JP2022513421A - 酸性ｐＨでＶＩＳＴＡと結合する抗体 - Google Patents

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Abstract

本出願は、酸性ｐＨでＴ細胞活性化のＶドメイン免疫グロブリン含有サプレッサー（ＶＩＳＴＡ）と特異的に結合する抗体およびがん処置におけるその使用に関する。一部の実施形態では、抗体は、酸性ｐＨでヒトＶＩＳＴＡと特異的に結合するが、中性または生理学的ｐＨではヒトＶＩＳＴＡと著しく結合しない。

Description

本出願は、酸性ｐＨでＴ細胞活性化のＶドメイン免疫グロブリン含有サプレッサー（ＶＩＳＴＡ）と特異的に結合する抗体およびがん処置におけるその使用に関する。
Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇ含有サプレッサー、またはＶＩＳＴＡは、骨髄単球性細胞および他の白血球によって発現された免疫受容体のＢ７ファミリーの共阻害メンバーである。しかし、ＶＩＳＴＡが免疫応答を抑制する機序は、十分に理解されていない。
本発明者らは、ＶＩＳＴＡは、他の既知免疫受容体とは異なり、その対抗受容体と結合し、酸性ｐＨで選択的に機能し、生理学的ｐＨ（例えば、７．３～７．４）ではわずかな活性しか有さないことを見出した。したがって、ＶＩＳＴＡは、血液における細胞循環を乱すことなく、または非炎症、非酸性組織中にありながら、腫瘍母地または炎症の部位などの酸性微小環境において免疫応答を抑制し得る。さらに、本発明者らは、抗ＶＩＳＴＡ抗体は、ＶＩＳＴＡ自身の酸性ｐＨ選択性と酷似して、酸性ｐＨでＶＩＳＴＡと選択的に結合し、生理学的ｐＨではほとんどまたは全く結合しないように操作され得ることを見出した。これらの酸性ｐＨ選択的抗体は、生理学的ｐＨでＶＩＳＴＡと結合する抗体と比較して、がんなどの疾患を処置するための望ましい特性を提供し得る。
本開示は、酸性ｐＨで（例えば、酸性条件で）ヒトＶＩＳＴＡ（「ｈＶＩＳＴＡ」または「ｈｕＶＩＳＴＡ」）などのＶＩＳＴＡの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）と特異的に結合する抗体に関する。本開示はまた、酸性ｐＨで、ｈＶＩＳＴＡなどのＶＩＳＴＡの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）と特異的に結合するが、中性または生理学的ｐＨではほとんどまたは全く結合しない抗体に関する。本発明者らは、ｈＶＩＳＴＡ－ＥＣＤアミノ酸配列は、いくつかの保存されたならびに保存されていないヒスチジン残基を含むことおよびＶＩＳＴＡのＥＣＤ中のヒスチジン残基の頻度は、他のＢ７ファミリーメンバーおよび他の免疫グロブリンスーパーファミリーメンバーと比較して例外的に高いこと（図１Ａおよび１Ｂを参照のこと）を本明細書において注記した。溶液中では、アミノ酸ヒスチジンは、約６．５のｐＫａを有し、これは、ｐＨ６．５以下では、タンパク質内のヒスチジン残基は、プロトン化され、したがって、正電荷を有することが多く、一方で、ｐＨ６．５よりも高いｐＨでは、それらは次第に非プロトン化され、電荷が中性であることを意味する。腫瘍微小環境および炎症組織は、酸性であることが多く、したがって、これらの微小環境において見出されたＶＩＳＴＡタンパク質は、少なくともそのヒスチジン残基で部分的にプロトン化され得る。本発明者らは、本明細書において論じられるように、ヒスチジンプロトン化は、ＶＩＳＴＡのコンホメーション、表面構造および／または電荷密度に影響を及ぼし得、次いで、受容体－リガンド相互作用および抗体結合両方のためのｐＨ特異的またはｐＨ選択的エピトープを作出し得ると仮定した。酸性ｐＨで結合するが、中性または生理学的ｐＨでは結合しない抗体を用いてＶＩＳＴＡを標的化することは、循環系およびリンパ系臓器に常駐する骨髄単球性細胞を介する標的媒介性薬物動態を妨げることができ、腫瘍微小環境における抗体ＰＫ、受容体占有率および活性を改善する。酸性ｐＨ選択的抗体はまた、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）およびペイロード（抗体－薬物コンジュゲート）のデリバリーなどの治療様式の場合に、循環標的細胞よりも、腫瘍内標的細胞に対するＶＩＳＴＡ抗体の特異性を改善し得る。
本明細書における図のうちいくつかのカラー版を、優先権米国仮出願の提出に伴い米国特許商標庁に提供した。ひとたび本出願が公開されると、仮出願は公的に入手可能となり、米国特許商標庁は、請求および必要な手数料の支払い時にカラー図面を提供すると推定される。
図１Ａ～Ｃは、ＶＩＳＴＡの細胞外ドメインが、例外的に高い頻度のヒスチジン残基を含有すること、これらのヒスチジン残基のうち多数が保存されていることおよびこれらのヒスチジン残基のうち少なくとも一部は、受容体－リガンド結合に関与し得ることを示す。図１Ａは、免疫グロブリンドメイン含有タンパク質のグラフを示し、各タンパク質の細胞外ドメインアミノ酸残基の数がｘ軸にプロットされ、各タンパク質の細胞外ドメイン内のヒスチジン残基の頻度がｙ軸にプロットされている。各データ点の大きさは、各タンパク質の細胞外ドメイン中のヒスチジン残基の総数に対応する。図１Ｂは、ヒト、カニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｑｕｅ）およびマウスＶＩＳＴＡの細胞外ドメインのアラインされたアミノ酸配列を示す。シグナルペプチド（Ｓｉｇ）および膜貫通ドメイン（ＴＭＤ）配列位置が示されている。３種すべてにわたって保存されたヒスチジン残基は、太字で示され、下線が引かれており、ヒトおよびカニクイザルにわたって保存されたヒスチジン残基は、太字で示されているだけである。図１Ｃは、ヒトＶＩＳＴＡ免疫グロブリンドメインの三次元構造のモデルを示す。ヒスチジン残基は、ボールおよびスティックトレースとして表されている。 図２Ａ～Ｂは、ＶＩＳＴＡの細胞外ドメイン中のヒスチジン残基が、生理学的ｐＨよりも酸性ｐＨに対して対抗受容体選択性を付与するモデルを示す。図２Ａは、ヒスチジン残基におけるピロールアンモニウム基（ＮＨ）のプロトン化の欠如と存在の間の平衡を示す。溶液中のヒスチジンのｐＫａは、６．５であり、ヒスチジン残基は、より高いｐＨよりも、ｐＨ６．５以下でプロトン化され、したがって、正電荷を有する可能性がより高いことを示す。図２Ｂは、ＶＩＳＴＡが、Ｐ－セレクチン糖タンパク質リガンド１（ＰＳＧＬ－１）または他の対抗受容体およびリガンド（「ＶＩＳＴＡ－Ｒ」）と酸性ｐＨで選択的に会合するモデルを示す。したがって、生理学的ｐＨではなく酸性ｐＨでＶＩＳＴＡの細胞外ドメインと結合する抗体は、ＶＩＳＴＡ活性を阻害またはモジュレートするのに重大であり得る。 図３は、腫瘍浸潤マクロファージ、樹状細胞、好中球、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞、ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞およびＢ細胞上のＶＩＳＴＡ表面発現（抗ＶＩＳＴＡ抗体染色の平均蛍光強度（ＭＦＩ））のレベルを示す。ＶＩＳＴＡは、多数の腫瘍浸潤白血球、特に、骨髄系細胞で発現される。腫瘍微小環境は、酸性であることが多く、ＶＩＳＴＡが、対抗受容体およびリガンドと会合することを可能にする。 図４Ａ～Ｇは、ＶＩＳＴＡが、酸性ｐＨで白血球と、およびＰＳＧＬ－１と選択的に結合し、中性ｐＨではほとんどまたは全く結合しないことならびにこの結合は、抗ＶＩＳＴＡ抗体によって遮断され得ることを示す。左側の図４Ａは、活性化ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞と結合する蛍光的にコンジュゲートされた組換えＶＩＳＴＡ多量体の代表的なヒストグラムを示す。暗灰色から淡灰色へ、塗りつぶされたヒストグラムは、ｐＨ７．０、６．５、６．４、６．３、６．１および６．０での結合を表す。一部のヒストグラムには、その対応するｐＨが表示されている。ｐＨ６．０での非ＶＩＳＴＡ対照多量体結合が、塗りつぶされていないヒストグラムとして示されている。右側には、異なるｐＨでの２人のドナーから得た活性化ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞と結合するＶＩＳＴＡ（丸）および対照（三角）多量体の平均ＭＦＩがグラフ化されている。図４Ｂは、ｐＨ６．０およびｐＨ７．４で末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）と結合する組換えＶＩＳＴＡ多量体の代表的なヒストグラムを示す。暗灰色から淡灰色へ、塗りつぶされたヒストグラムは、ＣＤ１９＋Ｂ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ５６＋ＮＫ細胞およびＣＤ１４＋単球とのｐＨ６．０での結合を表す。塗りつぶされていない、実線境界および点線境界ヒストグラムは、それぞれ、総ＰＢＭＣリンパ球および単球とのｐＨ７．４での結合を表す。図４Ｃは、抗ＶＩＳＴＡ遮断抗体（四角）または非ＶＩＳＴＡ特異的アイソタイプ対応対照抗体（丸）の存在下での、活性化ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞と結合する代表的な組換えＶＩＳＴＡ多量体を示す。抗体濃度が、対数スケールでプロットされている。非線形回帰も示されている。三角は、組換えＶＩＳＴＡ多量体で染色されなかった活性化ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞からのバックグラウンドシグナルを表す。図４Ｄは、ヒトＰＳＧＬ－１を発現するようにトランスフェクトされたヘパラン硫酸欠損チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（ｐＧＳＤ－６７７株、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）とｐＨ６．０で結合する組換えＶＩＳＴＡ多量体の代表的な二次元フローサイトメトリープロットを示す。多量体結合は、図４Ｃにおいて示された抗ＶＩＳＴＡ遮断抗体の存在下および不在下で実施した。組換えＶＩＳＴＡ多量体によって染色されていないままの細胞が、対照として示されている。ＰＳＧＬ－１抗体染色が、ｙ軸にプロットされ、ＶＩＳＴＡ多量体染色が、ｘ軸にプロットされている。図４Ｅは、ｐＨ６．０およびｐＨ７．４でマウス脾細胞と結合する組換えマウスＶＩＳＴＡ－Ｆｃ融合タンパク質の代表的なヒストグラムを示す。暗灰色から淡灰色へ、塗りつぶされたヒストグラムは、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ１１ｂ＋骨髄系細胞およびＣＤ４＋Ｔ細胞とのｐＨ６．０での結合を表す。塗りつぶされていないヒストグラムは、総脾細胞とのｐＨ７．４での結合を表す。図４ＦおよびＧは、ヒト末梢血単球との（図４Ｆ）および好中球（図４Ｇ）とのｐＨ６．０でのＶＩＳＴＡ多量体染色の代表的なヒストグラムを示す。ＶＩＳＴＡを含有しない多量体を用いてｐＨ７．４で染色された細胞または染色されないままのものが対照として含まれる。 図５Ａ～Ｄは、ＶＩＳＴＡが、Ｔ細胞抑制および細胞：細胞接着を酸性ｐＨで優先的に媒介すること、ならびに両効果は抗ＶＩＳＴＡ遮断抗体を用いて逆転され得ることを示す。図５Ａは、ｈＶＩＳＴＡまたはベクター対照を発現する２９３Ｔ細胞（ｙ軸にプロットされた）と、ｘ軸の細胞表面ヘパラン硫酸を内因性に発現するＣＨＯ細胞の間の、ｐＨ６．０および７．０での代表的な細胞：細胞コンジュゲート形成を示す。図５Ｂは、抗ＶＩＳＴＡ遮断抗体、抗ＶＩＳＴＡ非遮断抗体またはアイソタイプ対応非ＶＩＳＴＡ特異的対照抗体の存在下での同一細胞の間のｐＨ６．０で形成された細胞コンジュゲートの頻度のグラフである。図５Ｃは、ｈＶＩＳＴＡおよび抗ヒトＴ細胞受容体アゴニスト抗体ＯＫＴ３（「人工抗原提示細胞」）の単鎖可変断片を発現する２９３Ｔ細胞と種々のｐＨで同時培養した後にＮＦｋＢルシフェラーゼレポーターを発現するＪｕｒｋａｔ（ヒトＴ細胞株）細胞によって生じたルシフェラーゼ活性の代表的なプロットを示す。同時培養された細胞に、抗ＶＩＳＴＡ遮断抗体（四角）またはアイソタイプ対応非ＶＩＳＴＡ特異的対照抗体（丸）を添加した。図５Ｄでは、図５Ａに示されたデータが、対照と比較した抗ＶＩＳＴＡ抗体処置を用いた場合のルシフェラーゼシグナルの増大倍数（「効果サイズ」）としてプロットされている。 図６Ａ～Ｇは、ＶＩＳＴＡを細胞内エンドソーム、特に、Ｒａｂ１１＋リサイクリングエンドソームにおいて見出すことができ、エンドソーム輸送によって細胞表面に、および細胞表面からリサイクルできることを示す。図６Ａは、ヒトＶＩＳＴＡを発現する２９３Ｔ細胞内でのＶＩＳＴＡ、Ｒａｂ５（早期エンドソームマーカー）、Ｒａｂ７（後期エンドソームマーカー）およびＲａｂ１１（リサイクリングエンドソームマーカー）の共存を示す。図６Ｂは、ヒト単球内のＶＩＳＴＡおよびＲａｂ１１の共存を示す。細胞内ＶＩＳＴＡは、Ｒａｂ１１＋リサイクリングエンドソームと共存する。ＶＩＳＴＡ抗体（「ｃＡｂ」）と同一のアイソタイプの非ＶＩＳＴＡ結合対照抗体は、単球と検出可能に結合しない。図６Ｃは、ｐＨ７．４（黒色）、６．７（暗灰色）および６．（淡灰色）での３つの抗ＶＩＳＴＡ抗体の組換えＶＩＳＴＡとの結合を示す。図６Ｄは、カテプシンＢ感受性リンカーおよび細胞傷害性ペイロードを有する同一抗ＶＩＳＴＡ抗体１（逆三角）、２（丸）、３（四角）または非ＶＩＳＴＡ特異的対照抗体（三角）による死滅に対する、ＶＩＳＴＡ発現急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞株の感受性を示す。細胞生存力（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ ＬＵ）がｙ軸にプロットされ、抗体濃度がｘ軸にプロットされている。図６Ｅは、抗ＶＩＳＴＡ抗体３のｈＶＩＳＴＡ結合を、酸性ｐＨで結合の改善を示さない操作された変異体（「ＶＩＳＴＡ ｍＡｂ ３ｃ」）のものと比較する。図６Ｆは、抗ＶＩＳＴＡ抗体３（四角）および３ｃ（菱形）の効力を比較する抗体薬物コンジュゲートアッセイを示す。図６Ｇは、エンドソーム輸送の概略図を示し、ＶＩＳＴＡは、早期エンドソームおよびリサイクリングエンドソームを介して、細胞表面へ、および細胞表面からリサイクルする。 図７Ａ～Ｆは、酸性ｐＨ選択的抗体を得るために、抗ＶＩＳＴＡ抗体変異体ライブラリーが設計およびスクリーニングされる方法を示す。図７Ａは、スクリーニングのための‘０２９ライブラリーを作出するために、抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体クローンＰ１－０６１０２９（略して‘０２９）のＶＨ ＣＤＲ３において行われたアミノ酸置換を示す。酸性ｐＨでＶＩＳＴＡのヒスチジンが豊富な領域との結合を潜在的に改善するために、ライブラリーは、負電荷を有するアミノ酸アスパラギン酸およびグルタミン酸ならびにｐＨ応答性ヒスチジンの置換を許容した。Ｘ＝Ｈ、ＤまたはＥ。括弧内の配列は、不利益を導入することを避けるために合成から除去された。１～２の突然変異を有するＰ１－０６１０２９ ＨＣＤＲ３の合計６４７の特有の配列が合成された。図７Ｂは、‘０２９ライブラリーが、酸性ｐＨ選択的抗体変異体について反復してスクリーニングされ、選択される手順を示す。Ｒは、選択ラウンドを表す。図７Ｃは、９ラウンドの選択後の変異体プールを示す代表的な二次元フローサイトメトリープロットデータを示す。ＶＩＳＴＡ結合が、ｙ軸にプロットされ、変異体抗体発現が、ｘ軸にプロットされている。種々の抗体濃度およびｐＨでの結合データが示されている。図７Ｄは、ｐＨ６．０および７．４でヒトＶＩＳＴＡと結合するＰ１－０６１０２９およびその後代クローンのダイアグラムを示す。図７Ｅは、ｐＨ６．０でヒトＶＩＳＴＡに対するＰ１－０６１０２９およびその後代クローンの解離速度（ｏｆｆ－ｒａｔｅ）のダイアグラムを示す。図７Ｆは、ｐＨ６．０およびｐＨ７．４での抗体Ｐ１－０６８７６１、Ｐ１－０６８７６７およびＰ１－０６１０２９の、ヒトＶＩＳＴＡとのＳＰＲ結合データを示す。 図８Ａ～Ｆは、ＶＩＳＴＡ抗体Ｐ１－０６８７６１およびＰ１－０６８７６７の酸性ｐＨ選択的細胞結合、遮断およびエフェクター活性を示す。図８Ａおよび図８Ｂは、ヒトＶＩＳＴＡを異所性に発現するＲａｊｉ細胞との、酸性ｐＨ選択的抗体Ｐ１－０６８７６１（図８Ａ）およびＰ１－０６８７６７（図８Ｂ）結合の平均蛍光強度を示す。細胞は、およそｐＨ６．０（丸；図８Ａにおける最高曲線）、６．１（四角；３番目に高い曲線）、６．２（三角；２番目に高い曲線）、６．４（逆三角；ｐＨ６．１曲線に近い４番目に高い曲線）、６．６（菱形；下から４番目の曲線）、７．０（丸；下から３番目の曲線）、７．２（四角；下から２番目の曲線）および８．１（塗りつぶされていない三角；図８Ａ中の一番下の曲線）で染色した。結合は、蛍光的にコンジュゲートされた抗ヒトＩｇＧ二次抗体を用いて検出された。図８Ｃは、種々のｐＨで３１２５ｎｇ／ｍＬでヒトＶＩＳＴＡを異所性に発現するＲａｊｉ細胞と結合する、Ｐ１－０６８７６７（丸）およびアイソタイプ対応非特異的対照抗体（三角）を示す。「ｐＨ５０」、Ｐ１－０６８７６７結合の５０％が失われるｐＨは、およそ６．６である。図８Ｄは、ヒト単球と結合する、アイソタイプ対応非特異的対照抗体（それぞれ、ｐＨ７．０および６．０の塗りつぶされた、および塗りつぶされていない丸）、抗ＶＩＳＴＡ ｍＡｂ ２（「対照」、図６Ｃを参照のこと、それぞれ、ｐＨ７．０および６．０の塗りつぶされた、および塗りつぶされていない四角）、Ｐ１－０６８７６１（それぞれ、ｐＨ７．０および６．０の塗りつぶされた、および塗りつぶされていない三角）およびＰ１－０６８７６７（それぞれ、ｐＨ７．０および６．０の塗りつぶされた、および塗りつぶされていない逆三角）の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示す。結合は、蛍光的にコンジュゲートされた抗ヒトＩｇＧ二次抗体によって検出された。図８Ｅは、Ｐ１－０６１０２９（四角）、Ｐ１－０６８７６１（三角）およびＰ１－０６８７６７（逆三角）によるｐＨ６．０で活性化ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞と結合する組換えＶＩＳＴＡ多量体の匹敵する遮断を示し、一方で、非ＶＩＳＴＡ特異的対照抗体（丸）は、ＶＩＳＴＡ結合を遮断しなかった。図８Ｆは、生理学的ｐＨでの抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の媒介におけるＰ１－０６８７６１（三角）およびＰ１－０６８７６７（逆三角）の効力の低減を示す。Ｐ１－０６１０２９（四角）、非ＶＩＳＴＡ特異的陽性対照抗体（丸）および非ＶＩＳＴＡ特異的陰性対照抗体（菱形）も示されている。総標的細胞のパーセンテージとしての標的細胞のＮＫ細胞特異的溶解がｙ軸にプロットされ、抗体濃度がｘ軸にプロットされている。非線形回帰も示されている。 図９は、カニクイザルにおける酸性ｐＨ選択的抗ＶＩＳＴＡ抗体の薬物動態（ＰＫ）の増強を示す。図は、ＶＩＳＴＡ抗体２（「対照」、丸、図６Ｃを参照のこと）、ＶＩＳＴＡ抗体３（「酸性ｐＨ感受性」、四角、図６Ｃを参照のこと）またはＰ１－０６８７６７（三角）処置されたカニクイザルにおける経時的な血清抗体濃度を示す。 図１０Ａおよび１０Ｂは、酸性ｐＨ選択的抗ＶＩＳＴＡ抗体‘７６１および‘７６７における突然変異の結合効果を示す。図１０Ａは、ｐＨ７．４、ｐＨ６．７およびｐＨ６．０でのＰ１－０６８７６１復帰突然変異体の動態結合データならびにＰ１－０６８７６１と比較したその復帰突然変異の位置を示す。図１０Ｂは、ｐＨ７．４、ｐＨ６．７およびｐＨ６．０でのＰ１－０６８７６７復帰突然変異体の動態結合データならびにＰ１－０６８７６７と比較したその復帰突然変異の位置を示す。 図１１Ａ～Ｃは、種々の抗ＶＩＳＴＡ抗体のエピトープビニングおよびマッピングを示す。図１１Ａは、Ｐ１－０６１０２９およびＶＩＳＴＡ抗体対照と比較した、Ｐ１－０６８７６１およびＰ１－０６８７６７に対するＶＩＳＴＡエピトープ競合を示す。図１１Ｂおよび図１１Ｃは、非遮断ｈＶＩＳＴＡ抗体（ｍＡｂ１；図１１Ｃ）と比較した、表１４に列挙されるような遮断ｈＶＩＳＴＡ抗体（図１１Ｂ）のすべての残基のうちエピトープの表現を示す。分子の配向を表すためにアミノ酸残基６６（Ｈ）および１６２（Ａ）が示されている。ヒスチジン残基は灰色であり、エピトープ残基は黒色である。 図１２Ａ～Ｃは、以下：図１２Ａ：Ｐ１－０６１０２９、図１２Ｂ：Ｐ１－０６８７６１および図１２Ｃ：Ｐ１－０６８７６７の画像化されたキャピラリー等電点電気泳動（ｉｃＩＥＦ）データを示す。主要な種の等電点（ｐＩ主要）ならびにｐＩマーカーが示されている。 図１３ＡおよびＢは、‘０２９および‘０１５後代クローンの可変領域のアラインメントを示す。図１３Ａは、‘０２９およびその後代クローンの可変領域のアミノ酸配列のアラインメントを示す。図１３Ｂは、‘０１５およびその後代クローンの可変領域のアミノ酸配列のアラインメントを示す。 図１４ＡおよびＢは、ＣＤＲの位置を示す、４１Ｆ１１またはＶＩＳＴＡ．４ ＶＨのヌクレオチドおよびアミノ酸配列を示す。 図１５ＡおよびＢは、ＣＤＲの位置を示す、４１Ｆ１１またはＶＩＳＴＡ．４ ＶＫ１のヌクレオチドおよびアミノ酸配列を示す。 図１６ＡおよびＢは、ＣＤＲの位置を示す、４１Ｆ１１またはＶＩＳＴＡ．４ ＶＫ２のヌクレオチドおよびアミノ酸配列を示す。 図１７ＡおよびＢは、ＣＤＲの位置を示す、４１Ｆ１１またはＶＩＳＴＡ．４ ＶＫ３のヌクレオチドおよびアミノ酸配列を示す。 図１８Ａは、遮断抗体ＶＩＳＴＡ．４（ｐＨ６．０、橙色下向き三角；ｐＨ７．０、赤色四角）、非遮断抗体ＶＩＳＴＡ．５（ｐＨ６．０、緑色菱形；ｐＨ７．０、青色丸）および非ＶＩＳＴＡ結合抗体（ｐＨ６．０、塗りつぶされていない丸；ｐＨ７．０、塗りつぶされていない上向き三角）の、ＶＩＳＴＡを異所性に発現するＲａｊｉ細胞との細胞結合を示す。データは、４つより多い独立した実験を代表するものである。図１８Ｂおよび１８Ｃは、遮断抗体ＶＩＳＴＡ．４（図１８Ｂ；ｐＨ６．０、淡赤色；ｐＨ６．７、赤色；ｐＨ７．４、暗赤色）および非遮断抗体ＶＩＳＴＡ．５（図１８Ｃ；ｐＨ６．０、淡青色；ｐＨ６．７、青色；ｐＨ７．４、暗青色）のヒトＶＩＳＴＡ ＳＰＲ結合センサーグラムを示す。重ね合わされたセンサーグラムは、「結合」レポート点に対して正規化された１００ｎＭ ＶＩＳＴＡ結合反応である。これらのデータは、４つより多い独立した実験を代表するものである。図１８Ｄは、ＶＩＳＴＡ．４およびＶＩＳＴＡ．５交差遮断によるＶＩＳＴＡ抗体エピトープビニングを示す。各列は、特有のクローンを表し、各クローンについて、淡灰色の影つけは、交差遮断がないことを示し、暗灰色の影つけは、交差遮断を示す。ｐＨ７．４での結合能と比較したｐＨ６．０での結合能も表されており、暗灰色の影つけは、ｐＨ６．０でのＫｄにおいて３倍よりも大きい障害を示す。これらのデータは、１つの実験を代表するものである。 図１９Ａ～Ｃは、ＶＩＳＴＡ．４のヒトＶＩＳＴＡ ＳＰＲ結合センサーグラム（１００～０．２ｎＭシリーズ）（ｐＨ６．０、点線；ｐＨ７．４、実線）（図１９Ａ）、ＶＩＳＴＡ．４のｐＨ独立変異体（ｐＨ６．０、点線；ｐＨ７．４、実線）（図１９Ｂ）およびＶＩＳＴＡ．４の酸性ｐＨ選択的変異体（ｐＨ６．０、点線；ｐＨ７．４、実線）（図１９Ｃ）を示す。これらのデータは、２つの独立した実験を代表するものである。 図２０Ａおよび２０Ｂは、ＭＳ－ＨＤＸによって（ＭＳトレース図２０Ａおよび配列図２０Ｂによって）決定されるようなＶＩＳＴＡ．４のエピトープを示す。 図２１Ａおよび２１Ｂは、抗体ＶＩＳＴＡ．４（三角）、ＶＩＳＴＡ．５（四角）および非ＶＩＳＴＡ結合（対照、丸）の存在下、ｐＨ６．０で活性化ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞と結合するＶＩＳＴＡ多量体を示す。図２１Ｂは、非遮断Ｔ細胞と比較した、各抗体の遮断効率を示す。ダネットの多重比較を用いる一元配置ＡＮＯＶＡ、＊＊＊、Ｐ＜０．００１。これらのデータは、４つより多い独立した実験を代表するものである。エラーバーは、平均の標準誤差を表す。 図２２Ａ～Ｄは、酸性ｐＨでＶＩＳＴＡ結合を遮断する抗体が機能的であることを示す。ＶＩＳＴＡおよびＴＣＲアゴニストを発現するように操作された２９３Ｔ細胞（２９３Ｔ－ＯＫＴ３－ＶＩＳＴＡ）と同時培養されたヒトＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖（図２２Ａ）およびインターフェロンガンマ産生（図２２Ｂ）に対する、遮断抗体ＶＩＳＴＡ．４（四角）、非遮断抗体ＶＩＳＴＡ．５（三角）および非ＶＩＳＴＡ結合（対照、丸）抗体の効果は、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）Ｖｉｏｌｅｔの希釈を示す細胞のパーセンテージとして測定した。ダネットの多重比較を用いる一元配置ＡＮＯＶＡ、＊、Ｐ＜０．０５。これらのデータは、３つの独立した実験を代表するものである。図２２Ｃは、図２２Ａに記載されたような２９３Ｔ－ＯＫＴ３－ＶＩＳＴＡ細胞と同時培養されたＰＢＭＣ ＣＤ４＋Ｔ細胞でのＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ希釈の代表的なヒストグラムを示す。細胞は、ＶＩＳＴＡ．４、ＶＩＳＴＡ．５、非ＶＩＳＴＡ結合アイソタイプ対応抗体の存在下で、または２９３Ｔ－ＯＫＴ３－ＶＩＳＴＡ細胞を伴わずに（塗りつぶされた灰色）同時培養した。図に示されるように、ＶＩＳＴＡ．５および対照トレースは、密接に重なるが、一方で、ＶＩＳＴＡ．４トレースは、比較して、上および左へ変化している。これらのデータは、２つの独立した実験を代表するものである。図２２Ｄは、ＶＩＳＴＡ．４またはアイソタイプ対応非ＶＩＳＴＡ結合対照抗体のいずれかが、図２２Ａに記載されたように２９３Ｔ－ＯＫＴ３もしくは２９３Ｔ－ＯＫＴ３－ＶＩＳＴＡ細胞と同時培養されたヒトＰＢＭＣ ＣＤ４＋Ｔ細胞に添加された２つの独立した実験の結果を示す。同時培養後の増殖Ｔ細胞の頻度が図にプロットされている。対になるｔ検定、＊＊＊、Ｐ＜０．０００１。 図２３Ａ～Ｄは、ＪｕｒｋａｔＴ細胞活性化に対するＶＩＳＴＡおよびＶＩＳＴＡ．４遮断の効果を示す（ＮＦ－ｋＢ阻害の測定による）。図２３Ａは、２９３Ｔ－ｓｃＯＫＴ３－ＶＩＳＴＡ細胞と同時培養されたＮＦｋＢルシフェラーゼレポーターＪｕｒｋａｔＴ細胞に対するｐＨの効果を示す。エラーバーは、平均の標準誤差を表す。これらのデータは、３つの独立した実験の複合物である。図２３Ｂは、図２３に記載されたような２９３Ｔ－ＯＫＴ３－ＶＩＳＴＡ細胞と同時培養されたＪｕｒｋａｔ ＮＦｋＢ－ルシフェラーゼ細胞におけるＮＦ－ｋＢルシフェラーゼシグナルを示す（丸）。同時培養されていないＪｕｒｋａｔ（上向き三角）は、対照として含めた。データは、２つの独立した実験を代表するものである。エラーバーは、平均の標準誤差を表す。図２３Ｃは、ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞のＶＩＳＴＡ抑制に対するｐＨの効果を示す。細胞を、ＶＩＳＴＡ．４（上向き三角）、ＶＩＳＴＡ．５（下向き三角）または非ＶＩＳＴＡ結合抗体（抗体対照、四角）の存在下、示されたｐＨで、プレートコーティングされたＯＫＴ３およびＶＩＳＴＡ－Ｆｃを用いて刺激した。プレートコーティングされたＯＫＴ３および対照ＩｇＧ（ＶＩＳＴＡ対照、黒丸）を用いて刺激された、またはＯＫＴ３を用いない（ＯＫＴ３なし、灰色菱形）細胞も示されている。これらのデータは、２つの独立した実験を代表するものである。図２３Ｄは、ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞のＶＩＳＴＡ抑制に対するｐＨの効果を示す。細胞は、ＶＩＳＴＡ．４（上向き三角）、ＶＩＳＴＡ．５（下向き三角）または非ＶＩＳＴＡ結合抗体（抗体対照、四角）の存在下、示されたｐＨで、プレートコーティングされたＯＫＴ３およびＶＩＳＴＡ－Ｆｃを用いて刺激した。プレートコーティングされたＯＫＴ３および対照ＩｇＧ（ＶＩＳＴＡ対照、丸）を用いて刺激された、またはＯＫＴ３を用いない（ＯＫＴ３なし、灰色菱形）細胞も示されている。これらのデータは、２つの独立した実験を代表するものである。 野生型Ｃ５７ＢＬ６マウスにＭＣ３８腫瘍を移植し、非結合アイソタイプ対応対照抗体（四角）、マウスＶＩＳＴＡ遮断抗体ＶＩＳＴＡ．１０（上向き三角）、マウスＰＤ－１遮断抗体（四角）またはＶＩＳＴＡおよびＰＤ－１遮断抗体の組合せ（紫色下向き三角）を用いて処置した（図２４Ａ～Ｄを参照のこと）。すべての抗体は、マウスＩｇＧ１－Ｄ２６５Ａ（Ｆｃ－不活性）アイソタイプであった。これらのデータは、３つの独立した実験を代表するものである。図２４Ａ～Ｄは、経時的な腫瘍容量を示す。群あたりｎ＝１０。「ＴＦ」は、その腫瘍を拒絶したマウスを示す。図２４Ｅ～Ｆは、処置開始７日後の腫瘍内ＣＤ８＋Ｔ細胞（図２４Ｅ）およびＣＤ４＋Ｔ細胞（図２４Ｆ）の頻度を示す。群あたりｎ＝５。ダネットの多重比較を用いる一元配置ＡＮＯＶＡ、Ｐ＝０．０００１。図２４Ｇおよび２４Ｈは、マウスの各群（アイソタイプ対照：丸；抗ＰＤ１ Ｄ２６５Ａ：四角；抗ＶＩＳＴＡ Ｄ２６５Ａ：上向き三角；抗ＰＤ－１ Ｄ２６５Ａおよび抗ＶＩＳＴＡ Ｄ２６５Ａの組合せ：下向き三角）における経時的な中央値腫瘍容量を示す。図２４Ｉ：ＶＩＳＴＡノックアウトマウスおよび野生型同腹仔にＭＣ３８腫瘍を移植し、非結合アイソタイプ対応対照抗体（上部の２つの曲線０／７ ＴＦおよび０／５ ＴＦ、丸および下向き三角で印がつけられた）を用いて、またはマウスＰＤ－１遮断抗体（下部の２つの曲線０／５ ＴＦおよび５／８ ＴＦ、四角および下向き三角で印がつけられた）を用いて処置した。中央値腫瘍成長およびマウスの総数に対する研究の最後に腫瘍を有さない（ＴＦ）マウスの数が、各曲線に隣接して示されている（例えば、０／７ ＴＦ）。これらのデータは、２つの独立した実験を代表するものである。エラーバーは、四分位範囲を表す。図２４Ｊ～Ｍは、ＭＣ３８腫瘍が移植され、非結合アイソタイプ対応対照抗体（図２４Ｊ）、マウスＰＤ－１遮断抗体（図２４Ｋ）、マウスＰＤ－１遮断抗体および非ｐＨ選択的ヒトＶＩＳＴＡ遮断抗体Ｐ１－０６１０２９の組合せ（図２４Ｌ）またはマウスＰＤ－１遮断抗体および酸性ｐＨ選択的ヒトＶＩＳＴＡ遮断抗体Ｐ１－０６８７６７の組合せ（図２４Ｍ）を用いて処置されたヒトＶＩＳＴＡノックイン（ＫＩ）マウスの腫瘍容量を示す。すべての抗体は、マウスＩｇＧ１－Ｄ２６５Ａアイソタイプであった。腫瘍容量が経時的に示されている。群あたりｎ＝５～８。これらのデータは、１つの独立した実験を代表するものである。図２４Ｎは、５ｍｇ／ｋｇのＰ１－０６１０２９（「ＶＩＳＴＡ．１６」）（ＷＴ、下向き三角；ＫＩ、四角）またはＰ１－０６８７６７（「ＶＩＳＴＡ．１８」）（ＷＴ、上向き三角；ＫＩ、菱形）の静脈内注射後のヒトＶＩＳＴＡノックイン（ＫＩ）および野生型（ＷＴ）同腹仔マウス血清抗体濃度を示す。ＫＩマウスにおけるＰ１－０６１０２９およびＰ１－０６８７６７の算出された血清平均滞留時間（ＭＲＴ）は、それぞれ４．１および７１時間であると推定される。抗体あたりｎ＝４ＫＩマウスおよび１～２ＷＴマウス。これらのデータは、単一実験を代表するものである。図２４Ｏは、５ｍｇ／ｋｇのＶＩＳＴＡ．４（丸）またはＰ１－０６８７６７（「ＶＩＳＴＡ．１８」）（四角）の静脈内注射後のカニクイザル血清抗体濃度を示す。ＶＩＳＴＡ．４およびＰ１－０６８７６７の算出された血清平均滞留時間（ＭＲＴ）は、それぞれ７．６時間および７１７時間であると推定される。抗体あたりｎ＝１マカクザル。これらのデータは、単一実験を代表するものである。エラーバーは、特に示されていない場合、平均の標準誤差を表す。図２４ＰおよびＱは、ヒトＶＩＳＴＡノックインマウスにおけるＶＩＳＴＡ抗体単剤活性の欠如を示す。ヒトＶＩＳＴＡノックインマウスにＭＣ３８腫瘍を移植し、図２４Ｊ～Ｍに記載されるように処置した。図２４Ｒは、２００μｇの抗マウスＶＩＳＴＡ抗体（下向き三角）またはアイソタイプ対応対照抗体（四角）の単回静脈内注射を用いて処置された野生型マウスにおける抗体血中濃度を示す。抗体あたりｎ＝２。これらのデータは、２つの独立した実験を代表するものである。エラーバーは、平均の標準誤差を表す。 図２５Ａ～Ｃは、処置開始後７日のＰＤ－１（図２５Ａ）、ＬＡＧ－３（図２５Ｂ）およびＴＩＭ－３（図２５Ｃ）の腫瘍内ＣＤ８＋Ｔ細胞発現の代表的なヒストグラムを示す。エラーバーは、平均の標準誤差を表す。各下位区分では、対照、抗ＰＤ－１および抗ＶＩＳＴＡ主要ピークは、各パネルの右側で密接に重ね合わさり、一方で、組合せ主要ピークは、左側に現れる。 図２６Ａ～Ｃは、ＶＩＳＴＡが酸性ｐＨでＰＳＧＬ－１と結合することおよびこの相互作用は、ＶＩＳＴＡ抗体Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７６１、Ｐ１－０６８７６７およびＶＩＳＴＡ．４によって遮断されることを示す。図２６Ａは、ｐＨ６．０およびｐＨ７．４での捕捉されたＰＳＧＬ１との、Ｐ－セレクチン－ＦｃおよびＶＩＳＴＡ－Ｆｃ結合のＢＬＩ結合センサーグラムを示す。図２６Ｂは、抗体Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７６１、Ｐ１－０６８７６７およびＶＩＳＴＡ．４が、ＰＳＧＬ－１のｈＶＩＳＴＡとの結合を阻害することを示すヒストグラムである。図２６Ｃは、ＶＩＳＴＡ．４（上向き三角）による、および抗ＰＳＧＬ－１抗体ＫＰＬ－１（丸）による、ＣＨＯ－ＰＳＧＬ－１細胞とのＶＩＳＴＡ－Ｆｃ結合の抗体遮断を示す。これらのデータは、２つの独立した実験を代表するものである。エラーバーは、平均の標準誤差を表す。 図２７Ａ～Ｅは、Ｐ１－０６８７６７ ＦａｂおよびｈＶＩＳＴＡ、または（図２７Ｅでは）非遮断抗体ＶＩＳＴＡ．５およびｈＶＩＳＴＡの共結晶構造の表現を示す。ＶＩＳＴＡ ＩｇＶドメインは、その中央βシートの普通ではない、ヒスチジンが豊富な伸長を特徴とする。ＶＩＳＴＡ ＩｇＶドメインをＰ１－０６８７６７断片抗原結合（Ｆａｂ）とともに共結晶化した。ＶＩＳＴＡ＋Ｐ１－０６８７６７複合体の結晶構造を、１．６Å解像度で決定した。図２７Ａは、ＶＩＳＴＡ ＩｇＶドメイン：Ｐ１－０６８７６７ Ｆａｂ共結晶構造を示す。図２７Ａは、Ｐ１－０６８７６７ Ｆａｂ（重鎖、暗灰色；軽鎖、淡灰色）との複合体中のＶＩＳＴＡ ＩｇＶ ドメインの全体構造を示す。図２７Ｂは、ＶＩＳＴＡおよびＰＤ－Ｌ１ ＩｇＶドメインの重ね合わせを示す。ＶＩＳＴＡヒスチジン残基は、スティック表現で表されている。図２７Ｂは、ＶＩＳＴＡのＩｇＶドメインが普通ではない、ヒスチジンが豊富なβシート伸長を有することを示す。図２７Ｃは、ＶＩＳＴＡ＋Ｐ１－０６８７６７結晶構造によって明らかにされるような、Ｐ１－０６８７６７エピトープの分子表面（淡灰色静電表面）を示す。図２７Ｃは、遮断抗体がＶＩＳＴＡのヒスチジンが豊富なβシート伸長と結合することを示す。図２７Ｄは、ＶＩＳＴＡ（スティック表現で表されるエピトープ残基Ｈ１２１、Ｈ１２２およびＨ１２３を有する灰色リボン模式図）とＰ１－０６８７６７（スティック表現でその残基Ｅ１００およびＤ１０２を有する静電表面として表される）の間の界面の拡大図を示す。図２７Ｄは、酸性ｐＨ選択的Ｐ１－０６８７６７が、酸性残基を有するＶＩＳＴＡヒスチジンと会合することを示す。図２７Ｅは、非遮断抗体ＶＩＳＴＡ．５がＰ１－０６８７６７由来のｈＶＩＳＴＡの異なる領域において結合することを示す。 図２８Ａ～Ｋは、ＶＩＳＴＡ：ＰＳＧＬ－１結合特異性がヒスチジンおよびスルホチロシン残基によって決定されることを示す。図２８Ａに示されるように、ヒトＰＳＧＬ－１ １９マーＦｃ組換えタンパク質が、シアリルルイスＸ装飾を有する、または有さない（それぞれ、ＳＬＸ＋およびＳＬＸ－）細胞において産生された。ｐＨ６．０（白色）および７．４（黒色）でのＢＬＩ結合規模は、示されるようにＶＩＳＴＡ－ＦｃおよびＰ－セレクチン－Ｆｃについて示されている。データは、単一の独立した実験を代表するものである。図２８Ｂに示されるように、シアリルルイスＸ装飾を有する場合に産生されたヒトＰＳＧＬ－１ １９マーＦｃグリコペプチドは、９０％より高いチロシン硫酸化を有する（ｓＹが豊富な）および１％未満のチロシン硫酸化を有する（ｓＹが乏しい）画分にわけられた。ｐＨ６．０（白色）および７．４（黒色）でのＢＬＩ結合規模は、示されるようにＶＩＳＴＡ－ＦｃおよびＰ－セレクチン－Ｆｃについて示されている。これらのデータは、単一の独立した実験を代表するものである。図２８Ｃ～２８Ｄにおいて提供されるように、１５３～１５５位のヒスチジン残基が未変化のままの（ＷＴ ＶＩＳＴＡ）またはアラニン（Ｈ２Ａ突然変異体）、アスパラギン酸（Ｈ２Ｄ突然変異体）もしくはアルギニン（Ｈ２Ｒ突然変異体）によって置き換えられた、ヒトＶＩＳＴＡ－Ｆｃ組換えタンパク質が産生された。図２８Ｃは、ｐＨ６．０および７．４での捕捉されたＰＳＧＬ－１との野生型および突然変異体ＶＩＳＴＡ－Ｆｃタンパク質結合のＢＬＩ結合規模を示す。これらのデータは、単一実験を代表するものである。図２８Ｄは、ＷＴ ＶＩＳＴＡ（丸）、Ｈ２Ａ突然変異体（四角）、Ｈ２Ｄ突然変異体（下向き三角）およびＨ２Ｒ突然変異体（灰色上向き三角）ならびに対照（菱形）のｐＨ６．０でのＣＨＯ－ＰＳＧＬ－１細胞とのＶＩＳＴＡ－Ｆｃ結合を示す。これらのデータは、２つの独立した実験を代表するものである。図２８Ｅは、ＶＩＳＴＡのヒスチジンが豊富なリガンド界面（灰色リボン、下部）との複合体中のＰＳＧＬ－１ １９マーグリコペプチド（上部）の計算的モデルを示す。ＶＩＳＴＡ残基Ｈ９８、Ｈ１００、Ｈ１５３およびＨ１５４が記されている。ＰＳＧＬ－１残基Ｙ４６、Ｙ４８、Ｅ５６、Ｔ５７およびＹ５８も記されている。図２８Ｆは、ＶＩＳＴＡ－Ｆｃが、野生型ＶＩＳＴＡ（第２のレーン）、ＶＩＳＴＡ Ｈ２Ａ突然変異体（アラニンに突然変異されたＨｉｓ１５３～１５５を有する；第３のレーン）、ＶＩＳＴＡ Ｈ２Ｄ突然変異体（アスパラギン酸に突然変異されたＨｉｓ１５３～１５５を有する；第４のレーン）およびＶＩＳＴＡ Ｈ２Ｒ突然変異体（アルギニンに突然変異されたＨｉｓ１５３～１５５を有する；第５のレーン）である、蛍光体－ＮＦｋＢのレベルによって決定されるようなｐＨ６．８での一次Ｔ細胞活性化のＶＩＳＴＡ－Ｆｃ抑制を示す。これらのデータは、２つの独立した実験を代表するものである。図２８ＧおよびＨは、示されたｐＨでの、捕捉された野生型（ＷＴ、最も左のバー）、アラニンへのヒスチジン突然変異体（Ｈ２Ａ、左から２番目のバー）、アスパラギン酸へのヒスチジン突然変異体（Ｈ２Ｄ、右から２番目）およびアルギニンへのヒスチジン突然変異体（Ｈ２Ｒ、最も右のバー）ＶＩＳＴＡ－Ｆｃタンパク質との、捕捉されたＶＩＳＴＡ．５（非遮断抗体）、図２８Ｇ］およびＰ１－０６１０２９（遮断抗体）、図２８Ｈ］結合のＢＬＩ結合規模を示す。これらのデータは、１つの独立した実験を代表するものである。図２８Ｉは、ｐＨ６．０（左のバー）およびｐＨ７．４（右のバー）での、捕捉された、ＰＳＧＬ－１ １９マーＦｃの総、スルホチロシンが乏しい、およびスルホチロシンが豊富な画分との抗ＰＳＧＬ－１クローンＫＰＬ１のＢＬＩ結合規模を示す。これらのデータ１つの独立した実験を代表するものである。図２８Ｊは、示されたｐＨでの、捕捉されたＶＩＳＴＡ－Ｆｃとの、野生型ＰＳＧＬ－１ １９マーＦｃ（ＷＴ、左）およびアラニンへのチロシン突然変異体ＰＳＧＬ－１ １９マーＦｃ（Ｙ２Ａ、右）のＢＬＩ結合規模を示す。これらのデータは、１つの独立した実験を代表するものである。図２８Ｋは、ＶＩＳＴＡのヒスチジンが豊富なリガンド界面（灰色リボン、下部）との複合体中のＰＳＧＬ－１ １９マーグリコペプチド（上部）の図２８Ｅの計算的モデルの別の見解を示す。 図２９は、突然変異ｈＶＩＳＴＡタンパク質の、ｈＰＳＧＬ－１または抗ＶＩＳＴＡ抗体との結合速度論を示す表である。
定義
本出願において、「または」の使用は、別に記載されない限り「および／または」を意味する。複数の従属クレームの文脈で、「または」の使用は、代替においてのみ１つより多い前記の独立または従属クレームに戻って指す。「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「有する（ｈａｖｉｎｇ）」という用語は、本明細書において互換的に使用され得る。本発明によれば、「単離された（ｉｓｏｌａｔｅｄ）」分子は、その天然環境から取り出されている分子である。そのようなものとして、「単離された」という用語は、必ずしも、分子が精製されている程度を反映するわけではない。
「ポリペプチド」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指し、最小長に制限されない。「タンパク質」は、１つまたは複数のポリペプチドを含み得る。アミノ酸残基のこのようなポリマーは、天然または非天然アミノ酸残基を含有する場合があり、それだけに限らないが、ペプチド、オリゴペプチド、アミノ酸残基の二量体、三量体および多量体が挙げられる。全長タンパク質およびその断片の両方が定義によって包含される。この用語はまた、ポリペプチドの発現後修飾、例えば、グリコシル化、シアリル化、アセチル化、リン酸化なども含む。さらに、本発明の目的上、「ポリペプチド」または「タンパク質」とは、それぞれ、タンパク質が所望の活性を維持する限り、天然配列に対して欠失、付加および置換などの修飾（一般的に、性質において保存的な）を含むポリペプチドまたはタンパク質を指す。これらの修飾は、位置指定突然変異誘発によるように計画的である場合も、タンパク質を産生する宿主の突然変異もしくはＰＣＲ増幅によるエラーによってなど、偶発的である場合もある。タンパク質は、２つ以上のポリペプチドを含み得る。
「ＶＩＳＴＡ」は、免疫チェックポイント調節因子のＢ７ファミリーのメンバーである、Ｔ細胞活性化のＶドメイン免疫グロブリン含有サプレッサータンパク質の略語である。ＶＩＳＴＡは、ＰＤ－１同族体（ＰＤ１Ｈ）、Ｂ７－Ｈ５、Ｃ１０ｏｒｆ５４、ＥＳＣ－１（Ｄｉｅｓ－１）の分化、血小板受容体Ｇｉ２４前駆体およびデスドメイン１α（ＤＤ１α）としても知られている。「ｈＶＩＳＴＡ」または「ｈｕＶＩＳＴＡ」の用語は本明細書において、ヒトＶＩＳＴＡタンパク質を指す。そのシグナルペプチドを含むｈＶＩＳＴＡのアミノ酸配列は、配列番号１により提供され、一方で、シグナルペプチドを伴わない配列は、配列番号２により提供される。（以下の配列表を参照のこと）。ＶＩＳＴＡまたは「ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤ」の細胞外ドメインまたは「ＥＣＤ」とは、細胞外間隙に位置するＶＩＳＴＡタンパク質の一部を指し、ｈＶＩＳＴＡの場合には、配列番号２のアミノ酸１～１６２を含む（また、図１Ｂを参照のこと）。ｈＶＩＳＴＡの「ＩｇＶドメイン」の一部は、配列番号２の残基５～１３５を含む。
「リーダーペプチド」または「リーダー配列」という用語は、哺乳動物細胞由来のポリペプチドの分泌を促進するポリペプチドのＮ末端に位置するアミノ酸残基の配列を指す。リーダー配列は、哺乳動物細胞からのポリペプチドの排出の際に切断され、成熟タンパク質を形成し得る。リーダー配列は、天然であっても合成であってもよく、それらは、付着されるタンパク質に対して異種である場合も相同である場合もある。
「抗体」または「Ａｂ」という用語は、本明細書において、広い意味で使用され、それだけには限らないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）および所望の抗原結合活性を示す限り抗体断片を含む種々の抗体構造を包含する。本明細書において使用されるように、この用語は、重鎖の少なくとも相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ならびに軽鎖の少なくともＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む分子を指し、分子は、抗原と結合可能である。抗体という用語は、それだけに限らないが、抗原と結合可能である断片、例えば、「抗原結合断片」または「抗体断片」、例えば、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’および（Ｆａｂ’）２を含む。抗体という用語はまた、それだけに限らないが、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体およびマウス、カニクイザルなどといった種々の種の抗体も含む。
「重鎖」または「ＨＣ」という用語は、リーダー配列を伴って、または伴わずに、少なくとも重鎖可変領域を含むポリペプチドを指す。一部の実施形態では、重鎖は、重鎖定常領域の少なくとも一部を含む。「全長重鎖」という用語は、リーダー配列を伴って、または伴わずに、およびＣ末端リシン（Ｋ）を伴って、または伴わずに重鎖可変領域および重鎖定常領域を含むポリペプチドを指す。
「重鎖可変領域」または「ＶＨ」という用語は、重鎖の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、フレームワーク領域（ＦＲ）２、ＣＤＲ２、ＦＲ３およびＣＤＲ３を含む領域を指す。一部の実施形態では、重鎖可変領域はまた、ＦＲ１の少なくとも一部および／またはＦＲ４の少なくとも一部も含む。以下に詳述されるように、一部の実施形態では、重鎖ＣＤＲ１は、本明細書におけるＶＨ配列番号の残基２６～３５を含み、重鎖ＣＤＲ２は、本明細書におけるＶＨ配列番号の残基５０～６６を含み、重鎖ＣＤＲ３は、本明細書におけるＶＨ配列番号の残基９９～１１０を含む。他の実施形態では、明記される場合には、重鎖ＣＤＲ１は、Ｋａｂａｔ残基３１～３５に対応し、重鎖ＣＤＲ２は、Ｋａｂａｔ残基５０～６５に対応し、重鎖ＣＤＲ３は、Ｋａｂａｔ残基９５～１０２に対応する。例えば、Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest (1987 and 1991, NIH, Bethesda, Md.）を参照のこと。一部の実施形態では、重鎖ＣＤＲは、本明細書において、例えば、以下の配列表において、または表２において明記されるとおりである。
「軽鎖」または「ＬＣ」という用語は、リーダー配列を伴って、または伴わずに、少なくとも軽鎖可変領域を含むポリペプチドを指す。一部の実施形態では、軽鎖は、軽鎖定常領域の少なくとも一部を含む。「全長軽鎖」という用語は、リーダー配列を伴って、または伴わずに、軽鎖可変領域および軽鎖定常領域を含むポリペプチドを指す。
「軽鎖可変領域」または「ＶＬ」という用語は、軽鎖ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＨＶＲ２、ＦＲ３およびＨＶＲ３を含む領域を指す。一部の実施形態では、軽鎖可変領域はまた、ＦＲ１および／またはＦＲ４も含む。以下に明記されるように、一部の実施形態では、軽鎖ＣＤＲ１は、本明細書におけるＶＬ配列番号の残基２４～３５を含み、軽鎖ＣＤＲ２は、本明細書におけるＶＬ配列番号の残基５１～５７を含み、軽鎖ＣＤＲ３は、本明細書におけるＶＬ配列番号の残基９０～９８を含む。他の実施形態では、明記される場合には、軽鎖ＣＤＲ１は、Ｋａｂａｔ残基２４～３４に対応し、軽鎖ＣＤＲ２は、Ｋａｂａｔ残基５０～５６に対応し、軽鎖ＣＤＲ３は、Ｋａｂａｔ残基８９～９７に対応する。例えば、Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest (1987 and 1991, NIH, Bethesda, Md.）を参照のこと。一部の実施形態では、軽鎖ＣＤＲは、本明細書において、例えば、配列表において明記されるとおりである。
「キメラ抗体」とは、重鎖および／または軽鎖の一部が、特定の供給源または種に由来し、一方で、重鎖および／または軽鎖の残部が、異なる供給源または種に由来する抗体を指す。一部の実施形態では、キメラ抗体とは、第１の種（例えば、マウス、ラット、カニクイザルなど）に由来する少なくとも１つの可変領域および第２の種（例えば、ヒト、カニクイザルなど）に由来する少なくとも１つの定常領域を含む抗体を指す。一部の実施形態では、キメラ抗体は、少なくとも１つのマウス可変領域および少なくとも１つのヒト定常領域を含む。一部の実施形態では、キメラ抗体は、少なくとも１つのカニクイザル可変領域および少なくとも１つのヒト定常領域を含む。一部の実施形態では、キメラ抗体の可変領域のすべてが、第１の種に由来し、キメラ抗体のキメラ抗体の定常領域のすべては、第２の種に由来する。
「ヒト化抗体」とは、非ヒト可変領域のフレームワーク領域中の少なくとも１個のアミノ酸が、ヒト可変領域由来の対応するアミノ酸で置き換えられている抗体を指す。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、少なくとも１つのヒト定常領域またはその断片を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、（Ｆａｂ’）２などである。
「ヒト抗体」とは、本明細書において使用されるように、ヒトにおいて産生される抗体、ヒト免疫グロブリン遺伝子を含む非ヒト動物において産生される抗体、例えば、ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）およびインビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）法、例えば、抗体レパートリーがヒト免疫グロブリン配列に基づいているファージディスプレイを使用して選択される抗体を指す。
「ＶＩＳＴＡ抗体」または「抗ＶＩＳＴＡ抗体」とは、本明細書において使用されるように、酸性ｐＨなどの少なくとも一部の条件下でＶＩＳＴＡと特異的に結合する抗体を指す。一部の実施形態では、抗体は、それが酸性ｐＨでなどの少なくとも一部の条件下でヒトＶＩＳＴＡタンパク質と特異的に結合することを示す「ｈｕＶＩＳＴＡ抗体」または「抗ｈｕＶＩＳＴＡ抗体」であり得る。ＶＩＳＴＡの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）と特異的に結合するＶＩＳＴＡ抗体は、例えば、「ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤ抗体」と呼ばれ得る。
一部の実施形態では、抗体は、ＶＩＳＴＡと、酸性ｐＨで、中性および／または生理学的ｐＨよりも高い親和性で結合し得る。一部の実施形態では、抗体は、ＶＩＳＴＡと、酸性ｐＨでより高い親和性で結合する場合があり、中性および／または生理学的ｐＨでは、無視できるほどに、または非特異的にのみ結合する場合がある。
抗体のタンパク質、例えば、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質との結合の「ＫＤ」または「解離定数」は、抗体のタンパク質、例えば、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質に対する親和性または特異的結合の尺度である。低いＫＤは、高いＫＤを上回る改善された結合または親和性を示す。ＫＤは、抗体およびポリペプチドの「解離速度（ｏｆｆ－ｒａｔｅ）」またはｋｏｆｆまたはｋｄおよび「結合速度（ｏｎ－ｒａｔｅ）」またはｋｏｎまたはｋａの間の割合から構成される。解離速度（ｏｆｆ－ｒａｔｅ）および結合速度（ｏｎ－ｒａｔｅ）は、２つの結合パートナーが、その系において会合および解離する割合である。したがって、結合速度（ｏｎ－ｒａｔｅ）がほぼ一定のままであるより遅い解離速度（ｏｆｆ－ｒａｔｅ）は、より高い全体的な親和性、ひいては、より低いＫＤにつながる。本明細書において使用されるように、特定の値「以下の」ｋｏｆｆは、ｋｏｆｆまたは「解離速度（ｏｆｆ－ｒａｔｅ）」が明記されるとおりである、または明記される割合より遅いことを示す。
「特異的結合」または「特異的に結合する」という用語または同様の用語は、抗体およびそのポリペプチド標的などの２つのポリペプチドの結合のＫＤが、同一条件下に存在する２つの無作為のポリペプチド間の場合にあるであろうものよりも小さいことを示す。言い換えれば、ＫＤは、系中のポリペプチドの非特異的凝集によるものよりも小さい。
一部の実施形態では、抗体は、特定のｐＨまたはｐＨ範囲でＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と特異的に結合する。本明細書において「酸性」ｐＨとは、全般的に、７．０未満のｐＨを指し、「塩基性」ｐＨとは、全般的に、７．０より高いｐＨを指し、「中性」ｐＨとは、全般的に、約７．０のｐＨを指す。本明細書において「生理学的ｐＨ」とは、正常（すなわち、非がん性）生理学的条件における、例えば、７．３５～７．４５、または７．３～７．４、例えば、約７．４のｐＨを指す。ＶＩＳＴＡおよびＶＩＳＴＡ結合パートナーまたはＶＩＳＴＡおよびＴ細胞などの２つの分子の結合に関連して使用される、本明細書における「酸性条件での結合」または「生理学的条件での結合」などといった語句は、それぞれ、酸性ｐＨでの結合および生理学的ｐＨでの結合を指す。
単独または細胞上の受容体（またはリガンド）との、リガンド（または受容体）または競合抗体「の結合を遮断する」または「の結合を阻害する」抗体に言及する場合、対照と比較して統計的に有意である全体的な減少、例えば、５０％以上の全体的な減少、例えば、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれより多い全体的な減少がある場合に、結合は遮断される。「抗ＶＩＳＴＡ遮断抗体、」とは、例えば、少なくとも一部の条件下、例えば、酸性ｐＨで、ＶＩＳＴＡの、ＰＳＧＬ－１または別のＶＩＳＴＡリガンドまたは受容体またはヘパラン硫酸プロテオグリカンとの結合を遮断し得るものである。
「腫瘍モデル、」とは、本明細書において使用されるように、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤ抗体の生物活性を研究するために使用され得るインビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）前臨床アッセイを指し、異種移植または天然マウス腫瘍アッセイ系を含む。一部の場合には、腫瘍モデルは、抗体を用いて処置した際に腫瘍の大きさまたは成長を追跡することおよび／または腫瘍中の免疫細胞、例えば、特定の種類のＴ細胞またはＮＫ細胞の存在を追跡することを可能にし、抗体が免疫応答を引き起こした、または増強したか否かを調べることができる。
「免疫賦活剤」という用語は、本明細書において使用されるように、同時刺激分子を含めた、免疫賦活分子のアゴニストとして作用すること、または共阻害分子を含めた、免疫阻害分子のアンタゴニストとして作用することのいずれかによって免疫系を刺激する分子を指す。免疫賦活分子または免疫阻害分子は、免疫チェックポイントレギュレーター、例えば、ＶＩＳＴＡまたは別のＢ７ファミリーメンバーまたは以下にさらに記載されるような別の分子であり得る。免疫賦活剤は、生物製剤、例えば、抗体または抗体断片、他のタンパク質またはワクチンであり得る、または低分子薬であり得る。「免疫賦活分子」として、免疫応答を増強、刺激、誘導またはそうでなければ「オンにする」ように作用する受容体またはリガンドが挙げられる。本明細書において定義されるような免疫賦活分子として、同時刺激分子が挙げられる。「免疫阻害分子」として、免疫応答を阻害、抑制またはそうでなければ「オフにする」ように作用する受容体またはリガンドが挙げられる。本明細書において定義されるような免疫阻害分子として、共阻害分子が挙げられる。このような免疫賦活分子および免疫阻害分子は、例えば、Ｔ細胞などの免疫細胞上に見出される、またはＮＫ細胞などの自然免疫性に関与する細胞上に見出される受容体またはリガンドであり得る。
ペプチド、ポリペプチドまたは抗体配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」および「相同性」は、配列をアラインし、必要に応じて、配列同一性の一部としてあらゆる保存的置換を考慮することなく、最大配列同一性パーセントを達成するためにギャップを導入した後に、特定のペプチドまたはポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定することを目的としたアラインメントは、当技術分野における技術の範囲内である種々の方法により、例えば、公的に入手可能なコンピュータソフトウェア、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮまたはＭＥＧＡＬＩＧＮＴＭ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアを使用して達成され得る。当業者ならば、比較されている配列の全体にわたって最大アラインメントを達成するために必要とされる任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するのに適当なパラメータを決定できる。
「引き起こす」または「増強する」という用語は、任意の事象（例えば、タンパク質リガンド結合）の開始もしくは増大または任意の生物活性（例えば、免疫応答）もしくは表現型的特徴の開始もしくは増大またはその活性もしくは特徴の罹患率、程度もしくは尤度の開始もしくは増大を指す。「引き起こす」または「増強する」ことは、活性、機能および／または量を、参照と比較して開始または増大することである。引き起こすことまたは増強することが完全であることは、必要ではない。例えば、ある特定の実施形態では、「増強する」は、２０％以上の全体的な増大を引き起こす能力を意味する。別の実施形態では、「増強する」は、５０％以上の全体的な増大を引き起こす能力を意味する。さらに別の実施形態では、「増強する」は、７５％、８５％、９０％、９５％またはそれより多い全体的な増大を引き起こす能力を意味する。
「阻害」または「阻害する」という用語は、より一般には、任意の事象（例えば、タンパク質リガンド結合）の減少もしくは中断または任意の表現型的特徴の減少もしくは中断またはその特徴の罹患率、程度もしくは尤度の減少もしくは中断を指す。「低減する」または「阻害する」ことは、活性、機能および／または量を、参照と比較して減少、低減または停止することである。阻害または低減が完全であることは必要ではない。例えば、ある特定の実施形態では、「低減する」または「阻害する」は、２０％以上の全体的な減少を引き起こす能力を意味する。別の実施形態では、「低減する」または「阻害する」は、５０％以上の全体的な減少を引き起こす能力を意味する。さらに別の実施形態では、「低減する」または「阻害する」は、７５％、８５％、９０％、９５％またはそれより多い全体的な減少を引き起こす能力を意味する。
「処置」とは、本明細書において使用されるように、ヒトにおける疾患の治療薬の任意の投与または適用を対象とし、疾患または疾患もしくは１つもしくは複数の疾患症状の進行を阻害すること、疾患もしくは１つもしくは複数のその症状のその進行を阻害もしくは減速すること、疾患もしくは１つもしくは複数のその症状を部分的もしくは完全に軽減すること、または疾患の１つもしくは複数の症状の再発を防ぐことを含む。
「対象」および「患者」という用語は、ヒトを指すために本明細書において互換的に使用される。
「有効量」または「治療上有効量」といいう用語は、１つまたは複数の症状を部分的または完全に軽減するために、対照における疾患または障害の処置に有効な薬物の量を指す。一部の実施形態では、有効量とは、所望の治療または予防結果を達成するために、投与量および必要な時間について有効な量を指す。
「がん」という用語は、異常に高レベルの増殖および成長を示す細胞の群を指すように本明細書において使用される。がんは、良性（良性腫瘍とも言及される）、前悪性または悪性であり得る。がん細胞は、固形がん細胞または白血病がん細胞であり得る。「腫瘍成長」という用語は、がんの大きさまたは程度の対応する増大につながるがんを含む細胞（単数または複数）による増殖または成長を指すように本明細書において使用される。
本明細書における処置の方法に適用可能ながんの例として、それだけに限らないが、癌腫、リンパ腫、芽腫、肉腫および白血病が挙げられる。より詳しくは、このようながんの制限しない例として、扁平上皮がん、小細胞肺がん、下垂体がん、食道がん、星状細胞腫、軟部組織肉腫、非小細胞肺がん（扁平細胞非小細胞肺がんを含む）、肺腺癌、肺扁平上皮癌、腹膜のがん、肝細胞がん、胃腸がん、膵臓がん、神経膠芽腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝臓がん、膀胱がん、肝細胞腫、乳がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜または子宮癌腫、唾液腺癌、腎臓がん、腎細胞癌、肝臓がん、前立腺がん、外陰がん、甲状腺がん、肝臓癌腫、脳がん、子宮内膜がん、精巣がん、胆管癌、胆嚢癌腫、胃がん、黒色腫および種々の種類の頭頸部がん（頭頚部の扁平上皮癌を含む）が挙げられる。
１つまたは複数のさらなる治療薬「と組み合わせた」投与は、同時（併用）および任意の順序の連続（逐次）投与を含む。
「薬学的に許容される担体」とは、対象に投与するための「医薬組成物」を一緒に含む治療薬とともに使用するための、非毒性固体、半固体または液体増量剤、希釈剤、カプセル化材料、製剤助剤または当技術分野における従来の担体を指す。薬学的に許容される担体は、使用される投与量および濃度でレシピエントにとって非毒性であり、製剤の他の成分と適合する。薬学的に許容される担体は、使用される製剤にとって適当である。例えば、治療薬が経口投与される予定である場合、担体は、ゲルカプセル剤であり得る。治療薬が皮下投与される予定である場合、担体は、理想的には、皮膚にとって易刺激性でなく、注射部位反応を引き起こさない。
「化学療法薬」は、がんの処置において有用な化合物である。本明細書における方法において投与され得る化学療法薬の例として、それだけに限らないが、アルキル化剤、例えば、チオテパおよびシトキサン（登録商標）シクロスホスファミド（ｃｙｃｌｏｓｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）；アルキルスルホネート、例えば、ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファン；アジリジン、例えば、ベンゾドーパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）およびウレドーパ（ｕｒｅｄｏｐａ）；エチレンイミンならびにアルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミドおよびトリメチロロメラミンを含むメチルメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）；アセトゲニン（特に、ブラタシンおよびブラタシノン（ｂｕｌｌａｔａｃｉｎｏｎｅ））；カンプトテシン（合成類似体トポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシンおよびビゼレシン合成類似体を含む）；クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体、ＫＷ－２１８９およびＣＢ１－ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチイン；スポンギスタチン；ナイトロジェンマスタード、例えば、クロラムブシル、クロルナファジン、コロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、塩酸メクロレタミンオキシド、メルファラン、ノベムビシン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソウレア（ｎｉｔｒｏｓｕｒｅａｓ）、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチンおよびラニムスチン（ｒａｎｉｍｎｕｓｔｉｎｅ）；抗生物質、例えば、エネジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特に、カリケアマイシンガンマ１ＩおよびカリケアマイシンオメガＩ１（例えば、Agnew, Chem Intl. Ed. Engl., 33: 183-186 (1994)を参照のこと）；ジネマイシンＡを含むジネマイシン；ビスホスホネート、例えば、クロドロネート；エスペラマイシン；ならびにネオカルチノスタチン発色団および関連色素タンパク質エネジイン抗生物質（ａｎｔｉｏｂｉｏｔｉｃ）発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモミシニス（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎｉｓ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、アドリアマイシン（登録商標）ドキソルビシン（モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、例えば、マイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、ケラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮抗剤、例えば、メトトレキサートおよび５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）；葉酸類似体、例えば、デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート；プリン類似体、例えば、フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジン類似体、例えば、アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン；アンドロゲン、例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗副腎（ａｎｔｉ－ａｄｒｅｎａｌｓ）、例えば、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸補充剤（ｆｏｌｉｃ ａｃｉｄ ｒｅｐｌｅｎｉｓｈｅｒ）、例えば、フォリン酸；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキセート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルシン；ジアジクオン；エルフォルニチン（ｅｌｆｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）；マイタンシノイド、例えば、マイタンシンおよびアンサミトシン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモル（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖複合体（ＪＨＳ天然物、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２’’－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特に、Ｔ－２トキシン、ベラクリンＡ、ロリジンＡおよびアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、タキソール（登録商標）パクリタキセル（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、ニュージャージー州、プリンストン）、アブラキサン（登録商標）クレモフォール不含、パクリタキセルのアルブミン操作されたナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐａｒｔｎｅｒｓ、イリノイ州、シャンバーグ）およびタキソテール（登録商標）ドキセタキセル（ｄｏｘｅｔａｘｅｌ）（Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ、フランス、アントニー）；クロランブシル（ｃｈｌｏｒａｎｂｕｃｉｌ）；ジェムザール（登録商標）ゲムシタビン；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金類似体、例えば、シスプラチン、オキサリプラチンおよびカルボプラチン；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ナベルビン（登録商標）ビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ、ＣＰＴ－１１）（５－ＦＵおよびロイコボリンとともにイリノテカンの処置レジメンを含む）；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド、例えば、レチノイン酸；カペシタビン；コンブレタスタチン；ロイコボリン（ＬＶ）；オキサリプラチン処置レジメン（ＦＯＬＦＯＸ）を含むオキサリプラチン；細胞増殖を低減するＰＫＣ－アルファ、Ｒａｆ、Ｈ－Ｒａｓ、ＥＧＦＲ（例えば、エルロチニブ（タルセバ（登録商標）））およびＶＥＧＦ－Ａの阻害剤ならびに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体が挙げられる。
本明細書における方法において投与され得るさらなる限定しない例示的化学療法薬として、がんに対するホルモン作用を調節または阻害するように作用する抗ホルモン剤、例えば、タモキシフェン（ノルバデックス（登録商標）タモキシフェンを含む）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン（ｋｅｏｘｉｆｅｎｅ）、ＬＹ１１７０１８、オナプリストンおよびフェアストン（登録商標）トレミフェンを含む、例えば、抗エストロゲンおよび選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）；副腎におけるエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤、例えば、４（５）－イミダゾール、アミノグルテチミド、Ｍｅｇａｓｅ（登録商標）メゲストロールアセテート、アロマシン（登録商標）エキセメスタン、ホルメスタニー（ｆｏｒｍｅｓｔａｎｉｅ）、ファドロゾール、Ｒｉｖｉｓｏｒ（登録商標）ボロゾール、フェマーラ（登録商標）レトロゾールおよびアリミデックス（登録商標）アナストロゾールなど；および抗アンドロゲン、例えば、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、リュープロリドおよびゴセレリン；ならびにトロキサシタビン（１，３－ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、接着（ａｂｈｅｒａｎｔ）細胞増殖に関与するシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するもの、例えば、ＰＫＣ－アルファ、ＲａｌｆおよびＨ－Ｒａｓなど；ＶＥＧＦ発現阻害剤（例えば、Ａｎｇｉｏｚｙｍｅ（登録商標）リボザイム）およびＨＥＲ２発現阻害剤などのリボザイム；遺伝子療法ワクチン、例えば、Ａｌｌｏｖｅｃｔｉｎ（登録商標）ワクチン、Ｌｅｕｖｅｃｔｉｎ（登録商標）ワクチンおよびＶａｘｉｄ（登録商標）ワクチンなどのワクチン；Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ｒＩＬ－２；ルルトテカン（登録商標）トポイソメラーゼ１阻害剤；アバレリックス（登録商標）ｒｍＲＨ；および上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体が挙げられる。
「抗血管新生剤」または「血管新生阻害剤」とは、血管新生、脈管形成または望ましくない血管透過性を直接的または間接的に阻害する、低分子量物質、ポリヌクレオチド［例えば、阻害性ＲＮＡ（ＲＮＡｉまたはｓｉＲＮＡ）を含む］、ポリペプチド、単離タンパク質、組換えタンパク質、抗体またはそのコンジュゲートまたは融合タンパク質を指す。抗血管新生剤は、血管新生因子またはその受容体の血管新生活性を結合および遮断する物質を含むということは理解されるべきである。例えば、本明細書における方法において投与され得る抗血管新生剤として、血管新生剤に対する抗体または他のアンタゴニスト、例えば、ＶＥＧＦ－Ａに対する抗体［例えば、ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））］またはＶＥＧＦ－Ａ受容体に対する抗体（例えば、ＫＤＲ受容体またはＦｌｔ－１受容体）、抗ＰＤＧＦＲ阻害剤、例えば、グリベック（登録商標）（メシル酸イマチニブ）、ＶＥＧＦ受容体シグナル伝達を遮断する低分子（例えば、ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２８４、ＳＵ６６６８、スーテント（登録商標）／ＳＵ１１２４８（リンゴ酸スニチニブ）、ＡＭＧ７０６または例えば、国際特許出願ＷＯ２００４／１１３３０４に記載されるもの）が挙げられる。抗血管新生（Ａｎｔｉ－ａｎｇｉｏｇｅｎｓｉｓ）剤としてまた、天然血管新生阻害剤、例えば、アンギオスタチン、エンドスタチンなどが挙げられる。例えば、Klagsbrun and D’Amore (1991) Annu. Rev. Physiol. 53:217-39; Streit and Detmar (2003) Oncogene 22:3172-3179（例えば、悪性黒色腫における抗血管新生療法を列挙する表３）；Ferrara & Alitalo (1999) Nature Medicine 5(12):1359-1364; Tonini et al. (2003) Oncogene 22:6549-6556（例えば、既知の抗血管新生因子を列挙する表２）；および、Sato (2003) Int. J. Clin. Oncol. 8:200-206（例えば、臨床試験において使用された抗血管新生剤を列挙する表１）を参照のこと。
「成長阻害剤」とは、本明細書において使用されるように、インビトロまたはインビボで細胞（例えば、ＶＥＧＦを発現する細胞）の成長を阻害する化合物または組成物を指す。したがって、本明細書における方法において投与され得る成長阻害剤は、Ｓ期の細胞（例えば、ＶＥＧＦを発現する細胞）のパーセンテージを有意に低減するものであり得る。成長阻害剤の例として、それだけに限らないが、細胞周期進行を遮断する（Ｓ期以外の場所で）物質、例えば、Ｇ１停止およびＭ期停止を誘導する物質が挙げられる。古典的Ｍ期遮断剤として、ビンカ（ビンクリスチンおよびビンブラスチン）、タキサンおよびトポイソメラーゼＩＩ阻害剤、例えば、ドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシドおよびブレオマイシンが挙げられる。Ｇ１を停止する物質はまた、Ｓ期停止にも波及する、例えば、ＤＮＡアルキル化剤、例えば、タモキシフェン、プレドニゾン、ダカルバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキサート、５－フルオロウラシルおよびａｒａ－Ｃ。さらなる情報は、Murakami et al.による「Cell cycle regulation, oncogenes, and antineoplastic drugs」と題されたMendelsohn and Israel, eds., The Molecular Basis of Cancer, Chapter 1(W.B. Saunders, Philadelphia, 1995)、例えば、１３頁において見出すことができる。タキサン（パクリタキセルおよびドセタキセル）は、両方ともイチイに由来する抗がん薬である。ヨーロッパイチイに由来するドセタキセル（タキソテール（登録商標）、Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ）は、パクリタキセル（タキソール（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）の半合成類似体である。パクリタキセルおよびドセタキセルは、チュブリン二量体からの微小管の組み立てを促進し、脱重合を防ぐことによって微小管を安定化し、これは、細胞における有糸分裂の阻害につながる。
「抗新生物組成物」という用語は、少なくとも１種の活性治療薬を含むがん を処置するのに有用な組成物を指す。治療薬の例として、それだけに限らないが、例えば、化学療法薬、成長阻害剤、細胞傷害性薬剤、放射線療法において使用される物質、抗血管新生剤、がん免疫治療薬、アポトーシス薬、抗チュブリン剤およびがんを処置するための他の薬剤、例えば、抗ＨＥＲ－２抗体、抗ＣＤ２０抗体、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）アンタゴニスト（例えば、チロシンキナーゼ阻害剤）、ＨＥＲ１／ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、エルロチニブ（タルセバ（登録商標））、血小板由来増殖因子阻害剤（例えば、グリベック（登録商標）（メシル酸イマチニブ））、ＣＯＸ－２阻害剤（例えば、セレコキシブ）、インターフェロン、ＣＴＬＡ４阻害剤（例えば、抗ＣＴＬＡ抗体イピリムマブ（ＹＥＲＶＯＹ（登録商標）））、ＰＤ－１または（ｏｒｅ）ＰＤ－Ｌ１阻害剤（例えば、オプジーボ（登録商標）、キイトルーダ（登録商標）、テセントリク（登録商標）、バベンチオ（登録商標）、ＩＭＦＩＮＺＩ（登録商標））、ＴＩＭ３阻害剤（例えば、抗ＴＩＭ３抗体）、サイトカイン、以下の標的ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＢｌｙＳ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３またはＶＥＧＦ受容体のうち１つまたは複数と結合するアンタゴニスト（例えば、中和抗体）、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２および他の生理活性および有機化学物質などが挙げられる。それらの組合せも本開示に含まれる。
酸性ｐＨでＶＩＳＴＡ－ＥＣＤと特異的に結合する抗体
ＶＩＳＴＡは、その細胞外ドメイン（ＥＣＤ）中に多数のヒスチジン残基を有するので、そのフォールディングおよび全体構造ならびに抗体などのリガンドの結合に利用可能な表面は、酸性ｐＨで、中性ｐＨ、特に、ヒスチジンのｐＫａであるｐＨ６．５付近と比較して異なり得る。腫瘍微小環境は、一般に酸性であるので、それらの微小環境におけるＶＩＳＴＡとの結合のために、抗体は、表面ヒスチジン残基の少なくとも一部がプロトン化されている可能性がより高い酸性ｐＨでＶＩＳＴＡと特異性を有して結合する必要があり得る。
以下の配列表は、それぞれ、シグナルペプチドを伴うまたは伴わない（配列番号１および配列番号２（成熟ｈＶＩＳＴＡ））ヒトＶＩＳＴＡ（ｈＶＩＳＴＡ）のアミノ酸配列を提供する。シグナルペプチドは、配列番号１のアミノ酸残基１～３２を構成する。細胞外ドメイン（ＥＣＤ）は、配列番号２のアミノ酸残基１～１６２からなる）。ＩｇＶドメインは、配列番号１のアミノ酸残基３７～１６７および配列番号２のアミノ酸残基５～１３５を構成する。スターク領域は、配列番号１のアミノ酸残基１７２～１９４および配列番号２のアミノ酸残基１３６～１６２にあり、膜貫通ドメインは、配列番号１のアミノ酸残基１９５～２１６および配列番号２のアミノ酸残基１６３～１８４にある。配列番号１のアミノ酸残基１８７および配列番号２の１５５（太字および下線が引かれている）は、ＤまたはＥのいずれかである場合があり、これは、ｈＶＩＳＴＡにおける多型に相当する。その残基は、太字で示され、下線が引かれている。したがって、配列番号１および配列番号２は、その残基におけるヒト多型の両方を包含する。ＶＩＳＴＡのＥＣＤ中のヒスチジン残基は、灰色の影がつけられている。
抗ＶＩＳＴＡ抗体（Ａｂ）は、例えば、ＶＩＳＴＡのＩｇＶドメインもしくは例えば、配列番号２のアミノ酸２０～９５、２０～７０ ３５～７０、３５～９５、３５～１２７もしくは３７～１２５を含むｈＶＩＳＴＡに由来する領域を含むＶＩＳＴＡ－ＥＣＤまたはその断片と、酸性ｐＨで特異的に結合し得る。ある特定の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、ｐＨ７．０未満であるｐＨで特異的に結合する。ある特定の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、ｐＨ６．８未満であるｐＨで特異的に結合する。ある特定の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、ｐＨ６．５未満であるｐＨで特異的に結合する。ある特定の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、ｐＨ６．３未満であるｐＨで特異的に結合する。ある特定の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、ｐＨ６．０未満であるｐＨで特異的に結合する。ある特定の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、ｐＨ５．８未満であるｐＨで特異的に結合する。ある特定の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、ｐＨ５．５未満であるｐＨで特異的に結合する。ある特定の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、ｐＨ５．３未満であるｐＨで特異的に結合する。ある特定の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、ｐＨ５．０未満であるｐＨで特異的に結合する。
ある特定のＡｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、ｐＨ５．０～ｐＨ７．０の範囲内のｐＨで特異的に結合する。ある特定のＡｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、ｐＨ５．０～ｐＨ６．５の範囲内のｐＨで特異的に結合する。ある特定のＡｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、ｐＨ５．０～ｐＨ６．０の範囲内のｐＨで特異的に結合する。ある特定のＡｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、ｐＨ５．５～ｐＨ７．０の範囲内のｐＨで特異的に結合する。ある特定のＡｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、ｐＨ５．５～ｐＨ６．５の範囲内のｐＨで特異的に結合する。ある特定のＡｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、ｐＨ６．０～ｐＨ６．５の範囲内のｐＨで特異的に結合する。
ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質、例えば、ＶＩＳＴＡのＩｇＶドメインもしくは例えば、配列番号２のアミノ酸２０～９５、２０～７０ ３５～７０、３５～９５、３５～１２７もしくは３７～１２５を含むｈＶＩＳＴＡに由来する領域を含むｈＶＩＳＴＡ－ＥＣＤまたはその断片と、６．５以下のｐＨで、１０－６Ｍ以下のＫＤで結合するＡｂも、本明細書において提供される。一部の実施形態では、Ａｂは、１０－７Ｍ以下のＫＤで結合する。一部の実施形態では、Ａｂは、１０－８Ｍ以下のＫＤで結合する。一部の実施形態では、Ａｂは、１０－９Ｍ以下のＫＤで結合する。一部の実施形態では、Ａｂは、１０－１０Ｍ以下のＫＤで結合する。例えば、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、６．５以下のｐＨで、１０－８Ｍ以下のＫＤで結合し得る。
ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、６．０～６．５の範囲のｐＨ内で、１０－６Ｍ以下のＫＤで結合するＡｂも、本明細書において提供される。一部の実施形態では、Ａｂは、１０－７Ｍ以下のＫＤで結合する。一部の実施形態では、Ａｂは、１０－８Ｍ以下のＫＤで結合する。一部の実施形態では、Ａｂは、１０－９Ｍ以下のＫＤで結合する。一部の実施形態では、Ａｂは、１０－１０Ｍ以下のＫＤで結合する。例えば、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、６．５以下のｐＨで、例えば、６．０～６．５の範囲のｐＨ内で、１０－７Ｍ以下のＫＤで結合し得る。さらに、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、６．５以下のｐＨで、例えば、６．０～６．５の範囲のｐＨ内で、１０－８Ｍ以下のＫＤで結合し得る。Ａｂは、ｈＶＩＳＴＡ－ＥＣＤと、６．５以下のｐＨで、例えば、６．０～６．５の範囲のｐＨ内で、１０－９Ｍ以下のＫＤで結合し得る。
ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質、例えば、ＶＩＳＴＡのＩｇＶドメインもしくは例えば、配列番号２のアミノ酸２０～９５、２０～７０ ３５～７０、３５～９５、３５～１２７もしくは３７～１２５を含むｈＶＩＳＴＡに由来する領域を含むｈＶＩＳＴＡ－ＥＣＤまたはその断片と、例えば、６．５以下のｐＨで、２５℃で、または３７℃で１０－５ｓ－１以下のｋｏｆｆで、特異的に結合するＡｂも、本明細書において提供される。一部の実施形態では、Ａｂは、２５℃で、または３７℃で１０－４ｓ－１以下のｋｏｆｆを有する。一部の実施形態では、Ａｂは、２５℃で、または３７℃で２ １０－４ｓ－１以下のｋｏｆｆを有する。一部の実施形態では、Ａｂは、２５℃で、または３７℃で５ １０－４ｓ－１以下のｋｏｆｆを有する。一部の実施形態では、Ａｂは、２５℃で、または３７℃で７ １０－４ｓ－１以下のｋｏｆｆを有する。一部の実施形態では、Ａｂは、２５℃で、または３７℃で１０－３ｓ－１以下のｋｏｆｆを有する。一部の実施形態では、Ａｂは、２５℃で、または３７℃で２ １０－３ｓ－１以下のｋｏｆｆを有する。一部の実施形態では、Ａｂは、２５℃で、または３７℃で５ １０－３ｓ－１以下のｋｏｆｆを有する。一部の実施形態では、Ａｂは、２５℃で、または３７℃で７ １０－３ｓ－１以下のｋｏｆｆを有する。一部の実施形態では、Ａｂは、２５℃で、または３７℃で１０－２ｓ－１以下のｋｏｆｆを有する。一部の実施形態では、２５℃で、または３７℃で１０－１ｓ－１以下のｋｏｆｆを有する。例えば、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、６．５以下のｐＨで、２５℃で、または３７℃で１０－３ｓ－１以下のｋｏｆｆで特異的に結合し得る。Ａｂは、ｈＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、６．５以下のｐＨで、２５℃で、または３７℃で１０－３ｓ－１以下のｋｏｆｆで特異的に結合し得る。さらに、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、６．５以下のｐＨで、２５℃で、または３７℃で１０－２ｓ－１以下のｋｏｆｆで特異的に結合し得る。
ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質、例えば、ＶＩＳＴＡのＩｇＶドメインもしくは例えば、配列番号２のアミノ酸２０～９５、２０～７０ ３５～７０、３５～９５、３５～１２７もしくは３７～１２５を含むｈＶＩＳＴＡに由来する領域を含むｈＶＩＳＴＡ－ＥＣＤまたはその断片と、例えば、６．５以下のｐＨで、（ｉ）１０－６Ｍ以下、１０－７Ｍ以下、１０－８Ｍ以下、１０－９Ｍ以下または１０－１０Ｍ以下のＫＤおよび（ｉｉ）例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように、１０－５ｓ－‘１以下、１０－４（または２、５または７ １０－４）以下、１０－３（または２、５または７ １０－４）ｓ－１以下、１０－２ｓ－１以下または１０－１ｓ－１以下のｋｏｆｆ速度で結合するＡｂが、本明細書において提供される。例えば、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、６．５以下のｐＨで、１０－７Ｍ以下のＫＤおよび例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように１０－３ｓ－１以下のｋｏｆｆ速度で結合し得る。Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、６．５以下のｐＨで、１０－８Ｍ以下のＫＤおよび例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように１０－３ｓ－１以下のｋｏｆｆ速度で結合し得る。Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、６．５以下のｐＨで、１０－８Ｍ以下のＫＤおよび例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように１０－２ｓ－１以下のｋｏｆｆ速度で結合し得る。例えば、Ａｂは、ｈＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、６．５以下のｐＨで、１０－７Ｍ以下のＫＤおよび例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように１０－３ｓ－１以下のｋｏｆｆ速度で結合し得る。Ａｂは、ｈＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、６．５以下のｐＨで、１０－９Ｍ以下のＫＤおよび例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように１０－３ｓ－１以下のｋｏｆｆ速度で結合し得る。Ａｂは、ｈＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、６．５以下のｐＨで、１０－９Ｍ以下のＫＤおよび例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように１０－２ｓ－１以下のｋｏｆｆ速度で結合し得る。Ａｂは、ｈＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、６．５以下のｐＨで、１０－８Ｍ以下のＫＤおよび例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように１０－４（または２、５または７ １０－４）ｓ－１以下のｋｏｆｆ速度で結合し得る。Ａｂは、ｈＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、６．５以下のｐＨで、１０－８Ｍ以下のＫＤおよび例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように１０－５（または２、５または７ １０－５）ｓ－１以下のｋｏｆｆ速度で結合し得る。Ａｂは、ｈＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、６．５以下のｐＨで、１０－９Ｍ以下のＫＤおよび例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように１０－４（または２、５または７ １０－４）ｓ－１以下のｋｏｆｆ速度で結合し得る。Ａｂは、ｈＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、６．５以下のｐＨで、１０－９Ｍ以下のＫＤおよび例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように１０－５（または２、５または７ １０－５）ｓ－１以下のｋｏｆｆ速度で結合し得る。
ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、例えば、６．５以下のｐＨで、２５℃で、または３７℃で１０４Ｍ－１ｓ－１以上の高いｋｏｎで特異的に結合するＡｂが、本明細書において提供される。一部のこのような実施形態では、Ａｂは、１０５Ｍ－１ｓ－１以上のｋｏｎで結合し得る。一部のこのような実施形態では、Ａｂは、１０６Ｍ－１ｓ－１以上のｋｏｎで結合し得る。一部のこのような実施形態では、Ａｂは、１０７Ｍ－１ｓ－１以上のｋｏｎで結合し得る。例えば、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、６．５以下のｐＨで、例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように１０６Ｍ－１ｓ－１以上のｋｏｎで結合し得る。例えば、Ａｂは、ｈＶＩＳＴＡのＥＣＤと、６．５以下のｐＨで、例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように１０６Ｍ－１ｓ－１以上のｋｏｎで結合し得る。
ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、例えば、６．５以下のｐＨで、（ｉ）１０－６Ｍ以下、１０－７Ｍ以下、１０－８Ｍ以下、１０－９Ｍ以下または１０－１０Ｍ以下のＫＤおよび（ｉｉ）例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように１０４Ｍ－１ｓ－１以上、１０５Ｍ－１ｓ－１以上、１０６Ｍ－１ｓ－１以上、１０７Ｍ－１ｓ－１以上のｋｏｎで結合するＡｂが、本明細書において提供される。例えば、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、６．５以下のｐＨで、１０－７Ｍ以下のＫＤおよび例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように１０６Ｍ－１ｓ－１以上のｋｏｎ速度で結合し得る。例えば、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、６．５以下のｐＨで、１０－８Ｍ以下のＫＤおよび例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように１０６Ｍ－１ｓ－１以上のｋｏｎ速度で結合し得る。例えば、Ａｂは、ｈＶＩＳＴＡ－ＥＣＤと、６．５以下のｐＨで、１０－７Ｍ以下のＫＤおよび例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように１０６Ｍ－１ｓ－１以上の高いｋｏｎ速度で結合し得る。例えば、Ａｂは、ｈＶＩＳＴＡ－ＥＣＤと、６．５以下のｐＨで、１０－８Ｍ以下のＫＤおよび例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように１０６Ｍ－１ｓ－１以上のｋｏｎ速度で結合し得る。
一部の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、６．５以下のｐＨで、１０－７Ｍ以下のＫＤでならびに例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように、１０－５ｓ－１以下、２ １０－５ｓ－１以下、５ １０－５ｓ－１以下、７ １０－５ｓ－１以下、１０－４ｓ－１以下、２ １０－４ｓ－１以下、５ １０－４ｓ－１以下、７ １０－４ｓ－１以下、１０－３ｓ－１以下、２ １０－３ｓ－１以下、５ １０－３ｓ－１以下、７ １０－３ｓ－１以下、１０－２ｓ－１以下または１０－１ｓ－１以下のｋｏｆｆで結合し得る。一部の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、６．５以下のｐＨで、１０－９Ｍ以下のＫＤで、ならびに例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように、１０－５ｓ－１以下、１０－４ｓ－１以下、１０－３ｓ－１以下、１０－２ｓ－１以下または１０－１ｓ－１以下のｋｏｆｆで結合し得る。一部のこのような実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、６．５以下のｐＨで、１０－１０Ｍ以下のＫＤで、ならびに例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように、１０－５ｓ－１以下、１０－４ｓ－１以下、１０－３ｓ－１以下、１０－２ｓ－１以下または１０－１ｓ－１以下のｋｏｆｆで結合し得る。
一部の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、６．５以下のｐＨで、１０－７Ｍ以下のＫＤで、ならびに例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように、１０４Ｍ－１ｓ－１以上、１０５Ｍ－１ｓ－１以上、１０６Ｍ－１ｓ－１以上、１０７Ｍ－１ｓ－１以上のｋｏｎで結合し得る。一部の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、６．５以下のｐＨで、１０－８Ｍ以下のＫＤで、ならびに例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように、１０４Ｍ－１ｓ－１以上、１０５Ｍ－１ｓ－１以上、１０６Ｍ－１ｓ－１以上、１０７Ｍ－１ｓ－１以上のｋｏｎで結合し得る。一部の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、６．５以下のｐＨで、１０－９Ｍ以下のＫＤで、ならびに例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように、１０４Ｍ－１ｓ－１以上、１０５Ｍ－１ｓ－１以上、１０６Ｍ－１ｓ－１以上、１０７Ｍ－１ｓ－１以上のｋｏｎで結合し得る。一部のこのような実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、６．５以下のｐＨで、１０－１０Ｍ以下のＫＤで、ならびに例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように、１０４Ｍ－１ｓ－１以上、１０５Ｍ－１ｓ－１以上、１０６Ｍ－１ｓ－１以上、１０７Ｍ－１ｓ－１以上のｋｏｎで結合し得る。
一部の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、６．５以下のｐＨで、１０－７Ｍ以下のＫＤで、ならびに例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように、１０－５ｓ－１以下、１０－４ｓ－１以下、１０－３ｓ－１以下、１０－２ｓ－１以下または１０－１ｓ－１以下のｋｏｆｆで、ならびに例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように、１０４Ｍ－１ｓ－１以上、１０５Ｍ－１ｓ－１以上、１０６Ｍ－１ｓ－１以上、１０７Ｍ－１ｓ－１以上のｋｏｎで結合し得る。一部の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、６．５以下のｐＨで、１０－８Ｍ以下のＫＤで、ならびに例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように、１０－５ｓ－１以下、１０－４ｓ－１以下、１０－３ｓ－１以下、１０－２ｓ－１以下または１０－１ｓ－１以下のｋｏｆｆで、ならびに例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように、１０４Ｍ－１ｓ－１以上、１０５Ｍ－１ｓ－１以上、１０６Ｍ－１ｓ－１以上、１０７Ｍ－１ｓ－１以上のｋｏｎで結合し得る。一部の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、６．５以下のｐＨで、１０－９Ｍ以下のＫＤで、ならびに例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように、１０－５ｓ－１以下、１０－４ｓ－１以下、１０－３ｓ－１以下、１０－２ｓ－１以下または１０－１ｓ－１以下のｋｏｆｆで、ならびに例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように、１０４Ｍ－１ｓ－１以上、１０５Ｍ－１ｓ－１以上、１０６Ｍ－１ｓ－１以上、１０７Ｍ－１ｓ－１以上のｋｏｎで結合し得る。一部のこのような実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、６．５以下のｐＨで、１０－１０Ｍ以下のＫＤで、ならびに例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように、１０－５ｓ－１以下、１０－４ｓ－１以下、１０－３ｓ－１以下、１０－２ｓ－１以下または１０－１ｓ－１以下のｋｏｆｆで、ならびに例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように、１０４Ｍ－１ｓ－１以上、１０５Ｍ－１ｓ－１以上、１０６Ｍ－１ｓ－１以上、１０７Ｍ－１ｓ－１以上のｋｏｎで結合し得る。
上に注記したように、上記の実施形態の一部において、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質は、ｈＶＩＳＴＡ－ＥＣＤである、またはｈＶＩＳＴＡ－ＥＣＤの一部、例えば、ＩｇＶドメインなどである。上記の実施形態の一部において、Ａｂは、配列番号２のアミノ酸２０～９５を含むエピトープと特異的に結合し得る。上記の実施形態の一部において、Ａｂは、配列番号２のアミノ酸２０～７０を含むエピトープと特異的に結合し得る。上記の実施形態の一部において、Ａｂは、配列番号２のアミノ酸３５～９５を含むエピトープと特異的に結合し得る。上記の実施形態の一部において、Ａｂは、配列番号２のアミノ酸３５～７０を含むエピトープと特異的に結合し得る。上記の一部の実施形態では、エピトープは、残基２０～９５、２０～７０、３５～９５または３５～７０に由来する配列番号２の上記の一部のうちの１つだけでなく、配列番号２の別の一部、例えば、配列番号２の残基９５～１０５も含む三次元エピトープである。ある特定の実施形態では、Ａｂは、ＷＯ２０１５／０９７５３６に記載されるＡｂが結合するｈＶＩＳＴＡのエピトープと結合する。例えば、Ａｂは、ｈＶＩＳＴＡとの結合について、ＷＯ２０１５／０９７５３６において開示されるＡｂと競合または交差競合し得る。ある特定の実施形態では、Ａｂは、ヒトＶＩＳＴＡのコンホメーションエピトープと結合する。ある特定の実施形態では、Ａｂは、ヒトＶＩＳＴＡの配列番号２の残基１０３～１１１および配列番号２の１３６～１４６を含む、またはその中に存在するコンホメーションエピトープと結合する。ある特定の実施形態では、Ａｂは、ヒトＶＩＳＴＡの配列番号２の残基２４～３６、５４～６５および１００～１０２を含む、またはその中に存在するコンホメーションエピトープと結合する。ある特定の実施形態では、Ａｂは、ヒトＶＩＳＴＡのＦＧループ中のアミノ酸残基を含むコンホメーションエピトープと結合する。一部の実施形態では、Ａｂは、配列番号２のアミノ酸残基３５～１２７および／または３７～１２５を含むポリペプチドと結合する。一部の実施形態では、Ａｂは、配列番号２のアミノ酸残基３５０～１２７を含むＶＩＳＴＡ ＥＣＤポリペプチドまたはその一部と結合するが、抗体は、アミノ酸置換を含むＶＩＳＴＡ ＥＣＤポリペプチド（ｐｏｌｙｐｔｉｄｅ）またはその一部と結合しない、または低減された親和性で結合し、置換（１）は以下のアミノ酸残基：Ｔ３５、Ｙ３７、Ｋ３８、Ｔ３９、Ｙ４１、Ｒ５４、Ｔ６１、Ｆ６２、Ｑ６３、Ｌ６５、Ｈ６６、Ｌ６７、Ｈ６８、Ｈ６９、Ｆ９７、Ｌ１１５、Ｖ１１７、Ｉ１１９、Ｈ１２１、Ｈ１２２、Ｓ１２４、Ｅ１２５、Ｒ１２７および配列番号２のうち１つの置換である、または（２）は以下のアミノ酸残基：Ｙ３７、Ｔ３９、Ｒ５４、Ｆ６２、Ｑ６３、Ｈ６６、Ｌ１１５、Ｖ１１７、Ｉ１１９、Ｓ１２４またはＥ１２５のうち１つの置換である。一部の実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ抗体は、例えば、実施例においておよび／または特許請求の範囲において示されるような、本明細書において記載される抗体と同一の結合特徴を有する（または著しく同一の結合特徴）。
上記の抗体の一部は、ｐＨに応じてＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質に対して差次的結合親和性を示し得る。ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、酸性条件で、例えば、ｐＨ６．５以下で特異的に結合するある特定のＡｂはまた、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、中性および／またはアルカリｐＨで同様の親和性で特異的に結合する（すなわち、それらは、「汎結合剤」である）。例えば、一部のこのようなＡｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、ｐＨ６．５でのＫＤが、ｐＨ７．０でのＫＤの１．５倍以内であるように、ｐＨ６．５で、およびｐＨ７．０の両方で（例えば、２５℃の、または３７℃の一定温度で）１０－７Ｍ以下のＫＤで結合し得る。一部のこのようなＡｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、ｐＨ６．５でのＫＤが、ｐＨ７．０でのＫＤの１．５倍以内であるように、ｐＨ６．５で、およびｐＨ７．０の両方で（例えば、２５℃の、または３７℃の一定温度で）１０－８Ｍ以下のＫＤで結合し得る。一部のこのようなＡｂは、ｈＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、ｐＨ６．５でのＫＤが、ｐＨ７．０でのＫＤの１．５倍以内であるように、ｐＨ６．５で、およびｐＨ７．０の両方で（例えば、２５℃の、または３７℃の一定温度で）１０－８Ｍ以下のＫＤで結合し得る。
酸性条件で、例えば、ｐＨ６．５以下でＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と特異的に結合するある特定のＡｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、中性、生理学的および／またはアルカリ性条件でより低い親和性で結合し得る（「ｐＨ感受性結合剤」または「ｐＨ感受性Ａｂ」）。酸性条件で、例えば、ｐＨ６．５以下でＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と特異的に結合するある特定のＡｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、中性、生理学的および／またはアルカリ性条件で有意ではない、例えば、ほぼ検出不可能な結合を有し得る。例えば、一部の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、ｐＨ６．５で１０－８Ｍ以下のＫＤで、ならびにｐＨ７．０および／またはｐＨ７．４で１０－８Ｍよりも大きいＫＤで結合し得る。一部のこのような実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、ｐＨ６．５で１０－８Ｍ以下のＫＤで、ならびにｐＨ７．０および／またはｐＨ７．４で、ｐＨ６．５でのものよりも１．５倍よりも大きいＫＤで結合し得る。ある特定の実施形態では、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、ｐＨ６．５で、ｐＨ７．０でよりも少なくとも１．５倍、２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、３００倍、５００倍、１０００倍または５０００倍低いＫＤで（例えば、２５℃の、または３７℃の一定温度で）特異的に結合するｐＨ感受性Ａｂが提供される。例えば、一部の場合には、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、ｐＨ６．０で、ｐＨ７．０および／またはｐＨ７．４に対して少なくとも１．５倍、２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、３００倍、５００倍、１０００倍または５０００倍少ないＫＤで（例えば、２５℃の、または３７℃の一定温度で）結合する。
ある特定の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、酸性条件で、中性、生理学的またはアルカリ性条件におけるものに対してより低いｋｏｆｆで特異的に結合する。ある特定の実施形態では、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、酸性条件で、例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように、ｐＨ６．５で、ｐＨ７．０および／またはｐＨ７．４でのｋｏｆｆよりも少なくとも１．５倍、２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍または１０００倍低いｋｏｆｆで結合するＡｂが提供される。言い換えれば、解離速度（ｏｆｆ－ｒａｔｅ）は、酸性ｐＨで、中性ｐＨよりも遅い。例えば、一部の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように、ｐＨ６．０で、ｐＨ７．０および／またはｐＨ７．４に対して少なくとも１．５倍、２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍または１０００倍低いｋｏｆｆ速度で特異的に結合する。ある特定の実施形態では、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように、ｐＨ６．５で、ｐＨ７．４でのＫｏｆｆよりも少なくとも１．５倍、２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍または１０００倍低いｋｏｆｆで結合するＡｂが提供される。一部の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように、ｐＨ６．０で、ｐＨ７．４に対して少なくとも１．５倍、２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍または１０００倍低いｋｏｆｆ速度で特異的に結合する。ある特定の実施形態では、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように、ｐＨ６．０～６．５で、ｐＨ７．０～７．４でのｋｏｆｆよりも少なくとも１．５倍、２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍または１０００倍低いｋｏｆｆで結合するＡｂが提供される。
ある特定の実施形態では、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、酸性条件で、中性、生理学的、またはアルカリ性条件に対してより高いｋｏｎで特異的に結合するＡｂ。ある特定の実施形態では、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、酸性条件で、例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように、ｐＨ６．５で、ｐＨ７．０および／またはｐＨ７．４でのｋｏｎよりも少なくとも２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍または１０００倍高いｋｏｎで結合するＡｂが提供される。例えば、一部の実施形態では、Ａｂは、ａＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように、ｐＨ６．０で、ｐＨ７．０および／またはｐＨ７．４でよりも少なくとも２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍または１０００倍高いｋｏｎで特異的に結合する。
ある特定の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、配列番号１中の少なくとも１個のヒスチジン残基、例えば、Ｈｉｓ９８がプロトン化されるｐＨで特異的に結合する。ある特定の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、ｐＨ６．５以下、例えば、ｐＨ６．０からｐＨ６．５の間であると予測される、ＥＣＤ中のほとんどのヒスチジン残基がプロトン化されるｐＨで特異的に結合する。
また、酸性ｐＨでの結合の親和性が、高いままである限り、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、中性、生理学的、またはアルカリ性ｐＨで、酸性ｐＨに対して高い親和性で特異的に結合するＡｂも本明細書において包含される。例えば、Ａｂは、ｐＨ７．０で、ｐＨ６．５でのものよりも少なくとも１．５倍、２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、３００倍、５００倍、１０００倍低いＫＤで結合するが、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、ｐＨ６．５で、およびｐＨ７．０の両方で１０－８Ｍ以下のＫＤで結合し得る。
また、この節の上記の特性のうち１つまたは複数を共有するＡｂも本明細書において包含される。上記の特性、例えば、個々のＫＤ、ｋｏｆｆ、ｋｏｎ、特異的エピトープは、単離において処置されるべきではない。したがって、Ａｂは、上記の配列番号２の領域のうち１つを含むエピトープと結合することができ、また、異なるｐＨでのそのＫＤ、ｋｏｆｆまたはｋｏｎの挙動のうち１つまたは複数によって示されるような、上記のように汎結合またはｐＨ感受性またはｐＨ選択的結合特性を有し得る。
上記の実施形態のいずれかでは、Ａｂは、例えば、全長抗体［すなわち、全長重鎖（Ｃ末端リシンを伴う、または伴わない）および全長軽鎖を含む］、または抗原結合断片、例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、（Ｆａｂ’）２断片、ｓｃＦｖ断片、Ｆｖ断片であり得る、またはＡｂは、キメラ、ヒト化またはヒト抗体であり得る、またはＡｂは、二重特異性または多重特異性抗体であり得る。
Ａｂが所与のｐＨでＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質とどのくらい良好に結合するのか判定することは、いくつかの異なる方法を使用して実施され得る。例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）アッセイによって。例示的ＳＰＲアッセイは、固定化された捕捉試薬を用いて（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）抗ヒトＦｃ捕捉キット、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅカタログ番号ＢＲ－１００８－３９またはＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）抗マウス捕捉キット、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅカタログ番号ＢＲ－１００８－３９を使用して）、ＣＭ４センサーチップ上で１つまたはいくつかの抗体を捕捉することおよび濃度系列の分析物としてＶＩＳＴＡ抗原を流して、所望のｐＨを有するランニングバッファーにおける結合動態学および親和性を決定することを含む。一実施形態では、ＶＩＳＴＡは、３０μＬ／分の流速で、０．１ｎＭ～５００ｎＭ（例えば、０．１ｎＭ、１ｎＭ、１０ｎＭ、１００ｎＭ、５００ｎＭ）の範囲の２～５種の濃度で、最大４分の会合時間および最大１０分の解離時間まで注入される。結合サイクルの間に、それぞれの捕捉キットについて製造業者の使用説明書に従って捕捉表面が再生される。すべてのデータは、参照フローセルおよびブランク注入を使用して二重参照される。単純な１：１動態学を有するデータは、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ２００評価ソフトウェアを使用して物質移動を伴うラングミュア結合モデルにフィッティングされる。実施例に記載されるＳＰＲ法も使用され得る。
ＶＩＳＴＡ ＥＣＤポリペプチドに対するＡｂの親和性は、その表面でＶＩＳＴＡ ＥＣＤポリペプチド、ＰＳＧＬ－１またはヘパラン硫酸を発現する細胞を使用して決定することができ、この方法は、フローサイトメトリーを含み、所与のｐＨ、例えば、ｐＨ６．５以下でのＡｂの、細胞に結合されているＶＩＳＴＡ－ＥＣＤとの結合を判定することができる。例示的フローサイトメトリーアッセイは、以下を含む：ｈＶＩＳＴＡ ＥＣＤを異所性に発現する２９３Ｔ細胞または他の細胞を、ＭＥＳを用いて望ましいｐＨ、例えば、ｐＨ６．０に、またはＨＥＰＥＳを用いてｐＨ７．４に調整されたＨＢＳＳ＋１％ ＢＳＡからなるバッファーに再懸濁する。ｈＶＩＳＴＡに対するＡｂ（例えば、ヒトＩｇＧ）を、およそ２０μｇ／ｍＬから段階希釈し、再懸濁された細胞とともに４℃で３０分間インキュベートする。次いで、所望のｐＨ、例えば、６．０または７．４のｐＨを維持しながら、細胞を同一バッファーを用いて２回洗浄し、一次抗体（例えば、ヒトＩｇＧ）を認識し、低減されたｐＨで安定である、フルオロフォアがコンジュゲートしている二次抗体とともにインキュベートする。次いで、細胞を以前のとおりに洗浄し、ＢＤ Ｆｏｒｔｅｓｓａまたは他のフローサイトメーターで固定せずに直ちに獲得する。ＶＩＳＴＡ ＥＣＤポリペプチドに対するＡｂの親和性は、実施例に記載されるとおりに決定され得る。
ある特定の実施形態では、ｈＶＩＳＴＡ ＥＣＤと結合するＡｂは、ｈＶＩＳＴＡの、例えば、細胞上のその結合パートナー（例えば、ＶＩＳＴＡ受容体）との結合を遮断する。阻害または遮断は、１００％または少なくとも９９％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％もしくは５０％であり得る。ある特定の実施形態では、Ａｂは、酸性ｐＨ、例えば、ｐＨ６．５以下でＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と結合し、ＶＩＳＴＡの、その結合パートナーとの結合を、少なくとも５０％、例えば、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または１００％阻害する。ある特定の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と特異的に結合し、ＶＩＳＴＡの、その結合パートナーとの結合を、ｐＨ７．０未満であるｐＨで少なくとも５０％阻害する。ある特定の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と特異的に結合し、ＶＩＳＴＡの、その結合パートナーとの結合を、ｐＨ６．８未満であるｐＨで少なくとも５０％阻害する。ある特定の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と特異的に結合し、ＶＩＳＴＡの、その結合パートナーとの結合を、ｐＨ６．５未満であるｐＨで少なくとも５０％阻害する。ある特定の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と特異的に結合し、ＶＩＳＴＡの、その結合パートナーとの結合を、ｐＨ６．３未満であるｐＨで少なくとも５０％阻害する。ある特定の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と特異的に結合し、ＶＩＳＴＡの、その結合パートナーとの結合を、ｐＨ６．０未満であるｐＨで少なくとも５０％阻害する。ある特定の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と特異的に結合し、ＶＩＳＴＡの、その結合パートナーとの結合を、ｐＨ５．８未満であるｐＨで少なくとも５０％阻害する。ある特定の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と特異的に結合し、ＶＩＳＴＡの、その結合パートナーとの結合を、ｐＨ５．５未満であるｐＨで少なくとも５０％阻害する。ある特定の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と特異的に結合し、ＶＩＳＴＡの、その結合パートナーとの結合を、ｐＨ５．３未満であるｐＨで少なくとも５０％阻害する。ある特定の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と特異的に結合し、ＶＩＳＴＡの、その結合パートナーとの結合を、ｐＨ５．０未満であるｐＨで少なくとも５０％阻害する。
ある特定のＡｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と特異的に結合し、ＶＩＳＴＡの、その結合パートナーとの結合を、ｐＨ５．０～ｐＨ７．０の範囲内のｐＨで少なくとも５０％阻害する。ある特定のＡｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と特異的に結合し、ＶＩＳＴＡの、その結合パートナーとの結合を、ｐＨ５．０～ｐＨ６．５の範囲内のｐＨで少なくとも５０％阻害する。ある特定のＡｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と特異的に結合し、ＶＩＳＴＡの、その結合パートナーとの結合を、ｐＨ５．０～ｐＨ６．０の範囲内のｐＨで少なくとも５０％阻害する。ある特定のＡｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と特異的に結合し、ＶＩＳＴＡの、その結合パートナーとの結合を、ｐＨ５．５～ｐＨ７．０の範囲内のｐＨで少なくとも５０％阻害する。ある特定のＡｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と特異的に結合し、ＶＩＳＴＡの、その結合パートナーとの結合を、ｐＨ５．５～ｐＨ６．５の範囲内のｐＨで少なくとも５０％阻害する。ある特定のＡｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と特異的に結合し、ＶＩＳＴＡの、その結合パートナーとの結合を、ｐＨ６．０～６．５の範囲内のｐＨで少なくとも５０％阻害する。結合の阻害は、実施例に記載されるように決定され得る。
ＶＩＳＴＡ結合パートナーは、ＰＳＧＬ－１、例えば、ヒトＰＳＧＬ－１であり得る。ヒトＰＳＧＬ－１アイソフォームの配列は、本明細書において配列番号３～１０として提供されている。ＶＩＳＴＡは、シアリルルイス（ｓｉａｙｌ ｌｅｗｉｓ）Ｘを有するまたは有さないＰＳＧＬ－１と結合する。結合パートナーはまた、例えば、ある特定の細胞上に存在するヘパラン硫酸プロテオグリカンであり得る。
ＶＩＳＴＡ結合パートナーとの結合の阻害は、抗体の存在下および不在下での、ＶＩＳＴＡ（またはＶＩＳＴＡ ＥＣＤもしくはＶＩＳＴＡ ＩｇＶドメインもしくはＶＩＳＴＡ陽性細胞）の、ＶＩＳＴＡが結合する細胞、例えば、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、活性化されたまたは活性化されていないのいずれかの）、ＮＫ細胞またはＶＩＳＴＡが結合する他の細胞との結合の阻害を測定することによって決定され得る。ＶＩＳＴＡのその結合パートナーまたは結合パートナーを発現するＴ細胞との結合を阻害するか否かを調べるために使用できる例示的実験は、フローサイトメトリーアッセイ、例えば、以下を含むアッセイである：ドナー血液から得られたヒト末梢血単核細胞、バフィーコートまたはロイコパック（ｌｅｕｋｏｐａｋ）を、望ましいｐＨ、例えば、ＭＥＳを用いてｐＨ６．０に、およびＨＥＰＥＳを用いてｐＨ７．４に調整されたＨＢＳＳ＋１％ ＢＳＡからなるバッファーに再懸濁する。次いで、細胞を、２０μｇ／ｍＬの、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ（ＶＩＳＴＡ－Ｆｃ）に融合されたｈＶＩＳＴＡ ＥＣＤからなる組換えキメラタンパク質とともに、および変動する濃度の候補ＶＩＳＴＡ遮断抗体または対照抗体とともに４℃で３０分間インキュベートする。次いで、細胞を、所望のｐＨ、例えば、６．０または７．４のｐＨを維持しながら同一バッファーで２回洗浄し、ＶＩＳＴＡ－Ｆｃを認識するが、候補遮断抗体または対照抗体を認識せず、低減されたｐＨで安定である、フルオロフォアがコンジュゲートされた二次抗体と共に４℃でさらに３０分間インキュベートした。次いで、細胞を以前のように洗浄し、固定せず、ＢＤ Ｆｏｒｔｅｓｓａまたは他のフローサイトメーターで直ちに獲得した。結合の阻害は、例えば、実施例に記載されるように，決定され得る。
特定の実施形態では、本明細書において記載されるＡｂは、免疫応答、例えば、抗原特異的免疫応答を引き起こし得る、または増強し得る。ある特定の実施形態では、Ａｂは、特に、例えば、腫瘍微小環境において見出される酸性ｐＨで、Ｔ細胞活性を刺激する。Ｔ細胞活性の刺激は、例えば、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）において、または抗原提示細胞（天然または人工）およびＴ細胞を用いるインビトロアッセイにおいて測定され得る。Ｔ細胞活性の刺激はまた、例えば、実施例において記載されるＪｕｒｋａｔアッセイを使用して測定され得る。Ｔ細胞活性の刺激はまた、例えば、Ｔ細胞からのＩＦＮ－γ分泌を測定することによって、本明細書において他の実施例に記載されるように測定されることができ、これでは、ＩＦＮ－γ分泌の増強が、Ｔ細胞刺激を示す。活性化Ｔ細胞からの他のサイトカインの分泌も測定され得る。ある特定の実施形態では、例えば、実施例において記載されるようなＮＦ－ｋＢレベルなどの活性化Ｔ細胞のシグナル伝達が測定される。
特定の実施形態では、本明細書において記載されるＡｂは、細胞接着を阻害し、これは、実施例に記載されるように測定され得る。
抗ＶＩＳＴＡ Ａｂの活性はまた、特に、例えば、腫瘍微小環境において見出される酸性ｐＨで、単球アッセイ、ＡＤＣＣアッセイおよびＡＤＣＰアッセイにおいて示され得る。
ある特定の実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ Ａｂは、腫瘍モデル、例えば、ヒトＶＩＳＴＡノックイン腫瘍モデルにおいて腫瘍成長を阻害する。
本明細書において実施例において示されるように、抗体の薬物動態（ＰＫ）特性、すなわち半減期を増強するなどのための、エンドソームにおける抗ＶＩＳＴＡ Ａｂのリサイクルは、抗ＶＩＳＴＡ抗体が、酸性条件でＶＩＳＴＡと結合することを必要とする。したがって、低ｐＨ、例えば、本明細書においてさらに記載されるように、６．５以下のｐＨでＶＩＳＴＡと結合する抗ＶＩＳＴＡ Ａｂはまた、酸性ｐＨでＶＩＳＴＡと結合しないＶＩＳＴＡ抗体と比較して、より長い許容可能な半減期を有すると予測される。
例示的ｈＶＩＳＴＡ－ＥＣＤ結合Ａｂ
生理学的ｐＨまたは中性ｐＨと比較して酸性ｐＨで（例えば、酸性条件で）、ｈＶＩＳＴＡ（ＥＣＤ）と優先的に結合するＡｂが、本明細書において提供される。
ある特定の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、本明細書において提供される抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのうちいずれかのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（「ＶＨ」）を含む。ある特定の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、本明細書において提供される抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのうちいずれかのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、Ｐ１－０６１０２９またはＰ１－０６１０１５またはその後代、例えば、Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７５７、Ｐ１－０６８７５９、Ｐ１－０６８７６１、Ｐ１－０６８７６３、Ｐ１－０６８７６５、Ｐ１－０６８７６７、Ｐ１－０６８７６９、Ｐ１－０６８７７１、Ｐ１－０６８７７３、Ｐ１－０６８７７５、Ｐ１－０６９０５９、Ｐ１－０６９０６１、Ｐ１－０６９０６３、Ｐ１－０６９０６５、Ｐ１－０６９０６７、Ｐ１－０６９０６９、Ｐ１－０６９０７１、Ｐ１－０６９０７３、Ｐ１－０６９０７５、Ｐ１－０６９０７７、Ｐ１－０６１０１５、Ｐ１－０６８７３６、Ｐ１－０６８７３８、Ｐ１－０６８７４０、Ｐ１－０６８７４２、Ｐ１－０６８７４４、Ｐ１－０６８７６６、Ｐ１－０６８７４８、Ｐ１－０６８７５０、Ｐ１－０６８７５２ Ｐ１－０６８７５４、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、または実施例１７の表２２～３０に記載されるＶＩＳＴＡ．４（別名、４１Ｆ１１）由来抗体、例えば、ＶＩＳＴＡ．４、ＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４Ｇ、Ｐ１－０７０９７６（ＶＩＳＴＡ．４ ＶＨ＿Ｔ２８Ｐ、Ｙ５０Ｗ、Ｓ５５Ｅ、Ｄ９５Ｈ、Ｌ９６Ｅ、Ｐ９７Ｅ、Ｙ１００Ｅ；ＶＬ＿Ａ６４Ｇ）、Ｐ１－０７１７９９（Ｐ１－０７０９７６＿ＶＨ＿Ｈ９５Ｄ）、Ｐ１－０７１８０１（Ｐ１－０７０９７６＿ＶＨ＿Ｅ９７Ｐ）、またはＰ１－０６５３３３（ＶＩＳＴＡ．４ ＶＨ＿Ｔ２８Ｐ、Ｙ５０Ｗ、Ｓ５５Ｅ、Ｌ９６Ｅ、Ｙ１００Ｅ；ＶＬ＿Ａ６４Ｇ）、または実施例１７において開示される別の抗体のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３を含むＶＨを含む。これらの種の各々のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３は、以下の配列表において提供される上記の抗体種の各々のＶＨ配列のアミノ酸位置２６～３５（ＶＨ ＣＤＲ１）、５０～６６（ＶＨ ＣＤＲ２）および９９～１１０（ＶＨ ＣＤＲ３）を含む。ＣＤＲはまた、以下の配列表において提供される上記の抗体種のＶＨ配列の各々で下線が引かれており、太字である。
ある特定の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、本明細書において提供される抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのいずれかのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７５７、Ｐ１－０６８７５９、Ｐ１－０６８７６１、Ｐ１－０６８７６３、Ｐ１－０６８７６５、Ｐ１－０６８７６７、Ｐ１－０６８７６９、Ｐ１－０６８７７１、Ｐ１－０６８７７３、Ｐ１－０６８７７５、Ｐ１－０６９０５９、Ｐ１－０６９０６１、Ｐ１－０６９０６３、Ｐ１－０６９０６５、Ｐ１－０６９０６７、Ｐ１－０６９０６９、Ｐ１－０６９０７１、Ｐ１－０６９０７３、Ｐ１－０６９０７５、Ｐ１－０６９０７７、Ｐ１－０６１０１５、Ｐ１－０６８７３６、Ｐ１－０６８７３８、Ｐ１－０６８７４０、Ｐ１－０６８７４２、Ｐ１－０６８７４４、Ｐ１－０６８７６６、Ｐ１－０６８７４８、Ｐ１－０６８７５０、Ｐ１－０６８７５２ Ｐ１－０６８７５４、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、または実施例１７の表２２～３０に記載されるＶＩＳＴＡ．４（別名、４１Ｆ１１）由来抗体、例えば、ＶＩＳＴＡ．４、ＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４Ｇ、Ｐ１－０７０９７６（ＶＩＳＴＡ．４ ＶＨ＿Ｔ２８Ｐ、Ｙ５０Ｗ、Ｓ５５Ｅ、Ｄ９５Ｈ、Ｌ９６Ｅ、Ｐ９７Ｅ、Ｙ１００Ｅ；ＶＬ＿Ａ６４Ｇ）、Ｐ１－０７１７９９（Ｐ１－０７０９７６＿ＶＨ＿Ｈ９５Ｄ）、Ｐ１－０７１８０１（Ｐ１－０７０９７６＿ＶＨ＿Ｅ９７Ｐ）、またはＰ１０６５３３３（ＶＩＳＴＡ．４ ＶＨ＿Ｔ２８Ｐ、Ｙ５０Ｗ、Ｓ５５Ｅ、Ｌ９６Ｅ、Ｙ１００Ｅ；ＶＬ＿Ａ６４Ｇ）、または実施例１７において開示される別の抗体のうち１つのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬを含む。これらの種の各々のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３は、以下の配列表において提供される上記の抗体種の各々のＶＬ配列のアミノ酸位置２４～３５（ＶＬ ＣＤＲ１）、５１～５７（ＶＬ ＣＤＲ２）および９０～９８（ＶＬ ＣＤＲ３）を含む。ＣＤＲはまた、これらの配列の各々で下線が引かれ、太字である。
ある特定の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、本明細書において提供される抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのいずれかのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３を含むＶＨならびに本明細書において提供される抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、本明細書において提供される抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのいずれかのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＨならびに本明細書において提供される抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのいずれかのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、Ｐ１－０６１０２９またはＰ１－０６１０１５またはその後代、例えば、Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７５７、Ｐ１－０６８７５９、Ｐ１－０６８７６１、Ｐ１－０６８７６３、Ｐ１－０６８７６５、Ｐ１－０６８７６７、Ｐ１－０６８７６９、Ｐ１－０６８７７１、Ｐ１－０６８７７３、Ｐ１－０６８７７５、Ｐ１－０６９０５９、Ｐ１－０６９０６１、Ｐ１－０６９０６３、Ｐ１－０６９０６５、Ｐ１－０６９０６７、Ｐ１－０６９０６９、Ｐ１－０６９０７１、Ｐ１－０６９０７３、Ｐ１－０６９０７５、Ｐ１－０６９０７７、Ｐ１－０６１０１５、Ｐ１－０６８７３６、Ｐ１－０６８７３８、Ｐ１－０６８７４０、Ｐ１－０６８７４２、Ｐ１－０６８７４４、Ｐ１－０６８７６６、Ｐ１－０６８７４８、Ｐ１－０６８７５０、Ｐ１－０６８７５２ Ｐ１－０６８７５４、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、または実施例１７の表２２～３０に記載されるＶＩＳＴＡ．４（別名、４１Ｆ１１）由来抗体、例えば、ＶＩＳＴＡ．４、ＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４Ｇ、Ｐ１－０７０９７６（ＶＩＳＴＡ．４ ＶＨ＿Ｔ２８Ｐ、Ｙ５０Ｗ、Ｓ５５Ｅ、Ｄ９５Ｈ、Ｌ９６Ｅ、Ｐ９７Ｅ、Ｙ１００Ｅ；ＶＬ＿Ａ６４Ｇ）、Ｐ１－０７１７９９（Ｐ１－０７０９７６＿ＶＨ＿Ｈ９５Ｄ）、Ｐ１－０７１８０１（Ｐ１－０７０９７６＿ＶＨ＿Ｅ９７Ｐ）、またはＰ１０６５３３３（ＶＩＳＴＡ．４ ＶＨ＿Ｔ２８Ｐ、Ｙ５０Ｗ、Ｓ５５Ｅ、Ｌ９６Ｅ、Ｙ１００Ｅ；ＶＬ＿Ａ６４Ｇ）、または実施例１７において開示される別の抗体のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３を含むＶＨならびにＰ１－０６１０２９またはＰ１－０６１０１５またはその後代、例えば、Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７５７、Ｐ１－０６８７５９、Ｐ１－０６８７６１、Ｐ１－０６８７６３、Ｐ１－０６８７６５、Ｐ１－０６８７６７、Ｐ１－０６８７６９、Ｐ１－０６８７７１、Ｐ１－０６８７７３、Ｐ１－０６８７７５、Ｐ１－０６９０５９、Ｐ１－０６９０６１、Ｐ１－０６９０６３、Ｐ１－０６９０６５、Ｐ１－０６９０６７、Ｐ１－０６９０６９、Ｐ１－０６９０７１、Ｐ１－０６９０７３、Ｐ１－０６９０７５、Ｐ１－０６９０７７、Ｐ１－０６１０１５、Ｐ１－０６８７３６、Ｐ１－０６８７３８、Ｐ１－０６８７４０、Ｐ１－０６８７４２、Ｐ１－０６８７４４、Ｐ１－０６８７６６、Ｐ１－０６８７４８、Ｐ１－０６８７５０、Ｐ１－０６８７５２ Ｐ１－０６８７５４、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、または実施例１７の表２２～３０に記載されるＶＩＳＴＡ．４（別名、４１Ｆ１１）由来抗体、例えば、ＶＩＳＴＡ．４、ＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４Ｇ、Ｐ１－０７０９７６（ＶＩＳＴＡ．４ ＶＨ＿Ｔ２８Ｐ、Ｙ５０Ｗ、Ｓ５５Ｅ、Ｄ９５Ｈ、Ｌ９６Ｅ、Ｐ９７Ｅ、Ｙ１００Ｅ；ＶＬ＿Ａ６４Ｇ）、Ｐ１－０７１７９９（Ｐ１－０７０９７６＿ＶＨ＿Ｈ９５Ｄ）、Ｐ１－０７１８０１（Ｐ１－０７０９７６＿ＶＨ＿Ｅ９７Ｐ）、またはＰ１０６５３３３（ＶＩＳＴＡ．４ ＶＨ＿Ｔ２８Ｐ、Ｙ５０Ｗ、Ｓ５５Ｅ、Ｌ９６Ｅ、Ｙ１００Ｅ；ＶＬ＿Ａ６４Ｇ）、または実施例１７において開示される別の抗体のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
一部の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、
（ａ）Ｐ１－０６１０２９のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６１０２９のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｂ）Ｐ１－０６１０１５のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６１０１５のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｃ）Ｐ１－０６８７５７のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７５７のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｄ）Ｐ１－０６８７５９のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７５９のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｅ）Ｐ１－０６８７６１のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６１のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｆ）Ｐ１－０６８７６３のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６３のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｇ）Ｐ１－０６８７６５のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６５のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｈ）Ｐ１－０６８７６７のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６７のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｉ）Ｐ１－０６８７６９のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６９のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｊ）Ｐ１－０６８７７１のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７７１のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｋ）Ｐ１－０６８７７３のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７７３のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｌ）Ｐ１－０６８７７５のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７７５のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｍ）Ｐ１－０６９０５９のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６９０５９のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｎ）Ｐ１－０６９０６１のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６９０６１のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｏ）Ｐ１－０６９０６３のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６９０６３のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｐ）Ｐ１－０６９０６５のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６９０６５のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｑ）Ｐ１－０６９０６７のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６９０６７のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｒ）Ｐ１－０６９０６９のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６９０６９のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｓ）Ｐ１－０６９０７１のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６９０７１のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｔ）Ｐ１－０６９０７３のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６９０７３のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｕ）Ｐ１－０６９０７５のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６９０７５のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｖ）Ｐ１－０６９０７７のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６９０７７のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｗ）Ｐ１－０６８７３６のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７３６のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｘ）Ｐ１－０６８７３８のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７３８のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｙ）Ｐ１－０６８７４０のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７４０のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｚ）Ｐ１－０６８７４２のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７４２のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ａａ）Ｐ１－０６８７４４のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７４４のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｂｂ）Ｐ１－０６８７４６のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７４６のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｃｃ）Ｐ１－０６８７４８のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７４８のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｄｄ）Ｐ１－０６８７５０のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７５０のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｅｅ）Ｐ１－０６８７５２のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７５２のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｆｆ）Ｐ１－０６８７５４のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７５４のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｇｇ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５ＡのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５ＡのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｈｈ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００ＧのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６１＿Ｈ１００ＧのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｉｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６ＮのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６ＮのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｊｊ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６ＮのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６ＮのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｋｋ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０ＤのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０ＤのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｌｌ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｍｍ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００ＧのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００ＧのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｎｎ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００ＧのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００ＧのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｏｏ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６ＮのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６ＮのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｐｐ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｑｑ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｒｒ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｓｓ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｔｔ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｕｕ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２ＹのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２ＹのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｖｖ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５ＡのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５ＡのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｗｗ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６ＮのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６ＮのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｘｘ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２ＹのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２ＹのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｙｙ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００ＧのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００ＧのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｚｚ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ａａａ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２ＶのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２ＶのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｂｂｂ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２ＮのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２ＮのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｃｃｃ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５ＡのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５ＡのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｄｄｄ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２ＶのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２ＶのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｅｅｅ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ１０２ＶのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ１０２ＶのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｆｆｆ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５ＡのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５ＡのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｇｇｇ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２ＮのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２ＮのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｈｈｈ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２ＶのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２ＶのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｉｉｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０ＤのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０ＤのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｊｊｊ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｋｋｋ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２ＶのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２ＶのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｌｌｌ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｍｍｍ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｎｎｎ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｏｏｏ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｐｐｐ）ＶＩＳＴＡ．４のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＶＩＳＴＡ．４のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｑｑｑ）ＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４ＧのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４ＧのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｒｒｒ）Ｐ１－０７０９７６のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０７０９７６のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｓｓｓ）Ｐ１－０７１７９９のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０７１７９９のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｔｔｔ）Ｐ１－０７１８０１のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－Ｐ１－０７１８０１のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ、
（ｕｕｕ）Ｐ１－０６５３３３のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６５３３３のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含むＶＬ
を含み得る。
再度、以下の配列表は、ＩｇＧ１．３重鎖定常領域を有する（異なるＨＣ定常領域が表中に注記される場合を除く）上記で列挙される抗体の重鎖および軽鎖可変領域配列および全長重鎖および軽鎖配列を提供し、アミノ酸残基によるそのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ならびにＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の位置を注記し、各ＶＨおよびＶＬ配列中のＣＤＲに太字および下線が施されている。したがって、例えば、配列表において示される配列番号６７の太字の、下線が引かれたアミノ酸によって記されるように、Ｐ１－０６１０２９のＶＨ ＣＤＲ１は、配列番号６７のアミノ酸２６～３５を含み、一方で、ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号６７のアミノ酸５０～６６を含み、ＶＨ ＣＤＲ３は、配列番号６７のアミノ酸９９～１１０を含むなど。
ある特定の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、本明細書において提供される抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのいずれかのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨを含む。本明細書において提供される特定の抗体種の個々のＶＨ配列は、配列表において列挙される。ある特定の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、Ｐ１－０６１０２９またはＰ１－０６１０１５またはその後代、例えば、Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７５７、Ｐ１－０６８７５９、Ｐ１－０６８７６１、Ｐ１－０６８７６３、Ｐ１－０６８７６５、Ｐ１－０６８７６７、Ｐ１－０６８７６９、Ｐ１－０６８７７１、Ｐ１－０６８７７３、Ｐ１－０６８７７５、Ｐ１－０６９０５９、Ｐ１－０６９０６１、Ｐ１－０６９０６３、Ｐ１－０６９０６５、Ｐ１－０６９０６７、Ｐ１－０６９０６９、Ｐ１－０６９０７１、Ｐ１－０６９０７３、Ｐ１－０６９０７５、Ｐ１－０６９０７７、Ｐ１－０６１０１５、Ｐ１－０６８７３６、Ｐ１－０６８７３８、Ｐ１－０６８７４０、Ｐ１－０６８７４２、Ｐ１－０６８７４４、Ｐ１－０６８７６６、Ｐ１－０６８７４８、Ｐ１－０６８７５０、Ｐ１－０６８７５２ Ｐ１－０６８７５４、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、または実施例１７の表２２～３０に記載されるＶＩＳＴＡ．４（別名、４１Ｆ１１）由来抗体、例えば、ＶＩＳＴＡ．４、ＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４Ｇ、Ｐ１－０７０９７６（ＶＩＳＴＡ．４ ＶＨ＿Ｔ２８Ｐ、Ｙ５０Ｗ、Ｓ５５Ｅ、Ｄ９５Ｈ、Ｌ９６Ｅ、Ｐ９７Ｅ、Ｙ１００Ｅ；ＶＬ＿Ａ６４Ｇ）、Ｐ１－０７１７９９（Ｐ１－０７０９７６＿ＶＨ＿Ｈ９５Ｄ）、Ｐ１－０７１８０１（Ｐ１－０７０９７６＿ＶＨ＿Ｅ９７Ｐ）、またはＰ１－０６５３３３（ＶＩＳＴＡ．４ ＶＨ＿Ｔ２８Ｐ、Ｙ５０Ｗ、Ｓ５５Ｅ、Ｌ９６Ｅ、Ｙ１００Ｅ；ＶＬ＿Ａ６４Ｇ）、または実施例１７において開示される別の抗体のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨを含む。
ある特定の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、本明細書において提供される抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのいずれかのＶＨ ＣＤＲのアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、本明細書において提供される抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのいずれかのＶＨに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨを含む。ある特定の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７５７、Ｐ１－０６８７５９、Ｐ１－０６８７６１、Ｐ１－０６８７６３、Ｐ１－０６８７６５、Ｐ１－０６８７６７、Ｐ１－０６８７６９、Ｐ１－０６８７７１、Ｐ１－０６８７７３、Ｐ１－０６８７７５、Ｐ１－０６９０５９、Ｐ１－０６９０６１、Ｐ１－０６９０６３、Ｐ１－０６９０６５、Ｐ１－０６９０６７、Ｐ１－０６９０６９、Ｐ１－０６９０７１、Ｐ１－０６９０７３、Ｐ１－０６９０７５、Ｐ１－０６９０７７、Ｐ１－０６１０１５、Ｐ１－０６８７３６、Ｐ１－０６８７３８、Ｐ１－０６８７４０、Ｐ１－０６８７４２、Ｐ１－０６８７４４、Ｐ１－０６８７６６、Ｐ１－０６８７４８、Ｐ１－０６８７５０、Ｐ１－０６８７５２ Ｐ１－０６８７５４、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、または実施例１７の表２２～３０に記載されるＶＩＳＴＡ．４（別名、４１Ｆ１１）由来抗体、例えば、ＶＩＳＴＡ．４、ＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４Ｇ、Ｐ１－０７０９７６（ＶＩＳＴＡ．４ ＶＨ＿Ｔ２８Ｐ、Ｙ５０Ｗ、Ｓ５５Ｅ、Ｄ９５Ｈ、Ｌ９６Ｅ、Ｐ９７Ｅ、Ｙ１００Ｅ；ＶＬ＿Ａ６４Ｇ）、Ｐ１－０７１７９９（Ｐ１－０７０９７６＿ＶＨ＿Ｈ９５Ｄ）、Ｐ１－０７１８０１（Ｐ１－０７０９７６＿ＶＨ＿Ｅ９７Ｐ）、またはＰ１－０６５３３３（ＶＩＳＴＡ．４ ＶＨ＿Ｔ２８Ｐ、Ｙ５０Ｗ、Ｓ５５Ｅ、Ｌ９６Ｅ、Ｙ１００Ｅ；ＶＬ＿Ａ６４Ｇ）、または実施例１７において開示される別の抗体のＶＨのアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。
ある特定の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、本明細書において提供される抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのいずれかのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨを含む。ある特定の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、Ｐ１－０６１０２９またはＰ１－０６１０１５またはその後代、例えば、Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７５７、Ｐ１－０６８７５９、Ｐ１－０６８７６１、Ｐ１－０６８７６３、Ｐ１－０６８７６５、Ｐ１－０６８７６７、Ｐ１－０６８７６９、Ｐ１－０６８７７１、Ｐ１－０６８７７３、Ｐ１－０６８７７５、Ｐ１－０６９０５９、Ｐ１－０６９０６１、Ｐ１－０６９０６３、Ｐ１－０６９０６５、Ｐ１－０６９０６７、Ｐ１－０６９０６９、Ｐ１－０６９０７１、Ｐ１－０６９０７３、Ｐ１－０６９０７５、Ｐ１－０６９０７７、Ｐ１－０６１０１５、Ｐ１－０６８７３６、Ｐ１－０６８７３８、Ｐ１－０６８７４０、Ｐ１－０６８７４２、Ｐ１－０６８７４４、Ｐ１－０６８７６６、Ｐ１－０６８７４８、Ｐ１－０６８７５０、Ｐ１－０６８７５２ Ｐ１－０６８７５４、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、または実施例１７の表２２～３０に記載されるＶＩＳＴＡ．４（別名、４１Ｆ１１）由来抗体、例えば、ＶＩＳＴＡ．４、ＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４Ｇ、Ｐ１－０７０９７６（ＶＩＳＴＡ．４ ＶＨ＿Ｔ２８Ｐ、Ｙ５０Ｗ、Ｓ５５Ｅ、Ｄ９５Ｈ、Ｌ９６Ｅ、Ｐ９７Ｅ、Ｙ１００Ｅ；ＶＬ＿Ａ６４Ｇ）、Ｐ１－０７１７９９（Ｐ１－０７０９７６＿ＶＨ＿Ｈ９５Ｄ）、Ｐ１－０７１８０１（Ｐ１－０７０９７６＿ＶＨ＿Ｅ９７Ｐ）、またはＰ１－０６５３３３（ＶＩＳＴＡ．４ ＶＨ＿Ｔ２８Ｐ、Ｙ５０Ｗ、Ｓ５５Ｅ、Ｌ９６Ｅ、Ｙ１００Ｅ；ＶＬ＿Ａ６４Ｇ）、または実施例１７において開示される別の抗体のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨを含む。
ある特定の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、本明細書において提供される抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのいずれかのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、Ｐ１－０６１０２９またはＰ１－０６１０１５またはその後代、例えば、Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７５７、Ｐ１－０６８７５９、Ｐ１－０６８７６１、Ｐ１－０６８７６３、Ｐ１－０６８７６５、Ｐ１－０６８７６７、Ｐ１－０６８７６９、Ｐ１－０６８７７１、Ｐ１－０６８７７３、Ｐ１－０６８７７５、Ｐ１－０６９０５９、Ｐ１－０６９０６１、Ｐ１－０６９０６３、Ｐ１－０６９０６５、Ｐ１－０６９０６７、Ｐ１－０６９０６９、Ｐ１－０６９０７１、Ｐ１－０６９０７３、Ｐ１－０６９０７５、Ｐ１－０６９０７７、Ｐ１－０６１０１５、Ｐ１－０６８７３６、Ｐ１－０６８７３８、Ｐ１－０６８７４０、Ｐ１－０６８７４２、Ｐ１－０６８７４４、Ｐ１－０６８７６６、Ｐ１－０６８７４８、Ｐ１－０６８７５０、Ｐ１－０６８７５２ Ｐ１－０６８７５４、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、または実施例１７の表２２～３０に記載されるＶＩＳＴＡ．４（別名、４１Ｆ１１）由来抗体、例えば、ＶＩＳＴＡ．４、ＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４Ｇ、Ｐ１－０７０９７６（ＶＩＳＴＡ．４ ＶＨ＿Ｔ２８Ｐ、Ｙ５０Ｗ、Ｓ５５Ｅ、Ｄ９５Ｈ、Ｌ９６Ｅ、Ｐ９７Ｅ、Ｙ１００Ｅ；ＶＬ＿Ａ６４Ｇ）、Ｐ１－０７１７９９（Ｐ１－０７０９７６＿ＶＨ＿Ｈ９５Ｄ）、Ｐ１－０７１８０１（Ｐ１－０７０９７６＿ＶＨ＿Ｅ９７Ｐ）、またはＰ１－０６５３３３（ＶＩＳＴＡ．４ ＶＨ＿Ｔ２８Ｐ、Ｙ５０Ｗ、Ｓ５５Ｅ、Ｌ９６Ｅ、Ｙ１００Ｅ；ＶＬ＿Ａ６４Ｇ）、または実施例１７において開示される別の抗体のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
ある特定の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、本明細書において提供される抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのいずれかのＶＬ ＣＤＲのアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、本明細書において提供される抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのいずれかのＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＬを含む。ある特定の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７５７、Ｐ１－０６８７５９、Ｐ１－０６８７６１、Ｐ１－０６８７６３、Ｐ１－０６８７６５、Ｐ１－０６８７６７、Ｐ１－０６８７６９、Ｐ１－０６８７７１、Ｐ１－０６８７７３、Ｐ１－０６８７７５、Ｐ１－０６９０５９、Ｐ１－０６９０６１、Ｐ１－０６９０６３、Ｐ１－０６９０６５、Ｐ１－０６９０６７、Ｐ１－０６９０６９、Ｐ１－０６９０７１、Ｐ１－０６９０７３、Ｐ１－０６９０７５、Ｐ１－０６９０７７、Ｐ１－０６１０１５、Ｐ１－０６８７３６、Ｐ１－０６８７３８、Ｐ１－０６８７４０、Ｐ１－０６８７４２、Ｐ１－０６８７４４、Ｐ１－０６８７６６、Ｐ１－０６８７４８、Ｐ１－０６８７５０、Ｐ１－０６８７５２ Ｐ１－０６８７５４、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、または実施例１７の表２２～３０に記載されるＶＩＳＴＡ．４（別名、４１Ｆ１１）由来抗体、例えば、ＶＩＳＴＡ．４、ＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４Ｇ、Ｐ１－０７０９７６（ＶＩＳＴＡ．４ ＶＨ＿Ｔ２８Ｐ、Ｙ５０Ｗ、Ｓ５５Ｅ、Ｄ９５Ｈ、Ｌ９６Ｅ、Ｐ９７Ｅ、Ｙ１００Ｅ；ＶＬ＿Ａ６４Ｇ）、Ｐ１－０７１７９９（Ｐ１－０７０９７６＿ＶＨ＿Ｈ９５Ｄ）、Ｐ１－０７１８０１（Ｐ１－０７０９７６＿ＶＨ＿Ｅ９７Ｐ）、またはＰ１－０６５３３３（ＶＩＳＴＡ．４ ＶＨ＿Ｔ２８Ｐ、Ｙ５０Ｗ、Ｓ５５Ｅ、Ｌ９６Ｅ、Ｙ１００Ｅ；ＶＬ＿Ａ６４Ｇ）、または実施例１７において開示される別の抗体のＶＬのアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
