间和剂量范围，以及鉴别最佳细胞培养条件。
在另一个实施方案中，通过测量DNA片段化来定量凋亡。用于DNA片段化的定量体外测定的商业光度测定法是可用的。这类试验的实例，包括TUNEL(其检测标记的核苷酸在片段化DNA中的并入)和基于ELISA的试验，描述于《生物化学(Biochemica)》,(1999)2:3437(Roche Molecular Biochemicals)中。在另一个实施方案中，可以在形态上观测凋亡。
可以进行这类试验的癌细胞系为本领域的技术人员所熟知。还可以对初级细胞，例如组织外植体进行凋亡、坏死和增殖试验。
在特定实施方案中，将本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段或其组合物施用于患有癌症的受试者(在一些实施方案中，癌症的动物模型)达成以下作用中的至少一者、两者、三者、四者或更多者：(i)减轻或改善癌症的一种或多种症状的严重度；(ii)减小与癌症相关的一种或多种症状的持续时间；(iii)预防与癌症相关的症状的复发；(iv)减少受试者的住院治疗；(v)减小住院治疗时长；(vi)增加受试者的存活；(vii)增强或改善另一种疗法的治疗作用；(viii)抑制与癌症相关的一种或多种症状的发展或发作；(ix)减小与癌症相关的症状的数目；(x)改善如通过本领域中所熟知的方法评估的生活质量；(x)抑制肿瘤的复发；(xi)肿瘤和/或与其相关的一种或多种症状消退；(xii)抑制肿瘤和/或与其相关的一种或多种症状的进展；(xiii)减少肿瘤的生长；(xiv)减小肿瘤大小(例如，体积或直径)；(xv)减少新形成的肿瘤的形成；(xvi)根除、去除或控制原发性、区域性和/或转移性肿瘤；(xvii)减小转移瘤的数目或大小；(xviii)降低死亡率；(xix)增加无复发存活期；(xx)如通过本领域的技术人员可用的常规方法，诸如磁共振成像(MRI)、动态对比增强MRI(DCE-MRI)、X射线以及计算机断层摄影(CT)扫描或正电子发射断层摄影(PET)扫描测量，肿瘤的大小得以维持并且不增加或增加小于施用标准疗法之后肿瘤的增加；和/或(xxi)增加患者的缓解时长。
在某些实施方案中，将本文所描述的两种或更多种不同抗GITR抗体或其抗原结合片段施用于受试者。在一些实施方案中，将本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段与一种或多种其它疗法，例如抗癌剂、细胞因子、细胞疫苗或抗激素剂组合施用于受试者，以治疗癌症。
在一个特定实施方案中，本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段与放射线疗法组合施用，这种疗法包括例如使用x射线、γ射线以及其它来源的放射线以破坏癌细胞。在特定实施方案中，放射线治疗作为外束放射线或远距疗法施用，其中放射线从远端来源引导而来。在其它实施方案中，放射线治疗作为内疗法或近距疗法施用，其中放射源置于体内癌细胞或肿瘤块附近。在一个方面，本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段可以在因抗癌疗法而具有受损免疫系统的癌症患者中活化或增强免疫功能或反应。
在另一个实施方案中，将本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段与化学疗法组合施用于受试者。在一个实施方案中，可以在放射线疗法或化学疗法之前、期间或之后使用本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段。化学治疗剂的实例包括环磷酰胺、甲氨蝶呤、环孢素A(cyclosporin A)、来氟米特(leflunomide)、顺铂(cisplatin)、异环磷酰胺(ifosfamide)、紫杉烷(taxane)(诸如紫杉醇(taxol)和太平洋紫杉醇(paclitaxol))、拓扑异构酶I抑制剂(例如，CPT 11、拓扑替康(topotecan)、9AC以及GG 211)、吉西他滨(gemcitabine)、长春瑞滨(vinorelbine)、奥沙利铂(oxaliplatin)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、亚叶酸(leucovorin)、长春瑞滨、泰道(temodal)、松胞菌素B(cytochalasin B)、短杆菌肽D(gramicidin D)、依米丁(emetine)、丝裂霉素(mitomycin)、依托泊苷(etoposide)、替尼泊苷(tenoposide)、长春新碱(vincristine)、长春碱(vinblastine)、秋水仙碱(colchicin)、阿霉素(doxorubicin)、道诺霉素(daunorubicin)、二羟基蒽二酮、米托蒽醌(mitoxantrone)、光神霉素(mithramycin)、放线菌素D(actinomycin D)、1-去氢睾酮(1dehydrotestosterone)、糖皮质激素、普鲁卡因(procaine)、丁卡因(tetracaine)、利多卡因(lidocaine)、普萘洛尔(propranolol)和嘌呤霉素(puromycin)同源物以及癌得星(cytoxan)。
在一个实施方案中，将本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段与环磷酰胺，例如低剂量的环磷酰胺组合施用于受试者。环磷酰胺(伊洛坦(Elostan)、癌得星)是化学治疗剂，其当以低剂量(例如，当静脉内施用时至多300mg/m2、300mg/m2或约300mg/m2)使用时具有免疫调节功能。具体地说，低剂量的环磷酰胺可以减小调控性T细胞(Treg)(例如，CD4+CD25+FoxP3+细胞，或替代地CD45+CD3+CD4+CD8-FOXP3+CD25hiCD1271ow细胞)的数目和增殖能力并且调节免疫抑制网络。在一些实施方案中，环磷酰胺施用的剂量为约50mg/m2、100mg/m2、200mg/m2、300mg/m2、500mg/m2或更大。在一些实施方案中，环磷酰胺施用的剂量在10mg/m2至100mg/m2、50mg/m2至200mg/m2、50mg/m2至300mg/m2、50mg/m2至500mg/m2的范围内。在一些实施方案中，环磷酰胺在初始施用本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段之前或之后1小时、2小时、3小时、4小时、8小时、12小时、1天、5天或更长时间内施用于受试者。在一些实施方案中，本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段与环磷酰胺，例如低剂量环磷酰胺组合使用，用于治疗转移性肾细胞癌(RCC)。
在一个实施方案中，将本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段与Treg抑制剂组合施用于受试者。Treg抑制剂的实例包括(达利珠单抗(daclizumab))(Roche)，其为用于例如诱导器官移植中的免疫抑制的人类抗CD25单克隆抗体。达利珠单抗阻断IL-2结合至CD25，这也是维持Treg的信号。抑制Treg的另一种药剂是(舒尼替尼(Sunitinib))(Pfizer)，其为批准用于治疗肾细胞癌(RCC)和其它癌症的小分子多靶向酪氨酸激酶抑制剂。可以抑制Treg的另一种药剂是1-甲基-D-色氨酸(1-MT)，吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的竞争性抑制剂。IDO是在某些正常和赘生性细胞中表达的免疫抑制剂并且可能与癌症患者中Treg的增加相关联。额外的Treg抑制剂包括阻断Treg运输至肿瘤微环境的药剂。这类药剂可以包括针对某些趋化因子和趋化因子受体，诸如CCL17、CCL22以及CCR4的抗体。
可以根据本文所描述的方法使用的Treg抑制剂的其它实例在以下专利申请中公开，其出于所有目的以全文引用的方式并入本文中：美国专利公布号US 2009/0214533、US2012/0142750、US 2011/0305713、US 2009/0004213、US 2012/0219559、US 2010/0278844、US 2013/0323283以及US 2008/0152665。
在另一个实施方案中，本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段可以在手术之前、期间或之后施用于受试者。
在某些实施方案中，将本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段与免疫调节剂或抗体组合施用于受试者。免疫调节剂或抗体可以是(但不限于)佐剂、抗原、抗CD3(例如，OKT3)、检查点靶向剂或调节剂、或白介素。术语“检查点靶向剂”或“检查点调节剂”可以互换使用并且指的是选择性地调节调控性分子(例如，共抑制检查点分子(例如，蛋白质)或共刺激检查点分子(例如蛋白质)的表达或活性的药剂，这种调控性分子可以是例如免疫系统检查点的受体或配体。检查点靶向剂可以选自由以下组成的群组：检查点分子的促效剂；检查点分子的拮抗剂；选择性地靶向检查点分子的多肽(例如，肽配体、抗体、抗体片段)；选择性地靶向检查点分子的小分子；以及选择性地调节检查点分子的表达或活性的调控性核酸(例如，siRNA、miRNA)。在一个实施方案中，检查点靶向剂可以选自由PD-1的拮抗剂、PD-L1的拮抗剂、PD-L2的拮抗剂、CTLA-4的拮抗剂、TIM-3的拮抗剂、LAG-3的拮抗剂、GITR的促效剂以及OX40的促效剂组成的群组。因此，在一些实施方案中，抗GITR促效性抗体(例如，Hum231#1、Hum231#2或Hum231#2w)或其抗原结合片段可以与例如抗CTLA-4拮抗剂抗体或其抗原结合片段或另一种检查点靶向剂组合，在单一医药组合物中或在一起或独立施用的独立医药组合物中施用。
在一些实施方案中，本文提供了在受试者中治疗癌症的方法，其包括向受试者施用抗GITR抗体或其抗原结合片段以及OX40的促效剂和/或LAG-3、TIM-3、PD-1和/或CTLA-4的拮抗剂。在一些实施方案中，癌症选自多形性成胶质细胞瘤、转移性黑素瘤、抗性转移性黑素瘤、转移性卵巢癌、转移性肾细胞癌、头颈癌、胃癌、食道癌、非小细胞肺癌、小儿脑肿瘤、低级星形细胞瘤、室管膜瘤以及成神经管细胞瘤。
在一个特定实施方案中，将本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段与抑制(部分或完全)CTLA-4信号转导的药剂，诸如特异性地结合至人类CTLA-4的抗体(例如，曲美木单抗(Pfizer)；伊匹单抗(Bristol-Myers Squibb))或CTLA-4-Ig融合蛋白组合施用于受试者。在一些实施方案中，抗GITR抗体或其抗原结合片段与CTLA-4的拮抗剂(例如，曲美木单抗或伊匹单抗)组合使用用于治疗转移性卵巢癌。在一些实施方案中，抗GITR抗体或其抗原结合片段与CTLA-4的拮抗剂(例如，曲美木单抗或伊匹单抗)组合使用用于治疗对CTLA-4的拮抗剂(例如，曲美木单抗或伊匹单抗)具抗性的转移性卵巢癌。在一些实施方案中，抗GITR抗体或其抗原结合片段和CTLA-4的拮抗剂(例如，曲美木单抗或伊匹单抗)用于治疗多形性成胶质细胞瘤。在一些实施方案中，多形性成胶质细胞瘤是复发性的。在一些实施方案中，多形性成胶质细胞瘤是新诊断的。在一些实施方案中，多形性成胶质细胞瘤在具有非甲基化MGMT启动子的受试者中。在一些实施方案中，多形性成胶质细胞瘤对于贝伐单抗(Bevacizumab)疗法是难治的。在一些实施方案中，多形性成胶质细胞瘤在尚未接受贝伐单抗疗法的受试者中。在本文所公开的治疗方法中可以使用的抗CTLA-4抗体的实例在以下专利和专利申请中公开，其出于所有目的以全文引用的方式并入本文中：国际公布号WO 00/037504、WO 01/014424和WO 09/100140；美国专利号6,207,156和7,034,121。可以根据本文所描述的方法使用的抗CTLA-4抗体的其它实例在以下专利和专利申请中公开，其出于所有目的以全文引用的方式并入本文中：美国专利号7,465,446、8,263,073、8,142,778和8,226,946；以及美国申请号US 2003/086930、US 2005/226875、US 2007/243184、US2009/123477和US 2011/044953。
在另一个实施方案中，本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段与抑制(部分或完全)LAG-3信号转导的药剂，诸如特异性地结合至人类LAG-3的抗体组合施用。可以在本文所描述的治疗方法中使用的抗LAG-3抗体或其抗体片段的实例在以下专利和专利申请中公开，其出于所有目的以全文引用的方式并入本文中：美国专利号6,143,273和6,197,524；美国专利公布号US 2011/0150892、US 2010/0233183和US 2010/196394。
在另一个实施方案中，本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段与抑制(部分或完全)TIM-3信号转导的药剂，诸如特异性地结合至人类TIM-3的抗体组合施用。可以在本文所描述的治疗方法中使用的抗TIM-3抗体或其抗体片段的实例在以下专利和专利申请中公开，其出于所有目的以全文引用的方式并入本文中：美国专利号7,470,428和8,101,176；美国公布号US 2013/0022623、US 2010/0100131、US 2010/0100131和US 2010/061992。
在另一个实施方案中，本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段与抑制(部分或完全)PD-1信号转导的药剂，诸如特异性地结合至人类PD-1的抗体组合施用。在一些实施方案中，将抗PD-1抗体或其抗体片段施用于如本文所描述的受试者。在一些实施方案中，抗PD-1抗体是尼鲁单抗(Nivolumab)(BMS-936558或MDX1106)或兰利珠单抗(Lambrolizumab)(MK-3475)或匹利珠单抗(Pidilizumab)(CT-011)。可以在本文所公开的治疗方法中使用的抗PD-1抗体的其它非限制性实例在以下专利和专利申请中公开，其出于所有目的以全文引用的方式并入本文中：美国专利号6,808,710、7,488,802、8,008,449、8,114,845和8,168,757；美国公布号US 2013/0202623；以及PCT公布号WO 2013/033091。
在另一个实施方案中，本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段与抑制(部分或完全)PD-L1活性的药剂，诸如特异性地结合至人类PD-L1的抗体组合施用。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是BMS-936559、MPDL3280A、MEDI4736或MSB0010718C。可以在本文所公开的治疗方法中使用的抗PD-L1抗体的其它非限制性实例在以下专利和专利申请中公开，其出于所有目的以全文引用的方式并入本文中：美国专利号8,168,179和美国公布号US2010/0203056以及US 2003/0232323。在另一个实施方案中，本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段与抑制(部分或完全)PD-L2活性的药剂，诸如特异性地结合至人类PD-L2的抗体组合施用。
在另一个实施方案中，本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段与活化或增强OX-40信号转导的药剂，诸如特异性地结合至人类OX-40的抗体组合施用。可以在本文所描述的治疗方法中使用的抗OX40抗体或其抗体片段的实例在以下专利和专利申请中公开，其出于所有目的以全文引用的方式并入本文中：美国专利号7,550,140、7,807,156、8,283,450、8,614,295和7,531,170；美国公布号US 2010/0196359、US 2010/0136030和US 2013/0183315。
在另一个实施方案中，将本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段与疫苗，诸如本文(包括上述章节5.4.1)所描述的疫苗组合施用于受试者。在一个特定实施方案中，将抗GITR抗体或其抗原结合片段与基于热休克蛋白的肿瘤疫苗组合施用于受试者。热休克蛋白(HSP)是跨越所有物种普遍发现的高度保守蛋白的家族。其表达作为热休克或其它形式的应激的结果可以强有力地诱导至高得多的水平，这种应激包括暴露于毒素、氧化应激或葡萄糖剥夺。五个家族已经根据分子量分类：HSP-110、-90、-70、-60以及-28。HSP经由抗原呈递细胞(APC)，诸如巨噬细胞和树突状细胞(DC)中的交叉呈递路径递送免疫原性肽，引起T细胞活化。HSP发挥肿瘤相关抗原肽的伴侣运载体的功能，形成能够诱导肿瘤特异性免疫的复合物。从死亡的肿瘤细胞释放后，HSP抗原复合物由抗原呈递细胞(APC)摄取，其中抗原被加工成结合I类和II类MHC分子的肽，引起抗肿瘤CD8+和CD4+T细胞的活化。由来源于肿瘤制剂的HSP复合物引出的免疫特异性地针对由每个受试者的癌症表达的独特抗原肽谱。
热休克蛋白肽复合物(HSPPC)是由与抗原肽非共价复合的热休克蛋白组成的蛋白肽复合物。HSPPC引出先天性与适应性免疫反应。在一个特定实施方案中，抗原肽对所治疗的癌症展现抗原性。HSPPC经由膜受体(主要是CD91)或通过结合至Toll样受体被APC有效夺取。HSPPC内化使得具有趋化因子和细胞因子产生的APC的功能成熟，引起自然杀伤细胞(NK)、单核细胞以及Th1和Th-2介导的免疫反应的活化。在一些实施方案中，本文所公开的方法中使用的HSPPC包含来自与抗原肽复合的应激蛋白的hsp60、hsp70或hsp90家族的一种或多种热休克蛋白。在一些实施方案中，HSPPC包含hsc70、hsp70、hsp90、hsp110、grp170、gp96、钙网蛋白(calreticulin)，或其两者或更多者的组合。
在一个特定实施方案中，将抗GITR抗体或其抗原结合片段与热休克蛋白肽复合物(HSPPC)，例如热休克蛋白肽复合物-96(HSPPC-96)组合施用于受试者，以治疗癌症，例如多形性成胶质细胞瘤。HSPPC-96包含与抗原肽复合的96kDa热休克蛋白(Hsp)gp96。HSPPC-96是从受试者的肿瘤制造的癌症免疫疗法并且含有癌症的抗原“指纹”。在一些实施方案中，这种指纹含有仅存在于那个特定受试者的特定癌细胞中的独特抗原并且疫苗的注射预期刺激受试者的免疫系统以识别并攻击具有特定癌症指纹的任何细胞。
在一些实施方案中，HSPPC，例如HSPPC-96从受试者的肿瘤组织产生。在一个特定实施方案中，HSPPC(例如，HSPPC-96)从所治疗的类型的癌症的肿瘤或其转移瘤产生。在另一个特定实施方案中，HSPPC(例如，HSPPC-96)对于所治疗的受试者是自体的。在一些实施方案中，肿瘤组织是非坏死性肿瘤组织。在一些实施方案中，至少1克(例如，至少1、至少2、至少3、至少4、至少5、至少6、至少7、至少8、至少9、或至少10克)非坏死性肿瘤组织用于产生疫苗方案。在一些实施方案中，在手术切除之后，非坏死性肿瘤组织在用于疫苗制剂中之前冷冻。在一些实施方案中，HSPPC，例如HSPPC-96通过纯化技术从肿瘤组织分离，过滤并且准备用于可注射疫苗。在一些实施方案中，向受试者施用6-12个剂量的HSPPC，例如HSPCC-96。在这类实施方案中，HSPPC，例如HSPPC-96的剂量对于前4个剂量可以每周施用并且然后对于2-8个额外剂量每两周施用。
在一些实施方案中，抗GITR抗体或其抗原结合片段与HSPPC-96组合使用用于治疗转移性黑素瘤(例如，抗性转移性黑素瘤)、转移性卵巢癌或转移性肾细胞癌。在一些实施方案中，抗GITR抗体或其抗原结合片段与HSPPC-96组合使用用于治疗多形性成胶质细胞瘤。在一些实施方案中，抗GITR抗体或其抗原结合片段和CTLA-4的拮抗剂与HSPPC-96组合使用用于治疗多形性成胶质细胞瘤。在一些实施方案中，有待治疗的受试者在施用HSPPC之前受免疫抑制(例如，归因于感染，例如HIV，或由于已经经历抗癌疗法(例如，化学疗法、放射线))。
可以根据本文所描述的方法使用的HSPPC的其它实例在以下专利和专利申请中公开，其出于所有目的以全文引用的方式并入本文中：美国专利号6,391,306、6,383,492、6,403,095、6,410,026、6,436,404、6,447,780、6,447,781以及6,610,659。
在一些实施方案中，将本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段与靶向免疫调节酶，诸如IDO(吲哚胺-(2,3)-双加氧酶)和TDO(色氨酸2,3-双加氧酶)的化合物组合施用于受试者。在特定实施方案中，这种化合物选自由帕卡斯他(Incyte Corporation)、F001287(Flexus Biosciences)、吲哚西莫(NewLink Genetics)以及NLG919(NewLinkGenetics)组成的群组。在一个实施方案中，化合物是帕卡斯他。在另一个实施方案中，化合物是F001287。在另一个实施方案中，化合物是吲哚西莫。在另一个实施方案中，化合物是NLG919。
癌症患者中CD4+CD25+Treg的数目升高阻止宿主设置有效的抗肿瘤免疫反应。另外，高Treg频率与降低的患者存活相关联(Curiel TJ等,(2004)《自然医学(NatMedicine)》10(9):942-9；Woo EY等,(2002)《免疫学杂志(J Immunol)》168:4272-6)。然而，在调控性T细胞耗尽之后观测到癌症患者的PBMC中的免疫活性增强(Dannull J等,(2005)《临床研究杂志(J Clin Invest)》115(12):3623-33)。在表面上表达高水平的GITR的Treg可以用抗GITR抗体DTA-1耗尽(Coe D等,(2010)《癌症免疫学免疫疗法(Cancer ImmunolImmunother)》59:1367-77)。在一个实施方案中，基于免疫的策略可以离体或体内合并用抗GITR抗体或其抗原结合片段耗尽Treg，引起GITR阳性Treg细胞的耗尽。
在某些实施方案中，将本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段与溶癌病毒，诸如他莫进拉帕伐(Talimogene laherparepvec)(OncoVEX GM-CSF)和CGTG-102(Ad5/3-D24-GMCSF)组合施用于受试者。
在某些实施方案中，将本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段与有效抑制肿瘤生长/转移的细胞因子组合施用于受试者。这类细胞因子、淋巴因子或其它造血因子包括(但不限于)M-CSF、GM-CSF、TNF、IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IFN、TNFα、TNF1、TNF2、G-CSF、Meg-CSF、GM-CSF、血小板生成素、干细胞因子以及红细胞生成素。
在某些实施方案中，将本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段与受体酪氨酸激酶抑制剂，诸如甲磺酸伊马替尼(imatinib mesylate)(以或销售)、现在以Tarveca销售的埃罗替尼(erlotinib)(EGF受体抑制剂)、或舒尼替尼(以销售)组合施用于受试者。
在某些实施方案中，将本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段与拮抗性TGF-β抗体，诸如(GC1008)，一种靶向和抑制TGF-β1、2或3同种型的抗体组合施用于受试者。
在一些实施方案中，将本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段或其组合物施用于罹患或诊断患有癌症的受试者。在一个特定实施方案中，将抗GITR抗体或其组合物施用于罹患或诊断患有多形性成胶质细胞瘤的受试者。在一些实施方案中，多形性成胶质细胞瘤是复发性的。在一些实施方案中，多形性成胶质细胞瘤是新诊断的。在一些实施方案中，多形性成胶质细胞瘤在具有非甲基化MGMT启动子的受试者中。在一些实施方案中，多形性成胶质细胞瘤是复发性的。在一些实施方案中，多形性成胶质细胞瘤是新诊断的。在一些实施方案中，多形性成胶质细胞瘤在具有非甲基化MGMT启动子的受试者中。在一些实施方案中，多形性成胶质细胞瘤对于贝伐单抗疗法是难治的。在一些实施方案中，多形性成胶质细胞瘤在尚未接受贝伐单抗疗法的受试者中。
在某些实施方案中，根据本文所描述的方法治疗的患者是已经用抗生素、抗癌剂、或其它生物疗法/免疫疗法治疗的患者。这些患者当中有难治性患者、对于常规疗法太年轻的患者、以及尽管用现有疗法管理或治疗仍具有复发性病毒感染的患者。
在一些实施方案中，施用本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段或其组合物的受试者在施用抗体或其组合物之前尚未接受疗法。在其它实施方案中，将本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段或其组合物施用于在施用抗体或其组合物之前已经接受疗法的受试者。
在某些实施方案中，将抗GITR抗体或其抗原结合片段或其组合物施用于接受免疫抑制疗法或从免疫抑制疗法恢复的受试者。在某些实施方案中，将抗GITR抗体或其组合物施用于患有癌症的受试者并且癌细胞表达GITRL。在一些实施方案中，有待根据本文所公开的方法治疗的受试者受免疫抑制(例如，归因于感染，例如HIV，或由于已经经历抗癌疗法(例如，化学疗法、放射线))。
如本文所描述，抗GITR抗体影响包括OX40、CD25以及PD-1的蛋白质的表面表达。因此，在某些实施方案中，抗GITR抗体或其抗原结合片段或其组合物在施用结合至OX40、CD25或PD-1的抗体或其抗原结合片段之前施用。
拮抗剂PD-1抗体或其抗原结合片段可以在促效剂GITR抗体或其抗原结合片段相对于在施用的时间受试者中PD-1的表达已经增加受试者中PD-1的表面表达的时间施用。举例来说，拮抗剂PD-1抗体或其抗原结合片段可以在施用促效剂GITR抗体之后至少12小时、至少1天、至少2天、至少3天、至少4天、至少5天、至少6天或至少7天施用。拮抗剂PD-1抗体或其抗原结合片段可以在施用促效剂GITR抗体或其抗原结合片段之后12小时至两周、1天至两周、2天至两周或3天至两周施用。拮抗剂PD-1抗体或其抗原结合片段可以在施用促效剂GITR抗体或其抗原结合片段之后12小时至一周、1天至一周、2天至一周或3天至一周施用。
促效剂OX40抗体或其抗原结合片段可以在促效剂GITR抗体或其抗原结合片段相对于在施用的时间受试者中OX40的表达已经增加受试者中OX40的表面表达的时间施用。举例来说，促效剂OX40抗体或其抗原结合片段可以在施用促效剂GITR抗体之后至少12小时、至少1天、至少2天、至少3天、至少4天、至少5天、至少6天或至少7天施用。促效剂OX40抗体或其抗原结合片段可以在施用促效剂GITR抗体或其抗原结合片段之后12小时至两周、1天至两周、2天至两周或3天至两周施用。促效剂OX40抗体或其抗原结合片段可以在施用促效剂GITR抗体或其抗原结合片段之后12小时至一周、1天至一周、2天至一周或3天至一周施用。
抗CD25抗体或其抗原结合片段可以在促效剂GITR抗体或其抗原结合片段相对于在施用的时间受试者中CD25的表达已经增加受试者中CD25的表面表达的时间施用。举例来说，抗CD25抗体或其抗原结合片段可以在施用促效剂GITR抗体之后至少12小时、至少1天、至少2天、至少3天、至少4天、至少5天、至少6天或至少7天施用。抗CD25抗体或其抗原结合片段可以在施用促效剂GITR抗体或其抗原结合片段之后12小时至两周、1天至两周、2天至两周或3天至两周施用。抗CD25抗体或其抗原结合片段可以在施用促效剂GITR抗体或其抗原结合片段之后12小时至一周、1天至一周、2天至一周或3天至一周施用。
拮抗剂CTLA-4抗体或其抗原结合片段可以在施用促效剂GITR抗体或抗原结合片段之后施用。举例来说，拮抗剂CTLA-4抗体或其抗原结合片段可以在施用促效剂GITR抗体之后至少12小时、至少1天、至少2天、至少3天、至少4天、至少5天、至少6天或至少7天施用。拮抗剂CTLA-4抗体或其抗原结合片段可以在施用促效剂GITR抗体或其抗原结合片段之后12小时至两周、1天至两周、2天至两周或3天至两周施用。拮抗剂CTLA-4抗体或其抗原结合片段可以在施用促效剂GITR抗体或其抗原结合片段之后12小时至一周、1天至一周、2天至一周或3天至一周施用。
可以根据本文所描述的方法治疗的癌症的实例包括(但不限于)B细胞淋巴瘤(例如，B细胞慢性淋巴细胞白血病、B细胞非霍奇金淋巴瘤、皮肤B细胞淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤)、基底细胞癌、膀胱癌、胚细胞瘤、脑转移瘤、乳癌、伯基特淋巴瘤(Burkittlymphoma)、癌瘤(例如，腺癌(例如，胃食管交界部腺癌))、子宫颈癌、结肠癌、结肠直肠癌(结肠癌和直肠癌)、子宫内膜癌、食道癌、尤文肉瘤(Ewing sarcoma)、滤泡性淋巴瘤、胃癌、胃食管交界部癌、胃肠癌、成胶质细胞瘤(例如，多形性成胶质细胞瘤，例如新诊断的或复发性的)、神经胶质瘤、头颈癌(例如，头颈部鳞状细胞癌)、肝转移瘤、霍奇金氏和非霍奇金氏淋巴瘤、肾癌(例如，肾细胞癌和维耳姆斯氏肿瘤(Wilms'tumor))、喉癌、白血病(例如，慢性髓细胞白血病、毛细胞白血病)、肝癌(例如，肝癌瘤和肝细胞瘤)、肺癌(例如，非小细胞肺癌和小细胞肺癌)、成淋巴细胞淋巴瘤、淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、转移性脑肿瘤、转移癌、骨髓瘤(例如，多发性骨髓瘤)、成神经细胞瘤、眼黑素瘤、口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌(例如，胰腺导管腺癌)、前列腺癌(例如，激素难治性(例如，去势抗性)、转移性、转移性激素难治性(例如，去势抗性、雄激素非依赖性))、肾细胞癌(例如，转移性)、唾液腺癌、肉瘤(例如，横纹肌肉瘤)、皮肤癌(例如，黑素瘤(例如，转移性黑素瘤))、软组织肉瘤、实体肿瘤、鳞状细胞癌、滑膜肉瘤、睾丸癌、甲状腺癌、移形细胞癌(移行上皮细胞癌)、葡萄膜黑素瘤(例如，转移性)、疣状癌、外阴癌以及瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(Waldenstrom macroglobulinemia)。
在一些实施方案中，根据本文所描述的方法治疗的癌症是人类肉瘤或癌瘤，例如，纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肉瘤、软骨肉瘤、成骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤文氏肿瘤(Ewing's tumor)、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胰腺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管源性癌、肾细胞癌(例如，转移性)、肝细胞瘤、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎癌、维耳姆斯氏肿瘤、子宫颈癌、睾丸肿瘤、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神经胶质瘤、多形性成胶质细胞瘤、星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、寡枝神经胶质瘤、脊膜瘤、黑素瘤、成神经细胞瘤、成视网膜细胞瘤。在某些实施方案中，根据本文所描述的方法治疗的癌症是急性淋巴细胞白血病或急性髓细胞白血病(例如，成髓细胞、原髓细胞、髓单核细胞、单核细胞以及红白血病)；慢性白血病(慢性髓细胞(粒细胞)白血病或慢性淋巴细胞白血病)；霍奇金氏病(Hodgkin's disease)；非霍奇金氏病(non-Hodgkin's disease)；急性骨髓性白血病；B细胞淋巴瘤；T细胞淋巴瘤；间变性大细胞淋巴瘤；眼内淋巴瘤；滤泡性淋巴瘤；小肠淋巴瘤；或脾边缘区淋巴瘤。在某些实施方案中，根据本文所描述的方法治疗的癌症是多发性骨髓瘤、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症、重链病、胃肠基质肿瘤、头和/或颈癌(例如，下咽鳞状细胞癌、喉鳞状细胞癌、口咽细胞癌或喉疣状癌)、子宫内膜基质肉癌、肥大细胞肉瘤、成人软组织肉瘤、子宫肉瘤、梅克尔细胞癌(merkel cell carcinoma)、尿路上皮癌、伴有脑转移的黑素瘤、葡萄膜黑素瘤、伴有肝转移的葡萄膜黑素瘤、非小细胞肺癌、直肠癌或骨髓增生异常综合症。在一些实施方案中，根据这些方法治疗的癌症是转移性的。
在某些实施方案中，根据本文所描述的方法治疗的癌症包括前列腺癌、乳癌、肺癌、结肠直肠癌、黑素瘤、支气管癌、膀胱癌、脑或中枢神经系统癌、外周神经系统癌、子宫或子宫内膜癌、口腔或咽癌、非霍奇金氏淋巴瘤、甲状腺癌、肾癌、胆管癌、小肠或阑尾癌、唾液腺癌、甲状腺癌、肾上腺癌、鳞状细胞癌、间皮瘤、骨癌、胸腺瘤/胸腺癌、成胶质细胞瘤、骨髓增生异常综合症、软组织肉瘤、DIPG、腺癌、骨肉瘤、软骨肉瘤、白血病或胰腺癌。在一些实施方案中，根据本文所描述的方法治疗的癌症包括癌瘤(例如，腺癌)、淋巴瘤、胚细胞瘤、黑素瘤、肉瘤或白血病。在某些实施方案中，根据本文所描述的方法治疗的癌症包括鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、胃肠癌、霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、胰腺癌、成胶质细胞瘤、神经胶质瘤、子宫颈癌、卵巢癌、肝癌(例如，肝癌瘤和肝细胞瘤)、膀胱癌、乳癌、发炎性乳癌、梅克尔细胞癌、结肠癌、结肠直肠癌、胃癌、尿膀胱癌、子宫内膜癌、骨髓瘤(例如，多发性骨髓瘤)、唾液腺癌、肾癌(例如，肾细胞癌和维耳姆斯氏肿瘤)、基底细胞癌、黑素瘤、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、睾丸癌、食道癌、浆液性腺癌或各种类型的头颈癌。在某些实施方案中，根据本文所描述的方法治疗的癌症包括促纤维增生性黑素瘤、发炎性乳癌、胸腺瘤、直肠癌、肛门癌或可手术治疗或不可手术治疗的脑干神经胶质瘤。在一个特定实施方案中，癌症是实体肿瘤。在另一个特定实施方案中，癌症是多形性成胶质细胞瘤。在一些实施方案中，多形性成胶质细胞瘤是复发性的。在一些实施方案中，多形性成胶质细胞瘤是新诊断的。在一些实施方案中，多形性成胶质细胞瘤在具有非甲基化MGMT启动子的受试者中。在一些实施方案中，多形性成胶质细胞瘤对于贝伐单抗疗法是难治的。在一些实施方案中，多形性成胶质细胞瘤在尚未接受贝伐单抗疗法的受试者中。
在一些实施方案中，根据本文所描述的方法治疗的癌症是转移性黑素瘤(例如，抗性转移性黑素瘤)、转移性卵巢癌或转移性肾细胞癌。在某些实施方案中，根据本文所描述的方法治疗的癌症是对伊匹单抗具抗性的黑素瘤。在一些实施方案中，根据本文所描述的方法治疗的癌症是对尼鲁单抗具抗性的黑素瘤。在一些实施方案中，根据本文所描述的方法治疗的癌症是对伊匹单抗和尼鲁单抗具抗性的黑素瘤。
5.4.1.2感染性疾病
在一个特定方面，本文呈现了预防和/或治疗感染性疾病的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段或其组合物。在一个实施方案中，本文提供了预防和/或治疗感染(例如，病毒感染、细菌感染、真菌感染、原生动物感染或寄生虫感染)的方法。根据这些方法预防和/或治疗的感染可以由本文所鉴别的感染物引起。在一个特定实施方案中，本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段或其组合物是施用于受试者的唯一活性剂。在一些实施方案中，本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段或其组合物与抗感染干预(例如，抗病毒剂、抗细菌剂、抗真菌剂或抗蠕虫剂)组合使用用于治疗感染性疾病。
可以由本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段治疗和/或预防的感染性疾病是由包括(但不限于)细菌、寄生虫、真菌、原生动物以及病毒的感染物引起。在一个特定实施方案中，由本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段治疗和/或预防的感染性疾病是由病毒引起。可以根据本文所描述的方法预防和/或治疗的病毒性疾病或病毒感染包括(但不限于)由以下引起的那些：A型肝炎病毒、B型肝炎病毒、C型肝炎病毒、流感(例如，流感A或流感B)、水痘、腺病毒、I型单纯疱疹(HSV-I)、II型单纯疱疹(HSV-II)、牛瘟、鼻病毒、艾柯病毒、轮状病毒、呼吸道合胞病毒、乳头状瘤病毒、乳多泡病毒、巨细胞病毒、棘状病毒、虫媒病毒、汉坦病毒、柯萨奇病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、风疹病毒、脊髓灰质炎病毒、天花、爱泼斯坦巴尔病毒、I型人类免疫缺陷病毒(HIV-I)、II型人类免疫缺陷病毒(HIV-II)，以及诸如病毒性脑膜炎、脑炎、登革热或天花的病毒性疾病的作用物。
可以预防和/或治疗的细菌感染包括由大肠杆菌、肺炎克雷伯菌(Klebsiellapneumoniae)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)、普通变形杆菌(Proteus vulgaris)、草绿色葡萄球菌(Staphylococcusviridans)以及绿脓假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)引起的感染。可以根据本文所描述的方法预防和/或治疗的由细菌(例如，大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、普通变形杆菌、草绿色葡萄球菌以及绿脓假单胞菌)引起的细菌性疾病包括(但不限于)立克次体分枝杆菌(Mycobacteria rickettsia)、支原体(Mycoplasma)、奈瑟氏菌(Neisseria)、肺炎链球菌(S.pneumonia)、伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)(莱姆病(Lyme disease))、炭疽芽孢杆菌(炭疽病)、破伤风、链球菌(Streptococcus)、葡萄球菌(Staphylococcus)、分枝杆菌(mycobacterium)、百日咳、霍乱、瘟疫、白喉、衣原体(chlamydia)、金黄色葡萄球菌(S.aureus)以及军团杆菌(legionella)。
可以根据本文所描述的方法预防和/或治疗的由原生动物引起的原生动物疾病或原生动物感染包括(但不限于)利什曼原虫、球虫病、锥虫、血吸虫或疟疾。可以根据本文所描述的方法预防和/或治疗的由寄生虫引起的寄生虫疾病或寄生虫感染包括(但不限于)衣原体和立克次体。
可以根据本文所描述的方法预防和/或治疗的真菌疾病或真菌感染包括(但不限于)由以下引起的那些：念珠菌(Candida)感染、接合菌病、念珠菌乳房炎、伴有潜伏毛孢子菌血症的进行性播散性毛孢子菌病、播散性念珠菌病、肺副球霉菌病、肺曲霉病、卡氏肺囊虫(Pneumocystis carinii)肺炎、隐球菌脑膜炎、球孢子菌(coccidioidal)脑膜脑炎和脑脊髓血管炎、黑曲霉(Aspergillus niger)感染、镰胞菌角膜炎(Fusarium keratitis)、副鼻窦霉菌病、烟曲霉(Aspergillus fumigatus)心内膜炎、胫骨软骨发育不良、光滑念珠菌(Candida glabrata)阴道炎、口咽念珠菌病、X-连锁慢性肉芽肿病、脚癣、皮肤念珠菌病、霉菌性胎盘炎、播散性毛孢子菌病、过敏性支气管肺曲霉病、霉菌性角膜炎、新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)感染、真菌性腹膜炎、曲弯孢霉(Curvularia geniculata)感染、葡萄球菌眼内炎、孢子丝菌病以及肤癣病。