ある特定の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、本明細書において提供される抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのいずれかのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬを含む。ある特定の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、Ｐ１－０６１０２９またはＰ１－０６１０１５またはその後代、例えば、Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７５７、Ｐ１－０６８７５９、Ｐ１－０６８７６１、Ｐ１－０６８７６３、Ｐ１－０６８７６５、Ｐ１－０６８７６７、Ｐ１－０６８７６９、Ｐ１－０６８７７１、Ｐ１－０６８７７３、Ｐ１－０６８７７５、Ｐ１－０６９０５９、Ｐ１－０６９０６１、Ｐ１－０６９０６３、Ｐ１－０６９０６５、Ｐ１－０６９０６７、Ｐ１－０６９０６９、Ｐ１－０６９０７１、Ｐ１－０６９０７３、Ｐ１－０６９０７５、Ｐ１－０６９０７７、Ｐ１－０６１０１５、Ｐ１－０６８７３６、Ｐ１－０６８７３８、Ｐ１－０６８７４０、Ｐ１－０６８７４２、Ｐ１－０６８７４４、Ｐ１－０６８７６６、Ｐ１－０６８７４８、Ｐ１－０６８７５０、Ｐ１－０６８７５２ Ｐ１－０６８７５４、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、または実施例１７の表２２～３０に記載されるＶＩＳＴＡ．４（別名、４１Ｆ１１）由来抗体、例えば、ＶＩＳＴＡ．４、ＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４Ｇ、Ｐ１－０７０９７６（ＶＩＳＴＡ．４ ＶＨ＿Ｔ２８Ｐ、Ｙ５０Ｗ、Ｓ５５Ｅ、Ｄ９５Ｈ、Ｌ９６Ｅ、Ｐ９７Ｅ、Ｙ１００Ｅ；ＶＬ＿Ａ６４Ｇ）、Ｐ１－０７１７９９（Ｐ１－０７０９７６＿ＶＨ＿Ｈ９５Ｄ）、Ｐ１－０７１８０１（Ｐ１－０７０９７６＿ＶＨ＿Ｅ９７Ｐ）、またはＰ１－０６５３３３（ＶＩＳＴＡ．４ ＶＨ＿Ｔ２８Ｐ、Ｙ５０Ｗ、Ｓ５５Ｅ、Ｌ９６Ｅ、Ｙ１００Ｅ；ＶＬ＿Ａ６４Ｇ）、または実施例１７において開示される別の抗体のＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬを含む。
ある特定の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、本明細書において提供される抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのいずれかのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨを含み、本明細書において提供される抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのいずれかのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬを含む。これらの実施形態のある特定のものでは、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、Ｐ１－０６１０２９またはＰ１－０６１０１５またはその後代、例えば、Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７５７、Ｐ１－０６８７５９、Ｐ１－０６８７６１、Ｐ１－０６８７６３、Ｐ１－０６８７６５、Ｐ１－０６８７６７、Ｐ１－０６８７６９、Ｐ１－０６８７７１、Ｐ１－０６８７７３、Ｐ１－０６８７７５、Ｐ１－０６９０５９、Ｐ１－０６９０６１、Ｐ１－０６９０６３、Ｐ１－０６９０６５、Ｐ１－０６９０６７、Ｐ１－０６９０６９、Ｐ１－０６９０７１、Ｐ１－０６９０７３、Ｐ１－０６９０７５、Ｐ１－０６９０７７、Ｐ１－０６１０１５、Ｐ１－０６８７３６、Ｐ１－０６８７３８、Ｐ１－０６８７４０、Ｐ１－０６８７４２、Ｐ１－０６８７４４、Ｐ１－０６８７６６、Ｐ１－０６８７４８、Ｐ１－０６８７５０、Ｐ１－０６８７５２ Ｐ１－０６８７５４、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、またはＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨならびにＰ１－０６１０２９またはＰ１－０６１０１５のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、Ｐ１－０６１０２９またはＰ１－０６１０１５またはその後代、例えば、Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７５７、Ｐ１－０６８７５９、Ｐ１－０６８７６１、Ｐ１－０６８７６３、Ｐ１－０６８７６５、Ｐ１－０６８７６７、Ｐ１－０６８７６９、Ｐ１－０６８７７１、Ｐ１－０６８７７３、Ｐ１－０６８７７５、Ｐ１－０６９０５９、Ｐ１－０６９０６１、Ｐ１－０６９０６３、Ｐ１－０６９０６５、Ｐ１－０６９０６７、Ｐ１－０６９０６９、Ｐ１－０６９０７１、Ｐ１－０６９０７３、Ｐ１－０６９０７５、Ｐ１－０６９０７７、Ｐ１－０６１０１５、Ｐ１－０６８７３６、Ｐ１－０６８７３８、Ｐ１－０６８７４０、Ｐ１－０６８７４２、Ｐ１－０６８７４４、Ｐ１－０６８７６６、Ｐ１－０６８７４８、Ｐ１－０６８７５０、Ｐ１－０６８７５２ Ｐ１－０６８７５４、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、またはＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＶＬを含む。ある特定の実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、実施例１７の表２２～３０に記載されるＶＩＳＴＡ．４（別名、４１Ｆ１１）由来抗体、例えば、ＶＩＳＴＡ．４、ＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４Ｇ、Ｐ１－０７０９７６（ＶＩＳＴＡ．４ ＶＨ＿Ｔ２８Ｐ、Ｙ５０Ｗ、Ｓ５５Ｅ、Ｄ９５Ｈ、Ｌ９６Ｅ、Ｐ９７Ｅ、Ｙ１００Ｅ；ＶＬ＿Ａ６４Ｇ）、Ｐ１－０７１７９９（Ｐ１－０７０９７６＿ＶＨ＿Ｈ９５Ｄ）、Ｐ１－０７１８０１（Ｐ１－０７０９７６＿ＶＨ＿Ｅ９７Ｐ）、またはＰ１－０６５３３３（ＶＩＳＴＡ．４ ＶＨ＿Ｔ２８Ｐ、Ｙ５０Ｗ、Ｓ５５Ｅ、Ｌ９６Ｅ、Ｙ１００Ｅ；ＶＬ＿Ａ６４Ｇ）、または実施例１７において開示される別の抗体のＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、本明細書において提供される抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのいずれかのＶＨ ＣＤＲのアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ならびに本明細書において提供される抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのいずれかのＶＬ ＣＤＲのアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、また、本明細書において提供される抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂのいずれかの対応するＶＨおよびＶＬに対して各々少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬも含む。ある特定の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、本明細書において提供される抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂの６つのＣＤＲすべてを含み、また、Ｐ１－０６１０２９またはＰ１－０６１０１５またはその後代、例えば、Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７５７、Ｐ１－０６８７５９、Ｐ１－０６８７６１、Ｐ１－０６８７６３、Ｐ１－０６８７６５、Ｐ１－０６８７６７、Ｐ１－０６８７６９、Ｐ１－０６８７７１、Ｐ１－０６８７７３、Ｐ１－０６８７７５、Ｐ１－０６９０５９、Ｐ１－０６９０６１、Ｐ１－０６９０６３、Ｐ１－０６９０６５、Ｐ１－０６９０６７、Ｐ１－０６９０６９、Ｐ１－０６９０７１、Ｐ１－０６９０７３、Ｐ１－０６９０７５、Ｐ１－０６９０７７、Ｐ１－０６１０１５、Ｐ１－０６８７３６、Ｐ１－０６８７３８、Ｐ１－０６８７４０、Ｐ１－０６８７４２、Ｐ１－０６８７４４、Ｐ１－０６８７６６、Ｐ１－０６８７４８、Ｐ１－０６８７５０、Ｐ１－０６８７５２ Ｐ１－０６８７５４、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦの、または実施例１７の表２２～３０に記載されるＶＩＳＴＡ．４（別名、４１Ｆ１１）由来抗体、例えば、ＶＩＳＴＡ．４、ＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４Ｇ、Ｐ１－０７０９７６（ＶＩＳＴＡ．４ ＶＨ＿Ｔ２８Ｐ、Ｙ５０Ｗ、Ｓ５５Ｅ、Ｄ９５Ｈ、Ｌ９６Ｅ、Ｐ９７Ｅ、Ｙ１００Ｅ；ＶＬ＿Ａ６４Ｇ）、Ｐ１－０７１７９９（Ｐ１－０７０９７６＿ＶＨ＿Ｈ９５Ｄ）、Ｐ１－０７１８０１（Ｐ１－０７０９７６＿ＶＨ＿Ｅ９７Ｐ）、またはＰ１－０６５３３３（ＶＩＳＴＡ．４ ＶＨ＿Ｔ２８Ｐ、Ｙ５０Ｗ、Ｓ５５Ｅ、Ｌ９６Ｅ、Ｙ１００Ｅ；ＶＬ＿Ａ６４Ｇ）、または実施例１７において開示される別の抗体のＶＨおよびＶＬなどの抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂの対応するＶＨおよびＶＬに対して各々少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列も含む。
ある特定の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、本明細書において提供される抗ｈＶＩＳＴＡ ＡｂのいずれかのＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＶＬを含む。ある特定の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、Ｐ１－０６１０２９またはＰ１－０６１０１５またはその後代、例えば、Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７５７、Ｐ１－０６８７５９、Ｐ１－０６８７６１、Ｐ１－０６８７６３、Ｐ１－０６８７６５、Ｐ１－０６８７６７、Ｐ１－０６８７６９、Ｐ１－０６８７７１、Ｐ１－０６８７７３、Ｐ１－０６８７７５、Ｐ１－０６９０５９、Ｐ１－０６９０６１、Ｐ１－０６９０６３、Ｐ１－０６９０６５、Ｐ１－０６９０６７、Ｐ１－０６９０６９、Ｐ１－０６９０７１、Ｐ１－０６９０７３、Ｐ１－０６９０７５、Ｐ１－０６９０７７、Ｐ１－０６１０１５、Ｐ１－０６８７３６、Ｐ１－０６８７３８、Ｐ１－０６８７４０、Ｐ１－０６８７４２、Ｐ１－０６８７４４、Ｐ１－０６８７６６、Ｐ１－０６８７４８、Ｐ１－０６８７５０、Ｐ１－０６８７５２ Ｐ１－０６８７５４、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、またはＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＶＬを含む。ある特定の実施形態では、ＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列は、各々、実施例１７の表２２～３０に記載されるＶＩＳＴＡ．４（別名、４１Ｆ１１）由来抗体、例えば、ＶＩＳＴＡ．４、ＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４Ｇ、Ｐ１－０７０９７６（ＶＩＳＴＡ．４ ＶＨ＿Ｔ２８Ｐ、Ｙ５０Ｗ、Ｓ５５Ｅ、Ｄ９５Ｈ、Ｌ９６Ｅ、Ｐ９７Ｅ、Ｙ１００Ｅ；ＶＬ＿Ａ６４Ｇ）、Ｐ１－０７１７９９（Ｐ１－０７０９７６＿ＶＨ＿Ｈ９５Ｄ）、Ｐ１－０７１８０１（Ｐ１－０７０９７６＿ＶＨ＿Ｅ９７Ｐ）、またはＰ１－０６５３３３（ＶＩＳＴＡ．４ ＶＨ＿Ｔ２８Ｐ、Ｙ５０Ｗ、Ｓ５５Ｅ、Ｌ９６Ｅ、Ｙ１００Ｅ；ＶＬ＿Ａ６４Ｇ）、または実施例１７において開示される別の抗体のＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列からなる。
抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、
（ａ）Ｐ１－０６１０２９のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６１０２９のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｂ）Ｐ１－０６１０１５のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６１０１５のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｃ）Ｐ１－０６８７５７のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７５７のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｄ）Ｐ１－０６８７５９のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７５９のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｅ）Ｐ１－０６８７６１のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｆ）Ｐ１－０６８７６３のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６３のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｇ）Ｐ１－０６８７６５のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６５のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｈ）Ｐ１－０６８７６７のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６７のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｉ）Ｐ１－０６８７６９のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６９のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｊ）Ｐ１－０６８７７１のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７７１のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｋ）Ｐ１－０６８７７３のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７７３のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｌ）Ｐ１－０６８７７５のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７７５のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｍ）Ｐ１－０６９０５９のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６９０５９のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｎ）Ｐ１－０６９０６１のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６９０６１のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｏ）Ｐ１－０６９０６３のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６９０６３のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｐ）Ｐ１－０６９０６５のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６９０６５のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｑ）Ｐ１－０６９０６７のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６９０６７のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｒ）Ｐ１－０６９０６９のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６９０６９のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｓ）Ｐ１－０６９０７１のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６９０７１のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｔ）Ｐ１－０６９０７３のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６９０７３のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｕ）Ｐ１－０６９０７５のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６９０７５のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｖ）Ｐ１－０６９０７７のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６９０７７のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｗ）Ｐ１－０６８７３６のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７３６のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｘ）Ｐ１－０６８７３８のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７３８のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｙ）Ｐ１－０６８７４０のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７４０のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｚ）Ｐ１－０６８７４２のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７４２のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ａａ）Ｐ１－０６８７４４のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７４４のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｂｂ）Ｐ１－０６８７４６のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７４６のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｃｃ）Ｐ１－０６８７４８のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７４８のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｄｄ）Ｐ１－０６８７５０のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７５０のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｅｅ）Ｐ１－０６８７５２のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７５２のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｆｆ）Ｐ１－０６８７５４のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７５４のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｇｇ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５ＡのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｈｈ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｈ１００ＧのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｉｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６ＮのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｊｊ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６ＮのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｋｋ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０ＤのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０ＤのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｌｌ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｍｍ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００ＧのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｎｎ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００ＧのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｏｏ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６ＮのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｐｐ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｑｑ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｒｒ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｓｓ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｔｔ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｕｕ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２ＹのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２ＹのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｖｖ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５ＡのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｗｗ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６ＮのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｘｘ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２ＹのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２ＹのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｙｙ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００ＧのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｚｚ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ａａａ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２ＶのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｂｂｂ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２ＮのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２ＮのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｃｃｃ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５ＡのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｄｄｄ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２ＶのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｅｅｅ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｄ１０２ＶのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｆｆｆ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５ＡのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｇｇｇ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２ＮのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２ＮのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｈｈｈ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２ＶのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｉｉｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０ＤのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０ＤのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｊｊｊ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｋｋｋ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２ＶのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｌｌｌ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｍｍｍ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｎｎｎ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、または
（ｏｏｏ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｐｐｐ）ＶＩＳＴＡ．４のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＶＩＳＴＡ．４のＶＬを含むＶＬ、
（ｑｑｑ）ＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４ＧのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４ＧのＶＬを含むＶＬ、
（ｒｒｒ）Ｐ１－０７０９７６のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０７０９７６のＶＬを含むＶＬ、
（ｓｓｓ）Ｐ１－０７１７９９のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０７１７９９のＶＬを含むＶＬ、
（ｔｔｔ）Ｐ１－０７１８０１のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－Ｐ１－０７１８０１のＶＬを含むＶＬ、
（ｕｕｕ）Ｐ１－０６５３３３のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨおよびＰ１－０６５３３３のＶＬを含むＶＬ
を含み得る。
抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、
（ａ）Ｐ１－０６１０２９のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６１０２９のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６１０２９のＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｂ）Ｐ１－０６１０１５のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６１０１５のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６１０１５のＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｃ）Ｐ１－０６８７５７のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７５７のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７５７のＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｄ）Ｐ１－０６８７５９のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７５９のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７５９のＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｅ）Ｐ１－０６８７６１のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６１のＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｆ）Ｐ１－０６８７６３のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６３のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６３のＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｇ）Ｐ１－０６８７６５のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６５のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６５のＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｈ）Ｐ１－０６８７６７のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６７のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６７のＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｉ）Ｐ１－０６８７６９のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６９のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６９のＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｊ）Ｐ１－０６８７７１のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７７１のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７７１のＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｋ）Ｐ１－０６８７７３のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７７３のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７７３のＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｌ）Ｐ１－０６８７７５のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７７５のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７７５のＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｍ）Ｐ１－０６９０５９のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６９０５９のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６９０５９のＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｎ）Ｐ１－０６９０６１のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６９０６１のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６９０６１のＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｏ）Ｐ１－０６９０６３のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６９０６３のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６９０６３のＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｐ）Ｐ１－０６９０６５のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６９０６５のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６９０６５のＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｑ）Ｐ１－０６９０６７のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６９０６７のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６９０６７のＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｒ）Ｐ１－０６９０６９のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６９０６９のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６９０６９のＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｓ）Ｐ１－０６９０７１のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６９０７１のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６９０７１のＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｔ）Ｐ１－０６９０７３のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６９０７３のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６９０７３のＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｕ）Ｐ１－０６９０７５のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６９０７５のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６９０７５のＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｖ）Ｐ１－０６９０７７のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６９０７７のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６９０７７のＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｗ）Ｐ１－０６８７３６のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７３６のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７３６のＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｘ）Ｐ１－０６８７３８のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７３８のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７３８のＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｙ）Ｐ１－０６８７４０のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７４０のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７４０のＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｚ）Ｐ１－０６８７４２のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７４２のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７４２のＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ａａ）Ｐ１－０６８７４４のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７４４のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７４４のＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｂｂ）Ｐ１－０６８７４６のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７４６のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７４６のＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｃｃ）Ｐ１－０６８７４８のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７４８のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７４８のＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｄｄ）Ｐ１－０６８７５０のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７５０のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７５０のＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｅｅ）Ｐ１－０６８７５２のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７５２のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７５２のＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｆｆ）Ｐ１－０６８７５４のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７５４のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７５４のＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｇｇ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５ＡのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５ＡのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５ＡのＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｈｈ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００ＧのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｈ１００ＧのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６１＿Ｈ１００ＧのＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｉｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６ＮのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６ＮのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６ＮのＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｊｊ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６ＮのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６ＮのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６ＮのＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｋｋ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０ＤのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０ＤのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０ＤのＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｌｌ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｍｍ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００ＧのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００ＧのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００ＧのＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｎｎ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００ＧのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００ＧのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００ＧのＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｏｏ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６ＮのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６ＮのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６ＮのＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｐｐ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦのＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｑｑ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｒｒ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｓｓ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｔｔ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｕｕ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２ＹのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２ＹのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２ＹのＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｖｖ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５ＡのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５ＡのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５ＡのＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｗｗ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６ＮのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６ＮのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６ＮのＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｘｘ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２ＹのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２ＹのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２ＹのＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｙｙ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００ＧのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００ＧのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００ＧのＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｚｚ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ａａａ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２ＶのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２ＶのＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｂｂｂ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２ＮのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２ＮのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２ＮのＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｃｃｃ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５ＡのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５ＡのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５ＡのＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｄｄｄ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２ＶのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２ＶのＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｅｅｅ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ１０２ＶのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｄ１０２ＶのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ１０２ＶのＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｆｆｆ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５ＡのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５ＡのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５ＡのＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｇｇｇ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２ＮのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２ＮのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２ＮのＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｈｈｈ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２ＶのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２ＶのＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｉｉｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０ＤのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０ＤのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０ＤのＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｊｊｊ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｋｋｋ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２ＶのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２ＶのＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｌｌｌ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｍｍｍ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｎｎｎ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦのＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、または
（ｏｏｏ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｐｐｐ）ＶＩＳＴＡ．４のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＶＩＳＴＡ．４のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＶＩＳＴＡ．４のＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｑｑｑ）ＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４ＧのＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４ＧのＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４ＧのＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｒｒｒ）Ｐ１－０７０９７６のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０７０９７６のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０７０９７６のＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｓｓｓ）Ｐ１－０７１７９９のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０７１７９９のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０７１７９９のＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、
（ｔｔｔ）Ｐ１－０７１８０１のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０７１８０１のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０７１８０１のＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、または
（ｕｕｕ）Ｐ１－０６５３３３のＶＨのＶＨ ＣＤＲを含むＶＨおよびＰ１－０６５３３３のＶＬ ＣＤＲを含むＶＬならびにＰ１－０７１７９９のＶＨおよびＶＬに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬアミノ酸配列
を含み得る。
抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、
（ａ）Ｐ１－０６１０２９のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６１０２９のＶＬからなるＶＬ、
（ｂ）Ｐ１－０６１０１５のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６１０１５のＶＬからなるＶＬ、
（ｃ）Ｐ１－０６８７５７のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７５７のＶＬからなるＶＬ、
（ｄ）Ｐ１－０６８７５９のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７５９のＶＬからなるＶＬ、
（ｅ）Ｐ１－０６８７６１のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６１のＶＬからなるＶＬ、
（ｆ）Ｐ１－０６８７６３のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６３のＶＬからなるＶＬ、
（ｇ）Ｐ１－０６８７６５のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６５のＶＬからなるＶＬ、
（ｈ）Ｐ１－０６８７６７のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６７のＶＬからなるＶＬ、
（ｉ）Ｐ１－０６８７６９のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６９のＶＬからなるＶＬ、
（ｊ）Ｐ１－０６８７７１のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７７１のＶＬからなるＶＬ、
（ｋ）Ｐ１－０６８７７３のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７７３のＶＬからなるＶＬ、
（ｌ）Ｐ１－０６８７７５のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７７５のＶＬからなるＶＬ、
（ｍ）Ｐ１－０６９０５９のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６９０５９のＶＬからなるＶＬ、
（ｎ）Ｐ１－０６９０６１のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６９０６１のＶＬからなるＶＬ、
（ｏ）Ｐ１－０６９０６３のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６９０６３のＶＬからなるＶＬ、
（ｐ）Ｐ１－０６９０６５のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６９０６５のＶＬからなるＶＬ、
（ｑ）Ｐ１－０６９０６７のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６９０６７のＶＬからなるＶＬ、
（ｒ）Ｐ１－０６９０６９のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６９０６９のＶＬからなるＶＬ、
（ｓ）Ｐ１－０６９０７１のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６９０７１のＶＬからなるＶＬ、
（ｔ）Ｐ１－０６９０７３のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６９０７３のＶＬからなるＶＬ、
（ｕ）Ｐ１－０６９０７５のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６９０７５のＶＬからなるＶＬ、
（ｖ）Ｐ１－０６９０７７のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６９０７７のＶＬからなるＶＬ、
（ｗ）Ｐ１－０６８７３６のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７３６のＶＬからなるＶＬ、
（ｘ）Ｐ１－０６８７３８のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７３８のＶＬからなるＶＬ、
（ｙ）Ｐ１－０６８７４０のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７４０のＶＬからなるＶＬ、
（ｚ）Ｐ１－０６８７４２のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７４２のＶＬからなるＶＬ、
（ａａ）Ｐ１－０６８７４４のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７４４のＶＬからなるＶＬ、
（ｂｂ）Ｐ１－０６８７４６のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７４６のＶＬからなるＶＬ、
（ｃｃ）Ｐ１－０６８７４８のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７４８のＶＬからなるＶＬ、
（ｄｄ）Ｐ１－０６８７５０のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７５０のＶＬからなるＶＬ、
（ｅｅ）Ｐ１－０６８７５２のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７５２のＶＬからなるＶＬ、
（ｆｆ）Ｐ１－０６８７５４のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７５４のＶＬからなるＶＬ、
（ｇｇ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５ＡのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬ、
（ｈｈ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｈ１００ＧのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬ、
（ｉｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６ＮのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬ、
（ｊｊ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６ＮのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬ、
（ｋｋ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０ＤのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿０６８７６１＿Ｅ３０ＤのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬ、
（ｌｌ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬ、
（ｍｍ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００ＧのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬ、
（ｎｎ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００ＧのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬ、
（ｏｏ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６ＮのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬ、
（ｐｐ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬ、
（ｑｑ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬ、
（ｒｒ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬ、
（ｓｓ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬ、
（ｔｔ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬ、
（ｕｕ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２ＹのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２ＹのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬ、
（ｖｖ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５ＡのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬ、
（ｗｗ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６ＮのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬ、
（ｘｘ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２ＹのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２ＹのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬ、
（ｙｙ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００ＧのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬ、
（ｚｚ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬ、
（ａａａ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２ＶのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬ、
（ｂｂｂ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２ＮのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２ＮのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬ、
（ｃｃｃ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５ＡのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬ、
（ｄｄｄ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２ＶのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬ、
（ｅｅｅ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｄ１０２ＶのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬ、
（ｆｆｆ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５ＡのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬ、
（ｇｇｇ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２ＮのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２ＮのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬ、
（ｈｈｈ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２ＶのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬ、
（ｉｉｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０ＤのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０ＤのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬ、
（ｊｊｊ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬ、
（ｋｋｋ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２ＶのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬ、
（ｌｌｌ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬ、
（ｍｍｍ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬ、
（ｎｎｎ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬ、または
（ｏｏｏ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬ、
（ｐｐｐ）ＶＩＳＴＡ．４のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＶＩＳＴＡ．４のＶＬからなるＶＬ、
（ｑｑｑ）ＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４ＧのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４ＧのＶＬからなるＶＬ、
（ｒｒｒ）Ｐ１－０７０９７６のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０７０９７６のＶＬからなるＶＬ、
（ｓｓｓ）Ｐ１－０７１７９９のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０７１７９９のＶＬからなるＶＬ、
（ｔｔｔ）Ｐ１－０７１８０１のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０７１８０１のＶＬからなるＶＬ、または
（ｕｕｕ）Ｐ１－０６５３３３のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨおよびＰ１－０６５３３３のＶＬからなるＶＬ
を含み得る。
ある特定の実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ Ａｂは、上記および本明細書において別の場所で記載された抗体の可変領域および／または可変領域ＣＤＲ１～３のいずれか、例えば、Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７５７、Ｐ１－０６８７５９、Ｐ１－０６８７６１、Ｐ１－０６８７６３、Ｐ１－０６８７６５、Ｐ１－０６８７６７、Ｐ１－０６８７６９、Ｐ１－０６８７７１、Ｐ１－０６８７７３、Ｐ１－０６８７７５、Ｐ１－０６９０５９、Ｐ１－０６９０６１、Ｐ１－０６９０６３、Ｐ１－０６９０６５、Ｐ１－０６９０６７、Ｐ１－０６９０６９、Ｐ１－０６９０７１、Ｐ１－０６９０７３、Ｐ１－０６９０７５、Ｐ１－０６９０７７、Ｐ１－０６１０１５、Ｐ１－０６８７３６、Ｐ１－０６８７３８、Ｐ１－０６８７４０、Ｐ１－０６８７４２、Ｐ１－０６８７４４、Ｐ１－０６８７６６、Ｐ１－０６８７４８、Ｐ１－０６８７５０、Ｐ１－０６８７５２ Ｐ１－０６８７５４、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦの、または実施例１７の表２２～３０に記載されるＶＩＳＴＡ．４（別名、４１Ｆ１１）由来抗体、例えば、ＶＩＳＴＡ．４、ＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４Ｇ、Ｐ１－０７０９７６（ＶＩＳＴＡ．４ ＶＨ＿Ｔ２８Ｐ、Ｙ５０Ｗ、Ｓ５５Ｅ、Ｄ９５Ｈ、Ｌ９６Ｅ、Ｐ９７Ｅ、Ｙ１００Ｅ；ＶＬ＿Ａ６４Ｇ）、Ｐ１－０７１７９９（Ｐ１－０７０９７６＿ＶＨ＿Ｈ９５Ｄ）、Ｐ１－０７１８０１（Ｐ１－０７０９７６＿ＶＨ＿Ｅ９７Ｐ）、またはＰ１－０６５３３３（ＶＩＳＴＡ．４ ＶＨ＿Ｔ２８Ｐ、Ｙ５０Ｗ、Ｓ５５Ｅ、Ｌ９６Ｅ、Ｙ１００Ｅ；ＶＬ＿Ａ６４Ｇ）、または実施例１７において開示される別の抗体の
（１）ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のうち１つもしくは複数、
（２）ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、
（３）ＶＨ、
（４）ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のうち１つもしくは複数およびＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のうち１つもしくは複数、
（５）ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ならびにＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、または
（６）ＶＨおよびＶＬ
を含み、抗ＶＩＳＴＡ Ａｂはまた、以下の節において記載されるように、ＩｇＧ抗体、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４抗体またはその修飾形態である。一部の実施形態では、定常領域は、エフェクター機能を有し、一部の実施形態では、定常領域には、エフェクターがない。ある特定の実施形態では、定常領域は、ＩｇＧ１．３のものである。
ある特定の実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ Ａｂは、上記および本明細書において別の場所で記載された抗体の可変領域および／または可変領域ＣＤＲ１～３のいずれか、例えば、Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７５７、Ｐ１－０６８７５９、Ｐ１－０６８７６１、Ｐ１－０６８７６３、Ｐ１－０６８７６５、Ｐ１－０６８７６７、Ｐ１－０６８７６９、Ｐ１－０６８７７１、Ｐ１－０６８７７３、Ｐ１－０６８７７５、Ｐ１－０６９０５９、Ｐ１－０６９０６１、Ｐ１－０６９０６３、Ｐ１－０６９０６５、Ｐ１－０６９０６７、Ｐ１－０６９０６９、Ｐ１－０６９０７１、Ｐ１－０６９０７３、Ｐ１－０６９０７５、Ｐ１－０６９０７７、Ｐ１－０６１０１５、Ｐ１－０６８７３６、Ｐ１－０６８７３８、Ｐ１－０６８７４０、Ｐ１－０６８７４２、Ｐ１－０６８７４４、Ｐ１－０６８７６６、Ｐ１－０６８７４８、Ｐ１－０６８７５０、Ｐ１－０６８７５２ Ｐ１－０６８７５４、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦの、または実施例１７の表２２～３０に記載されるＶＩＳＴＡ．４（別名、４１Ｆ１１）由来抗体、例えば、ＶＩＳＴＡ．４、ＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４Ｇ、Ｐ１－０７０９７６（ＶＩＳＴＡ．４ ＶＨ＿Ｔ２８Ｐ、Ｙ５０Ｗ、Ｓ５５Ｅ、Ｄ９５Ｈ、Ｌ９６Ｅ、Ｐ９７Ｅ、Ｙ１００Ｅ；ＶＬ＿Ａ６４Ｇ）、Ｐ１－０７１７９９（Ｐ１－０７０９７６＿ＶＨ＿Ｈ９５Ｄ）、Ｐ１－０７１８０１（Ｐ１－０７０９７６＿ＶＨ＿Ｅ９７Ｐ）、またはＰ１－０６５３３３（ＶＩＳＴＡ．４ ＶＨ＿Ｔ２８Ｐ、Ｙ５０Ｗ、Ｓ５５Ｅ、Ｌ９６Ｅ、Ｙ１００Ｅ；ＶＬ＿Ａ６４Ｇ）、または実施例１７において開示される別の抗体の
（１）ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のうち１つもしくは複数、
（２）ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、
（３）ＶＨ、
（４）ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のうち１つもしくは複数およびＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のうち１つもしくは複数、
（５）ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ならびにＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、または
（６）ＶＨおよびＶＬ
を含み、以下の特徴：
－ 酸性ｐＨ、例えば、ｐＨ６．０またはｐＨ６．５で、ｈＶＩＳＴＡ、例えば、ＥＣＤのヒスチジンが豊富な領域または配列番号２のアミノ酸残基３５～１２７を含むポリペプチドと特異的に結合すること、
－ 生理学的ｐＨまたは中性ｐＨ、例えば、ｐＨ７．４またはｐＨ７．０で、ｈＶＩＳＴＡ、例えば、ＥＣＤのヒスチジンが豊富な領域または配列番号２のアミノ酸残基３５～１２７を含むポリペプチドとの著しい結合を欠くこと、
－ 酸性ｐＨ、例えば、ｐＨ６．０またはｐＨ６．５で、ｃｙｎｏ ＶＩＳＴＡ、例えば、ＥＣＤのヒスチジンが豊富な領域と特異的に結合すること、
－ 生理学的ｐＨまたは中性ｐＨ、例えば、ｐＨ７．４またはｐＨ７．０で、ｃｙｎｏ ＶＩＳＴＡ、例えば、ＥＣＤのヒスチジンが豊富な領域との著しい結合を欠くこと、
－ 配列番号２を有するｈＶＩＳＴＡ ＥＣＤと比較して、以下のアミノ酸：Ｔ３５、Ｙ３７、Ｋ３８、Ｔ３９、Ｙ４１、Ｒ５４、Ｔ６１、Ｆ６２、Ｑ６３、Ｌ６５、Ｈ６６、Ｌ６７、Ｈ６８、Ｈ６９、Ｆ９７、Ｌ１１５、Ｖ１１７、Ｉ１１９、Ｈ１２１、Ｈ１２２、Ｓ１２４、Ｅ１２５、Ｒ１２７のうち１または複数で置換を有するｈＶＩＳＴＡ－ＥＣＤとの結合の低減を有すること、
－ Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７６１、Ｐ１－０６８７６７および／またはＰ１－０６１０１５と、ｈＶＩＳＴＡとの結合について交差競合すること、
－ 酸性ｐＨ、例えば、ｐＨ６．０またはｐＨ６．５で、ＶＩＳＴＡを発現するヒトＴ細胞（例えば、ナイーブまたは活性化Ｔ細胞）とのｈＶＩＳＴＡの結合を阻害すること、
－ 酸性ｐＨ、例えば、ｐＨ６．０またはｐＨ６．５でのシアリルルイス（ｓｉａｙｌ ｌｅｗｉｓ）Ｘを有するまたは有さないＰＳＧＬ－１とのｈＶＩＳＴＡの結合を阻害すること（例えば、配列番号１を有するｈＶＩＳＴＡのＨ１５３およびＨ１５４と、ＰＳＧＬ－１チロシンＹ４６およびＹ４８の間の相互作用を阻害すること）であって、ＰＳＧＬ－１が、シアリルルイス（ｓｉａｙｌ ｌｅｗｉｓ ）Ｘを有するまたは有さず、チロシンが、好ましくは、スルホチロシンである、阻害すること）、
－ 例えば、実施例に記載されるように測定された、カニクイザルにおける少なくとも１００、２００、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００または７００時間（例えば、少なくとも３５０時間）の平均滞留時間（ＭＲＴ）を有すること、
－ 例えば、Ｔ細胞増殖を増強すること、Ｔ細胞からのＩＦＮ－γ産生を増強することおよび／またはＴ細胞受容体媒介性ＮＦ－ｋＢシグナル伝達を刺激することによってＴ細胞活性化を刺激すること、
－ ＶＩＳＴＡ媒介性細胞：細胞接着を阻害すること、
－ ＶＩＳＴＡを発現する、ヒト腫瘍細胞のサンプルまたは炎症ヒト組織のサンプルにおいてｈＶＩＳＴＡと特異的に結合すること、
－ 例えば、実施例１５に記載される酵母表面ディスプレイおよびＮＧＳアッセイを使用して決定されるような、番号付けが成熟ｈＶＩＳＴＡのものである、１つまたは複数（例えば、少なくとも１～３、１～５、１～１０、５～１０、５～１５またはすべて）のエネルギー的に重要な接触残基Ｙ３７、Ｔ３９、Ｒ５４、Ｆ６２、Ｈ６６、Ｖ１１７、Ｉ１１９またはＳ１２４によってｈＶＩＳＴＡと接触すること、
－ 実施例１８に記載されるようにＭＳ－ＨＤＸによって決定されるように、領域２との結合が最強であってもよく、配列番号１を有するｈＶＩＳＴＡの領域１：５７ＬＧＰＶＤＫＧＨＤＶＴＦ６８（配列番号４９８）、領域２：８６ＲＲＰＩＲＮＬＴＦＱＤＬ９７（配列番号４９７）および領域３：１４８ＶＶＥＩＲＨＨＨＳＥＨＲＶＨＧＡＭＥ１６５（配列番号４９９）と結合すること、
－ 例えば、実施例において記載されるように、例えば、結晶学によって決定されるように、ｈＶＩＳＴＡのヒスチジンが豊富なβシート伸長と結合すること、
－ 例えば、実施例において記載されるように、例えば、結晶学によって決定されるように、例えば、水素結合によって、成熟ｈＶＩＳＴＡの（ｉ）Ｈ１２１、Ｈ１２２および／もしくはＨ１２３または（ｉｉ）Ｈ６６、Ｈ６８、Ｈ１２１、Ｈ１２２および／もしくはＨ１２３（４．０オングストローム（Å）以下の距離）と接触すること、
－ ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３中に位置する少なくとも１つまたは複数のグルタミン酸、アスパラギン酸またはヒスチジン残基によってｈＶＩＳＴＡと接触すること、
－ 低いまたは検出不可能なレベルのＴＭＤＤ、
－ 低いまたは検出不可能なレベルの好中球減少、ならびに
－ 特許請求の範囲において、および／または実施例において示される任意のさらなる特徴
のうち１つまたは複数をさらに含む。
ある特定の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、本明細書において提供される抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂのいずれかの重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）を含む。ある特定の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、ＩｇＧ１．３重鎖定常領域、例えば、Ｐ１－０６１０２９．ＩｇＧ１．３（配列番号６９）、Ｐ１－０６８７５７．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７５９．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６３．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６５．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６７．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６９．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７７１．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７７３．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７７５．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６９０５９．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６９０６１．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６９０６３．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６９０６５．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６９０６７．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６９０６９．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６９０７１．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６９０７３．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６９０７５．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６９０７７．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６１０１５．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７３６．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７３８．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７４０．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７４２．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７４４．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６６．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７４８．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７５０．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７５２．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７５４．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３、またはＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３を含む、配列表において以下に示されるようなＰ１－０６１０２９またはＰ１－０６１０１５またはその後代の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１．３重鎖定常領域を含んでもよい、実施例１７の表２２～３０に記載されるＶＩＳＴＡ．４（別名、４１Ｆ１１）由来抗体、例えば、ＶＩＳＴＡ．４、ＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４Ｇ、Ｐ１－０７０９７６（ＶＩＳＴＡ．４ ＶＨ＿Ｔ２８Ｐ、Ｙ５０Ｗ、Ｓ５５Ｅ、Ｄ９５Ｈ、Ｌ９６Ｅ、Ｐ９７Ｅ、Ｙ１００Ｅ；ＶＬ＿Ａ６４Ｇ）、Ｐ１－０７１７９９（Ｐ１－０７０９７６＿ＶＨ＿Ｈ９５Ｄ）、Ｐ１－０７１８０１（Ｐ１－０７０９７６＿ＶＨ＿Ｅ９７Ｐ）、またはＰ１－０６５３３３（ＶＩＳＴＡ．４ ＶＨ＿Ｔ２８Ｐ、Ｙ５０Ｗ、Ｓ５５Ｅ、Ｌ９６Ｅ、Ｙ１００Ｅ；ＶＬ＿Ａ６４Ｇ）、または実施例１７において開示される別の抗体の重鎖アミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、ＩｇＧ１．３重鎖定常領域を含む、本明細書において提供される抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂのいずれかの重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖ならびに本明細書において提供される抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂのいずれかの軽鎖のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、ＩｇＧ１．３ ＨＣ定常領域、例えば、Ｐ１－０６１０２９．ＩｇＧ１．３（配列番号６９）、Ｐ１－０６８７５７．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７５９．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６３．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６５．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６７．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６９．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７７１．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７７３．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７７５．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６９０５９．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６９０６１．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６９０６３．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６９０６５．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６９０６７．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６９０６９．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６９０７１．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６９０７３．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６９０７５．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６９０７７．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６１０１５．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７３６．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７３８．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７４０．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７４２．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７４４．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６６．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７４８．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７５０．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７５２．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７５４．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３、またはＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３を含む、Ｐ１－０６１０２９またはＰ１－０６１０１５またはその後代のＶＨのアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６１０２９またはＰ１－０６１０１５の軽鎖のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１．３ 抗体および同一抗体の軽鎖として、実施例１７の表２２～３０に記載されるＶＩＳＴＡ．４（別名、４１Ｆ１１）由来抗体、例えば、ＶＩＳＴＡ．４、ＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４Ｇ、Ｐ１－０７０９７６（ＶＩＳＴＡ．４ ＶＨ＿Ｔ２８Ｐ、Ｙ５０Ｗ、Ｓ５５Ｅ、Ｄ９５Ｈ、Ｌ９６Ｅ、Ｐ９７Ｅ、Ｙ１００Ｅ；ＶＬ＿Ａ６４Ｇ）、Ｐ１－０７１７９９（Ｐ１－０７０９７６＿ＶＨ＿Ｈ９５Ｄ）、Ｐ１－０７１８０１（Ｐ１－０７０９７６＿ＶＨ＿Ｅ９７Ｐ）、またはＰ１－０６５３３３（ＶＩＳＴＡ．４ ＶＨ＿Ｔ２８Ｐ、Ｙ５０Ｗ、Ｓ５５Ｅ、Ｌ９６Ｅ、Ｙ１００Ｅ；ＶＬ＿Ａ６４Ｇ）、または実施例１７において開示される別の抗体の重鎖を含む。
抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、
（ａ）Ｐ１－０６１０２９．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖（配列番号６９）およびＰ１－０６１０２９の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖（配列番号７０）、
（ｂ）Ｐ１－０６１０１５．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６１０１５の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｃ）Ｐ１－０６８７５７．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７５７の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｄ）Ｐ１－０６８７５９．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７５９の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｅ）Ｐ１－０６８７６１．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６１の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｆ）Ｐ１－０６８７６３．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６３の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｇ）Ｐ１－０６８７６５．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６５の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｈ）Ｐ１－０６８７６７．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６７の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｉ）Ｐ１－０６８７６９．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６９の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｊ）Ｐ１－０６８７７１．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７７１の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｋ）Ｐ１－０６８７７３．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７７３の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｌ）Ｐ１－０６８７７５．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７７５の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｍ）Ｐ１－０６９０５９．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６９０５９の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｎ）Ｐ１－０６９０６１．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６９０６１の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｏ）Ｐ１－０６９０６３．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６９０６３の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｐ）Ｐ１－０６９０６５．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６９０６５の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｑ）Ｐ１－０６９０６７．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６９０６７の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｒ）Ｐ１－０６９０６９．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６９０６９の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｓ）Ｐ１－０６９０７１．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６９０７１の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｔ）Ｐ１－０６９０７３．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６９０７３の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｕ）Ｐ１－０６９０７５．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６９０７５の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｖ）Ｐ１－０６９０７７．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６９０７７の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｗ）Ｐ１－０６８７３６．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７３６の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｘ）Ｐ１－０６８７３８．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７３８の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｙ）Ｐ１－０６８７４０．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７４０の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｚ）Ｐ１－０６８７４２．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７４２の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ａａ）Ｐ１－０６８７４４．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７４４の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｂｂ）Ｐ１－０６８７４６．ＩｇＧ１．３のＶＨのアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７４６の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｃｃ）Ｐ１－０６８７４８．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７４８の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｄｄ）Ｐ１－０６８７５０．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７５０の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｅｅ）Ｐ１－０６８７５２．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７５２の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｆｆ）Ｐ１－０６８７５４．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７５４の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｇｇ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｈｈ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｉｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｊｊ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｋｋ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｌｌ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｍｍ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｎｎ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｏｏ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｐｐ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｑｑ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｒｒ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｓｓ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｔｔ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｕｕ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｖｖ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｗｗ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｘｘ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｙｙ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｚｚ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ａａａ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｂｂｂ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｃｃｃ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｄｄｄ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｅｅｅ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｆｆｆ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｇｇｇ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｈｈｈ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｉｉｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｊｊｊ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｋｋｋ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｌｌｌ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｍｍｍ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｎｎｎ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｏｏｏ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｐｐｐ）ＶＩＳＴＡ．４．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＶＩＳＴＡ．４．ＩｇＧ１．３の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｑｑｑ）ＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４Ｇ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４Ｇ．ＩｇＧ１．３の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｒｒｒ）Ｐ１－０７０９７６．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０７０９７６．ＩｇＧ１．３の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｓｓｓ）Ｐ１－０７１７９９．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０７１７９９．ＩｇＧ１．３の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、または
（ｔｔｔ）Ｐ１－０７１８０１．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０７１８０１．ＩｇＧ１．３の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｕｕｕ）Ｐ１－０６５３３３．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖およびＰ１－０６５３３３．ＩｇＧ１．３の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖
を含み得る。
抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、
（ａ）Ｐ１－０６１０２９のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含む重鎖（ＨＣ）およびＰ１－０６１０２９のＬＣ ＣＤＲを含む軽鎖（ＬＣ）ならびにそれぞれ、Ｐ１－０６１０２９．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｂ）Ｐ１－０６１０１５のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６１０１５のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６１０１５．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｃ）Ｐ１－０６８７５７のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７５７のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７５７．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｄ）Ｐ１－０６８７５９のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７５９のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７５９．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｅ）Ｐ１－０６８７６１のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７６１のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７６１．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｆ）Ｐ１－０６８７６３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７６３のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７６３．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｇ）Ｐ１－０６８７６５のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７６５のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７６５．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｈ）Ｐ１－０６８７６７のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７６７のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７６７．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｉ）Ｐ１－０６８７６９のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７６９のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７６９．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｊ）Ｐ１－０６８７７１のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７７１のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７７１．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｋ）Ｐ１－０６８７７３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７７３のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７７３．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｌ）Ｐ１－０６８７７５のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７７５のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７７５．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｍ）Ｐ１－０６９０５９のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６９０５９のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６９０５９．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｎ）Ｐ１－０６９０６１のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６９０６１のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６９０６１．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｏ）Ｐ１－０６９０６３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６９０６３のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６９０６３．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｐ）Ｐ１－０６９０６５のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６９０６５のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６９０６５．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｑ）Ｐ１－０６９０６７のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６９０６７のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６９０６７．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｒ）Ｐ１－０６９０６９のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６９０６９のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６９０６９．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｓ）Ｐ１－０６９０７１のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６９０７１のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６９０７１．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｔ）Ｐ１－０６９０７３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６９０７３のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６９０７３．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｕ）Ｐ１－０６９０７５のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６９０７５のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６９０７５．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｖ）Ｐ１－０６９０７７のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６９０７７のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６９０７７．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｗ）Ｐ１－０６８３７６のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８３７６のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８３７６．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｘ）Ｐ１－０６８７３８のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７３８のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７３８．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｙ）Ｐ１－０６８７４０のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７４０のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７４０．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｚ）Ｐ１－０６８７４２のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７４２のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７４２．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ａａ）Ｐ１－０６８７４４のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７４４のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７４４．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｂｂ）Ｐ１－０６８７４６のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７４６のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７４６．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｃｃ）Ｐ１－０６８７４８のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７４８のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７４８．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｄｄ）Ｐ１－０６８７５０のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７５０のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７５０．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｅｅ）Ｐ１－０６８７５２のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７５２のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７５２．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｆｆ）Ｐ１－０６８７５４のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７５４のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７５４．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｇｇ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５ＡのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｈｈ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７６１＿Ｈ１００ＧのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｉｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６ＮのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｊｊ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６ＮのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｋｋ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０ＤのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｌｌ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ．＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｍｍ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００ＧのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｎｎ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００ＧのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｏｏ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６ＮのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｐｐ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｑｑ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｒｒ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｓｓ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｔｔ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｕｕ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２ＹのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｖｖ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５ＡのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｗｗ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６ＮのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｘｘ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２ＹのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｙｙ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００ＧのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｚｚ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ａａａ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２ＶのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｂｂｂ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２ＮのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｃｃｃ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５ＡのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｄｄｄ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６１０１５のＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｅｅｅ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７６７＿Ｄ１０２ＶのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｆｆｆ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５ＡのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｇｇｇ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２ＮのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｈｈｈ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２ＶのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｉｉｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０ＤのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｊｊｊ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｋｋｋ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２ＶのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｌｌｌ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｍｍｍ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｎｎｎ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｏｏｏ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含むＨＣおよびＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＬＣ ＣＤＲを含むＬＣならびにそれぞれ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｐｐｐ）ＶＩＳＴＡ．４のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含む重鎖（ＨＣ）およびＶＩＳＴＡ．４のＬＣ ＣＤＲを含む軽鎖（ＬＣ）ならびにそれぞれ、ＶＩＳＴＡ．４．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一あるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｑｑｑ）ＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４ＧのＨＣのＨＣ ＣＤＲを含む重鎖（ＨＣ）およびＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４ＧのＬＣ ＣＤＲを含む軽鎖（ＬＣ）ならびにそれぞれ、ＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４Ｇ．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一あるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｒｒｒ）Ｐ１－０７０９７６のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含む重鎖（ＨＣ）およびＰ１－０７０９７６のＬＣ ＣＤＲを含む軽鎖（ＬＣ）ならびにそれぞれ、Ｐ１－０７０９７６．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一あるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｓｓｓ）Ｐ１－０７１７９９のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含む重鎖（ＨＣ）およびＰ１－０７１７９９のＬＣ ＣＤＲを含む軽鎖（ＬＣ）ならびにそれぞれ、Ｐ１－０７１７９９．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一あるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｔｔｔ）Ｐ１－０７１８０１のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含む重鎖（ＨＣ）およびＰ１－０７１８０１のＬＣ ＣＤＲを含む軽鎖（ＬＣ）ならびにそれぞれ、Ｐ１－０７１８０１．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一あるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列、
（ｕｕｕ）Ｐ１－０６５３３３のＨＣのＨＣ ＣＤＲを含む重鎖（ＨＣ）およびＰ１－０６５３３３のＬＣ ＣＤＲを含む軽鎖（ＬＣ）ならびにそれぞれ、Ｐ１－０６５３３３．ＩｇＧ１．３のＨＣおよびＬＣに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一あるＨＣおよびＬＣアミノ酸配列
を含み得る。
一部の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、
（ａ）Ｐ１－０６１０２９．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６１０２９の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｂ）Ｐ１－０６１０１５．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６１０１５の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｃ）Ｐ１－０６８７５７．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７５７の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｄ）Ｐ１－０６８７５９．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７５９の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｅ）Ｐ１－０６８７６１．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７６１の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｆ）Ｐ１－０６８７６３．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７６３の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｇ）Ｐ１－０６８７６５．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７６５の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｈ）Ｐ１－０６８７６７．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７６７の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｉ）Ｐ１－０６８７６９．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７６９の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｊ）Ｐ１－０６８７７１．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７７１の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｋ）Ｐ１－０６８７７３．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７７３の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｌ）Ｐ１－０６８７７５．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７７５の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｍ）Ｐ１－０６９０５９．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６９０５９の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｎ）Ｐ１－０６９０６１．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６９０６１の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｏ）Ｐ１－０６９０６３．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６９０６３の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｐ）Ｐ１－０６９０６５．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６９０６５の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｑ）Ｐ１－０６９０６７．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６９０６７の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｒ）Ｐ１－０６９０６９．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６９０６９の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｓ）Ｐ１－０６９０７１．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６９０７１の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｔ）Ｐ１－０６９０７３．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６９０７３の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｕ）Ｐ１－０６９０７５．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６９０７５の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｖ）Ｐ１－０６９０７７．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６９０７７の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｗ）Ｐ１－０６８７３６の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７３６の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｘ）Ｐ１－０６８７３８．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７３８の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｙ）Ｐ１－０６８７４０．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７４０の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｚ）Ｐ１－０６８７４２．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７４２の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ａａ）Ｐ１－０６８７４４．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７４４の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｂｂ）Ｐ１－０６８７４６．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７４６の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｃｃ）Ｐ１－０６８７４８．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７４８の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｄｄ）Ｐ１－０６８７５０．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７５０の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｅｅ）Ｐ１－０６８７５２．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７５２の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｆｆ）Ｐ１－０６８７５４の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７５４の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｇｇ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｈｈ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｉｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｊｊ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｋｋ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｌｌ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｍｍ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｎｎ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｏｏ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｐｐ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｑｑ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｒｒ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｓｓ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｔｔ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｕｕ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｖｖ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｗｗ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｘｘ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｙｙ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｚｚ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ａａａ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｂｂｂ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｃｃｃ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｄｄｄ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｅｅｅ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｆｆｆ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｇｇｇ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｈｈｈ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｉｉｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｊｊｊ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｋｋｋ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｌｌｌ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｍｍｍ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｎｎｎ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｏｏｏ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｐｐｐ）ＶＩＳＴＡ．４．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＶＩＳＴＡ．４の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｑｑｑ）ＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｒｒｒ）Ｐ１－０７０９７６．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０７０９７６の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｓｓｓ）Ｐ１－０７１７９９．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０７１７９９の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｔｔｔ）Ｐ１－０７１８０１．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０７１８０１の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖、または
（ｕｕｕ）Ｐ１－０６５３３３．ＩｇＧ１．３の重鎖のアミノ酸配列からなる重鎖およびＰ１－０６５３３３の軽鎖のアミノ酸配列からなる軽鎖
を含み得る。
一部の実施形態では、本開示は、
上記で列挙された（ａ）～（ｕｕｕ）の重鎖のアミノ酸配列とそれに続くＬｙｓ残基からなる重鎖および
上記で列挙された（ａ）～（ｕｕｕ）の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖
を含み、重鎖および軽鎖アミノ酸配列が、上記で列挙された（ａ）～（ｕｕｕ）の中から同一抗体種から選択される抗ＶＩＳＴＡ ｍＡを企図する。
一部の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、本明細書における配列表中のＨＣ配列において提供されるように、ＩｇＧ１．３重鎖定常領域ではなく、本明細書における抗体種のＶＨアミノ酸配列を含む重鎖アミノ酸配列を含む場合があり（配列番号１６３を参照のこと）、抗体は、異なる重鎖定常領域配列、例えば、ヒト野生型ＩｇＧ１定常領域、例えば、ヒトＩｇＧ１アロタイプｆ（ＩｇＧ１ｆ）（配列番号１８２）または修飾されたヒトＩｇＧ１定常領域、例えば、ＩｇＧ１．１ｆ（配列番号１８３）または修飾されたヒトＩｇＧ１定常領域、例えば、ＩｇＧ１．Ｐ２３８Ｋ（配列番号１８４）を含む場合がある。したがって、本開示の実施形態は、
（ａ）（ｉ）Ｐ１－０６１０２９のＶＨのアミノ酸配列（配列番号６７）および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６１０２９（配列番号７０）の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｂ）（ｉ）Ｐ１－０６１０１５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６１０１５の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｃ）（ｉ）Ｐ１－０６８７５７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７５７の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｄ）（ｉ）Ｐ１－０６８７５９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７５９の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｅ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｆ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６３の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｇ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６５の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｈ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｉ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６９の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｊ）（ｉ）Ｐ１－０６８７７１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７７１の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｋ）（ｉ）Ｐ１－０６８７７３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７７３の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｌ）（ｉ）Ｐ１－０６８７７５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７７５の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｍ）（ｉ）Ｐ１－０６９０５９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６９０５９の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｎ）（ｉ）Ｐ１－０６９０６１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６９０６１の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｏ）（ｉ）Ｐ１－０６９０６３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６９０６３の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｐ）（ｉ）Ｐ１－０６９０６５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６９０６５の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｑ）（ｉ）Ｐ１－０６９０６７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６９０６７の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｒ）（ｉ）Ｐ１－０６９０６９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６９０６９の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｓ）（ｉ）Ｐ１－０６９０７１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６９０７１の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｔ）（ｉ）Ｐ１－０６９０７３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６９０７３の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｕ）（ｉ）Ｐ１－０６９０７５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６９０７５の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｖ）（ｉ）Ｐ１－０６９０７７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６９０７７の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｗ）（ｉ）Ｐ１－０６８７３６のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７３６の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｘ）（ｉ）Ｐ１－０６８７３８のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７３８の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｙ）（ｉ）Ｐ１－０６８７４０のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７４０の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｚ）（ｉ）Ｐ１－０６８７４２のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７４２の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ａａ）（ｉ）Ｐ１－０６８７４４のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７４４の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｂｂ）（ｉ）Ｐ１－０６８７４６のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７４６の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｃｃ）（ｉ）Ｐ１－０６８７４８のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７４８の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｄｄ）（ｉ）Ｐ１－０６８７５０のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７５０の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｅｅ）（ｉ）Ｐ１－０６８７５２のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７５２の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｆｆ）（ｉ）Ｐ１－０６８７５４のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７５４の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｇｇ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｈｈ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｉｉ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｊｊ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｋｋ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０ＤのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｌｌ（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｍｍ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｎｎ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｏｏ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｐｐ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｑｑ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｒｒ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｓｓ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｔｔ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｕｕ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２ＹのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｖｖ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｗｗ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｘｘ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２ＹのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｙｙ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｚｚ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ａａａ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｂｂｂ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｃｃｃ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｄｄｄ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｅｅｅ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｆｆｆ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｇｇｇ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｈｈｈ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｉｉｉ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０ＤのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｊｊｊ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｋｋｋ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｌｌｌ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｍｍｍ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｎｎｎ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｏｏｏ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｐｐｐ）（ｉ）ＶＩＳＴＡ．４のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＶＩＳＴＡ．４の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｑｑｑ）（ｉ）ＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｒｒｒ）（ｉ）Ｐ１－０７０９７６のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０７０９７６の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｓｓｓ）（ｉ）Ｐ１－０７１７９９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０７１７９９の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｔｔｔ）（ｉ）Ｐ１－０７１８０１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０７１８０１の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、または
（ｕｕｕ）（ｉ）Ｐ１－０６５３３３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６５３３３の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖
を含む抗ＶＩＳＴＡ Ａｂを含む。
ある特定の本開示の実施形態は、
（ａ）（ｉ）Ｐ１－０６１０２９のＶＨのアミノ酸配列（配列番号６７）および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６１０２９の軽鎖アミノ酸配列（配列番号７０）からなる軽鎖、
（ｂ）（ｉ）Ｐ１－０６１０１５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６１０１５の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｃ）（ｉ）Ｐ１－０６８７５７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７５７の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｄ）（ｉ）Ｐ１－０６８７５９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７５９の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｅ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｆ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６３の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｇ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６５の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｈ（ｉ）Ｐ１－０６８７６７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｉ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６９の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｊ）（ｉ）Ｐ１－０６８７７１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７７１の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｋ）（ｉ）Ｐ１－０６８７７３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７７３の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｌ）（ｉ）Ｐ１－０６８７７５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７７５の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｍ）（ｉ）Ｐ１－０６９０５９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６９０５９の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｎ）（ｉ）Ｐ１－０６９０６１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６９０６１の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｏ）（ｉ）Ｐ１－０６９０６３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６９０６３の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｐ）（ｉ）Ｐ１－０６９０６５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６９０６５の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｑ）（ｉ）Ｐ１－０６９０６７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６９０６７の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｒ）（ｉ）Ｐ１－０６９０６９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６９０６９の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｓ）（ｉ）Ｐ１－０６９０７１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６９０７１の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｔ）（ｉ）Ｐ１－０６９０７３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６９０７３の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｕ）（ｉ）Ｐ１－０６９０７５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６９０７５の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｖ）（ｉ）Ｐ１－０６９０７７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６９０７７の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｗ）（ｉ）Ｐ１－０６８７３６のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７３６の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｘ）（ｉ）Ｐ１－０６８７３８のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７３８の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｙ）（ｉ）Ｐ１－０６８７４０のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７４０の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｚ）（ｉ）Ｐ１－０６８７４２のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７４２の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ａａ）（ｉ）Ｐ１－０６８７４４のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７４４の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｂｂ）（ｉ）Ｐ１－０６８７４６のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７４６の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｃｃ）（ｉ）Ｐ１－０６８７４８のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７４８の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｄｄ）（ｉ）Ｐ１－０６８７５０のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７５０の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｅｅ）（ｉ）Ｐ１－０６８７５２のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７５２の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｆｆ）（ｉ）Ｐ１－０６８７５４のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７５４の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｇｇ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｈｈ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｉｉ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｊｊ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｋｋ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０ＤのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｌｌ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｍｍ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｎｎ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｏｏ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｐｐ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｑｑ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｒｒ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｓｓ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｔｔ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｕｕ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２ＹのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｖｖ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｗｗ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｘｘ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２ＹのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｙｙ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｚｚ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ａａａ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｂｂｂ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｃｃｃ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｄｄｄ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｅｅｅ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｆｆｆ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｇｇｇ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｈｈｈ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｉｉｉ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０ＤのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｊｊｊ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｋｋｋ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｌｌｌ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｍｍｍ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｎｎｎ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｏｏｏ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｐｐｐ）（ｉ）ＶＩＳＴＡ．４のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＶＩＳＴＡ．４の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｑｑｑ）（ｉ）ＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｒｒｒ）（ｉ）Ｐ１－０７０９７６のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０７０９７６の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｓｓｓ）（ｉ）Ｐ１－０７１７９９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０７１７９９の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｔｔｔ）（ｉ）Ｐ１－０７１８０１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０７１８０１の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、または
（ｕｕｕ）（ｉ）Ｐ１－０６５３３３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６５３３３の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖
を含む抗ＶＩＳＴＡ Ａｂを含み、ＶＨのＣ末端アミノ酸および配列番号１８２Ｎ末端アミノ酸は、ペプチド結合を形成する。
一部の実施形態では、本開示は、
（ｉ）上記で列挙された（ａ）～（ｕｕｕ）のＶＨ、（ｉｉ）配列番号１８２および（ｉｉｉ）Ｌｙｓ残基のアミノ酸配列からなり、ＶＨのＣ末端アミノ酸および配列番号１８２のＮ末端アミノ酸が、ペプチド結合を形成し、配列番号１８２のＣ末端アミノ酸が、ＬｙｓのＮ末端に接続される重鎖と、
上記で列挙された（ａ）～（ｕｕｕ）の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖と
を含み、
ＶＨおよび軽鎖アミノ酸配列が、上記で列挙された（ａ）～（ｕｕｕ）の中からの同一抗体種から選択される抗ＶＩＳＴＡ ｍＡｂを企図する。
ある特定の本開示の実施形態は、
（ａ）（ｉ）Ｐ１－０６１０２９のＶＨのアミノ酸配列（配列番号６７）および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６１０２９の軽鎖アミノ酸配列（配列番号７０）を含む軽鎖、
（ｂ）（ｉ）Ｐ１－０６１０１５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６１０１５の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｃ）（ｉ）Ｐ１－０６８７５７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７５７の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｄ）（ｉ）Ｐ１－０６８７５９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７５９の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｅ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｆ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６３の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｇ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６５の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｈ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｉ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６９の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｊ）（ｉ）Ｐ１－０６８７７１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７７１の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｋ）（ｉ）Ｐ１－０６８７７３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７７３の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｌ）（ｉ）Ｐ１－０６８７７５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７７５の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｍ）（ｉ）Ｐ１－０６９０５９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６９０５９の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｎ）（ｉ）Ｐ１－０６９０６１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６９０６１の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｏ）（ｉ）Ｐ１－０６９０６３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６９０６３の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｐ）（ｉ）Ｐ１－０６９０６５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６９０６５の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｑ）（ｉ）Ｐ１－０６９０６７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６９０６７の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｒ）（ｉ）Ｐ１－０６９０６９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６９０６９の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｓ）（ｉ）Ｐ１－０６９０７１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６９０７１の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｔ）（ｉ）Ｐ１－０６９０７３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６９０７３の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｕ）（ｉ）Ｐ１－０６９０７５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６９０７５の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｖ）（ｉ）Ｐ１－０６９０７７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６９０７７の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｗ）（ｉ）Ｐ１－０６８７３６のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７３６の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｘ）（ｉ）Ｐ１－０６８７３８のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７３８の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｙ）（ｉ）Ｐ１－０６８７４０のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７４０の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｚ）（ｉ）Ｐ１－０６８７４２のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７４２の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ａａ）（ｉ）Ｐ１－０６８７４４のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７４４の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｂｂ）（ｉ）Ｐ１－０６８７４６のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７４６の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｃｃ）（ｉ）Ｐ１－０６８７４８のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７４８の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｄｄ）（ｉ）Ｐ１－０６８７５０のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７５０の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｅｅ）（ｉ）Ｐ１－０６８７５２のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７５２の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｆｆ）（ｉ）Ｐ１－０６８７５４のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７５４の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｇｇ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｈｈ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｉｉ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｊｊ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｋｋ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０ＤのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびに０６８７６１＿Ｅ３０Ｄの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｌｌ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｍｍ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｎｎ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｏｏ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｐｐ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｑｑ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｒｒ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｓｓ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｔｔ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｕｕ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２ＹのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｖｖ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｗｗ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｘｘ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２ＹのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｙｙ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｚｚ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ａａａ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｂｂｂ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｃｃｃ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｄｄｄ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｅｅｅ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｆｆｆ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｇｇｇ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｈｈｈ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｉｉｉ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０ＤのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｊｊｊ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｋｋｋ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｌｌｌ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｍｍｍ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｎｎｎ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｏｏｏ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｐｐｐ）（ｉ）ＶＩＳＴＡ．４のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＶＩＳＴＡ．４の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｑｑｑ）（ｉ）ＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｒｒｒ）（ｉ）Ｐ１－０７０９７６のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０７０９７６の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｓｓｓ）（ｉ）Ｐ１－０７１７９９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０７１７９９の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｔｔｔ）（ｉ）Ｐ１－０７１８０１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０７１８０１の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、または
（ｕｕｕ）（ｉ）Ｐ１－０６５３３３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６５３３３の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖
を含む抗ＶＩＳＴＡ Ａｂを含む。
ある特定の本開示の実施形態は、
（ａ）（ｉ）Ｐ１－０６１０２９のＶＨのアミノ酸配列（配列番号６７）および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６１０２９の軽鎖アミノ酸配列（配列番号７０）からなる軽鎖、
（ｂ）（ｉ）Ｐ１－０６１０１５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６１０１５の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｃ）（ｉ）Ｐ１－０６８７５７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７５７の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｄ）（ｉ）Ｐ１－０６８７５９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７５９の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｅ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｆ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６３の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｇ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６５の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｈ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｉ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６９の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｊ）（ｉ）Ｐ１－０６８７７１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７７１の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｋ）（ｉ）Ｐ１－０６８７７３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７７３の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｌ）（ｉ）Ｐ１－０６８７７５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７７５の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｍ）（ｉ）Ｐ１－０６９０５９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６９０５９の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｎ）（ｉ）Ｐ１－０６９０６１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６９０６１の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｏ）（ｉ）Ｐ１－０６９０６３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６９０６３の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｐ）（ｉ）Ｐ１－０６９０６５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６９０６５の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｑ）（ｉ）Ｐ１－０６９０６７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６９０６７の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｒ）（ｉ）Ｐ１－０６９０６９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６９０６９の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｓ）（ｉ）Ｐ１－０６９０７１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６９０７１の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｔ）（ｉ）Ｐ１－０６９０７３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６９０７３の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｕ）（ｉ）Ｐ１－０６９０７５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６９０７５の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｖ）（ｉ）Ｐ１－０６９０７７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６９０７７の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｗ）（ｉ）Ｐ１－０６８７３６のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７３６の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｘ）（ｉ）Ｐ１－０６８７３８のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７３８の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｙ）（ｉ）Ｐ１－０６８７４０のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７４０の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｚ）（ｉ）Ｐ１－０６８７４２のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７４２の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ａａ）（ｉ）Ｐ１－０６８７４４のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７４４の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｂｂ）Ｐ１－０６８７４６のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７４６の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｃｃ）（ｉ）Ｐ１－０６８７４８のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７４８の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｄｄ）（ｉ）Ｐ１－０６８７５０のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７５０の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｅｅ）（ｉ）Ｐ１－０６８７５２のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７５２の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｆｆ）（ｉ）Ｐ１－０６８７５４のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７５４の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｇｇ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｈｈ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｉｉ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｊｊ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｋｋ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０ＤのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｌｌ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｍｍ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｎｎ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｏｏ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｐｐ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｑｑ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｒｒ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｓｓ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｔｔ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｕｕ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２ＹのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｖｖ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｗｗ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｘｘ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２ＹのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｙｙ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｚｚ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ａａａ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｂｂｂ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｃｃｃ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｄｄｄ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｅｅｅ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｆｆｆ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｇｇｇ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｈｈｈ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｉｉｉ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０ＤのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｊｊｊ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｋｋｋ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｌｌｌ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｍｍｍ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｎｎｎ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｏｏｏ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｐｐｐ）（ｉ）ＶＩＳＴＡ．４のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＶＩＳＴＡ．４の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｑｑｑ）（ｉ）ＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｒｒｒ）（ｉ）Ｐ１－０７０９７６のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０７０９７６の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｓｓｓ）（ｉ）Ｐ１－０７１７９９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０７１７９９の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｔｔｔ）（ｉ）Ｐ１－０７１８０１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０７１８０１の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｕｕｕ）（ｉ）Ｐ１－０６５３３３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６５３３３の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖
を含み、
ＶＨのＣ末端アミノ酸および配列番号１８３のＮ末端アミノ酸が、ペプチド結合を形成する抗ＶＩＳＴＡ Ａｂを含む。
一部の実施形態では、本開示は、
（ｉ）上記で列挙された（ａ）～（ｕｕｕ）のＶＨ、（ｉｉ）配列番号１８３および（ｉｉｉ）Ｌｙｓ残基のアミノ酸配列からなり、ＶＨのＣ末端アミノ酸および配列番号１８３のＮ末端アミノ酸がペプチド結合を形成し、配列番号１８３のＣ末端アミノ酸がＬｙｓのＮ末端に接続される重鎖、ならびに
上記で列挙された（ａ）～（ｕｕｕ）の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖
を含み、
ＶＨおよび軽鎖アミノ酸配列が、上記で列挙された（ａ）～（ｕｕｕ）の中からの同一抗体種から選択される抗ＶＩＳＴＡ ｍＡｂを企図する。
本開示のさらなる実施形態は、
（ａ）（ｉ）Ｐ１－０６１０２９のＶＨのアミノ酸配列（配列番号６７）および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６１０２９の軽鎖アミノ酸配列（配列番号７０）を含む軽鎖、
（ｂ）（ｉ）Ｐ１－０６１０１５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６１０１５の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｃ）（ｉ）Ｐ１－０６８７５７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７５７の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｄ）（ｉ）Ｐ１－０６８７５９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７５９の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｅ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｆ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６３の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｇ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６５の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｈ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｉ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６９の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｊ）（ｉ）Ｐ１－０６８７７１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７７１の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｋ）（ｉ）Ｐ１－０６８７７３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７７３の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｌ）（ｉ）Ｐ１－０６８７７５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７７５の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｍ）（ｉ）Ｐ１－０６９０５９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６９０５９の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｎ）（ｉ）Ｐ１－０６９０６１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６９０６１の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｏ）（ｉ）Ｐ１－０６９０６３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６９０６３の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｐ）（ｉ）Ｐ１－０６９０６５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６９０６５の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｑ）（ｉ）Ｐ１－０６９０６７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６９０６７の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｒ）（ｉ）Ｐ１－０６９０６９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６９０６９の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｓ）（ｉ）Ｐ１－０６９０７１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６９０７１の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｔ）（ｉ）Ｐ１－０６９０７３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６９０７３の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｕ）（ｉ）Ｐ１－０６９０７５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６９０７５の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｖ）（ｉ）Ｐ１－０６９０７７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６９０７７の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｗ）（ｉ）Ｐ１－０６８７３６のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７３６の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｘ）（ｉ）Ｐ１－０６８７３８のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７３８の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｙ）（ｉ）Ｐ１－０６８７４０のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７４０の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｚ）（ｉ）Ｐ１－０６８７４２のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７４２の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ａａ）（ｉ）Ｐ１－０６８７４４のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７４４の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｂｂ）Ｐ１－０６８７４６のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７４６の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｃｃ）（ｉ）Ｐ１－０６８７４８のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７４８の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｄｄ）（ｉ）Ｐ１－０６８７５０のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７５０の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｅｅ）（ｉ）Ｐ１－０６８７５２のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７５２の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｆｆ）（ｉ）Ｐ１－０６８７５４のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７５４の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｇｇ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｈｈ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｉｉ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｊｊ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｋｋ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０ＤのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｌｌ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｍｍ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｎｎ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｏｏ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｐｐ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｑｑ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｒｒ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｓｓ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｔｔ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｕｕ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２ＹのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｖｖ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｗｗ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｘｘ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２ＹのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｙｙ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｚｚ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ａａａ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｂｂｂ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｃｃｃ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｄｄｄ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｅｅｅ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｆｆｆ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｇｇｇ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｈｈｈ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｉｉｉ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０ＤのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｊｊｊ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｋｋｋ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｌｌｌ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｍｍｍ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｎｎｎ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｏｏｏ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｐｐｐ）（ｉ）ＶＩＳＴＡ．４のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＶＩＳＴＡ．４の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｑｑｑ）（ｉ）ＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｒｒｒ）（ｉ）Ｐ１－０７０９７６のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０７０９７６の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｓｓｓ）（ｉ）Ｐ１－０７１７９９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０７１７９９の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、
（ｔｔｔ）（ｉ）Ｐ１－０７１８０１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０７１８０１の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、または
（ｕｕｕ）（ｉ）Ｐ１－０６５３３３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含む重鎖ならびにＰ１－０６５３３３の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖
を含む抗ＶＩＳＴＡ Ａｂを含む。
本開示のなおさらなる実施形態は、
（ａ）（ｉ）Ｐ１－０６１０２９のＶＨのアミノ酸配列（配列番号６７）および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６１０２９の軽鎖アミノ酸配列（配列番号７０）からなる軽鎖、
（ｂ）（ｉ）Ｐ１－０６１０１５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６１０１５の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｃ）（ｉ）Ｐ１－０６８７５７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７５７の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｄ）（ｉ）Ｐ１－０６８７５９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７５９の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｅ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｆ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６３の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｇ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６５の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｈ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｉ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６９の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｊ）（ｉ）Ｐ１－０６８７７１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７７１の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｋ）（ｉ）Ｐ１－０６８７７３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７７３の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｌ）（ｉ）Ｐ１－０６８７７５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７７５の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｍ）（ｉ）Ｐ１－０６９０５９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６９０５９の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｎ）（ｉ）Ｐ１－０６９０６１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６９０６１の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｏ）（ｉ）Ｐ１－０６９０６３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６９０６３の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｐ）（ｉ）Ｐ１－０６９０６５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６９０６５の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｑ）（ｉ）Ｐ１－０６９０６７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６９０６７の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｒ）（ｉ）Ｐ１－０６９０６９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６９０６９の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｓ）（ｉ）Ｐ１－０６９０７１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６９０７１の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｔ）（ｉ）Ｐ１－０６９０７３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６９０７３の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｕ）（ｉ）Ｐ１－０６９０７５のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６９０７５の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｖ）（ｉ）Ｐ１－０６９０７７のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６９０７７の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｗ）（ｉ）Ｐ１－０６８７３６のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７３６の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｘ）（ｉ）Ｐ１－０６８７３８のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７３８の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｙ）（ｉ）Ｐ１－０６８７４０のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７４０の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｚ）（ｉ）Ｐ１－０６８７４２のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７４２の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ａａ）（ｉ）Ｐ１－０６８７４４のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７４４の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｂｂ）Ｐ１－０６８７４６の重鎖のアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７４６の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｃｃ）（ｉ）Ｐ１－０６８７４８のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７４８の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｄｄ）（ｉ）Ｐ１－０６８７５０のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７５０の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｅｅ）（ｉ）Ｐ１－０６８７５２のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７５２の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｆｆ）（ｉ）Ｐ１－０６８７５４のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７５４の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｇｇ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｈｈ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｉｉ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｊｊ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｋｋ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０ＤのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｌｌ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｍｍ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｎｎ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｏｏ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｐｐ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｑｑ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｒｒ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｓｓ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｔｔ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｕｕ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２ＹのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｖｖ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｗｗ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｘｘ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２ＹのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｙｙ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００ＧのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｚｚ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ａａａ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｂｂｂ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｃｃｃ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｄｄｄ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｅｅｅ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｆｆｆ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｇｇｇ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２ＮのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｈｈｈ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｉｉｉ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０ＤのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｊｊｊ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５ＡのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｋｋｋ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２ＶのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｌｌｌ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｍｍｍ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｎｎｎ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｏｏｏ）（ｉ）Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦの軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｐｐｐ）（ｉ）ＶＩＳＴＡ．４のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＶＩＳＴＡ．４の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｑｑｑ）（ｉ）ＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｒｒｒ）（ｉ）Ｐ１－０７０９７６のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０７０９７６の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｓｓｓ）（ｉ）Ｐ１－０７１７９９のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０７１７９９の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、
（ｔｔｔ）（ｉ）Ｐ１－０７１８０１のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０７１８０１の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖、または
（ｕｕｕ）（ｉ）Ｐ１－０６５３３３のＶＨのアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列からなる重鎖ならびにＰ１－０６５３３３の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖
を含み、
ＶＨのＣ末端アミノ酸および配列番号１８４のＮ末端アミノ酸が、ペプチド結合を形成する抗ＶＩＳＴＡ Ａｂを含む。
ある特定の実施形態では、抗体のＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列は、実施例１７の表２２～３０に記載されるＶＩＳＴＡ．４（別名、４１Ｆ１１）由来抗体、例えば、ＶＩＳＴＡ．４、ＶＩＳＴＡ．４＿ＶＬ＿Ａ６４Ｇ、Ｐ１－０７０９７６（ＶＩＳＴＡ．４ ＶＨ＿Ｔ２８Ｐ、Ｙ５０Ｗ、Ｓ５５Ｅ、Ｄ９５Ｈ、Ｌ９６Ｅ、Ｐ９７Ｅ、Ｙ１００Ｅ；ＶＬ＿Ａ６４Ｇ）、Ｐ１－０７１７９９（Ｐ１－０７０９７６＿ＶＨ＿Ｈ９５Ｄ）、Ｐ１－０７１８０１（Ｐ１－０７０９７６＿ＶＨ＿Ｅ９７Ｐ）、またはＰ１－０６５３３３（ＶＩＳＴＡ．４ ＶＨ＿Ｔ２８Ｐ、Ｙ５０Ｗ、Ｓ５５Ｅ、Ｌ９６Ｅ、Ｙ１００Ｅ；ＶＬ＿Ａ６４Ｇ）、または実施例１７において開示される別の抗体のものを含み、重鎖定常領域は、ＩｇＧ１．３、ＩｇＧ１、ＩｇＧ１．１ｆ、ＩｇＧ４、ＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ（ＥＵ番号付け）に由来する、または配列番号１８２、１８３または１８４のうちの１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、Ｐ１－０７０９７６のものに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるアミノ酸ＶＨ配列を含み得る、または１、２、３、４もしくは５つのアミノ酸置換、例えば、保存的もしくは復帰置換を別にしてＰ１－０７０９７６のＶＨのアミノ酸配列を含む。一部のこのような実施形態では、抗体は、抗体Ｐ１－０７０９７６のＶＨ ＣＤＲおよびＶＬ ＣＤＲを保持し、その結果、ＶＨ配列中の相違のすべてが、ＶＨのフレームワーク領域に限定される。一部の実施形態では、ＶＨは、Ｐ１－０７０９７６のものであるが、Ｈ９５ＤおよびＥ９７Ｐ復帰置換のうち一方または両方を含む。一部の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、Ｐ１－０７０９７６のものに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるアミノ酸ＶＬ配列を含み得る、または１、２、３、４もしくは５つのアミノ酸置換、例えば、保存的もしくは復帰置換を別にしてＰ１－０７０９７６、Ｐ１－０７１７９９もしくはＰ１－０７１８０１のＶＬのアミノ酸配列を含む。一部のこのような実施形態では、抗体は、抗体Ｐ１－０７０９７６のＶＨ ＣＤＲおよびＶＬ ＣＤＲを保持し、その結果、ＶＬ配列中の相違のすべてが、ＶＬのフレームワーク領域に限定される。
一部の実施形態では、本開示は、
（ｉ）上記で列挙された（ａ）～（ｕｕｕ）のＶＨ、（ｉｉ）配列番号１８４および（ｉｉｉ）Ｌｙｓ残基のアミノ酸配列からなり、ＶＨのＣ末端アミノ酸および配列番号１８４のＮ末端アミノ酸がペプチド結合を形成し、配列番号１８４のＣ末端アミノ酸が、ＬｙｓのＮ末端に接続される重鎖、ならびに
上記で列挙された（ａ）～（ｕｕｕ）の軽鎖アミノ酸配列からなる軽鎖
を含み、
ＶＨおよび軽鎖アミノ酸配列が、上記で列挙された（ａ）～（ｕｕｕ）の中からの同一抗体種から選択される抗ＶＩＳＴＡ ｍＡｂを企図する。
一部の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、Ｐ１－０６１０２９のものに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるアミノ酸ＶＨ配列を含む場合があり、抗体は、少なくとも１つの残基が、Ｄ、ＥまたはＨで置換されている、Ｐ１－０６１０２９のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、Ｐ１－０６１０２９のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の各々は、Ｄ、ＥまたはＨで置換された１、２または３つの残基を含有する。一部の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、Ｐ１－０６１０２９のものに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるアミノ酸ＶＨ配列を含む場合があり、抗体は、ＣＤＲ１のアミノ酸位置４、５または７に１つもしくは２つのＤもしくはＥ残基を含むＶＨ ＣＤＲ１を含み、および／またはＣＤＲ２の位置３、５、６もしくは７に１つ、２つもしくは３つのＤ、ＥもしくはＨ残基を有するＶＨ ＣＤＲ２を含み、および／またはＣＤＲ３の位置６、１２もしくは１４に１つ、２つもしくは３つのＤ、ＥもしくはＨ残基を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む（例えば、これらの実施形態内に入る抗体の以下の表５を参照のこと）。このような場合には、軽鎖可変領域は、Ｐ１－０６１０２９またはＰ１－０６１０１５またはその後代、例えば、Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７５７、Ｐ１－０６８７５９、Ｐ１－０６８７６１、Ｐ１－０６８７６３、Ｐ１－０６８７６５、Ｐ１－０６８７６７、Ｐ１－０６８７６９、Ｐ１－０６８７７１、Ｐ１－０６８７７３、Ｐ１－０６８７７５、Ｐ１－０６９０５９、Ｐ１－０６９０６１、Ｐ１－０６９０６３、Ｐ１－０６９０６５、Ｐ１－０６９０６７、Ｐ１－０６９０６９、Ｐ１－０６９０７１、Ｐ１－０６９０７３、Ｐ１－０６９０７５、Ｐ１－０６９０７７、Ｐ１－０６１０１５、Ｐ１－０６８７３６、Ｐ１－０６８７３８、Ｐ１－０６８７４０、Ｐ１－０６８７４２、Ｐ１－０６８７４４、Ｐ１－０６８７６６、Ｐ１－０６８７４８、Ｐ１－０６８７５０、Ｐ１－０６８７５２ Ｐ１－０６８７５４、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、またはＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３を含み得る、および／または軽鎖可変領域は、Ｐ１－０６１０２９またはＰ１－０６１０１５またはその後代、例えば、Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７５７、Ｐ１－０６８７５９、Ｐ１－０６８７６１、Ｐ１－０６８７６３、Ｐ１－０６８７６５、Ｐ１－０６８７６７、Ｐ１－０６８７６９、Ｐ１－０６８７７１、Ｐ１－０６８７７３、Ｐ１－０６８７７５、Ｐ１－０６９０５９、Ｐ１－０６９０６１、Ｐ１－０６９０６３、Ｐ１－０６９０６５、Ｐ１－０６９０６７、Ｐ１－０６９０６９、Ｐ１－０６９０７１、Ｐ１－０６９０７３、Ｐ１－０６９０７５、Ｐ１－０６９０７７、Ｐ１－０６１０１５、Ｐ１－０６８７３６、Ｐ１－０６８７３８、Ｐ１－０６８７４０、Ｐ１－０６８７４２、Ｐ１－０６８７４４、Ｐ１－０６８７６６、Ｐ１－０６８７４８、Ｐ１－０６８７５０、Ｐ１－０６８７５２ Ｐ１－０６８７５４、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、またはＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのものに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であり得る。
一部の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、Ｐ１－０６１０１５のものに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるアミノ酸ＶＨ配列を含む場合があり、抗体は、少なくとも１つの残基が、Ｄ、ＥまたはＨで置換されているＰ１－０６１０１５のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、Ｐ１－０６１０１５のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の各々は、Ｄ、ＥまたはＨで置換された１、２または３つの残基を含有する。一部の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、Ｐ１－０６１０１５のものに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるアミノ酸ＶＨ配列を含む場合があり、抗体は、ＣＤＲ１のアミノ酸位置６、７、８および９に１つまたは２つのＤ、ＥもしくはＨ残基を含むＶＨ ＣＤＲ１を含み、および／またはＣＤＲ２の位置１、２、４もしくは８～１１に１つ、２つもしくは３つのＤ、ＥもしくはＨ残基を有するＶＨ ＣＤＲ２を含み、および／またはＣＤＲ３の位置２、３、６、７もしくは１２に１つ、２つもしくは３つのＤ、ＥもしくはＨ残基を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む（例えば、これらの実施形態内に入る抗体の以下の表５を参照のこと）。このような場合には、軽鎖可変領域は、Ｐ１－０６１０２９またはＰ１－０６１０１５またはその後代、例えば、Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７５７、Ｐ１－０６８７５９、Ｐ１－０６８７６１、Ｐ１－０６８７６３、Ｐ１－０６８７６５、Ｐ１－０６８７６７、Ｐ１－０６８７６９、Ｐ１－０６８７７１、Ｐ１－０６８７７３、Ｐ１－０６８７７５、Ｐ１－０６９０５９、Ｐ１－０６９０６１、Ｐ１－０６９０６３、Ｐ１－０６９０６５、Ｐ１－０６９０６７、Ｐ１－０６９０６９、Ｐ１－０６９０７１、Ｐ１－０６９０７３、Ｐ１－０６９０７５、Ｐ１－０６９０７７、Ｐ１－０６１０１５、Ｐ１－０６８７３６、Ｐ１－０６８７３８、Ｐ１－０６８７４０、Ｐ１－０６８７４２、Ｐ１－０６８７４４、Ｐ１－０６８７６６、Ｐ１－０６８７４８、Ｐ１－０６８７５０、Ｐ１－０６８７５２ Ｐ１－０６８７５４、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、またはＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３を含み得る、および／または軽鎖可変領域は、Ｐ１－０６１０２９またはＰ１－０６１０１５またはその後代、例えば、Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７５７、Ｐ１－０６８７５９、Ｐ１－０６８７６１、Ｐ１－０６８７６３、Ｐ１－０６８７６５、Ｐ１－０６８７６７、Ｐ１－０６８７６９、Ｐ１－０６８７７１、Ｐ１－０６８７７３、Ｐ１－０６８７７５、Ｐ１－０６９０５９、Ｐ１－０６９０６１、Ｐ１－０６９０６３、Ｐ１－０６９０６５、Ｐ１－０６９０６７、Ｐ１－０６９０６９、Ｐ１－０６９０７１、Ｐ１－０６９０７３、Ｐ１－０６９０７５、Ｐ１－０６９０７７、Ｐ１－０６１０１５、Ｐ１－０６８７３６、Ｐ１－０６８７３８、Ｐ１－０６８７４０、Ｐ１－０６８７４２、Ｐ１－０６８７４４、Ｐ１－０６８７６６、Ｐ１－０６８７４８、Ｐ１－０６８７５０、Ｐ１－０６８７５２ Ｐ１－０６８７５４、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、またはＰ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦのものに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であり得る。