在某些实施方案中，将本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段或其组合物施用于受试者(在一些实施方案中，动物模型)达成以下作用中的一者、两者、三者、四者或更多者：(i)减轻或改善感染性疾病、感染或与其相关的症状的严重度；(ii)减小感染性疾病、感染或与其相关的症状的持续时间；(iii)抑制感染性疾病、感染或与其相关的症状的进展；(iv)感染性疾病、感染或与其相关的症状消退；(v)抑制感染性疾病、感染或与其相关的症状的发展或发作；(vi)抑制感染性疾病或与其相关的症状的复发；(vii)减少或抑制感染物从一个细胞至另一个细胞、一个组织至另一个组织或一个器官至另一个器官的扩散；(viii)抑制或减少感染物从一个受试者至另一个受试者的扩散/传播；(ix)减少与感染性疾病相关的器官衰竭；(x)减少受试者的住院治疗；(xi)减小住院治疗时长；(xii)增加患有感染性疾病或感染的受试者的存活；(xiii)消除感染性疾病或感染；(xiii)抑制或减少感染物或感染的复制；(xiv)抑制或减少感染物进入细胞中；(xv)抑制或减少感染物的基因组的复制；(xvi)抑制或减少感染物蛋白的合成；(xvii)抑制或减少感染物的组装；(xviii)抑制或减少感染无从细胞中的释放；(xviii)减小感染物的数目或滴度；(xix)减小与感染性疾病或感染相关的症状的数目；(xx)增强、改善、增补、补充或强化另一种疗法的预防或治疗作用；和/或(xxi)预防与感染性疾病相关的继发性感染的发作或进展。
在某些实施方案中，将本文所描述的两种或更多种不同抗GITR抗体或其抗原结合片段施用于受试者。在一些实施方案中，将本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段与一种或多种其它疗法组合施用于受试者。在一个实施方案中，本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段与一种或多种抗真菌剂组合施用。
在一个特定实施方案中，将本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段与一种或多种抗生素组合施用于受试者。可以与本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段组合使用的抗生素的实例包括氨基糖苷抗生素、糖肽、酰胺醇(amphenicol)抗生素、袢霉素抗生素、头孢菌素、头霉素恶唑烷酮、青霉素、喹诺酮、加明链霉素、四环素以及其类似物。
在另一个实施方案中，本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段与一种或多种抗病毒剂组合施用。可以与本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段组合使用的抗病毒剂的实例包括非核苷逆转录酶抑制剂、核苷逆转录酶抑制剂、蛋白酶抑制剂以及融合抑制剂。在一个实施方案中，抗病毒剂是金刚烷胺(amantadine)、磷酸奥司他韦(oseltamivirphosphate)、金刚乙胺(rimantadine)以及扎那米韦(zanamivir)。在另一个实施方案中，抗病毒剂是非核苷逆转录酶抑制剂，诸如地拉韦啶(delavirdine)、依法韦仑(efavirenz)或奈韦拉平(nevirapine)。在另一个实施方案中，抗病毒剂是核苷逆转录酶抑制剂，诸如阿巴卡韦(abacavir)、去羟肌苷(didanosine)、恩曲他滨(emtricitabine)、恩曲他滨、拉米夫定(lamivudine)、司他夫定(stavudine)、富马酸替诺福韦酯(tenofovir DF)、扎西他滨(zalcitabine)或齐多夫定(zidovudine)。在另一个实施方案中，抗病毒剂是蛋白酶抑制剂，诸如安普那韦(amprenavir)、阿扎那韦(atazanavir)、弗沙普纳(fosamprenav)、茚地那韦(indinavir)、洛匹那韦(lopinavir)、奈非那韦(nelfinavir)、利托那韦(ritonavir)或沙奎那韦(saquinavir)。在另一个实施方案中，抗病毒剂是融合抑制剂，诸如恩夫韦地(enfuvirtide)。在另一个实施方案中，抗病毒剂是磷酸奥司他韦(oseltamivirphosphate)、两性霉素B(amphotericin B)或帕利珠单抗(palivizumab)。
在一个特定实施方案中，将抗GITR抗体或其抗原结合片段与疫苗组合施用于受试者，这种疫苗是包含与包含来自病原体(例如，病毒、细菌、真菌等等)的抗原的抗原肽复合的热休克蛋白的热休克蛋白制剂。在一些实施方案中，将抗GITR抗体或其抗原结合片段与疫苗组合施用于受试者，这种疫苗是包含与包含病毒抗原(例如，HSV-1或HSV-2的抗原)的抗原肽复合的热休克蛋白的热休克蛋白制剂。在一些实施方案中，包含与包含病毒抗原(例如，HSV-1或HSV-2的抗原)的抗原肽复合的热休克蛋白的热休克蛋白制剂与佐剂，诸如QS-21组合。在一些实施方案中，疫苗是HerpV(Agenus Inc.)，其为用于治疗疱疹感染的疫苗。适合疫苗的一个非限制性实例在Mo A.等,(2011),《疫苗(Vaccine)》29:8530-8541中公开，其内容以全文引用的方式并入本文中。其它非限制性实例在美国专利号8,541,002中公开，其内容以全文引用的方式并入本文中。
在一些实施方案中，将本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段或其组合物施用于罹患由感染物引起的感染性疾病的受试者，这些感染物包括(但不限于)细菌、真菌、原生动物以及病毒。在某些实施方案中，将本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段或其组合物施用于诊断患有由感染物引起的感染性疾病的受试者，这些感染物包括(但不限于)细菌、真菌、原生动物以及病毒。在一些实施方案中，将本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段或其组合物施用于患有感染的受试者。在一些实施方案中，根据本文所描述的方法治疗的受试者是免疫受损的或受免疫抑制。在某些实施方案中，根据本文所描述的方法治疗的受试者已经、正在或以其它方式将接受另一种疗法(例如，抗病毒剂、抗生素或抗真菌剂)。
5.4.1.3施用途径和剂量
可以将本文所描述的抗体或其抗原结合片段或组合物通过多种途径递送至受试者。这些包括(但不限于)肠道外、鼻内、气管内、经口、皮内、表面、肌肉内、腹膜内、经皮、静脉内、肿瘤内、结膜以及皮下途径。还可以采用肺部施用，例如，通过使用吸入器或喷雾器，以及用作喷雾的具有雾化剂的配方。
将有效治疗和/或预防病状的抗体或其抗原结合片段或组合物的量将取决于疾病的性质，并且可以通过标准临床技术确定。
在组合物中将要采用的精确剂量还将取决于施用途径以及感染或由其引起的疾病的严重性，并且应根据开业医师的判断和每个受试者的情况决定。举例来说，有效剂量还可以取决于施用方式、靶部位、患者的生理状况(包括年龄、体重和健康)、患者是人类还是动物、所施用的其它药物、或治疗是预防性的还是治疗性的而变化。通常，患者是人类，但还可以治疗非人类哺乳动物，包括转基因哺乳动物。最佳地滴定治疗剂量以使安全性和功效最佳。
在某些实施方案中，采用体外试验以帮助鉴别最佳剂量范围。有效剂量可以从来源于体外或动物模型测试系统的剂量反应曲线外推出。
对于用抗体(或其抗原结合片段)被动免疫，剂量在约0.0001至100mg/kg并且更通常0.01至15mg/kg患者体重的范围内。举例来说，剂量可以为1mg/kg体重、10mg/kg体重或在1-10mg/kg的范围内，或换句话说，对于70kg患者分别为70mg或700mg或在70-700mg的范围内。在一些实施方案中，施用于患者的剂量为约1mg/kg至约20mg/kg患者体重。一般来说，人类抗体在人体内具有比来自其它物种的抗体更长的半衰期，这归因于对外来多肽的免疫反应。因此，更低剂量的人类抗体和更小频率的施用常常是可能的。
例示性治疗方案要求每两周一次或每月一次或每3至6个月一次施用持续一年的时段或历经几年，或历经几年时间间隔。在一些方法中，将两种或更多种具有不同结合特异性的抗体或其抗原结合片段同时施用于受试者。通常在多个时刻施用抗体或其抗原结合片段。单个剂量之间的时间间隔可以是每周、每月、每3个月、每6个月或每年。
5.4.2检测和诊断用途
本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段(参看例如章节5.1)可以用于使用本领域的技术人员所知的经典免疫组织学方法化验生物样品中的GITR蛋白水平，这些方法包括免疫试验，诸如酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫沉淀或西方墨点法。适合的抗体试验标记在本领域中是已知的并且包括酶标记，诸如葡萄糖氧化酶；放射性同位素，诸如碘(125I、121I)、碳(14C)、硫(35S)、氚(3H)、铟(121In)以及锝(99Tc)；发光标记，诸如鲁米诺；以及荧光标记，诸如荧光素和罗丹明，以及生物素。这类标记可以用于标记本文所描述的抗体或其抗原结合片段。或者，识别本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段的第二抗体可以加标记并且与抗GITR抗体或其抗原结合片段组合使用以检测GITR蛋白水平。
化验GITR蛋白的表达水平预期包括直接地(例如，通过测定或估计绝对蛋白水平)或相对地(例如，通过与第二生物样品中的疾病相关蛋白水平相比较)定性或定量测量或估计第一生物样品中GITR蛋白的水平。可以测量或估计第一生物样品中的GITR多肽表达水平并且与标准GITR蛋白水平相比较，这个标准是从获自不患有病症的个体的第二生物样品获取或由来自不患有病症的个体的群体的平均水平测定。如本领域中应了解，一旦“标准”GITR多肽水平是已知的，那么其可以作为标准反复用于比较。
如本文中所使用，术语“生物样品”指的是获自受试者、细胞系、组织或潜在地表达GITR的细胞的其它来源的任何生物样品。从动物(例如，人类)获得组织活检体和体液的方法在本领域中是众所周知的。生物样品包括外周单核血细胞。
本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段可以用于预后、诊断、监测以及筛选应用，包括熟练技术人员所熟知和标准化并且基于本发明描述的体外和体内应用。可以利用用于免疫系统状态和/或免疫反应的体外评估和评价的预后、诊断、监测以及筛选试验和试剂盒以预测、诊断和监测来评价患者样品，包括已知具有或疑似具有免疫系统功能障碍的那些，或关于预期或所需的免疫系统反应、抗原反应或疫苗反应进行评价。免疫系统状态和/或免疫反应的评估和评价还适用于确定患者对于药物的临床试验或对于施用特定化学治疗剂或抗体或其抗原结合片段(包括其组合)对比不同药剂或抗体或其抗原结合片段的适宜性。这种类型的预后和诊断监测和评估已经在实践中利用针对乳癌中的HER2蛋白的抗体(HercepTestTM，Dako)，其中这个试验还用于针对使用的抗体疗法评价患者。体内应用包括定向细胞疗法和免疫系统调节以及免疫反应的放射成像。
在一个实施方案中，抗GITR抗体或其抗原结合片段可以用于活检样品的免疫组织化学。
在另一个实施方案中，抗GITR抗体或其抗原结合片段可以用于检测GITR的水平，或在膜表面上含有GITR的细胞的水平，这些水平然后可以与某些疾病症状相联系。本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段可以携带可检测或功能标记。当使用荧光标记时，可以利用当前可用的在本领域中已知的显微术和荧光活化细胞分选分析(FACS)或两种方法程序的组合以鉴别和定量特异性结合成员。本文所描述的抗GITR抗体或其抗原结合片段可以携带荧光标记。例示性荧光标记包括例如反应性和偶联探针，例如氨基香豆素、荧光素以及德克萨斯红(Texas red)、Alexa Fluor染料、Cy染料和DyLight染料。抗GITR抗体或其抗原结合片段可以携带放射性标记，诸如同位素3H、14C、32P、35S、36Cl、51Cr、57Co、58Co、59Fe、67Cu、90Y、99Tc、111In、117Lu、121I、124I、125I、131I、198Au、211At、213Bi、225Ac以及186Re。当使用放射性标记时，可以利用当前可用的在本领域中已知的计数程序以鉴别和定量抗GITR抗体或其抗原结合片段与GITR(例如，人类GITR)的特异性结合。在标记是酶的情况下，检测可以通过目前利用的如本领域中已知的比色、分光光度、荧光光度、电流测定或气体测定技术中的任一者实现。这可以通过使样品或对照样品与抗GITR抗体或其抗原结合片段在允许抗体或其抗原结合片段与GITR之间形成复合物的条件下接触来达成。在样品和对照中检测抗体或其抗原结合片段与GITR之间形成的任何复合物并且相比较。鉴于本文所描述的抗体对GITR的特异性结合，抗体或其抗原结合片段可以用于特异性地检测细胞表面上的GITR表达。本文所描述的抗体或其抗原结合片段还可以用于经由免疫亲和纯化来纯化GITR。
本文还包括了一种试验系统，其可以按测试试剂盒的形式制备用于定量分析例如GITR或GITR/GITRL复合物存在的程度。系统或测试试剂盒可以包含标记的组分，例如标记的抗体，以及一种或多种额外免疫化学试剂。对于试剂盒的更多情况，参看例如下文的章节5.5。
5.5试剂盒
本文提供了包含一种或多种本文所描述的抗体或其抗原结合片段或其偶联物的试剂盒。在一个特定实施方案中，本文提供了一种医药包装或试剂盒，其包含填充有本文所描述的医药组合物的一种或多种成分，诸如一种或多种本文所提供的抗体或其抗原结合片段的一个或多个容器。在一些实施方案中，试剂盒含有本文所描述的医药组合物和任何预防或治疗剂，诸如本文所描述的那些。在某些实施方案中，试剂盒可以含有T细胞有丝分裂原，诸如植物血球凝集素(PHA)和/或佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)，或TCR复合物刺激抗体，诸如抗CD3抗体和抗CD28抗体。任选地与这样的容器相关联的可以是由管控医药品或生物产品的制造、使用或出售的政府机构规定的形式的通知，这个通知反映了由制造、使用或出售的代理商批准供人类施用。
本文还提供了可以用于上述方法中的试剂盒。在一个实施方案中，试剂盒在一个或多个容器中包含本文所描述的抗体，优选地是纯化抗体。在一个特定实施方案中，本文所描述的试剂盒含有实质上分离的GITR抗原(例如，人类GITR)作为对照。在另一个特定实施方案中，本文所描述的试剂盒进一步包含不与GITR抗原反应的对照抗体。在另一个特定实施方案中，本文所描述的试剂盒含有用于检测抗体与GITR抗原的结合的一种或多种要素(例如，抗体可以偶联至可检测底物，诸如荧光化合物、酶底物、放射性化合物或发光化合物，或识别第一抗体的第二抗体可以偶联至可检测底物)。在特定实施方案中，本文所提供的试剂盒可以包括重组产生或化学合成的GITR抗原。试剂盒中所提供的GITR抗原还可以附着至固体支撑物。在一个更特定实施方案中，上文所描述的试剂盒的检测构件包括GITR抗原附着的固体支撑物。这种试剂盒还可以包括非附着的报告体标记的抗人类抗体或抗小鼠/大鼠抗体。在这个实施方案中，抗体与GITR抗原的结合可以通过所述报告体标记的抗体的结合来检测。
以下实施例作为说明并且不作为限制而提供。
6.实施例
这个章节(即，章节6)中的实施例作为说明并且不作为限制而提供。
6.1实施例1：针对人类GITR的新颖抗体的产生
这个实施例描述了结合至人类GITR的鼠类抗体的产生和表征。详细地说，这个实施例描述了特异性地结合至人类GITR并且对CD4+T细胞展现共刺激作用的鼠类抗体的产生。
为了产生新颖GITR抗体，用人类GITR转染的小鼠CMS5a细胞在BALB/c小鼠中与佐剂(单磷酰脂质A(MPL)、海藻糖二霉菌酸酯(TDM)、胞壁酰二肽(MDP)以及弗氏佐剂(FA))组合用作免疫原。使来自免疫的小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系SP2/0融合。在混合血吸附试验中对hGITR转染的CMS5a和野生型CMS5a细胞筛选新产生的克隆体的上清液。通过ELISA对重组hGITR蛋白(HGITR-Fc，Sigma)进一步测试所选的上清液。融合#231得到通过MHA和ELISA对人类GITR(本文中有时称作hGITR或huGITR)具有选择性反应性的四种杂交瘤(231-32-15、231-1039-45、231-1042-7以及231-1333-21)。通过蛋白G亲和色谱法纯化抗体(所有IgG1)用于进一步测试。
通过西方墨点针对纯化的重组人类GITR、重组小鼠GITR、用人类GITR转染的CMS5a细胞、野生型CMS5a细胞、活化的CD4+T细胞以及未处理的CD4+T细胞测试抗GITR抗体的特异性。在非还原条件下的西方墨点描绘于图1中。抗GITR抗体与纯化的重组人类GITR反应，不与重组小鼠GITR反应，与CMS5a细胞中的重组人类GITR反应，并且与活化的CD4+T细胞中的天然人类GITR反应。
通过表面等离子体共振进行配体(GITR-L)和单克隆抗体结合至固定的huGITR的分析并且在上测量。使用标准胺偶合将GITR(约1100RU)固定至CM5传感器芯片上。将分析物以5μl/min的流动速率注射于固定的GITR上持续15分钟，继之以10分钟离解时段。在已经进行动力学运作之后，通过软件(Biacore Life Sciences)同时计算亲和力和离解常数。在12.5-200nM的浓度范围内分析人类GITR-L的结合并且在6.25-100nM的浓度下分析鼠类抗GITR单克隆抗体。抗体不结合至固定的小鼠GITR。抗体的亲和力和离解常数列入下表9中。
表9
对杂交瘤231-32-15、231-1039-45、231-1042-7以及231-1333-21进行测序并且发现其具有相同的cDNA和蛋白质序列。通过胰蛋白酶消化物的N端蛋白质测序和质谱法(MS)确认VH和VL的蛋白质序列。抗GITR抗体的可变重链序列是SEQ ID NO:201并且抗GITR抗体的可变轻链序列是SEQ ID NO:202。重链可变区(VH)互补决定区(CDR)序列VH CDR1、VHCDR2以及VH CDR3分别具有SEQ ID NO:13、14以及15，并且轻链可变区(VL)CDR序列VLCDR1、VL CDR2以及VL CDR3分别具有SEQ ID NO:16、17以及18。
将新的231-GITR抗体的竞争结合与可商购的抗GITR单克隆抗体(R&D SystemsmAb689克隆体110416)相比较。使用GITR转染的CMS5a细胞并且与未标记的抗GITR mAb一起孵育，随之添加PE偶联的R&D mAb或Alexa 488偶联的231-1039-45或213-1333-21抗体(对于Alexa448偶联的213-1333-21抗体，数据未示出)，通过FACS分析评估结果。R&D systems抗GITR mAb的阻断研究描绘于图2A中并且231抗体(1039-45)的阻断研究描绘于图2B中。在这些研究中，首先不添加抗体、添加未标记的R&D抗体或未标记的测试抗体(抗体1042-7、1039-45、1331-21或32-15)并且与M5Sa-GITR转染的细胞一起孵育。然后随之添加标记的R&D systems抗体(图2A)或标记的231-抗GITR抗体1039-45(图2B)。新的231抗体(1042-7、1039-45、1333-21或32-15)仅部分阻断R&D抗体的结合，这可能归因于位阻(图2A)。图2B示出了R&D抗体不阻断231-1039-45抗体的结合。1039-45的结合受231抗体中的任一者(即，受1042-7、1039-45、1333-21或32-15)抑制。
通过FACS分析231-GITR抗体的结合特征并且结果描绘于图3A-C中。图3A示出了用来自两个不同批次(1和2)的抗人类GITR IgG11333-21抗体和R&D Systems抗体将CMS5a-GITR细胞染色。在图3B中，示出了在用1042-7、32-15、1039-45、1333-21以及R&D Systems抗体染色后源自离体PMBC的CD3-CD19-GITR+和CD4+CD25+GITR+的荧光强度。在1333-21或R&Dsystems抗体(mAb689克隆体110416)结合之后这些源自体内PBMC的细胞的FACS分析示于图3C中。
接下来，进行研究以评估抗GITR抗体与抗CD3(OKT3)抗体组合对CD4+T细胞的共刺激作用。通过组合抗GITR抗体(231-1042-7、231-32-15、231-1039-45、231-1333-21)与次最佳浓度(0.2μg/ml)的OKT3观测到最显著的相对共刺激作用。使不同浓度的抗GITR抗体(5μg/ml)和OKT-3抗体结合至组织培养板并且然后与CSFE标记的CD4+细胞一起孵育。将IL-2(10U/ml)添加至培养基中并且将细胞和抗体再孵育5天。在5天结束时，用具有低CFSE强度的分裂细胞评价CFSE强度。还测量IFNγ。抗GITR抗体的结果描绘于图4中。在OKT3抗体的次最佳浓度(0.2μg/ml)下，抗GITR抗体对CD4+细胞的增殖具有显著的相对作用。在与所测试的所有水平的OKT3组合的抗GITR抗体存在下观察到IFNγ与对照相比增加，在0.2μg/ml和0.04μg/ml下观测到最明显的作用。所测试的抗体之间的变化可以归咎于试验内可变性和每个抗体制剂(例如，独立制剂)之间的天然可变性。值得注意地，在不存在OKT3的情况下，不存在受抗GITR抗体的刺激。抗GITR抗体与OKT3的共刺激作用剂量依赖于抗GITR抗体的量(数据未示出)。
总之，已经分离出对人类GITR具特异性并且识别重组和天然GITR的新的抗GITR抗体。这些抗体以2.5-5ng/ml结合在hGITR转染的CMS5a细胞上表达的hGITR并且通过FACS分析显示良好的结合。抗体还结合至人类PBMC，包括表达天然hGITR的T细胞。通过其对GITR的亲和力是KA(1/m)约4.2×108、KD(m)2.4×10-9(对比GITRL(配体)KA1.8×108和KD 5.5×10-9)。抗体对比可商购的GITR mAb(R&D)结合至hGITR上的不同位点。
已经展示了抗GITR单克隆抗体与次最佳浓度(0.2μg/ml和0.04μg/ml)的抗CD3mAb(OKT3)对CD4+T细胞的共刺激作用。尽管在富集的CD4+T细胞的群体中存在T调控性细胞，但抗GITR抗体增强CD4 T细胞活性。
6.2实施例2：小鼠单克隆抗体231-32-15的人源化
这个实施例描述了鼠类抗体231-32-15的人源化和人源化抗体的表征。
6.2.1鼠类抗体231-32-15的人源化
本文描述了抗人类GITR小鼠抗体231-32-15的人源化，包括人类接受体构架的选择。
6.2.2鼠类抗体231-32-15的嵌合
通过(Life TechnologiesTM)合成分别具有SEQ ID NO:201和202的来自鼠类231-32-15的鼠类VH和VL(κ)可变区。包括来自原始鼠类可变域的天然前导序列连同具有限制位点的适配子以允许这些可变区直接克隆至标准内部人类IgG1 Vh载体(CH1-2-3域)和Vk载体(Ck1)中，以创造具有鼠类Vh或Vk和人类恒定区的嵌合基因。然后将嵌合重和轻链表达载体共转染至悬浮液中的CHO细胞中以产生嵌合抗体蛋白用于下文所进行的试验中。这个嵌合抗体在章节6中的实施例中称作“嵌合亲本231-32-15抗体”。这个嵌合亲本231-32-15抗体在轻链恒定域中含有T109S取代(即，相对于野生型Fc序列在位置109处用丝氨酸取代苏氨酸)(根据Kabat编号)，这有助于可变区框内克隆至恒定区。这个突变是不影响抗体结合或功能的保守修饰。
同源性匹配用于选择人类接受体构架以移植抗体231-32-15的CDR。数据库，例如，来自人类和小鼠的免疫球蛋白基因座的种系可变基因的数据库(IMGT数据库(国际ImMunoGeneTics informationLefranc MP等,(1999)《核酸研究(NucleicAcids Res)》27(1):209-12；RuizM等,(2000)《核酸研究(Nucleic Acids Res)》28(1):219-21；Lefranc MP(2001)《核酸研究(Nucleic Acids Res)》29(1):207-9；Lefranc MP(2003)《核酸研究(Nucleic Acids Res)》31(1):307-10；Lefranc MP等,(2005)《发育与比较免疫学(Dev Compo Immunol)》29(3):185-203；Kaas Q等,(2007)《功能基因组学和蛋白质组学简报(Briefings in Functional Genomics&Proteomics)》6(4):253-64)或VBASE2(RetterI等,(2005)《核酸研究(Nucleic Acids Res)》33,数据库期号D671-D674)或Kabat数据库(Johnson G等,(2000)《核酸研究(Nucleic Acids Res)》28:214-218))或公布(例如，KabatEA等,同上)可以用于鉴别鼠类重和轻链可变区所属的人类亚家族并且确定最佳拟合人类种系构架以用作接受体分子。在这些亚家族内将要用作接受体的重和轻链可变区序列(VH和VL)的选择可以基于CDR1和CDR2区的结构的序列同源性和/或匹配以帮助保存在移植之后六个CDR的适当相对呈递。
使用IgBLAST(在NCBI网站上可用)搜索IMGT数据库指示231-32-15重链可变区构架与人类重链可变区亚家族1和7的成员之间的良好同源性。对于种系序列观测到CDR与构架序列的最高同源性和一致性：IGHV1-2*02(也称为DP75；SEQ ID NO:601)(59.2％一致性；98个中的58个氨基酸残基)、IGHV1-3*01(SEQ ID NO:602)(58.2％一致性；57/98)、IGHV1-46*01(SEQ ID NO:603)(57.1％一致性；56/98)、IGHV1-18*01(SEQ ID NO:604)和IGHV1-69*01(SEQ ID NO:605)(都是56.1％一致性；55/98)、以及IGHV7-4-1*02(SEQ ID NO:606)(54.1％一致性；53/98)。
使用相同的方法，231-32-15轻链可变域序列显示与人类轻链可变域κ亚家族3和4的成员的良好同源性。对于种系序列观测到CDR与构架序列的最高同源性和一致性：IGKV4-1*01(SEQ ID NO:607)(79.2％一致性；101个中的80个氨基酸残基)和IGKV3-7*02(SEQ IDNO:608)(64.4％一致性；65/101)。
作为人源化过程的起点，使用人类IGHV1-2*02作为人类构架接受体产生CDR移植型式的小鼠231-32-15VH。在残基位置处制造许多回复突变，其可能影响CDR的构象或可变域间堆积并且因此对于维持抗体的完整活性可能是结构上重要的。在构架1中，残基KabatH24保持为小鼠，因为其为CDR1(如由Kabat定义的5个氨基酸残基长的环)的经典残基。其在鼠类序列中是Gly并且在人类种系中是Ala。在构架2中，残基Kabat H48保持为小鼠，因为其被称为游标残基(即，极接近CDR)。其在鼠类序列中是Ile并且在人类种系中是Met。在构架3中，作为游标残基的残基Kabat H67和73保持为小鼠。H67在鼠类序列中是Ala并且在人类IGHV1-2*02种系中是Val。H73在鼠类序列中是Lys并且在人类IGHV1-2*02种系中是Thr。作为CDR2的关键经典残基的残基H71已经保持为小鼠(其在人类种系中是Arg并且在鼠类序列中是Val)。作为CDR1的经典残基的残基Kabat H94已经保持为小鼠(其在人类种系中是Arg并且在鼠类序列中是Lys)。最终人源化序列称作型式VH A(SEQ ID NO:206)并且与IGHV1-2*02人类种系具有79.6％一致性(98个中的78个氨基酸残基)。
使用人类IGKV3-7*02作为人类构架接受体产生第一CDR移植型式的小鼠231-32-15VL。在各种残基位置处考虑回复突变并且因此在构架3中，残基Kabat L87保持为小鼠，因为其可能在VH/VL界面中起关键作用。L87在鼠类序列中是His并且在IGKV3-7*02人类种系中是Tyr。最终人源化序列称作型式VK A1(SEQ ID NO:207)并且与IGKV3-7*02人类种系具有81.2％一致性(101个中的82个氨基酸残基)。
使用人类IGKV4-1*01作为人类构架接受体产生第二CDR移植型式的小鼠231-32-15VL。在各种残基位置处考虑回复突变并且因此在构架3中，残基Kabat L87保持为小鼠，因为其可能在VH/VL界面中起关键作用。L87在鼠类序列中是His并且在IGKV4-1*01人类种系中是Tyr。最终人源化序列称作型式VK A2(SEQ ID NO:208)并且与IGKV4-1*01人类种系具有91.1％一致性(101个中的92个氨基酸残基)。
表10示出了在上文所描述的CDR移植型式的小鼠231-32-15VH和VL中在小鼠与人类抗体构架之间不同的残基(Kabat编号)。
表10：231-32-15与人类接受体重链可变IGHV1-2*02以及人类接受体轻链可变IGKV4-1*01和IGKV3-7*02构架的比较。
6.2.3人源化变体的表达
如下文所描述，通过Life TechnologiesTM合成IGHV1-2*02、IGK4-1*01以及IGK3-7*02的可变区并且在标准表达载体(pPEP)中克隆。这些构建体随后用于转染CHO细胞，并且使用如下文所描述的悬浮阵列技术(200系统，Millipore)和表面等离子体共振(GE Healthcare)测试表达的抗体。术语“可变区”在这个实施例中意指重链IGHV1-2*02的VDJ重排基因以及轻链IGK4-1*01和IGK3-7*02的VJ重排基因。表达载体含有CMV启动子、免疫球蛋白恒定区、WPRE元件(转录后反应元件)以及BGH多腺苷酸化信号。三个不同的表达载体变体用于克隆可变区IGHV1-2*02。两个表达载体变体含有不同的免疫球蛋白恒定区-IGHG1和IGHG4并且三个表达载体变体含有IGHG1的片段以产生抗体Fab片段。在含有IGKC免疫球蛋白恒定区的表达载体中克隆轻链IGK4-1*01和IGK3-7*02的可变区。
6.2.3.1在表达载体中克隆用于CHO细胞转染
将合成的可变区克隆至含有适当免疫球蛋白恒定区的pPEP表达载体中。对于IGHV1-2*02的重链可变区的克隆，在37℃下用HindIII/Eco47IIIat消化构建体3592(pPEP-InsX-Cg(iso3))、4192(pPEP-InsX-IgG4)以及4215(pPEP-InsX-Fab-Xa-6xHis)(“6xHis”以SEQ ID NO:36公开)持续4小时。消化之后，对具有4952bp、4952bp以及4313bp的大小的色带进行凝胶纯化(Macherey&Nagel，NucleoSpin凝胶和PCR清理)。对于κ轻链可变区IGK4-1*01和IGK3-7*02的克隆，在37℃下用HindIII/Eco47III消化构建体3593(pPEP-Ins-Ck)持续4小时，并且对具有4474bp的大小的色带进行凝胶纯化。在37℃下用HindIII/Eco47III消化合成的抗体可变区持续4小时，并且对具有422bp(IGHV1-2*02)和411bp(IGK4-1*01和IGK3-7*02)的大小的色带进行凝胶纯化。
将消化和纯化的可变抗体区(IGHV1-2*02、IGK4-1*01、IGK3-7*02)框内接合至含有适当免疫球蛋白恒定区的pPEP载体(50ng)中。在16℃下以1:3的载体与插入物的比率进行接合过夜。此后，将1μl接合反应物电穿孔至DH10B细胞(大肠杆菌ElectroMax DH10B电感受态细胞，Invitrogen)(1900V/5ms)中。然后将5-50μl电穿孔的细菌涂至LB-琼脂+100μg/ml氨苄西林(ampicillin)板上。从每个构建体，采集约2-3个集落并且生长过夜。
从每个克隆体，进行小规模的DNA质粒制备(Macherey&Nagel，NucleoSpin质粒)。用HindIII/Eco47III(H/E)进行消化以验证克隆的插入物的存在和正确大小，并且ApaLI(A)消化用于验证正确的载体骨架。通过分离未切割的质粒DNA测试载体完整性。从每个阳性克隆体和DNA，将制剂规模放大，控制消化并且使用引物892-Je(序列：5'gaccaatagaaactgggcttgtc 3'；SEQ ID NO:705)测序。每个构建体接收构建体编号作为唯一标识符并且制备甘油储备液。
表11：表达载体中的构建体表征
6.2.3.2在逆转录病毒表达载体中克隆
通过Life TechnologeisTM合成IGHV1-2*02、IGK3-7*02以及IGK4-1*01的可变区并且克隆至逆转录病毒表达载体(pCMA)中。这些构建体随后用于转导前B细胞并且使用Retrocyte 技术在表面上表达抗体。逆转录病毒表达载体含有基于MSCV的5'和3'LTR、包含膜锚定部分(IGHG1)的免疫球蛋白恒定区(IGHG1或IGKC)以及CD8表面标志物基因。
将合成的可变区克隆至含有适当免疫球蛋白恒定区的逆转录病毒表达载体中。对于重链可变区的克隆，在37℃下用HindIII/Eco47III消化构建体3956(pCMA-InsX Cg(iso3)loxP2-I-tr_huCD8-loxP)持续4小时，并且对7616bp的大小的色带进行凝胶纯化。对于κ轻链可变区的克隆，在37℃下用HindIII/Eco47III消化构建体3957(pCMA-InsX Ck-I-tr_huCD8)持续4小时，并且对6718bp的大小的色带进行凝胶纯化。如上述章节6.2.1中所描述消化合成的抗体可变区。
将消化和纯化的可变抗体区框内接合至含有适当免疫球蛋白恒定区的逆转录病毒表达载体(50ng)中。如上述章节6.2.3.1中所描述进行接合、转化以及克隆体验证。使用引物327-Je(序列：5'ctcgatcctccctttatccag3'；SEQ ID NO:706)对规模放大的DNA质粒制剂进行测序。每个构建体接收构建体编号作为唯一标识符并且制备甘油储备液。
表12：逆转录病毒表达载体中的构建体表征
6.2.4重组抗体的表达
通过悬浮液中FreeStyleCHO-S细胞(Invitrogen，R800-07)的瞬时转染表达重组抗体。简单地说，在补充有4mM L-谷氨酰胺(Biochrom，K 0283)和1×HT补充物(GIBCO，11067-030)的PowerCHO2培养基(Lonza，12-771Q)中将细胞密度调整至8×106个细胞/毫升。在轻微搅动下将对应于抗体轻链(2.5μg/ml)和重链(2.5μg/ml)的DNA添加至细胞悬浮液中。在添加DNA之后，用10μl/ml TransIT-Pro转染试剂(MIRUS，MIR5700)和0.5mM(最终浓度)丙戊酸(Sigma-Aldrich，P4543)补充细胞悬浮液。在31℃、8％CO2下在振荡(200rpm)下孵育细胞悬浮液6天。
通过离心(9000g，在10℃下10分钟)收获培养上清液并且经0.45μm过滤器过滤。Vivaspin 20超滤装置(Sartorius，VS2032，MWCO 50kDa)用于在1000g、10℃下浓缩上清液至0.6ml的最终体积，持续约60分钟。对于重组抗体的纯化，用结合缓冲液(20mM磷酸盐缓冲液pH 7.0)平衡蛋白A HP Spin Trap柱(GE Healthcare，28-9031-32)并且加载0.6ml浓缩液。将柱用盖密封并且在室温下在直立圆筒混合机上孵育。30分钟后，通过施加600μl结合缓冲液并且随后在100g下离心1分钟将柱洗涤2次。通过添加400μl洗脱缓冲液(100mM甘氨酸，pH 2.0)并且在100g下离心1分钟从旋转柱洗脱结合的重组抗体。用40μl中和缓冲液(1MTris-HCl，pH 9.0)立即中和洗脱液。在4℃下在蛋白质LoBind管(Eppendorf，0030108.116)中储存纯化的重组抗体直至进一步加工用于表征研究。
对于定量，在试验缓冲液(Roche，11112589001)中稀释细胞培养上清液和含有人类IgG的纯化样品，并且在96半孔板(Corning，3884)中一式两份评估稀释液。简单地说，在黑暗(20℃，650rpm)中孵育25μl样品1小时，其中5μl含有通过与F(ab')2片段特异性山羊抗人类IgG(Jackson ImmunoResearch，109-006-09)胺偶合加载的1200个Luminex-COOH-珠粒。使用ChromPure人类IgG全分子(Jackson ImmunoResearch，009-000-003)的25μl 1:3稀释系列(0.08-60ng/ml)的重复生成标准曲线。通过添加30μl用R-PE标记的Fc特异性抗人类IgG(5μg/ml；Jackson ImmunoResearch，109-116-098)并且再孵育1小时进行检测。读取板并且使用200仪器(Millipore)使用以下设置分析：100个珠粒、50μl样品大小。
纯化样品的质量控制包括通过SDS-PAGE和尺寸排阻色谱法(SEC)在HPLC上分析。分别在还原和非还原条件下在12％和8％聚丙烯酰胺凝胶上，遵循Laemmli的方案(LaemmliUK(1970)《自然(Nature)》,227(5259):680-5)进行SDS-PAGE分析。用考马斯亮蓝(Commassie brilliant blue)溶液将聚丙烯酰胺凝胶染色以供显现。在配备有二元泵、脱气单元、自动取样单元以及UV二极管阵列检测器的Agilent Infinity 1260系统(AgilentTechnologies)上进行SEC。对于分离，使用Zenix-C 300柱(3μm粒度，4.5×300mm，Sepax，233300-4630)。加载3μg的每个样品并且在100mM磷酸盐缓冲液pH 7.0(补充有150mM NaCl)中以0.3 5ml/min分离15分钟并且在220nm下检测。
6.2.5人源化变体的表征
两种人源化变体(Hum231#1：IGHV1-2*02和IGK3-7*02；Hum231#2：IGHV1-2*02和IGK4-1*01)和嵌合亲本抗体231-32-15的结合特性在如下文所描述的许多试验中表征。
6.2.5.1通过悬浮阵列技术的定量和结合分析
在试验缓冲液(Roche 11112589001)中以1:10,000和1:100,000稀释两种人源化变体和嵌合亲本抗体231-32-15的纯化物质。简单地说，在96半孔滤板(Millipore，MABVN1250)中将25μl的每个稀释液在黑暗中(20℃，650rpm)与1500珠粒一起(在5μl试验缓冲液中)孵育1小时。使珠粒(Luminex Corp，#5LC10005-01和#14LC10014-01)与抗人类IgG(F(ab)2特异性，JIR，105-006-097)或GITR抗原(R&D systems，二硫键连接的同型二聚体；689-GR)经由与COOH珠粒表面胺偶合而偶合。对于IgG1型式，使用25μl ChromPure IgG全分子(JIR，009-000-003)的重复以1:3稀释系列(0.08-540ng/ml)生成标准曲线。对于IgG4格式的抗体，使用不同标准-纯化的免疫球蛋白(Sigma，I4639)。使用60μl用R-PE标记的山羊抗人类IgG F(ab)2(2.5μg/ml；JIR109-116-098，AbDSerotecRapid RPE抗体偶联试剂盒，LNK022RPE)和1小时孵育时间(20℃，650rpm)进行检测。使用200系统(Millipore)分析板。每孔在48μl样品体积中对100个珠粒的数目计数。相对于嵌合亲本231-32-15抗体(设定至100％结合)的MFI值并且根据存在于样品中的IgG值计算相对亲和力。两种人源化变体都显示接近于100％的相对亲和力。
6.2.5.2使用悬浮阵列技术的配体阻断活性
为了确定抗GITR抗体是否阻断配体(GITRL)与GITR的结合，使用悬浮阵列技术进行排序试验设置。将5μl试验缓冲液(Luminex Corp，#14LC10014-01)中的1200个珠粒添加至96孔半区板(Corning,Inc.，3884)的每个孔中。使珠粒与GITR抗原(R&D systems，二硫键连接的同型二聚体；689-GR)经由与COOH珠粒表面胺偶合而偶合。使用50μg/ml GITR抗原和每毫升1×107个Luminex珠粒进行偶合反应。标准NHS酯化学用于在抗原的伯胺基与珠粒表面上的羧基之间形成碳化二亚胺键(Luminex Xmap详细说明书第3章)。