一部の実施形態では、抗ｈＶＩＳＴＡ Ａｂは、ＶＩＳＴＡ．４のものに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるアミノ酸ＶＨ配列を含む場合があり、抗体は、少なくとも１つの残基が、Ｄ、ＥまたはＨで置換されている、ＶＩＳＴＡ．４のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＶＩＳＴＡ．４のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の各々は、Ｄ、ＥまたはＨで置換された１、２または３つの残基を含有する。このような場合には、軽鎖可変領域は、ＶＩＳＴＡ．４もしくはＶＩＳＴＡ．４ Ａ６４ＧのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／もしくはＣＤＲ３を含み得る、ならびに／または軽鎖可変領域は、ＶＩＳＴＡ．４もしくはＶＩＳＴＡ．４ Ａ６４Ｇのものに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であり得る。このような抗体は、ＶＩＳＴＡ．４後代の例である。
一部の実施形態では、このような修飾された抗ｈＶＩＳＴＡ Ｐ１－０６１０２９またはＰ１－０６１０１５またはＶＩＳＴＡ．４後代は、以下の特徴：
－ 酸性ｐＨ、例えば、ｐＨ６．０またはｐＨ６．５で、ｈＶＩＳＴＡ、例えば、ＥＣＤのヒスチジンが豊富な領域または配列番号２のアミノ酸残基３５～１２７を含むポリペプチドと特異的に結合すること、
－ 生理学的ｐＨまたは中性ｐＨ、例えば、ｐＨ７．４またはｐＨ７．０で、ｈＶＩＳＴＡ、例えば、ＥＣＤのヒスチジンが豊富な領域または配列番号２のアミノ酸残基３５～１２７を含むポリペプチドとの著しい結合を欠くこと、
－ 酸性ｐＨ、例えば、ｐＨ６．０またはｐＨ６．５で、ｃｙｎｏ ＶＩＳＴＡ、例えば、ＥＣＤのヒスチジンが豊富な領域と特異的に結合すること、
－ 生理学的ｐＨまたは中性ｐＨ、例えば、ｐＨ７．４またはｐＨ７．０で、ｃｙｎｏ ＶＩＳＴＡ、例えば、ＥＣＤのヒスチジンが豊富な領域との著しい結合を欠くこと、
－ 配列番号２を有するｈＶＩＳＴＡ ＥＣＤと比較して、以下のアミノ酸：Ｔ３５、Ｙ３７、Ｋ３８、Ｔ３９、Ｙ４１、Ｒ５４、Ｔ６１、Ｆ６２、Ｑ６３、Ｌ６５、Ｈ６６、Ｌ６７、Ｈ６８、Ｈ６９、Ｆ９７、Ｌ１１５、Ｖ１１７、Ｉ１１９、Ｈ１２１、Ｈ１２２、Ｓ１２４、Ｅ１２５、Ｒ１２７のうち１または複数で置換を有するｈＶＩＳＴＡ－ＥＣＤとの結合の低減を有すること、
－ ｈＶＩＳＴＡと、Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７６１、Ｐ１－０６８７６７、Ｐ１－０６１０１５および／またはＶＩＳＴＡ．４との結合について交差競合すること、
－ 酸性ｐＨ、例えば、ｐＨ６．０またはｐＨ６．５で、ＶＩＳＴＡを発現するヒトＴ細胞（例えば、ナイーブまたは活性化Ｔ細胞）とのｈＶＩＳＴＡの結合を阻害すること、
－ 酸性ｐＨ、例えば、ｐＨ６．０またはｐＨ６．５でのシアリルルイス（ｓｉａｙｌ ｌｅｗｉｓ）Ｘを有するまたは有さないＰＳＧＬ－１とのｈＶＩＳＴＡの結合を阻害すること（例えば、配列番号１を有するｈＶＩＳＴＡのＨ１５３およびＨ１５４と、ＰＳＧＬ－１チロシンＹ４６およびＹ４８の間の相互作用を阻害すること）であって、ＰＳＧＬ－１が、シアリルルイス（ｓｉａｙｌ ｌｅｗｉｓ）Ｘを有するまたは有さず、チロシンが、好ましくは、スルホチロシンである、阻害すること、
－ 例えば、実施例に記載されるように測定された、カニクイザルにおける少なくとも１００、２００、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００または７００時間（例えば、少なくとも３５０時間）の平均滞留時間（ＭＲＴ）を有すること、
－ ＴＭＤＤの低いまたは検出不可能なレベル、
－ 好中球減少の低いまたは検出不可能なレベル、
－ 例えば、Ｔ細胞増殖を増強すること、Ｔ細胞からのＩＦＮ－γ産生を増強することおよび／またはＴ細胞受容体媒介性ＮＦ－ｋＢシグナル伝達を刺激することによって、Ｔ細胞活性化を刺激すること、
－ ＶＩＳＴＡ媒介性細胞：細胞接着を阻害すること、および
－ ＶＩＳＴＡを発現する、ヒト腫瘍細胞のサンプルまたは炎症ヒト組織のサンプルにおいてｈＶＩＳＴＡと特異的に結合すること、
－ 例えば、実施例１５に記載される酵母表面ディスプレイおよびＮＧＳアッセイを使用して決定されるような、番号付けが成熟ｈＶＩＳＴＡのものである、１つまたは複数（例えば、少なくとも１～３、１～５、１～１０、５～１０、５～１５またはすべて）のエネルギー的に重要な接触残基Ｙ３７、Ｔ３９、Ｒ５４、Ｆ６２、Ｈ６６、Ｖ１１７、Ｉ１１９またはＳ１２４によってｈＶＩＳＴＡと接触すること、
－ 実施例１８に記載されるようにＭＳ－ＨＤＸによって決定されるように、領域２との結合が最強であってもよく、配列番号１を有するｈＶＩＳＴＡの領域１：５７ＬＧＰＶＤＫＧＨＤＶＴＦ６８（配列番号４９８）、領域２：８６ＲＲＰＩＲＮＬＴＦＱＤＬ９７（配列番号４９７）および領域３：１４８ＶＶＥＩＲＨＨＨＳＥＨＲＶＨＧＡＭＥ１６５（配列番号４９９）と結合すること、
－ 例えば、実施例において記載されるように、例えば、結晶学によって決定されるように、ｈＶＩＳＴＡのヒスチジンが豊富なβシート伸長と結合すること、
－ 例えば、実施例において記載されるように、例えば、結晶学によって決定されるように、例えば、水素結合によって、成熟ｈＶＩＳＴＡの（ｉ）Ｈ１２１、Ｈ１２２および／もしくはＨ１２３または（ｉｉ）Ｈ６６、Ｈ６８、Ｈ１２１、Ｈ１２２および／もしくはＨ１２３（４．０オングストローム（Å）以下の距離）と接触すること、
－ ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３中に位置する少なくとも１つまたは複数のグルタミン酸、アスパラギン酸またはヒスチジン残基によってｈＶＩＳＴＡと接触すること、
－ および特許請求の範囲において、および／または実施例において示される任意のさらなる特徴
のうち１つまたは複数を有する。
例示的抗体定常領域
一部の実施形態では、本明細書において記載される抗体は、１つまたは複数のヒト定常領域を含む。一部の実施形態では、ヒト重鎖定常領域は、ＩｇＡ、ＩｇＧおよびＩｇＤから選択されるアイソタイプのものである。一部の実施形態では、ヒト軽鎖定常領域は、κおよびλから選択されるアイソタイプのものである。一部の実施形態では、本明細書において記載される抗体は、ヒトＩｇＧ定常領域、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４を含む。一部の実施形態では、本明細書において記載される抗体は、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。一部のこのような実施形態では、本明細書において記載される抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域中にＳ２４１Ｐ突然変異を含む。一部の実施形態では、本明細書において記載される抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域およびヒトκ軽鎖を含む。
重鎖定常領域の選択は、抗体がインビボでエフェクター機能を有するか否かを決定できる。このようなエフェクター機能は、一部の実施形態では、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を含み、抗体が結合される細胞の死滅をもたらし得る。一部の癌を処置する方法を含む処置の一部の方法では、細胞死滅は、例えば、抗体が、腫瘍の維持または成長を支持する細胞に結合する場合には望ましいものであり得る。腫瘍の維持または成長を支持し得る例示的細胞として、それだけに限らないが、腫瘍細胞自体、腫瘍への脈管構造の動員を補助する細胞および腫瘍成長もしくは腫瘍生存を支持もしくは促進するリガンド、増殖因子または対抗受容体を提供する細胞が挙げられる。一部の実施形態では、エフェクター機能が望ましい場合、ヒトＩｇＧ１重鎖またはヒトＩｇＧ３重鎖を含む抗体が選択される。
ある特定の実施形態では、本明細書において提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増大または減少するように変更される。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つまたは複数のグリコシル化部位が作出または除去されるようにアミノ酸配列を変更することによって好都合なことに達成され得る。
抗体がＦｃ領域を含む場合には、それに付着している炭水化物が変更される場合もある。哺乳動物細胞によって産生される天然抗体は、通常、一般に、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７へのＮ結合によって付着される分岐した二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Wright et al. TIBTECH 15:26-32 (1997)を参照のこと。オリゴ糖は、二分岐オリゴ糖構造の「ステム」中のＧｌｃＮＡｃと付着している、種々の炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトースおよびシアル酸ならびにフコースを含み得る。一部の実施形態では、ある特定の改善された特性を有する抗体を作出するために、本発明の抗体中のオリゴ糖の修飾が行われ得る。例えば、一部の実施形態では、抗体は、例えば、普通、フコース含有グリコシル化でグリコシル化されるＡｓｎ２９７などの残基を突然変異することによって脱フコシル化され得る。一部の実施形態では、本明細書における抗体は、脱フコシル化されたヒトＩｇＧ１定常領域を含み得る。
抗体に、二分されたオリゴ糖がさらに与えられており、例えば、抗体のＦｃ領域に付着している二分岐オリゴ糖が、ＧｌｃＮＡｃによって二分されている。このような抗体は、低減されたフコシル化および／または改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。このような抗体の例は、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８（Jean-Mairet et al.）；米国特許第６，６０２，６８４号（Umana et al.）；およびＵＳ２００５／０１２３５４６（Umana et al.）に記載されている。Ｆｃ領域に付着しているオリゴ糖中に少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体も提供される。このような抗体は、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。このような抗体は、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７（Patel et al.）；ＷＯ１９９８／５８９６４（Raju, S.）；およびＷＯ１９９９／２２７６４（Raju, S.）に記載されている。
抗体にはまた、アミノ末端リーダー伸長も与えられる。例えば、アミノ末端リーダー配列の１個または複数のアミノ酸残基が、抗体の任意の１つまたは複数の重鎖または軽鎖のアミノ末端に存在する。例示的アミノ末端リーダー伸長は、抗体の軽鎖の一方または両方に存在する３個のアミノ酸残基、ＶＨＳを含むかまたはからなる。
ヒトＦｃＲｎ高親和性結合ポリペプチドのインビボまたは血清半減期は、例えば、変異体Ｆｃ領域を有するポリペプチドが投与される、トランスジェニックマウスにおいて、ヒトにおいて、または非ヒト霊長類においてアッセイされ得る。例えばまた、Petkova et al. International Immunology 18(12):1759-1769 (2006)を参照のこと。
本発明の一部の実施形態では、脱フコシル化された抗体は、フコースを含む親抗体よりも、ヒトエフェクター細胞の存在下でより効率的にＡＤＣＣを媒介し、一般に、ＡＤＣＣ活性は、本明細書において開示されるようにインビトロＡＤＣＣアッセイを使用して決定され得るが、ＡＤＣＣ活性を決定するための他のアッセイまたは方法、例えば、動物モデルにおいてなども企図される。
ある特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、少なくとも１個のアミノ酸残基を、異なるアミノ酸残基と置き換えることによって変更されて、抗体のエフェクター機能を変更する。例えば、抗体がエフェクターリガンドに対して変更された親和性を有するが、親抗体の抗原結合能を保持するように、アミノ酸残基２３４、２３５、２３６、２３７、２９７、３１８、３２０、３２２、３３０、および／または３３１から選択される１個または複数のアミノ酸が、異なるアミノ酸残基と置き換えられ得る。親和性が変更されるエフェクターリガンドは、例えば、補体のＦｃ受容体またはＣ１成分であり得る。このアプローチは、両方ともWinter et al.による米国特許第５，６２４，８２１号および同５，６４８，２６０号にさらに詳細に記載されている。
一部の例では、抗体が、変更されたＣ１ｑ結合および／または低減されたもしくは消失された補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を有するように、アミノ酸残基３２９、３３１および３２２から選択される１個または複数のアミノ酸が、異なるアミノ酸残基と置き換えられ得る。このアプローチは、Idusogie et al.による米国特許第６，１９４，５５１号にさらに詳細に記載されている。
一部の例では、アミノ酸位置２３１および２３９内の１個または複数のアミノ酸残基が変更され、それによって、抗体の、補体を固定する能力を変更する。このアプローチは、Bodmer et al.によるＰＣＴ公開ＷＯ９４／２９３５１にさらに記載されている。一部の例では、Ｆｃ領域は、以下の位置で１個または複数のアミノ酸を修飾することによって、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を減少するように、および／またはＦｃγ受容体に対する親和性を減少するように修飾され得る：２３４、２３５、２３６、２３８、２３９、２４０、２４１、２４３、２４４、２４５、２４７、２４８、２４９、２５２、２５４、２５５、２５６、２５８、２６２、２６３、２６４、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１２、３１３、３１５、３２０、３２２、３２４、３２５、３２６、３２７、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、３７８、３８２、３８８、３８９、３９８、４１４、４１６、４１９、４３０、４３３、４３４、４３５、４３６、４３７、４３８または４３９。例示的置換として、２３６Ａ、２３９Ｄ、２３９Ｅ、２６８Ｄ、２６７Ｅ、２６８Ｅ、２６８Ｆ、３２４Ｔ、３３２Ｄおよび３３２Ｅが挙げられる。例示的変異体として、２３９Ｄ／３３２Ｅ、２３６Ａ／３３２Ｅ、２３６Ａ／２３９Ｄ／３３２Ｅ、２６８Ｆ／３２４Ｔ、２６７Ｅ／２６８Ｆ、２６７Ｅ／３２４Ｔおよび２６７Ｅ／２６８Ｆ７３２４Ｔが挙げられる。Ｆｃに行うことができる他のＦｃ修飾として、ＦｃγＲおよび／または補体タンパク質との結合を低減または切断し、それによって、Ｆｃ媒介性エフェクター機能、例えば、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰおよびＣＤＣを低減または切断するためのものがある。例示的修飾として、２３４、２３５、２３６、２３７、２６７、２６９、３２５、３２８、３３０および／または３３１位（例えば、３３０および３３１）の置換、挿入および欠失を含むが、それに限定されず、番号付けは、ＥＵインデックスに従う。例示的置換として、それだけには限らないが、２３４Ａ、２３５Ｅ、２３６Ｒ、２３７Ａ、２６７Ｒ、２６９Ｒ、３２５Ｌ、３２８Ｒ、３３０Ｓおよび３３１Ｓ（例えば、３３０Ｓおよび３３１Ｓ）が挙げられ、番号付けは、ＥＵインデックスに従う。Ｆｃ変異体は、２３６Ｒ／３２８Ｒを含み得る。ＦｃγＲおよび補体相互作用を低減するための他の修飾として、置換２９７Ａ、２３４Ａ、２３５Ａ、２３７Ａ、３１８Ａ、２２８Ｐ、２３６Ｅ、２６８Ｑ、３０９Ｌ、３３０Ｓ、３３１Ｓ、２２０Ｓ、２２６Ｓ、２２９Ｓ、２３８Ｓ、２３３Ｐおよび２３４Ｖならびに突然変異によるもしくは酵素的手段による、またはタンパク質をグリコシル化しない細菌などの生物における産生による２９７位でのグリコシル化の除去を含む。これらのおよび他の修飾は、Strohl, 2009, Current Opinion in Biotechnology 20:685-691において概説されている。例えば、ヒトＩｇＧ１．３ Ｆｃ定常領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＥおよびＧ２３７Ａ置換を含有する。ＩｇＧ１ｆａ．Ｐ２３８Ｋ（またはＩｇＧ１．Ｐ２３８Ｋ）は、Ｐ２３８Ｋ置換を含有する。ＩｇＧ１．１ｆは、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓ置換を含む（ｏｍｐｒｉｓｅｓ）。
阻害性受容体ＦｃγＲＩＩｂに対する親和性を増強するＦｃ変異体も使用され得る。このような変異体は、例えば、Ｂ細胞および単球を含むＦｃγＲＩＩｂ細胞と関連する免疫調節性活性を有するＦｃ融合タンパク質を提供し得る。一実施形態では、Ｆｃ変異体は、１つまたは複数の活性化受容体と関連するＦｃγＲＩＩｂに対する増強された親和性を選択的に提供する。ＦｃγＲＩＩｂとの結合を変更するための修飾として、ＥＵインデックスに従う２３４、２３５、２３６、２３７、２３９、２６６、２６７、２６８、３２５、３２６、３２７、３２８、３３０、３３１および３３２からなる群から選択される位置に１つまたは複数の修飾が挙げられる。ＦｃγＲｌｌｂ親和性を増強するための例示的置換として、それだけには限らないが、２３４Ａ、２３４Ｄ、２３４Ｅ、２３４Ｆ、２３４Ｗ、２３５Ｄ、２３５Ｅ、２３５Ｆ、２３５Ｒ、２３５Ｙ、２３６Ｄ、２３６Ｎ、２３７Ａ、２３７Ｄ、２３７Ｎ、２３９Ｄ、２３９Ｅ、２６６Ｍ、２６７Ｄ、２６７Ｅ、２６８Ｄ、２６８Ｅ、３２７Ｄ、３２７Ｅ、３２８Ｆ、３２８Ｗ、３２８Ｙ、３３０Ｓ、３３１Ｓ、および３３２Ｅが挙げられる。例示的置換として、２３５Ｙ、２３６Ｄ、２３９Ｄ、２６６Ｍ、２６７Ｅ、２６８Ｄ、２６８Ｅ、３２８Ｆ、３２８Ｗおよび３２８Ｙが挙げられる。ＦｃγＲＩＩｂとの結合を増強するための他のＦｃ変異体として、２３５Ｙ／２６７Ｅ、２３６Ｄ／２６７Ｅ、２３９Ｄ／２６８Ｄ、２３９Ｄ／２６７Ｅ、２６７Ｅ／２６８Ｄ、２６７Ｅ／２６８Ｅおよび２６７Ｅ／３２８Ｆが挙げられる。
ＦｃγＲおよび補体相互作用を増強するための他の修飾として、それだけには限らないが、置換２９８Ａ、３３３Ａ、３３４Ａ、３２６Ａ、２４７１、３３９Ｄ、３３９Ｑ、２８０Ｈ、２９０Ｓ、２９８Ｄ、２９８Ｖ、２４３Ｌ、２９２Ｐ、３００Ｌ、３９６Ｌ、３０５１および３９６Ｌが挙げられる。これらおよび他の修飾は、Strohl, 2009, Current Opinion in Biotechnology 20:685-691に概説されている。Ｆｃγ受容体との結合を増大するＦｃ修飾は、Ｆｃ領域のアミノ酸位置２３８、２３９、２４８、２４９、２５２、２５４、２５５、２５６、２５８、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７９、２８０、２８３、２８５、２９８、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３０１、３０３、３０５、３０７、３１２、３１５、３２４、３２７、３２９、３３０、３３５、３３７、３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、３７９、３８２、３８８、３８９、３９８、４１４、４１６、４１９、４３０、４３４、４３５、４３７、４３８または４３９のうち任意の１つまたは複数でのアミノ酸修飾が挙げられ、Ｆｃ領域における残基の番号付けは、特許公開ＷＯ００／４２０７２におけるようにＥＵインデックスのものである。
適宜、Ｆｃ領域は、当業者に公知のさらなるおよび／または代替位置に天然に存在しないアミノ酸残基を含み得る（例えば、米国特許第５，６２４，８２１号、同６，２７７，３７５号、同６，７３７，０５６号、同６，１９４，５５１号、同７，３１７，０９１号、同８，１０１，７２０号、ＰＣＸ特許公開ＷＯ００／４２０７２、ＷＯ０１／５８９５７、ＷＯ０２／０６９１９、ＷＯ０４／０１６７５０、ＷＯ０４／０２９２０７、ＷＯ０４／０３５７５２、ＷＯ０４／０７４４５５、ＷＯ０４／０９９２４９、ＷＯ０４／０６３３５１、ＷＯ０５／０７０９６３、ＷＯ０５／０４０２１７、ＷＯ０５／０９２９２５およびＷＯ０６／０２０１１４を参照のこと）。
Ｆｃ領域のそのリガンドに対する親和性および結合特性は、それだけに限らないが、平衡法（例えば、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ））または動態学（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ解析）および他の方法、例えば、間接結合アッセイ、競合阻害アッセイ、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）、ゲル電気泳動およびクロマトグラフィー（例えば、ゲル濾過）を含む、当技術分野で公知のさまざまなインビトロアッセイ法（生化学または免疫学ベースのアッセイ）によって決定され得る。これらおよび他の方法は、調べられている成分のうち１つまたは複数上にある標識を利用でき、および／またはそれだけには限らないが発色性、蛍光、発光または同位体標識を含むさまざまな検出法を使用できる。結合親和性および動態学の詳細な説明は、抗体－免疫原相互作用に焦点を当てているPaul, W. E., ed., Fundamental immunology, 4th Ed., Lippincott-Raven, Philadelphia (1999)に見出すことができる。
ある特定の実施形態では、抗体は、その生物学的半減期を増大するように修飾される。種々のアプローチがあり得る。例えば、これは、ＦｃＲｎに対するＦｃ領域の結合親和性を増大することによって行われ得る。例えば、米国特許第６，２７７，３７５号に記載されるように、以下の残基のうち１つまたは複数が突然変異され得る：２５２、２５４、２５６、４３３、４３５、４３６。特定の例示的置換として、以下：Ｔ２５２Ｌ、Ｔ２５４Ｓおよび／またはＴ２５６Ｆのうち１つまたは複数を含む。あるいは、Presta et al.による米国特許第５，８６９，０４６号および同６，１２１，０２２号に記載されるように、生物学的半減期を増大するために、抗体は、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２ドメインの２つのループからとられたサルベージ受容体結合エピトープを含有するようにＣＨ１またはＣＬ領域内で変更され得る。ＦｃＲｎとの結合を増大する、および／または薬物動態特性を改善する他の例示的変異体として、例えば、２５９１、３０８Ｆ、４２８Ｌ、４２８Ｍ、４３４Ｓ、４３４１ １．４３４Ｆ、４３４Ｙおよび４３４Ｘ１を含む２５９、３０８、４２８および４３４位での置換が挙げられる。ＦｃＲｎとのＦｃ合を増大する他の変異体として以下が挙げあれる：２５０Ｅ、２５０Ｑ、４２８Ｌ、４２８Ｆ、２５０Ｑ／４２８Ｌ（Hinton et al. 2004, J. Biol. Chem. 279(8):6213-6216、Hinton et al. 2006 Journal of Immunology 176:346-356）、２５６Ａ、２７２Ａ、２８６Ａ、３０５Ａ、３０７Ａ、３０７Ｑ、３１１Ａ、３１２Ａ、３７６Ａ、３７８Ｑ、３８０Ａ、３８２Ａ、４３４Ａ（Shields et al., Journal of Biological Chemistry, 2001, 276(9):6591-6604）、２５２Ｆ、２５２Ｔ、２５２Ｙ、２５２Ｗ、２５４Ｔ、２５６Ｓ、２５６Ｒ、２５６Ｑ、２５６Ｅ、２５６Ｄ、２５６Ｔ、３０９Ｐ、３１１Ｓ、４３３Ｒ、４３３Ｓ、４３３１、４３３Ｐ、４３３Ｑ、４３４Ｈ、４３４Ｆ、４３４Ｙ、２５２Ｙ／２５４Ｔ／２５６Ｅ、４３３Ｋ／４３４Ｆ／４３６Ｈ、３０８Ｔ／３０９Ｐ／３１１Ｓ（Dall Acqua et al. Journal of Immunology, 2002, 169:5171-5180、Dall’Acqua et al., 2006, Journal of Biological Chemistry 281:23514-23524）。ＦｃＲｎ結合を調節するための他の修飾は、Yeung et al., 2010, J Immunol, 182:7663-7671に記載されている。
ある特定の実施形態では、特定の生物学的特徴を有するハイブリッドＩｇＧアイソタイプが使用され得る。例えば、ＩｇＧ１／ＩｇＧ３ハイブリッド変異体は、２つのアイソタイプが異なる位置で、ＣＨ２および／またはＣＨ３領域中のＩｇＧ１位置を、ＩｇＧ３由来のアミノ酸で置換することによって構築され得る。したがって、１つまたは複数の置換、例えば、２７４Ｑ、２７６Ｋ、３００Ｆ、３３９Ｔ、３５６Ｅ、３５８Ｍ、３８４Ｓ、３９２Ｎ、３９７Ｍ、４２２Ｉ、４３５Ｒおよび４３６Ｆを含むハイブリッド変異体ＩｇＧ抗体が構築され得る。本明細書において記載される一部の実施形態では、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２ハイブリッド変異体は、２つのアイソタイプが異なる位置で、ＣＨ２および／またはＣＨ３領域中のＩｇＧ２位置を、ＩｇＧ１由来のアミノ酸で置換することによって構築され得る。したがって、１つまたは複数の置換、例えば、以下のアミノ酸置換：２３３Ｅ、２３４Ｌ、２３５Ｌ、－２３６Ｇ（２３６位でのグリシンの挿入と呼ばれる）および３２７Ａのうち１つまたは複数を含むハイブリッド変異体ＩｇＧ抗体が構築され得る。
さらに、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩおよびＦｃＲｎに対するヒトＩｇＧ１上の結合部位は、マッピングされており、結合が改善された変異体が記載されている（Shields, R.L. et al. (2001) J. Biol. Chem. 276:6591-6604を参照のこと）。ＦｃγＲＩＩＩとの結合を改善するために、２５６、２９０、２９８、３３３、３３４および３３９位の特定の突然変異が示されている。さらに、ＦｃγＲＩＩＩ結合を改善するために以下の組合せ突然変異体が示されている：増強されたＦｃγＲＩＩＩａ結合およびＡＤＣＣ活性を示すと示されているＴ２５６Ａ／Ｓ２９８Ａ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ、Ｓ２９８Ａ／Ｋ２２４ＡおよびＳ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ（Shields et al., 2001）。カニクイザルにおいてＦｃγＲＩＩＩａに対する親和性の最大の増大、ＦｃγＲＩＩｂ結合の減少および強力な細胞傷害性活性を示したＳ２３９Ｄ／Ｉ３３２ＥおよびＳ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌ突然変異を有する変異体を含め、ＦｃγＲＩＩＩａとの強力に増強された結合を有する他のＩｇＧ１変異体が同定されている（Lazar et al., 2006）。アレムツズマブ（ＣＤ５２特異的）、トラスツズマブ（ＨＥＲ２／ｎｅｕ特異的）、リツキシマブ（ＣＤ２０特異的）およびセツキシマブ（ＥＧＦＲ特異的）などの抗体に三重突然変異を導入することによって、インビトロで大幅に増強されたＡＤＣＣ活性に変換され、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ変異体は、サルにおいてＢ細胞を枯渇させる増強された能力を示した（Lazar et al., 2006）。さらに、Ｂ細胞悪性腫瘍および乳がんのモデルにおいてヒトＦｃγＲＩＩＩａを発現するトランスジェニックマウスにおいて増強されたＦｃγＲＩＩＩａとの結合および同時に増強されたＡＤＣＣ活性を示した、Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００ＬおよびＰ３９６Ｌ突然変異を含有するＩｇＧ１突然変異体が同定されている（Stavenhagen et al., 2007; Nordstrom et al., 2011）。使用され得る他のＦｃ突然変異体として、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｌ３３４Ａ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌ、Ｌ２３５Ｖ／Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９６ＬおよびＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓが挙げられる。
ある特定の実施形態では、低減されたＦｃγＲとの結合を有するＦｃが選択される。低減されたＦｃγＲ結合を有する例示的Ｆｃ、例えば、ＩｇＧ１ Ｆｃは、以下の３つのアミノ酸置換：Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＥおよびＧ２３７Ａを含む。
ある特定の実施形態では、低減された補体結合を有するＦｃが選択される。低減された補体結合を有する例示的Ｆｃ、例えば、ＩｇＧ１ Ｆｃは、以下の２つのアミノ酸置換：Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓを有する。
ある特定の実施形態では、本質的にエフェクター機能を有さないＦｃが選択される、すなわち、それは、低減されたＦｃγＲとの結合および低減された補体結合を有する。エフェクターがない例示的Ｆｃ、例えば、ＩｇＧ１ Ｆｃは、以下の５つの突然変異：Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓを含む。
ＩｇＧ４定常ドメインを使用する場合、置換Ｓ２２８Ｐを含むことができ、これはＩｇＧ１中のヒンジ配列を模倣し、それによって、ＩｇＧ４分子を安定化する。
ＷＯ２０１７／０８７６７８またはＷＯ２０１６０８１７４６に記載されるＦｃ修飾も使用され得る。
抗体の可変領域が、酸性ｐＨでＶＩＳＴＡと結合するが、生理学的ｐＨでは結合しない場合には、低ＴＭＤＤであり、好中球減少がないと予測されるので、エフェクター機能を有する、またはエフェクター機能が枯渇した定常領域を使用してもよい。しかし、好ましくは、生理学的ｐＨと比較して酸性ｐＨでｈＶＩＳＴＡと結合しないＶＩＳＴＡ抗体については、高ＴＭＤＤおよび好中球減少を避けるためにエフェクターがない定常領域、例えば、ＩｇＧ１．３を使用することが好ましい。
ある特定の実施形態では、抗体のグリコシル化が修飾される。例えば、非グリコシル化抗体が行われ得る（すなわち、抗体は、グリコシル化を欠く）。グリコシル化は、例えば、抗体の抗原に対する親和性を増大するために変更され得る。このような炭水化物修飾は、例えば、抗体配列内の１つまたは複数のグリコシル化の部位を変更することによって達成され得る。例えば、１つまたは複数の可変領域フレームワークグリコシル化部位を排除し、それによってその部位でのグリコシル化の排除をもたらす１つまたは複数のアミノ酸置換が行われ得る。このような非グリコシル化は、抗体の抗原に対する親和性を増大し得る。このようなアプローチは、Co et al.による米国特許第５，７１４，３５０号および同６，３５０，８６１号にさらに詳細に記載されている。
Ｎ２９７での定常領域のグリコシル化は、Ｎ２９７残基を別の残基、例えば、Ｎ２９７Ａに突然変異することによって、および／または隣接するアミノ酸、例えば、２９８を突然変異し、それによって、Ｎ２９７でのグリコシル化を低減することによって防ぐことができる。
さらにまたはあるいは、変更されたグリコシル化の種類を有する抗体、例えば、低減された量のフコシル残基を有する低フコシル化抗体または増大された二分ＧｌｃＮａｃ構造を有する抗体を作製することができる。このような変更されたグリコシル化パターンは、抗体のＡＤＣＣ能力を増大すると実証されている。このような炭水化物修飾は、例えば、変更されたグリコシル化機構を有する宿主細胞において抗体を発現させることによって達成され得る。変更されたグリコシル化機構を有する細胞は、当技術分野で記載されており、本明細書において記載される組換え抗体を発現し、それによって、変更されたグリコシル化を有する抗体を産生するための宿主細胞として使用され得る。例えば、Hanai et al.によるＥＰ１，１７６，１９５には、フコシルトランスフェラーゼをコードする機能的に破壊されたＦＵＴ８遺伝子を有する細胞株が記載されており、その結果、このような細胞株において発現される抗体は、低フコシル化を示す。PrestaによるＰＣＴ公開ＷＯ０３／０３５８３５には、低減された、フコースをＡｓｎ（２９７）に連結された炭水化物に付着させる能力を有し、その宿主細胞において発現される抗体の低フコシル化をもたらす、変異体ＣＨＯ細胞株、Ｌｅｄ ３細胞が記載されている（また、Shields, R.L. et al. (2002) J. Biol. Chem. 277:26733-26740も参照のこと）。Umana et al.によるＰＣＴ公開ＷＯ９９／５４３４２には、操作された細胞株において発現された抗体が、増大された二分ＧｌｃＮａｃ構造を示し、これが抗体の増大されたＡＤＣＣ活性をもたらすように、糖タンパク質修飾グリコシルトランスフェラーゼ｛例えば、ベータ（ｌ，４）－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ））を発現するように操作された細胞株が記載されている（Umana et al. (1999) Nat. Biotech. 17: 176-180も参照のこと）。
本明細書において記載される抗体の別の修飾は、ペグ化である。抗体は、例えば、抗体の生物学的（例えば、血清）半減期を増大するためにペグ化され得る。抗体をペグ化するために、抗体またはその断片は、通常、１つまたは複数のＰＥＧ基が、抗体または抗体断片に付着されるようになる条件下で、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、例えば、ＰＥＧの反応性エステルまたはアルデヒド誘導体と反応される。一部の実施形態では、ペグ化は、反応性ＰＥＧ分子（または類似の反応性水溶性ポリマー）とのアシル化反応またはアルキル化反応によって実施される。本明細書において、「ポリエチレングリコール」という用語は、モノ（ＣＩ－ＣＩＯ）アルコキシ－またはアリールオキシ－ポリエチレングリコールまたはポリエチレングリコール－マレイミドなど、他のタンパク質を誘導体化するために使用されてきたＰＥＧの形態のいずれも包含するように意図される。ある特定の実施形態では、ペグ化されるべき抗体は、非グリコシル化抗体である。タンパク質をペグ化する方法は、当技術分野で公知であり、本明細書において記載される抗体に適用され得る。例えば、Nishimura et al.によるＥＰ０１５４３１６およびIshikawa et al.によるＥＰ０４０１３８４を参照のこと。
種々の実施形態では、本明細書において記載されるＶＩＳＴＡと結合する抗体は、抗原結合が有害であろう組織および環境において抗原結合を選択的に遮断するが、有益であろう場合には抗原結合が許容されるように修飾される（「活性化可能抗体」）。一実施形態では、抗体の抗原結合表面と特異的に結合し、抗原結合に干渉する遮断ペプチド「マスク」が生成され、このマスクは、ペプチダーゼ切断可能なリンカーによって抗体の結合アームの各々に連結される。例えば、ＣｙｔｏｍＸの米国特許第８，５１８，４０４号を参照のこと。このようなコンストラクトは、プロテアーゼレベルが、非腫瘍組織と比較して腫瘍微小環境において大幅に増大しているがんの処置にとって有用である。腫瘍微小環境における切断可能なリンカーの選択的切断によって、マスキング／遮断ペプチドの解離が可能となり、抗原結合が望まれない副作用を引き起こし得る末梢組織においてではなく腫瘍において、抗原が選択的に結合することを可能にする。抗体と連結している遮断ペプチドの例は、ＷＯ２０１８／０８５５５において提供されている。
あるいは、関連実施形態において、（二価）抗体の両抗原結合表面と結合し、抗原結合に干渉する、２つの抗原結合ドメインを含む二価結合性化合物（「マスキングリガンド」）が開発されており、これでは、２つの結合ドメインは、例えば、ペプチダーゼによって切断可能な切断可能リンカーによって互いに連結している（抗体ではなく）。例えば、Ｔｅｇｏｐｈａｒｍ Ｃｏｒｐの国際特許出願公開番号ＷＯ２０１０／０７７６４３を参照のこと。マスキングリガンドは、抗体が結合するように意図される、または独立に生成され得る抗原を含み得る、または由来し得る。このようなマスキングリガンドは、非腫瘍組織と比較して腫瘍微小環境においてプロテアーゼレベルが大幅に増大している癌の処置にとって有用である。腫瘍微小環境における切断可能なリンカーの選択的切断によって、互いからの２つの結合ドメインの解離が可能となり、抗体の抗原結合表面の結合力を低減する。結果として生じた抗体からのマスキングリガンドの解離が、抗原結合が望まれない副作用を引き起こし得る末梢組織においてではなく腫瘍において、抗原が選択的に結合することを可能にする。
核酸および宿主細胞
抗体またはその重鎖または軽鎖またはその一部をコードする核酸も提供される。例示的核酸が配列表において提供されている。配列表中の核酸に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％または９９％である任意の核酸が、本明細書において包含される。本明細書において提供される抗体をコードする核酸を含む組成物も包含され、これらを含む細胞ならびに抗ＶＩＳＴＡ抗体をコードする核酸を用いて形質転換された細胞を培養することおよび培地または細胞から抗体を単離することを含む抗体を調製する方法も同様である。
ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤ結合Ａｂおよび関連医薬組成物を使用する処置方法
ある特定の実施形態では、低ｐＨでＶＩＳＴＡと結合し、例えば、中性または生理学的ｐＨでは、著しい結合を欠く抗ＶＩＳＴＡ抗体は、ＶＩＳＴＡアンタゴニスト抗体、すなわち、ＶＩＳＴＡの作用を阻害し、その結果、免疫応答が刺激される抗体であり得る。このような抗体は、免疫系または免疫応答を刺激することが望まれる疾患、例えば、増殖性疾患（良性または悪性）、癌および感染性疾患（例えば、ウイルス感染症）を処置するために使用され得る。
ある特定の実施形態では、低ｐＨでＶＩＳＴＡと結合し、例えば、中性または生理学的ｐＨでは、著しい結合を欠く抗ＶＩＳＴＡ抗体は、ＶＩＳＴＡアゴニスト抗体、すなわち、ＶＩＳＴＡの作用を増大し、その結果、免疫応答が阻害される抗体であり得る。このような抗体は、免疫系または免疫応答の阻害が望まれる疾患、例えば、自己免疫疾患および炎症状態、例えば、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、セリアック病、シェーグレン（Ｓｊｏｉｇｒｅｎ）症候群、グレーブス病、炎症性腸疾患、乾癬、強直性脊椎炎、移植片対宿主病、アレルギーおよび喘息を処置するために有用であり得る。
本明細書において記載される抗体は、例えば、がんを処置するために使用され得る。一部の実施形態では、有効量の本明細書において記載される抗体を患者に投与することを含むがんを処置する方法が提供される。一部の実施形態では、Ａｂは、患者において免疫応答、例えば、抗原特異的免疫応答を引き起こし得る、または増強し得る。一部の実施形態では、Ａｂは、Ｔ細胞活性を刺激し得る。一部の実施形態では、Ａｂは、患者において少なくとも１種の腫瘍の成長を阻害し得る。
がんを有する対象を処置する方法であって、対象に、治療上有効量の本明細書において記載される抗ＶＩＳＴＡ抗体を投与し、その結果、対象が処置されることを含む方法が、本明細書において提供される。抗ＶＩＳＴＡ抗体は、単独で使用され得る。あるいは、抗ＶＩＳＴＡ抗体は、以下にさらに記載されるように、別の物質とともに使用され得る。
本明細書において記載されるように酸性条件下でＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と特異的に結合するＡｂを用いて処置され得るがんの例として、それだけに限らないが、癌腫、リンパ腫、芽腫、肉腫および白血病が挙げられる。本明細書において記載されるＡｂを用いて処置され得る癌としてまた、通常、免疫療法に対して応答性であるがんおよび通常、免疫療法に対して応答性ではないものが挙げられる。処置され得る癌としてまた、ＶＩＳＴＡ陽性がん、例えば、ＶＩＳＴＡ陽性腫瘍浸潤性細胞、例えば、リンパ球、骨髄性または単球性細胞を有する癌が挙げられる。がんは固形腫瘍または血液悪性腫瘍（液体腫瘍）を有する癌があり得る。
処置のためのがんの限定されない例として、扁平上皮癌、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、扁平上皮非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、非扁平ＮＳＣＬＣ、神経膠腫、胃腸がん、腎がん（例えば、明細胞癌）、卵巣がん、肝臓がん、結腸直腸がん、子宮内膜がん、腎臓がん（例えば、腎細胞癌（ＲＣＣ））、前立腺がん（例えば、ホルモン不応性前立腺腺癌）、甲状腺がん、神経芽腫、膵臓がん、神経膠芽腫（神経膠芽腫多形）、子宮頸がん、胃がん（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、膀胱がん、肝細胞腫、乳がん、結腸癌腫および頭頸部がん（または癌腫）、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、生殖細胞腫瘍、小児肉腫、副鼻腔ナチュラルキラー、黒色腫（例えば、転移性悪性黒色腫、例えば、皮膚性または眼球内悪性黒色腫）、骨がん、皮膚がん、子宮がん、肛門領域のがん、精巣がん、卵管の癌腫、子宮内膜の癌腫、子宮頸部の癌腫、膣の癌腫、外陰部の癌腫、食道のがん、小腸のがん、内分泌系のがん、副甲状腺のがん、副腎のがん、軟部組織の肉腫、尿道のがん、陰茎のがん、小児の固形腫瘍、尿管のがん、腎盂の癌腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳がん、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮がん、扁平上皮がん、Ｔ細胞リンパ腫、アスベストによって誘導されるものを含む環境によって誘導された癌、ウイルス関連癌またはウイルス起源のがん（例えば、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ関連またはＨＰＶ起源の腫瘍））および２つの主要血液細胞系統、すなわち、骨髄細胞株（顆粒球、赤血球、血小板、マクロファージおよび肥満細胞を産生する）またはリンパ球細胞株（Ｂ、Ｔ、ＮＫおよび血漿細胞を産生する）のいずれかに由来する血液悪性腫瘍（ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃｄ ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ）、例えば、すべての種類の白血病、リンパ腫および骨髄腫、例えば、急性、慢性、リンパ性および／または骨髄性白血病、例えば、急性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、未分化ＡＭＬ（ＭＯ）、骨髄芽球性白血病（Ｍｌ）、骨髄芽球性白血病（Ｍ２；細胞成熟を伴う）、前骨髄球性白血病（Ｍ３またはＭ３変異体［Ｍ３Ｖ］）、骨髄単球性白血病（Ｍ４または好酸球増加を伴うＭ４変異体［Ｍ４Ｅ］）、単球性白血病（Ｍ５）、赤白血病（Ｍ６）、巨核芽球性白血病（Ｍ７）、単離顆粒球性肉腫および緑色腫；リンパ腫、例えば、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、Ｂ細胞血液悪性腫瘍、例えば、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、単球様Ｂ細胞リンパ腫、粘膜関連リンパ球組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、未分化（例えば、Ｋｉ １＋）大細胞型リンパ腫、成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病、マントル細胞リンパ腫、血液免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、血液中心性リンパ腫、腸管Ｔ細胞リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、前駆体Ｔリンパ芽球性リンパ腫、Ｔリンパ芽球性；ならびにリンパ腫／白血病（Ｔ－Ｌｂｌｙ／Ｔ－ＡＬＬ）、末梢Ｔ細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、移植後リンパ増殖性障害、真性組織球性リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性滲出リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）、リンパ球系統の造血腫瘍、急性リンパ性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性組織球性リンパ腫（ＤＨＬ）、免疫芽球性大細胞リンパ腫、前駆体Ｂリンパ芽球性リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＬＣ）（菌状息肉症またはセザリー症候群とも呼ばれる）およびワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症を伴うリンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）；骨髄腫、例えば、ＩｇＧ骨髄腫、軽鎖骨髄腫、非分泌性骨髄腫、くすぶり型骨髄腫（低悪性度骨髄腫とも呼ばれる）、孤立性形質細胞腫および多発性骨髄腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、へアリー細胞リンパ腫；骨髄系統の造血腫瘍、線維肉腫および横紋筋肉腫を含む間葉起源の腫瘍；セミノーマ、奇形癌腫、星状細胞腫、シュワン腫を含む中枢および末梢神経の腫瘍；線維肉腫、横紋筋肉腫および骨肉腫を含む間葉起源の腫瘍；ならびに黒色腫、色素性乾皮症、ケラトアカントーマ、セミノーマ、甲状腺濾胞性がんおよび奇形癌腫を含む他の腫瘍、リンパ球系統の造血腫瘍、例えば、それだけには限らないが、Ｔ細胞障害、例えば、小細胞および脳回状細胞型のものを含むＴ前リンパ性白血病（Ｔ－ＰＬＬ）を含むＴ細胞およびＢ細胞腫瘍；Ｔ細胞種の大顆粒リンパ球性白血病（ＬＧＬ）；ａ／ｄ Ｔ－ＮＨＬ肝脾リンパ腫；末梢／胸腺後Ｔ細胞リンパ腫（多形性および免疫芽球性亜型）；血液中心性（鼻腔）Ｔ細胞リンパ腫；頭部または頚部のがん、腎がん、直腸がん、甲状腺のがん；急性骨髄性リンパ腫ならびに前記がんの任意の組合せが挙げられる。本明細書において記載される方法もまた、転移性癌、切除不能、難治性癌（例えば、例えば、遮断ＣＴＬＡ－４またはＰＤ－１抗体を用いるこれまでの免疫療法に対して難治性のがん）および／または再発性がんの処置のために使用され得る。
一部の実施形態では、がんを処置する方法が提供され、方法は、本明細書において記載されるような酸性条件でｈｕＶＩＳＴＡと特異的に結合する単離抗体をがんを有する対象に投与することを含む。一部の実施形態では、がんを処置するための本明細書において記載される抗体の使用が提供される。
ある特定の実施形態では、本明細書において記載される抗体は、例えば、免疫腫瘍学もしくは免疫療法薬を用いる前の処置に対して不適切な応答を示した、またはそれで進行した癌を有する患者に投与される。一部の実施形態では、癌は、内因性に難治性もしくは抵抗性（例えば、ＰＤ－１経路アンタゴニストに対して難治性）であるか、または抵抗性もしくは難治性状態が獲得されるかのいずれかで前の処置に対して難治性または抵抗性である。例えば、本明細書において記載される抗体は、第１の療法に対して応答性ではない、もしくは十分に応答性ではない対象または処置、例えば、単独のもしくは別の療法（例えば、抗ＰＤ－１経路アンタゴニスト療法を用いる）と組み合わせた抗ＰＤ－１経路アンタゴニスト処置後に疾患進行を有する対象に投与され得る。他の実施形態では、本明細書において記載される抗体は、免疫腫瘍学物質、例えば、ＰＤ－１経路アンタゴニストをこれまでに受け取っていなかった（すなわち、処置されていない）患者に投与される。
ある特定の実施形態では、対象において癌を処置する方法は、第１に対象において腫瘍の腫瘍突然変異負荷（ＴＭＢ）を調べることおよび例えば、高ＴＭＢを有するとわかった対象に、結果に基づいて抗ＶＩＳＴＡ抗体を投与することを含む。
免疫賦活剤との組合せ
一部の実施形態では、本明細書において記載されるような抗体、例えば、本明細書において記載されるアンタゴニストＶＩＳＴＡ抗体は、少なくとも１つの免疫賦活剤と組み合わせて投与される。例えば、治療薬は、一緒に注入され得る、またはほぼ同時に注射され得る。一部の実施形態では、抗体および少なくとも１種の免疫賦活剤は逐次投与される。例えば、一部の実施形態では、抗体は、少なくとも１種の免疫賦活剤の前または後に逐次投与され、その結果、２種の治療薬３０分、６０分、９０分、１２０分、３時間、６時間、１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、３日、５日、７日または２週間離れて投与される。
一部の実施形態では、抗体の少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３用量、少なくとも５用量または少なくとも１０用量が、少なくとも１種の免疫賦活剤の投与の前に投与される。一部の実施形態では、少なくとも１種の免疫賦活剤の少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３用量、少なくとも５用量または少なくとも１０用量が、抗体の投与の前に投与される。一部の実施形態では、免疫賦活剤の最後の用量が、抗体の第１の用量の少なくとも１、２、３、５日もしくは１０日または１、２、３、５、１２もしくは２４週間前に投与される。一部の実施形態では、抗体の最後の用量が、少なくとも１種の免疫賦活剤の最初の用量の少なくとも１、２、３、５日もしくは１０日または１、２、３、５、１２もしくは２４週間前に投与される。一部の実施形態では、対象は、少なくとも１種の免疫賦活剤を用いる療法を受け取っていた、または受け取っており、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤ－結合抗体が、治療レジメンに付加される。
一部の実施形態では、少なくとも１種の免疫賦活剤は、Ｔ細胞の活性化の阻害剤のアンタゴニストを含み、一方で、一部の実施形態では、少なくとも１種の免疫賦活剤は、Ｔ細胞の活性化の刺激物質のアゴニストを含む。一部の実施形態では、少なくとも１種の免疫賦活剤は、ＣＴＬＡ４、ＬＡＧ－３、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ガレクチン１、ガレクチン９、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＢＴＬＡ、ＣＤ２５、ＣＤ６９、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１３、ＧＰＲ５６、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、２Ｂ４、ＣＤ４８、ＧＡＲＰ、ＰＤ１Ｈ、ＬＡＩＲ１、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、ＩＬＴ４、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、ＴＧＦβ、ＶＥＧＦ、ＫＩＲ、ＬＡＧ－３、アデノシンＡ２Ａ受容体、ＰＩ３ＫデルタまたはＩＤＯのアンタゴニストを含む。一部の実施形態では、少なくとも１種の免疫賦活剤は、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、４－１ＢＢＬ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ－Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＤＲ３、ＣＤ２８Ｈ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＩＦＮα、ＳＴＩＮＧのアゴニストまたはＴｏｌｌ様受容体アゴニスト、例えば、ＴＬＲ２／４アゴニストを含む。一部の実施形態では、少なくとも１種の免疫賦活剤は、膜結合タンパク質のＢ７ファミリーの別のメンバー、例えば、Ｂ７－１、Ｂ７－２、Ｂ７－Ｈ２（ＩＣＯＳ－Ｌ）、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４およびＢ７－Ｈ６と結合する物質を含む。一部の実施形態では、少なくとも１種の免疫賦活剤は、ＴＮＦ受容体ファミリーのメンバーと結合する物質またはＴＮＦ受容体ファミリーのメンバーと結合する同時刺激もしくは共抑制分子、例えば、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ７０、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２－Ｌ、ＴＲＡＩＬＲ１／ＤＲ４、ＴＲＡＩＬＲ２／ＤＲ５、ＴＲＡＩＬＲ３、ＴＲＡＩＬＲ４、ＯＰＧ、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ、ＴＷＥＡＫＲ／Ｆｎ１４、ＴＷＥＡＫ、ＢＡＦＦＲ、ＥＤＡＲ、ＸＥＤＡＲ、ＥＤＡ１、ＥＤＡ２、ＴＡＣＩ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、ＬＴβＲ、ＬＩＧＨＴ、ＤｅＲ３、ＨＶＥＭ、ＶＥＧＬ／ＴＬ１Ａ、ＴＲＡＭＰ／ＤＲ３、ＴＮＦＲ１、ＴＮＦβ、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦα、１β２、ＦＡＳ、ＦＡＳＬ、ＲＥＬＴ、ＤＲ６、ＴＲＯＹ、またはＮＧＦβを含む。一部の実施形態では、少なくとも１種の免疫賦活剤は、Ｔ細胞活性化を阻害するサイトカインをアンタゴナイズまたは阻害する物質、例えば、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、ＴＧＦβ、ＶＥＧＦを含む。一部の実施形態では、少なくとも１種の免疫賦活剤は、Ｔ細胞活性化を刺激するサイトカインのアゴニスト、例えばＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１およびＩＦＮαを含む。一部の実施形態では、少なくとも１種の免疫賦活剤は、ケモカインのアンタゴニスト、例えば、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、ＣＣＲ２またはＣＣＲ４を含む。一部の実施形態では、少なくとも１種の免疫賦活剤は、抗体を含む。一部の実施形態では、少なくとも１種の免疫賦活剤は、ワクチン、例えば、メソテリンを標的とするワクチンまたは減弱リステリアがんワクチン、例えば、ＣＲＳ－２０７を含み得る。
例えば、本明細書において記載される抗ＶＩＳＴＡ抗体は、以下の物質のうち１つまたは複数とともに投与され得る：
（１）Ｔ細胞活性化を阻害するタンパク質（例えば、免疫チェックポイント阻害剤）のアンタゴニスト（阻害剤または遮断剤）、例えば、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２およびＬＡＧ－３、ガレクチン９、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＢＴＬＡ、ＣＤ６９、ガレクチン－１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１３、ＧＰＲ５６、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、２Ｂ４、ＣＤ４８、ＧＡＲＰ、ＰＤ１Ｈ、ＬＡＩＲ１、ＴＩＭ－１、ＴＩＭ－３およびＴＩＭ－４；ならびに／または（２）Ｔ細胞活性化を刺激するタンパク質のアゴニスト、例えば、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、４－１ＢＢＬ、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ－Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＤＲ３およびＣＤ２８Ｈ。
がんを処置するために本明細書において記載される抗ＶＩＳＴＡ抗体と組み合わせることができる例示的物質として、ＹＥＲＶＯＹ（登録商標）（イピリムマブ）またはトレメリムマブ（ＣＴＬＡ－４に対する）、ガリキシマブ（Ｂ７．１に対する）、ＢＭＳ－９３６５５８（ニボルマブ；ＰＤ－１に対する）、ＭＫ－３４７５（ペムブロリズマブ；ＰＤ－１に対する）、アテゾリズマブ（テセントリク（登録商標））、アベルマブ、デュルバルマブ、セミプリマブ、トリパリマブ（ｔｏｒｉｐａｌｉｍａｂ）、シンチリムブ（ｓｉｎｔｉｌｉｍｂ）、ＡＭＰ２２４（Ｂ７ＤＣに対する）、ＢＭＳ－９３６５５９（Ｂ７－Ｈ１に対する）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（Ｂ７－Ｈ１に対する）、ＭＥＤＩ－５７０（ＩＣＯＳに対する）、ＡＭＧ５５７（Ｂ７Ｈ２に対する）、ＭＧＡ２７１（Ｂ７Ｈ３に対する）、ＩＭＰ３２１（ＬＡＧ－３に対する）、ＢＭＳ－６６３５１３（ＣＤ１３７に対する）、ＰＦ－０５０８２５６６（ＣＤ１３７に対する）、ＣＤＸ－１１２７（ＣＤ２７に対する）、抗ＯＸ４０（Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｅ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ）、ｈｕＭＡｂＯＸ４０Ｌ（ＯＸ４０Ｌに対する）、アタシセプト（ＴＡＣＩに対する）、ＣＰ－８７０８９３（ＣＤ４０に対する）、ルカツムマブ（ＣＤ４０に対する）、ダセツズマブ（ＣＤ４０に対する）、ムロモナブ－ＣＤ３（ＣＤ３に対する）；抗ＧＩＴＲ抗体ＭＫ４１６６、ＴＲＸ５１８、Ｍｅｄｉ１８７３、ＩＮＢＲＸ－１１０、ＬＫ２－１４５、ＧＷＮ－３２３、ＧＩＴＲＬ－Ｆｃまたはそれらの任意の組合せが挙げられる。
がんの処置のための抗ＶＩＳＴＡ抗体と組み合わせることができる他の分子として、ＮＫ細胞上の阻害性受容体のアンタゴニストまたはＮＫ細胞上の活性化受容体のアゴニスト、例えば、ＫＩＲのアンタゴニスト（例えば、リリルマブ（ｌｉｒｉｌｕｍａｂ））が挙げられる。
Ｔ細胞活性化はまた、可溶性サイトカインによって調節され得る。一部の実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ抗体は、Ｔ細胞活性化を阻害するように意図されるサイトカインのアンタゴニストまたはＴ細胞活性化を刺激するサイトカインのアゴニストと組み合わせて投与され得る。例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体は、（ｉ）Ｔ細胞活性化を阻害するＩｇＳＦファミリーもしくはＢ７ファミリーもしくはＴＮＦファミリーのタンパク質のアンタゴニスト（または阻害剤もしくは遮断剤）またはＴ細胞活性化を阻害するサイトカイン（例えば、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、ＴＧＦ－β、ＶＥＧＦ；「免疫抑制サイトカイン」）のアンタゴニストおよび／または（ｉｉ）Ｔ細胞活性化を刺激するサイトカインのＩｇＳＦファミリー、Ｂ７ファミリーまたはＴＮＦファミリーの刺激性受容体のアゴニストと組み合わせて使用され得る。
併用療法のためのさらに他の薬剤として、マクロファージまたは単球を阻害または枯渇させる薬剤が挙げられ、それだけには限らないが、ＣＳＦ－１Ｒアンタゴニスト、例えば、ＲＧ７１５５（ＷＯ１１／７００２４、ＷＯ１１／１０７５５３、ＷＯ１１／１３１４０７、Ｗ０１３／８７６９９、Ｗ０１３／１１９７１６、ＷＯ１３／１３２０４４）またはＦＰＡ－００８（ＷＯ１１／１４０２４９、Ｗ０１３１６９２６４、ＷＯ１４／０３６３５７）を含むＣＳＦ－１Ｒアンタゴニスト抗体を含む。
抗ＶＩＳＴＡ抗体はまた、ＴＧＦ－βシグナル伝達を阻害する物質とともに投与され得る。
抗ＶＩＳＴＡ抗体と組み合わせることができるさらなる物質として、腫瘍抗原提示を増強する物質、例えば、樹状細胞ワクチン、ＧＭ－ＣＳＦ分泌性細胞性ワクチン、ＣｐＧオリゴヌクレオチドおよびイミキモドまたは腫瘍細胞の免疫原性を増強する療法（例えば、アントラサイクリン）が挙げられる。
抗ＶＩＳＴＡ抗体と組み合わせることができるさらに他の療法として、Ｔｒｅｇ細胞を枯渇させるまたは遮断する療法、例えば、ＣＤ２５と特異的に結合する物質が挙げられる。
抗ＶＩＳＴＡ抗体と組み合わせることができる別の療法として、インドールアミンジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、ジオキシゲナーゼ、アルギナーゼまたは一酸化窒素シンセターゼなどの代謝酵素を阻害する療法がある。
抗ＶＩＳＴＡ抗体とともに使用できる別のクラスの物質として、アデノシンの形成を阻害する物質、例えば、ＣＤ７３阻害剤またはアデノシンＡ２Ａ受容体を阻害する物質が挙げられる。
がんを処置するための抗ＶＩＳＴＡ抗体と組み合わせることができる他の療法として、Ｔ細胞アネルギーまたは消耗を逆転させる／防ぐ療法ならびに腫瘍部位で自然免疫活性化および／または炎症を引き起こす療法が挙げられる。
がんを処置するための抗ＶＩＳＴＡ抗体と組み合わせることができる他の療法として、ＩＬ－８を遮断する療法、例えば、ＨｕＭａｘ（登録商標）－ＩＬ８を用いる療法が挙げられる。
抗ＶＩＳＴＡ抗体は、２種以上の免疫腫瘍学物質と組み合わせることができ、例えば、免疫経路の複数の要素、例えば、以下のうち１つまたは複数を標的とするように意図されるコンビナトリアルアプローチと組み合わせることができる：腫瘍抗原提示を増強する療法（例えば、樹状細胞ワクチン、ＧＭ－ＣＳＦ分泌性細胞請求項ワクチン、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、イミキモド）；例えば、ＣＴＬＡ－４および／またはＰＤ１／ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－Ｌ２経路を阻害することおよび／またはＴｒｅｇもしくは他の免疫抑制細胞を枯渇させるもしくは遮断することによって負の免疫調節を阻害する療法；例えば、ＣＤ－１３７、ＯＸ－４０および／もしくはＣＤ４０もしくはＧＩＴＲ経路を刺激する、ならびに／またはＴ細胞エフェクター機能を刺激するアゴニストを用いて正の免疫調節を刺激する療法；抗腫瘍Ｔ細胞の頻度を全身的に増大する療法；例えば、ＣＤ２５のアンタゴニスト（例えば、ダクリズマブ）を使用して、またはｅｘ ｖｉｖｏ抗ＣＤ２５ビーズ枯渇によってＴｒｅｇ、例えば、腫瘍中のＴｒｅｇを枯渇させるまたは阻害する療法；腫瘍中のサプレッサー骨髄系細胞の機能に影響を及ぼす療法；腫瘍細胞の免疫原性を増強する療法（例えば、アントラサイクリン）；遺伝子修飾された細胞、例えば、キメラ抗原受容体によって修飾された細胞（ＣＡＲ－Ｔ療法）を含む養子Ｔ細胞またはＮＫ細胞移植；代謝酵素、例えば、インドールアミンジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、ジオキシゲナーゼ、アルギナーゼまたは一酸化窒素シンセターゼを阻害する療法；Ｔ細胞アネルギーまたは消耗を逆転させる／防ぐ療法；腫瘍部位で自然免疫活性化および／または炎症を引き起こす療法；免疫賦活性サイトカインの投与；または免疫抑制サイトカインの遮断。
本明細書において記載される抗ＶＩＳＴＡ抗体は、正の同時刺激受容体をつなぐアゴニスト剤、阻害性受容体を介してシグナル伝達を減弱する遮断剤、アンタゴニストおよび抗腫瘍Ｔ細胞の頻度を全身的に増大する１つまたは複数の物質、腫瘍微小環境内でそれぞれの免疫抑制経路を克服する（例えば、阻害性受容体会合（例えば、ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１相互作用）を遮断する、Ｔｒｅｇを枯渇させる、または阻害する（例えば、抗ＣＤ２５モノクローナル抗体（例えば、ダクリズマブ）を使用して、またはｅｘ ｖｉｖｏ抗ＣＤ２５ビーズ枯渇によって）、代謝酵素、例えば、ＩＤＯを阻害する、またはＴ細胞アネルギーもしくは消耗を逆転させる／防ぐ）物質ならびに腫瘍部位で自然免疫活性化および／または炎症を引き起こす物質のうち１つまたは複数と一緒に使用され得る。
ある特定の実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ抗体は、対象がＢＲＡＦ Ｖ６００突然変異陽性である場合に、対象にＢＲＡＦ阻害剤と一緒に投与される。
本明細書において記載される併用療法において使用するための適したＰＤ－１アンタゴニストとして、制限するものではないが、リガンド、抗体（例えば、モノクローナル抗体および二重特異性抗体）および多価物質が挙げられる。一実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニストは、融合タンパク質、例えば、Ｆｃ融合タンパク質、例えば、ＡＭＰ－２４４である。一実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニストは、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。
例示的抗ＰＤ－１抗体は、ＷＯ２００６／１２１１６８において記載される抗体１７Ｄ８、２Ｄ３、４Ｈ１、５Ｃ４、７Ｄ３、５Ｆ４および４Ａ１１のうち１つのＣＤＲまたは可変領域を含むニボルマブ（ＢＭＳ－９３６５５８）または抗体である。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ＷＯ２０１２／１４５４９３に記載されるＭＫ－３４７５（ランブロリズマブ）、ＷＯ２０１２／１４５４９３に記載されるＡＭＰ－５１４またはＰＤＲ００１である。さらに既知ＰＤ－１抗体および他のＰＤ－１阻害剤として、ＷＯ２００９／０１４７０８、ＷＯ０３／０９９１９６、ＷＯ２００９／１１４３３５、ＷＯ２０１１／０６６３８９、ＷＯ２０１１／１６１６９９、ＷＯ２０１２／１４５４９３、米国特許第７，６３５，７５７号および同８，２１７，１４９号および米国特許公開第２００９／０３１７３６８号に記載されるものが挙げられる。ＷＯ２０１３／１７３２２３に開示される抗ＰＤ－１抗体のいずれかも使用され得る。これらの抗体のうちの１つとして、ＰＤ－１上の同一のエピトープとの結合について競合するおよび／または結合する抗ＰＤ－１抗体も、組合せ処置において使用され得る。
一部の実施形態では、併用療法にとって有用な抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＢＭＳ－９３６５５９（ＷＯ２００７／００５８７４および米国特許第７，９４３，７４３号では１２Ａ４と呼ばれる）またはＰＣＴ公開ＷＯ０７／００５８７４および米国特許第７，９４３，７４３号に記載される３Ｇ１０、１２Ａ４、１０Ａ５、５Ｆ８、１０Ｈ１０、１Ｂ１２、７Ｈ１、１１Ｅ６、１２Ｂ７および１３Ｇ４のＣＤＲもしくは可変領域を含む抗体である。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＭＥＤＩ４７３６（デュルバルマブおよび抗Ｂ７－Ｈ１としても知られる）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（アテゾリズマブおよびＲＧ７４４６としても知られる）、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ（アベルマブとしても知られる；ＷＯ２０１３／７９１７４）またはｒＨｉｇＭ１２Ｂ７である。ＷＯ２０１３／１７３２２３、ＷＯ２０１１／０６６３８９、ＷＯ２０１２／１４５４９３、米国特許第７，６３５，７５７号および同８，２１７，１４９号および米国公開第２００９／１４５４９３号に開示される抗ＰＤ－Ｌ１抗体のいずれかも使用され得る。これらの抗体のいずれかのものと同一のエピトープと競合するおよび／または結合する抗ＰＤ－Ｌ１抗体も、組合せ処置において使用され得る。
ある特定の実施形態では、本開示の抗ＶＩＳＴＡ抗体は、ＣＴＬＡ－４アンタゴニスト、例えば、抗ＣＴＬＡ－４抗体とともに使用され得る。一実施形態では、抗ＣＴＬＡ－４抗体は、Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（ＰＣＴ公開ＷＯ０１／１４４２４において記載される、イピリムマブまたは抗体１０Ｄ１）、トレメリムマブ（以前は、チシリムマブ、ＣＰ－６７５，２０６）、以下の刊行物のいずれかにおいて記載されるモノクローナルまたは抗ＣＴＬＡ－４抗体：ＷＯ９８／４２７５２；ＷＯ００／３７５０４；米国特許第６，２０７，１５６号；Hurwitz et al. (1998) Pro. Natl. Acad. Sci. USA 95(17): 10067-10071；Camacho et al. (2004) J. Clin. Oncology 22(145)：要約番号２５０５（抗体ＣＰ－６７５２０６）；およびMokyr et al. (1998)Cancer Res. 58:5301-5304の群から選択される抗体である。ＷＯ２０１３／１７３２２３において開示される抗ＣＴＬＡ－４抗体のいずれかも使用され得る。
一部の実施形態では、本開示の抗ＶＩＳＴＡ抗体は、ＬＡＧ３アンタゴニストと組み合わせて使用される。抗ＬＡＧ３抗体の例として、米国特許公開番号ＵＳ２０１１／０１５０８９２、ＷＯ１０／１９５７０およびＷＯ２０１４／００８２１８において記載される抗体２５Ｆ７、２６Ｈ１０、２５Ｅ３、８Ｂ７、１１Ｆ２または１７Ｅ５のＣＤＲまたは可変領域を含む抗体が挙げられる。一実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体は、ＢＭＳ－９８６０１６である。使用できる、他の技術分野で認識されている抗ＬＡＧ－３抗体として、ＵＳ２０１１／００７０２３、ＷＯ０８／１３２６０１およびＷＯ０９／４４２７３に記載されるＩＭＰ７３１およびＩＭＰ－３２１が挙げられる。これらの抗体のいずれかのものと同一のエピトープと競合するおよび／または結合する抗ＬＡＧ－３抗体も、組合せ処置において使用され得る。
一部の実施形態では、本開示の抗ＶＩＳＴＡ抗体は、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）アゴニスト、例えば、アゴニストＣＤ１３７抗体と組み合わせて投与され得る。適したＣＤ１３７抗体として、例えば、ウレルマブまたはＰＦ－０５０８２５６６（Ｗ０１２／３２４３３）が挙げられる。
一部の実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ抗体は、ＯＸ４０アゴニスト、例えば、アゴニストＯＸ４０抗体と組み合わせて投与され得る。適したＯＸ４０抗体として、例えば、ＭＥＤＩ－６３８３、ＭＥＤＩ－６４６９またはＭＯＸＲ０９１６（ＲＧ７８８８；ＷＯ０６／０２９８７９）が挙げられる。
一実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ抗体は、ＣＤ４０アゴニスト、例えば、アゴニストＣＤ４０抗体と組み合わせて投与される。ある特定の実施形態では、免疫腫瘍学物質は、ＣＤ４０アンタゴニスト、例えば、アンタゴニストＣＤ４０抗体である。適したＣＤ４０抗体として、例えば、ルカツムマブ（ＨＣＤ１２２）、ダセツズマブ（ＳＧＮ－４０）、ＣＰ－８７０，８９３またはＣｈｉ Ｌｏｂ ７／４が挙げられる。
一実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ抗体は、ＣＤ２７アゴニスト、例えば、アゴニストＣＤ２７抗体と組み合わせて投与される。適したＣＤ２７抗体として、例えば、バルリルマブ（ｖａｒｌｉｌｕｍａｂ）（ＣＤＸ－１１２７）が挙げられる。
ある特定の実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ抗体は、抗ＧＩＴＲ抗体、例えば、ＷＯ２００６／１０５０２１においいて記載されるような、例えば、６Ｃ８のＣＤＲ配列を有する抗体、例えば、６Ｃ８のＣＤＲを有するヒト化抗体；ＷＯ２０１１／０２８６８３に記載される抗ＧＩＴＲ抗体のＣＤＲを含む抗体；ＪＰ２００８２７８８１４に記載される抗ＧＩＴＲ抗体のＣＤＲを含む抗体、ＷＯ２０１５／０３１６６７、ＷＯ２０１５／１８７８３５、ＷＯ２０１５／１８４０９９、ＷＯ２０１６／０５４６３８、ＷＯ２０１６／０５７８４１もしくはＷＯ２０１６／０５７８４６に記載される抗ＧＩＴＲ抗体のＣＤＲを含む抗体または本明細書において記載されるもしくは参照される他の抗ＧＩＴＲ抗体と一緒に投与される。
一部の実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ抗体は、ＭＧＡ２７１（Ｂ７Ｈ３に対する）（ＷＯ１１／１０９４００）と組み合わせて投与される。
一部の実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ抗体は、ＫＩＲアンタゴニスト、例えば、リルリマブ（ｌｉｒｉｌｕｍａｂ）と組み合わせて投与される。
一部の実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ抗体は、ＩＤＯアンタゴニストと組み合わせて投与される。適したＩＤＯアンタゴニストとして、例えば、ＩＮＣＢ－０２４３６０（ＷＯ２００６／１２２１５０、ＷＯ０７／７５５９８、ＷＯ０８／３６６５３、ＷＯ０８／３６６４２）、インドキシモド（ｉｎｄｏｘｉｍｏｄ）、ＮＬＧ－９１９（ＷＯ０９／７３６２０、ＷＯ０９／１１５６６５２、ＷＯ１１／５６６５２、ＷＯ１２／１４２２３７）またはＦ００１２８７が挙げられる。
一部の実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ抗体は、Ｔｏｌｌ様受容体アゴニスト、例えば、ＴＬＲ２／４アゴニスト（例えば、カルメット・ゲラン菌）、ＴＬＲ７アゴニスト（例えば、ヒルトノール（Ｈｉｌｔｏｎｏｌ）またはイミキモド）、ＴＬＲ７／８アゴニスト（例えば、レシキモド）またはＴＬＲ９アゴニスト（例えば、ＣｐＧ７９０９）と組み合わせて投与される。
一実施形態では、抗ＶＩＳＴＡは、ＴＧＦ－β阻害剤、例えば、ＧＣ１００８、ＬＹ２１５７２９９、ＴＥＷ７１９７またはＩＭＣ－ＴＲ１と組み合わせて投与される。
さらなる併用療法
本明細書におけるＡｂはまた、他の様式の処置、例えば、例えば、手術、化学療法、放射線療法または別の治療用抗体などの生物製剤の投与の前、それと実質的に同時に、またはその後に提供され得る。一部の実施形態では、がんは、手術、化学療法および放射線療法またはそれらの組合せから選択される療法後に再発または進行していた。例えば、本明細書において記載されるような抗ＶＩＳＴＡ抗体は、微小転移が存在し得るリスクがある場合および／または再発のリスクを低減するために、補助的療法として投与され得る。
がんの処置のために、組合せは、１種または複数のさらなる抗がん剤、例えば、化学療法薬、成長阻害性物質、抗がんワクチン、例えば、遺伝子療法ワクチン、抗血管新生剤および／または抗腫瘍、抗新生物組成物とともに投与され得る。本発明の抗体と組み合わせて使用できる、化学療法薬、成長阻害性物質、抗がんワクチン、抗血管新生剤および抗腫瘍、抗新生物組成物の限定しない例は、「定義」の下で本明細書において提供される。
一部の実施形態では、ステロイドまたは非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）などの抗炎症性薬が、組合せで投与され得る。本明細書において記載される抗ＶＩＳＴＡ抗体を用いる処置とともに、またはその前に異常増殖性細胞を静止状態にすることが望ましい場合には、ホルモンおよびステロイド（合成類似体を含む）、例えば、１７ａ－エチニルエストラジオール、ジエチルスチルベストロール、テストステロン、プレドニゾン、フルオキシメステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、テストラクトン、メゲストロールアセテート（Ｍｅｇｅｓｔｒｏｌａｃｅｔａｔｅ）、メチルプレドニゾロン、メチル－テストステロン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、クロロトリアニセン、ヒドロキシプロゲステロン、アミノグルテチミド、エストラムスチン、酢酸メドロキシプロゲステロン（Ｍｅｄｒｏｘｙｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅａｃｅｔａｔｅ）、リュープロリド、フルタミド、トレミフェン、ゾラデックス（登録商標）も患者に投与され得る。本明細書において記載される方法または組成物を使用する場合には、臨床設定において腫瘍成長または転移において使用される他の物質、例えば、アンチミメティック（ａｎｔｉｍｉｍｅｔｉｃｓ）も要望どおりに投与され得る。
本明細書において記載される抗体はまた、免疫原、例えば、がん性細胞、精製された腫瘍抗原（組換えタンパク質、ペプチドおよび炭水化物分子を含む）、細胞および免疫賦活性サイトカインをコードする遺伝子でトランスフェクトされた細胞と組み合わせてもよい（He et al.,(2004) J. Immunol. 173:4919-28）。使用できる腫瘍ワクチンの限定されない例として、黒色腫抗原のペプチド、例えば、ｇｐ１００のペプチド、ＭＡＧＥ抗原、Ｔｒｐ－２、ＭＡＲＴ１および／またはチロシナーゼまたはサイトカインＧＭ－ＣＳＦを発現するようにトランスフェクトされた腫瘍細胞（以下でさらに論じられる）が挙げられる。
ヒトでは、黒色腫などの一部の腫瘍が免疫原性であることがわかっている。ＶＩＳＴＡ阻害によってＴ細胞活性化の閾値を低下させることによって、宿主における腫瘍応答を活性化でき、非免疫原性腫瘍または限定された免疫原性を有するものの処置が可能になる。
本明細書において記載される抗ＶＩＳＴＡ抗体はまた、ワクチン接種プロトコールと組み合わせることができる。腫瘍に対するワクチン接種のための多数の実験戦略が、考案されている（Rosenberg, S., 2000, Development of Cancer Vaccines, ASCO Educational Book Spring: 60-62、Logothetis, C, 2000, ASCO Educational Book Spring: 300-302, Khayat, D. 2000, ASCO Educational Book Spring: 414-428; Foon, K. 2000, ASCO Educational Book Spring: 730-738を参照のこと、Restifo, N. and Sznol, M.,Cancer Vaccines, Ch. 61, pp. 3023-3043 in DeVita et al. (eds.), 1997, Cancer: Principles and Practice of Oncology, Fifth Editionも参照のこと）。これらの戦略のうち１つでは、ワクチンは、自己または同種異系腫瘍細胞を使用して調製される。これらの細胞性ワクチンは、腫瘍細胞がＧＭ－ＣＳＦを発現するように形質導入される場合に最も有効であるとわかっている。ＧＭ－ＣＳＦは、腫瘍ワクチン接種のための抗原提示の強力なアクチベーターであるとわかっている（Dranoff et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A. 90: 3539-43）。
種々の腫瘍における遺伝子発現および大規模遺伝子発現パターンの研究は、いわゆる腫瘍特異的抗原の定義につながった（Rosenberg, S A (1999) Immunity 10: 281-7）。多数の場合には、これらの腫瘍特異的抗原は、腫瘍においておよび腫瘍が生じた細胞において発現される分化抗原、例えば、メラニン形成細胞抗原ｇｐ１００、ＭＡＧＥ抗原およびＴｒｐ－２である。より重要なことに、これらの抗原の多くは、宿主において見出される腫瘍特異的Ｔ細胞の標的であると示される場合がある。ＶＩＳＴＡ阻害は、これらのタンパク質に対する免疫応答を生じさせるために、腫瘍において発現される組換えタンパク質および／またはペプチドの収集物とともに使用され得る。これらのタンパク質は、普通、免疫系によって自己抗原としてみなされ、したがって、それらに対して寛容性である。腫瘍抗原は、染色体のテロメアの合成にとって必要であり、ヒトがんの８５％超において、および限定された数の体組織においてのみ発現されるタンパク質テロメラーゼを含み得る（Kim et al. (1994) Science 266: 2011-2013）。腫瘍抗原はまた、タンパク質配列を変更する、もしくは２つの無関係の配列の間で融合タンパク質（すなわち、フィラデルフィア染色体中のｂｃｒ－ａｂｌ）を作出する体細胞突然変異またはＢ細胞腫瘍に由来するイディオタイプのために、がん細胞において発現される「ネオ抗原」であり得る。
他の腫瘍ワクチンは、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、肝炎ウイルス（ＨＢＶおよびＨＣＶ）およびカポジヘルペス肉腫ウイルス（ＫＨＳＶ）のようなヒトがんに関与しているウイルスに由来するタンパク質を含み得る。ＶＩＳＴＡ阻害とともに使用できる腫瘍特異的抗原の別の形態は、腫瘍組織自体から単離された精製熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）である。これらの熱ショックタンパク質は、腫瘍細胞由来のタンパク質の断片を含有し、これらのＨＳＰは、腫瘍免疫を誘発するための抗原提示細胞へのデリバリーで高度に有効である（Suot & Srivastava (1995) Science 269: 1585-1588; Tamura et al. (1997) Science 278: 117-120）。
腫瘍溶解性ウイルスは、ＶＩＳＴＡ抗体と組み合わせて使用され得る。
樹状細胞（ＤＣ）は、抗原特異的応答を刺激するために使用できる強力な抗原提示細胞である。ＤＣは、ｅｘ ｖｉｖｏで産生され、種々のタンパク質およびペプチド抗原ならびに腫瘍細胞抽出物が負荷され得る（Nestle et al. (1998) Nature Medicine 4: 328-332）。ＤＣはまた、同様にこれらの腫瘍抗原を発現するための遺伝的手段によって形質導入され得る。ＤＣはまた、免疫処置を目的として腫瘍細胞に直接的に融合されている（Kugler et al. (2000) Nature Medicine 6:332-336）。ワクチン接種の方法として、より強力な抗腫瘍応答を活性化するためにＤＣ免疫処置が、ＶＩＳＴＡ阻害と有効に組み合わされ得る。
感染性疾患処置
本明細書において記載される方法はまた、特定の毒素または病原体に曝露されている患者を処置するために使用され得る。したがって、本開示は、対象において感染性疾患を処置する方法であって、対象に、本明細書において記載されるような抗体、例えば、アンタゴニストＶＩＳＴＡ抗体を投与し、その結果、対象が感染性疾患について処置されることを含む方法を企図する。上記で論じられるような腫瘍へのその適用と同様に、抗体媒介性ＶＩＳＴＡ阻害は、病原体、毒素および自己抗原に対する免疫応答を刺激するために単独で、またはアジュバントとして、ワクチンと組み合わせて使用され得る。この治療アプローチが特に有用であろう病原体の例として、現在有効なワクチンがない病原体または従来のワクチンが決して完全に有効ではない病原体が挙げられる。これらとして、それだけには限らないが、ＨＩＶ、肝炎（Ａ、Ｂ＆Ｃ）、インフルエンザ、ヘルペス、ジアルディア、マラリア、リーシュマニア、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）が挙げられる。ＶＩＳＴＡ阻害は、感染の過程にわたって変更された抗原を示すＨＩＶなどの病原体による確立された感染に対して有用であり得る。
本明細書において記載される方法によって処置可能であり得る感染症を引き起こす病原性ウイルスの一部の例として、ＨＩＶ、肝炎（Ａ、ＢまたはＣ）、ヘルペスウイルス（例えば、ＶＺＶ、ＨＳＶ－１、ＨＡＶ－６、ＨＳＶ－ＩＩおよびＣＭＶ、エプスタイン・バーウイルス）、アデノウイルス、インフルエンザウイルス、フラビウイルス、エコーウイルス、ライノウイルス、コクサッキーウイルス、コロナウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ムンプスウイルス、ロタウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、パルボウイルス、ワクシニアウイルス、ＨＴＬＶウイルス、デングウイルス、パピローマウイルス、軟属腫ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ＪＣウイルスおよびアルボウイルス脳炎ウイルスが挙げられる。
本明細書において記載される方法によって処置可能であり得る感染症を引き起こす病原性細菌の一部の例として、クラミジア、リケッチア菌、マイコバクテリア、ブドウ球菌、連鎖球菌、肺炎球菌（ｐｎｅｕｍｏｎｏｃｏｃｃｉ）、髄膜炎菌および淋菌、クレブシエラ、プロテウス、セラチア、シュードモナス、レジオネラ、ジフテリア、サルモネラ、バチルス、コレラ、テタヌス、ボツリヌス症、炭疽菌、ペスト、レプトスピラ症およびライム病菌が挙げられる。
本明細書において記載される方法によって処置可能であり得る感染症を引き起こす病原性真菌の一部の例として、カンジダ（アルビカンス（ａｌｂｉｃａｎｓ）、クルセイ（ｋｒｕｓｅｉ）、グラブラタ（ｇｌａｂｒａｔａ）、トロピカリス（ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）など）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）（フミガツス（ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、ニガー（ｎｉｇｅｒ）など）、ムコラレス（Ｍｕｃｏｒａｌｅｓ）属（ムコール（ｍｕｃｏｒ）、アブシジア（ａｂｓｉｄｉａ）、リゾプス（ｒｈｉｚｏｐｕｓ））、スポロトリックス・シェンキイ（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ ｓｃｈｅｎｋｉｉ）、ブラストミセス・デルマチチディス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）、パラコクシジオイデス・ブラシリエンシス（Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）、コクシジオイデス・イミチス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ）およびヒストプラズマ・カプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）が挙げられる。
本明細書において記載される方法によって処置可能であり得る感染症を引き起こす病原性寄生生物の一部の例として、エントアメーバ・ヒストリチカ（Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ）、大腸バランチジウム、ネグレリア・フォーレリ（Ｎａｅｇｌｅｒｉａｆｏｗｌｅｒｉ）、アカントアメーバ属（Ａｃａｎｔｈａｍｏｅｂａ）の種、ランブル鞭毛虫（Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｉａ）、クリプトスポリジウム属（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）の種、ニューモシスチス・カリニ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ）、プラスモディウム・ビバックス（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｖｉｖａｘ）、ネズミバベシア（Ｂａｂｅｓｉａ ｍｉｃｒｏｔｉ）、トリパノソーマ・ブルセイ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｂｒｕｃｅｉ）、クルーズトリパノソーマ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ）、ドノバンリーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｄｏｎｏｖａｎｉ）、トキソプラズマ原虫（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ）およびブラジル鉤虫（Ｎｉｐｐｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）が挙げられる。
上記の方法のすべてにおいて、ＶＩＳＴＡ阻害を、他の形態の免疫療法、例えば、本明細書において記載されるもの、例えば、サイトカイン処置（例えば、インターフェロン、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｇ－ＣＳＦ、ＩＬ－２）または腫瘍抗原の増強された提示を提供し得る二重特異性抗体療法と組み合わせることができる（例えば、Holliger (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448; Poljak (1994) Structure 2: 1121-1123を参照のこと）。
投与の経路および担体
種々の実施形態では、抗体は、それだけに限らないが、経口、動脈内、非経口、鼻腔内の、筋肉内、心臓内、脳室内、気管内、頬側、直腸の、腹腔内、皮内、局所、経皮およびくも膜下腔内を含む種々の経路によって、またはそうでなければ、移植もしくは吸入によってインビボで投与され得る。対象組成物は、それだけに限らないが、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、軟膏、溶液、坐剤、浣腸、注射剤、吸入剤およびエアロゾルを含む固体、半固体、液体またはガス形態に製剤され得る。抗体をコードする核酸分子は、文献に記載されるように、金微粒子上にコーティングされ、微粒子銃デバイスまたは「遺伝子銃」によって皮内に送達され得る（例えば、Tang et al., Nature 356:152-154 (1992)を参照のこと）。適当な製剤および投与の経路は、意図される適用に従って選択され得る。
種々の実施形態では、抗体を含む組成物は、さまざまな薬学的に許容される担体と共に製剤で提供される（例えば、Gennaro, Remington: The Science and Practice of Pharmacy with Facts and Comparisons: Drugfacts Plus, 20th ed. (2003)、Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7th ed., Lippencott Williams and Wilkins (2004)、Kibbe et al., Handbook of Pharmaceutical Excipients, 3rd ed., Pharmaceutical Press (2000)を参照のこと）。媒体、アジュバントおよび希釈剤を含む種々の薬学的に許容される担体が利用可能である。さらに、種々の薬学的に許容される補助物質、例えば、ｐＨ調整剤および緩衝剤、張力調整剤、安定化剤、湿潤剤なども利用可能である。限定されない例示的担体として、生理食塩水、緩衝生理食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノールおよびそれらの組合せが挙げられる。
種々の実施形態では、抗体を含む組成物は、水性または非水性溶媒、例えば、植物油または他のオイル、合成脂肪酸グリセリド、高度脂肪酸のエステルまたはプロピレングリコールにそれらを、必要に応じて、従来の添加剤、例えば、溶解剤、等張性物質、懸濁剤、乳化剤、安定化剤および保存料とともに溶解、懸濁または乳化することによって、皮下投与を含む注射のために製剤化され得る。種々の実施形態では、組成物は、吸入のために、例えば、加圧された許容される噴霧剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素などを使用して製剤化され得る。組成物はまた、種々の実施形態では、徐放性マイクロカプセル剤に、例えば、生分解性または非生分解性ポリマーを用いて製剤化され得る。限定されない例示的生分解性製剤は、ポリ乳酸－グリコール酸ポリマーを含む。は限定されない例示的非生分解性製剤は、ポリグリセリン脂肪酸エステルを含む。このような製剤を作製するある特定の方法は、例えば、ＥＰ１１２５５８４Ａ１に記載されている。
各々抗体もしくは抗体の組合せの１つもしくは複数の用量を含有する１つまたは複数の容器を含む医薬パックおよびキットも提供される。一部の実施形態では、単位投与量が提供され、単位投与量は、抗体または抗体の組合せを１種または複数のさらなる物質とともに、または伴わずに含む組成物の所定量を含有する。一部の実施形態では、このような単位投与量は、注射のための単回使用充填済みシリンジで供給される。種々の実施形態では、単位投与量中に含有される組成物は、生理食塩水、スクロースなど；バッファー、例えば、リン酸などを含み得る；および／または安定および有効なＰＨ範囲内で製剤化され得る。あるいは、一部の実施形態では、組成物は、適当な液体、例えば、滅菌水の添加の際に再構成され得る凍結乾燥散剤として提供され得る。一部の実施形態では、組成物は、それだけに限らないが、スクロースおよびアルギニンを含むタンパク質凝集を阻害する１種または複数の物質を含む。一部の実施形態では、本発明の組成物は、ヘパリンおよび／またはプロテオグリカンを含む。
医薬組成物は、特定の適応症の処置または予防にとって有効な量で投与され得る。治療上有効量は、通常、処置されている対象の体重、その体調または健康状態、処置されるべき状態の広範性または処置されている対象の年齢に応じて変わる。一般に、抗体は、用量あたり約１０μｇ／体重１ｋｇ～約１００ｍｇ／体重１ｋｇの範囲の量で投与され得る。一部の実施形態では、抗体は、用量あたり約５０μｇ／体重１ｋｇ～約５ｍｇ／体重１ｋｇの範囲の量で投与され得る。一部の実施形態では、抗体は、用量あたり約１０９μｇ／体重１ｋｇ～約１０ｍｇ／体重１ｋｇの範囲の量で投与され得る。一部の実施形態では、抗体は、用量あたり約１００μｇ／体重１ｋｇ～約２０ｍｇ／体重１ｋｇの範囲の量で投与され得る。一部の実施形態では、抗体は、用量あたり約０．５ｍｇ／体重１ｋｇ～約２０ｍｇ／体重１ｋｇの範囲の量で投与され得る。
抗体組成物は、対象に必要に応じて投与され得る。投与の頻度の決定は、処置されている状態、処置されている対象の年齢、処置されている状態の重症度、処置されている対象の全身健康状態などの考慮に基づいて当業者、例えば、主治医によって行われ得る。一部の実施形態では、抗体の有効用量は、対象に１回または複数回投与される。種々の実施形態では、抗体の有効用量は、対象に、１ヶ月に１回、１ヶ月に１回未満、例えば、例えば、２ヶ月毎または３ヶ月毎などで投与される。他の実施形態では、抗体の有効用量は、１ヶ月に１回より多く、例えば、３週間毎、２週間毎または毎週などで投与される。一部の実施形態では、抗体の有効用量は、１、２、３、４または５週間あたり１回投与される。一部の実施形態では、抗体の有効用量は、週に２回または３回投与される。抗体の有効用量は、対象に少なくとも１回投与される。一部の実施形態では、抗体の有効用量は、少なくとも１ヶ月、少なくとも６ヶ月または少なくとも１年の期間を含めて、複数回投与され得る。
ある特定の実施形態では、本明細書において論じられる抗ＶＩＳＴＡ抗体および第２の物質の組合せは、薬学的に許容される担体中の単一組成物として併用投与され得る、または薬学的に許容される担体中に抗ＶＩＳＴＡ抗体および第２の物質を有する別個の組成物として併用投与され得る。一実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ抗体および第２の物質の組合せは、逐次投与され得る。２種の物質の投与は、例えば、３０分、６０分、９０分、１２０分、３時間、６時間、１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、３日、５日、７日もしくは１週間以上離れている時間で始まり得る、または第２の物質の投与は、例えば、第１の物質が投与された３０分、６０分、９０分、１２０分、３時間、６時間、１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、３日、５日、７日もしくは１週間以上後に始まり得る。
低ｐＨ結合性ｈＶＩＳＴＡ－ＥＣＤ Ａｂを同定する方法
また、酸性（または低ｐＨ）条件でＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と特異的に結合するＡｂを同定する方法も本明細書において提供される。ある特定の実施形態では、ｐＨ６．５以下でＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と特異的に結合するＡｂを同定する方法は、ｐＨ６．５以下で試験Ａｂまたは複数の試験Ａｂを、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と接触させることおよびＶＩＳＴＡタンパク質のＥＣＤと、１０－７Ｍ、１０－８Ｍ、１０－９Ｍ以下のＫＤで結合する場合に試験Ａｂを選択することを含む。一部の実施形態では、方法は、ｐＨ６．５で実施される、他のものでは、ｐＨ６．０で、またはｐＨ５．５で、またはｐＨ５．０で実施される。一部の実施形態では、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質は、ｈＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質である、またはｈＶＩＳＴＡ ＩｇＶドメインを含む、または配列番号２のアミノ酸２０～９５もしくは配列番号２のアミノ酸２０～７０、３５～９５もしくは３５～７０を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、ポリペプチドはまた、配列番号２のアミノ酸９５～１０５を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸３５～１２７または３７～１２５を含む。
一部の実施形態では、方法は、中性、生理学的またはアルカリ性ｐＨで、例えば、ｐＨ７．０またはｐＨ７．４で試験Ａｂまたは複数の試験Ａｂの結合を試験することをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、ｐＨ６．５以下で１０－７Ｍ、１０－８Ｍ、１０－９Ｍ以下のＫＤで、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と結合する場合だけでなく、ｐＨ７．０またはｐＨ７．４でポリペプチドと特異的に結合する場合にも抗体を選択することをさらに含む。一部の実施形態では、試験Ａｂは、酸性条件で、例えば、ｐＨ６．５以下でＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と特異的に結合し、中性および／またはアルカリ性ｐＨで同様の親和性でＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質とも特異的に結合する（すなわち、それらが「汎結合剤」である）場合に選択される。例えば、一部のこのようなＡｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、ｐＨ６．５でのＫＤが、ｐＨ７．０でのＫＤの１．５倍以内であるように、ｐＨ６．５で、およびｐＨ７．０またはｐＨ７．４の両方で（例えば、２５℃の、または３７℃の一定温度で）、１０－７Ｍ、１０－８Ｍ、１０－９Ｍ以下のＫＤで結合し得る。
ある特定のＡｂは、酸性条件で、例えば、ｐＨ６．５以下で、中性またはアルカリ性ｐＨでよりも高い親和性でＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と特異的に結合する場合に選択され得る（「ｐＨ感受性結合剤」または「ｐＨ感受性Ａｂ」）。例えば、一部の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、ｐＨ６．５で１０－８Ｍ以下のＫＤで、およびｐＨ７．０またはｐＨ７．４で１０－８Ｍより大きいＫＤで結合し得る。一部のこのような実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、ｐＨ６．５で１０－８Ｍ以下のＫＤで、およびｐＨ７．０またはｐＨ７．４でｐＨ６．５でのものよりも１．５倍よりも高いＫＤで結合し得る。ある特定の実施形態では、ｐＨ感受性Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、ｐＨ６．５でｐＨ７．０またはｐＨ７．４でよりも少なくとも１．５倍、２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、３００倍、５００倍、１０００倍または５０００倍低いＫＤで特異的に結合する（例えば、２５℃の、または３７℃の一定温度で）場合に選択される。例えば、一部の場合には、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、ｐＨ６．０で、ｐＨ７．０またはｐＨ７．４以上と比較して少なくとも１．５倍、２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、３００倍、５００倍、１０００倍または５０００倍少ないＫＤで結合する（例えば、２５℃の、または３７℃の一定温度で）場合に選択される。
ある特定の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、酸性条件で、中性、生理学的またはアルカリ性条件におけるものに対して低いｋｏｆｆで特異的に結合する場合に選択される。ある特定の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、酸性条件で、例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように、ｐＨ６．５で、ｐＨ７．０またはｐＨ７．４でのｋｏｆｆよりも少なくとも１．５倍、２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍または１００倍低いｋｏｆｆで結合する場合に選択される。例えば、一部の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように、ｐＨ６．０で、ｐＨ７．０またはｐＨ７．４に対して少なくとも１．５倍、２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍または１００倍低いｋｏｆｆ速度で結合する場合に選択される。
ある特定の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、酸性条件で、中性またはアルカリ性条件に対して高いｋｏｎで結合する場合に、選択される。ある特定の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、酸性条件で、例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように、ｐＨ６．５で、ｐＨ７．０またはｐＨ７．４でのｋｏｎよりも少なくとも２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍または１００倍高いｋｏｎで結合する場合に、選択される。例えば、一部の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように、ｐＨ６．０で、ｐＨ７．０またはｐＨ７．４でよりも少なくとも２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍または１００倍高いｋｏｎで結合する場合に、選択される。
ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤ結合性ＡｂのｐＨ感受性を修飾する方法
ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と結合するが、ｐＨ６．５以下では結合しない、またはｐＨ６．５以下では高親和性で結合しないＡｂは、ｐＨ６．５以下でその結合の親和性を増大するように操作され得る。例えば、Ａｂのパラトープは、例えば、１つまたは複数のアミノ酸残基の置換によって突然変異され得る。例えば、一部の実施形態では、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤとの接触残基である重鎖または軽鎖中の１～８個、例えば、１～６個、１～４個、１～３個、１～２個または１個のアミノ酸残基（例えば、ＣＤＲのうちの１つまたは複数中の残基）が、異なるアミノ酸残基で置換され得る。次いで、突然変異されたＡｂは、ｐＨ６．５以下でのＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質との結合について試験される場合があり、親抗体よりも高い親和性で結合するＡｂ種が選択され得る。必要に応じて、上記のステップは、Ａｂで突然変異誘発および選択の２以上のラウンドが実施され、酸性ｐＨでの最高親和性結合剤が選択されるように反復され得る。一部の実施形態では、このような選択は、得られた抗体の抗腫瘍効力をその親を上回って改善し得る。
上記の選択法はまた、抗体と特異的に結合するＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質について、これまでに記載された一般的な選択に従って設計され得る。すなわち、ある特定の実施形態では、改善されたＡｂは、ＶＩＳＴＡタンパク質のＥＣＤとｐＨ６．５で１０－８Ｍ以下のＫＤで結合する場合に選択される。一部の実施形態では、選択は、ｐＨ６．５での代わりにｐＨ６．０で、またはｐＨ５．５で、またはｐＨ５．０で実施される。一部の実施形態では、選択プロセスのために使用されるＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質は、完全ｈＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質である、またはｈＶＩＳＴＡ ＩｇＶドメインを含むポリペプチドである、または配列番号２のアミノ酸２０～９５もしくは配列番号２のアミノ酸２０～７０、３５～９５もしくは３５～７０を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、ポリペプチドはまた、配列番号２のアミノ酸９５～１０５を含む。一部の実施形態では。配列番号２のアミノ酸残基３５～１２７を含むポリペプチドが使用される。
一部の実施形態では、酸性ｐＨでのＶＩＳＴＡ抗体のＶＩＳＴＡ ＥＣＤとの結合を改善する方法は、１つまたは複数のＶＨまたはＶＬ ＣＤＲ、例えば、ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３またはＶＨ ＣＤＲ１およびＣＤＲ３のみの中のグルタミン酸、アスパラギン酸および／またはヒスチジン残基の数を増大することを含む。ある特定の実施形態では、方法は、例えば、結晶学によって決定されるようにｈＶＩＳＴＡと接触する抗体の領域中のグルタミン酸、アスパラギン酸および／またはヒスチジン残基の数を増大することを含む。
一部の実施形態では、方法は、中性、アルカリ性または生理学的ｐＨで、例えば、ｐＨ７．０または７．４で選択されたＡｂの結合を試験することをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質とｐＨ６．５以下で１０－８Ｍ以下のＫＤで結合する場合だけでなく、ｐＨ７．０または７．４でポリペプチドと特異的に結合する場合にも、抗体を選択することをさらに含む。一部のこのような実施形態では、Ａｂは、酸性条件で、例えば、ｐＨ６．５以下でＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と特異的に結合し、また、中性および／またはアルカリ性または生理学的ｐＨで、同様の親和性でＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と特異的に結合する場合に選択される（すなわち、それらは「汎結合剤」である）。例えば、一部のこのようなＡｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、ｐＨ６．５でのＫＤが、ｐＨ７．０で、またはｐＨ７．４でのＫＤの１．５倍以内であるように、ｐＨ６．５で、およびｐＨ７．０の両方で１０－８Ｍ以下のＫＤで結合し得る（例えば、２５℃の、または３７℃の一定温度で）。
ある特定のＡｂは、それらが酸性条件で、例えば、ｐＨ６．５以下で、中性、生理学的またはアルカリ性ｐＨでよりも高い親和性でＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と特異的に結合する場合に選択され得る（「ｐＨ感受性結合剤」または「ｐＨ感受性Ａｂ」）。例えば、一部の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、ｐＨ６．５で１０－８Ｍ以下のＫＤで、およびｐＨ７．０で１０－８Ｍよりも大きいＫＤで結合し得る。一部のこのような実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、ｐＨ６．５で１０－８Ｍ以下のＫＤで、およびｐＨ７．０で、ｐＨ６．５でのものよりも１．５倍よりも大きいＫＤで結合し得る。ある特定の実施形態では、ｐＨ感受性Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、ｐＨ６．５で、ｐＨ７．０またはｐＨ７．４でよりも少なくとも１．５倍、２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、３００倍、５００倍、１０００倍または５０００倍低いＫＤで（例えば、２５℃の、または３７℃の一定温度で）特異的に結合する場合に選択される。例えば、一部の場合には、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、ｐＨ６．０で、ｐＨ７．０またはｐＨ７．４またはそれより高いものに対して少なくとも１．５倍、２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、３００倍、５００倍、１０００倍または５０００倍少ないＫＤで（例えば、２５℃の、または３７℃の一定温度で）結合する場合に選択される。
ある特定の実施形態では、方法は、２つのｐＨ値でｋｏｆｆを決定することをさらに含む。一部のこのような実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、酸性条件で、中性、生理学的またはアルカリ性条件におけるものに対して低いｋｏｆｆで特異的に結合する場合に選択される。ある特定の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、酸性条件で、例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように、ｐＨ６．５で、ｐＨ７．０またはｐＨ７．４でのｋｏｆｆよりも少なくとも１．５倍、２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍または１００倍低いｋｏｆｆで結合する場合に選択される。例えば、一部の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように、ｐＨ６．０で、ｐＨ７．０に対して少なくとも１．５倍、２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍または１００倍低いｋｏｆｆ速度で結合する場合に選択される。
ある特定の実施形態では、方法は、２つのｐＨ値でｋｏｎを決定することをさらに含む。一部のこのような実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、酸性条件で、中性、生理学的またはアルカリ性条件と比較して高いｋｏｎで結合する場合に選択される。ある特定の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、酸性条件で、例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように、ｐＨ６．５で、ｐＨ７．０またはｐＨ７．４でのｋｏｎよりも少なくとも２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍または１００倍高いｋｏｎで結合する場合に選択される。例えば、一部の実施形態では、Ａｂは、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と、例えば、２５℃で、または３７℃で測定されるように、ｐＨ６．０で、ｐＨ７．０またはｐＨ７．４でよりも少なくとも２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍または１００倍高いｋｏｎで結合する場合に選択される。
ｈｕＶＩＳＴＡと、酸性ｐＨで、中性または生理学的ｐＨに対して優先的に結合する抗体は、酸性ｐＨ、例えば、ｐＨ６．０または６．５で結合についてＶＩＳＴＡ抗体またはＦａｂまたはｓｃＦｖのライブラリーを陽性にスクリーニングすることおよび中性ｐＨ、例えば、ｐＨ７．０または生理学的ｐＨ、例えば、ｐＨ７．４で結合がないことについてライブラリーを陰性にスクリーニングすることによって同定できる。ライブラリーは、例えば、酸性ｐＨで、帯電され得る、ＶＩＳＴＡと結合する可能性がより高い結合ドメインを選択するために、グルタミン酸、アスパラギン酸およびヒスチジン残基において濃縮され得る。スクリーニングは、酸性ｐＨでの陽性選択および中性または生理学的ｐＨでの陰性選択含み得る。陽性および陰性選択は変更され得る。
あるいは、中性および酸性ｐＨでＶＩＳＴＡと結合する抗体を、酸性ｐＨで結合を維持しながら、またはさらに増強しながら、中性ｐＨで結合を欠くように操作してもよい。例えば、１つまたは複数のＣＤＲ中などのＶＨおよび適宜ＶＬアミノ酸残基を置換することによって、ライブラリーを作出することができ、ライブラリーを、酸性ｐＨでｈＶＩＳＴＡと結合する抗体についての陽性選択および中性（または生理学的）ｐＨでＶＩＳＴＡと結合しない抗体についての陰性選択によってスクリーニングする。所望のｐＨ選択性、ｐＨ依存性またはｐＨ独立性ＶＩＳＴＡ結合プロフィールを有する抗体と結合するＶＩＳＴＡを操作するために同様の方法が使用され得る。
特定の実施形態
本開示のさらなる実施形態として、以下が挙げられる：
１． 酸性条件でヒトＶＩＳＴＡ（ｈＶＩＳＴＡ）と特異的に結合する単離抗体。
２． 酸性条件でｈＶＩＳＴＡに特異的に結合するが、中性または生理学的条件では著しく結合しない、実施形態１に記載の単離抗体。
３． 酸性条件で、中性または生理学的条件におけるそのＫＤよりも少なくとも１０倍低いＫＤでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１または２に記載の単離抗体。
４． 酸性条件で、中性または生理学的条件におけるそのＫＤよりも少なくとも１００倍低いＫＤでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から３のいずれか１つに記載の単離抗体。
５． 酸性条件で、中性または生理学的条件におけるそのＫＤよりも少なくとも１０００倍低いＫＤでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から４のいずれか１つに記載の単離抗体。
６． 中性または生理学的条件で、１０－５Ｍ以上のＫＤでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から５のいずれか１つに記載の単離抗体。
７． 中性または生理学的条件で、１０－４Ｍ以上のＫＤでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から６のいずれか１つに記載の単離抗体。
８． 中性または生理学的条件で、１０－３Ｍ以上のＫＤでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から７のいずれか１つに記載の単離抗体。
９． 酸性条件で、１０－７Ｍ以下のＫＤでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から８のいずれか１つに記載の単離抗体。
１０． 酸性条件で、１０－８Ｍ以下のＫＤでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から９のいずれか１つに記載の単離抗体。
１１． 酸性条件で、１０－９Ｍ以下のＫＤでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から１０のいずれか１つに記載の単離抗体。
１２． 酸性条件で、１０－７Ｍ以下のＫＤでｈＶＩＳＴＡと結合する、および中性または生理学的条件で１０－４以上のＫＤでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から１１のいずれか１つに記載の単離抗体。
１３． 酸性条件で、１０－７Ｍ以下のＫＤでｈＶＩＳＴＡと結合する、および中性または生理学的条件で１０－５以上のＫＤでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から１２のいずれか１つに記載の単離抗体。
１４． 酸性条件で、中性または生理学的条件におけるそのｋｏｆｆよりも少なくとも５倍低いｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から１３のいずれか１つに記載の単離抗体。
１５． 酸性条件で、中性または生理学的条件におけるそのｋｏｆｆよりも少なくとも１０倍低いｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から１４のいずれか１つに記載の単離抗体。
１６． 酸性条件で、中性または生理学的条件におけるそのｋｏｆｆよりも少なくとも５０倍低いｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から１５のいずれか１つに記載の単離抗体。
１７． 酸性条件で、中性または生理学的条件におけるそのｋｏｆｆよりも少なくとも１００倍低いｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から１６のいずれか１つに記載の単離抗体。
１８． 酸性条件で、７×１０－３ｓ－１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から１７のいずれか１つに記載の単離抗体。
１９． 酸性条件で、５×１０－３ｓ－１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から１８のいずれか１つに記載の単離抗体。
２０． 酸性条件で、３×１０－３ｓ－１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から１９のいずれか１つに記載の単離抗体。
２１． 酸性条件で、１０－３ｓ－１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から２０のいずれか１つに記載の単離抗体。
２２． 酸性条件で、７×１０－４ｓ－１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から２１のいずれか１つに記載の単離抗体。
２３． 酸性条件で、５×１０－４ｓ－１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から２２のいずれか１つに記載の単離抗体。
２４． 酸性条件で、３×１０－４ｓ－１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から２３のいずれか１つに記載の単離抗体。
２５． 酸性条件で、１０－４ｓ－１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から２４のいずれか１つに記載の単離抗体。
２６． 酸性条件で、７×１０－５ｓ－１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から２５のいずれか１つに記載の単離抗体。
２７． 酸性条件で、５×１０－５ｓ－１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から２６のいずれか１つに記載の単離抗体。
２８． 酸性条件で、３×１０－５ｓ－１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から２１のいずれか１つに記載の単離抗体。
２９． 酸性条件で、１０－５ｓ－１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から２８のいずれか１つに記載の単離抗体。
３０． 中性または生理学的条件で、１０－３ｓ－１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から２９のいずれか１つに記載の単離抗体。
３１． 中性または生理学的条件で、３×１０－３ｓ－１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から３０のいずれか１つに記載の単離抗体。
３２． 中性または生理学的条件で、５×１０－３ｓ－１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から３１のいずれか１つに記載の単離抗体。
３３． 中性または生理学的条件で、７×１０－３ｓ－１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から３２のいずれか１つに記載の単離抗体。
３４． 中性または生理学的条件で、１０－２ｓ－１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から３３のいずれか１つに記載の単離抗体。
３５． 中性または生理学的条件で、３×１０－２ｓ－１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から３４のいずれか１つに記載の単離抗体。
３６． 中性または生理学的条件で、５×１０－２ｓ－１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から３５のいずれか１つに記載の単離抗体。
３７． 中性または生理学的条件で、７×１０－２ｓ－１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から３６のいずれか１つに記載の単離抗体。
３８． 中性または生理学的条件での抗体のｈＶＩＳＴＡとの結合が、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって検出可能ではない、実施形態１から３７のいずれか１つに記載の単離抗体。
３９． 酸性条件で、５×１０－３ｓ－１以下のｋｏｆｆで、および中性または生理学的条件で、７×１０－３ｓ－１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から３８のいずれか１つに記載の単離抗体。
４０． 酸性条件で、１０－４ｓ－１以下のｋｏｆｆで、および中性または生理学的条件で、１０－２ｓ－１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から３９のいずれか１つに記載の単離抗体。
４１． 酸性条件で、１０－８Ｍ以下のＫＤおよび５×１０－３ｓ－１以下のｋｏｆｆで、ならびに中性または生理学的条件（ｎｅｕｔｒａｌ ｏｆ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ）で、１０－６Ｍ以上のＫＤおよび７×１０－３ｓ－１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から４０のいずれか１つに記載の単離抗体。
４２． 酸性条件で、１０－８Ｍ以下のＫＤおよび３×１０－３ｓ－１以下のｋｏｆｆで、ならびに中性または生理学的条件（ｎｅｕｔｒａｌ ｏｆ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ）で、１０－６Ｍ以上のＫＤおよび１０－２ｓ－１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から４１のいずれか１つに記載の単離抗体。
４３． 酸性条件で、１０－１２～１０－８ＭのＫＤおよび１０－４～５×１０－３ｓ－１のｋｏｆｆで、ならびに中性または生理学的条件（ｎｅｕｔｒａｌ ｏｆ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ）で、１０－７～１０－４ＭのＫＤおよび３×１０－３～１０－２ｓ－１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から４２のいずれか１つに記載の単離抗体。
４４． 酸性条件で、１０－１２～１０－８ＭのＫＤおよび１０－４～５×１０－３ｓ－１のｋｏｆｆで、ならびに中性または生理学的条件（ｎｅｕｔｒａｌ ｏｆ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ）で、１０－７～１０－４ＭのＫＤおよび３×１０－３～１０－２ｓ－１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合し、ｃｙｎｏ ＶＩＳＴＡと１０－７以下のＫＤで結合する、実施形態１から４３のいずれか１つに記載の単離抗体。
４５． ｐＨ６．９でｐＨ７．４でよりも少なくとも１０倍低いＫＤで、ならびに／またはｐＨ６．５でｐＨ７．４でよりも少なくとも１００倍低い、およびｐＨ６．０でｐＨ７．４でよりも少なくとも１０００倍低いＫＤで、ｈＶＩＳＴＡと結合する、実施形態１から４４のいずれか１つに記載の単離抗体。
４６． カニクイザル（ｃｙｎｏ）ＶＩＳＴＡと特異的に結合する、実施形態１から４５のいずれか１つに記載の単離抗体。
４７． 酸性条件で、生理学的条件と比較してより高い親和性でｃｙｎｏ ＶＩＳＴＡと結合する、実施形態４６に記載の単離抗体。
４８． 酸性条件で、１０－８以下のＫＤおよび／または１０－２以下のｋｏｆｆで、ならびに生理学的条件で、１０－６以上のＫＤおよび／または１０－２以上のｋｏｆｆでｃｙｎｏ ＶＩＳＴＡと結合する、実施形態４５から４７のいずれか１つに記載の単離抗体。
４９． 酸性条件が、６．５以下のｐＨを有する条件である、実施形態１から４８のいずれか１つに記載の単離抗体。
５０． 酸性条件が、６．０～６．５のｐＨを有する条件である、実施形態１から４９のいずれか１つに記載の単離抗体。
５１． 中性条件が、７．０のｐＨを有する条件である、実施形態１から５０のいずれか１つに記載の単離抗体。
５２． 生理学的条件が、７．３５～７．４５のｐＨを有する条件である、実施形態１から５１のいずれか１つに記載の単離抗体。
５３． 生理学的条件が、７．４のｐＨを有する条件である、実施形態１から５２のいずれか１つに記載の単離抗体。
５４． ｈＶＩＳＴＡの、ヒトＴ細胞、例えば、ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞との結合を阻害する（アンタゴニスト抗体）、実施形態１から５３のいずれか１つに記載の単離抗体。
５５． ｐＨ７．０未満のｐＨを有する条件において、ｈＶＩＳＴＡの、ヒトＴ細胞との結合を阻害する、実施形態５４に記載の単離抗体。
５６． ｈＶＩＳＴＡの、ヒトＰＳＧＬ－１（ｈｕＰＳＧＬ－１）との結合を阻害し、および／またはｈｕＰＳＧＬ１と、ｈＶＩＳＴＡとの結合について競合する、実施形態１から５５のいずれか１つに記載の単離抗体。
５７． ｐＨ７．０未満のｐＨを有する条件において、ｈＶＩＳＴＡの、ｈｕＰＳＧＬ－１との結合を阻害する、実施形態５６に記載の単離抗体。
５８． ｈＶＩＳＴＡの、ヘパラン硫酸プロテオグリカンとの結合を阻害する、実施形態１から５７のいずれか１つに記載の単離抗体。
５９． ｐＨ７．０未満のｐＨを有する条件において、ｈＶＩＳＴＡの、ヘパラン硫酸プロテオグリカンとの結合を阻害する、実施形態５８に記載の単離抗体。
６０． ｐＨ７．０未満のｐＨを有する条件が、対象における、および免疫賦活が望まれるｐＨ７．０未満のｐＨを有する腫瘍または任意の患部である、実施形態５５、５７または５９のいずれか１つに記載の単離抗体。
６１． 例えば、実施例に記載されるように決定されるように、例えば、Ｔ細胞増殖を増強すること、Ｔ細胞からのＩＦＮ－γ産生を増強することおよび／またはＴ細胞受容体媒介性ＮＦ－ｋＢシグナル伝達を刺激することによって証明されるように、Ｔ細胞活性化を刺激する、実施形態１から６０のいずれか１つに記載の単離抗体。
６２． ｐＨ７．０未満のｐＨを有する条件において、Ｔ細胞活性化を刺激する、実施形態６１に記載の単離抗体。
６３． ＶＩＳＴＡ媒介性細胞間接着を低減する、実施形態１から６２のいずれか１つに記載の単離抗体。
６４． カニクイザルにおいて少なくとも１００、２００、３００、４００または５００日の平均滞留時間（ＭＲＴ）を有する、実施形態１から６３のいずれか１つに記載の単離抗体。
６５． 投与される対象の末梢血においてＶＩＳＴＡ陽性細胞、例えば、好中球と著しく結合しない、実施形態１から６４のいずれか１つに記載の単離抗体。
６６． 投与される対象の末梢血においてＶＩＳＴＡ陽性細胞、例えば、好中球を著しく枯渇させない、実施形態１から６５のいずれか１つに記載の単離抗体。
６７． 酸性ｐＨでｈＶＩＳＴＡと結合するように操作されているが、中性または生理学的ｐＨではｈＶＩＳＴＡと特異的に結合しない、実施形態１から６６のいずれか１つに記載の単離抗体。
６８． ｈＶＩＳＴＡのヒスチジンが豊富な領域、例えば、ヒスチジンが豊富なβシート伸長でまたはその付近で結合する、実施形態１から６７のいずれか１つに記載の単離抗体。
６９． ６．０～６．５のｐＨを有する条件において、ｈＶＩＳＴＡのヒスチジンが豊富な領域、例えば、ヒスチジンが豊富なβシート伸長でまたはその付近で結合する、実施形態６８に記載の単離抗体。
７０． 例えば、実施例１５に記載される競合ＢＬＩエピトープビニングアッセイによって決定されるように、ｈＶＩＳＴＡとの結合について、例えば、Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７５７、Ｐ１－０６８７５９、Ｐ１－０６８７６１、Ｐ１－０６８７６３、Ｐ１－０６８７６５、Ｐ１－０６８７６７、Ｐ１－０６８７６９、Ｐ１－０６８７７１、Ｐ１－０６８７７３、Ｐ１－０６８７７５、Ｐ１－０６９０５９、Ｐ１－０６９０６１、Ｐ１－０６９０６３、Ｐ１－０６９０６５、Ｐ１－０６９０６７、Ｐ１－０６９０６９、Ｐ１－０６９０７１、Ｐ１－０６９０７３、Ｐ１－０６９０７５、Ｐ１－０６９０７７、Ｐ１－０６９０７７、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、またはＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６１０１５、Ｐ１－０６８７３６、Ｐ１－０６８７３８、Ｐ１－０６８７４０、Ｐ１－０６８７４２、Ｐ１－０６８７４４、Ｐ１－０６８７４８、Ｐ１－０６８７５０、Ｐ１－０６８７５２ Ｐ１－０６８７５４、ＶＩＳＴＡ．４またはその誘導体、例えば、Ｐ１－０７０９７６、Ｐ１－０６５３３３、Ｐ１－０７０９７６＿Ｈ９５ＤまたはＰ１－０７０９７６＿Ｅ９７Ｐ、（例えば、ＩｇＧ１．３との関連で）のＶＨおよびＶＬを含む、本明細書において記載される１つまたは複数の抗体と競合または交差競合する、実施形態１から６８のいずれか１つに記載の単離抗体。
７１． 例えば、実施例１５に記載される競合ＢＬＩエピトープビニングアッセイによって決定されるように、エピトープ群Ａと結合する、実施形態１から７０のいずれか１つに記載の単離抗体。
７２． 以下のアミノ酸残基：Ｖ３４、Ｔ３５、Ｙ３７、Ｋ３８、Ｔ３９、Ｙ４１、Ｓ５２、Ｒ５４、Ｔ６１、Ｆ６２、Ｑ６３、Ｌ６５、Ｈ６６、Ｌ６７、Ｈ６８、Ｈ６９、Ｆ９７、Ｌ１１５、Ｖ１１７、Ｉ１１９、Ｈ１２１、Ｈ１２２、Ｓ１２４、Ｅ１２５、Ｒ１２７のうち１つまたは複数が、突然変異されており、番号付けが成熟ｈＶＩＳＴＡのものである、ｈＶＩＳＴＡと著しく結合しない、実施形態１から７０のいずれか１つに記載の単離抗体。
７３． 例えば、実施例において記載される酵母突然変異解析によって決定されるような、配列番号１または２からなるｈＶＩＳＴＡと特異的に結合するが、以下のアミノ酸残基：Ｖ３４、Ｔ３５、Ｙ３７、Ｋ３８、Ｔ３９、Ｙ４１、Ｓ５２、Ｒ５４、Ｔ６１、Ｆ６２、Ｑ６３、Ｌ６５、Ｈ６６、Ｌ６７、Ｈ６８、Ｈ６９、Ｆ９７、Ｌ１１５、Ｖ１１７、Ｉ１１９、Ｈ１２１、Ｈ１２２、Ｓ１２４、Ｅ１２５、Ｒ１２７のうち１つまたは複数が、突然変異されており、番号付けが成熟ｈＶＩＳＴＡのものである、ｈＶＩＳＴＡと著しく結合しない、単離抗体。
７４． 以下のアミノ酸残基：Ｖ３４、Ｔ３５、Ｙ３７、Ｋ３８、Ｔ３９、Ｙ４１、Ｓ５２、Ｒ５４、Ｔ６１、Ｆ６２、Ｑ６３、Ｌ６５、Ｈ６６、Ｌ６７、Ｈ６８、Ｈ６９、Ｆ９７、Ｌ１１５、Ｖ１１７、Ｉ１１９、Ｈ１２１、Ｈ１２２、Ｓ１２４、Ｅ１２５、Ｒ１２７のうち２つ、３つ、４つ、５つまたはそれより多くが突然変異されており、番号付けが成熟ｈＶＩＳＴＡのものである、ｈＶＩＳＴＡと著しく結合しない、実施形態１から７３のいずれか１つに記載の単離抗体。
７５． 以下の残基：Ｖ３４、Ｔ３５、Ｙ３７、Ｋ３８、Ｔ３９、Ｙ４１、Ｓ５２、Ｒ５４、Ｔ６１、Ｆ６２、Ｑ６３、Ｌ６５、Ｈ６６、Ｌ６７、Ｈ６８、Ｈ６９、Ｆ９７、Ｌ１１５、Ｖ１１７、Ｉ１１９、Ｈ１２１、Ｈ１２２、Ｓ１２４、Ｅ１２５、Ｒ１２７のうち１つまたは複数が、表１５において示される対応する残基のうち１つに突然変異されており、番号付けが成熟ｈＶＩＳＴＡのものである、ｈＶＩＳＴＡと著しく結合しない、実施形態７２から７４のいずれか１つに記載の単離抗体。
７６． 実施例において記載されるように、ＨＤＸ－ＭＳによって決定されるように、ｈＶＩＳＴＡのアミノ酸領域８６ＲＲＰＩＲＮＬＴＦＱＤＬ９７（配列番号４９７）と結合する、実施形態１から７５のいずれか１つに記載の単離抗体。
７７． ｈＶＩＳＴＡのアミノ酸領域８６ＲＲＰＩＲＮＬＴＦＱＤＬ９７（配列番号４９７）と結合し、アミノ酸５７ＬＧＰＶＤＫＧＨＤＶＴＦ６８（配列番号４９８）および１４８ＶＶＥＩＲＨＨＨＳＥＨＲＶＨＧＡＭＥ１６５（配列番号４９９）ともあまり強くはないが結合する、実施形態１から７６のいずれか１つに記載の単離抗体。
７８． 酸性条件下で、例えば、６．５のｐＨでｈＶＩＳＴＡと特異的に結合し（例えば、実施例において記載されるアッセイのうちの１つによって測定されるように）、ＶＩＳＴＡと（ａ）Ｔ細胞または（ｂ）ＰＳＧＬ－１の間の相互作用を阻害し、例えば、実施例１５に記載される酵母表面ディスプレイおよびＮＧＳアッセイを使用して決定されるように、本明細書において記載される抗体、例えば、ＶＩＳＴＡ．４、Ｐ１－０７０９７６、Ｐ１－０６５３３３、Ｐ１－０７０９７６＿Ｈ９５Ｄ、Ｐ１－０７０９７６＿Ｅ９７Ｐ、Ｐ１－０６１０１５、Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７６１またはＰ１－０６８７６７の１つまたは複数（例えば、少なくとも１～３、１～５、１～１０、５～１０、５～１５またはすべて）のエネルギー的に重要な接触残基、例えば、エネルギー的に重要な接触残基の以下の群：（ｉ）Ｖ３４、Ｔ３５、Ｙ３７、Ｋ３８、Ｔ３９、Ｙ４１、Ｓ５２、Ｒ５４、Ｔ６１、Ｆ６２、Ｑ６３、Ｌ６５、Ｈ６６、Ｌ６７、Ｈ６８、Ｈ６９、Ｆ９７、Ｌ１１５、Ｖ１１７、Ｉ１１９、Ｈ１２１、Ｈ１２２、Ｓ１２４、Ｅ１２５、Ｒ１２７；（ｉｉ）Ｖ３４、Ｔ３５、Ｙ３７、Ｔ３９、Ｙ４１、Ｓ５２、Ｒ５４、Ｆ６２、Ｌ６５、Ｈ６６、Ｈ６８、Ｌ１１５、Ｖ１１７、Ｉ１１９、Ｒ１２０、Ｈ１２１、Ｈ１２２、Ｓ１２４、Ｅ１２５；または（ｉｉｉ）Ｙ３７、Ｔ３９、Ｒ５４、Ｆ６２、Ｈ６６、Ｌ１１５またはＶ１１７のうち１つから選択される１つまたは複数のアミノ酸によってｈＶＩＳＴＡと接触し、番号付けが成熟ｈＶＩＳＴＡのものである、単離抗体（Ａｂ）。
７９． 酸性条件下、例えば、６．５のｐＨでｈＶＩＳＴＡと特異的に結合し（例えば、実施例において記載されるアッセイのうちの１つによって測定されるように）、ＶＩＳＴＡと（ａ）Ｔ細胞または（ｂ）ＰＳＧＬ－１の間の相互作用を阻害し、例えば、実施例１５に記載される酵母表面ディスプレイおよびＮＧＳアッセイを使用して決定されるように、１つまたは複数（例えば、少なくとも１～３、１～５、１～１０、５～１０、５～１５またはすべて）のエネルギー的に重要な接触残基Ｙ３７、Ｔ３９、Ｒ５４、Ｆ６２、Ｈ６６、Ｖ１１７、Ｉ１１９またはＳ１２４によってｈＶＩＳＴＡと接触し、番号付けが成熟ｈＶＩＳＴＡのものである単離抗体（Ａｂ）。
８０． 酸性条件下、例えば、６．５のｐＨでｈＶＩＳＴＡと特異的に結合し（例えば、実施例において記載されるアッセイのうちの１つによって測定されるように）、例えば、実施例１５に記載される酵母表面ディスプレイおよびＮＧＳアッセイを使用して決定されるように、ＶＩＳＴＡと（ａ）Ｔ細胞または（ｂ）ＰＳＧＬ－１の間の相互作用を阻害し、ＶＩＳＴＡ．４の１つまたは複数（例えば、少なくとも１～３、１～５、１～１０、５～１０、５～１５またはすべて）のエネルギー的に重要な接触残基によってｈＶＩＳＴＡと接触する、単離抗体（Ａｂ）。
８１． ｈＶＩＳＴＡのＦＧループと結合する、実施形態１から８０のいずれか１つに記載の単離抗体。
８２． 例えば、実施例において記載されるように、例えば、結晶学によって決定されるように、ｈＶＩＳＴＡのヒスチジンが豊富なβシート伸長と結合する、実施形態１から８１のいずれか１つに記載の単離抗体。
８３． 例えば、実施例において記載されるように、例えば、結晶学によって決定されるように、水素結合などによって、ｈＶＩＳＴＡのＨ１２１、Ｈ１２２およびＨ１２３（例えば、４．０オングストローム（Å）またはそれより短い距離）と接触する、実施形態１から８２のいずれか１つに記載の単離抗体。
８４． ＶＨ ＣＤＲ１およびＶＨ ＣＤＲ３によってｈＶＩＳＴＡと接触する、例えば、ＶＨ ＣＤＲ２によって、および／またはＶＬ ＣＤＲによって著しく結合しない、実施形態１から８３のいずれか１つに記載の単離抗体。
８５． 抗体の重鎖アミノ酸残基１１０および１１２が、それぞれ、ｈＶＩＳＴＡのＨ１２１およびＨ１２２と水素結合を形成し、抗体のアミノ酸残基がｈＶＩＳＴＡのＨ１２３と水素結合を形成してもよく、抗体のアミノ酸番号付けが、実施例において使用されるものに従う、実施形態１から８４のいずれか１つに記載の単離抗体。
８６． ＶＩＳＴＡ．４下の表３１に列挙されるｈＶＩＳＴＡとの１つまたは複数（例えば、１～５、５～１０、１０～１５、１０～２０または１５～２０）の相互作用を含む、実施形態８５に記載の抗体。
８７． ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３中に位置する、少なくとも１つまたは複数のグルタミン酸、アスパラギン酸またはヒスチジン残基によってｈＶＩＳＴＡと接触する、実施形態１から８６のいずれか１つに記載の単離抗体。
８８． 中性または生理学的ｐＨでｈＶＩＳＴＡと著しく結合しない（例えば、実施例において記載されるアッセイのうちの１つによって測定されるように）、実施形態１から８７のいずれか１つに記載の単離抗体。
８９． 酸性条件下で、例えば、６．５のｐＨで、中性または生理学的ｐＨ下でのｈＶＩＳＴＡとの結合のＫＤおよび／またはｋｏｆｆよりも少なくとも１０倍、１００倍または１０００倍低いＫＤ（またはｋｏｆｆ）で、ｈＶＩＳＴＡと結合する（例えば、実施例において記載されるアッセイのうちの１つによって測定されるように）、実施形態１から８８のいずれか１つに記載の単離抗体。
９０． 中性または生理学的ｐＨでｈＶＩＳＴＡと著しく結合しない（例えば、実施例において記載されるアッセイのうちの１つによって測定されるように）、実施形態１から８９のいずれか１つに記載の単離抗体。
９１． 酸性条件下、例えば、６．５のｐＨでｈＶＩＳＴＡと特異的に結合する（例えば、実施例において記載されるアッセイのうちの１つによって測定されるように）単離抗体（Ａｂ）であって、
・ｈＶＩＳＴＡと（ａ）Ｔ細胞および／または（ｂ）ＰＳＧＬ－１の間の相互作用を阻害する（例えば、配列番号１を有するｈＶＩＳＴＡのＨ１５３およびＨ１５４と、ＰＳＧＬ－１チロシンＹ４６およびＹ４８の間の相互作用を阻害する）、
・例えば、Ｔ細胞増殖を増強すること、Ｔ細胞からのＩＦＮ－γ産生を増強することおよび／またはＴ細胞受容体媒介性ＮＦ－ｋＢシグナル伝達を刺激することによってＴ細胞活性化を増強する、
・例えば、実施例１５に記載される酵母表面ディスプレイおよびＮＧＳアッセイを使用して決定されるように、番号付けが成熟ｈＶＩＳＴＡのものである、１つまたは複数（例えば、少なくとも１～３、１～５、１～１０、５～１０、５～１５またはすべて）のエネルギー的に重要な接触残基Ｙ３７、Ｔ３９、Ｒ５４、Ｆ６２、Ｈ６６、Ｖ１１７、Ｉ１１９またはＳ１２４によって、ｈＶＩＳＴＡと接触する、
・例えば、実施例において記載されるように、例えば、結晶学によって決定されるように、ｈＶＩＳＴＡのヒスチジンが豊富なβシート伸長と結合する、
・例えば、実施例において記載されるように、例えば、結晶学によって決定されるように、例えば、水素結合によって、成熟ｈＶＩＳＴＡの（ｉ）Ｈ１２１、Ｈ１２２および／もしくはＨ１２３または（ｉｉ）Ｈ６６、Ｈ６８、Ｈ１２１、Ｈ１２２および／もしくはＨ１２３（４．０オングストローム（Å）またはそれ以下の距離）と接触する、
・実施例１８に記載されるようにＭＳ－ＨＤＸによって決定されるように、領域２との結合が最強であってもよく、配列番号１を有するｈＶＩＳＴＡの領域１：５７ＬＧＰＶＤＫＧＨＤＶＴＦ６８（配列番号４９８）、領域２：８６ＲＲＰＩＲＮＬＴＦＱＤＬ９７（配列番号４９７）および領域３：１４８ＶＶＥＩＲＨＨＨＳＥＨＲＶＨＧＡＭＥ１６５（配列番号４９９）と結合する、
・ｈＶＩＳＴＡとの結合について、本明細書において記載される１つまたは複数の抗体、例えば、Ｐ１－０６１０１５、Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７６１、Ｐ１－０６８７６７およびＶＩＳＴＡ．４と競合する（二元配置競合）、
・ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３中に位置する、少なくとも１つまたは複数のグルタミン酸、アスパラギン酸またはヒスチジン残基によってｈＶＩＳＴＡと接触する、
・低い標的媒介性薬物動態を有し、例えば、実施例に記載されるように測定されるように、少なくとも１００、２００、３００、４００、５００、６００または７００時間の平均滞留時間（ＭＲＴ）につながる、
・ＴＭＤＤの低いまたは検出不可能なレベルを有する、および／または
・低いまたは検出不可能なレベルの好中球減少を有する
単離抗体。
９２． 酸性条件下、例えば、６．５のｐＨで、中性または生理学的ｐＨ下でのｈＶＩＳＴＡとの結合のＫＤおよび／またはｋｏｆｆよりも少なくとも１０倍、１００倍または１０００倍低いＫＤ（および／またはｋｏｆｆ）で（例えば、実施例において記載されるアッセイのうちの１つによって測定されるように）ｈＶＩＳＴＡと特異的に結合する単離抗体であって、
・ｈＶＩＳＴＡと（ａ）Ｔ細胞および／または（ｂ）ＰＳＧＬ－１の間の相互作用を阻害する（例えば、配列番号１を有するｈＶＩＳＴＡのＨ１５３およびＨ１５４と、ＰＳＧＬ－１チロシンＹ４６およびＹ４８の間の相互作用を阻害する）、
・例えば、Ｔ細胞増殖を増強すること、Ｔ細胞からのＩＦＮ－γ産生を増強することおよび／またはＴ細胞受容体媒介性ＮＦ－ｋＢシグナル伝達を刺激することによってＴ細胞活性化を増強する、
・例えば、実施例１５に記載される酵母表面ディスプレイおよびＮＧＳアッセイを使用して決定されるように、番号付けが成熟ｈＶＩＳＴＡのものである、１つまたは複数（例えば、少なくとも１～３、１～５、１～１０、５～１０、５～１５またはすべて）のエネルギー的に重要な接触残基Ｙ３７、Ｔ３９、Ｒ５４、Ｆ６２、Ｈ６６、Ｖ１１７、Ｉ１１９またはＳ１２４によって、ｈＶＩＳＴＡと接触する、
・例えば、実施例において記載されるように、例えば、結晶学によって決定されるように、ｈＶＩＳＴＡのヒスチジンが豊富なβシート伸長と結合する、
・例えば、実施例において記載されるように、例えば、結晶学によって決定されるように、例えば、水素結合によって、成熟ｈＶＩＳＴＡの（ｉ）Ｈ１２１、Ｈ１２２および／もしくはＨ１２３または（ｉｉ）Ｈ６６、Ｈ６８、Ｈ１２１、Ｈ１２２および／もしくはＨ１２３（４．０オングストローム（Å）またはそれ以下の距離）と接触する、
・実施例１８に記載されるようにＭＳ－ＨＤＸによって決定されるように、領域２との結合が最強であってもよく、配列番号１を有するｈＶＩＳＴＡの領域１：５７ＬＧＰＶＤＫＧＨＤＶＴＦ６８（配列番号４９８）、領域２：８６ＲＲＰＩＲＮＬＴＦＱＤＬ９７（配列番号４９７）および領域３：１４８ＶＶＥＩＲＨＨＨＳＥＨＲＶＨＧＡＭＥ１６５（配列番号４９９）と結合する、
・ｈＶＩＳＴＡとの結合について、本明細書において記載される１つまたは複数の抗体、例えば、Ｐ１－０６１０１５、Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７６１、Ｐ１－０６８７６７およびＶＩＳＴＡ．４と競合する（例えば、二元配置競合）、
・ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３中に位置する、少なくとも１つまたは複数のグルタミン酸、アスパラギン酸またはヒスチジン残基によってｈＶＩＳＴＡと接触する、
・低い標的媒介性薬物動態を有し、例えば、実施例に記載されるように測定されるように、少なくとも１００、２００、３００、４００、５００、６００または７００時間の平均滞留時間（ＭＲＴ）につながる、
・ＴＭＤＤの低いまたは検出不可能なレベルを有する、および／または
・低いまたは検出不可能なレベルの好中球減少を有する、
単離抗体。
９３． 例えば、ｉｃＩＥＦによって測定されるような、６．５から６．８の間の等電点（ｐＩ）を有する、実施形態１から９２のいずれか１つに記載の単離抗体。
９４． 例えば、実施例において決定されたように、低い凝集、例えば、ＶＩＳＴＡ．４またはその誘導体、例えば、Ｐ１－０７０９７６、Ｐ１－０６５３３３、Ｐ１－０７０９７６＿Ｈ９５ＤまたはＰ１－０７０９７６＿Ｅ９７Ｐ（例えば、ＩｇＧ１．３に関連して、およびＶＫ１．Ａ６４Ｇを有する）のものと同様またはそれより低い凝集を示す、実施形態１から９３のいずれか１つに記載の単離抗体。
９５． 実施例において決定されたように、ＶＩＳＴＡ．４またはその誘導体、例えば、Ｐ１－０７０９７６、Ｐ１－０６５３３３、Ｐ１－０７０９７６＿Ｈ９５ＤまたはＰ１－０７０９７６＿Ｅ９７Ｐ（例えば、ＩｇＧ１．３に関連して、およびＶＫ１．Ａ６４Ｇを有する）のものと同様またはそれより低い粘性を示す、実施形態１から９４のいずれか１つに記載の単離抗体。
９６． 例えば、実施例において決定されたように、ＶＩＳＴＡ．４またはその誘導体、例えば、Ｐ１－０７０９７６、Ｐ１－０６５３３３、Ｐ１－０７０９７６＿Ｈ９５ＤまたはＰ１－０７０９７６＿Ｅ９７Ｐ（例えば、ＩｇＧ１．３に関連して、およびＶＫ１．Ａ６４Ｇを有する）のものと同様またはそれより低い流体力学半径を示す、実施形態１から９５のいずれか１つに記載の単離抗体。
９７． 例えば、実施例（例えば、実施例１６）において決定されたように、ＶＩＳＴＡ．４またはその誘導体、例えば、Ｐ１－０７０９７６、Ｐ１－０６５３３３、Ｐ１－０７０９７６＿Ｈ９５ＤまたはＰ１－０７０９７６＿Ｅ９７Ｐ（例えば、ＩｇＧ１．３に関連して、およびＶＫ１．Ａ６４Ｇを有する）のものと同様またはそれより高い融解温度（Ｔｍ１）を示す、実施形態１から９６のいずれか１つに記載の単離抗体。
９８． 例えば、実施例（例えば、実施例１６）において決定されたように、ＶＩＳＴＡ．４またはその誘導体、例えば、Ｐ１－０７０９７６、Ｐ１－０６５３３３、Ｐ１－０７０９７６＿Ｈ９５ＤまたはＰ１－０７０９７６＿Ｅ９７Ｐ（例えば、ＩｇＧ１．３に関連して、およびＶＫ１．Ａ６４Ｇを有する）のものと同様またはそれより低い高分子量種の量を示す、実施形態１から９７のいずれか１つに記載の単離抗体。
９９． ＩｇＧ抗体である、実施形態１から９８のいずれか１つに記載の単離抗体。
１００． ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４抗体（Ｓ２２８Ｐ置換（ＥＵ番号付け）を有していてもよいＩｇＧ４）である、実施形態９９に記載の単離抗体。
１０１． エフェクターがない抗体である、例えば、ＡＤＣＣおよび／もしくはＣＤＣを欠く、ならびに／または１つもしくは複数のＦｃγＲｓ、例えば、ＦｃγＲＩＩＩと著しく結合しない抗体である、実施形態１から１００のいずれか１つに記載の単離抗体。
１０２． 定常領域が、抗体のエフェクター機能（例えば、ＡＤＣＣおよび／もしくはＣＤＣ）ならびに／または１つもしくは複数のＦｃγＲｓ、例えば、ＦｃγＲＩＩＩと結合する能力を、対応する野生型重鎖定常領域のものと比較して低減する、野生型重鎖定常領域中に１～５つの突然変異を含む、実施形態１０１に記載の単離抗体。
１０３． 抗体の定常領域が、ＩｇＧ１．３、ＩｇＧ１．１である、またはＰ２３８Ｋ置換を有するＩｇＧ１（例えば、ＩｇＧ１．Ｐ２３８Ｋ）である、実施形態１から１０２のいずれか１つに記載の単離抗体。
１０４． エフェクター機能を有する、および／または１つもしくは複数のＦｃγＲｓ、例えば、ＦｃγＲＩＩＩと結合する、実施形態１から１０３のいずれか１つに記載の単離抗体。
１０５． 脱フコシル化されている（例えば、脱フコシル化ＩｇＧ１抗体）、実施形態１０４に記載の単離抗体。
１０６． 定常領域が、抗体のエフェクター機能ならびに／または１つもしくは複数のＦｃγＲｓ、例えば、ＦｃγＲＩＩＩと結合する能力を、対応する野生型定常領域と比較して増強する１～５つの突然変異を含む、実施形態１０５に記載の単離抗体。
１０７． ４１Ｆ１１またはＶＩＳＴＡ．４またはその変異体である、単離抗体または実施形態１から１０６のいずれか１つに記載の単離抗体。
１０８． 変異体が、組み合わされた、４１Ｆ１１またはＶＩＳＴＡ．４のものに対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９８％同一である、または１～２０、１～１５、１～１０もしくは１～５個のアミノ酸残基、例えば、アミノ酸置換（例えば、Ｄ、ＥまたはＨへの置換）でそれから異なっている、ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３およびＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、実施形態１から１０７のいずれか１つに記載の単離抗体。
１０９． 変異体が、４１Ｆ１１またはＶＩＳＴＡ．４のものに対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９８％同一である、または１～５０、１～４０、１～３０もしくは１～２０、１～１０もしくは１～５個のアミノ酸残基、例えば、アミノ酸置換（例えば、Ｄ、ＥまたはＨへの置換）でそれから異なっているＶＨおよびＶＬアミノ酸配列を含む、実施形態１から１０８のいずれか１つに記載の単離抗体。
１１０． 実施例１７において、または配列表において開示される抗ＶＩＳＴＡ抗体のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、実施形態１から１０９のいずれか１つに記載の単離抗体。
１１１． 実施例１において、または配列表において開示される抗ＶＩＳＴＡ抗体のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、実施形態１から１１０のいずれか１つに記載の単離抗体。
１１２． 実施例１７において、または配列表において開示される抗ＶＩＳＴＡ抗体のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ならびにＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、実施形態８３から１１１のいずれか１つに記載の単離抗体。
１１３． 実施例１７において、または配列表において開示される抗ＶＩＳＴＡ抗体のＶＨアミノ酸配列を含む、実施形態１から１１２のいずれか１つに記載の単離抗体。
１１４． 実施例１７において、または配列表において開示される抗ＶＩＳＴＡ抗体のＶＬアミノ酸配列を含む、実施形態１から１１３のいずれか１つに記載の単離抗体。
１１５． 実施例１７において、または配列表において開示される抗ＶＩＳＴＡ抗体のＶＨおよびＶＬアミノ酸配列を含む、実施形態１から１１４のいずれか１つに記載の単離抗体。
１１６． ヒトＶＩＳＴＡと特異的に結合し、４１Ｆ１１もしくはＶＩＳＴＡ．４のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３アミノ酸配列または組み合わされた、４１Ｆ１１もしくはＶＩＳＴＡ．４のものに対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９８％同一である、もしくは１～２０、１～１５、１～１０もしくは１～５個のアミノ酸残基、例えば、アミノ酸置換（例えば、Ｄ、ＥまたはＨへの置換）でそれから異なっているアミノ酸配列を含む単離抗体。
１１７． ヒトＶＩＳＴＡと特異的に結合し、４１Ｆ１１もしくはＶＩＳＴＡ．４のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３アミノ酸配列または組み合わされた、４１Ｆ１１もしくはＶＩＳＴＡ．４のものに対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９８％同一である、もしくは１～２０、１～１５、１～１０もしくは１～５個のアミノ酸残基、例えば、アミノ酸置換（例えば、Ｄ、ＥまたはＨへの置換）でそれから異なっているアミノ酸配列を含む、単離抗体。
１１８． ４１Ｆ１１もしくはＶＩＳＴＡ．４のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ならびにＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３アミノ酸配列または組み合わされた、４１Ｆ１１もしくはＶＩＳＴＡ．４のものに対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９８％同一である、もしくは１～２０、１～１５、１～１０もしくは１～５個のアミノ酸残基、例えば、アミノ酸置換（例えば、Ｄ、ＥまたはＨへの置換）でそれから異なっているアミノ酸配列を含む、実施形態１から１１７のいずれか１つに記載の単離抗体。
１１９． ４１Ｆ１１もしくはＶＩＳＴＡ．４のＶＨアミノ酸配列またはそれに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％同一である、もしくはそれに対して１～５０、１～４０、１～３０、１～２０、１～１０もしくは１～５つのアミノ酸変化、例えば、置換を含むアミノ酸配列を含む、実施形態１から１１８のいずれか１つに記載の単離抗体。
１２０． ４１Ｆ１１もしくはＶＩＳＴＡ．４のＶＬアミノ酸配列またはそれに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％同一である、もしくはそれに対して１～５０、１～４０、１～３０、１～２０、１～１０もしくは１～５つのアミノ酸変化、例えば、置換を含むアミノ酸配列を含む、実施形態１から１１９のいずれか１つに記載の単離抗体。
１２１． ４１Ｆ１１もしくはＶＩＳＴＡ．４のＶＨおよびＶＬアミノ酸配列またはそれに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％同一である、もしくはそれに対して１～５０、１～４０、１～３０、１～２０、１～１０もしくは１～５つのアミノ酸変化、例えば、置換を含むアミノ酸配列を含む、実施形態１から１２０のいずれか１つに記載の単離抗体。
１２２． 実施例１７において、または配列表において開示される抗ＶＩＳＴＡ抗体のＨＣアミノ酸配列またはそれに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％もしくは１００％同一である、もしくはそれに対して１～５０、１～４０、１～３０、１～２０、１～１０もしくは１～５つのアミノ酸変化、例えば、置換を含むアミノ酸配列を含む、実施形態１から１２１のいずれか１つに記載の単離抗体。
１２３． 実施例１７において、または配列表において開示される抗ＶＩＳＴＡ抗体のＬＣアミノ酸配列またはそれに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％もしくは１００％同一である、もしくはそれに対して１～５０、１～４０、１～３０、１～２０、１～１０もしくは１～５つのアミノ酸変化、例えば、置換を含むアミノ酸配列を含む、実施形態１から１２２のいずれか１つに記載の単離抗体。
１２４． 実施例１７において、または配列表において開示される抗ＶＩＳＴＡ抗体のＨＣおよびＬＣアミノ酸配列またはそれに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％もしくは１００％同一である、もしくはそれに対して１～５０、１～４０、１～３０、１～２０、１～１０もしくは１～５つのアミノ酸変化、例えば、置換を含むアミノ酸配列を含む、実施形態１から１２３のいずれか１つに記載の単離抗体。
１２５． ＶＩＳＴＡ．４（配列番号５０３～５０５）、Ｐ１－０７０９７６（配列番号５０９～５１１）、Ｐ１－０６５３３３（配列番号５０６～５０８）、Ｐ１－０７０９７６＿Ｈ９５Ｄ（配列番号５１２～５１４）またはＰ１－０７０９７６＿Ｅ９７Ｐ（配列番号５１５～５１７）のＶＨ ＣＤＲを含む、実施形態１から１２４のいずれか１つに記載の単離抗体。
１２６． ＶＩＳＴＡ．４、Ｐ１－０７０９７６、Ｐ１－０６５３３３、Ｐ１－０７０９７６＿Ｈ９５ＤまたはＰ１－０７０９７６＿Ｅ９７ＰのＶＬ ＣＤＲ（配列番号５００～５０２）を含む、実施形態１から１２５のいずれか１つに記載の単離抗体。
１２７． ＶＩＳＴＡ．４（それぞれ、配列番号５０３～５０５および５００～５０２）、Ｐ１－０７０９７６（それぞれ、配列番号５０９～５１１および５００～５０２）、Ｐ１－０６５３３３（それぞれ、配列番号５０６～５０８および５００～５０２）、Ｐ１－０７０９７６＿Ｈ９５Ｄ（それぞれ、配列番号５１２～５１４および５００～５０２）またはＰ１－０７０９７６＿Ｅ９７Ｐ（それぞれ、配列番号５１５～５１７および５００～５０２）のＶＨおよびＶＬ ＣＤＲを含む、実施形態１から１２６のいずれか１つに記載の単離抗体。
１２８． ＶＩＳＴＡ．４（配列番号４９２）、Ｐ１－０７０９７６（配列番号４７４）、Ｐ１－０６５３３３（配列番号４７３）、Ｐ１－０７０９７６＿Ｈ９５Ｄ（配列番号４７７）またはＰ１－０７０９７６＿Ｅ９７Ｐ（配列番号４７８）のＶＨを含む、実施形態１から１２７のいずれか１つに記載の単離抗体。
１２９． ＶＩＳＴＡ．４、Ｐ１－０７０９７６、Ｐ１－０６５３３３、Ｐ１－０７０９７６＿Ｈ９５ＤまたはＰ１－０７０９７６＿Ｅ９７Ｐ（Ａ６４Ｇを有する、または有さない）のＶＬ（配列番号４９３（Ａ６４Ｇを有さない）または配列番号４７９（Ａ６４Ｇを有する）に対応する）を含む、実施形態１から１２８のいずれか１つに記載の単離抗体。
１３０． ＶＩＳＴＡ．４（配列番号４９２および４７９または配列番号４９２および４９３）、Ｐ１－０７０９７６（配列番号４７４および４７９または配列番号４７４および４９３）、Ｐ１－０６５３３３（配列番号４７５および４７９または配列番号４７５および４９３）、Ｐ１－０７０９７６＿Ｈ９５Ｄ（配列番号４７７および４７９または配列番号４７７および４９３）またはＰ１－０７０９７６＿Ｅ９７Ｐ（配列番号４７８および４７９または配列番号４７８および４９３）のＶＨおよびＶＬ（ＶＬ中にＡ６４Ｇを有する、または有さない）を含む、実施形態１から１２９のいずれか１つに記載の単離抗体。
１３１．ＶＩＳＴＡ．４．ＩｇＧ１．３（配列番号４９１）、Ｐ１－０７０９７６．ＩｇＧ１．３（配列番号４７６）、Ｐ１－０６５３３．ＩｇＧ１．３（配列番号４７５）、Ｐ１－０７０９７６＿Ｈ９５Ｄ．ＩｇＧ１．３（配列番号４８０）またはＰ１－０７０９７６＿Ｅ９７Ｐ．ＩｇＧ１．３（配列番号４８１）のＨＣを含む、実施形態１から１３０のいずれか１つに記載の単離抗体。
１３２． ＶＩＳＴＡ．４．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０７０９７６．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６５３３．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０７０９７６＿Ｈ９５Ｄ．ＩｇＧ１．３またはＰ１－０７０９７６＿Ｅ９７Ｐ．ＩｇＧ１．３（ＶＬ中にＡ６４Ｇを有する、または有さない）のＬＣ（配列番号４９４（Ａ６４Ｇを有さない）または配列番号４８２（Ａ６４Ｇを有する）を含む、実施形態１から１３１のいずれか１つに記載の単離抗体。
１３３． ＶＩＳＴＡ．４．ＩｇＧ１．３（配列番号４９１および４９４または配列番号４９１および４８２）、Ｐ１－０７０９７６．ＩｇＧ１．３（配列番号４７６および４９４または配列番号４７６および４８２）、Ｐ１－０６５３３３．ＩｇＧ１．３（配列番号４７５および４９４または配列番号４７５および４８２）、Ｐ１－０７０９７６＿Ｈ９５Ｄ．ＩｇＧ１．３（配列番号４８０および４９４または配列番号４８０および４８２）またはＰ１－０７０９７６＿Ｅ９７Ｐ．ＩｇＧ１．３（配列番号４８１および４９４または配列番号４８１および４８２）のＨＣおよびＬＣ（ＶＬ中にＡ６４Ｇを有する、または有さない）を含む、実施形態１から１３２のいずれか１つに記載の単離抗体。
１３４． 全長抗体または全長重鎖（Ｃ末端リシンを有する、または有さない）および全長軽鎖を含む抗体である、実施形態１から１３３のいずれか１つに記載の単離抗体。
１３５． 抗原結合断片である、実施形態１から１３０のいずれか１つに記載の単離抗体。
１３６． 多量体（例えば、二量体または三量体）抗体である、実施形態１から１３５のいずれか１つに記載の単離抗体。
１３７． 別の分子に連結されている（例えば、共有結合によって）、実施形態１から１３６のいずれか１つに記載の単離抗体。
１３８． 他の分子が、標識である、実施形態１３７に記載の単離抗体。
１３９． 他の分子が、ペプチドである、実施形態１３７または１３８に記載の単離抗体。
１４０． 抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）または活性化できる抗体である、実施形態１から１３９のいずれか１つに記載の単離抗体。
１４１． 実施形態１から１４０のいずれか１つに記載の抗体をコードする単離核酸。
１４２． 実施形態１から１４０のいずれか１つに記載の抗体の重鎖および／または軽鎖をコードする単離核酸。
１４３． 実施形態１から１４０のいずれか１つに記載の抗体の重鎖をコードする核酸および抗体の軽鎖をコードする核酸を含む組成物。
１４４． 実施形態１４１から１４２のいずれか１つに記載の単離核酸または実施形態１４３に記載の組成物を含む細胞。
１４５． 抗体を調製する方法であって、抗体が発現される条件下で実施形態１４４に記載の細胞を培養することを含む、方法。
１４６． 実施形態１から１４５のいずれか１つに記載の単離抗体、核酸、組成物または細胞および薬学的に許容される担体を含む組成物。
１４７． 第２の治療薬を含む、実施形態１４６に記載の組成物。
１４８． 第２の治療薬が、免疫賦活剤を含む、実施形態１４７に記載の組成物。
１４９． 免疫賦活剤が、免疫抑制分子のアンタゴニスト、例えば、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４およびＬＡＧ－３または免疫賦活分子のアゴニスト、例えば、ＧＩＴＲおよびＯＸ４０を含む、実施形態１４８に記載の組成物。
１５０． 対象においてがんを処置する方法であって、対象に、免疫応答を刺激するおよび／またはＶＩＳＴＡアンタゴニスト抗体である実施形態１から１４９のいずれか１つに記載の組成物または単離抗体の治療上有効量を投与することを含む、方法。
１５１． 対象が、例えば、がんの腫瘍中にＶＩＳＴＡ陽性細胞を有する、実施形態１５０に記載の方法。
１５２． ＶＩＳＴＡ陽性細胞が、ＶＩＳＴＡ陽性浸潤性リンパ性（例えば、Ｔ細胞）または骨髄単球性細胞を含む、実施形態１５１に記載の方法。
１５３． 対象が、腫瘍中のＶＩＳＴＡ陽性細胞の存在についてまず試験され、対象が例えば、腫瘍中にＶＩＳＴＡ陽性細胞を有する場合には、対象が処置される、実施形態１５０から１５２のいずれか１つに記載の方法。
１５４． 第２の療法を投与することをさらに含む、実施形態１５０から１５３のいずれか１つに記載の方法。
１５５． 第２の療法が、化学療法、放射線療法、手術または第２の薬剤の投与を含む、実施形態１５４に記載の方法。
１５６． 第２の療法が、第２の薬剤を含み、第２の薬剤が、免疫賦活剤である、実施形態１５５に記載の方法。
１５７． 免疫賦活性剤が、免疫抑制分子のアンタゴニスト、例えば、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４およびＬＡＧ－３または免疫賦活分子のアゴニスト、例えば、ＧＩＴＲおよびＯＸ４０を含む、実施形態１５６に記載の方法。
１５８． 対象において感染性疾患（例えば、ウイルス性疾患）を処置する方法であって、対象に、免疫応答を刺激するおよび／またはＶＩＳＴＡアンタゴニストである実施形態１から１５７のいずれか１つに記載の組成物または単離抗体の治療上有効量を投与することを含む、方法。
１５９． サンプルにおいてＶＩＳＴＡを検出する方法であって、サンプルを、実施形態１から１４０のいずれか１つに記載のＶＩＳＴＡ抗体と接触させることを含む、方法。
１６０． ｈＶＩＳＴＡと特異的に結合し、ＶＩＳＴＡ媒介性Ｔ細胞活性化を阻害する単離抗体であって、配列番号４６３、４７３、４７４、４７７、４７８または４９２を含むかまたはからなるＶＨのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列（例えば、配列番号５０３～５０５、５０６～５０８、５０９～５１１、５１２～５１４または５１５～５１７）を含む、単離抗体。
１６１． 配列番号４６４、４７１、４９３または４７９を含むかまたはからなるＶＬのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列（例えば、配列番号５００～５０２）を含む、実施形態１６０に記載の単離抗体。
１６２． シグナルペプチドを有する、または有さない配列番号４６３、４７３、４７４、４７７、４７８または４９２を含むかまたはからなるＶＨを含む、実施形態１６０または１６１に記載の単離抗体。
１６３． シグナルペプチドを有する、または有さない配列番号４６４、４７１、４７９または４９３を含むかまたはからなるＶＬを含む、実施形態１６０から１６２のいずれか１つに記載の単離抗体。
１６４． Ｃ末端リシンを有する、または有さない、野生型ＩｇＧ１（例えば、配列番号１８２）、野生型ＩｇＧ２、野生型ＩｇＧ３、野生型ＩｇＧ４、Ｓ２２８Ｐを含む野生型ＩｇＧ４、ＩｇＧ１．１（配列番号１８３）、ＩｇＧ１．３（配列番号１６３）、ＩｇＧ１．Ｐ２３８Ｋ（配列番号１８４）を含むかまたはからなる重鎖定常領域を含む、実施形態１６０から１６３のいずれか１つに記載の単離抗体。
１６５． シグナルペプチドを有する、または有さない、配列番号４７５、４７６、４９１、４８０または４８１を含むかまたはからなる重鎖を含む、実施形態１６０から１６４のいずれか１つに記載の単離抗体。
１６６． シグナルペプチドを有する、または有さない、配列番号４７２、４９４または４８２を含むかまたはからなる軽鎖を含む、実施形態１６０から１６５のいずれか１つに記載の単離抗体。
１６７． （ａ）それぞれ、配列番号４７５および配列番号４８２もしくは４７２、
（ｂ）それぞれ、配列番号４７５および配列番号４９４、
（ｃ）それぞれ、配列番号４７６および配列番号４８２もしくは４７２、
（ｄ）それぞれ、配列番号４７６および配列番号４９４、
（ｅ）それぞれ、配列番号４９１および配列番号４８２もしくは４７２、
（ｆ）それぞれ、配列番号４９１および配列番号４９４、
（ｇ）それぞれ、配列番号４８０）および配列番号４８２もしくは４７２、
（ｈ）それぞれ、配列番号４８０）および配列番号４９４、
（ｉ）それぞれ、配列番号４８１）および配列番号４８２もしくは４７２、または
（ｊ）それぞれ、配列番号４８１）および配列番号４９４
を含むかまたはからなる重鎖および軽鎖を含む、実施形態１６６に記載の単離抗体。
１６８． 対象においてがんを処置する方法であって、対象に、ｈＶＩＳＴＡと特異的に結合する、ｈＶＩＳＴＡ（例えば、Ｔ細胞活性化）ならびに例えば、対象の腫瘍において、例えば、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞数の増大をもたらすＰＤ１／ＰＤ－Ｌ１経路アンタゴニストの活性を阻害する抗体を投与することを含む、方法。