蛋白质的抗原偶合是简单的两步碳化二亚胺程序，在此期间首先在Sulfo-NHS(N-羟基硫代琥珀酰亚胺)存在下用EDC(1-乙基-3-[3-二甲氨基丙基]碳化二亚胺盐酸盐)试剂活化微球羧基以形成sulfo-NHS酯中间物。然后通过与靶分子(抗体、蛋白质或肽)的伯胺反应置换反应性中间物以形成共价酰胺键。在20℃和650rpm下将偶合珠粒与不同浓度的抗GITR抗体(每孔在25μl试验缓冲液中9000ng/ml至12ng/ml的浓度)一起孵育1小时。此后，将30μl R-PE标记的GITR配体(浓度1nM；单体，R&D systems 694-GF/CF)添加至每个孔中，得到60μl的总孔体积(每孔1200个珠粒和0.5nM标记的GITRL的最终浓度)。内部使用R-PE标记试剂盒(AbDSerotec，LYNX Rapid RPE抗体偶联试剂盒，LNK023RPE)根据制造商的方案完成配体的标记。使用200系统(Millipore)分析板。每孔在50μl样品体积中对100个珠粒的数目计数。使用仅配体对照的非竞争信号(100％结合)的MFI值计算配体阻断潜力。PE可检测信号指示配体结合至抗原。
在第一个试验中，测试抗GITR抗体嵌合亲本231-32-15和m6C8(WO 06/105021)以及识别IL-1β的对照抗体(SK48E26；国际公布号WO 95/001997)。抗体m6C8是基于WO 06/105021(以引用的方式并入本文中)中所提供的抗体6C8的可变区产生的IgG1抗体。m6C8的重链包含SEQ ID NO:585的氨基酸序列。m6C8的轻链包含SEQ ID NO:586的氨基酸序列。这个试验的结果示于图5中，其中可以观测到在高于333ng/ml的6C8抗体的浓度下，未检测到PE信号并且因此未发生GITRL与GITR的结合。相比之下，对于嵌合亲本231-32-15抗体，在所测试的所有浓度下，检测到PE信号，指示当嵌合亲本231-32-15抗体也结合至GITR时GITRL仍然能够结合至GITR。图5中所示的数据来自一式两份进行的这个试验的四次重复，其中标准偏差针对n＝8计算。
在第二个试验中，在嵌合亲本231-32-15抗GITR抗体以及人源化变体Hum231#1和Hum231#2存在下测试GITRL-PE结合至GITR。图6示出了这三个抗GITR抗体当结合至GITR时仍然允许GITRL与GITR的结合并且全部三个抗体显示可比的配体阻断活性。
6.2.5.3通过表面等离子体共振的动力学分析
表面等离子体共振用于测定人源化变体和嵌合亲本231-32-15抗体的亲和力(T100/T200灵敏度增强系统(GE Healthcare)和Fab捕获试验)。在25℃下使用1×DPBS(PAA，H15-002)加上P20(0.05％，Pierce，28320)作为运作缓冲液分析所有相互作用。将抗GITR抗体(8μg/ml，在运作缓冲液中)经由固定的抗人类Fab抗体(GE Healthcare，Fab捕获试剂盒，28958325)捕获至CM5传感器芯片(GE Healthcare，Series S CM5，BR-1005-30)的芯片表面。为了检测GITR抗原的非特异性相互作用，仅在流动池2中进行抗体捕获，而在流动池1中仅固定捕获抗体。另外，无关抗体(抗IL-1β；SK48E26；国际公布号WO 95/001997)用于评估GITR结合的特异性。在捕获抗GITR抗体之后，使GITR抗原(R&D systems，二硫键连接的同型二聚体；689-GR)以对于每个抗体的不同量(40nM、10nM以及2.5nM)穿过两个流动池。而且，在每次运作中包括空白曲线(仅运作缓冲液)。缔合运作90秒并且离解运作600秒，其中流动速率为10μl/min。在每次运作之后，用10mM甘氨酸pH2.0(GEHealthcare，BR-1003-55)进行再生步骤，以30μl/min持续60秒。使用T200评价软件版本2.0.1应用具有Rmax全拟合的Langmuir 1:1模型评价结合曲线。
从这些值，计算亲和力值(KD(M))并且值示于下表13中。人源化变体Hum231#1和Hum123#2显示改良的缔合速率(on-rate)但降低的离解速率(off-rate)，分别得到0.7nM和0.6nM的KD值。嵌合亲本231-32-15抗体具有2nM的亲和力。
表13：缔合速率和离解速率以及计算的KD(M)的概述
6.2.5.4通过表面等离子体共振的配体阻断分析
两种人源化变体Hum231#1和Hum231#2预期显示与嵌合亲本231-32-15抗体相同的配体阻断动力学。这使用配体阻断试验如通过表面等离子体共振(T100/T200灵敏度增强系统(GE Healthcare))测量来确认。
在第一个实验中，评价GITR配体与固定的GITR抗原的结合。将GITR抗原(R&Dsystems，二硫键连接的同型二聚体；689-GR)以高密度(4371RU)固定于CM5传感器芯片(GEHealthcare，Series S CM5，BR-1005-30)上。在另一个流动池中，固定卵白蛋白(1289RU，Pierce ThermoFisher 77120)以供参考。根据来自制造商(GE Healthcare)的用于胺偶合(用0.4M EDC和0.1M NHS活化表面，GE Healthcare胺偶合试剂盒，BR-1000-50)的标准方案进行固定。用1M乙醇-胺-HCl pH 8.5灭活未反应基团。此后，使两种GITR配体(单体R&D，694-GL和非共价连接的同型三聚体R&D，6987)以不同量(500nM、250nM以及125nM)穿过芯片表面以确定饱和状态。以5μl/min的流动速率使用240秒的缔合时间和300秒的离解时间。使用10mM甘氨酸pH2.0(GE Healthcare，BR-1003-55)完成芯片表面的再生，以10μl/min持续60秒。用125nM GITR三聚配体达成最有利的饱和状态并且这个设置因此与相同量的抗GITR抗体一起使用。在另一个实验中，使用相反设置以使得抗GITR抗体(125nM)首先结合至芯片上的GITR抗原并且此后添加GITR配体(125nM非共价连接的三聚体)。
如图7中所示，当将GITR抗原固定于芯片上并且在抗GITR抗体嵌合231-32-15抗体、Hum231#1以及Hum231#2存在下添加GITRL时，观测到GITRL的结合。相比之下，在抗GITR抗体m6C8存在下未观测到GITRL的结合。这些数据指示嵌合231-32-15抗体、Hum231#1以及Hum231#2并不抑制人类GITR结合至GITRL。
6.3实施例3：人源化抗体的功能表征
这个实施例展示了通过上文所描述的方法产生的人源化抗GITR抗体发挥GITR的促效剂的功能的能力。抗GITR抗体Hum231#2包含有包含SEQ ID NO:567的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:587的氨基酸序列的轻链。抗体Hum231#2是在轻链恒定域中含有T109S取代(即，相对于野生型Fc序列在位置109处用丝氨酸取代苏氨酸)(根据Kabat编号)的人类IgG1抗体，这有助于可变区框内克隆至恒定区。这个突变是不影响抗体结合或功能的保守修饰。还产生在位置109处含有苏氨酸(根据Kabat编号)的野生型配对物，命名为Hum231#2w。抗体Hum231#2w是包含SEQ ID NO:567的重链和SEQ ID NO:576的轻链的人类IgG1抗体。
还化验这些抗GITR抗体以确定其共刺激初级人类CD4+或CD8+T细胞的能力。如下文的章节6.3.1至6.3.3和6.3.7中所描述，用来自多个供体的物质进行这项工作。在候选抗体的筛选和测试中所用的人类白细胞从纽约血液中心(New York Blood Center)(New YorkCity)取得。
在富集的CD4阳性(又称为CD4+)T细胞、CD8阳性(又称为CD8+)T细胞以及PBMC上展示抗GITR抗体的功能活性。对于人类T细胞增殖研究，收集新鲜制备的供体堆积白细胞并且使用无菌组织培养技术加工。加工白细胞以通过密度梯度(淋巴细胞分离培养基，Corning)收获单核免疫细胞(PBMC)。PBMC位于Ficol密度梯度的血沉棕黄层中。
通过阴性选择使用人类CD4+T细胞富集混合液(StemcellTechnologies,Vancouver,BC Canada)从PBMC制备富集的CD4细胞。通过在淋巴细胞分离培养基(Corning)上密度离心使富集的CD4+T细胞制剂与红血细胞分离。洗涤收集的细胞并且等分用于在液氮中储存。为了说明供体对刺激的反应的可变性，不同浓度的抗CD3用于调整对反应的供体特异性能力。因此，在筛选抗GITR抗体之前，在存在或不存在参考抗GITR嵌合亲本231-32-15抗体的情况下评估血沉棕黄层响应于用滴定水平的抗CD3(克隆体SP34；BDPharmingen；浓度在31.5ng/ml至250ng/ml的范围内)的CD3刺激的细胞因子释放和增殖的能力以确立基线T细胞增殖和其细胞因子产生并且确定对于每个供体血沉棕黄层的适当刺激条件。
6.3.1促效性抗GITR抗体对抗CD3刺激的CD4+T细胞增殖的影响
通过CD4+T细胞的共刺激评估抗GITR抗体的促效剂活性。将嵌合亲本231-32-15抗体的促效活性与两种人源化型式：Hum231#1和Hum231#2相比较。共刺激试验如下进行：对于板结合的刺激条件，将抗CD3抗体、抗GITR抗体以及同型对照(如有指示)涂布于平底或圆底无菌组织培养板上持续两小时，并且经由洗涤去除过量抗体。对于可溶性共刺激条件，将抗CD3抗体涂布至板上，同时在溶液中提供使用抗GITR抗体的共刺激。所测试的抗GITR抗体是Hum231#1和Hum231#2、嵌合亲本231-32-15抗体(又称为REF-231)或阴性同型对照(pAB1915)。另外，对于板结合的和可溶性共刺激条件，在溶液中还提供抗CD28抗体(125ng/ml；BD Pharmingen)和10U IL-2。
通过监测分裂细胞内羧基荧光素二乙酸酯琥珀酰亚胺酯(CFSE)染料的稀释测定细胞增殖(Quah BJ等,(2007)《自然实验手册(Nat Protoc)》,2(9):2049-56)。用1-2μMCFSE标记富集的CD4+T细胞。洗涤CFSE标记的CD4+富集的T细胞并且然后用板结合的抗CD3(125ng/ml)、可溶性抗CD28(125ng/ml)以及10U IL-2连同5μg/ml或10μg/ml板结合的抗GITR抗体或无抗体刺激。在37℃下在培养物中使细胞分裂3至6天，这取决于从板收集培养上清液和细胞的时间点处每个供体细胞的最佳活化。
图8A和8B示出了通过分别对血沉棕黄层6和血沉棕黄层8一式三份进行的抗GITR抗体共刺激诱导的CD4+T细胞增殖的代表性FACS分析。这些图示出了细胞数目(Y轴)和由CFSE标记的CD4+T细胞发射的荧光的水平(X轴)。使用10μg/ml抗GITR抗体(嵌合亲本231-32-15(REF 231-32-15)、Hum231#1以及Hum231#2)。由细胞的百分比增加与CFSE发射的荧光的水平下降(CFSE low)显示增强的CD4+T细胞增殖。图8A和8B说明了抗GITR抗体(嵌合亲本231-32-15(REF231-32-15)、Hum231#1以及Hum231#2)当添加至用次最佳浓度的抗CD3抗体活化的细胞中时对于两种高响应细胞(血沉棕黄层6，图8A)并且甚至对于低响应细胞(血沉棕黄层8；图8B)展示促效活性。
图9A和9B是来自10μg/ml浓度的板结合的抗GITR抗体(嵌合亲本231-32-15抗体、Hum231#1、Hum231#2以及m6C8)的上述研究的代表性结果的直方图。在图9A中所示的实施例中，用Hum231#1或Hum231#2共刺激在10μg/ml下诱导CD4+T细胞增殖。当用10μg/ml Hum231#1或Hum231#2共刺激时约大于50％的CD4+T细胞增殖(CFSE low细胞)。相比之下，在不存在抗GITR抗体介导的共刺激的抗CD3/抗CD28刺激下，仅约35％的CD4+T细胞增殖(CFSE low细胞)。图9B说明了添加抗GITR共刺激至抗CD3/抗CD28介导的刺激经过5天与用单独的抗CD3/抗CD28刺激相比还引起培养物中CD4+T细胞的绝对数目增加。举例来说，用抗CD3/抗CD28与10μg/ml抗体嵌合亲本231-32-15抗体(REF231)联合刺激引起GITR共刺激诱导的CD4+T细胞数目从7.5×104扩展至12.0×104。
另外，Hum231#1介导的共刺激在10μg/ml下还诱导CD4+T细胞从7.5×104扩展至11.5×104。在10μg/ml抗体浓度下，由Hum231#2共刺激还诱导CD4+T细胞从7.5×104增殖至10.6×104。值得注意地，CD4+T细胞与10μg/ml m6C8的共刺激(国际公布号：WO 06/105021)在培养5天后相比单独的抗CD3/抗CD28刺激所见并不引起细胞的绝对数目的额外增加。
6.3.2促效性抗GITR抗体对抗CD3诱导的CD4+T细胞细胞因子产生的影响
作为抗GITR抗体的促效性共刺激活性进一步证明，通过多重ELISA(Flowcytomix，基于FACS珠粒的细胞因子ELISA，eBioscience)测量由CD4+T细胞释放的细胞因子(IFNγ、IL-6、TNFα以及IL-10)。收集从增殖试验收获的上清液并且用于细胞因子分析。图10A至10D示出了10μg/ml或5μg/ml嵌合亲本231-32-15、Hum231#1或Hum231#2抗GITR抗体对由人类CD4+T细胞产生细胞因子的影响。添加10μg/ml或5μg/ml嵌合亲本231-32-15抗体、Hum231#1或Hum231#2至抗CD3/抗CD28刺激的T细胞中当与单独的抗CD3/抗CD28刺激相比时显著增加IFNγ、TNFα、IL-10以及IL-6的产生。在不存在抗CD3/抗CD28刺激的情况下对于促效性抗GITR抗体未观测到共刺激活性。
6.3.3人源化231-32-15克隆体的滴定
为了评价诱导T细胞增殖和细胞因子产生的抗GITR抗体浓度的范围，用125ng/ml抗CD3/抗CD28刺激富集的CD4+T细胞并且用滴定的板结合的嵌合亲本231-32-15、Hum231#1或Hum231#2抗GITR抗体共刺激。图11中所示的结果指示嵌合亲本231-32-15、Hum231#1以及Hum231#2共刺激在10μg/ml、5μg/ml或2.5μg/ml的浓度下如通过CFSE稀释监测诱导T细胞增殖。此外，在不存在任何抗CD3/抗CD28刺激的情况下，抗GITR抗体并不刺激CD4+T细胞增殖。
图12A示出了抗CD3/抗CD28刺激和抗GITR抗体(嵌合亲本231-32-15、Hum231#1或Hum231#2)共刺激在一定范围的浓度(10μg/ml、5μg/ml或2.5μg/ml)下增强CD4+T细胞的IFNγ产生。值得注意地，在不存在抗CD3/抗CD28刺激的情况下，抗GITR抗体(嵌合亲本231-32-15、Hum231#1或Hum231#2)并不诱导IFNγ产生。
为了进一步检查溶液中嵌合亲本231-32-15、Hum231#1或Hum231#2抗GITR抗体的功能活性，用125ng/ml抗CD3/抗CD28刺激富集的CD4+T细胞并且用滴定的可溶性抗GITR抗体共刺激。如图12B中所示，可溶性Hum231#1或Hum231#2抗GITR抗体也共刺激CD4+T细胞的IFNγ产生。
6.3.4促效性抗GITR抗体对抗CD3诱导的PBMC细胞因子产生的影响
在这个实施例中，使用PBMC检查由抗GITR抗体Hum231#2共刺激诱导的细胞因子产生。在液氮中储存经由发克梯度(ficoll gradient)从健康供体血沉棕黄层(ResearchBlood Components,LLC)分离的PBMC并且在实验当天解冻。使细胞再悬浮于细胞培养基(RPMI+10％FBS+20U/ml IL-2)中并且添加至含有各种次最佳浓度(0.3-5μg/ml)的板结合的抗CD3抗体和5μg/ml板结合的抗GITR抗体或同型对照IgG1抗体的96孔培养板中。在37℃和5％CO2下将样品孵育4天并且第2天和第4天收集细胞培养上清液。根据制造商的说明书使用V-PLEX Proinflammatory Panel1(人类)试剂盒(Meso Scale Discovery)测试样品以测量分泌的细胞因子(IFNγ、IL-2、TNFα、IL-10、IL-13以及IL-4)。
如图13中所描绘，用板结合的抗GITR抗体Hum231#2共刺激诱导来自两个不同供体的PBMC中多个细胞因子的分泌。
6.3.5促效性抗GITR抗体对通过细胞内细胞因子染色测量的细胞因子产生的影响
通过细胞内细胞因子染色进一步分析Hum231#2对细胞因子产生的促效活性。在液氮中储存经由发克梯度从健康供体血沉棕黄层(Research Blood Components,LLC)分离的PBMC并且在实验当天解冻。使细胞再悬浮于细胞培养基(RPMI+10％FBS+20U/ml IL-2)中并且添加至含有各种次最佳浓度(0.3-5μg/ml)的板结合的抗CD3抗体和5μg/ml板结合的抗GITR抗体或同型对照IgG1抗体的96孔培养板中。在37℃和5％CO2下将样品孵育3-4天。活化之后，为了抑制细胞内蛋白质转运，根据制造商的说明书用布雷菲德菌素A(BDBiosciences)处理细胞并且在37℃和5％CO2下将样品孵育6小时。孵育之后，用FITC生存力胺染料(Life technologies)将细胞染色以对死细胞染色。用冷FACS缓冲液(1×PBS+2％FBS，pH7.2)洗涤之后，将在冷FACS缓冲液中稀释的含有针对CD3(APC Cy7，SP34.2)、CD4(PercP Cy5.5，L200)以及CD8a(PE Cy7，SK1)的抗体的抗体混合液添加至每个样品中并且在4℃下孵育10分钟。根据制造商的说明书固定细胞并且用Cytofix-Cytoperm(BDBiosciences)渗透用于细胞内染色。用针对IFNγ(Alexa647，B27)和TNFα(PE，Mab11)的抗体将PBMC染色并且在室温下孵育10分钟。使用1×Perm-洗涤缓冲液(BD Biosciences)洗涤样品并且使用FACScanto流式细胞测量仪(BD Biosciences)撷取。使用Flojo软件分析流式细胞测量图。流式细胞测量图和图形代表使用来自六个不同供体的PBMC的实验。
GITR抗体Hum231#2在一定范围的次最佳抗CD3抗体浓度下对人类T细胞，包括IFNγ+单功能性T细胞、TNFα+单功能性T细胞以及IFNγ+TNFα+多功能性T细胞展示共刺激活性(图14A和14B)。
接下来，使作为人类IgG1抗体的Hum231#2w转化成人类IgG4抗体，命名为pab1989。抗体pab1989与Hum231#2w共享相同的重链可变区和相同的轻链，但包含人类IgG4恒定区。抗体pab1989包含SEQ ID NO:554的重链序列和SEQ ID NO:576的轻链序列。
在上文所描述的细胞内细胞因子染色实验中与IgG1抗体Hum231#2w平行测试IgG4抗体pab1989。以0.7、0.8以及0.9μg/ml使用抗CD3抗体并且以5μg/ml使用抗GITR抗体。在37℃和5％CO2下将样品孵育3-4天。如图14C中所示，pab1989展现与Hum231#2w类似的促效活性，诱导IFNγ+TNFα+多功能性CD4+T细胞和TNFα+单功能性CD4+T细胞。图形代表使用来自四个不同供体的PBMC的实验。
6.3.6交联对抗GITR抗体的促效活性的影响
使用抗CD3刺激的PBMC检查交联对抗GITR抗体Hum231#2的功能活性的影响。
在如章节6.3.5中所描述的次最佳CD3刺激试验中针对IFNγ+TNFα+多功能性T细胞的诱导测试板结合的或可溶性Hum231#2。如图15A中所示，与同型对照相比，仅板结合的而非可溶性Hum231#2增加IFNγ+TNFα+多功能性CD8+T细胞的百分比。
对于板结合的Hum231#2或与抗Fc抗体交联的Hum231#2重复如章节6.3.4中所描述的PBMC细胞因子分泌试验。第4天收集培养上清液用于测量分泌的细胞因子(IFNγ、IL-2、TNFα、IL-10、IL-13以及IL-4)。用板结合的(图15B)或抗Fc交联的(图15C)Hum231#2共刺激诱导细胞因子分泌。
6.3.7人源化231-32-15克隆体对血沉棕黄层8(BC8)的活性和效应T细胞或T调控性细胞的测量
在这个实施例中，通过监测CD4+T效应或CD4+T调控性细胞的增殖测量促效性抗GITR抗体对这些细胞的影响。用CFSE标记富集的CD4+T细胞并且用125ng/ml板结合的抗CD3抗体刺激。在培养物中5天后通过CFSE稀释监测增殖的富集的CD4+T细胞。
通过流式细胞测量术染色由细胞表面标志物鉴别图16A和16B中所示的在富集的CD4+T细胞群体内的CD4+T效应或T调控性细胞群体。将活化的CD4+T效应细胞表征为CD25+、CD45RA-、CD127Med/Low以及Foxp3Neg/Low。将CD4+T调控性细胞鉴别为CD4+、CD25+、CD45RA-、CD127Low以及Foxp3High。根据下表14进行FACS染色：
表14：FACS染色组
刺激试验的结果示于图16A和16B的FACS图中。在CD4+Treg(CD4+、CD25+、CD45RA-、CD127Low以及Foxp3High)或活化的CD4+T效应细胞(CD25+、CD45RA-、CD127Med/Low以及Foxp3Neg/Low)上的门控显示单独和与抗GITR共刺激联合的125ng/ml抗CD3/抗CD28刺激上调T效应与T调控性细胞上的GITR表达。
图16A描绘了T效应与T调控性细胞的FACS分析。两种细胞类型在用单独或与抗GITR抗体联合的抗CD3刺激之后在其细胞表面上表达GITR。然而，用抗GITR抗体共刺激优于T调控性细胞优先扩展T效应细胞，得到增加的Teff/Treg比率(图16B)。
作为在细胞免疫的背景下抗GITR抗体对T细胞的促效活性进一步证明，评价在PBMC刺激之后的T细胞反应。
通过调整PBMC上抗CD3诱导的增殖对PBMC的刺激进行滴定。图17A和17B中说明了用与板结合的抗GITR抗体或同型对照联合的31.25ng/ml板结合的抗CD3/抗CD28刺激的CFSE标记的PBMC。作为抗GITR抗体的活性的阳性对照，相同刺激条件用于刺激富集的CD4+T细胞(数据未示出)。
通过用抗CD3和抗CD4或抗CD3和抗CD8染色鉴别PBMC群体中的CD4+或CD8+T细胞。在CD4+CD3+T细胞或CD8+CD3+T细胞上门控的撷取的FACS样品的FloJo(Tree Star,Inc.)分析显示抗GITR嵌合亲本231-32-15(REF 231)、Hum231#1以及Hum231#2抗体刺激T细胞增殖(％CFSE low)。详细地说，图17B中所描绘的实验揭示抗GITR嵌合亲本231-32-15(REF 231)、Hum231#1以及Hum231#2抗体对CD8+T细胞具有活性。
6.3.8促效性抗GITR抗体对GITR NF-κB-荧光素酶报告细胞系的影响
设计人类GITR NF-κB-荧光素酶报告细胞系(Promega)以探测抗GITR促效性抗体的共刺激活性。已经报道由抗GITR促效性抗体或GITR配体活化GITR会活化NF-κB(Snell LM等,(2010)《免疫学杂志(J Immunol)》185:7223-7234；Bulliard Y等,(2013)《实验医学杂志(J Exp Med)》210:1685-1693；Yu KY等,(2003)《生物化学与生物物理学研究通讯(Biochem Biophys Res Commun)》310:433-438)。这样的话，遗传修饰Jurkat细胞以稳定表达GloResponse NF-κB-luc2P构建体和人类GITR。使报告细胞再悬浮于试验培养基(RPMI+1％FBS)中并且在不存在或存在0.3μg/ml板结合的抗CD3抗体(克隆体SP34)的情况下与各种浓度(12.5、10、5、2.5、1.25以及0.625μg/ml)的板结合的抗GITR抗体Hum231#2w、m6C8或IgG1同型对照一起孵育。在孵育6或18小时后读取与抗CD3抗体一起孵育的板。在孵育2、5、6、8或18小时后读取不存在抗CD3抗体的板。孵育之后，在室温下平衡板并且然后添加等体积的室温Bio-Glo试剂(Promega)。使用EnVision多标记读取器2100读取发光。
对于使用抗CD3抗体的试验，针对所测试的每种抗体浓度绘制在刺激后18小时的荧光素酶RLU(图18A)。类似地，对于不使用抗CD3抗体的试验，图18B是示出针对所测试的各种抗体浓度在刺激后5小时的荧光素酶相对光单位(RLU)的图形。在图18C中，示出了在刺激后0、2、5、6、8以及18小时，在所测试的若干抗体浓度当中，在不存在抗CD3抗体的情况下荧光素酶表达(GITR Ab/同型对照)的最高比率。所示的数据代表使用抗CD3抗体的四个实验或不使用抗CD3抗体的两个实验。
在存在抗CD3抗体的情况下，虽然m6C8在6小时显示更强的促效活性(数据未示出)，但截至刺激后18小时，Hum231#2w和m6C8诱导GITR报告细胞系的类似活化(图18A)。然而，在不存在抗CD3抗体的情况下，仅Hum231#2w而非m6C8诱导GITR报告细胞系的活化(图18B)。
6.3.9促效性抗GITR抗体对Fcγ受体IIIA(CD16)报告细胞系的影响
在这个实施例中，检查由活化的nTreg细胞和T效应细胞对人类GITR的表达。使用基于磁性的分离技术富集从健康供体分离的PBMC的CD3+T细胞(Teff)或CD4+CD25+CD45RA+T细胞(nTreg)。然后用CD3-CD28扩展珠粒与500U rIL-2将T淋巴细胞活化4天，并且用50UrIL-2再活化5天。通过流式细胞测量术在CD4+和CD8+Teff上门控对比nTreg测定GITR受体定量。同时运作Quantibrite珠粒(BD Biosciences)并且用于定量GITR受体表面密度。
如图19A中所示，第9天(和所评价的所有时间点)在活化的nTreg细胞上人类GITR的表面表达高于在活化的CD4+或CD8+T效应细胞上的表面表达。
接下来，使用表达Fcγ受体IIIA(CD16)的报告细胞系连同如所描述产生的活化的T效应(Teff)或nTreg细胞评价抗GITR抗体Hum231#2w共啮合GITR的能力和通过活化Fcγ受体的信号。将扩展的Teff或nTreg细胞与不同剂量的Hum231#2w或IgG1同型对照一起孵育。将过度表达CD16(158V/V多态性)的Jurkat NFAT-荧光素酶报告细胞添加至样品中。抗体/抗原复合物(其中抗原位于细胞表面上)与CD16的结合向启动子/报告构建体传导信号并且引起荧光素酶基因转录。在37℃和5％CO2下将板孵育20小时。这个孵育之后，在室温下解冻Bio-Glo荧光素酶试验试剂(Promega)并且将75μl添加至96孔白色试验板的每个孔中。在5-10分钟内，测量发光。从每个样品读数扣除背景发光并且记录调整的相对光单位(RLU)。ΔRLU代表抗GITR抗体的RLU减去同型对照的RLU。
与活化的nTreg与活化的CD4+或CD8+T效应细胞之间的差异性表面GITR表达(图19A)一致，抗GITR抗体Hum231#2w当结合至活化的nTreg细胞时优先活化CD16(图19B)。
为了评价GITR过度表达是否是位于肿瘤微环境内的调控性T细胞的特征，在从健康人类供体(图19C，a-c，n＝3)的血液或从非小细胞肺癌(NSCLC)患者(图19C，d-f，n＝3)的肿瘤组织分离的T细胞上比较GITR表达。为了消除抗体与免疫群体的背景结合，在添加细胞表面和细胞内抗体之前将所有细胞与纯化的CD16/32抗体(10μg/ml，在室温下20分钟)一起孵育。在FcR阻断之后，将所有样品与APC偶联的抗GITR抗体(克隆体110416，R&D systems)或同型对照和细胞表面抗体谱系混合液(CD3-FITC、CD25-PECy7、CD4-BV650以及CD8a-PE)一起在冰上孵育45分钟(每次1μg/ml)，用FACS缓冲液(PBS、EDTA以及0.5％BSA)洗涤三次，随之固定/渗透并且与太平洋蓝(Pacific Blue)偶联的FOXP3一起孵育(固定/渗透并且在冰上每次孵育45分钟，1μg/ml)。然后使用LSRFortessa流式细胞测量仪(BD Biosciences)分析染色的样品。图19C中的细胞群体定义如下：Tconv(CD3+、CD4+、CD8a-、CD25low、FOXP3-)或Treg(CD3+、CD4+、CD8a-、CD25high、FOXP3+)。
如图19C中所展示，GITR表面表达在从NSCLC患者的肿瘤组织分离的调控性T细胞上最高，在来自健康供体的Treg或常规T细胞上具有极小或不可检测的水平。
6.3.10促效性抗GITR抗体对来自非洲绿猴的T细胞的细胞因子产生的影响
为了测试物种交叉反应性，评价Hum231#2与来自非洲绿猴(AGM)的GITR的结合。简单地说，解冻AGM PBMC(Worldwide Primates)并且计数。使PBMC再悬浮于细胞培养基(RPMI+10％FBS)中并且在37℃和5％CO2下用抗CD3抗体(克隆体SP34.2，BD)或ConA(Sigma)加上IL-2(20U/ml)刺激3天。活化之后，在室温下用胺染料FITC(Life technologies)将细胞染色15分钟。用冷FACS缓冲液(1×PBS+2％FBS，pH7.2)洗涤细胞，并且添加在冷FACS缓冲液中稀释的含有针对CD3(APC Cy7，SP34.2)、CD4(PercP，L200)、CD8(PE Cy7，SK1)以及PD-1(PE，EH12.2H7)的抗体的抗体混合液并且在4℃下孵育10分钟。洗涤细胞并且在4℃下与每孔2.5μg Hum231#2或IgG1同型对照一起孵育10分钟。洗涤细胞并且然后在4℃下用与Alexa647偶联的二级抗Fc F(ab')2抗体染色10分钟。洗涤细胞并且用1.6％多聚甲醛固定，随后使用FACSCanto流式细胞测量仪(BD Biosciences)撷取。使用FACS DIVA软件分析FACS文件。
如图20A中所示，抗GITR抗体Hum231#2结合至活化的AGM CD4+和CD8+T细胞。来自AGM的未刺激的T细胞并不表达基线水平的GITR并且细胞表面上的GITR水平在T细胞活化后上调。图20A中所示的图代表使用来自三个不同AGM的PBMC的实验。
接下来，使用来自非洲绿猴(AGM)的PBMC进行CD3次刺激试验以检查Hum231#2w的促效活性。经由发克梯度从健康供体分离人类(Research Blood Components,LLC)或AGMPBMC(Worldwide Primates)并且在液氮中储存并且在实验当天解冻。使细胞再悬浮于细胞培养基(RPMI+10％FBS+20U/ml IL-2)中并且添加至含有板结合的抗CD3抗体(0.8μg/ml)和各种浓度(2、4、5、6以及9μg/ml)的板结合的抗GITR抗体或同型对照IgG1抗体的96孔培养板中。在37℃和5％CO2下将样品孵育4天。活化之后，为了抑制细胞内蛋白质转运，根据制造商的说明书用布雷菲德菌素A(BD Biosciences)处理细胞并且在37℃和5％CO2下将样品孵育6小时。孵育之后，用FITC生存力胺染料(Life technologies)将细胞染色以对死细胞染色。用冷FACS缓冲液(1×PBS+2％FBS，pH7.2)洗涤之后，将在冷FACS缓冲液中稀释的含有针对CD3(APC Cy7，SP34.2)、CD4(PercP Cy5.5，L200)以及CD8a(PE Cy7，SK1)的抗体的抗体混合液添加至每个样品中并且在4℃下孵育10分钟。根据制造商的说明书固定细胞并且用Cytofix-Cytoperm(BD Biosciences)渗透用于细胞内染色。用针对IFNγ(Alexa647，B27)和TNFα(PE，Mab11，仅用于人类PBMC)的抗体将PBMC染色并且在室温下孵育10分钟。使用1×Perm-洗涤缓冲液(BD Biosciences)洗涤样品并且使用FACScanto流式细胞测量仪(BDBiosciences)撷取。使用Flojo软件分析流式细胞测量图。
如图20B和20C中所示，用抗GITR抗体Hum231#2w共刺激诱导由CD8+AGM T细胞产生IFNγ。流式细胞测量图和图形代表使用来自两个AGM的PBMC的实验。
6.3.11重组人类GITR配体和人源化231-32-15克隆体的同时结合对抗CD3刺激的CD4+T细胞的影响
不阻止GITR结合至GITR配体(GITRL)的促效性抗GITR抗体可以得到增强的免疫反应，特征在于增强T效应细胞的增殖和/或效应功能和/或下调T调控性细胞的抑制功能。
测试单独或与重组人类GITRL组合的抗GITR抗体对CD4+T细胞的促效活性。用1-2μM CFSE标记富集的CD4+T细胞，洗涤并且然后在37℃下用板结合的抗CD3(125ng/ml)、可溶性抗CD28(125ng/ml)以及10U IL-2，连同10μg/ml嵌合亲本231-32-15抗体、10μg/mlHum231#1、10μg/ml Hum231#2、10μg/ml GITRL、10μg/ml嵌合亲本231-32-15抗体与10μg/mlGITRL的组合、10μg/ml Hum231#1与10μg/ml GITRL的组合或10μg/ml Hum231#2与10μg/mlGITRL的组合刺激3至6天。然后从板收集培养上清液和细胞。分别如章节6.3.1和6.3.2中所描述检查细胞增殖和细胞因子释放。如章节6.3.7中所描述可以进一步测试抗GITR抗体和GITRL的同时结合对CD4+T效应细胞或CD4+T调控性细胞的影响。这项研究可以显示GITRL与抗GITR抗体(嵌合亲本231-32-15、Hum231#1以及Hum231#2)之间对增强免疫反应的协同或相加效应。
作为使用可溶性重组人类GITRL用于测试与本文所描述的抗GITR抗体组合的共促效剂活性的替代方案，还可能使用经过诱导以表达GITRL的抗原呈递细胞。如上文所描述，在存在或不存在抗GITR抗体的情况下这类诱导的APC可以与CD4+T效应细胞或CD4+T调控性细胞一起培养，并且评估T细胞的功能。为了诱导GITRL表达，如例如Tone M等,(2003)《美国国家科学院院刊(PNAS)》100:15059-15064中所描述，将抗原呈递细胞，诸如巨噬细胞或树突状细胞与TLR4配体(例如，LPS)一起孵育1、2、4、6或12小时；或如例如Tian J等,(2012)《公共科学图书馆期刊(PLoS One)》,7(10):e46936中所描述，与从酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的细胞壁纯化的整个β-聚糖粒子(WGP)一起孵育6、12、24、48或72小时。
6.3.12促效性抗GITR抗体对T细胞上的OX40和PD-1表面表达的影响
在这个实施例中，评价促效性抗GITR抗体对T细胞上OX40和PD-1的表面表达的影响。在液氮中储存经由发克梯度从健康供体血沉棕黄层(Research Blood Components,LLC)分离的PBMC并且在实验当天解冻。使细胞再悬浮于细胞培养基(RPMI+10％FBS+20U/mlIL-2)中并且添加至含有各种次最佳浓度(0、0.7、0.8以及0.9μg/ml)的板结合的抗CD3抗体(克隆体SP34)和5μg/ml板结合的抗GITR抗体Hum231#2或同型对照IgG1抗体的96孔培养板中。在37℃和5％CO2下将样品孵育4天。孵育之后，用FITC生存力胺染料(Lifetechnologies)将细胞染色以对死细胞染色。用冷FACS缓冲液(1×PBS+2％FBS，pH7.2)洗涤之后，添加抗OX40抗体并且在4℃下孵育10分钟。洗涤细胞并且添加抗人类Fc F(ab')2Alexa647并且在4℃下孵育10分钟。在离心和洗涤步骤之后，将在冷FACS缓冲液中稀释的含有针对CD3(APC Cy7，SP34.2)、CD4(PercP Cy5.5，L200)、CD8a(PE Cy7，SK1)以及PD-1(PE，EH12.2H7)的抗体的抗体混合液添加至每个样品中并且在4℃下孵育10分钟。洗涤样品并且再悬浮于200μl 1.6％多聚甲醛中，随后使用FACScanto流式细胞测量仪(BDBiosciences)撷取。使用Flojo软件分析FACS图。流式细胞测量图和图形代表使用来自一个供体的PBMC的实验。
如图21中所示，用抗GITR抗体Hum231#2共刺激增加人类CD4+和CD8+T细胞上的OX40和PD-1表面表达。
6.4实施例4：人源化变体的种系化
这个实施例描述了种系人源化变体的产生。
6.4.1文库设计
文库方法用于通过经由简并密码子将定点突变引入重和轻链可变区中产生具有增加的人类种系含量的人源化变体。通过用2至4个氨基酸置换17个氨基酸位置使VH链的可变区突变，得到1.3E+06的最终多样性。在9个氨基酸位置(每个位置2-3个氨基酸)处使轻链的可变区突变，得到7.7E+02的最终多样性。文库中所包括的不同构架和CDR位置示于图22中。使用IGHV1-2*02VH人类种系(图22A)和IGKV4-1*01VL人类种系(图22B)设计文库。
6.4.2文库产生
将突变的人源化可变区克隆至逆转录病毒表达载体(pCMA)中。这些构建体随后用于转导前B细胞并且使用Retrocyte 技术在表面上表达抗体。逆转录病毒表达载体含有基于MSCV的5'和3'LTR、包含膜锚定部分(IGHG1)的免疫球蛋白恒定区(IGHG1或IGKC)以及CD4表面标志物基因。表面标志物和免疫球蛋白由IRES(内部核糖体进入位点)偶合。术语“可变区”在这个实施例中意指重链的VDJ重排基因和轻链的VJ重排基因。
6.4.2.1人源化重链文库的产生
将合成的人源化可变重链区(Eurofins MWG GmbH)克隆至含有包含膜锚定部分的免疫球蛋白恒定区(IGHG1)的逆转录病毒表达载体中。在37℃下在一个步骤和一个管中使用typeIIS限制酶LguI和T4-DNA接合酶进行消化和接合1小时。以1:3的载体与插入物的比率将合成的人源化重链文库物质(128.7ng)框内接合至pCMA逆转录病毒表达载体(1μg)中。然后使接合反应物沉淀并且浓缩(8.3倍)至94ng/μl的最终DNA浓度。
将整个(3×4μl)浓缩的接合反应物电穿孔至80μl DH10B细胞(大肠杆菌ElectroMax DH10B电感受态细胞，Invitrogen，目录号12033-015)(1900V/5ms)中。添加1000μl SOC培养基(Invitrogen，目录号15544-034)并且在37℃下回收转化的DH10B细胞1小时。进行1:1000稀释以测定文库复杂性。将整个转化反应物涂至LB-琼脂+100μg/ml氨苄西林板上并且在37℃下孵育过夜。测定人源化VH链文库的复杂性为7.3E+07并且因此恢复整个文库多样性。
从板上刮下所有电穿孔的细菌并且制备用于在-80℃下长期储存的2个甘油储备液。进行大规模的DNA质粒制备(Macherey&Nagel，NucleoBond Xtra Maxi Plus试剂盒)。用HindIII/Eco47III(H/E)进行消化以验证克隆的插入物人源化VH链文库物质的存在和正确大小。为了验证正确的载体骨架，使用KpnI/BsrGI(K/B)消化。作为对照。还用LguI消化人源化VH链文库质粒DNA以验证不存在人源化VH链的插入的载体的量并且通过分离未切割的质粒DNA测试载体完整性。
采集96个单一克隆体并且发送用于测序以使用引物89-AL(序列：5'gcctccgcctcctcttcctccatcc 3'；SEQ ID NO:707)测定最终文库多样性。在质量控制中未鉴别到冗余序列。理论多样性为1.3E+06个不同变体，因此每个独特序列的覆盖率为约50次。35％的文库克隆体具有所需的突变模式(＝2.5E+07)并且所有所需的变体都存在于文库中。
6.4.2.2人源化轻链文库的产生
将合成的人源化可变轻链区(Eurofins MWG GmbH)克隆至含有免疫球蛋白恒定区(IGKC)的逆转录病毒表达载体中。如章节6.4.2.1中所描述进行消化和接合。以1:10的载体与插入物的比率将合成的人源化轻链文库物质(227.9ng)框内接合至pCMA逆转录病毒表达载体(0.5μg)中。此后，使接合反应物沉淀并且3.6倍浓缩至52ng/μl的最终DNA浓度。
如上述章节6.4.2.1中所描述进行转化。将2×4μl浓缩的接合反应物电穿孔至80μl DH10B细胞(大肠杆菌ElectroMax DH10B电感受态细胞，Invitrogen，目录号12033-015)(1900V/5ms)中。测定人源化VL链文库的复杂性为4.6E+07并且因此恢复整个文库多样性。如章节6.4.2.1中所描述进行文库质粒DNA制备和质粒DNA的验证。在质量控制中仅鉴别到一个冗余序列。理论多样性为7.7E+02个不同变体，因此每个独特序列的覆盖率为约60000次。65％的文库克隆体具有所需的突变模式并且所有所需的变体都存在于文库中。