１６９． 対象においてがんを処置する方法であって、対象に、ｈＶＩＳＴＡと特異的に結合し、ｈＶＩＳＴＡ（例えば、Ｔ細胞活性化）ならびに例えば、対象の腫瘍において、例えば、消耗したＴ細胞ならびに／またはＰＤ－１、ＬＡＧ３および／もしくはＴＩＭ－３を発現するＴ細胞数の低減をもたらすＰＤ１／ＰＤ－Ｌ１経路アンタゴニストの活性を阻害する抗体を投与することを含む、方法。
１７０． 対象においてがんを処置する方法であって、対象に、ｈＶＩＳＴＡと特異的に結合し、ｈＶＩＳＴＡ（例えば、Ｔ細胞活性化）ならびに例えば、対象の腫瘍における、例えば、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞数の増大および例えば、対象の腫瘍における、消耗したＴ細胞ならびに／またはＰＤ－１、ＬＡＧ３および／もしくはＴＩＭ－３を発現するＴ細胞数の低減ならびに／または本明細書において記載される他の特徴をもたらすＰＤ１／ＰＤ－Ｌ１経路アンタゴニストの活性を阻害する抗体を投与することを含む、方法。
１７１． ｈＶＩＳＴＡと特異的に結合する抗体が、本明細書において記載される抗体である、実施形態１６８から１７０のいずれか１つに記載の方法。
さらなる特定の例示的実施形態として、以下が挙げられる：
１．ｈＶＩＳＴＡと特異的に結合する単離Ａｂであって、重鎖および軽鎖を含み、（ｉ）重鎖が、それぞれ配列番号５０３、５０４および５０５を含むＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、軽鎖が、それぞれ配列番号５００、５０１および５０２を含むＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む、（ｉｉ）重鎖が、配列番号４６３もしくは４９２を含むＶＨを含み、軽鎖が、配列番号４６４、４７１、４７９もしくは４８２を含むＶＬを含む、ならびに／または（ｉｉｉ）重鎖が、配列番号４９１を含み、軽鎖が、配列番号４７２、４８２もしくは４９４を含む、単離Ａｂ。
２．ｈＶＩＳＴＡと特異的に結合する単離Ａｂであって、重鎖および軽鎖を含み、（ｉ）重鎖が、それぞれ配列番号５０３、５０４および５０５を含むＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、軽鎖が、それぞれ配列番号５００、５０１および５０２を含むＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む、（ｉｉ）重鎖が、配列番号４６３もしくは４９２を含むＶＨを含み、軽鎖が、配列番号４６４、４７１、４７９もしくは４８２を含むＶＬを含む、ならびに／または（ｉｉｉ）重鎖が、配列番号４９１を含み、軽鎖が、配列番号４７２、４８２もしくは４９４またはその変異体または誘導体を含み、Ａｂが、以下の特徴のうち１つまたは複数（またはすべて）を含む、単離Ａｂ：
ａ．ｐＨ６．０でｈＶＩＳＴＡの細胞外ドメインと結合し（例えば、１０－７Ｍ以下のＫＤで）、ｐＨ７．４ではｈＶＩＳＴＡの細胞外ドメインと著しく結合しなくてもよい、
ｂ．例えば、酸性ｐＨで、ｈＶＩＳＴＡの、Ｔ細胞との、またはＰＳＧＬ－１との結合を阻害する、
ｃ．酵母表面ディスプレイおよびＮＧＳによって決定されるように、以下のエネルギー的に重要な接触残基Ｙ３７、Ｔ３９、Ｒ５４、Ｆ６２、Ｈ６６、Ｌ１１５、Ｖ１１７、Ｉ１１９、Ｓ１２４およびＥ１２５のうち１つまたは複数と結合する、
ｄ．ｈＶＩＳＴＡとの結合について、（ｉ）配列番号４６３もしくは４９２を含むＶＨを含む重鎖および配列番号４６４、４７１、４７９もしくは４８２を含むＶＬを含む軽鎖を含む、ならびに／または（ｉｉ）重鎖が、配列番号４９１を含み、軽鎖が配列番号４７２、４８２もしくは４９４を含む抗体と競合する、
ｅ．ｈＶＩＳＴＡのアミノ酸領域８６ＲＲＰＩＲＮＬＴＦＱＤＬ９７（配列番号４９７）と、またより少ない強度であるが、アミノ酸５７ＬＧＰＶＤＫＧＨＤＶＴＦ６８（配列番号４９８）および１４８ＶＶＥＩＲＨＨＨＳＥＨＲＶＨＧＡＭＥ１６５（配列番号４９９）と結合する。
ｆ．例えば、酸性ｐＨでＴ細胞と結合するｈＶＩＳＴＡを阻害する、
ｇ．例えば、酸性ｐＨでＴ細胞増殖およびＴ細胞からのＩＦＮ－ガンマ産生を増強する、
ｈ．例えば、酸性ｐＨで、ｈＶＩＳＴＡによって、Ｔ細胞受容体媒介性ＮＦ－ｋＢシグナル伝達抑制を開放する、
ｉ．低いまたは検出不可能なレベルのＴＭＤＤを有する、および／または
ｊ．低いまたは検出不可能なレベルの好中球減少を有する。
３．ｈＶＩＳＴＡと特異的に結合する単離Ａｂであって、重鎖および軽鎖を含み、（ｉ）重鎖が、それぞれ配列番号５０６、５０７および５０８を含むＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、軽鎖が、それぞれ配列番号５００、５０１および５０２を含むＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む、（ｉｉ）重鎖が、配列番号４７３を含むＶＨ含み、軽鎖が、配列番号４６４、４７１、４７９もしくは４８２を含むＶＬを含む、ならびに／または（ｉｉｉ）重鎖が、配列番号４７５を含み、軽鎖が、配列番号４７２、４８２もしくは４９４を含む、単離Ａｂ。
４．ｈＶＩＳＴＡと特異的に結合する単離Ａｂであって、重鎖および軽鎖を含み、
ａ．（ｉ）重鎖が、それぞれ配列番号５０９、５１０および５１１を含むＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、軽鎖が、それぞれ配列番号５００、５０１および５０２を含むＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む、（ｉｉ）重鎖が、配列番号４７４を含むＶＨを含み、軽鎖が、配列番号４６４、４７１、４７９もしくは４８２を含むＶＬを含む、ならびに／または（ｉｉｉ）重鎖が、配列番号４７６を含み、軽鎖が、配列番号４７２、４８２もしくは４９４を含む、
ｂ．（ｉ）重鎖が、それぞれ配列番号５１２、５１３および５１３を含むＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、軽鎖が、それぞれ配列番号５００、５０１および５０２を含むＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む、（ｉｉ）重鎖が、配列番号４７７を含むＶＨを含み、軽鎖が、配列番号４６４、４７１、４７９もしくは４８２を含むＶＬを含む、ならびに／または（ｉｉｉ）重鎖が、配列番号４８０を含み、軽鎖が、配列番号４７２、４８２もしくは４９４を含む、または
ｃ．（ｉ）重鎖が、それぞれ配列番号５１５、５１６および５１７を含むＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、軽鎖が、それぞれ配列番号５００、５０１および５０２を含むＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む、（ｉｉ）重鎖が、配列番号４７８を含むＶＨを含み、軽鎖が、配列番号４６４、４７１、４７９もしくは４８２を含むＶＬを含む、ならびに／または（ｉｉｉ）重鎖が、配列番号４８１を含み、軽鎖が、配列番号４７２、４８２もしくは４９４を含み、
抗体が、
（１）ｐＨ６．０でｈＶＩＳＴＡの細胞外ドメインと結合し（例えば、１０－７Ｍ以下のＫＤで）、ｐＨ７．４では著しく結合しない、
（２）例えば、酸性ｐＨで、ｈＶＩＳＴＡの、Ｔ細胞との、またはＰＳＧＬ－１との結合を阻害する、
（３）酵母表面ディスプレイおよびＮＧＳによって決定されるように、以下のエネルギー的に重要な接触残基Ｙ３７、Ｔ３９、Ｒ５４、Ｆ６２、Ｈ６６、Ｌ１１５、Ｖ１１７、Ｉ１１９、Ｓ１２４およびＥ１２５のうち１つまたは複数と結合する、
（４）ｈＶＩＳＴＡとの結合について、（ｉ）配列番号４６３もしくは４９２を含むＶＨを含む重鎖および配列番号４６４、４７１、４７９もしくは４８２を含むＶＬを含む軽鎖を含む、ならびに／または（ｉｉ）重鎖が、配列番号４９１を含み、軽鎖が配列番号４７２、４８２もしくは４９４を含む抗体と競合する、
（５）ｈＶＩＳＴＡのアミノ酸領域８６ＲＲＰＩＲＮＬＴＦＱＤＬ９７（配列番号４９７）と、またより少ない強度であるが、アミノ酸５７ＬＧＰＶＤＫＧＨＤＶＴＦ６８（配列番号４９８）および１４８ＶＶＥＩＲＨＨＨＳＥＨＲＶＨＧＡＭＥ１６５（配列番号４９９）と結合する、
（６）例えば、酸性ｐＨでＴ細胞と結合するｈＶＩＳＴＡを阻害する、
（７）例えば、酸性ｐＨでＴ細胞増殖およびＴ細胞からのＩＦＮ－ガンマ産生を増強する、
（８）例えば、酸性ｐＨで、ｈＶＩＳＴＡによって、Ｔ細胞受容体媒介性ＮＦ－ｋＢシグナル伝達抑制を開放する、
（９）低いまたは検出不可能なレベルのＴＭＤＤを有する、および／または
（１０）低いまたは検出不可能なレベルの好中球減少を有する。
さらなる特定の実施形態は、本開示の特許請求の範囲に記載されている。
以下で論じされる実施例は、純粋に本発明の例示的なものであるように意図され、決して本発明を制限すると考えられてはならない。実施例は、以下の実験がすべてまたは実施された唯一の実験であるということを表すと意図されるものではない。使用された数字（例えば、量、温度など）に関して正確性を確実にするために努力がなされているが、一部の実験誤差および偏差は、考慮されなければならない。別に示されない限り、部分は重量部分であり、分子量は、平均分子量であり、温度は、摂氏度であり、圧力は、大気圧でまたはその付近である。
ＶＩＳＴＡの細胞外ドメインは、例外的にヒスチジンが豊富である
この実施例は、ＶＩＳＴＡの細胞外ドメインが、例外的にヒスチジン残基が豊富であること、これらのヒスチジン残基は、進化的に保存されていることおよびそれらは、ＶＩＳＴＡが関わる受容体－リガンド相互作用に寄与している可能性があることを示す。
免疫グロブリンドメインを含有するタンパク質の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）のアミノ酸配列を、ユニプロット（ｕｎｉｐｒｏｔ）およびスイス－プロット（ｓｗｉｓｓ－ｐｒｏｔ）データベースから抽出し、ヒスチジン含量について解析した。図１Ａは、この解析の結果をグラフとして表す。各タンパク質について、すべての細胞外ドメインアミノ酸残基のパーセンテージとしてのヒスチジン残基の頻度が、ｙ軸にプロットされており、細胞外ドメインアミノ酸残基の総数がｘ軸にプロットされている。各データ点の直径は、各タンパク質の細胞外ドメイン中のヒスチジン残基の総数に対応する。ＶＩＳＴＡ（表示されている）は、その細胞外ドメイン中に例外的に高い頻度のヒスチジン残基を含有する。
次いで、ＶＩＳＴＡにおけるヒスチジン残基の進化的保存を評価した。
図１Ｂは、ヒト、カニクイザルおよびマウスＶＩＳＴＡのアミノ酸参照配列が、シグナルペプチド（「Ｓｉｇ」）、膜貫通ドメイン（「ＴＭＤ」）および細胞内ドメインを除いてアラインされたことを示す。３種すべてにわたって保存されているヒスチジン残基は、太字で、下線が引かれている。ヒトおよびｃｙｎｏ ＶＩＳＴＡにわたって保存されているヒスチジン残基は、太字であり、下線は引かれていない。ＶＩＳＴＡの細胞外ドメインヒスチジン残基の多くは、進化的に保存されており、これは、ＶＩＳＴＡの高ヒスチジン含量の重要な生物学的役割を示唆する。
ｈＶＩＳＴＡ ＩｇＶドメインの３次元モデルを、ＰＤＢデータベース中の利用可能な解決された構造に対する配列相同性解析に基づいて作出した。図１Ｃにおいて示されるモデルは、ＶＩＳＴＡのＥＣＤ中の多数のヒスチジンは分子の表面に露出しており、そこでそれらはリガンド結合において、ならびに抗体認識において役割を果たし得るということを示す。ヒスチジン残基は、ボールおよびスティックとして表されている。
ヒスチジンプロトン化は、腫瘍および他の酸性微小環境においてＶＩＳＴＡ受容体－リガンド会合および免疫抑制活性を調節し得る
この実施例は、生理学的に関連する酸性ｐＨに応じたヒスチジンプロトン化ならびにＶＩＳＴＡ細胞外ドメインヒスチジンが、生理学的ｐＨではなく酸性ｐＨに対する対抗受容体またはリガンド選択性を付与するモデルを記載する。
図２Ａは、ヒスチジン残基中のピロールアンモニウム基（ＮＨ）のプロトン化の欠如および存在の間の平衡を示す。溶液中のヒスチジンのｐＫａは、６．５であり、ヒスチジン残基が、ｐＨ６．５以下で、より高いｐＨで、よりプロトン化される、したがって、正電荷を有する可能性が高いことを示す。プロトン化の結果として、ＶＩＳＴＡ ＥＣＤの表面での正電荷の増大は、受容体またはリガンド結合ならびにＶＩＳＴＡ構造および／または機能に影響を及ぼし得る。したがって、ｐＨの変化はまた、抗体結合性エピトープおよび／または変更された抗体親和性の結果も修飾し得る。
図２Ｂは、ＶＩＳＴＡが、酸性ｐＨでＰＳＧＬ－１または他の対抗受容体およびリガンド（「ＶＩＳＴＡ－Ｒ」）と選択的に会合するモデルを示す。血液中などの生理学的ｐＨでは、ＶＩＳＴＡのＥＣＤ上のヒスチジン残基は、非プロトン化であると予測される。結果として、ＰＳＧＬ－１または他の対抗受容体およびリガンドと結合するＶＩＳＴＡは、生理学的ｐＨでは無視できる。対照的に、酸性の細胞外ｐＨを有する傾向がある位置、例えば、腫瘍微小環境または炎症の部位では、酸性ｐＨが、ＶＩＳＴＡ ＥＣＤヒスチジンプロトン化を部分的または完全に駆動する場合があり、したがって、ＰＳＧＬ－１または他の対抗受容体およびリガンドとのＶＩＳＴＡ会合を可能にする。したがって、酸性ｐＨ範囲でＶＩＳＴＡ－ＥＣＤタンパク質と協力に結合する抗体は、腫瘍におけるＶＩＳＴＡ活性の阻害においてより有効であり得る。
ＶＩＳＴＡは、腫瘍において骨髄単球性細胞によって発現される
この実施例は、ＶＩＳＴＡが、腫瘍において、マクロファージ、樹状細胞および顆粒球を含む骨髄単球性細胞によって頻繁に発現されることを示す。
外科的に切除された非小細胞肺癌、腎明細胞癌、黒色腫、結腸直腸癌腫および他の腫瘍サンプルを、氷冷ＰＢＳで洗浄し、およそ１５ｍｍ３の大きさの小片に切断し、２％熱不活化ＦＢＳおよび２ｍＭ ＥＤＴＡ（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ １５５７５０２０）を補給した氷冷ＲＰＭＩ－１６４０培地（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号１１８７５０９３）に懸濁した。各サンプルを大型クリアランスガラスダウンス（Ｔｅｎｂｒｏｅｃｋ Ｔｉｓｓｕｅ Ｇｒｉｎｄｅｒｓ）に移し、組織片が視覚的に分離されるまですりつぶした。懸濁液を、７０μＭナイロンメッシュを通して濾過し、遠心分離した。上清を廃棄し、細胞ペレットを、０．１％ウシ血清アルブミンおよび２５０ｍｇ／ｍＬ滅菌濾過ＤＮアーゼ１（等級ＩＩ、ウシ膵臓由来、Ｒｏｃｈｅカタログ番号１０１０４１５９００１）を補給した室温ＰＢＳに、室温で３分間再懸濁した。次いで、細胞を、氷冷された補給されたＲＰＭＩで洗浄し、氷冷ＰＢＳに再懸濁した。細胞生存力色素を添加し、細胞を、暗所、氷上でインキュベートした。２０分後、４％正常ラット血清、４％正常マウス血清、２０％ ＡＢ血漿由来ヒト血清および１：１２５希釈されたヒトＴｒｕＳｔａｉｎ ＦｃＸ（商標）（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄカタログ番号４２２３０２）を添加することによって非特異的抗体染色を遮断した。細胞を、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ Ｓｔａｉｎバッファー（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号５６２７９４）に懸濁されたＨＬＡ－ＤＲに対するフルオロフォアがコンジュゲートされた抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号５６４０４０）、ＣＤ８（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号４６－００８７－４２）、ＣＤ１４（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄカタログ番号３２５６２０）、ＣＤ４５（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄカタログ番号３０４０１７）、ＣＤ４（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号５６３８７５）、ＣＤ１１ｃ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号７４４４３９）、ＣＤ１５（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号５６３１４２）、ＰＤ－１（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号５６５２９９）、ＣＤ３（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号５６５５１５）、ＣＤ５６（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号６１－０５６７－４２）、ＣＤ１９（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号５６４９７７）およびＶＩＳＴＡ（ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（商標）６４７にコンジュゲートされたＶＩＳＴＡ抗体３、Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号Ａ２０１８６）を用いて、暗所、氷上で３０分間染色した。染色された細胞を氷冷ＰＢＳで洗浄し、固定し（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号００－５５２３－００）、フローサイトメーターで獲得した。ＦｌｏｗＪｏ（商標）ソフトウェア（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してデータを解析した。図３に示されるように、ＶＩＳＴＡ細胞表面発現は、マクロファージおよび顆粒球で最高であり、樹状細胞で中程度であり、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞およびＢ細胞で低かった。
ＶＩＳＴＡ細胞結合は、酸性ｐＨ選択性を示す
この実施例は、多量体化ヒトＶＩＳＴＡ ＥＣＤが、刺激されたヒトＣＤ４＋Ｔ細胞およびヒト末梢血単核細胞と、酸性ｐＨで、中性または生理学的ｐＨよりも効率的に結合することおよびこの結合が抗ヒトＶＩＳＴＡ遮断（ｌｏｃｋｉｎｇ）抗体によって遮断され得ることを示す。マウス脾細胞との酸性ｐＨ選択的二量体化マウスＶＩＳＴＡ ＥＣＤ結合も示されている。
ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞を、ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ（商標）（Ｓｔｅｍｃｅｌｌカタログ番号１５０６２）によって健常ドナー血液から濃縮し、１０％熱不活化ＦＢＳ、Ｇｌｕｔａｍａｘ（商標）（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号３５０５００６１）、非必須アミノ酸（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ １１１４００５０）、ピルビン酸ナトリウム（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号１１３６００７０）および２－メルカプトエタノール（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ２１９８５０２３）を補給したＲＰＭＩ－１６４０中で、ヒトＴアクチベーターＣＤ３／ＣＤ２８ Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号１１１．３２Ｄ）および組換えヒトＩＬ－２（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈカタログ番号２００－０２）とともにおよそ４日間インビトロで刺激した。活性化されたＣＤ４＋Ｔ細胞を、ｍＭ ＭＥＳ（Ｓｉｇｍａ、１３１７－１００ＭＬ）で種々のｐＨに酸性化されたハンクス緩衝塩溶液（ＨＢＳＳ、Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号１４０２５１３４）に希釈されたフィコエリトリン（ＰＥ）がコンジュゲートされたストレプトアビジンデキストラマー（カタログ番号ＤＸ０１－ＰＥ）上に２８：１モル比で負荷されたモノビオチン化ｈＶＩＳＴＡ ＥＣＤ分子（Ｐｈｅ３３－Ａｌａ１９４（受入番号ＡＡＨ２０５６８）－ポリヒスチジン；ＡｃｒｏＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｉｎｃ．Ｂ７５－Ｈ８２Ｆ３）を用いて室温で３０分間染色した。対照として、活性化されたＣＤ４＋Ｔ細胞を、ｈＶＩＳＴＡが負荷されなかった、ＰＥがコンジュゲートされたストレプトアビジンデキストラマーを用いて染色した。染色された細胞を、ＨＢＳＳ＋ＭＥＳを用いて洗浄し、フローサイトメーターで獲得した。データをＦｌｏｗＪｏ（商標）ソフトウェア（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して解析した。図４Ａに表された結果は、ｐＨ＞６．５では、ｈＶＩＳＴＡが、対照よりも良好にＣＤ４＋Ｔ細胞と結合しなかったことを示す。対照的に、ｐＨ＜６．５では、ｈＶＩＳＴＡは、ＣＤ４＋Ｔ細胞との漸進的に強力な結合を示した。左側、暗灰色から淡灰色へ、塗りつぶされたヒストグラムは、ｐＨ７．０、６．５、６．４、６．３、６．１および６．０での結合を表す。一部のヒストグラムは、その対応するｐＨが表示されている。ｐＨ６．０での非ＶＩＳＴＡ対照多量体結合は、塗りつぶされていないヒストグラムとして示されている。右側、種々のｐＨでｈＶＩＳＴＡが負荷されたデキストラマー（青色丸）または負荷されていないデキストラマー（三角）を用いて染色されたＣＤ４＋Ｔ細胞のグラフ化されたＰＥ平均蛍光強度（ＭＦＩ）。
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、フィコール勾配遠心分離（Ｆｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ Ｐｌｕｓ、ＧＥ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号１７１４４００３）によって健常ドナー血液から濃縮し、ｈＶＩＳＴＡが負荷されたデキストラマー（多量体とも呼ばれる）および上記のようなＨＢＳＳ＋ＭＥＳバッファーで希釈されたフルオロフォアがコンジュゲートされたものを用いて染色した。図４Ｂは、暗灰色から淡灰色へ、ｐＨ６．０でのＣＤ１９＋Ｂ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ５６＋ＮＫ細胞およびＣＤ１４＋単球との結合を表す塗りつぶされたヒストグラムを示す。塗りつぶされていない、実線境界および点線境界ヒストグラムは、それぞれ、ｐＨ７．４での総ＰＢＭＣリンパ球および単球との結合を表す。結果は、ｈＶＩＳＴＡが、酸性ｐＨで多数の白血球と結合し得るが、生理学的ｐＨでは、著しくは結合しないことを示す。
活性化されたヒトＣＤ４＋Ｔ細胞を、力価測定された抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体またはアイソタイプ対応非ＶＩＳＴＡ特異的抗体の存在下、ｐＨ６でｈＶＩＳＴＡ多量体を用いて染色した。図４Ｃにおいてグラフ化された結果は、抗体濃度に対するＶＩＳＴＡ多量体ＭＦＩを示す。抗ｈＶＩＳＴＡ抗体（ＶＩＳＴＡ抗体３；四角）だけでなく、非ＶＩＳＴＡ特異的対照抗体（丸）も、活性化されたＣＤ４＋Ｔ細胞とのｈＶＩＳＴＡ結合を濃度依存的に遮断した。ｈＶＩＳＴＡが負荷された多量体を用いて染色されなかったＣＤ４＋Ｔ細胞のＰＥ ＭＦＩ が、対照として含まれる（単一三角）。
図４Ｄは、ｐＨ６．０での、全長ヒトＰＳＧＬ－１（配列番号３；核酸ＮＭ＿００３００６．４）を発現するようにトランスフェクトされた、ヘパラン硫酸－突然変異体チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（ｐＧＳＤ－６７７株、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）に対するＶＩＳＴＡ多量体染色の代表的な二次元フローサイトメトリープロットを示す。染色は、力価測定された抗ＶＩＳＴＡ遮断抗体（ｍＡｂ ３）の存在下または不在下で実施した。ＶＩＳＴＡ多量体によって染色されないままの細胞は、対照として示される。ＰＳＧＬ－１抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号５６２７５８）染色が、ｙ軸にプロットされ、ＶＩＳＴＡ多量体染色がｘ軸にプロットされている。
脾細胞をＣ５７ＢＬ６／Ｊマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙカタログ番号０００６６４）から採取し、ｐＨ６．０または７．４で、ｍＶＩＳＴＡ ＥＣＤ／ヒトＩｇＧ Ｆｃ（断片、結晶化可能）キメラ融合タンパク質、続いて、フルオロフォアがコンジュゲートされた抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈカタログ番号１０９－０６５－０９８）を用いて染色した。図４Ｅにおいてヒストグラムによって表される結果は、ｍＶＩＳＴＡが、マウス脾細胞とｐＨ６．０で、生理学的ｐＨ（およそｐＨ７．４）よりも効率的に結合することを示す。暗灰色から淡灰色へ、塗りつぶされたヒストグラムは、ｐＨ６．０でのＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ１１ｂ＋骨髄系細胞およびＣＤ４＋Ｔ細胞との結合を表す。塗りつぶされていないヒストグラムは、ｐＨ７．４での総脾細胞との結合を表す。図４ＦおよびＧは、ＶＩＳＴＡ多量体が、それぞれ、単球および好中球と結合し、ｐＨ６．０では、ｐＨ７．４でよりもより強力に結合することを示す。
ＶＩＳＴＡは、細胞：細胞間接着および免疫抑制を酸性ｐＨで選択的に媒介する
この実施例は、ＶＩＳＴＡが、酸性ｐＨで、中性または生理学的ｐＨよりも強力に細胞：細胞間接着を媒介し、Ｔ細胞活性化を抑制することを示す。
酸性ｐＨ適合性フローサイトメトリーをベースとする細胞／細胞コンジュゲートアッセイを確立した。全長ヒトＶＩＳＴＡを異所性に発現する２９３Ｔ細胞（不死化ヒト胚性腎臓細胞株、ＡＴＣＣカタログ番号ＣＲＬ－３２１６）またはベクターを、ＣＦＳＥ（カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル；Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号Ｃ３４５５４）を用いて標識した。ＣＨＯ細胞を、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）Ｆａｒ Ｒｅｄ（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号Ｃ３４５６４）を用いて標識した。次いで、ベクターまたはＶＩＳＴＡ ２９３Ｔ細胞を、ｐＨ７．０またはｐＨ６．０バッファー中でＣＨＯ細胞と１：１比で混合し、室温で１時間インキュベートした。ＣＨＯおよび２９３Ｔ細胞／細胞コンジュゲートの形成をフローサイトメトリーによって評価した。図５Ａ～Ｂに示される結果は、ＶＩＳＴＡを発現する２９３Ｔ細胞が、酸性ｐＨでＣＨＯ細胞に優先的に接着することおよび抗ＶＩＳＴＡ遮断抗体（ＶＩＳＴＡ ｍＡｂ ３；赤色バー）を含めることによって、ＶＩＳＴＡ媒介性細胞／細胞接着が阻害されることを実証する。
酸性ｐＨ適合性Ｔ細胞抑制アッセイを確立した。ＮＦｋＢプロモーターによって駆動されるルシフェラーゼレポーターを発現するＪｕｒｋａｔ細胞（不死化ヒトＴ細胞株、ＡＴＣＣカタログ番号ＴＩＢ－１５２）を、全長ヒトＶＩＳＴＡおよび抗ヒトＴ細胞受容体アゴニスト抗体クローンＯＫＴ３の単鎖可変断片を異所性に発現する２９３Ｔ細胞（不死化ヒト胚性腎臓細胞株、ＡＴＣＣカタログ番号ＣＲＬ－３２１６）と、１０：１のＪｕｒｋａｔ：２９３Ｔ細胞比で種々のｐＨのＨＢＳＳ＋ＭＥＳバッファー中で同時培養した。抗ＶＩＳＴＡ遮断抗体（ＶＩＳＴＡ ｍＡｂ ３）またはアイソタイプ対応非ＶＩＳＴＡ特異的対照抗体を、１０μｇ／ｍＬで同時培養物に添加した。インキュベーション後、ＪｕｒｋａｔＴ細胞活性化を、ルシフェラーゼ活性を測定することによって定量化した（１秒間隔Ｐｒｏｍｅｇａカタログ番号Ｇ７９４０）。結果は、図５Ｃ～Ｄに示されている。図５Ｃは、種々のｐＨで抗ＶＩＳＴＡ（赤色四角）または対照抗体（青色丸）を用いて処置されたＪｕｒｋａｔにおけるルシフェラーゼ単位のプロットを示す。図５Ｄは、試験された各ｐＨでの、対照抗体処置された同時培養物におけるルシフェラーゼシグナルによって除された、抗ＶＩＳＴＡ抗体処置された同時培養物におけるルシフェラーゼシグナルのプロットを示す。結果は、ＶＩＳＴＡ媒介性Ｔ細胞抑制が酸性ｐＨで最も強力であることを示す。
ＶＩＳＴＡは、細胞内リサイクリングエンドソームを介して輸送される
この実施例は、ＶＩＳＴＡを細胞内エンドソーム、特に、Ｒａｂ１１＋リサイクリングエンドソームにおいて見出すことができ、エンドソーム輸送によって細胞表面に、および細胞表面からリサイクルできることを示す。抗ＶＩＳＴＡ抗体が酸性ｐＨでＶＩＳＴＡと結合する力は、そのエンドソーム輸送の際にＶＩＳＴＡと結合しているままでいる能力に影響を及ぼす。
磁性活性化細胞選別によって単球をＰＢＭＣから単離した。次いで、単球および２９３Ｔ細胞の両方とも、４％パラホルムアルデヒド中で固定し、Ｒａｂ５、Ｒａｂ７またはＲａｂ１１について、抗ＶＩＳＴＡまたは対照抗体を用いて細胞内染色した。抗ＶＩＳＴＡ抗体と同一のアイソタイプの非ＶＩＳＴＡ結合性抗体である対照抗体（「ｃＡｂ」）は、ヒトＶＩＳＴＡを発現する単球または２９３Ｔ細胞と検出可能に結合しない。抗ＶＩＳＴＡおよび対照抗体を、Ａｌｅｘａ４８８を用いて直接標識した。Ａｌｅｘａ５９４抗ウサギＩｇ二次抗体を使用してＲａｂ抗体を検出した。Ｈｏｅｓｃｈｔ３３３４２染色を実施して、細胞核を同定した。スピニングディスク共焦点顕微鏡を使用して画像を獲得した。図６Ａは、ヒトＶＩＳＴＡを発現する２９３Ｔ細胞内でのＶＩＳＴＡ、Ｒａｂ５（早期エンドソームマーカー）、Ｒａｂ７（後期エンドソームマーカー）およびＲａｂ１１（リサイクリングエンドソームマーカー）の共存を示す。図６Ｂは、ヒト単球内でのＶＩＳＴＡおよびＲａｂ１１の共存を示す。細胞内ＶＩＳＴＡは、Ｒａｂ１１＋リサイクリングエンドソームと共存する。
ＶＩＳＴＡの、エンドソームを介してリサイクルする能力を評価するために、エンドリソソーム依存性抗体薬物コンジュゲート死滅アッセイを、生理学的および酸性ｐＨで変動するＶＩＳＴＡ結合特性を有する３種の抗ｈＶＩＳＴＡ抗体（ＶＩＳＴＡ ｍＡｂ １、２および３）を用いて実施した。ｐＨ７．４、６．７および６．０での３種のＶＩＳＴＡ抗体すべてのｈＶＩＳＴＡ結合プロフィールを比較するために、ＳＰＲアッセイをまず実施した。ＶＩＳＴＡ抗体を、固定化されたプロテインＡを含有するＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ１００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）ＣＭ５バイオセンサーで捕捉し、次いで、示されたｐＨの、３７℃のＰＢＳＴランニングバッファー中に１００ｎＭ ｈＶＩＳＴＡ－ＥＣＤ（配列番号１のアミノ酸３２～１９３および７×Ｈｉｓテール、すなわちAFKVATPYSL YVCPEGQNVT LTCRLLGPVD KGHDVTFYKT WYRSSRGEVQ TCSERRPIRN LTFQDLHLHH GGHQAANTSH DLAQRHGLES ASDHHGNFSI TMRNLTLLDS GLYCCLVVEI RHHHSEHRVH GAMELQVQTG KDAPSNCVVY PSSSQESENI TAHHHHHHH；配列番号３２５）を流した。参照を差し引いたセンサーグラムを、「結合」レポート点に対して正規化し、プロットした。ＶＩＳＴＡ抗体３、「ｍＡｂ ３」、（図６Ｃ、上部）は、酸性ｐＨで最大程度のＶＩＳＴＡ結合障害を示し、ＶＩＳＴＡ抗体２、「ｍＡｂ ２」（図６Ｃ、中央）が続き、これは、中程度にのみ損なわれた。ＶＩＳＴＡ抗体１、「ｍＡｂ １」は、酸性および生理学的ｐＨ条件で強力なＶＩＳＴＡ結合を維持した（図６Ｃ、下部）。
エンドリソソーム依存性抗体薬物コンジュゲート死滅アッセイを、以下のとおりに実施した。ヒトＶＩＳＴＡを内因性に発現するＡＭＬ３細胞（不死化ヒト単球細胞株、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－９５８９）を、力価測定された抗ＶＩＳＴＡ抗体または非ＶＩＳＴＡ特異的対照抗体ならびにカテプシンＢ感受性リンカーおよび細胞傷害性ツブリシンペイロードにコンジュゲートされた抗ヒトＩｇＧ二次抗体とともに培養した。カテプシンＢは、後期エンドソームおよびリソソームにおいて主に活性であるので、早期エンドソームおよびリサイクリングエンドソームを介してＶＩＳＴＡとともにリサイクルする抗ＶＩＳＴＡ抗体は、低レベルのリンカー切断、結果として、低レベルの細胞傷害性ペイロード放出および細胞死を起こす。酸性エンドソームにおいてＶＩＳＴＡから分離されるようになり、後期エンドソームおよびリソソームに選別される抗ＶＩＳＴＡ抗体は、高レベルのリンカー切断を起こす。５日培養した後にＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ（登録商標）（Ｐｒｏｍｅｇａカタログ番号Ｇ７５７３）によって細胞生存力を測定した。図６Ｄは、ｙ軸にプロットされたＡＭＬ３生存力（Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ）およびｘ軸にプロットされた一次抗体濃度を用いてこのアッセイの結果を示す。一次抗体の算出されたＥＣ５０：ＶＩＳＴＡ抗体１、逆三角、０．４８５μｇ／ｍＬ；ＶＩＳＴＡ抗体２、丸、０．０９２μｇ／ｍＬ；ＶＩＳＴＡ抗体３、四角、０．００６μｇ／ｍＬ；対照、三角、１．０８５μｇ／ｍＬ。抗体効力は、酸性ｐＨでの抗ＶＩＳＴＡ抗体結合と逆相関していた。
酸性ｐＨでの結合が、効力の相違を原因とするものであったことを確認するために、ＶＩＳＴＡ抗体３を、酸性ｐＨでＶＩＳＴＡと結合するその能力が改善されるように親和性最適化した。図６Ｅは、図６Ｃについて記載されるアッセイ条件下で、ＶＩＳＴＡ抗体３のｈＶＩＳＴＡ抗体結合プロフィールを、この変異体、ＶＩＳＴＡ抗体３ｃと比較するＳＰＲアッセイを示す。ＶＩＳＴＡ抗体３は、酸性ｐＨでＶＩＳＴＡ結合障害をやはり示したのに対し、変異体ＶＩＳＴＡ抗体３ｃは、酸性および生理学的ｐＨで同等のＶＩＳＴＡ結合を示した。図６Ｆは、図６Ｄについて記載された死滅アッセイにおいてＶＩＳＴＡ抗体３ｃの活性（菱形）を示す。ＶＩＳＴＡ抗体３のｐＨ独立性変異体は、元の抗体のものよりも３１倍低い効力を示し、これは、酸性ｐＨでの損なわれた抗ＶＩＳＴＡ抗体結合は、ＶＩＳＴＡリサイクリングの際の抗体結合の喪失をもたらすということを示す。
これらの知見に基づいて、ＶＩＳＴＡが、早期エンドソームおよびリサイクリングエンドソームによって、細胞表面へ、および細胞表面からリサイクルされるリサイクリングモデルが提案される。このモデルは、図６Ｇに表されている。抗ＶＩＳＴＡ抗体は、これらのエンドソームを介してＶＩＳＴＡとともにリサイクルし、標的会合を維持し得る。しかし、酸性ｐＨでＶＩＳＴＡ結合が損なわれるＶＩＳＴＡ抗体、特に、酸性ｐＨで迅速な解離速度（ｏｆｆ－ｒａｔｅ）を有するものは、リサイクリングの際にＶＩＳＴＡから分離され、細胞内で捕捉または分解されるようになることがあり、不十分な標的会合および循環抗体の連続的な消費をもたらす。対照的に、酸性ｐＨでＶＩＳＴＡと結合し、結合しているままである抗体は、特に、腫瘍などの酸性微小環境において高いレベルの標的会合を維持し、インビボで長い平均滞留時間を示し得る。
生理学的ｐＨで結合を欠くＶＩＳＴＡ抗体の優越性
本発明者らは、ＶＩＳＴＡは、酸性ｐＨ選択的免疫受容体であることを示し、酸性ｐＨで十分に結合する抗体を用いてＶＩＳＴＡを標的とすることの重要性および有用性を実証した。さらに、生理学的ｐＨでＶＩＳＴＡと結合しない、または無視できるほどしか結合しない抗体は、いくつかの理由のために有利である。第１に、循環骨髄単球性細胞、特に、単球および好中球でのＶＩＳＴＡの比較的豊富な発現のために、生理学的ｐＨでＶＩＳＴＡと結合する抗体は、血液における高レベルの標的媒介性薬物動態（ＴＭＤＤ）の影響を受ける。この効果は、抗ＶＩＳＴＡ抗体内部移行および分解につながる、ＶＩＳＴＡの細胞内エンドソームを介してリサイクルする傾向によって増悪される。この二次的効果は、ＶＩＳＴＡのヒスチジンが豊富なリガンド界面と結合する抗体について観察され得るように、酸性ｐＨで結合が損なわれた抗体にとって特に問題になる。両効果は、循環中の抗ＶＩＳＴＡ抗体の量を低減し、腫瘍に到達する抗体の量、従って、抗体の意図される生理活性を低減する。第２に、生理学的ｐＨでＶＩＳＴＡと結合し、エフェクター機能、例えば、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞性貪食（ＡＤＣＰ）の誘導または免疫調節性ペイロードのデリバリーを有する抗体は、循環骨髄単球性細胞をそれらのエフェクター機能に付し、潜在的に、循環好中球枯渇または活性化などの望ましくない効果をもたらす。したがって、本発明者らは、酸性ｐＨでｈｕＶＩＳＴＡと結合するが、生理学的ｐＨでは無視できるほどにしか結合しない抗体は、（１）腫瘍などの関連部位におけるより良好な露出および（２）ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰまたは免疫調節性ペイロードのデリバリーなどのエフェクター機能を有する抗体の場合の低減された毒性という二重の利点を有することを発見した。さらに、ＶＩＳＴＡ自体が、酸性ｐＨ選択的免疫受容体であるので、生理学的ｐＨでのＶＩＳＴＡのリガンド界面の遮断は、ＶＩＳＴＡ受容体－リガンド活性を調節するのに不必要である可能性が高い。したがって、酸性ｐＨでｈｕＶＩＳＴＡと結合するが、生理学的ｐＨでは著しくは結合しない抗体を、以下に記載されるように作製した。
酸性ｐＨで、生理学的ｐＨを上回ってヒトＶＩＳＴＡと優先的に結合する抗ＶＩＳＴＡ抗体の単離
この実施例は、ＶＩＳＴＡと、低（酸性）ｐＨで、中性または生理学的ｐＨを比較して優先的に結合する抗体の作製を記載する。
抗体の抗ＶＩＳＴＡ抗原結合断片のライブラリーを、以下のとおりに構築し、スクリーニングした。全長ヒトＶＩＳＴＡ（ｈＶＩＳＴＡ）を用いて免疫処置したＨｕＭａｂマウスから単離した遺伝物質を使用して抗体ライブラリーを作出した。これらの抗体はｓｃＦｖとして形式を整え、ｍＲＮＡディスプレイによって低ｐＨ（ｐＨ６．０）での全長ｈＶＩＳＴＡ結合に対して選択した（Xu L et al. (2002) Chemistry & Biology 9: 933; Roberts RW and JW Szostak (1997) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:12297; Kurz et al. (2000) Nucleic Acids Res. 28(18):E83）。選択アウトプットを、次世代シーケンシング（ＮＧＳ）によって解析し、低ｐＨでのＶＩＳＴＡ結合への濃縮を実証したライブラリーメンバーを同定し、ＩｇＧ１．３（アミノ酸突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＥおよびＧ２３７Ａを有するＩｇＧ１ ＦｃからなるエフェクターがないＩｇＧ１定常領域）として再度形式を整え、ＳＰＲによってＶＩＳＴＡとの結合についてスクリーニングした。
表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）解析を実施し、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ２００機器（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、酸性および生理学的ｐＨでのＶＩＳＴＡ Ａｂの会合速度（ｋａまたはｋｏｎとして定義される、１／Ｍｓ単位）、解離速度（ｋｄまたはｋｏｆｆとして定義される、ｓ－１単位）および親和性定数（ＫＤとして定義される、Ｍ単位）を測定した。プロテインＡ（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号２１１８１）を、１０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ４．５で２０μｇ／ｍｌに希釈し、製造業者のアミンカップリングプロトコール（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に従って、フローセルあたり６，０００ＲＵ固定化密度のプロテインＡを標的として、ＣＭ５バイオセンサーのフローセル上に固定化した。ＳＰＲ実験をｐＨ７．４および６．０のＰＢＳＴ（１３７ｍＭ塩化ナトリウム、２．７ｍＭ塩化カリウム、１０ｍＭリン酸バッファー、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０）ランニングバッファーを使用して３７℃で実施した。抗体をＰＢＳＴ ｐＨ７．４で２０ｎＭに希釈し、活性バイオセンサーフローセルにわたって５μｌ／分で５０秒間捕捉した。５０～０．２ｎＭの一価ｈＶＩＳＴＡ－ＥＣＤ（配列番号３２５）の濃度系列を、ｐＨ７．４および６．０ランニングバッファーで調製し、捕捉した抗体上に４０μｌ／分で注射して、会合および解離を測定した。アッセイサイクルの間に１０ｍＭグリシンｐＨ１．５の２回の１５秒の注射を使用して、プロテインＡ捕捉表面を再生した。Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ２００評価ソフトウェアｖ．２．０において、速度定数ｋａ（ｋｏｎ）およびｋｄ（ｋｏｆｆ）を参照フローセルから導き、０ｎＭブランクを差し引いたセンサーグラムを、１：１結合モデルにフィッティングした。各ＶＩＳＴＡ抗体について、ｐＨ６でのｋｏｆｆ／ｐＨ７．４でのｋｏｆｆの比を算出して、酸性ｐＨでの遅い解離速度（ｏｆｆ－ｒａｔｅ）および生理学的ｐＨでの迅速な解離速度（ｏｆｆ－ｒａｔｅ）を示す抗体を同定した。
ＩｇＧ１．３抗体として再度形式が整えられた６種の抗体は、ｐＨ６およびｐＨ７．４の両方でほぼ等価の親和性を実証した。特に、２種の抗体は、ｐＨ６．０でｐＨ７．４よりも遅い解離速度（ｏｆｆ ｒａｔｅ）（すなわち、ｐＨ７．４でｐＨ６．０よりも迅速なｋｏｆｆ）を有していた。これら２種のｈｕＶＩＳＴＡ抗体の可変領域は、Ｐ１－０６１０１５およびＰ１－０６１０２９と呼ばれ、これらの可変領域を含み、ＩｇＧ１．３抗体として形式が整えられた抗体は、それぞれ、Ｐ１－０６１０１５．ＩｇＧ１．３およびＰ１－０６１０２９．ＩｇＧ１．３と呼ばれる。Ｐ１－０６１０１５．ＩｇＧ１．３およびＰ１－０６１０２９．ＩｇＧ１．３のｋｏｆｆ速度が、表１に提供されている。
Figure 2022513421000002
Ｐ１－０６１０１５およびＰ１－０６１０２９の重鎖および軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列が、以下の表２に提供されており、本開示の実施例の節の後の配列表においても示されている。
Figure 2022513421000003
酸性ｐＨ選択的抗体を開発するためのＰ１－０６１０１５およびＰ１－０６１０２９抗ＶＩＳＴＡ Ａｂのさらなる操作
この実施例は、ｐＨ７．４に対するｐＨ６．０での結合の間のより高いｋｏｆｆ比を有する抗ｈｕＶＩＳＴＡ可変領域を得るための、実施例２において同定された可変領域Ｐ１－０６１０１５およびＰ１－０６１０２９のさらなる操作を記載する。
それぞれ、Ｐ１－０６１０１５およびＰ１－０６１０２９のＶＨ ＣＤＲ中に特定の突然変異を導入することによって、２つのライブラリーを構築した。ライブラリーは、低ｐＨで結合を改善する可能性が最も高いアミノ酸置換、すなわち、アスパラギン酸、グルタミン酸およびヒスチジンのみを可能にした。ライブラリーはまた、各ＣＤＲにおいて単一および二重アミノ酸置換ならびにＣＤＲにわたる組換え（鎖あたり最大６つのアミノ酸置換）を可能にした。図７Ａは、Ｐ１－０６１０２９ライブラリーを形成するためにＰ１－０６１０２９の重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列中に導入された突然変異を示す。図は、傾向を導入することを避けるために特定の配列が排除されたことを示す（例えば、ＤＧ）。
’０２９および‘０１５ライブラリーを、酵母表面ディスプレイによってｐＨ６．０での全長ｈＶＩＳＴＡとの数ラウンドの結合によってスクリーニングした。陽性（ｐＨ６．０ ｈｕＶＩＳＴＡと結合する）および陰性（ｐＨ７．４ ｈｕＶＩＳＴＡと結合する）（図７Ｂに示される）選択の間を切り替えることによって選択のさらなるラウンドを実施し、陰性選択ラウンドにおいてｐＨ７．４でＶＩＳＴＡと結合しなかったライブラリーメンバーを集めた。選択アウトプットをＮＧＳによって解析した。選択のラウンド９後にｐＨ６．０でｈｕＶＩＳＴＡと結合した’０２９ライブラリーメンバーを、ｐＨ６．０およびｐＨ７．４でのヒトＶＩＳＴＡとの結合についてフローサイトメトリーによって解析した。図７Ｃは、選択の９ラウンド後の変異体プールを示す代表的な二次元フローサイトメトリープロットを示す。ＶＩＳＴＡ結合がｙ軸にプロットされており、変異体抗体発現がｘ軸にプロットされている。種々の抗体濃度およびｐＨでの結合データが示されている。結果は、ヒトＶＩＳＴＡとの、特に、２０ｎＭでの、極めて強力なｐＨ６選択的結合を実証した。
‘０２９のさらなる後代クローンを、‘０２９ライブラリーから、種々の方法を使用して単離した。一部のクローンは、第１の方法によって同定されたものと同一であり、９つのさらなるクローンを単離した。
さらなる解析のために選択された‘０２９ライブラリーから単離された１９クローンを、ＩｇＧ１．３抗体として再度形式を整えた。‘０２９ＶＨ ＣＤＲのものと比較した、これらのクローンの重鎖ＣＤＲにおけるアミノ酸の相違が、表５に示されている。
Figure 2022513421000004
ｐＨ６．０および７．４でのＩｇＧ１．３抗体として形式が整えられた、‘０２９後代クローンの、および親の‘０２９抗体各々のいくつかの調製物の、ヒトＶＩＳＴＡとの結合を表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定した。ＳＰＲ解析を実施し、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ１００機器（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して酸性および中性ｐＨでのＶＩＳＴＡ ＡｂのｋｏｆｆおよびＫＤ結合親和性測定値を測定した。プロテインＡ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号２１１８１）を希釈し、製造業者のアミンカップリングプロトコール（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に従って、フローセルあたり２，０００ＲＵ固定化密度のプロテインＡを標的として、ＣＭ５バイオセンサーのフローセル上に固定化した。ＳＰＲ実験をｐＨ７．４および６．０のＰＢＳＴ（１３７ｍＭ塩化ナトリウム、２．７ｍＭ塩化カリウム、１０ｍＭリン酸バッファー、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０）ランニングバッファーを使用して３７℃で実施した。抗体をＰＢＳＴ ｐＨ７．４で２５ｎＭに希釈し、活性バイオセンサーフローセルにわたって５μｌ／分で６０秒間捕捉した。５０～５ｎＭの一価ｈＶＩＳＴＡ－ＥＣＤ（配列番号３２５）の濃度系列を、ｐＨ７．４および６．０ランニングバッファーで調製し、捕捉した抗体上に４０μｌ／分で注射して、会合および解離を測定した。アッセイサイクルの間に１０ｍＭグリシンｐＨ１．５の２回の１５秒の注射を使用して、プロテインＡ捕捉表面を再生した。Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ２００評価ソフトウェアｖ．２．０において、速度定数ｋａ（ｋｏｎ）およびｋｄ（ｋｏｆｆ）を参照フローセルから導き、０ｎＭブランクを差し引いたセンサーグラムを、１：１結合モデルにフィッティングした。各ＶＩＳＴＡ抗体について、親和性定数、ＫＤを、速度定数の比ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして算出した。
最大（または規模）ヒトＶＩＳＴＡ結合反応は、各抗体の５０ｎＭ ＶＩＳＴＡ注射の最後での、参照が差し引かれた「結合」レポート点反応として定義され、反応単位（ＲＵ）で報告される。各抗体に対する最大ヒトＶＩＳＴＡ結合反応（ＲＵ）が、図７Ｄにおいてプロットされている。平均結合反応（２～４の複製抗体の間の）がプロットされており、エラーバーは、標準偏差を表す。結果は、‘０２９の選択された後代クローンが、ｐＨ６．０でｈＶＩＳＴＡと結合するが、ｐＨ７．４では結合しないことを示す（ｐＨ７．４での結合を表す中白丸は、親の‘０２９クローンを除いてグラフの下部にすべて位置している）。
‘０２９およびその後代のｐＨ６．０でのｋｏｆｆ速度は、ＳＰＲによって、上記の方法を使用して決定され、図７Ｅに表されている。図中の破線は、‘０２９のｋｏｆｆ速度を表し、破線の左のクローンは、ｐＨ６．０で、親の‘０２９抗体のものと比較してより遅いｋｏｆｆ速度を有するのに対し、右側のものは、ｐＨ６．０で、親の‘０２９抗体のものと比較してより速いｋｏｆｆ速度を有する。
中性および酸性ｐＨでの‘０２９、‘７６１および‘７６７抗体との代表的なｈＶＩＳＴＡ ＳＰＲ結合センサーグラムが、図７Ｆに示されている。参照が差し引かれた５０ｎＭおよび５ｎＭ ｈｕＶＩＳＴＡセンサーグラムがプロットされている。中性ｐＨでは、‘７６１および‘７６７について＜１０ＲＵ ＶＩＳＴＡ結合シグナルが観察され、従って、‘０２９に対して‘７６１および‘７６７のｋｏｆｆおよびＫＤを適切に測定し、比較するために、生理学的ｐＨでμＭ ＶＩＳＴＡ濃度を利用するＳＰＲ動態学アッセイが必要であった。
このアッセイのために、‘０２９、‘７６１および‘７６７を、ｈＩｇＧ１ｆアイソタイプとして再度形式を整え、標準ｈＩｇＧ１ｆとして、およびｈＩｇＧ１ｆ脱フコシル化形式の両方で発現され、ｈＩｇＧ１．３ｆ Ｆｃに対して比較した。ＳＰＲ動態学アッセイを実施して、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ１００機器（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、酸性および生理学的ｐＨでのＶＩＳＴＡ ＡｂのｋｏｆｆおよびＫＤ結合親和性測定値を測定した。プロテインＡ（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号２１１８１）を、１０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ４．５で２０μｇ／ｍｌに希釈し、製造業者のアミンカップリングプロトコール（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に従って、フローセルあたり２，０００ＲＵ固定化密度のプロテインＡを標的として、ＣＭ５バイオセンサーのフローセル上に固定化した。ＳＰＲ実験をｐＨ７．４および６．０のＰＢＳＴ（１３７ｍＭ塩化ナトリウム、２．７ｍＭ塩化カリウム、１０ｍＭリン酸バッファー、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０）ランニングバッファーを使用して３７℃で実施した。抗体をＰＢＳＴ ｐＨ７．４で２５ｎＭに希釈し、活性バイオセンサーフローセルにわたって５μｌ／分で４５秒間捕捉した。１６００～０．７８ｎＭ（ｐＨ７．４）および１００～０．７８ｎＭ（ｐＨ６．０）の一価ｈＶＩＳＴＡ－ＥＣＤ（配列番号３２５）の濃度系列を、ランニングバッファーで調製し、捕捉した抗体上に４０μｌ／分で注射して、会合および解離を測定した。アッセイサイクルの間に１０ｍＭグリシンｐＨ１．５の２回の１５秒の注射を使用して、プロテインＡ捕捉表面を再生した。Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ２００評価ソフトウェアｖ．２．０において、速度定数ｋａ（ｋｏｎ）およびｋｄ（ｋｏｆｆ）を参照フローセルから導き、０ｎＭブランクを差し引いたセンサーグラムを、１：１結合モデルにフィッティングした。各ＶＩＳＴＡ抗体について、親和性定数、ＫＤを、速度定数の比ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして算出した。ｐＨ７．４／ｐＨ６．０でのｋｏｆｆおよびＫＤの比を算出し、酸性ｐＨでの、生理学的ｐＨと比較した解離速度（ｏｆｆ－ｒａｔｅ）および親和性改善を比較した。‘７６１および‘７６７について、５０ｎＭ ｈＶＩＳＴＡを使用して中性ｐＨ結合速度定数をこれまでに決定することができなかったが（図７Ｄおよび７Ｆ）、中性ｐＨ ＶＩＳＴＡ濃度範囲を１．６μＭに増大した結果、１：１結合モデルにフィッティングするこれらのクローンの結合反応（＞１０ＲＵ）が得られた。これらの酸性感受性ＶＩＳＴＡ抗体の動態学データは、表６に示されている。‘０２９親は、両ｐＨで等価のｋｏｆｆを示し、一方で‘７６１および‘７６７は、ｋｏｆｆにおいてｐＨ６について、ｐＨ７．４を上回って１０倍の選択性およびＫＤにおいて、ｐＨ６について、ｐＨ７．４を上回って２０００倍の選択性を示す。ヒトＶＩＳＴＡ結合速度定数は、ｈＩｇＧ１．３ｆ、ｈＩｇＧ１ｆおよび脱フコシル化ｈＩｇＧ１ｆアイソタイプ変異体にわたって保存されている。
Figure 2022513421000005
Ｐ１－０６１０２９（「‘０２９」）、Ｐ１－０６８７６１（「‘７６１」）およびＰ１－０６８７６７（「‘７６７」）（ＩｇＧ１．３抗体としての）のヒトＶＩＳＴＡ結合動態学を、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ１００機器（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用してｐＨ７．４とｐＨ６．０の間のｐＨ値で、すなわち、ｐＨ６．９およびｐＨ６．４５で測定した。プロテインＡ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号２１１８１）を、１０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ４．５で２０μｇ／ｍｌに希釈し、製造業者のアミンカップリングプロトコール（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に従って、フローセルあたり２，０００ＲＵ固定化密度のプロテインＡを標的として、ＣＭ５バイオセンサーのフローセル上に固定化した。アッセイをｐＨ７．４、６．９、６．４５および６．０のＰＢＳＴ（１３７ｍＭ塩化ナトリウム、２．７ｍＭ塩化カリウム、１０ｍＭリン酸バッファー、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０）ランニングバッファーを使用して３７℃で実施した。抗体をＰＢＳＴ ｐＨ７．４で２５ｎＭに希釈し、活性バイオセンサーフローセルにわたって５μｌ／分で４５秒間捕捉した。１００～０．７８ｎＭの一価ｈＶＩＳＴＡ－ＥＣＤ（配列番号３２５）の濃度系列を、ｐＨ７．４、６．９、６．４５および６．０ランニングバッファーで調製し、捕捉した抗体上に４０μｌ／分で注射して、会合および解離を測定した。アッセイサイクルの間に１０ｍＭグリシンｐＨ１．５の２回の１５秒の注射を使用して、プロテインＡ捕捉表面を再生した。Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ２００評価ソフトウェアｖ．２．０において、速度定数ｋａ（ｋｏｎ）およびｋｄ（ｋｏｆｆ）を参照フローセルから導き、０ｎＭブランクを差し引いたセンサーグラムを、１：１結合モデルにフィッティングした。各ＶＩＳＴＡ抗体について、親和性定数、ＫＤを、速度定数の比ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして算出した。各ｐＨでの、ｐＨ６．０と比較したｋｏｆｆおよびＫＤの比を算出して、バッファーｐＨが生理学的なものに変わるにつれ、ＶＩＳＴＡ ｋｏｆｆおよびＫＤがどのように変化するのかを評価し、表７に示されている。‘０２９親は、試験された各ｐＨで一貫したｋｏｆｆを示し、一方で、‘７６１および‘７６７後代は、ｐＨ６．９で、ｐＨ６．０と比較して少なくとも１０倍速いＶＩＳＴＡ ｋｏｆｆおよび１００倍弱いＶＩＳＴＡ ＫＤを示した。バッファーｐＨが、酸性から生理学的なものへ変化するにつれ、‘７６１および‘７６７のＶＩＳＴＡ ｋｏｆｆおよびＫＤは両方とも弱まった。比較のための‘７６１および‘７６７の生理学的ｐＨデータは、表７から参照され、アスタリスク（＊）で示されている。
Figure 2022513421000006
表７中のデータは、ｐＨ６．４５での、ｐＨ６．０と比較した‘７６１および‘７６７のｈＶＩＳＴＡとの結合の少なくとも１０倍低い親和性、ｐＨ６．９でのｐＨ６．０と比較した‘７６１および‘７６７のｈＶＩＳＴＡとの結合の少なくとも１００倍低い親和性およびｐＨ７．４での、ｐＨ６．０と比較した‘７６１および‘７６７のｈＶＩＳＴＡとの結合の少なくとも１０００倍低い親和性を示す。
‘０１５ライブラリーはまた、ＶＩＳＴＡとのｐＨ６選択的結合に対してわずかな優先傾向を実証した。‘０１５ＶＨ ＣＤＲと比較した後代クローンのアミノ酸の相違が、表８に示されている。ｐＨ６．０および７．４での‘０１５後代クローンの、および親の‘０１５の各々のいくつかの調製物（すべてＩｇＧ１．３抗体として）の、ヒトＶＩＳＴＡとの結合を、ＳＰＲによって、上記の‘０２９解析について記載された同一の方法を使用して測定し、表８に示されている。
Figure 2022513421000007
ＳＰＲによって決定されるような、ｐＨ６．０および７．４での‘０２９および’０１５およびその後代クローンの、ｈｕＶＩＳＴＡとの結合の動態学の概要が、表９および１０に示されている。
Figure 2022513421000008
Figure 2022513421000009
Figure 2022513421000010
したがって、ｐＨ６．０でのＶＩＳＴＡ－ＥＣＤに対するｋｏｆｆを、‘０２９親と比較して維持した、または改善した、およびまた生理学的ｐＨで、より弱いｋｏｆｆまたはＶＩＳＴＡとの結合の喪失を実証したいくつかの‘０２９後代クローンを同定した。‘０１５後代は、ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤとの酸性ｐＨ選択的結合を示し、中性ｐＨではＶＩＳＴＡとの検出された結合はなかったが、アッセイされたすべての‘０１５後代は、ｐＨ６．０で、‘０１５親と比較してより速いｋｏｆｆをもたらした。
酸性ｐＨ選択的‘０２９後代は、ＶＩＳＴＡ遮断活性を維持しながら、酸性ｐＨ依存性細胞結合およびエフェクター機能を実証する
クローン‘７６１および‘７６７の、全長ヒトＶＩＳＴＡ（Ｄ１８７Ｅ置換を有する配列番号１）を異所性に発現するように操作されたＲａｊｉ細胞とのｐＨ依存性結合を測定した。この実験のために、ＩｇＧ１．３抗体として‘７６１および‘７６７の形式を整え、抗ヒトＩｇＧ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈカタログ番号１０９－０６５－０９８）によって結合を測定した。図８Ａ～８Ｂに示される結果は、‘７６１（図８Ａ）および‘７６７クローン（図８Ｂ）が、ｐＨ７．２および８．１で不十分にしか結合しないが、酸性ｐＨでは、特に、ｐＨ６．０、６．１、６．２および６．４では良好に結合することを示す。結合ＭＦＩがｙ軸にプロットされており、一次抗体濃度が対数スケールでｘ軸にプロットされている。非線形回帰も示されている。
図８Ｃは、種々のｐＨでの、３１２５ｎｇ／ｍＬのヒトＶＩＳＴＡを発現するＲａｊｉ細胞との、Ｐ１－０６８７６７（丸）およびアイソタイプ対応非特異的対照抗体（三角）結合を測定する図８Ａ～Ｂに記載される実験から得られたデータを示す。「ｐＨ５０」、Ｐ１－０６８７６７結合の５０％が喪失されるｐＨは、およそ６．６である。結合ＭＦＩが、ｙ軸にプロットされ、バッファーｐＨが、ｘ軸にプロットされている、非線形回帰も示されている。
図８Ｄは、ヒト単球との、アイソタイプ対応非特異的対照抗体（それぞれ、ｐＨ７．０および６．０の塗りつぶされたおよび塗りつぶされていない丸）、抗ＶＩＳＴＡ ｍＡｂ ２（「対照」、図６Ｃを参照のこと、それぞれ、ｐＨ７．０および６．０の塗りつぶされたおよび塗りつぶされていない四角）、Ｐ１－０６８７６１（それぞれ、ｐＨ７．０および６．０の塗りつぶされたおよび塗りつぶされていない三角）およびＰ１－０６８７６７（それぞれ、ｐＨ７．０および６．０の塗りつぶされたおよび塗りつぶされていない逆三角）結合のＭＦＩを示す。結合は、図８Ａ～Ｂに記載されるように検出された。非ｐＨ選択的ＶＩＳＴＡ対照抗体（ｍＡｂ ２）は、両ｐＨで単球と結合した。両方の操作された酸性ｐＨ選択的抗体は、ｐＨ６．０で単球と良好に結合したが、ｐＨ７．０では非特異的アイソタイプ対応対照よりも良好に結合しなかった。したがって、クローン‘７６１および‘７６７は、中性ｐＨではＶＩＳＴＡに対して弱い結合を有する、または結合を有さず、代わりに、細胞上のＶＩＳＴＡと、酸性ｐＨで選択的に結合する。
図８Ｅは、‘０２９（四角）、‘７６１（三角）および‘７６７（逆三角）による、ｐＨ６．０での活性化ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞との組換えＶＩＳＴＡ多量体結合の同等の遮断を示し、一方で、非ＶＩＳＴＡ特異的対照抗体（丸）は、ＶＩＳＴＡ 結合を遮断しなかった。この遮断アッセイは、実施例４に記載されるように実施した。これらのデータは、操作された酸性ｐＨ選択的ＶＩＳＴＡ抗体が、酸性ｐＨでＶＩＳＴＡ受容体－リガンド結合を依然として遮断可能であることを示す。
すべて脱フコシル化ＩｇＧ１抗体として発現された、Ｐ１－０６１０２９．ＩｇＧ１ｆ、Ｐ１－０６８７６１．ＩｇＧ１ｆ、Ｐ１－０６８７６７．ＩｇＧ１ｆ抗体、非ＶＩＳＴＡ特異的抗体および非ＶＩＳＴＡ特異的陰性対照抗体について、生理学的ｐＨでの抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）による標的細胞（図８Ａ～Ｂに記載されるヒトＶＩＳＴＡを発現する同一Ｒａｊｉ細胞）のＮＫ細胞特異的溶解を測定した。ＮＫ細胞を、陰性ビーズ選択（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓカタログ番号１９０５５）によってＰＢＭＣから濃縮し、１μＭヒドロコルチゾン（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓカタログ番号０７９０４）および５００Ｕ／ｍＬ組換えヒトＩＬ－２（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈカタログ番号２００－０２）を補給したＭｙｅｌｏｃｕｌｔ（商標）培地（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓカタログ番号０５１５０）で一晩培養した。アッセイの当日に、ヒトＶＩＳＴＡを異所性に発現するＲａｊｉ細胞（図８Ａ～Ｂに記載される）を、Ｃａｌｃｅｉｎ ＡＭ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓカタログ番号Ｃ３１００ＭＰ）を用いて標識し、培養されたＮＫ細胞と１０：１のＮＫ：標的細胞比で、およびＰ１－０６１０２９．ＩｇＧ１ｆ、Ｐ１－０６８７６１．ＩｇＧ１ｆ、Ｐ１－０６８７６７．ＩｇＧ１ｆ抗体、非ＶＩＳＴＡ特異的抗体および非ＶＩＳＴＡ特異的陰性対照抗体とともに、生理学的ｐＨで２時間同時培養した。特異的溶解を、上清蛍光シグナル（ＥｎＶｉｓｉｏｎ（商標）プレートリーダー）から内挿した。Ｄｅｌｆｉａ（登録商標）溶解バッファー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒカタログ番号４００５－００１０）を用いる標的細胞の溶解によって、抗体を伴わない同時培養から得られた自発性溶解シグナルおよび最大溶解シグナルを決定した。抗体特異的溶解を、（最大溶解シグナル－自発性溶解シグナル）によって除された観察された溶解のパーセンテージであると算出した。
図８Ｆにおいて提供される結果は、生理学的ｐＨでの抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の媒介におけるＰ１－０６８７６１．ＩｇＧ１ｆおよびＰ１－０６８７６７．ＩｇＧ１ｆの、Ｐ１－０６１０２９および陽性対照と比較して低減された効力を示す。
ＶＩＳＴＡ抗体のｃｙｎｏ ＰＫ
ヒト抗体ナイーブなカニクイザルに、酸性および中性ｐＨで同程度に結合するＶＩＳＴＡ抗体（「対照」；ｍＡｂ２）、酸性ｐＨでの結合が損なわれているＶＩＳＴＡ抗体（「酸性ｐＨ選択的」、ｍＡｂ３）または酸性ｐＨ選択的抗体‘７６７いずれかの単回５ｍｐｋ用量を静脈内注射し、これらの抗体のｃｙｎｏ ＰＫを決定した。
この実施例において使用された抗体のＳＰＲ結合動態学は、表１１において提供されており、以下のとおりに決定した。酸性ｐＨ選択的および対照抗ＶＩＳＴＡ抗体のｃｙｎｏ ＶＩＳＴＡ交差反応性を、酸性および中性ｐＨで評価した。ＶＩＳＴＡ Ａｂの結合親和性測定を、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ１００機器（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して実施した。プロテインＡ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号２１１８１）を、１０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ４．５で２０μｇ／ｍｌに希釈し、製造業者のアミンカップリングプロトコール（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に従って、フローセルあたり２，０００ＲＵ固定化密度のプロテインＡを標的として、ＣＭ５バイオセンサーのフローセル上に固定化した。アッセイを、Ｈ７．４および６．０のＰＢＳＴ（１３７ｍＭ塩化ナトリウム、２．７ｍＭ塩化カリウム、１０ｍＭリン酸バッファー、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０）ランニングバッファーを使用して３７℃で行った。抗体（ＩｇＧ１．３抗体として形式を整えた）を、ＰＢＳＴ ｐＨ７．４で２５ｎＭに希釈し、活性バイオセンサーフローセルにわたって５μｌ／分で４５秒間捕捉した。１６００～０．７８ｎＭ（ｐＨ７．４）および１００～０．７８ｎＭ（ｐＨ６．０）の一価ｈＶＩＳＴＡ－ＥＣＤ（配列番号３２５）およびｃｙｎｏVISTA-ECD(AFKVATLYSL YVCPEGQNVT LTCRVFGPVD KGHDVTFYKT WYRSSRGEVQ TCSERRPIRN LTFQDLHLHH GGHQAANTSH DLAQRHGLES ASDHHGNFSI TMRNLTLLDS GLYCCLVVEIRHHHSEHRVH GAMELQVQTG KDAPSSCVAY PSSSQESENI TAHHHHHHH；（配列番号３２６）の濃度系列を、ランニングバッファーで調製し、捕捉した抗体上に４０μｌ／分で注射して、会合および解離を測定した。アッセイサイクルの間に１０ｍＭグリシンｐＨ１．５の２回の１５秒の注射を使用して、プロテインＡ捕捉表面を再生した。Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ２００評価ソフトウェアｖ．２．０において、速度定数ｋａ（ｋｏｎ）およびｋｄ（ｋｏｆｆ）を参照フローセルから導き、０ｎＭブランクを差し引いたセンサーグラムを、１：１結合モデルにフィッティングした。各ＶＩＳＴＡ抗体について、親和性定数、ＫＤを、速度定数の比ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして算出した。ｐＨ７．４／ｐＨ６．０でのｋｏｆｆおよびＫＤの比を算出して、酸性ｐＨで、中性ｐＨに対して解離速度（ｏｆｆ－ｒａｔｅ）および親和性の相違を比較し、表１１に示されている。試験したすべての抗ＶＩＳＴＡ抗体が、試験した両ｐＨで同等の（２倍以内）ヒトおよびｃｙｎｏ ＶＩＳＴＡ動態学結合パラメータを示し、ｃｙｎｏ ＶＩＳＴＡとの交差反応性が確認された。両抗ＶＩＳＴＡ対照抗体が、生理学的ｐＨで、酸性ｐＨと比較して改善されたｋｄおよびより強力なＫＤを示し、酸性ｐＨ感受性対照は、酸性ｐＨで、対照抗体と比較してより迅速なＶＩＳＴＡ ｋｄを示した。
Figure 2022513421000011
ヒト抗体ナイーブなカニクイザルに、ＶＩＳＴＡ ｍＡｂ２（「対照」）、ＶＩＳＴＡ ｍＡｂ３（「酸性ｐＨ感受性」）またはＰ１－０６８７６７．ＩｇＧ１．３いずれかの単回５ｍｐｋ用量を静脈内注射した。注射後の各抗体の血清濃度が、図９に示されている。Ｐ１－０６８７６７．ＩｇＧ１．３および対照抗ＶＩＳＴＡ抗体の平均滞留時間は、それぞれ、７１７および２２時間であり、酸性ｐＨで選択性が、ＶＩＳＴＡ抗体標的媒介性薬物動態（ＴＭＤＤ）を大幅に低減したことを示す。対照抗体（ｍＡｂ ２）および酸性ｐＨ感受性抗体（ｍＡｂ ３）は、生理学的ｐＨでＶＩＳＴＡと同程度に結合するが、実施例６および７に記載されたように、酸性ｐＨ感受性抗体は、７．６時間というより少ない平均滞留時間を有しており、ＶＩＳＴＡ抗体リサイクリングにとっての酸性ｐＨ結合の重要性を実証した。結果は、酸性ｐＨ選択的抗体は、優れたＰＫを有し、従って、腫瘍または他の微小環境において標的会合により容易に達することを示す。
ｐＨ選択的‘０２９後代は、高ｐＩタンパク質と非特異的に結合しない
ＶＩＳＴＡに対する、および他の高ｐＩタンパク質に対する‘０２９、‘７６１および‘７６７クローンの結合特異性を、ＳＰＲによって、中性および酸性ｐＨで、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ１００機器（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して評価した。プロテインＡ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号２１１８１）を、１０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ４．５で２０μｇ／ｍｌに希釈し、製造業者のアミンカップリングプロトコール（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に従って、フローセルあたり８００ＲＵ固定化密度のプロテインＡを標的として、ＣＭ３バイオセンサーのフローセル上に固定化した。ＳＰＲ実験を、ｐＨ７．４および６．０のＰＢＳＴ（１３７ｍＭ塩化ナトリウム、２．７ｍＭ塩化カリウム、１０ｍＭリン酸バッファー、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０）ランニングバッファーを使用して２５℃で実施した。抗体（ＩｇＧ１．３抗体として形式を整えた）を、ＰＢＳＴ ｐＨ７．４で５０ｎＭに希釈し、活性バイオセンサーフローセルにわたって５μｌ／分で６０秒間捕捉した。１００～１０ｎＭの一価ｈＶＩＳＴＡ－ＥＣＤ（配列番号３２５）の濃度系列、アビジン（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号２１１２８）、シトクロムｃ（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｃ２８６７）、ＢＳＡ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍカタログ番号１２６５９３）および一価対照抗原（「Ａｇ」）を、ｐＨ７．４および６．０ランニングバッファーで調製し、捕捉した抗体上に５０μｌ／分で注射して、結合特異性を評価した。アッセイサイクルの間に１０ｍＭグリシンｐＨ１．５の２回の１５秒の注射を使用して、プロテインＡ捕捉表面を再生した。Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ２００評価ソフトウェアｖ．２．０を使用して、参照フローセルおよび０ｎＭブランクを差し引いたセンサーグラムを調査した。結果は、表１２に示されている。
Figure 2022513421000012
表１２では、＞１０ＲＵとして定義される特異的結合、サンプル注射の最後でのＳＰＲ結合応答が、塗りつぶされた灰色四角によって示されている。「抗Ａｇ」は、ＶＩＳＴＡ結合対照Ａｂである。‘０２９クローンは、酸性および中性ｐＨでＶＩＳＴＡに対して特異的である。‘０２９後代クローン‘７６１および‘７６７は、酸性ｐＨでＶＩＳＴＡに対して特異的であり、一方で、対照抗体もまた抗原特異性を維持した。プロテインＡ参照表面とのｐＩ対照タンパク質の非特異的結合（「ＮＳＢ」）は、このアッセイでは観察されなかった。
したがって、‘７６１および‘７６７のＶＨ ＣＤＲに導入された電荷を有するアミノ酸は、これらの抗体に、他の高ｐＩタンパク質、例えば、アビジンおよびシトクロムＣまたは低ｐＩタンパク質、例えば、ＢＳＡと静電的に結合させない。
抗体‘７６１および‘７６７によるＴ細胞活性化のＶＩＳＴＡ媒介性阻害の開放
この実施例は、抗体‘７６１および‘７６７の、ＪｕｒｋａｔＴ細胞活性化のｈＶＩＳＴＡ阻害を遮断する能力を調べるために実施され得るアッセイを記載する。
実施例５において記載されるものと同一のアッセイが使用される。手短には、ＮＦｋＢルシフェラーゼレポーターを発現するＪｕｒｋａｔ（ヒトＴ細胞株）細胞を、種々のｐＨで、ヒトＶＩＳＴＡおよび抗ヒトＴ細胞受容体アゴニスト抗体ＯＫＴ３の単鎖可変断片を発現する２９３Ｔ細胞と同時培養する。同時培養された細胞に、抗ＶＩＳＴＡ抗体‘７６１および‘７６７またはアイソタイプ対応非ＶＩＳＴＡ特異的対照抗体を添加する。Ｊｕｒｋａｔ活性化は、ルシフェラーゼ単位として、および対照に対する抗ＶＩＳＴＡ処置を用いた場合のルシフェラーゼシグナルの増大倍数として示される。
突然変異解析によって、ＶＩＳＴＡ抗体にｐＨ依存性結合特性を付与する重要な残基が同定された
抗体Ｐ１－０６８７６１．ＩｇＧ１．３およびＰ１－０６８７６７．ＩｇＧ１．３は、Ｐ１－０６１０２９から５～６の突然変異を含有する（表７）。ＶＩＳＴＡ抗体のｐＨ依存性特性を付与するのに重要な残基を同定するために突然変異解析を実施した。そのようなものとして、Ｐ１－０６８７６１およびＰ１－０６８７６７のＮ－１（Ｐ１－０６１０２９への１つのアミノ酸復帰）およびＮ－２（Ｐ１－０６１０２９への２つのアミノ酸復帰）変異体のパネルを合成し、ＩｇＧ１．３として発現させ、ｐＨ６、ｐＨ６．７およびｐＨ７．４でのｈｕＶＩＳＴＡとのその結合について解析した。
Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ１００機器（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して結合動態学を測定した。プロテインＡ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号２１１８１）を、１０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ４．５で２０μｇ／ｍｌに希釈し、製造業者のアミンカップリングプロトコール（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に従って、フローセルあたり２，０００ＲＵ固定化密度のプロテインＡを標的として、ＣＭ５バイオセンサーのフローセル上に固定化した。アッセイを、ｐＨ７．４、６．７および６．０のＰＢＳＴ（１３７ｍＭ塩化ナトリウム、２．７ｍＭ塩化カリウム、１０ｍＭリン酸バッファー、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０）ランニングバッファーを使用して３７℃で実施した。抗体をＰＢＳＴ ｐＨ７．４で２５ｎＭに希釈し、活性バイオセンサーフローセルにわたって５μｌ／分で４０秒間捕捉した。１００～１０ｎＭの一価ｈＶＩＳＴＡ－ＥＣＤ（配列番号３２５）の濃度系列を、ｐＨ７．４、６．７および６．０ランニングバッファーで調製し、捕捉した抗体上に４０μｌ／分で注射して、会合および解離を測定した。アッセイサイクルの間に１０ｍＭグリシンｐＨ１．５の２回の１５秒の注射を使用して、プロテインＡ捕捉表面を再生した。Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ２００評価ソフトウェアｖ．２．０において、速度定数ｋａ（ｋｏｎ）およびｋｄ（ｋｏｆｆ）を参照フローセルから導き、０ｎＭブランクを差し引いたセンサーグラムを、１：１結合モデルにフィッティングした。
各ＶＩＳＴＡ抗体について、親和性定数、ＫＤを、速度定数の比ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして算出した。％Ｒｍａｘを算出して、ｐＨが、ＶＩＳＴＡに対する抗体の結合能に影響を及ぼす方法を比較し、予測された最大ＶＩＳＴＡ結合反応に対する測定された最大ＶＩＳＴＡ結合反応に相当する。％Ｒｍａｘは、予測されたＶＩＳＴＡ結合反応（Ｒｅｘｐ）に対する、各抗体の１００ｎＭ ＶＩＳＴＡ注射の最後での、参照が差し引かれた「結合」レポート点反応（Ｒｍａｘ）の割合として定義される。Ｒｅｘｐは、Ｒｅｘｐ＝［（ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤ分子量／ｍＡｂ分子量）×（ｍＡｂ「捕捉」レポート点反応（ＲＵ）］×２ ｍＡｂあたりの結合部位として算出される。
Ｐ１－０６８７６１復帰変異体について得られたＳＰＲ結果は、図１０Ａに示されており、これは、ｐＨ６．０ ｋｏｆｆ、最も遅いものから最も早いものによってランク付けされている。表では、１００ｎＭ ｈＶＩＳＴＡと、弱い結合反応を示した、または結合反応を示さなかった抗体（＜１０ＲＵ）が、非結合（ＮＢ）としてカテゴリー化された。結果は、３２位（すなわち、‘７６１のＶＨ ＣＤＲ１中のアミノ酸残基７）のＥおよび１００ｆ（‘７６１のＶＨ ＣＤＲ３中のアミノ酸残基１２）は両方とも、酸性ｐＨ選択性の維持にとって必要であることを示すが、これは、Ｐ１－０６１０２９親配列へのこれらの復帰によって、生理学的ｐＨで著しいｈＶＩＳＴＡ結合（％Ｒｍａｘ＞１０）が可能となるからである。さらなる解析によって、Ｅ５５Ａ（‘７６１のＶＨ ＣＤＲ２中のアミノ酸残基６）を有する変異体の復帰が酸性ｐＨ選択性を維持し、Ｐ１－０６８７６１の２倍以内の同等の結合動態学を示すことが明らかにされた。対照的に、Ｈ１００Ｇ、Ｅ５６ＮおよびＥ３０Ｄ（それぞれ、‘７６１のＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸残基１２、ＶＨ ＣＤＲ２の７およびＶＨ ＣＤＲ１の４）を有する変異体の復帰は、酸性ｐＨ選択性を維持しながら、これらのｍＡｂはまた、酸性ｐＨで、Ｐ１－０６８７６１と比較して約３倍速いｋｏｆｆを示し、酸性ｐＨでのこれらの突然変異体の解離速度（ｏｆｆ－ｒａｔｅ）を、Ｐ１－０６１０２９親に近づけた。したがって、元のＰ１－０６１０２９クローンにＧ１００Ｈ、Ｎ５６Ｅおよび／またはＤ３０Ｅ突然変異を付加することは、酸性選択的Ｐ１－０６８７６１クローンにおいて観察された酸性ｐＨＶＩＳＴＡ親和性改善に寄与した。
Ｐ１－０６８７６７復帰変異体について得られたＳＰＲ結果は、図１０Ｂに示されており、これは、ｐＨ６．０ ｋｏｆｆ、最も遅いものから最も早いものによってランク付けされている。結果は、１０２位（‘７６７のＶＨ ＣＤＲ３中のアミノ酸残基１４）のＤは、酸性ｐＨ選択性の維持にとって必要であったことおよびＰ１－０６１０２９親配列へのＤ１０２Ｖの復帰によって、中性ｐＨで著しいｈＶＩＳＴＡ結合が可能となった（％Ｒｍａｘ＞１０）ことを示す。さらなる解析によって、Ｅ３０Ｄ、Ｄ５２ＮおよびＥ５５Ａ（それぞれ、‘７６７のＶＨ ＣＤＲ１のアミノ酸残基４、ＶＨ ＣＤＲ２の３およびＶＨ ＣＤＲ３の６）を有する変異体の復帰が、酸性ｐＨ選択性を維持し、Ｐ１－０６８７６７の２倍以内の同等のｐＨ６．０結合動態学を示すことが明らかにされた。対照的に、Ｅ１００ｆＦ（‘７６７のＶＨ ＣＤＲ３アミノ酸残基１２）を有する変異体の復帰は、酸性ｐＨで、Ｐ１－０６８７６７と比較して＞３倍速いｋｏｆｆを有していたが、酸性ｐＨ選択性を維持した。注目すべきことに、Ｅ１００ｆＦを有する変異体の復帰は、酸性ｐＨで、親のｍＡｂ Ｐ１－０６１０２９と比較してさらに速いｋｏｆｆを示した。
したがって、Ｐ１－０６８７６１およびＰ１－０６８７６７（酸性ｐＨ選択的）の、Ｐ１－０６１０２９（ｐＨ寛容性）に対する復帰突然変異体の概要は、表１３における以下のとおりである（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、強調によってわけられている）。
Figure 2022513421000013
表１３中のＰ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７６１およびＰ１－０６８７６７の上記のＶＨ ＣＤＲ配列は、それぞれ、配列番号６７、５１、５５のアミノ酸（「アミノ酸位置」）２６～３５、５０～６６および９９～１１０にある。酸性ｐＨ選択性にとって必要な重要な突然変異は、太字で示されており、ｐＨ６．０ ｋｄに対して、Ｐ１－０６８７６１およびＰ１－０６８７６７と比較して３倍を超える影響を有する突然変異には下線が引かれている。
ＶＩＳＴＡ抗体エピトープのマッピング
ＩｇＧ１．３抗体として形式が整えられた‘０１５、‘０２９、‘７６１および‘７６７のｈＶＩＳＴＡエピトープを、２つの異なる方法によって決定した：ＢＬＩ（バイオレーザーインターフェロメトリー）競合および酵母表面ディスプレイ。
競合ＢＬＩエピトープビニングアッセイを実施して、酸性ｐＨ選択的ＶＩＳＴＡ抗体Ｐ１－０６８７６１およびＰ１－０６８７６７が、Ｐ１－０６１０２９親、Ｐ１－０６１０１５および関連ＶＩＳＴＡ対照抗体１、２および３と比較してＶＩＳＴＡ上に同様のまたは重複するエピトープを保持していたか否かを評価した。ＯｃｔｅｔＲｅｄ３８４ ＢＬＩ機器（ＰＡＬＬ／ＦｏｒｔｅＢｉｏ）でサンドイッチおよびタンデム形式ビニングアッセイを実施した。すべてのアッセイステップは、３０℃で、１０００ｒｐｍ振盪速度で実施し、使用したバッファーは、酸性（ｐＨ６．０）または中性（ｐＨ７．４）ＰＢＳＴ（１３７ｍＭ塩化ナトリウム、２．７ｍＭ塩化カリウム、１０ｍＭリン酸バッファー、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０）であった。サンドイッチ形式のために、抗ヒトＩｇＧ－Ｆｃセンサー（ＡＨＣ、ＰＡＬＬ／ＦｏｒｔｅＢｉｏ）は、まず、ｐＨ７．４でＶＩＳＴＡ抗体パネルを捕捉し、次いで、総ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ番号００９－０００－００２）を用いて抗ヒト捕捉センサーを遮断した。次いで、ｐＨ６．０でヒトＶＩＳＴＡ－ＥＣＤを捕捉し、最後に、すべての可能性ある抗体組合せの競合をｐＨ６．０で評価した。タンデム形式アッセイでは、ストレプトアビジンコーティングされたバイオセンサー（ＳＡＸ、ＰＡＬＬ／ＦｏｒｔｅＢｉｏ）が、まず、ｐＨ７．４でビオチン化ｈＶＩＳＴＡ－ＥＣＤを捕捉し、次いで、センサーが、ｐＨ６．０で完全ＶＩＳＴＡ抗体パネルを捕捉し、ＶＩＳＴＡ上での各抗体の完全結合飽和を確実にし、その後、ｐＨ６．０ですべての可能性ある抗体組合せとの競合を評価した。
競合ＢＬＩエピトープビニングアッセイの結果は、競合マトリックス、図１１Ａによってまとめられている。この図では、捕捉された第１の抗体が、横列によって列挙され、（第２の）競合抗体に対するその結合または遮断活性が各縦列に示されている。競合マトリックスは、両アッセイ形式について同一であった。サンドイッチアッセイについては、競合抗体の結合（淡灰色）は、０．４～１．２ｎｍの間の範囲のシグナルによって定義され、遮断された抗体（黒色）は、非結合シグナル＜０．１ｎｍを示した。タンデムアッセイについては、競合抗体の結合は、０．３～０．８ｎｍの間の範囲のシグナルによって定義され、遮断された抗体は、非結合シグナル＜０．２ｎｍを示した。「ＶＩＳＴＡ ｍＡｂ ３」は、３７℃でのＳＰＲによって、ｈＶＩＳＴＡ－ＥＣＤからの速い酸性ｐＨ解離を示したが（図６Ｃ）、いずれかのＢＬＩアッセイ形式（３０℃で実施された）では迅速に解離しなかった。これらの競合アッセイは、Ｐ１－０６１０１５、Ｐ１－０６１０２９、酸性ｐＨ選択的抗体Ｐ１－０６８７６１およびＰ１－０６８７６７ならびにＶＩＳＴＡ抗体２および３はすべて、ＶＩＳＴＡ上の同様のまたは重複するエピトープについて互いに競合することを示した。しかし、ＶＩＳＴＡ抗体１は、分離している、別個のエピトープと結合する。したがって、酸性選択的クローンＰ１－０６８７６１およびＰ１－０６８７６７を作製するために、Ｐ１－０６１０２９のＶＨ ＣＤＲに導入された電荷を有するアミノ酸突然変異は、ＶＩＳＴＡ結