6.4.3从预选的前B细胞克隆体回收种系化重和轻链
如上文(章节6.4.2.1和6.4.2.2)所描述产生的人源化文库物质用于亲和力成熟Retrocyte筛选中以鉴别具有高种系基因含量以及改善的生物和生物化学特性的抗体。从含有80个和96个预选的前B细胞克隆体的两个96孔板，回收重和轻链。使细胞溶解(Phusion Human Specimen Direct PCR试剂盒，Thermo Scientific/Finnzymes目录号F-150)并且通过PCR直接扩增可变区(参看表15)。使用特异性5'正向和3'反向引物(参看表16)进行PCR。作为用于PCR的模板，使用2μl前B细胞溶解产物。纯化扩增的可变区(NucleoFast 96PCR(Macherey-Nagel))并且克隆至含有免疫球蛋白恒定区(IGHG1，IGKC)的CHO表达载体(pPEP)中。
表15：PCR程序
表16：用以扩增重和κ轻链可变区的引物
为了克隆预选的种系化重和轻链可变区，在37℃下在一个步骤和一个管中使用typeIIS限制酶LguI和T4-DNA接合酶进行消化和接合1小时并且在80℃下进行最终步骤10分钟，并且将预选的种系化重或轻链可变区(约60ng)框内接合至pPEP表达载体(50μg)中。使用1:12的载体与插入物的比率。
通过热休克转化在化学感受态DH10B细胞(30μl)中共转化2μl预选的种系化重链接合反应物和6μl预选的种系化κ轻链接合反应物。添加1000μl SOC培养基(Invitrogen，目录号15544-034)并且在37℃下回收转化的DH10B细胞1小时。最后添加1000μl LB培养基+氨苄西林(最终浓度：100μg/ml)并且在37℃下将转化的大肠杆菌细胞孵育过夜。进行小规模的DNA质粒制备(Macherey&Nagel，NucleoSpin 96质粒)并且用HindIII/NotI(VH链)和NcoI(VK链)进行消化以验证克隆的可变区的存在和正确大小。通过分离未切割的质粒DNA测试载体完整性。DNA质粒制剂随后用于转染CHO细胞并且使用悬浮阵列技术并且在动力学分析中通过Octet测试表达的抗体。通过PCR验证抗体序列。
6.4.4种系变体的选择
基于如通过Octet测量(Octet RED 96系统；ForteBioTM Inc.,Menlo Park,CA)测定的结合动力学选择数百种种系化抗体。根据仪器的说明手册配置实验程序。生物素-GITR结合至抗生物素蛋白链菌素生物传感器(SA)并且PBS(pH 7.4)用作空白对照。简单地说，在30℃下在运作缓冲液(PBS，0.05％Tween，pH7.4)中进行相互作用分析。在临用前将传感器尖端在运作缓冲液中预湿润10分钟，并且用每孔200μl样品或缓冲液填充Octet中所用的微量板并且以800rpm搅动。对于实验，使用可商购的预涂SA尖端。将生物素化GITR加载至PBSpH7.4中的ForteBio SA纤维上持续10分钟并且洗涤4分钟。对于缔合期，在测量之前将配体涂布的SA尖端在以1:10在运作缓冲液中稀释的细胞培养上清液中浸渍5分钟。在含有单独的Octet缓冲液的孔中测量抗体-抗原复合物的离解，持续5分钟。在每次运作之后，用甘氨酸(10mM，pH 2.0)再生尖端。用Octet评价软件v6.3使用1:1结合模型以局部完全拟合测定亲和力、Kon以及Koff。表17列出了56个所选的种系变体的重链可变区和轻链可变区的组成以及如通过Octet测量的其亲和力、Kon以及Koff值。
表17：种系变体的动力学分析
在这些抗体之中，选择一定数目用于基于进一步的Octet值和其种系同源性进行后续分析。从这些，如下文所描述更详细地表征在T细胞试验中都具有促效性(数据未示出)的抗体样品。图23详述了这些所选的种系变体的重和轻链可变区的组成。图24A、24B以及24C详述了其它所选的实际或预测种系变体的重和轻链区的组成。
6.4.5种系变体的动力学分析
遵循如章节6.2.5.1中所描述的方法使用悬浮阵列技术确定抗GITR种系变体抗体的定量和结合分析。种系变体与嵌合亲本231-32-15抗体相比的平均相对亲和力示于图23中。
另外，还根据实施例6.2.5.2中所描述的方法使用悬浮阵列技术进行配体阻断活性的评估。如图25A和25B中可见，在所选择的种系变体抗体存在下GITRL-PE与GITR的结合对于所测试的抗体遵循非常类似的模式。
在如下文实施例5中所描述的功能试验中进一步表征这些种系变体抗体。
6.5实施例5：种系变体的功能活性
6.5.1种系变体对抗CD3刺激的CD4+T细胞增殖和细胞因子产生的影响
为了评估如实施例4中所描述产生的新种系变体的活性，在从四种血沉棕黄层制剂BC4、BC9、BC13以及BC18富集的CD4T细胞上将这些变体与人源化抗体Hum231#1和Hum231#2以及嵌合亲本231-32-15抗体相比较。
如上述章节6.3.1中所描述使用在进行刺激试验之后5天测量的细胞内细胞因子染色(BC13和BC18)、细胞因子释放(BC4和BC9)以及CFSE稀释(BC4和BC9)进行次最佳CD3刺激试验。板结合的抗CD3和可溶性抗CD28抗体与板结合的抗GITR抗体、无抗体(单独的CD3)以及同型对照(抗体MSC8)一起使用。抗GITR抗体以10μg/ml的浓度使用。对于血沉棕黄层4和9，抗CD3抗体以125ng/ml的浓度使用，抗CD28抗体以125ng/ml和10U IL-2的浓度使用。对于血沉棕黄层13，抗CD3抗体以500ng/ml的浓度使用并且抗CD28抗体以100ng/ml的浓度使用。对于血沉棕黄层18，抗CD3抗体以31.25ng/ml的浓度使用并且抗CD28抗体以100ng/ml的浓度使用。
对于血沉棕黄层制剂BC4和BC9，在培养物中5天后从板收集上清液和细胞。测定细胞增殖并且以百分比CFSE low示出(图26A和26B)，并且上清液用于细胞因子分析(IFNγ和IL-10)。图27A和27B示出了BC4的细胞因子释放并且图28A和28B示出了BC9的细胞因子释放。
对于血沉棕黄层制剂BC13和BC18，在培养物中5天后，将莫能菌素(monensin)(eBioscience)添加至所有样品中持续6小时以能够细胞内截留IFNγ。然后将样品细胞内染色用于在通过流式细胞测量术在BD FACSAria I(BD Biosciences)上检测之后使用BDCytofix/Cytoperm试剂盒(BD Biosciences)进行IFNγ-PE(eBioscience)并且使用FlowJo软件(Tree Star)分析。种系化变体对来自BC13和BC18的IFNγ阳性CD4T细胞的百分比的影响的结果分别示于图29A和29B中。在与种系变体、嵌合亲本231-32-15抗体或人源化变体Hum231#1和Hum231#2接触之后，由这些抗GITR抗体诱导的IFNγ阳性CD4T细胞的百分比是可比的。然而，正如预期，在供体之间存在一些微小变化。
6.5.2种系变体对GITR NF-κB-荧光素酶报告细胞系的影响
在这个实施例中，使用章节6.3.8中所描述的GITR NF-κB-荧光素酶报告细胞系(Promega)测试如实施例4中所描述产生的种系变体。
根据制造商的说明书将报告细胞系(Promega)保持于培养物中。在实验当天，使细胞再悬浮于试验培养基(RPMI+1％FBS)中。将细胞(每孔100,000个细胞)添加至含有板结合的抗CD3抗体(克隆体SP34，0.3μg/ml)和各种浓度(12.5、10、5、2.5、1.25、0.625以及0μg/ml)的板结合的抗GITR抗体的96孔板中。在37℃和5％CO2下将报告细胞孵育18小时。孵育之后，使用Bio-Glo(Promega)和EnVision多标记读取器2100检测荧光素酶表达。
在这个试验中测试的抗GITR抗体是Hum231#2w和20个种系变体：pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、pab2159、pab2160以及pab2161。如图30A-C中所示，所有种系变体在GITR NF-κB-荧光素酶报告试验中都显示促效活性。
在不存在抗CD3抗体的情况下还测试种系变体的促效活性。在实验当天，使GITRNF-κB-荧光素酶报告细胞(Promega)再悬浮于试验培养基(RPMI+1％FBS)中。将细胞(每孔100,000个细胞)添加至含有各种浓度(12.5、10、5、2.5、1.25以及0.625μg/ml)的板结合的抗GITR抗体的96孔板中。在37℃和5％CO2下将报告细胞孵育6小时。孵育之后，使用Bio-Glo(Promega)和EnVision多标记读取器2100检测荧光素酶表达。
在这个试验中测试的抗GITR抗体是m6C8、Hum231#2w以及20个种系变体：pab1964、pab1965、pab1966、pab1967、pab1968、pab1969、pab1970、pab1971、pab1972、pab1973、pab1975、pab1976、pab1977、pab1979、pab1980、pab1981、pab1983、pab2159、pab2160以及pab2161。所有种系变体在不存在抗CD3抗体的情况下都诱导报告细胞系的剂量依赖性活化(图30D-F)。
6.6实施例6：抗GITR抗体的表位表征
为了表征嵌合亲本231-32-15抗体和人源化抗GITR抗体所识别的在人类GITR上的表位，如下文所描述进行进一步研究。
6.6.1表位竞争-细胞结合试验
为了确认人源化变体抗体保留亲本嵌合231-32-15抗体的表位特异性，进行细胞结合试验。收获表达嵌合亲本231-32-15抗体的1624-5前B细胞并且使1×106个细胞再悬浮于200μl FACS缓冲液加上以下中：i)生物素化GITR(GITR-bio)(1:1000)，与2μg嵌合亲本231-32-15抗体一起预孵育15分钟；ii)GITR-bio(1:1000)，与2μg Hum231#1一起预孵育15分钟；iii)GITR-bio(1:1000)，与2μg Hum231#2一起预孵育15分钟；或iv)GITR-bio(1:1000)。在4℃下将细胞孵育20分钟并且然后用4ml FACS缓冲液洗涤并且在4℃下以300g离心5分钟。使细胞团块再悬浮于200μl FACS缓冲液加上抗生物素蛋白链菌素-PE(1:1000)并且然后如前述孵育和洗涤。然后使细胞再悬浮于200μl FACS缓冲液中用于使用FACS-AriaII(BD Biosciences)分析。
图31示出了人源化变体抗体保留嵌合亲本231-32-15抗体的表位特异性。右手边型态示出了GITR-bio与表达嵌合亲本231-32-25抗体的1624-5前B细胞的结合。然而，当GITR-bio与嵌合亲本231-32-15、Hum231#1或Hum231#2抗体一起预孵育时，GITR-bio与1624-5细胞的结合存在损失(左手边型态)。重叠FACS型态指示人源化变体还显示彼此以及与嵌合亲本231-32-15抗体非常类似的GITR结合特性。
6.6.2表位竞争-悬浮阵列技术
将抗GITR抗体(25μl)在试验缓冲液(Roche 11112589001)中稀释至2μg/ml并且在0.5ml LoBind管(Eppendorf，0030108.116)中在振荡条件下在黑暗中与偶合抗人类IgG(F(ab)2特异性，JIR，105-006-097)的1500珠粒(5μl，Luminex Corp，编号5LC10005-01)一起孵育过夜。然后将这种混合物转移至预湿润的96孔滤板(Millipore，MABVN1250)中。用每孔200μl PBS将板洗涤两次以去除未结合的抗体。同时，在黑暗中在650rpm下将20μg/ml相同抗GITR抗体、不同抗GITR抗体或试验缓冲液与20μl(1μg/ml)R-PE标记的GITR抗原(R&D systems，二硫键连接的同型二聚体；689-GR；用AbDSerotec LYNX试剂盒内部标记，LNK022RPE)一起孵育1小时。将珠粒混合物和抗原/抗体混合物以1:1(各20μl)混合并且在振荡条件(20℃，650rpm)下再孵育一小时。在即将测量之前，将40μl试验缓冲液添加至每个孔中并且使用200系统(Millipore)和48μl样品体积中100个珠粒的读出进行分析。使用非竞争的对照(100％结合，仅试验缓冲液作为竞争化合物)的MFI值测定结合。
当嵌合亲本231-32-15抗体用作捕获的抗体时，两种人源化变体都观测到完全结合竞争。当抗GITR抗体m6C8用作捕获的抗体时，嵌合亲本231-32-15抗体或两种人源化变体未观测到结合的竞争(数据未示出)。这些结果指示m6C8和本文所描述的抗GITR抗体识别人类GITR上的不同表位。
6.6.3表位竞争-表面等离子体共振
对于使用表面等离子体共振的表位分级，使用“串联方法”(Abdiche YN等,(2009)《分析生物化学(Analytical Biochemistry)》,386:172-180)。出于那个目的，在CM5传感器芯片(GE Healthcare，Series S CM5，BR-1005-30)上使用不同密度的GITR抗原(R&Dsystems，二硫键连接的同型二聚体；689-GR)的固定产生不同芯片表面。流动池2含有低密度(667RU)的GITR抗原，在流动池3中评估中密度(1595RU)，并且在流动池4中达成高密度(4371RU)。在流动池1中固定卵白蛋白(1289RU，Pierce ThermoFisher 77120)以供参考。根据来自制造商(GE Healthcare)的用于胺偶合(用0.4M EDC和0.1M NHS活化表面，GEHealthcare胺偶合试剂盒，BR-1000-50)的标准方案进行固定。用1M乙醇-胺-HCl pH8.5灭活未反应基团。此后，使抗GITR抗体以300nM(45μg/ml)的浓度穿过不同表面，以5μl/min持续240秒。使用这些条件，应该已经达到GITR表面的饱和。在添加竞争抗体(300nM，5μl/min)之前包括60秒的离解时间。使用10mM甘氨酸pH2.0(GE Healthcare，BR-1003-55)进行芯片表面的再生，以10μl/min持续60秒。使用非竞争的对照(100％结合，饱和状态)的反应单位(RU)进行分级。
如图32中所示，当嵌合亲本231-32-15抗体首先结合至GITR时，未发生这种抗体的进一步结合。然而，当嵌合亲本231-32-15抗体首先结合至GITR并且施加抗体m6C8时，这种抗体仍然能够结合至GITR。
6.6.4抗GITR抗体的表位定位
为了定位本文所描述的抗GITR抗体所结合的在GITR上的表位，易错PCR用于产生人类GITR抗原的变体。在细胞文库中的细胞的表面上表达变体GITR蛋白并且针对抗GITR抗体的结合筛选这些细胞。作为阳性对照，多克隆抗GITR抗体用于确认GITR蛋白的适当折叠。对于发生减少的或无抗体结合的人类GITR抗原的变体，进行丙氨酸扫描诱变以确定由本文所描述的抗GITR抗体结合所需的精确表位残基。
6.6.4.1人类GITR变体的产生
易错PCR诱变用于产生在胞外域中具有随机突变的人类GITR的变体。对于易错PCR，根据制造商的说明书，使用GeneMorphII随机诱变试剂盒(Stratagene)。简单地说，使用内部构建体作为模板(13ng，构建体编号4377pMA-T-huGITR)、0.05U/μl Mutazyme IIDNA聚合酶、1×Mutazyme II反应缓冲液、0.2μM每种引物(1152-Je(序列5'gagctcctcgaggccaccatg 3'；SEQ ID NO:712)和1204-Je(序列5'cgcggccgcgaattctta 3'；SEQ ID NO:713))以及0.2mM每种脱氧核苷三磷酸(dATP、dCTP、dGTP以及dTTP)以50μl的体积进行20个PCR周期。通过PCR(Eppendorf，Germany)使用以下程序扩增样品：95℃持续2分钟；95℃持续30秒、56℃持续30秒、72℃持续1分钟的20个周期；以及72℃持续10分钟的最终伸长步骤。使用1％琼脂糖凝胶对PCR产物进行凝胶纯化，切出对应于720bp的预期大小的DNA色带并且使用来自Macherey&Nagel的NucleoSpin凝胶和PCR清理试剂盒根据产品手册完成凝胶提取。使用T4DNA接合酶和1:3(载体:插入物)的比率将纯化的DNA经由XhoI/EcoRI位点接合至内部表达载体中。2小时后停止接合(25℃)并且在65℃下进行热变性步骤10分钟。使用酵母t-RNA对来自接合反应物的DNA进行EtOH沉淀。使用标准消化和接合技术。将接合反应物电穿孔至DH10B细胞(大肠杆菌ElectroMax DH10B电感受态细胞，Invitrogen；1900V/5ms)中。将电穿孔的细菌涂至LB-琼脂+100μg/ml氨苄西林板上并且获得约1.9×108个集落。
然后从板上刮下所有电穿孔的细菌并且根据制造商的说明书用于大规模的DNA质粒制备(Macherey&Nagel，NucleoBond Xtra Maxi Plus试剂盒)以产生DNA文库。用XhoI/EcoRI和BsrGI/EcoRI进行限制酶消化以对文库进行质量控制。采集单一克隆体并且发送用于测序以使用引物1155-Je(fwd；序列5'ccttgaacctcctcgttcg 3'；SEQ ID NO:714)确定最终文库多样性。
6.6.4.2具有人类GITR变体的细胞文库的产生
转染随之转导的标准技术用于在1624-5细胞的表面上表达人类GITR突变体。为了产生逆转录病毒粒子，使用X-tremeGENE 9DNA转染试剂(Roche Diagnostics GmbH,Germany)将DNA文库和表达逆转录病毒蛋白Gag、Pol以及Env的载体转染至逆转录病毒包装细胞系(HEK细胞)中。所得逆转录病毒粒子在逆转录病毒包装细胞的细胞培养上清液中积聚。转染后两天，收获含有无细胞病毒载体粒子的上清液并且经受1624-5细胞的旋转感染。获得约4％的转导效率(％人类GITR表达细胞)。再连续培养至少一天后，使用嘌呤霉素(1.5μg/ml)选择细胞。未转导的细胞充当阴性对照(NC)。在抗生素选择之后，大多数细胞在细胞表面上稳定表达人类GITR抗原文库。经由发克(Ficoll)分离步骤去除非活细胞。
FACS用于使用多克隆抗GITR抗体选择表达正确折叠的人类GITR突变体的细胞并且随后选择表达不结合至抗GITR嵌合亲本231-32-15抗体的人类GITR变体的个别细胞。简单地说，通过FACS分析抗体结合细胞并且通过制备型高速FACS(FACSAriaII，BDBiosciences)将展现特异性抗体结合的细胞与非结合细胞群体分离。在组织培养物中再次扩展抗体反应性或非反应性细胞库，并且归因于逆转录病毒转导的细胞的稳定表达表型，重复抗体引导的细胞分选和组织培养物扩展的周期，直至获得明显可检测的抗GITR抗体(嵌合亲本231-32-15)非反应性细胞群体的点。使这个抗GITR抗体(嵌合亲本231-32-15)非反应性细胞群体接受最终的单一细胞分选步骤。在细胞扩展数天后，使用96孔板分析在FACSCalibur(BD Biosciences)上针对不结合至抗GITR嵌合亲本231-32-15抗体和结合至多克隆抗GITR抗体再次测试单一细胞分选的细胞。
6.6.4.3表位分析
为了将表型(多克隆抗GITR+，嵌合亲本231-32-15-)与基因型联系起来，进行单一细胞分选的huGITR变体的测序。图33示出了来自这些变体的序列的比对。根据人类GITR的未成熟氨基酸序列(SEQ ID NO:701)将图33中的氨基酸残基编号。测序鉴别具有增加的突变或“热点”(例如，P62和G63)的区，从而提供由抗GITR嵌合亲本231-32-15抗体识别的在人类GITR上的表位的指示。
为了确认结合至抗GITR抗体中所涉及的人类GITR的精确氨基酸，进行热点氨基酸的丙氨酸置换。以下位置(根据SEQ ID NO:701编号)独立地突变为丙氨酸：P28A、T29A、G30A、G31A、P32A、T54A、T55A、R56A、C57A、C58A、R59A、D60A、Y61A、P62A、G63A、E64A、E65A、C66A、C67A、S68A、E69A、W70A、D71A、C72A、M73A、C74A、V75A以及Q76A。转染随之转导的标准技术用于在1624-5细胞的表面上表达这些人类GITR丙氨酸突变体。
最后，在流式细胞测量术(FACSCalibur；BD Biosciences)中针对抗GITR人源化变体Hum231#2、三个种系变体(pab1967、pab1975和pab1979)以及参考抗体m6C8的结合测试在1624-5细胞上表达的丙氨酸突变体。简单地说，在4℃下将表达个别人类GITR丙氨酸突变体的1624-5细胞与2μg/ml单克隆抗GITR抗体Hum231#2、三个种系变体(pab1967、pab1975和pab1979)或m6C8抗体；或与APC偶联的多克隆抗GITR抗体(AF689，R&D systems)，以及在100μl FACS缓冲液(PBS+2％FCS)中稀释的Fc受体阻断剂(1:200；BD目录号553142)一起孵育20分钟。洗涤之后，在4℃下将细胞与在100μl FACS缓冲液(PBS+2％FCS)中稀释的如有必要用于检测的二级抗IgG抗体(APC偶联；BD目录号109-136-097)一起孵育20分钟。然后洗涤细胞并且使用流式细胞测量仪(BD Biosciences)撷取。用所测试的单克隆抗体的平均荧光强度(MFI)除以多克隆抗体的MFI值，生成个别GITR丙氨酸突变体的MFI比率(单克隆抗体/多克隆抗体)。基于所有突变体的个别MFI比率计算平均MFI比率(“AMFI比率”)。图34A是概括Hum231#2、三个种系变体(pab1967、pab1975和pab1979)以及参考抗体m6C8与表达人类GITR丙氨酸突变体的1624-5细胞的结合的表格。认为高于AMFI比率的60％的个别MFI比率指示在正规化之后多克隆抗体的类似结合并且在图34A中由“+”表示。在AMFI比率的30％与60％之间的个别MFI比率在图34A中由“+/-”表示。低于AMFI比率的30％的个别MFI比率在图34A中由“-”表示。
如图34A中所示，根据SEQ ID NO:701编号的D60A突变体和G63A突变体特异性地破坏或削弱抗GITR人源化变体Hum231#2和三个种系变体(pab1967、pab1975和pab1979)而不是参考抗体m6C8的结合。C58A突变体破坏全部五个抗体的结合并且可能是结构突变而非表位特异性突变。C74A突变体具有弱表达并且不可以用于结合比较。
此外，比较抗GITR抗体231-32-15、Hum231#2以及m6C8与野生型对比突变体人类GITR的结合。简单地说，如上文所描述在1624-5细胞的表面上表达野生型人类GITR和两个GITR丙氨酸突变体(D60A突变体和G63A突变体，根据SEQ ID NO:701编号)并且如上文所描述在流式细胞测量术分析中测试，其中首先使用2μg/ml单克隆抗体231-32-15、Hum231#2以及m6C8或偶联至APC的多克隆抗体将细胞染色，并且然后使用如有必要用于检测的二级抗IgG抗体(APC偶联；1:1000；BD目录号109-136-097)染色。所有平均荧光强度(MFI)值以两次测量的平均值计算。用针对特定细胞类型的所测试的单克隆抗体的MFI值除以针对相同细胞类型的多克隆抗体的MFI值，生成总共九个MFI比率(单克隆抗体/多克隆抗体)：MFI比率231-32-15,WT、MFI比率Hum231#2,WT、MFI比率m6C8,WT、MFI比率231-32-15,D60A、MFI比率Hum231#2,D60A、MFI比率m6C8,D60A、MFI比率231-32-15,G63A、MFI比率Hum231#2,G63A以及MFI比率m6C8,G63A。通过用GITR丙氨酸突变体的特定MFI比率除以野生型的对应MFI比率(例如，用MFI比率Hum231#2,D60A除以MFI比率Hum231#2,WT)计算抗体与GITR丙氨酸突变体相对于野生型GITR的结合的百分比。通过计算例如100％×(1-(MFI比率Hum231#2,D60A/MFI比率Hum231#2,WT))确定结合减少的百分比。
如图34B中所示，D60A突变体和G63A突变体特异性地破坏或削弱231-32-15和Hum231#2而不是m6C8的结合。图34B中所示的百分比是每个图中GITR阳性细胞的百分比。当使用表达GITR D60A的细胞测试时，抗体结合对于231-32-15和Hum231#2与对于m6C8减少10％相比分别减少82％和88％。类似地，当使用表达GITR G63A的细胞测试时，231-32-15和Hum231#2的结合分别减少37％和59％，而m6C8的结合增加62％。
作为抗GITR抗体的结合特征的进一步证明，比较抗体与猕猴GITR的结合。猕猴GITR的未成熟蛋白包含SEQ ID NO:704的氨基酸序列。为了增加蛋白质表达，猕猴GITR的信号肽的第一残基被甲硫氨酸置换，产生V1M猕猴GITR。然后产生突变体猕猴GITR V1M/Q62P/S63G，其中在位置62和63处的氨基酸残基(GlnSer)(根据SEQ ID NO:704编号)被人类GITR中的对应残基(ProGly)置换。图35A是人类GITR、V1M猕猴GITR以及V1M/Q62P/S63G猕猴GITR之间的序列比对。如上文所描述在1624-5细胞的表面上表达图35A中所示的三个蛋白质并且如上文所描述在流式细胞测量术分析中测试，其中首先使用2μg/ml单克隆抗体231-32-15、Hum231#2以及m6C8或偶联至APC的多克隆抗体将细胞染色，并且然后使用二级抗IgG抗体(APC偶联；1:1000；BD目录号109-136-097)染色。
如图35B中所示，抗GITR抗体231-32-15和Hum231#2展现仅结合至表达V1M/Q62P/S63G猕猴GITR的细胞，而不结合至表达V1M猕猴GITR的细胞。
6.7实施例7：用促效性抗GITR抗体体外处理T细胞继之以T细胞输注
在输注至受试者，例如患有癌症的人类受试者中之前，如果与GITR促效性抗体，例如Hum231#1、Hum231#2、Hum231#2w或本文所描述的另一种GITR促效性抗体一起培养，那么可以进一步活化指示活化状态的表达GITR的T细胞以杀死靶细胞，诸如肿瘤细胞。
通过标准技术，例如FACS分析评估从受试者，例如人类受试者分离的T细胞上GITR的表达水平。T细胞的来源是例如外周血、引出肿瘤部位的淋巴结的活检/手术标本或T细胞可能已经渗入的肿瘤本身的活检/手术标本。通过标准技术例如从总PBMC、淋巴组织或肿瘤组织分离T细胞。如果观测到GITR在T细胞表面上表达，那么可以将细胞与GITR促效性抗体，例如Hum231#1、Hum231#2、Hum231#2w或本文所描述的另一种GITR促效剂抗体在例如1μg/ml至1mg/ml的范围内的浓度下一起孵育例如30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、6小时、12小时、24小时、36小时、48小时或72小时，随之例如静脉内输注T细胞至受试者中。
如果未观测到GITR在从受试者分离的T细胞上表达，那么其表达可以通过将T细胞与TCR复合物刺激剂，诸如植物血球凝集素(PHA)和/或佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)，或TCR复合物刺激抗体，诸如抗CD3抗体和抗CD28抗体共孵育(在例如1μg/ml至1mg/ml的范围内的浓度下，持续例如30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、6小时、12小时、24小时、36小时、48小时或72小时)来诱导。或者，可以优选地首先孵育T细胞与单独的抗CD3抗体，随之在30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、6小时、12小时、24小时、36小时、48小时或72小时后添加促效性GITR抗体。还可能需要在抗原呈递细胞存在下用例如呈肽或蛋白质的形式的肿瘤抗原刺激T细胞以活化并扩展肿瘤特异性T细胞的数目。继抗原刺激之后，在输注之前可以将T细胞与GITR促效性抗体一起培养以增强其活化状态。
可以经过例如30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、6小时、12小时或24小时的时段将T细胞输注至受试者中，并且可以一次、两次、三次、四次或更多次，例如间隔1、2、3或4周或1、2、3、4、5或6个月输注至受试者中。输注的T细胞的数目可以通过标准实验方法测定并且可以包括例如1×106个细胞、1×107个细胞、1×108个细胞、1×109个细胞或更多。
在一些实施方案中，在用GITR促效性抗体处理之前、期间或之后可以使T细胞与作用物，诸如有丝分裂原(例如，PHA)或细胞因子(例如，IL-2)接触以非特异性地扩展T细胞群体。
在一些实施方案中，可以使T细胞与除了GITR促效性抗体以外的另一种促效剂，例如OX40促效性抗体接触。
本发明的范围不受本文所描述的特定实施方案限制。确实，除了所描述的那些以外的本发明的各种修改从前述描述和随附图式对于本领域的技术人员将变得显而易见。这类修改预期处于所附权利要求书的范围内。
本文所引用的所有参考文献(例如，公布或专利或专利申请)以全文引用的方式并入本文中并且出于所有目的达到如同每个个别的参考文献(例如，公布或专利或专利申请)特定地并且个别地指示出于所有目的以全文引用的方式并入一样的程度。其它实施方案在以上权利要求书内。
Claims (205)
1.一种特异性地结合至人类糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)的分离抗体，其包含：
(a)包含X1YX2MX3(SEQ ID NO:1)的氨基酸序列的重链可变区(VH)互补决定区(CDR)1，其中
X1是D、E、G或A；
X2是A、V、L、I、P、F、M或Y；并且
X3是Y、G、N、Q、S、T、C、W、F或H；
(b)包含X1IX2X3X4SGX5X6X7YX8QKFX9X10(SEQ ID NO:2)的氨基酸序列的VH CDR2，其中
X1是V、A、L、I、P、F、M或T；
X2是R、K、H、Q或A；
X3是T、G、N、Q、S、C、W、Y、V、I或P；
X4是Y、G、N、Q、S、T、C、W、F、H或A；
X5是D、E、G或A；
X6是V、A、L、I、P、F、M或T；
X7是T、G、N、Q、S、C、W、Y、V、I、P或A；
X8是N、G、Q、S、T、C、W、Y或A；
X9是K、R、H、Q或A；并且
X10是D、E、G或A；
(c)包含SGTVRGX1X2X3(SEQ ID NO:3)的氨基酸序列的VH CDR3，其中
X1是F、A、V、L、I、P、M、Y、W、H或S；
X2是A或D；并且
X3是Y、G、N、Q、S、T、C、W、F、H或V；
(d)包含KSSQSX1X2X3X4X5X6X7KX8YLX9(SEQ ID NO:4)的氨基酸序列的轻链可变区(VL)CDR1，其中：
X1是L、A、V、I、P、F或M；
X2是L、A、V、I、P、F、M或S；
X3是N、G、Q、S、T、C、W、Y或A；
X4是S、G、N、Q、T、C、W、Y或A；
X5是G、N、Q、S、T、C、W、Y或A；
X6是N、G、Q、S、T、C、W、Y或A；
X7是Q、G、N、S、T、C、W、Y或A；
X8是N、G、Q、S、T、C、W、Y或A；并且
X9是T、G、N、Q、S、C、W、Y、V、I或A；
(e)包含X1ASTRX2X3(SEQ ID NO:5)的氨基酸序列的VL CDR2，其中：
X1是W、G、N、Q、S、T、C、Y、F、H或A；
X2是E、D或A；并且
X3是S、G、N、Q、T、C、W、Y或A；以及
(f)包含QX1X2YX3X4PYT(SEQ ID NO:6)的氨基酸序列的VL CDR3，其中：
X1是N、G、Q、S、T、C、W或Y；
X2是D、E或Y；并且
X3是S、G、N、Q、T、C、W、Y或A；并且
X4是Y、G、N、Q、S、T、C、W、F、H、L或A。
2.一种特异性地结合至人类GITR的分离抗体，其包含：
(a)包含X1YX2MX3(SEQ ID NO:7)的氨基酸序列的重链可变区(VH)CDR1，其中
X1是D、E或G；
X2是A或V；并且
X3是Y或H；
(b)包含X1IX2TX3SGX4X5X6YNQKFX7X8(SEQ ID NO:8)的氨基酸序列的VH CDR2，其中
X1是V或L；
X2是R、K或Q；
X3是Y或F；
X4是D、E或G；
X5是V或L；
X6是T或S；
X7是K、R或Q；并且
X8是D、E或G；
(c)包含SGTVRGFAY(SEQ ID NO:9)的氨基酸序列的VH CDR3；
(d)包含KSSQSLLNSX1NQKNYLX2(SEQ ID NO:10)的氨基酸序列的轻链可变区(VL)CDR1，其中
X1是G或S；并且
X2是T或S；
(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:11)的氨基酸序列的VL CDR2；以及
(f)包含QNX1YSX2PYT(SEQ ID NO:12)的氨基酸序列的VL CDR3，其中
X1是D或E；并且
X2是Y、F或S。
3.如权利要求1或2所述的抗体，其中所述VH CDR1包含选自由SEQ ID NO:13、19-23以及117-119组成的群组的氨基酸序列。
4.如权利要求1或2所述的抗体，其中所述VH CDR1包含选自由SEQ ID NO:35和SEQ IDNO:116组成的群组的氨基酸序列。
5.如权利要求1或2所述的抗体，其中所述VH CDR2包含选自由SEQ ID NO:14、24-33以及120-188组成的群组的氨基酸序列。
6.如权利要求1或2所述的抗体，其中所述VH CDR2包含选自由SEQ ID NO:114、115以及194组成的群组的氨基酸序列。
7.如权利要求1或2所述的抗体，其中所述VH CDR3包含选自由SEQ ID NO:15、34以及189组成的群组的氨基酸序列。
8.如权利要求1或2所述的抗体，其中所述VL CDR1包含选自由SEQ ID NO:16和101-104组成的群组的氨基酸序列。
9.如权利要求1或2所述的抗体，其中所述VL CDR2包含选自由SEQ ID NO:17和105组成的群组的氨基酸序列。
10.如权利要求1或2所述的抗体，其中所述VL CDR3包含选自由SEQ ID NO:18、106-109、192以及193组成的群组的氨基酸序列。
11.如权利要求1或2所述的抗体，其中所述VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3各自包含表2中的抗体的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3的氨基酸序列。
12.如权利要求1或2所述的抗体，其中所述VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3各自包含表6中的抗体的VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3的氨基酸序列。
13.如权利要求1或2所述的抗体，其中所述VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3各自包含表1中的抗体的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3的氨基酸序列。
14.如权利要求1或2所述的抗体，其中所述VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3各自包含表5中的抗体的VL CDR1、VL CDR2以及VL CDR3的氨基酸序列。
15.一种特异性地结合至人类GITR的分离抗体，其包含：
(a)包含以下的重链可变区(VH)：包含DYAMY(SEQ ID NO:13)的氨基酸序列的VH CDR1，
包含VIRTYSGDVTYNQKFKD(SEQ ID NO:14)的氨基酸序列的VH CDR2，以及
包含SGTVRGFAY(SEQ ID NO:15)的氨基酸序列的VH CDR3；以及
(b)包含以下的轻链可变区(VL)：包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:16)的氨基酸序列的VL CDR1，
包含WASTRES(SEQ ID NO:17)的氨基酸序列的VL CDR2，以及
包含QNDYSYPYT(SEQ ID NO:18)的氨基酸序列的VL CDR3。
16.一种特异性地结合至人类GITR的分离抗体，其包含如表1和表2中所陈列的抗体22的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2以及VH CDR3。
17.如权利要求1至16中任一项所述的抗体，其中所述抗体部分地抑制人类GITR配体(GITRL)结合至人类GITR。
18.如权利要求1至16中任一项所述的抗体，其中相对于在悬浮阵列试验中在不存在所述抗GITR抗体的情况下0.5nM GITRL与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒的结合，所述抗体在1000ng/ml的浓度下抑制小于80％的0.5nM人类GITRL结合至以5pg/ml/珠粒的浓度偶合至珠粒的人类GITR。
19.如权利要求1至16中任一项所述的抗体，其中至少20％的量的在不存在所述抗体的情况下结合至人类GITR的人类GITRL在包括以下步骤的试验中在存在所述抗体的情况下结合至人类GITR：
(a)使人类GITR以5pg/ml/珠粒的浓度偶合至珠粒；
(b)在孔中在存在或不存在1000ng/ml所述抗体的情况下孵育40个珠粒/μl的浓度的所述人类GITR偶合珠粒；
(c)将标记的人类GITRL添加至所述孔中以获得0.5nM所述人类GITRL和20个珠粒/μl所述GITR偶合珠粒的最终浓度；以及
(d)检测结合至所述人类GITR偶合珠粒的所述标记的人类GITRL。
20.如权利要求17或18所述的抗体，其中所述抗体抑制50％至70％的人类GITRL结合至人类GITR。
21.如权利要求19所述的抗体，其中30％至50％的量的在不存在所述抗体的情况下结合至人类GITR的人类GITRL在存在所述抗体的情况下结合至人类GITR。
22.一种分离抗体，其特异性地结合至人类GITR并且部分地抑制人类GITR配体(GITRL)结合至人类GITR。
23.如权利要求22所述的抗体，其中相对于在悬浮阵列试验中在不存在所述抗GITR抗体的情况下0.5nM GITRL与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒的结合，所述抗体在1000ng/ml的浓度下抑制小于80％的0.5nM人类GITRL结合至以5pg/ml/珠粒的浓度偶合至珠粒的人类GITR。
24.如权利要求22所述的抗体，其中至少20％的量的在不存在所述抗体的情况下结合至人类GITR的人类GITRL如在包括以下步骤的试验中所评估在存在所述抗体的情况下结合至人类GITR：
(a)使人类GITR以5pg/ml/珠粒的浓度偶合至珠粒；
(b)在孔中在存在或不存在1000ng/ml所述抗体的情况下孵育40个珠粒/μl的浓度的所述人类GITR偶合珠粒；
(c)将标记的人类GITRL添加至所述孔中以获得0.5nM所述人类GITRL和20个珠粒/μl所述GITR偶合珠粒的最终浓度；以及
(d)检测结合至所述人类GITR偶合珠粒的所述标记的人类GITRL。
25.如权利要求22或23所述的抗体，其中所述抗体抑制50％至70％的人类GITRL结合至人类GITR。
26.如权利要求24所述的抗体，其中30％至50％的量的在不存在所述抗体的情况下结合至人类GITR的人类GITRL在存在所述抗体的情况下结合至人类GITR。
27.如权利要求1至26中任一项所述的抗体，其中所述抗体是促效性的。
28.如权利要求1至21中任一项所述的抗体，其中所述抗体进一步包含有包含SEQ IDNO:203的重链可变区序列的构架区的重链可变区序列。
29.如权利要求1至15或17至28中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含有包含SEQ IDNO:203的氨基酸序列的重链可变区序列。
30.如权利要求1至27中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含与选自由SEQ ID NO:201、SEQ ID NO:206以及SEQ ID NO:215至389组成的群组的重链可变区序列的构架区至少75％、80％、85％、90％、95％或100％一致的重链可变区序列的构架区。
31.如权利要求1至27中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含有包含选自由SEQ IDNO:201、206以及SEQ ID NO:215至389组成的群组的氨基酸序列的重链可变区序列。
32.如权利要求31所述的抗体，其中所述抗体包含有包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的重链可变区序列。
33.如权利要求1至27中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含有包含选自由SEQ IDNO:553、554以及567至570组成的群组的氨基酸序列的重链序列。
34.如权利要求1至27中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含有包含选自由SEQ IDNO:581和582组成的群组的氨基酸序列的重链序列。
35.如权利要求1至27中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含具有源自人类的构架区的重链可变区。
36.如权利要求1至27中任一项所述的抗体，其中所述抗体进一步包含作为或来源于由人类基因编码的氨基酸序列的重链可变构架区，其中所述氨基酸序列选自由IGHV1-2*02(SEQ ID NO:601)、IGHV1-3*01(SEQ ID NO:602)、IGHV1-46*01(SEQ ID NO:603)、IGHV1-18*01(SEQ ID NO:604)、IGHV1-69*01(SEQ ID NO:605)以及IGHV7-4-1*02(SEQ ID NO:606)组成的群组。
37.如权利要求36所述的抗体，其中所述抗体包含来源于氨基酸序列SEQ ID NO:601的重链可变构架区并且其中氨基酸序列SEQ ID NO:601中的至少一个氨基酸被对应的非人类重链可变构架区中的类似位置中的氨基酸取代。
38.如权利要求37所述的抗体，其中所述氨基酸取代在选自由24、48、67、71、73以及94组成的群组的氨基酸位置处，并且其中每个群组成员的所述氨基酸位置是根据Kabat编号所指示。
39.如权利要求38所述的抗体，其中所述氨基酸取代选自由24G、48I、67A、71V、73K以及94K组成的群组，并且其中每个群组成员的所述氨基酸位置是根据Kabat编号所指示。
40.如权利要求1至39中任一项所述的抗体，其中所述抗体进一步包含有包含SEQ IDNO:204或SEQ ID NO:205的轻链可变区序列的构架区的轻链可变区序列。
41.如权利要求1至15或17至39中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含有包含SEQ IDNO:204或SEQ ID NO:205的氨基酸序列的轻链可变区序列。
42.如权利要求1至39中任一项所述的抗体，其中所述抗体进一步包含与选自由SEQ IDNO:202、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:208以及SEQ ID NO:400-518组成的群组的轻链可变区序列的构架区至少75％、80％、85％、90％、95％或100％一致的轻链可变区序列的构架区。
43.如权利要求1至39中任一项所述的抗体，其中所述抗体进一步包含与SEQ ID NO:519的轻链可变区序列的构架区至少75％、80％、85％、90％、95％或100％一致的轻链可变区序列的构架区。
44.如权利要求1至39中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含有包含选自由SEQ IDNO:202、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:208以及SEQ ID NO:400至518组成的群组的氨基酸序列的轻链可变区序列。
45.如权利要求42所述的抗体，其中所述抗体包含有包含SEQ ID NO:519的氨基酸序列的轻链可变区序列。
46.如权利要求44所述的抗体，其中所述抗体包含有包含SEQ ID NO:207的氨基酸序列的轻链可变区序列。
47.如权利要求44所述的抗体，其中所述抗体包含有包含SEQ ID NO:208的氨基酸序列的轻链可变区序列。
48.如权利要求1至39中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含有包含选自由SEQ IDNO:555、556以及571至576组成的群组的氨基酸序列的轻链序列。
49.如权利要求1至39中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含具有源自人类的构架区的轻链可变序列。
50.如权利要求1至39中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含作为或来源于由人类基因编码的氨基酸序列的轻链可变构架区，其中所述氨基酸序列选自由IGKV4-1*01(SEQ IDNO:607)和IGKV3-7*02(SEQ ID NO:608)组成的群组。
51.如权利要求50所述的抗体，其中所述抗体包含来源于选自由IGKV4-1*01(SEQ IDNO:607)和IGKV3-7*02(SEQ ID NO:608)组成的群组的氨基酸序列的轻链可变构架区并且氨基酸序列SEQ ID NO:607或SEQ ID NO:608中的至少一个氨基酸被对应的非人类轻链可变构架区中的类似位置中的氨基酸取代。
52.如权利要求51所述的抗体，其中所述氨基酸取代在氨基酸位置87处，并且其中所述氨基酸位置是根据Kabat编号所指示。
53.如权利要求52所述的抗体，其中所述氨基酸取代是87H，并且其中所述氨基酸位置是根据Kabat编号所指示。
54.如权利要求1至27中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含有包含图23或图24A-24C中的任一者的表格中的抗体的氨基酸序列的重链可变区和轻链可变区。
55.如权利要求1至27中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含有包含表17中的抗体的氨基酸序列的重链可变区和轻链可变区。
56.一种特异性地结合至人类GITR的分离抗体，其包含：
(a)包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的重链可变区；以及
(b)包含SEQ ID NO:207的氨基酸序列的轻链可变区。
57.一种特异性地结合至人类GITR的分离抗体，其包含：
(a)包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的重链可变区；以及
(b)包含SEQ ID NO:208的氨基酸序列的轻链可变区。
58.一种特异性地结合至人类GITR的分离抗体，其包含有包含VH CDR1、VH CDR2、VHCDR3以及来源于人类免疫球蛋白的构架区的重链可变区(VH)，其中所述VH CDR1包含DYAMY(SEQ ID NO:13)的氨基酸序列，所述VH CDR2包含VIRTYSGDVTYNQKFKD(SEQ ID NO:14)的氨基酸序列，并且所述VH CDR3包含SGTVRGFAY(SEQ ID NO:15)的氨基酸序列。
59.一种特异性地结合至人类GITR的分离抗体，其包含有包含VL CDR1、VL CDR2、VLCDR3以及来源于人类免疫球蛋白的构架区的轻链可变区(VL)，其中所述VL CDR1包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:16)的氨基酸序列，所述VL CDR2包含WASTRES(SEQ ID NO:17)的氨基酸序列，并且所述VL CDR3包含QNDYSYPYT(SEQ ID NO:18)的氨基酸序列。
60.一种特异性地结合至人类GITR的分离抗体，其包含有包含选自由SEQ ID NO:201、203、206以及215-389组成的群组的氨基酸序列的重链可变区(VH)。
61.一种特异性地结合至人类GITR的分离抗体，其包含有包含选自由SEQ ID NO:202、204、205、207、208以及400-518组成的群组的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
62.一种特异性地结合至人类GITR的分离抗体，其包含有包含SEQ ID NO:519的氨基酸序列的轻可变区(VL)。
63.如权利要求58至62中任一项所述的抗体，其中所述抗体部分地抑制人类GITRL结合至人类GITR。
64.如权利要求58至62中任一项所述的抗体，其中相对于在悬浮阵列试验中在不存在所述抗GITR抗体的情况下0.5nM GITRL与5pg/ml/珠粒的浓度的GITR偶合珠粒的结合，所述抗体在1000ng/ml的浓度下抑制小于80％的0.5nM人类GITRL结合至以5pg/ml/珠粒的浓度偶合至珠粒的人类GITR。
65.如权利要求58至62中任一项所述的抗体，其中至少20％的量的在不存在所述抗体的情况下结合至人类GITR的人类GITRL如在包括以下步骤的试验中所评估在存在所述抗体的情况下结合至人类GITR：
(a)使人类GITR以5pg/ml/珠粒的浓度偶合至珠粒；
(b)在孔中在存在或不存在1000ng/ml所述抗体的情况下孵育40个珠粒/μl的浓度的所述人类GITR偶合珠粒；
(c)将标记的人类GITRL添加至所述孔中以获得0.5nM所述人类GITRL和20个珠粒/μl所述GITR偶合珠粒的最终浓度；以及
(d)检测结合至所述人类GITR偶合珠粒的所述标记的人类GITRL。
66.如权利要求63或64所述的抗体，其中所述抗体抑制50％至70％的人类GITRL结合至人类GITR。
67.如权利要求65所述的抗体，其中30％至50％的量的在不存在所述抗体的情况下结合至人类GITR的人类GITRL在存在所述抗体的情况下结合至人类GITR。
68.一种特异性地结合至人类GITR的分离抗体，其包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中所述VH和VL的氨基酸序列包含图23或图24A-24C中的任一者的单行中所列的氨基酸序列。
69.一种特异性地结合至人类GITR的分离抗体，其包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中所述VH和VL的氨基酸序列包含表17的单行中所列的氨基酸序列。
70.如权利要求1至32、35至47或49至69中任一项所述的抗体，其进一步包含重和/或轻链恒定区。
71.如权利要求70所述的抗体，其中所述重链恒定区选自由IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1以及IgA2组成的人类免疫球蛋白的群组。
72.如权利要求70或71所述的抗体，其中所述轻链恒定区选自由IgGκ和IgGλ组成的人类免疫球蛋白的群组。
73.如权利要求72所述的抗体，其中所述IgG1是非岩藻糖基化IgG1。
74.如权利要求72所述的抗体，其中IgG1的氨基酸序列包含N297A突变。
75.如权利要求72所述的抗体，其中IgG1的氨基酸序列包含N297Q突变。
76.如权利要求72所述的抗体，其中IgG4的氨基酸序列包含S228P突变。
77.如权利要求72所述的抗体，其中IgG2的氨基酸序列包含C127S突变。
78.如权利要求72所述的抗体，其中所述重链恒定区包含选自由SEQ ID NO:557-562组成的群组的氨基酸序列。
79.如权利要求72所述的抗体，其中所述重链恒定区包含选自由SEQ ID NO:583-584组成的群组的氨基酸序列。
80.如权利要求1至27中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：
(a)包含选自由SEQ ID NO:553、554以及567至570组成的群组的氨基酸序列的重链；以及
(b)包含选自由SEQ ID NO:555、556以及571至576组成的群组的氨基酸序列的轻链。
81.如权利要求1至27中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：
(a)包含选自由SEQ ID NO:581和582组成的群组的氨基酸序列的重链；以及
(b)包含选自由SEQ ID NO:555、556以及571至576组成的群组的氨基酸序列的轻链。
82.如权利要求80所述的抗体，其中所述抗体包含：
(a)包含SEQ ID NO:553的氨基酸序列的重链；以及
(b)包含SEQ ID NO:556的氨基酸序列的轻链。
83.如权利要求80所述的抗体，其中所述抗体包含：
(a)包含SEQ ID NO:554的氨基酸序列的重链；以及
(b)包含SEQ ID NO:556的氨基酸序列的轻链。
84.如权利要求81所述的抗体，其中所述抗体包含：
(a)包含SEQ ID NO:581的氨基酸序列的重链；以及
(b)包含SEQ ID NO:556的氨基酸序列的轻链。
85.如权利要求81所述的抗体，其中所述抗体包含：
(a)包含SEQ ID NO:582的氨基酸序列的重链；以及
(b)包含SEQ ID NO:556的氨基酸序列的轻链。
86.如权利要求80所述的抗体，其中所述抗体包含：
(a)包含SEQ ID NO:553的氨基酸序列的重链；以及
(b)包含SEQ ID NO:555的氨基酸序列的轻链。
87.如权利要求80所述的抗体，其中所述抗体包含：
(a)包含SEQ ID NO:554的氨基酸序列的重链；以及
(b)包含SEQ ID NO:555的氨基酸序列的轻链。
88.如权利要求80所述的抗体，其中所述抗体包含：
(a)包含SEQ ID NO:567的氨基酸序列的重链；以及
(b)包含SEQ ID NO:573的氨基酸序列的轻链。
89.如权利要求80所述的抗体，其中所述抗体包含：
(a)包含SEQ ID NO:567的氨基酸序列的重链；以及
(b)包含SEQ ID NO:576的氨基酸序列的轻链。
90.如权利要求80所述的抗体，其中所述抗体包含：
(a)包含SEQ ID NO:554的氨基酸序列的重链；以及
(b)包含SEQ ID NO:576的氨基酸序列的轻链。
91.如权利要求81所述的抗体，其中所述抗体包含：
(a)包含SEQ ID NO:581的氨基酸序列的重链；以及
(b)包含SEQ ID NO:576的氨基酸序列的轻链。
92.如权利要求81所述的抗体，其中所述抗体包含：
(a)包含SEQ ID NO:582的氨基酸序列的重链；以及
(b)包含SEQ ID NO:576的氨基酸序列的轻链。
93.一种特异性地结合至GITR的分离抗体，其中所述抗体包含：
(a)包含SEQ ID NO:567的氨基酸序列的重链；以及
(b)包含SEQ ID NO:587的氨基酸序列的轻链。
94.一种分离抗体，其与如权利要求1至93中任一项所述的抗体结合至人类GITR的相同表位。
95.如权利要求1至94中任一项所述的抗体，其中所述抗体结合至包含SEQ ID NO:701的残基26-241的人类GITR，其中所述抗体与变体GITR之间的所述结合相对于所述抗体与所述人类GITR之间的所述结合实质上削弱，并且其中所述变体GITR除了选自由D60A和G63A组成的群组的氨基酸取代以外包含SEQ ID NO:701的残基26-241。
96.如权利要求1至94中任一项所述的抗体，其中所述抗体结合至包含SEQ ID NO:701的残基60-63的表位。
97.如权利要求1至94中任一项所述的抗体，其中所述抗体结合至由SEQ ID NO:701的残基60-63陈列的氨基酸序列内的至少一个残基。
98.如权利要求1至94中任一项所述的抗体，其中所述抗体结合包含SEQ ID NO:701的残基60或63中的至少一者的所述人类GITR的表位。
99.如权利要求1至94中任一项所述的抗体，其中所述抗体特异性地结合至以下每一者：i)人类GITR，其中所述人类GITR包含SEQ ID NO:701的残基26-241，以及ii)猕猴GITR的变体，所述变体包含SEQ ID NO:699的残基26-234，其中所述抗体并不特异性地结合至包含SEQ ID NO:704的残基26-234的猕猴GITR。
100.如权利要求1至94中任一项所述的抗体，其中所述抗体与结合至人类GITR相比展现减少或缺乏结合至除了存在D60A或G63A氨基酸取代以外与人类GITR一致的蛋白质。
101.一种特异性地结合至人类GITR的分离抗体，其中所述人类GITR包含SEQ ID NO:701的残基26-241，其中所述抗体与变体GITR之间的所述结合相对于所述抗体与所述人类GITR之间的所述结合实质上削弱，并且其中所述变体GITR除了选自由D60A和G63A组成的群组的氨基酸取代以外包含SEQ ID NO:701的残基26-241。
102.如权利要求95或101所述的抗体，其中所述氨基酸取代是D60A。
103.如权利要求95或101所述的抗体，其中所述氨基酸取代是G63A。
104.一种特异性地结合至人类GITR的分离抗体，其中所述人类GITR包含SEQ ID NO:701的残基26-241，并且其中所述抗体结合至包含SEQ ID NO:701的残基60-63的表位。
105.一种特异性地结合至人类GITR的分离抗体，其中所述人类GITR包含SEQ ID NO:701的残基26-241，并且其中所述抗体结合至由SEQ ID NO:701的残基60-63陈列的氨基酸序列内的至少一个残基。
106.如权利要求97或105所述的抗体，其中所述抗体结合至选自由SEQ ID NO:701的残基60、62以及63组成的群组的至少一个残基。
107.如权利要求97或105所述的抗体，其中所述抗体结合至选自由SEQ ID NO:701的残基62和63组成的群组的至少一个残基。
108.一种特异性地结合至人类GITR的分离抗体，其中所述人类GITR包含SEQ ID NO:701的残基26-241，并且其中所述抗体结合包含SEQ ID NO:701的残基60或63中的至少一者的所述人类GITR的表位。
109.一种分离抗体，其特异性地结合至以下每一者：i)人类GITR，其中所述人类GITR包含SEQ ID NO:701的残基26-241，以及ii)猕猴GITR的变体，所述变体包含SEQ ID NO:699的残基26-234，其中所述抗体并不特异性地结合至包含SEQ ID NO:704的残基26-234的猕猴GITR。
110.一种特异性地结合至人类GITR的分离抗体，其中所述抗体与结合至人类GITR相比展现减少或缺乏结合至除了存在D60A或G63A氨基酸取代以外与人类GITR一致的蛋白质。
111.如权利要求94至110中任一项所述的抗体，其中所述抗体诱导、活化或增强人类GITR的活性。
112.一种分离抗体，其与如权利要求1至111中任一项所述的抗体竞争结合至人类GITR达到如权利要求1至111中任一项所述的抗体自竞争结合至人类GITR的程度。
113.一种与如权利要求1至111中任一项所述的抗体竞争结合至人类GITR的分离第一抗体，其中所述第一抗体在包括以下步骤的试验中竞争结合：
(a)在容器中孵育GITR转染的细胞与未标记形式的所述第一抗体；
(b)将标记形式的如权利要求1至111中任一项所述的抗体添加至所述容器中的所述细胞中并且在所述容器中孵育所述细胞；以及
(c)检测标记形式的如权利要求1至111中任一项所述的抗体与所述细胞的结合。
114.一种与如权利要求1至111中任一项所述的抗体竞争结合至人类GITR的分离第一抗体，其中所述竞争如所述第一抗体与人类GITR的结合减少超过80％所展现。
115.如权利要求1至114中任一项所述的抗体，其中所述抗体诱导、活化或增强人类GITR的活性。
116.如权利要求1至115中任一项所述的抗体，其中所述抗体独立于TCR触发诱导、活化或增强细胞中人类GITR的活性。
117.如权利要求1至116中任一项所述的抗体，其中所述抗体独立于TCR触发诱导、活化或增强细胞中NF-κB的活性。
118.如权利要求116或117所述的抗体，其中所述细胞是T细胞。
119.如权利要求116或117所述的抗体，其中所述细胞不是T细胞。
120.如权利要求116或117所述的抗体，其中所述细胞选自由B细胞、浆细胞、记忆细胞、自然杀伤细胞、粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、肥大细胞、单核细胞、树突状细胞、浆细胞样树突状细胞、NKT细胞以及巨噬细胞组成的群组。
121.如权利要求1至120中任一项所述的抗体，其中所述抗体增加多功能性(IFNγ+TNFα+)T细胞的百分比。
122.如权利要求1至121中任一项所述的抗体，其中所述抗体当结合至活化的调控性T细胞时，结合至选自由CD16、CD32A以及CD64组成的群组的活化Fcγ受体达到比所述抗体当结合至活化的效应T细胞时，结合至选自由CD16、CD32A以及CD64组成的群组的所述活化Fcγ受体更大的程度。
123.如权利要求122所述的抗体，其中所述活化Fcγ受体在选自由源自骨髓的效应细胞和源自淋巴细胞的效应细胞组成的群组的细胞上表达。
124.如权利要求1至123中任一项所述的抗体，其中所述抗体增加活化的T细胞中OX40、PD-1或其组合的表面表达。
125.如权利要求1至68中任一项所述的抗体，其中所述抗体是人源化抗体、鼠类抗体或嵌合抗体。
126.如权利要求1至125中任一项所述的抗体，其中所述抗体以约0.5nM至5nM范围内的KD结合至人类GITR。
127.如权利要求1至126中任一项所述的抗体，其进一步包含可检测标记。
128.一种分离核酸分子，其编码如权利要求1至127中任一项所述的抗体的重链可变区和/或轻链可变区或者轻链和/或重链。
129.如权利要求128所述的分离核酸分子，其中所述核酸分子编码包含SEQ ID NO:209的核酸序列的重链可变区。
130.如权利要求128或129所述的分离核酸分子，其中所述核酸分子编码包含SEQ IDNO:210或SEQ ID NO:211的核酸序列的轻链可变区。
131.一种分离载体，其包含如权利要求128、129或130所述的核酸分子。
132.一种宿主细胞，其包含如权利要求128、129或130所述的分离核酸分子或如权利要求131所述的分离载体。
133.如权利要求132所述的宿主细胞，其选自由组织培养物中的大肠杆菌、假单胞菌、芽孢杆菌、链霉菌、酵母、CHO、YB/20、NS0、PER-C6、HEK-293T、NIH-3T3、HeLa、BHK、Hep G2、SP2/0、R1.1、B-W、L-M、COS 1、COS 7、BSC1、BSC40、BMT10细胞、植物细胞、昆虫细胞以及人类细胞组成的群组。
134.一种产生结合至人类GITR的抗体的方法，其包括培养如权利要求132或133所述的宿主细胞以便表达所述核酸分子并且产生所述抗体。
135.一种分离抗体，其特异性地结合至人类GITR并且由如权利要求128至130中任一项所述的分离核酸分子编码。
136.一种医药组合物，其包含如权利要求1至127中任一项所述的抗体、如权利要求128至130中任一项所述的核酸分子、如权利要求131所述的载体或如权利要求132或133所述的宿主细胞，以及医药学上可接受的载剂或赋形剂。
137.一种医药组合物，其包含如权利要求1至127中任一项所述的抗体，以及医药载剂或赋形剂。
138.一种在受试者中调节免疫反应的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的如权利要求1至127中任一项所述的抗体或如权利要求136或137所述的医药组合物。
139.如权利要求138所述的方法，其为增强或诱导所述受试者的所述免疫反应的方法。
140.一种在受试者中增强T细胞的扩展和T细胞效应功能的方法，其包括向所述受试者施用有效量的如权利要求1至127中任一项所述的抗体或如权利要求136或137所述的医药组合物。
141.一种在受试者中增强CD8+T细胞的扩展的方法，其包括向所述受试者施用有效量的如权利要求1至127中任一项所述的抗体或如权利要求136或137所述的医药组合物。
142.一种在受试者中独立于TCR触发活化T细胞的方法，其包括向所述受试者施用有效量的如权利要求136或137所述的医药组合物。
143.一种在受试者中独立于TCR触发诱导、活化或增强NF-κB的活性的方法，其包括向所述受试者施用有效量的如权利要求136或137所述的医药组合物。
144.一种在受试者中增加多功能性(IFNγ+TNFα+)T细胞的百分比的方法，其包括向所述受试者施用有效量的如权利要求136或137所述的医药组合物。
145.一种在受试者中增加活化的T细胞中OX40、PD-1或其组合的表面表达的方法，其包括向所述受试者施用有效量的如权利要求136或137所述的医药组合物。
146.一种在受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的如权利要求1至127中任一项所述的抗体或如权利要求136或137所述的医药组合物。
147.如权利要求146所述的方法，其中所述癌症是鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、胃肠癌、霍奇金氏或非霍奇金氏淋巴瘤、胰腺癌、成胶质细胞瘤、神经胶质瘤、子宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、乳癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、骨髓瘤、唾液腺癌、肾癌、基底细胞癌、黑素瘤、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、睾丸癌、食道癌或一种类型的头或颈癌。
148.如权利要求147所述的方法，其中所述癌症是促纤维增生性黑素瘤、发炎性乳癌、胸腺瘤、直肠癌、肛门癌或可手术治疗或不可手术治疗的脑干神经胶质瘤。
149.如权利要求146所述的方法，其进一步包括向所述受试者施用吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)的抑制剂。
150.如权利要求149所述的方法，其中所述抑制剂选自由帕卡斯他、F001287、吲哚西莫以及NLG919组成的群组。
151.如权利要求149所述的方法，其中所述抑制剂是帕卡斯他。
152.如权利要求149所述的方法，其中所述抑制剂是F001287。
153.如权利要求149所述的方法，其中所述抑制剂是吲哚西莫。
154.如权利要求149所述的方法，其中所述抑制剂是NLG919。
155.一种在受试者中治疗病毒感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的如权利要求1至127中任一项所述的抗体或如权利要求136或137所述的医药组合物。
156.如权利要求155所述的方法，其中所述病毒感染是由人乳头状瘤病毒(HPV)、单纯疱疹或其它疱疹病毒、B型肝炎病毒(HBV)、C型肝炎病毒(HCV)或其它肝炎病毒、麻疹病毒、HIV或爱泼斯坦巴尔病毒(EBV)引起的病毒感染。
157.一种在受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括：向有需要的所述受试者施用有效量的如权利要求1至127中任一项所述的抗体与另一种治疗剂的组合。
158.如权利要求157所述的方法，其中所述其它治疗剂是吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)的抑制剂，其中所述抗体和所述IDO的抑制剂在不同的医药组合物中并且作为独立的剂型施用。
159.如权利要求158所述的方法，其中所述抑制剂选自帕卡斯他、F001287、吲哚西莫以及NLG919。
160.如权利要求157所述的方法，其中所述其它治疗剂是检查点靶向剂。
161.如权利要求160所述的方法，其中所述检查点靶向剂选自由PD-1的拮抗剂、PD-L1的拮抗剂、PD-L2的拮抗剂、CTLA-4的拮抗剂、TIM-3的拮抗剂、LAG-3的拮抗剂以及OX40的促效剂组成的群组。
162.如权利要求160所述的方法，其中所述检查点靶向剂选自由拮抗剂抗PD-1抗体、拮抗剂抗PD-L1抗体、拮抗剂抗PD-L2抗体、拮抗剂抗CTLA-4抗体、拮抗剂抗TIM-3抗体、拮抗剂抗LAG-3抗体以及促效剂抗OX40抗体组成的群组。
163.如权利要求161所述的方法，其中所述其它治疗剂是PD-1的拮抗剂或OX40的促效剂。
164.如权利要求161所述的方法，其中所述PD-1的拮抗剂或所述OX40的促效剂继施用所述抗GITR抗体之后施用。
165.如权利要求161所述的方法，其中所述PD-1的拮抗剂或所述OX40的促效剂与所述抗GITR抗体同时或在施用所述抗GITR抗体之前施用。
166.如权利要求157所述的方法，其中所述其它治疗剂是抗CD25抗体。
167.如权利要求166所述的方法，其中所述抗CD25抗体继施用所述抗GITR抗体之后施用。
168.如权利要求166所述的方法，其中所述抗CD25抗体与所述抗GITR抗体同时或在施用所述抗GITR抗体之前施用。
169.一种在受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括将抗PD-1抗体施用于已经接受抗GITR抗体的受试者，其中所述抗PD-1抗体在所述抗GITR抗体相对于在所述施用的时间所述受试者中PD-1的表达已经增加所述受试者中PD-1的表达的时间施用。
170.一种在受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括将抗OX40抗体施用于已经接受抗GITR抗体的受试者，其中所述抗OX40抗体在所述抗GITR抗体相对于在所述施用的时间所述受试者中OX40的表达已经增加所述受试者中OX40的表达的时间施用。
171.一种在受试者中治疗癌症的方法，其包括将抗GITR抗体施用于有需要的受试者，其中所述抗GITR抗体相对于在所述施用的时间所述受试者中PD-1的表达增加所述受试者中PD-1的表达，以及当PD-1的表达增加时将抗PD-1抗体施用于所述受试者。
172.一种在受试者中治疗癌症的方法，其包括将抗GITR抗体施用于有需要的受试者，其中所述抗GITR抗体相对于在所述施用的时间所述受试者中OX40的表达增加所述受试者中OX40的表达，以及当OX40的表达增加时将抗OX40抗体施用于所述受试者。
173.如权利要求169至172中任一项所述的方法，其中所述抗GITR抗体诱导、活化或增强GITR的活性。
174.一种在第一受试者中治疗癌症或病毒感染的方法，所述方法包括以下步骤：
(a)离体孵育T细胞与如权利要求1至127中任一项所述的抗体；以及
(b)将所述T细胞输注至所述第一受试者中。
175.如权利要求174所述的方法，其进一步包括在步骤(a)之前从第二受试者分离所述T细胞，其中所述T细胞对于所述第一受试者是自体或异体的。
176.如权利要求174所述的方法，其进一步包括在步骤(a)之前：
(1)针对GITR的细胞表面表达试验所述T细胞；以及
(2)如果步骤(1)并不得到GITR高于临限值的检测，那么通过孵育所述T细胞与T细胞受体(TCR)复合物刺激剂诱导所述T细胞的所述表面上GITR的表达。
177.如权利要求174所述的方法，其进一步包括在步骤(a)之前、同时或之后孵育所述T细胞与TCR复合物刺激剂。
178.如权利要求174、175、176或177所述的方法，其进一步包括向所述第一受试者施用抗癌剂。
179.如权利要求178所述的方法，其中所述抗癌剂是疫苗。
180.如权利要求179所述的方法，其中所述疫苗包含有包含与抗原肽复合的热休克蛋白的热休克蛋白肽复合物(HSPPC)。
181.如权利要求180所述的方法，其中所述热休克蛋白是gp96蛋白并且与肿瘤相关抗原肽复合，其中所述HSPPC来源于获自受试者的肿瘤。
182.一种增强T细胞的扩展和T细胞效应功能的离体方法，其包括离体孵育T细胞与如权利要求1至127中任一项所述的抗体。
183.如权利要求182所述的方法，其中所述T细胞已经从第一受试者分离。
184.如权利要求182或183所述的方法，其进一步包括在孵育所述T细胞与所述抗体之前、同时或之后孵育所述T细胞与TCR复合物刺激剂。
185.如权利要求182、183或184所述的方法，其进一步包括将与所述抗体一起孵育的所述T细胞输注至第二受试者中，其中所述T细胞对于所述第二受试者是自体或异体的。
186.一种增强T细胞的刺激的方法，其包括离体孵育已经用TCR复合物刺激剂刺激的T细胞与如权利要求1至127中任一项所述的抗体。
187.一种活化T细胞的方法，其包括离体孵育T细胞与TCR复合物刺激剂和如权利要求1至127中任一项所述的抗体。
188.如权利要求186或187所述的方法，其中所述T细胞从第一受试者分离。
189.如权利要求186、187或188所述的方法，其进一步包括将与所述抗体一起孵育的所述T细胞输注至第二受试者中，其中所述T细胞对于所述第二受试者是自体或异体的。
190.如权利要求138至173中任一项所述的方法，其中所述受试者是人类。
191.如权利要求174、176、177、183、184或188所述的方法，其中所述第一受试者是人类。
192.如权利要求175、178、179、180、181、185或189所述的方法，其中所述第一和第二受试者是人类。
193.一种在受试者中优于T调控性细胞的扩展优先扩展效应T细胞的方法，其包括向所述受试者施用有效量的如权利要求1至127中任一项所述的抗体或如权利要求136或137所述的医药组合物。
194.如权利要求193所述的方法，其中所述受试者是人类。
195.一种鉴别在不存在TCR促效剂的情况下能够诱导、活化或增强GITR的活性的抗GITR抗体的方法，其包括在不存在TCR促效剂的情况下使表达GITR的细胞与抗GITR抗体接触以及测量GITR活性，其中与不存在所述抗GITR抗体的情况下的GITR活性相比增加的GITR活性指示所述抗GITR抗体在不存在TCR促效剂的情况下能够诱导、活化或增强GITR的活性。
196.如权利要求195所述的方法，其中所述GITR活性通过测量NF-κB活性来评估。
197.如权利要求195所述的方法，其中所述GITR活性通过测量经典和非经典NF-κB路径的活化来评估。
198.如权利要求195所述的方法，其中所述GITR活性通过测量TRAF适配子介导的信号传导路径的活化来评估，其中所述TRAF适配子选自由TRAF1、TRAF2、TRAF3、TRAF4以及TRAF5组成的群组。
199.如权利要求195所述的方法，其中所述GITR活性通过测量MAPK/ERK路径的活化来评估。
200.如权利要求195至199中任一项所述的方法，其中所述抗GITR抗体使所述GITR活性与不存在所述抗GITR抗体的情况下的所述GITR活性相比增加至少两倍。
201.如权利要求195至200中任一项所述的方法，其中所述细胞是T细胞。
202.如权利要求195至200中任一项所述的方法，其中所述细胞不是T细胞。
203.一种特异性地结合至人类GITR的分离抗体，其中所述抗体在不存在TCR触发的情况下能够诱导、活化或增强细胞中GITR的活性。
204.一种特异性地结合至人类GITR的分离抗体，其中所述抗体在不存在TCR触发的情况下能够诱导、活化或增强细胞中NF-κB的活性。
205.一种在受试者中治疗癌症的方法，其包括向所述受试者施用有效量的如权利要求203或204所述的抗体。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211180038.2A CN115925946A (zh) | 2014-05-28 | 2015-05-28 | 抗gitr抗体和其使用方法 |
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201462004071P | 2014-05-28 | 2014-05-28 | |
| US62/004,071 | 2014-05-28 | ||
| US201562161250P | 2015-05-13 | 2015-05-13 | |
| US62/161,250 | 2015-05-13 | ||
| PCT/US2015/032895 WO2015184099A1 (en) | 2014-05-28 | 2015-05-28 | Anti-gitr antibodies and methods of use thereof |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202211180038.2A Division CN115925946A (zh) | 2014-05-28 | 2015-05-28 | 抗gitr抗体和其使用方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN108064242A true CN108064242A (zh) | 2018-05-22 |
| CN108064242B CN108064242B (zh) | 2022-10-21 |
Family
ID=53433276
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202211180038.2A Pending CN115925946A (zh) | 2014-05-28 | 2015-05-28 | 抗gitr抗体和其使用方法 |
| CN201580041149.7A Active CN108064242B (zh) | 2014-05-28 | 2015-05-28 | 抗gitr抗体和其使用方法 |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202211180038.2A Pending CN115925946A (zh) | 2014-05-28 | 2015-05-28 | 抗gitr抗体和其使用方法 |
Country Status (26)
| Country | Link |
|---|---|
| US (9) | US10155818B2 (zh) |
| EP (2) | EP3148579B1 (zh) |
| JP (3) | JP6847666B2 (zh) |
| KR (2) | KR102433464B1 (zh) |
| CN (2) | CN115925946A (zh) |
| AU (3) | AU2015266958A1 (zh) |
| CA (1) | CA2949998A1 (zh) |
| CY (1) | CY1124787T1 (zh) |
| DK (1) | DK3148579T3 (zh) |
| EA (1) | EA201692458A1 (zh) |
| ES (1) | ES2860751T3 (zh) |
| HR (1) | HRP20210364T1 (zh) |
| HU (1) | HUE053857T2 (zh) |
| IL (3) | IL293212B2 (zh) |
| LT (1) | LT3148579T (zh) |
| MA (2) | MA40041B1 (zh) |
| MX (2) | MX2016015614A (zh) |
| NZ (1) | NZ726513A (zh) |
| PH (1) | PH12016502345A1 (zh) |
| PL (1) | PL3148579T3 (zh) |
| PT (1) | PT3148579T (zh) |
| RS (1) | RS61678B1 (zh) |
| SG (2) | SG10201912986PA (zh) |
| SI (1) | SI3148579T1 (zh) |
| TW (2) | TWI709573B (zh) |
| WO (1) | WO2015184099A1 (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109561681A (zh) * | 2016-07-20 | 2019-04-02 | Igm生物科学股份有限公司 | 多聚gitr结合分子及其用途 |
| CN112739314A (zh) * | 2018-08-08 | 2021-04-30 | 雪松-西奈医学中心 | 用于治疗癌症和自体免疫疾病的组合物和方法 |
| CN113035298A (zh) * | 2021-04-02 | 2021-06-25 | 南京信息工程大学 | 递归生成大阶数行限制覆盖阵列的药物临床试验设计方法 |
Families Citing this family (130)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2012305931B2 (en) | 2011-09-08 | 2017-09-07 | Yeda Research And Development Co. Ltd | Anti third party central memory T cells, methods of producing same and use of same in transplantation and disease treatment |
| KR101566539B1 (ko) | 2012-06-08 | 2015-11-05 | 국립암센터 | 신규한 Ｔｈ2 세포 전환용 에피토프 및 이의 용도 |
| KR102433464B1 (ko) | 2014-05-28 | 2022-08-17 | 아게누스 인코포레이티드 | 항-gitr 항체 및 이의 사용 방법 |
| SG10201810507WA (en) | 2014-06-06 | 2018-12-28 | Bristol Myers Squibb Co | Antibodies against glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor (gitr) and uses thereof |
| JP2017538678A (ja) | 2014-11-05 | 2017-12-28 | フレクサス・バイオサイエンシーズ・インコーポレイテッドＦｌｅｘｕｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｉｎｃ． | 免疫調節剤 |
| UY36390A (es) * | 2014-11-05 | 2016-06-01 | Flexus Biosciences Inc | Compuestos moduladores de la enzima indolamina 2,3-dioxigenasa (ido), sus métodos de síntesis y composiciones farmacéuticas que los contienen |
| JP6951973B2 (ja) | 2014-11-12 | 2021-10-20 | シージェン インコーポレイテッド | グリカン相互作用化合物及び使用方法 |
| KR20170138477A (ko) | 2015-04-17 | 2017-12-15 | 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 | 항-pd-1 항체 및 또 다른 항체의 조합물을 포함하는 조성물 |
| EA201792497A1 (ru) | 2015-06-03 | 2018-05-31 | Бристол-Майерс Сквибб Компани | Антитела к gitr для диагностики злокачественной опухоли |
| PL3322424T3 (pl) | 2015-07-16 | 2024-03-04 | Yeda Research And Development Co., Ltd. | Zastosowanie centralnych limfocytów t pamięci przeciwko stronie trzeciej |
| CN108650886B (zh) | 2015-07-23 | 2022-07-05 | 英伊布里克斯公司 | 多价和多特异性gitr-结合融合蛋白 |
| US11059899B1 (en) | 2015-10-22 | 2021-07-13 | Ablynx N.V. | Polypeptides that bind glucocorticoid-induced TNFR family-related receptor (GITR) |
| WO2017083582A1 (en) | 2015-11-12 | 2017-05-18 | Siamab Therapeutics, Inc. | Glycan-interacting compounds and methods of use |
| WO2017087678A2 (en) | 2015-11-19 | 2017-05-26 | Bristol-Myers Squibb Company | Antibodies against glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor (gitr) and uses thereof |
| CN116063542A (zh) * | 2015-12-02 | 2023-05-05 | 阿吉纳斯公司 | 抗体和其使用方法 |
| WO2017096276A1 (en) * | 2015-12-02 | 2017-06-08 | Agenus Inc. | Anti-gitr antibodies and methods of use thereof |
| WO2017096189A1 (en) * | 2015-12-02 | 2017-06-08 | Agenus Inc. | Anti-gitr antibodies and methods of use thereof |
| EP3426297A4 (en) | 2016-03-08 | 2019-08-14 | Janssen Biotech, Inc. | GITR ANTIBODIES, METHODS AND USES |
| TWI786044B (zh) | 2016-05-13 | 2022-12-11 | 美商再生元醫藥公司 | 藉由投予ｐｄ-１抑制劑治療皮膚癌之方法 |
| JP7169195B2 (ja) | 2016-05-20 | 2022-11-10 | バイオヘイブン・ファーマシューティカル・ホールディング・カンパニー・リミテッド | 癌を処置するためのリルゾール、リルゾールプロドラッグまたはリルゾール類似体と免疫療法との併用 |
| US11623958B2 (en) | 2016-05-20 | 2023-04-11 | Harpoon Therapeutics, Inc. | Single chain variable fragment CD3 binding proteins |
| CN109789177A (zh) * | 2016-05-27 | 2019-05-21 | 德那翠丝有限公司 | 腺病毒和免疫调节剂组合治疗 |
| SG10201912563XA (en) * | 2016-05-27 | 2020-02-27 | Agenus Inc | Anti-tim-3 antibodies and methods of use thereof |
| US20190263918A1 (en) * | 2016-06-08 | 2019-08-29 | Shanghai Jiao Tong University School Of Medicine | Sequence of antibody heavy chain constant region for enhancing agonistic antibody activity |
| MA45233A (fr) | 2016-06-10 | 2019-04-17 | Regeneron Pharma | Anticorps anti-gitr et leurs utilisations |
| EP3471754A1 (en) | 2016-06-20 | 2019-04-24 | Kymab Limited | Anti-pd-l1 antibodies |
| EP3478721A1 (en) * | 2016-07-01 | 2019-05-08 | Five Prime Therapeutics, Inc. | Combined anti tumor therapy with a gitr agonist and cpg |
| SG11201900026TA (en) | 2016-07-14 | 2019-01-30 | Bristol Myers Squibb Co | Antibodies against tim3 and uses thereof |
| CN109689689B (zh) * | 2016-07-22 | 2022-12-06 | 丹娜法伯癌症研究所公司 | 糖皮质激素诱导肿瘤坏死因子受体(gitr)抗体及其使用方法 |
| CA3041340A1 (en) | 2016-11-09 | 2018-05-17 | Agenus Inc. | Anti-ox40 antibodies, anti-gitr antibodies, and methods of use thereof |
| WO2018094143A1 (en) | 2016-11-17 | 2018-05-24 | Siamab Therapeutics, Inc. | Glycan-interacting compounds and methods of use |
| US20200247902A1 (en) * | 2016-11-17 | 2020-08-06 | Seattle Genetics, Inc. | Compositions and methods for treating cancer |
| JOP20190100A1 (ar) * | 2016-11-19 | 2019-05-01 | Potenza Therapeutics Inc | بروتينات ربط مولد ضد مضاد لـ gitr وطرق استخدامها |
| US10751368B2 (en) | 2017-01-18 | 2020-08-25 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Methods of transplantation and disease treatment |
| US11555178B2 (en) | 2017-01-18 | 2023-01-17 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Genetically modified veto cells and use of same in immunotherapy |
| AU2018213124A1 (en) * | 2017-01-27 | 2019-09-12 | Ultrahuman One Limited | Binding agents |
| EP3882271A3 (en) | 2017-02-10 | 2022-01-05 | Eutilex Co., Ltd. | Ifn-gamma-inducible regulatory t cell convertible anti-cancer (irtca) antibody and uses thereof |
| KR20240011262A (ko) | 2017-02-21 | 2024-01-25 | 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. | 폐암의 치료를 위한 항-pd-1 항체 |
| AU2018226824A1 (en) * | 2017-03-03 | 2019-09-19 | Seagen Inc. | Glycan-interacting compounds and methods of use |
| WO2018183928A1 (en) | 2017-03-31 | 2018-10-04 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods of treating tumor |
| WO2018185618A1 (en) | 2017-04-03 | 2018-10-11 | Novartis Ag | Anti-cdh6 antibody drug conjugates and anti-gitr antibody combinations and methods of treatment |
| AR111651A1 (es) | 2017-04-28 | 2019-08-07 | Novartis Ag | Conjugados de anticuerpos que comprenden agonistas del receptor de tipo toll y terapias de combinación |
| US10543271B2 (en) | 2017-05-12 | 2020-01-28 | Harpoon Therapeutics, Inc. | Mesothelin binding proteins |
| KR20200006115A (ko) | 2017-05-16 | 2020-01-17 | 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 | 항-gitr 효능제 항체에 의한 암의 치료 |
| WO2018229715A1 (en) | 2017-06-16 | 2018-12-20 | Novartis Ag | Compositions comprising anti-cd32b antibodies and methods of use thereof |
| CN109136275B (zh) | 2017-06-19 | 2021-03-16 | 百奥赛图(北京)医药科技股份有限公司 | 人源化gitr基因改造动物模型的制备方法及应用 |
| EP3642240A1 (en) | 2017-06-22 | 2020-04-29 | Novartis AG | Antibody molecules to cd73 and uses thereof |
| WO2018235056A1 (en) | 2017-06-22 | 2018-12-27 | Novartis Ag | IL-1BETA BINDING ANTIBODIES FOR USE IN THE TREATMENT OF CANCER |
| PE20200717A1 (es) | 2017-06-22 | 2020-07-21 | Novartis Ag | Moleculas de anticuerpo que se unen a cd73 y usos de las mismas |
| JP2020524694A (ja) | 2017-06-22 | 2020-08-20 | ノバルティス アーゲー | がんの処置における使用のためのＩＬ−１β結合性抗体 |
| EP3645037A1 (en) | 2017-06-27 | 2020-05-06 | Novartis AG | Dosage regimens for anti-tim-3 antibodies and uses thereof |
| WO2019001559A1 (zh) | 2017-06-30 | 2019-01-03 | 江苏恒瑞医药股份有限公司 | 抗gitr抗体、其抗原结合片段及其医药用途 |
| CN111655264B (zh) | 2017-06-30 | 2023-08-15 | 百时美施贵宝公司 | 经取代的喹啉基环己基丙酰胺化合物和改进的其制备方法 |
| US20200172617A1 (en) | 2017-07-20 | 2020-06-04 | Novartis Ag | Dosage regimens of anti-lag-3 antibodies and uses thereof |
| JP7241080B2 (ja) * | 2017-08-28 | 2023-03-16 | アンジーエックス・インコーポレーテッド | 抗ｔｍ４ｓｆ１抗体およびそれを使用する方法 |
| US10927180B2 (en) | 2017-10-13 | 2021-02-23 | Harpoon Therapeutics, Inc. | B cell maturation antigen binding proteins |
| US20200239577A1 (en) | 2017-10-15 | 2020-07-30 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods of treating tumor |
| WO2019081983A1 (en) | 2017-10-25 | 2019-05-02 | Novartis Ag | CD32B TARGETING ANTIBODIES AND METHODS OF USE |
| MX2020004756A (es) | 2017-11-16 | 2020-08-20 | Novartis Ag | Terapias de combinacion. |
| CN111886255A (zh) | 2018-01-12 | 2020-11-03 | 百时美施贵宝公司 | 抗tim3抗体及其用途 |
| WO2019173420A1 (en) * | 2018-03-08 | 2019-09-12 | Phanes Therapeutics, Inc. | Anti-claudin 18.2 antibodies and uses thereof |
| CN111971304A (zh) | 2018-03-21 | 2020-11-20 | 戊瑞治疗有限公司 | 在酸性pH结合至VISTA的抗体 |
| TW202003565A (zh) | 2018-03-23 | 2020-01-16 | 美商必治妥美雅史谷比公司 | 抗mica及/或micb抗體及其用途 |
| CN111918873A (zh) | 2018-03-27 | 2020-11-10 | 百时美施贵宝公司 | 使用紫外线信号实时监测滴度 |
| CN111971306A (zh) | 2018-03-30 | 2020-11-20 | 百时美施贵宝公司 | 治疗肿瘤的方法 |
| US20210147547A1 (en) | 2018-04-13 | 2021-05-20 | Novartis Ag | Dosage Regimens For Anti-Pd-L1 Antibodies And Uses Thereof |
| TW202015726A (zh) | 2018-05-30 | 2020-05-01 | 瑞士商諾華公司 | Ｅｎｔｐｄ２抗體、組合療法、及使用該等抗體和組合療法之方法 |
| US20210214459A1 (en) | 2018-05-31 | 2021-07-15 | Novartis Ag | Antibody molecules to cd73 and uses thereof |
| US20210251994A1 (en) | 2018-06-15 | 2021-08-19 | Flagship Pioneering Innovations V, Inc. | Increasing immune activity through modulation of postcellular signaling factors |
| EP3820904A2 (en) | 2018-07-09 | 2021-05-19 | Five Prime Therapeutics, Inc. | Antibodies binding to ilt4 |
| CR20210001A (es) | 2018-07-10 | 2021-04-19 | Novartis Ag | Derivados de 3-(5-hidroxi-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona y su uso en el tratamiento de trastornos dependientes de la proteina con dedos de zinc 2 de la familia ikaros (1kzf2) |
| AR116109A1 (es) | 2018-07-10 | 2021-03-31 | Novartis Ag | Derivados de 3-(5-amino-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona y usos de los mismos |
| JP2022513421A (ja) | 2018-07-11 | 2022-02-08 | ファイブ プライム セラピューティクス， インコーポレイテッド | 酸性ｐＨでＶＩＳＴＡと結合する抗体 |
| WO2020021465A1 (en) | 2018-07-25 | 2020-01-30 | Advanced Accelerator Applications (Italy) S.R.L. | Method of treatment of neuroendocrine tumors |
| IL297931A (en) | 2018-09-25 | 2023-01-01 | Harpoon Therapeutics Inc | dll3 binding proteins and methods of use |
| WO2020089811A1 (en) | 2018-10-31 | 2020-05-07 | Novartis Ag | Dc-sign antibody drug conjugates |
| KR20210106437A (ko) | 2018-12-20 | 2021-08-30 | 노파르티스 아게 | 3-(1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 유도체를 포함하는 투약 요법 및 약학적 조합물 |
| WO2020128637A1 (en) | 2018-12-21 | 2020-06-25 | Novartis Ag | Use of il-1 binding antibodies in the treatment of a msi-h cancer |
| WO2020128613A1 (en) | 2018-12-21 | 2020-06-25 | Novartis Ag | Use of il-1beta binding antibodies |
| AU2019409139A1 (en) | 2018-12-21 | 2021-06-03 | Novartis Ag | Use of IL-1β binding antibodies |
| JP2022516850A (ja) | 2018-12-21 | 2022-03-03 | ノバルティス アーゲー | 骨髄異形成症候群の治療又は予防におけるＩＬ－１β抗体の使用 |
| EP3924055B1 (en) | 2019-02-15 | 2024-04-03 | Novartis AG | Substituted 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and uses thereof |
| US20220144807A1 (en) | 2019-02-15 | 2022-05-12 | Novartis Ag | 3-(1-oxo-5-(piperidin-4-yl)isoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and uses thereof |
| WO2020172658A1 (en) | 2019-02-24 | 2020-08-27 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods of isolating a protein |
| RU2734432C1 (ru) * | 2019-04-23 | 2020-10-16 | Закрытое Акционерное Общество "Биокад" | Моноклональное антитело, которое специфически связывается с GITR |
| EP3962493A2 (en) | 2019-05-03 | 2022-03-09 | Flagship Pioneering Innovations V, Inc. | Methods of modulating immune activity/level of irf or sting or of treating cancer, comprising the administration of a sting modulator and/or purinergic receptor modulator or postcellular signaling factor |
| WO2020237221A1 (en) | 2019-05-23 | 2020-11-26 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods of monitoring cell culture media |
| CN114174538A (zh) | 2019-05-30 | 2022-03-11 | 百时美施贵宝公司 | 适合于免疫肿瘤学疗法的多肿瘤基因特征 |
| KR20220016157A (ko) | 2019-05-30 | 2022-02-08 | 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 | 세포 국재화 시그너쳐 및 조합 요법 |
| WO2020243568A1 (en) | 2019-05-30 | 2020-12-03 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods of identifying a subject suitable for an immuno-oncology (i-o) therapy |
| CA3150273A1 (en) * | 2019-08-08 | 2021-02-11 | Cedars-Sinai Medical Center | Method of generating activated t cells for cancer therapy |
| CN114502590A (zh) | 2019-09-18 | 2022-05-13 | 诺华股份有限公司 | Entpd2抗体、组合疗法、以及使用这些抗体和组合疗法的方法 |
| JP2022548292A (ja) | 2019-09-19 | 2022-11-17 | ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー | 酸性ｐＨでＶＩＳＴＡと結合する抗体 |
| BR112022007376A2 (pt) | 2019-10-21 | 2022-07-05 | Novartis Ag | Terapias de combinação com venetoclax e inibidores de tim-3 |
| WO2021079195A1 (en) | 2019-10-21 | 2021-04-29 | Novartis Ag | Tim-3 inhibitors and uses thereof |
| US20230114107A1 (en) | 2019-12-17 | 2023-04-13 | Flagship Pioneering Innovations V, Inc. | Combination anti-cancer therapies with inducers of iron-dependent cellular disassembly |
| WO2021123996A1 (en) | 2019-12-20 | 2021-06-24 | Novartis Ag | Uses of anti-tgf-beta antibodies and checkpoint inhibitors for the treatment of proliferative diseases |
| JP2023510393A (ja) | 2020-01-17 | 2023-03-13 | ノバルティス アーゲー | 骨髄異形成症候群または慢性骨髄単球性白血病の処置に使用するためのｔｉｍ－３阻害剤と低メチル化剤とを含む組合せ |
| CN115244084A (zh) | 2020-03-06 | 2022-10-25 | 瑞泽恩制药公司 | 抗gitr抗体及其用途 |
| JPWO2021225159A1 (zh) * | 2020-05-08 | 2021-11-11 | ||
| AU2021288224A1 (en) | 2020-06-11 | 2023-01-05 | Novartis Ag | ZBTB32 inhibitors and uses thereof |
| CN115916199A (zh) | 2020-06-23 | 2023-04-04 | 诺华股份有限公司 | 包含3-(1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮衍生物的给药方案 |
| EP4172323A1 (en) | 2020-06-29 | 2023-05-03 | Flagship Pioneering Innovations V, Inc. | Viruses engineered to promote thanotransmission and their use in treating cancer |
| US20230271940A1 (en) | 2020-08-03 | 2023-08-31 | Novartis Ag | Heteroaryl substituted 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and uses thereof |
| US20230338587A1 (en) | 2020-08-31 | 2023-10-26 | Advanced Accelerator Applications International Sa | Method of treating psma-expressing cancers |
| US20230303700A1 (en) | 2020-08-31 | 2023-09-28 | Bristol-Myers Squibb Company | Cell localization signature and immunotherapy |
| WO2022043557A1 (en) | 2020-08-31 | 2022-03-03 | Advanced Accelerator Applications International Sa | Method of treating psma-expressing cancers |
| JP2023544410A (ja) | 2020-10-05 | 2023-10-23 | ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー | タンパク質を濃縮するための方法 |
| US20240018248A1 (en) | 2020-12-02 | 2024-01-18 | Vib Vzw | An ltbr agonist in combination therapy against cancer |
| WO2022120179A1 (en) | 2020-12-03 | 2022-06-09 | Bristol-Myers Squibb Company | Multi-tumor gene signatures and uses thereof |
| EP4267172A1 (en) | 2020-12-28 | 2023-11-01 | Bristol-Myers Squibb Company | Subcutaneous administration of pd1/pd-l1 antibodies |
| EP4267105A1 (en) | 2020-12-28 | 2023-11-01 | Bristol-Myers Squibb Company | Antibody compositions and methods of use thereof |
| CA3206883A1 (en) | 2020-12-31 | 2022-07-07 | Sanofi | Multifunctional natural killer (nk) cell engagers binding to nkp46 and cd123 |
| WO2022159620A1 (en) * | 2021-01-21 | 2022-07-28 | Twist Bioscience Corporation | Methods and compositions relating to adenosine receptors |
| TW202246334A (zh) | 2021-02-02 | 2022-12-01 | 美商美國禮來大藥廠 | Gitr拮抗劑及其使用方法 |
| US20220325287A1 (en) | 2021-03-31 | 2022-10-13 | Flagship Pioneering Innovations V, Inc. | Thanotransmission polypeptides and their use in treating cancer |
| EP4314068A1 (en) | 2021-04-02 | 2024-02-07 | The Regents Of The University Of California | Antibodies against cleaved cdcp1 and uses thereof |
| TW202304979A (zh) | 2021-04-07 | 2023-02-01 | 瑞士商諾華公司 | 抗ＴＧＦβ抗體及其他治療劑用於治療增殖性疾病之用途 |
| CN117813327A (zh) * | 2021-05-10 | 2024-04-02 | 美帝马布生物公司 | 抗gitr抗体及其用途 |
| AR125874A1 (es) | 2021-05-18 | 2023-08-23 | Novartis Ag | Terapias de combinación |
| AU2022303363A1 (en) | 2021-06-29 | 2024-01-18 | Flagship Pioneering Innovations V, Inc. | Immune cells engineered to promote thanotransmission and uses thereof |
| WO2023173011A1 (en) | 2022-03-09 | 2023-09-14 | Bristol-Myers Squibb Company | Transient expression of therapeutic proteins |
| WO2023178192A1 (en) | 2022-03-15 | 2023-09-21 | Compugen Ltd. | Il-18bp antagonist antibodies and their use in monotherapy and combination therapy in the treatment of cancer |
| WO2023175614A1 (en) | 2022-03-15 | 2023-09-21 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Anti glucocorticoid-induced tnfr-related (gitr) protein antibodies and uses thereof |
| WO2023178329A1 (en) | 2022-03-18 | 2023-09-21 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods of isolating polypeptides |
| WO2023235847A1 (en) | 2022-06-02 | 2023-12-07 | Bristol-Myers Squibb Company | Antibody compositions and methods of use thereof |
| WO2024058404A1 (ko) | 2022-09-15 | 2024-03-21 | 주식회사 엘지에너지솔루션 | 배터리 관리 시스템, 배터리 팩, 전기 차량 및 배터리 충전 시간 예측 방법 |
| US20240174732A1 (en) | 2022-10-05 | 2024-05-30 | Flagship Pioneering Innovations V, Inc. | Nucleic acid molecules encoding trif and additional polypeptides and their use in treating cancer |
| US20240190982A1 (en) * | 2022-11-03 | 2024-06-13 | Incyte Corporation | Combination therapies comprising an anti-gitr antibody for treating cancers |
| CN117777306A (zh) * | 2023-07-04 | 2024-03-29 | 深圳豪石生物科技有限公司 | 一种靶向cldn18.2的增强型嵌合抗原受体及其用途 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006105021A2 (en) * | 2005-03-25 | 2006-10-05 | Tolerrx, Inc. | Gitr binding molecules and uses therefor |
| WO2013039954A1 (en) * | 2011-09-14 | 2013-03-21 | Sanofi | Anti-gitr antibodies |
Family Cites Families (237)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4044126A (en) | 1972-04-20 | 1977-08-23 | Allen & Hanburys Limited | Steroidal aerosol compositions and process for the preparation thereof |
| GB1429184A (en) | 1972-04-20 | 1976-03-24 | Allen & Hanburys Ltd | Physically anti-inflammatory steroids for use in aerosols |
| US4444887A (en) | 1979-12-10 | 1984-04-24 | Sloan-Kettering Institute | Process for making human antibody producing B-lymphocytes |
| US4716111A (en) | 1982-08-11 | 1987-12-29 | Trustees Of Boston University | Process for producing human antibodies |
| GB8308235D0 (en) | 1983-03-25 | 1983-05-05 | Celltech Ltd | Polypeptides |
| US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
| US5807715A (en) | 1984-08-27 | 1998-09-15 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin |
| JP2532858B2 (ja) | 1985-04-01 | 1996-09-11 | セルテツク リミテツド | 形質転換したミエロ―マ細胞系 |
| GB8601597D0 (en) | 1986-01-23 | 1986-02-26 | Wilson R H | Nucleotide sequences |
| GB8607679D0 (en) | 1986-03-27 | 1986-04-30 | Winter G P | Recombinant dna product |
| US5225539A (en) | 1986-03-27 | 1993-07-06 | Medical Research Council | Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies |
| US5869620A (en) | 1986-09-02 | 1999-02-09 | Enzon, Inc. | Multivalent antigen-binding proteins |
| EP0307434B2 (en) | 1987-03-18 | 1998-07-29 | Scotgen Biopharmaceuticals, Inc. | Altered antibodies |
| GB8717430D0 (en) | 1987-07-23 | 1987-08-26 | Celltech Ltd | Recombinant dna product |
| US5677425A (en) | 1987-09-04 | 1997-10-14 | Celltech Therapeutics Limited | Recombinant antibody |
| ATE151110T1 (de) | 1988-09-02 | 1997-04-15 | Protein Eng Corp | Herstellung und auswahl von rekombinantproteinen mit verschiedenen bindestellen |
| US5223409A (en) | 1988-09-02 | 1993-06-29 | Protein Engineering Corp. | Directed evolution of novel binding proteins |
| US5750373A (en) | 1990-12-03 | 1998-05-12 | Genentech, Inc. | Enrichment method for variant proteins having altered binding properties, M13 phagemids, and growth hormone variants |
| US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
| US5413923A (en) | 1989-07-25 | 1995-05-09 | Cell Genesys, Inc. | Homologous recombination for universal donor cells and chimeric mammalian hosts |
| GB8928874D0 (en) | 1989-12-21 | 1990-02-28 | Celltech Ltd | Humanised antibodies |
| US5585112A (en) | 1989-12-22 | 1996-12-17 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Method of preparing gas and gaseous precursor-filled microspheres |
| WO1991010737A1 (en) | 1990-01-11 | 1991-07-25 | Molecular Affinities Corporation | Production of antibodies using gene libraries |
| US5780225A (en) | 1990-01-12 | 1998-07-14 | Stratagene | Method for generating libaries of antibody genes comprising amplification of diverse antibody DNAs and methods for using these libraries for the production of diverse antigen combining molecules |
| AU633698B2 (en) | 1990-01-12 | 1993-02-04 | Amgen Fremont Inc. | Generation of xenogeneic antibodies |
| US6075181A (en) | 1990-01-12 | 2000-06-13 | Abgenix, Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
| IT1246382B (it) | 1990-04-17 | 1994-11-18 | Eurand Int | Metodo per la cessione mirata e controllata di farmaci nell'intestino e particolarmente nel colon |
| US5427908A (en) | 1990-05-01 | 1995-06-27 | Affymax Technologies N.V. | Recombinant library screening methods |
| GB9015198D0 (en) | 1990-07-10 | 1990-08-29 | Brien Caroline J O | Binding substance |
| US5545806A (en) | 1990-08-29 | 1996-08-13 | Genpharm International, Inc. | Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
| US5625126A (en) | 1990-08-29 | 1997-04-29 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
| WO1992003918A1 (en) | 1990-08-29 | 1992-03-19 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
| US5633425A (en) | 1990-08-29 | 1997-05-27 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
| US5814318A (en) | 1990-08-29 | 1998-09-29 | Genpharm International Inc. | Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
| US5661016A (en) | 1990-08-29 | 1997-08-26 | Genpharm International Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes |
| US5698426A (en) | 1990-09-28 | 1997-12-16 | Ixsys, Incorporated | Surface expression libraries of heteromeric receptors |
| US5543390A (en) | 1990-11-01 | 1996-08-06 | State Of Oregon, Acting By And Through The Oregon State Board Of Higher Education, Acting For And On Behalf Of The Oregon Health Sciences University | Covalent microparticle-drug conjugates for biological targeting |
| JP3672306B2 (ja) | 1991-04-10 | 2005-07-20 | ザ スクリップス リサーチ インスティテュート | ファージミドを使用するヘテロ二量体受容体ライブラリー |
| EP0519596B1 (en) | 1991-05-17 | 2005-02-23 | Merck & Co. Inc. | A method for reducing the immunogenicity of antibody variable domains |
| EP0590067A1 (en) | 1991-06-14 | 1994-04-06 | Xoma Corporation | Microbially-produced antibody fragments and their conjugates |
| EP1400536A1 (en) | 1991-06-14 | 2004-03-24 | Genentech Inc. | Method for making humanized antibodies |
| US5637481A (en) | 1993-02-01 | 1997-06-10 | Bristol-Myers Squibb Company | Expression vectors encoding bispecific fusion proteins and methods of producing biologically active bispecific fusion proteins in a mammalian cell |
| IE922437A1 (en) | 1991-07-25 | 1993-01-27 | Idec Pharma Corp | Recombinant antibodies for human therapy |
| US5565332A (en) | 1991-09-23 | 1996-10-15 | Medical Research Council | Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach |
| ATE275198T1 (de) | 1991-12-02 | 2004-09-15 | Medical Res Council | Herstellung von antikörpern auf phagenoberflächen ausgehend von antikörpersegmentbibliotheken. |
| US5766886A (en) | 1991-12-13 | 1998-06-16 | Xoma Corporation | Modified antibody variable domains |
| GB9203459D0 (en) | 1992-02-19 | 1992-04-08 | Scotgen Ltd | Antibodies with germ-line variable regions |
| GB9206422D0 (en) | 1992-03-24 | 1992-05-06 | Bolt Sarah L | Antibody preparation |
| US5733743A (en) | 1992-03-24 | 1998-03-31 | Cambridge Antibody Technology Limited | Methods for producing members of specific binding pairs |
| US6174666B1 (en) | 1992-03-27 | 2001-01-16 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Method of eliminating inhibitory/instability regions from mRNA |
| US6010715A (en) | 1992-04-01 | 2000-01-04 | Bertek, Inc. | Transdermal patch incorporating a polymer film incorporated with an active agent |
| US6024975A (en) | 1992-04-08 | 2000-02-15 | Americare International Diagnostics, Inc. | Method of transdermally administering high molecular weight drugs with a polymer skin enhancer |
| AU4116793A (en) | 1992-04-24 | 1993-11-29 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells |
| US6005079A (en) | 1992-08-21 | 1999-12-21 | Vrije Universiteit Brussels | Immunoglobulins devoid of light chains |
| DK0656946T4 (da) | 1992-08-21 | 2010-07-26 | Univ Bruxelles | Immunoglobuliner uden lette kæder |
| US5639641A (en) | 1992-09-09 | 1997-06-17 | Immunogen Inc. | Resurfacing of rodent antibodies |
| US5837242A (en) | 1992-12-04 | 1998-11-17 | Medical Research Council | Multivalent and multispecific binding proteins, their manufacture and use |
| US6274552B1 (en) | 1993-03-18 | 2001-08-14 | Cytimmune Sciences, Inc. | Composition and method for delivery of biologically-active factors |
| US5985307A (en) | 1993-04-14 | 1999-11-16 | Emory University | Device and method for non-occlusive localized drug delivery |
| US5523092A (en) | 1993-04-14 | 1996-06-04 | Emory University | Device for local drug delivery and methods for using the same |
| AU6796094A (en) | 1993-04-29 | 1994-11-21 | Raymond Hamers | Production of antibodies or (functionalized) fragments thereof derived from heavy chain immunoglobulins of (camelidae) |
| JPH08511420A (ja) | 1993-06-16 | 1996-12-03 | セルテック・セラピューテイクス・リミテッド | 抗 体 |
| WO1995001997A1 (en) | 1993-07-09 | 1995-01-19 | Smithkline Beecham Corporation | RECOMBINANT AND HUMANIZED IL-1β ANTIBODIES FOR TREATMENT OF IL-1 MEDIATED INFLAMMATORY DISORDERS IN MAN |
| US6004534A (en) | 1993-07-23 | 1999-12-21 | Massachusetts Institute Of Technology | Targeted polymerized liposomes for improved drug delivery |
| WO1995015982A2 (en) | 1993-12-08 | 1995-06-15 | Genzyme Corporation | Process for generating specific antibodies |
| GB9326253D0 (en) | 1993-12-23 | 1994-02-23 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccines |
| US5997873A (en) | 1994-01-13 | 1999-12-07 | Mount Sinai School Of Medicine Of The City University Of New York | Method of preparation of heat shock protein 70-peptide complexes |
| WO1995020401A1 (en) | 1994-01-31 | 1995-08-03 | Trustees Of Boston University | Polyclonal antibody libraries |
| DK0758383T3 (da) | 1994-05-06 | 2007-05-29 | Roussy Inst Gustave | Oplöselige polypeptidfraktioner af LAG-3-proteinet; fremgangsmåde til fremstilling; terapeutisk sammensætning; antiidiotypisk antistof |
| US5516637A (en) | 1994-06-10 | 1996-05-14 | Dade International Inc. | Method involving display of protein binding pairs on the surface of bacterial pili and bacteriophage |
| US5759542A (en) | 1994-08-05 | 1998-06-02 | New England Deaconess Hospital Corporation | Compositions and methods for the delivery of drugs by platelets for the treatment of cardiovascular and other diseases |
| US5660854A (en) | 1994-11-28 | 1997-08-26 | Haynes; Duncan H | Drug releasing surgical implant or dressing material |
| US5869046A (en) | 1995-04-14 | 1999-02-09 | Genentech, Inc. | Altered polypeptides with increased half-life |
| US6121022A (en) | 1995-04-14 | 2000-09-19 | Genentech, Inc. | Altered polypeptides with increased half-life |
| US5983134A (en) | 1995-04-23 | 1999-11-09 | Electromagnetic Bracing Systems Inc. | Electrophoretic cuff apparatus drug delivery system |
| EP1978033A3 (en) | 1995-04-27 | 2008-12-24 | Amgen Fremont Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
| CA2219486A1 (en) | 1995-04-28 | 1996-10-31 | Abgenix, Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
| US6316652B1 (en) | 1995-06-06 | 2001-11-13 | Kosta Steliou | Drug mitochondrial targeting agents |
| ATE227586T1 (de) | 1995-07-21 | 2002-11-15 | Applied Research Systems | Verfahren zur erkennung, identifizierung, isolierung, selektiver markierung und zielgerichteter erkennung von th1 lymphozyten mit hilfe von lag-3 protein |
| US6167301A (en) | 1995-08-29 | 2000-12-26 | Flower; Ronald J. | Iontophoretic drug delivery device having high-efficiency DC-to-DC energy conversion circuit |
| US5935576A (en) | 1995-09-13 | 1999-08-10 | Fordham University | Compositions and methods for the treatment and prevention of neoplastic diseases using heat shock proteins complexed with exogenous antigens |
| GB9601081D0 (en) | 1995-10-06 | 1996-03-20 | Cambridge Antibody Tech | Specific binding members for human transforming growth factor beta;materials and methods |
| US5989830A (en) | 1995-10-16 | 1999-11-23 | Unilever Patent Holdings Bv | Bifunctional or bivalent antibody fragment analogue |
| US6039975A (en) | 1995-10-17 | 2000-03-21 | Hoffman-La Roche Inc. | Colon targeted delivery system |
| JP2978435B2 (ja) | 1996-01-24 | 1999-11-15 | チッソ株式会社 | アクリロキシプロピルシランの製造方法 |
| WO1997034631A1 (en) | 1996-03-18 | 1997-09-25 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Immunoglobin-like domains with increased half lives |
| TW345603B (en) | 1996-05-29 | 1998-11-21 | Gmundner Fertigteile Gmbh | A noise control device for tracks |
| US6111090A (en) | 1996-08-16 | 2000-08-29 | Schering Corporation | Mammalian cell surface antigens; related reagents |
| US6027947A (en) | 1996-08-20 | 2000-02-22 | Ramtron International Corporation | Partially or completely encapsulated top electrode of a ferroelectric capacitor |
| US5985317A (en) | 1996-09-06 | 1999-11-16 | Theratech, Inc. | Pressure sensitive adhesive matrix patches for transdermal delivery of salts of pharmaceutical agents |
| AU722289B2 (en) | 1996-10-01 | 2000-07-27 | Aptalis Pharmatech, Inc. | Taste-masked microcapsule compositions and methods of manufacture |
| US5916771A (en) | 1996-10-11 | 1999-06-29 | Abgenix, Inc. | Production of a multimeric protein by cell fusion method |
| US6131570A (en) | 1998-06-30 | 2000-10-17 | Aradigm Corporation | Temperature controlling device for aerosol drug delivery |
| WO1998023289A1 (en) | 1996-11-27 | 1998-06-04 | The General Hospital Corporation | MODULATION OF IgG BINDING TO FcRn |
| CA2616914C (en) | 1996-12-03 | 2012-05-29 | Abgenix, Inc. | Egfr-binding antibody |
| US5860957A (en) | 1997-02-07 | 1999-01-19 | Sarcos, Inc. | Multipathway electronically-controlled drug delivery system |
| US6017540A (en) | 1997-02-07 | 2000-01-25 | Fordham University | Prevention and treatment of primary and metastatic neoplastic diseases and infectious diseases with heat shock/stress protein-peptide complexes |
| US6277375B1 (en) | 1997-03-03 | 2001-08-21 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Immunoglobulin-like domains with increased half-lives |
| WO1998042752A1 (en) | 1997-03-21 | 1998-10-01 | Brigham And Women's Hospital Inc. | Immunotherapeutic ctla-4 binding peptides |
| US6120751A (en) | 1997-03-21 | 2000-09-19 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Charged lipids and uses for the same |
| CZ294425B6 (cs) | 1997-04-14 | 2005-01-12 | Micromet Ag | Způsob výroby anti-humánního antigenového receptoru, anti-humánní antigenový receptor, řetězec VH a VL, souprava pro selekci anti-humánních antigenových receptorů a farmaceutická kompozice, obsahující uvedený receptor |
| US6060082A (en) | 1997-04-18 | 2000-05-09 | Massachusetts Institute Of Technology | Polymerized liposomes targeted to M cells and useful for oral or mucosal drug delivery |
| US7951917B1 (en) | 1997-05-02 | 2011-05-31 | Genentech, Inc. | Method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components |
| US20020062010A1 (en) | 1997-05-02 | 2002-05-23 | Genentech, Inc. | Method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components |
| US6235883B1 (en) | 1997-05-05 | 2001-05-22 | Abgenix, Inc. | Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor |
| US5948433A (en) | 1997-08-21 | 1999-09-07 | Bertek, Inc. | Transdermal patch |
| US6645495B1 (en) | 1997-08-29 | 2003-11-11 | Antigenics, Inc. | Compositions of saponin adjuvants and excipients |
| US6503184B1 (en) | 1997-10-21 | 2003-01-07 | Human Genome Sciences, Inc. | Human tumor necrosis factor receptor-like proteins TR11, TR11SV1 and TR11SV2 |
| JP2001520039A (ja) | 1997-10-21 | 2001-10-30 | ヒューマン ジノーム サイエンシーズ， インコーポレイテッド | ヒト腫瘍壊死因子レセプター様タンパク質、ｔｒ１１，ｔｒ１１ｓｖ１およびｔｒ１１ｓｖ２ |
| DE69839179T2 (de) | 1997-10-28 | 2009-02-19 | Bando Chemical Industries, Ltd., Kobe | Dermatologisches pflaster und verfahren zur herstellung seiner basisschicht |
| US5948646A (en) | 1997-12-11 | 1999-09-07 | Fordham University | Methods for preparation of vaccines against cancer comprising heat shock protein-peptide complexes |
| JP2002502607A (ja) | 1998-02-09 | 2002-01-29 | ジェネンテク・インコーポレイテッド | 新規な腫瘍壊死因子レセプター相同体及びそれをコードする核酸 |
| US6194551B1 (en) | 1998-04-02 | 2001-02-27 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants |
| ES2230848T3 (es) | 1998-04-28 | 2005-05-01 | Smithkline Beecham Corporation | Anticuerpos monoclonales con inmunogenicidad reducida. |
| US6048736A (en) | 1998-04-29 | 2000-04-11 | Kosak; Kenneth M. | Cyclodextrin polymers for carrying and releasing drugs |
| DE69929444T2 (de) | 1998-08-10 | 2006-09-28 | Antigenics Inc., Woburn | Cpg-zusammensetzungen, saponin-adjuvantien und verfahren zu deren verwendung |
| CZ302706B6 (cs) | 1998-12-23 | 2011-09-14 | Pfizer Inc. | Lidská monoklonální protilátka, farmaceutická kompozice tuto protilátku obsahující, bunecná linie produkující tuto protilátku, izolovaná molekula kódující težký nebo lehký retezec uvedené protilátky, hostitelská bunka obsahující tuto izolovanou molek |
| US6737056B1 (en) | 1999-01-15 | 2004-05-18 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants with altered effector function |
| KR100940380B1 (ko) | 1999-01-15 | 2010-02-02 | 제넨테크, 인크. | 효과기 기능이 변화된 폴리펩티드 변이체 |
| US6271359B1 (en) | 1999-04-14 | 2001-08-07 | Musc Foundation For Research Development | Tissue-specific and pathogen-specific toxic agents and ribozymes |
| US6256533B1 (en) | 1999-06-09 | 2001-07-03 | The Procter & Gamble Company | Apparatus and method for using an intracutaneous microneedle array |
| MXPA02001877A (es) | 1999-08-23 | 2002-08-20 | Dana Farber Cancer Inst Inc | Pd-1, un receptor para b7-4, y usos del mismo. |
| MXPA02001911A (es) | 1999-08-24 | 2003-07-21 | Medarex Inc | Anticuerpos ctla-4 humanos y sus usos. |
| ATE440111T1 (de) | 1999-11-29 | 2009-09-15 | Bac Ip B V | Immobilisierte antigenbindende moleküle aus einer domäne |
| JP2003520828A (ja) | 2000-01-27 | 2003-07-08 | ジェネティクス インスティテュート，エルエルシー | Ｃｔｌａ４（ｃｄ１５２）に対する抗体、これを含む結合体、およびその使用 |
| US6261595B1 (en) | 2000-02-29 | 2001-07-17 | Zars, Inc. | Transdermal drug patch with attached pocket for controlled heating device |
| NZ521540A (en) | 2000-04-11 | 2004-09-24 | Genentech Inc | Multivalent antibodies and uses therefor |
| US7658921B2 (en) | 2000-12-12 | 2010-02-09 | Medimmune, Llc | Molecules with extended half-lives, compositions and uses thereof |
| ES2649037T3 (es) | 2000-12-12 | 2018-01-09 | Medimmune, Llc | Moléculas con semividas prolongadas, composiciones y usos de las mismas |
| IL149701A0 (en) | 2001-05-23 | 2002-11-10 | Pfizer Prod Inc | Use of anti-ctla-4 antibodies |
| US20030133936A1 (en) | 2001-07-12 | 2003-07-17 | Byrne Michael Chapman | CD25markers and uses thereof |
| EP1539233B1 (en) | 2001-07-12 | 2011-04-27 | FOOTE, Jefferson | Super humanized antibodies |
| WO2003042402A2 (en) | 2001-11-13 | 2003-05-22 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Agents that modulate immune cell activation and methods of use thereof |
| CA2474497C (en) | 2002-01-30 | 2013-12-03 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Compositions and methods related to tim-3, a th1-specific cell surface molecule |
| AUPS054702A0 (en) | 2002-02-14 | 2002-03-07 | Immunaid Pty Ltd | Cancer therapy |
| US20040014194A1 (en) | 2002-03-27 | 2004-01-22 | Schering Corporation | Beta-secretase crystals and methods for preparing and using the same |
| JP2005529873A (ja) | 2002-04-12 | 2005-10-06 | メダレックス インコーポレイテッド | Ｃｔｌａ−４抗体を使用した治療の方法 |
| DE60317677T2 (de) | 2002-06-13 | 2008-10-30 | Crucell Holland B.V. | Ox40 (=cd134) rezeptor agonisten und therapeutische verwendung |
| FI2206517T3 (fi) | 2002-07-03 | 2023-10-19 | Ono Pharmaceutical Co | Immuunopotentioivia koostumuksia käsittäen anti-PD-L1 -vasta-aineita |
| US7291331B1 (en) | 2002-09-11 | 2007-11-06 | La Jolla Institute For Allergy And Immunology | Methods of treating OX40 medicated recall immune responses |
| WO2004056875A1 (en) | 2002-12-23 | 2004-07-08 | Wyeth | Antibodies against pd-1 and uses therefor |
| US9068234B2 (en) | 2003-01-21 | 2015-06-30 | Ptc Therapeutics, Inc. | Methods and agents for screening for compounds capable of modulating gene expression |
| AU2004217526B2 (en) | 2003-02-28 | 2010-02-04 | St. Jude Children's Research Hospital Inc. | T cell regulation |
| EP1631588A2 (en) | 2003-05-23 | 2006-03-08 | Wyeth | Gitr ligand and gitr ligand-related molecules and antibodies and uses thereof |
| US7465446B2 (en) | 2003-05-30 | 2008-12-16 | Medarex, Inc. | Surrogate therapeutic endpoint for anti-CTLA4-based immunotherapy of disease |
| WO2005007190A1 (en) | 2003-07-11 | 2005-01-27 | Schering Corporation | Agonists or antagonists of the clucocorticoid-induced tumour necrosis factor receptor (gitr) or its ligand for the treatment of immune disorders, infections and cancer |
| EP1660534A2 (en) | 2003-08-22 | 2006-05-31 | MedImmune, Inc. | Humanization of antibodies |
| US8541002B2 (en) | 2003-09-12 | 2013-09-24 | Agenus Inc. | Vaccine for treatment and prevention of herpes simplex virus infection |
| PL1692516T3 (pl) | 2003-10-24 | 2011-05-31 | Immunaid Pty Ltd | Sposób terapii |
| EP1756162A1 (en) | 2004-03-23 | 2007-02-28 | Biogen Idec MA Inc. | Receptor coupling agents and therapeutic uses thereof |
| BRPI0509274A (pt) | 2004-03-26 | 2007-09-04 | Pfizer Prod Inc | usos de anticorpos anti-ctla-4 |
| DE102004063494A1 (de) | 2004-12-23 | 2006-07-13 | Tegenero Ag | Antikörper |
| EP3530736A3 (en) | 2005-05-09 | 2019-11-06 | ONO Pharmaceutical Co., Ltd. | Human monoclonal antibodies to programmed death 1 (pd-1) and methods for treating cancer using anti-pd-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics |
| US20110305713A1 (en) | 2005-10-21 | 2011-12-15 | Medical College Of Georgia Research Institute, Inc | Methods and compositions to enhance vaccine efficacy by reprogramming regulatory t cells |
| WO2007081878A2 (en) | 2006-01-07 | 2007-07-19 | Medical College Of Georgia Research Institute, Inc. | Indoleamine 2,3-dioxygenase pathways in the generation of regulatory t cells |
| AR056142A1 (es) | 2005-10-21 | 2007-09-19 | Amgen Inc | Metodos para generar el anticuerpo igg monovalente |
| US20070243184A1 (en) | 2005-11-08 | 2007-10-18 | Steven Fischkoff | Prophylaxis and treatment of enterocolitis associated with anti-ctla-4 antibody therapy |
| WO2007060918A1 (ja) | 2005-11-24 | 2007-05-31 | Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. | 新規なメモリーｃｔｌ誘導増強剤 |
| TWI461436B (zh) | 2005-11-25 | 2014-11-21 | Kyowa Hakko Kirin Co Ltd | 人類ｃｄ１３４（ｏｘ４０）之人類單株抗體及其製造及使用方法 |
| US20110212086A1 (en) | 2006-01-19 | 2011-09-01 | Genzyme Corporation | GITR Antibodies For The Treatment of Cancer |
| GB0603081D0 (en) | 2006-02-15 | 2006-03-29 | Dynal Biotech Asa Oslo | Method |
| US9868961B2 (en) | 2006-03-30 | 2018-01-16 | The Regents Of The University Of California | Methods and compositions for localized secretion of anti-CTLA-4 antibodies |
| NZ573646A (en) | 2006-06-12 | 2012-04-27 | Wyeth Llc | Single-chain multivalent binding proteins with effector function |
| WO2008073160A2 (en) | 2006-08-17 | 2008-06-19 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Methods for converting or inducing protective immunity |
| EP1894941A1 (en) | 2006-09-01 | 2008-03-05 | Institut Pasteur | Treatment of cervical carcinoma with a recombinant adenylate cyclase carrying HPV antigens |
| US20100061992A1 (en) | 2006-11-15 | 2010-03-11 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Therapeutic uses of tim-3 modulators |
| RU2009135824A (ru) | 2007-02-27 | 2011-04-10 | Дженентек, Инк. (Us) | Антитела-антагонисты против ох40 и их применение в лечении воспалительных и аутоиммунных заболеваний |
| US20090004213A1 (en) | 2007-03-26 | 2009-01-01 | Immatics Biotechnologies Gmbh | Combination therapy using active immunotherapy |
| EP1987839A1 (en) | 2007-04-30 | 2008-11-05 | I.N.S.E.R.M. Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale | Cytotoxic anti-LAG-3 monoclonal antibody and its use in the treatment or prevention of organ transplant rejection and autoimmune disease |
| JP2008278814A (ja) * | 2007-05-11 | 2008-11-20 | Igaku Seibutsugaku Kenkyusho:Kk | アゴニスティック抗ヒトｇｉｔｒ抗体による免疫制御の解除とその応用 |
| EP2175884B8 (en) | 2007-07-12 | 2017-02-22 | GITR, Inc. | Combination therapies employing gitr binding molecules |
| GB0718167D0 (en) | 2007-09-18 | 2007-10-31 | Cancer Rec Tech Ltd | Cancer marker and therapeutic target |
| WO2009045443A2 (en) | 2007-10-02 | 2009-04-09 | The University Of Rochester | Methods and compositions related to synergistic responses to oncogenic mutations |
| US8227577B2 (en) | 2007-12-21 | 2012-07-24 | Hoffman-La Roche Inc. | Bivalent, bispecific antibodies |
| WO2009100140A1 (en) | 2008-02-04 | 2009-08-13 | Medarex, Inc. | Anti-clta-4 antibodies with reduced blocking of binding of ctla-4 to b7 and uses thereof |
| US8168757B2 (en) | 2008-03-12 | 2012-05-01 | Merck Sharp & Dohme Corp. | PD-1 binding proteins |
| BRPI0915692B8 (pt) | 2008-07-08 | 2021-05-25 | Incyte Corp | compostos derivados de 1,2,5-oxadiazóis, sua forma sólida, sua composição, bem como seus usos |
| US7993640B2 (en) | 2008-08-06 | 2011-08-09 | Light Sciences Oncology, Inc. | Enhancement of light activated therapy by immune augmentation using anti-CTLA-4 antibody |
| AR072999A1 (es) | 2008-08-11 | 2010-10-06 | Medarex Inc | Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos |
| RS54233B1 (en) | 2008-08-25 | 2015-12-31 | Amplimmune Inc. | PD-1 ANTAGONIST COMPOSITIONS AND PROCEDURES FOR THEIR APPLICATION |
| US9301785B2 (en) | 2008-10-21 | 2016-04-05 | K2M, Inc. | Spinal buttress plate |
| CN108997498A (zh) | 2008-12-09 | 2018-12-14 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 抗-pd-l1抗体及它们用于增强t细胞功能的用途 |
| JP5782385B2 (ja) | 2009-02-17 | 2015-09-24 | ユーシービー ファーマ ソシエテ アノニム | ヒトｏｘ４０に対する特異性を有する抗体分子 |
| EP2949673A1 (en) | 2009-04-27 | 2015-12-02 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Anti-il-3ra antibody for use in treatment of blood tumor |
| WO2010137654A1 (ja) | 2009-05-29 | 2010-12-02 | 株式会社未来創薬研究所 | Egfファミリーリガンドのアンタゴニストを成分とする医薬組成物 |
| CN102471378B (zh) | 2009-06-26 | 2014-04-02 | 瑞泽恩制药公司 | 容易地分离的具有天然免疫球蛋白形式的双特异性抗体 |
| EP3381937A3 (en) | 2009-08-13 | 2018-10-31 | The Johns Hopkins University | Methods of modulating immune function |
| LT3023438T (lt) | 2009-09-03 | 2020-05-11 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Anti-gitr antikūnai |
| SG10201501784YA (en) | 2009-12-07 | 2015-05-28 | Univ Leland Stanford Junior | Methods for enhancing anti-tumor antibody therapy |
| US20130202623A1 (en) | 2010-02-16 | 2013-08-08 | Nicolas Chomont | Pd-1 modulation and uses thereof for modulating hiv replication |
| DK2542590T4 (da) | 2010-03-05 | 2020-07-13 | Univ Johns Hopkins | Sammensætninger og fremgangsmåde til målrettede immunomodulatoriske antistof-fer og fusionproteiner |
| US20120014947A1 (en) | 2010-07-16 | 2012-01-19 | The University Of Chicago | Methods and compositions to reduce liver damage associated with conditions or therapies that affect the immune system |
| US20140140986A1 (en) | 2010-11-08 | 2014-05-22 | Biovest International, Inc. | Materials and methods for directing an immune response to an epitope |
| US20130323283A1 (en) | 2010-12-01 | 2013-12-05 | The Children's Hospital Of Philadelphia | Compositions and methods for treating foxp3+ treg related diseases |
| CN107936121B (zh) | 2011-05-16 | 2022-01-14 | 埃泰美德(香港)有限公司 | 多特异性fab融合蛋白及其使用方法 |
| WO2012162561A2 (en) | 2011-05-24 | 2012-11-29 | Zyngenia, Inc. | Multivalent and monovalent multispecific complexes and their uses |
| US8841418B2 (en) | 2011-07-01 | 2014-09-23 | Cellerant Therapeutics, Inc. | Antibodies that specifically bind to TIM3 |
| AU2012282116B2 (en) | 2011-07-11 | 2016-07-07 | Ichnos Sciences SA | Antibodies that bind to OX40 and their uses |
| US8920075B2 (en) | 2011-09-01 | 2014-12-30 | Halo Maritime Defense Systems, Inc. | Marine barrier and gate |
| US9382319B2 (en) | 2011-09-26 | 2016-07-05 | Jn Biosciences Llc | Hybrid constant regions |
| WO2013049307A2 (en) | 2011-09-30 | 2013-04-04 | University Of Miami | Enhanced immune memory development by aptamer targeted mtor inhibition of t cells |
| AU2013203422A1 (en) | 2012-01-06 | 2013-07-18 | Bioalliance C.V. | Anti-transferrin receptor antibodies and methods using same |
| AU2013222185B2 (en) | 2012-02-23 | 2018-07-26 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Prediction of responsiveness to treatment with immunomodulatory therapeutics and method of monitoring abscopal effects during such treatment |
| US20150086584A1 (en) | 2012-03-22 | 2015-03-26 | University Of Miami | Multi-specific binding agents |
| KR101566539B1 (ko) | 2012-06-08 | 2015-11-05 | 국립암센터 | 신규한 Ｔｈ2 세포 전환용 에피토프 및 이의 용도 |
| CN112587671A (zh) | 2012-07-18 | 2021-04-02 | 博笛生物科技有限公司 | 癌症的靶向免疫治疗 |
| EP2880057A4 (en) | 2012-08-02 | 2016-03-23 | Jn Biosciences Llc | MULTIMERIZED FUSION ANTIBODIES OR PROTEINS THROUGH THE MUTATION OF A CYSTEINE AND A PIECE OF TAIL |
| RS58528B1 (sr) | 2012-12-03 | 2019-04-30 | Bristol Myers Squibb Co | Poboljšanje anti-kancerske aktivnosti imunomodulatornih fc fuzionih proteina |
| US9834610B2 (en) | 2013-01-31 | 2017-12-05 | Thomas Jefferson University | Fusion proteins for modulating regulatory and effector T cells |
| US10533054B2 (en) | 2013-01-31 | 2020-01-14 | Thomas Jefferson University | Agonist fusion protein for CD40 and OX40 and methods of stimulating the immune system |
| WO2014145907A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Xencor, Inc. | Targeting t cells with heterodimeric proteins |
| JP6449229B2 (ja) | 2013-03-15 | 2019-01-09 | アッヴィ・バイオセラピューティクス・インコーポレイテッド | Ｆｃ変異体 |
| FR3008408B1 (fr) | 2013-07-11 | 2018-03-09 | Mc Saf | Nouveaux conjugues anticorps-medicament et leur utilisation en therapie |
| MY183503A (en) | 2013-07-16 | 2021-02-23 | Genentech Inc | Method of treating cancer using pd-1 axis binding antagonists and tigit inhibitors |
| US20150038682A1 (en) | 2013-08-02 | 2015-02-05 | Jn Biosciences Llc | Antibodies or fusion proteins multimerized via homomultimerizing peptide |
| AR097306A1 (es) | 2013-08-20 | 2016-03-02 | Merck Sharp & Dohme | Modulación de la inmunidad tumoral |
| TW201605896A (zh) | 2013-08-30 | 2016-02-16 | 安美基股份有限公司 | Gitr抗原結合蛋白 |
| KR20230076867A (ko) | 2013-12-20 | 2023-05-31 | 더 브로드 인스티튜트, 인코퍼레이티드 | 신생항원 백신과의 병용 요법 |
| CA2943167A1 (en) | 2014-03-24 | 2015-10-01 | University Of Southampton | Modified antibodies containing modified igg2 domains which elicit agonist or antagonistic properties and use thereof |
| US20150307620A1 (en) | 2014-04-16 | 2015-10-29 | University Of Connecticut | Linked immunotherapeutic agonists that costimulate multiple pathways |
| KR102433464B1 (ko) | 2014-05-28 | 2022-08-17 | 아게누스 인코포레이티드 | 항-gitr 항체 및 이의 사용 방법 |
| SG10201810507WA (en) | 2014-06-06 | 2018-12-28 | Bristol Myers Squibb Co | Antibodies against glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor (gitr) and uses thereof |
| UA122395C2 (uk) | 2014-08-19 | 2020-11-10 | Мерк Шарп Енд Доум Корп. | Антитіло проти tigit |
| JO3663B1 (ar) | 2014-08-19 | 2020-08-27 | Merck Sharp & Dohme | الأجسام المضادة لمضاد lag3 وأجزاء ربط الأنتيجين |
| CN107250159A (zh) | 2014-10-03 | 2017-10-13 | 达纳－法伯癌症研究所公司 | 糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(gitr)抗体及其使用方法 |
| MA41044A (fr) | 2014-10-08 | 2017-08-15 | Novartis Ag | Compositions et procédés d'utilisation pour une réponse immunitaire accrue et traitement contre le cancer |
| PL3221346T3 (pl) | 2014-11-21 | 2021-03-08 | Bristol-Myers Squibb Company | Przeciwciała ze zmodyfikowanym regionem stałym łańcucha ciężkiego |
| WO2016090347A1 (en) | 2014-12-05 | 2016-06-09 | Immunext, Inc. | Identification of vsig8 as the putative vista receptor and its use thereof to produce vista/vsig8 modulators |
| TWI595006B (zh) | 2014-12-09 | 2017-08-11 | 禮納特神經系統科學公司 | 抗ｐｄ－１抗體類和使用彼等之方法 |
| RU2017125531A (ru) | 2014-12-19 | 2019-01-21 | Дана-Фарбер Кэнсер Инститьют, Инк. | Химерные антигенные рецепторы и способы их применения |
| GB201500319D0 (en) | 2015-01-09 | 2015-02-25 | Agency Science Tech & Res | Anti-PD-L1 antibodies |
| BR112017020491A2 (pt) | 2015-03-25 | 2018-07-17 | The Regents Of The University Of Michigan | composições e métodos para distribuição de agentes de biomacromolécula. |
| KR20170138477A (ko) | 2015-04-17 | 2017-12-15 | 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 | 항-pd-1 항체 및 또 다른 항체의 조합물을 포함하는 조성물 |
| WO2017096189A1 (en) | 2015-12-02 | 2017-06-08 | Agenus Inc. | Anti-gitr antibodies and methods of use thereof |
| CN116063542A (zh) | 2015-12-02 | 2023-05-05 | 阿吉纳斯公司 | 抗体和其使用方法 |
| WO2017096276A1 (en) | 2015-12-02 | 2017-06-08 | Agenus Inc. | Anti-gitr antibodies and methods of use thereof |
| CA3041340A1 (en) | 2016-11-09 | 2018-05-17 | Agenus Inc. | Anti-ox40 antibodies, anti-gitr antibodies, and methods of use thereof |
-
2015
- 2015-05-28 KR KR1020167036746A patent/KR102433464B1/ko active IP Right Grant
- 2015-05-28 EP EP15729987.6A patent/EP3148579B1/en active Active
- 2015-05-28 SI SI201531531T patent/SI3148579T1/sl unknown
- 2015-05-28 IL IL293212A patent/IL293212B2/en unknown
- 2015-05-28 CN CN202211180038.2A patent/CN115925946A/zh active Pending
- 2015-05-28 WO PCT/US2015/032895 patent/WO2015184099A1/en active Application Filing
- 2015-05-28 DK DK15729987.6T patent/DK3148579T3/da active
- 2015-05-28 CN CN201580041149.7A patent/CN108064242B/zh active Active
- 2015-05-28 RS RS20210303A patent/RS61678B1/sr unknown
- 2015-05-28 CA CA2949998A patent/CA2949998A1/en active Pending
- 2015-05-28 ES ES15729987T patent/ES2860751T3/es active Active
- 2015-05-28 MX MX2016015614A patent/MX2016015614A/es unknown
- 2015-05-28 MA MA40041A patent/MA40041B1/fr unknown
- 2015-05-28 US US14/724,452 patent/US10155818B2/en active Active
- 2015-05-28 AU AU2015266958A patent/AU2015266958A1/en not_active Abandoned
- 2015-05-28 LT LTEP15729987.6T patent/LT3148579T/lt unknown
- 2015-05-28 TW TW104117180A patent/TWI709573B/zh active
- 2015-05-28 TW TW109136463A patent/TW202132337A/zh unknown
- 2015-05-28 SG SG10201912986PA patent/SG10201912986PA/en unknown
- 2015-05-28 EP EP18204948.6A patent/EP3498295A1/en active Pending
- 2015-05-28 PT PT157299876T patent/PT3148579T/pt unknown
- 2015-05-28 IL IL249092A patent/IL249092B/en unknown
- 2015-05-28 MA MA047849A patent/MA47849A/fr unknown
- 2015-05-28 NZ NZ726513A patent/NZ726513A/en unknown
- 2015-05-28 PL PL15729987T patent/PL3148579T3/pl unknown
- 2015-05-28 HU HUE15729987A patent/HUE053857T2/hu unknown
- 2015-05-28 SG SG11201609721WA patent/SG11201609721WA/en unknown
- 2015-05-28 EA EA201692458A patent/EA201692458A1/ru unknown
- 2015-05-28 KR KR1020227027870A patent/KR20220116578A/ko not_active Application Discontinuation
- 2015-05-28 JP JP2016569715A patent/JP6847666B2/ja active Active
-
2016
- 2016-11-25 PH PH12016502345A patent/PH12016502345A1/en unknown
- 2016-11-28 MX MX2020013062A patent/MX2020013062A/es unknown
-
2018
- 2018-04-25 US US15/962,667 patent/US20180244793A1/en not_active Abandoned
- 2018-04-25 US US15/962,752 patent/US10800849B2/en active Active
- 2018-04-25 US US15/962,673 patent/US10577426B2/en active Active
- 2018-10-30 US US16/175,453 patent/US10280226B2/en active Active
-
2019
- 2019-03-15 US US16/355,268 patent/US10829559B2/en active Active
- 2019-12-27 JP JP2019238784A patent/JP2020048584A/ja active Pending
-
2020
- 2020-01-15 US US16/744,163 patent/US11401335B2/en active Active
- 2020-08-21 US US16/999,374 patent/US11897962B2/en active Active
-
2021
- 2021-01-29 AU AU2021200582A patent/AU2021200582B2/en active Active
- 2021-03-03 HR HRP20210364TT patent/HRP20210364T1/hr unknown
- 2021-03-12 CY CY20211100215T patent/CY1124787T1/el unknown
-
2022
- 2022-06-22 US US17/808,248 patent/US20230039577A1/en active Pending
- 2022-08-12 AU AU2022215304A patent/AU2022215304A1/en active Pending
- 2022-12-19 JP JP2022202168A patent/JP2023021446A/ja active Pending
-
2023
- 2023-07-02 IL IL304178A patent/IL304178A/en unknown
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006105021A2 (en) * | 2005-03-25 | 2006-10-05 | Tolerrx, Inc. | Gitr binding molecules and uses therefor |
| WO2013039954A1 (en) * | 2011-09-14 | 2013-03-21 | Sanofi | Anti-gitr antibodies |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 孙立山等: "测定GITR和GITRLELISA的建立及其临床初步应用 ", 《检验医学》 * |
| 杨晓鲲等: "GITR抗体介导增强NK细胞杀伤活性的实验研究 ", 《重庆医学》 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109561681A (zh) * | 2016-07-20 | 2019-04-02 | Igm生物科学股份有限公司 | 多聚gitr结合分子及其用途 |
| CN112739314A (zh) * | 2018-08-08 | 2021-04-30 | 雪松-西奈医学中心 | 用于治疗癌症和自体免疫疾病的组合物和方法 |
| CN113035298A (zh) * | 2021-04-02 | 2021-06-25 | 南京信息工程大学 | 递归生成大阶数行限制覆盖阵列的药物临床试验设计方法 |
| CN113035298B (zh) * | 2021-04-02 | 2023-06-20 | 南京信息工程大学 | 递归生成大阶数行限制覆盖阵列的药物临床试验设计方法 |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11897962B2 (en) | Anti-GITR antibodies and methods of use thereof | |
| CN107849144A (zh) | 抗‑ctla‑4抗体及其使用方法 | |
| CN111788225A (zh) | 抗cd38抗体及与抗cd3和抗cd28抗体的组合 | |
| CN108137686A (zh) | 抗ox40抗体及其使用方法 | |
| CN107001476A (zh) | 用于增强的免疫应答和癌症治疗的组合物和方法 | |
| CN110088134A (zh) | 针对人ctla-4的抗体 | |
| RU2812910C2 (ru) | Антитела к cd38 и комбинации с антителами к cd3 и cd28 | |
| EA040077B1 (ru) | Анти-gitr антитела и способы их применения |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |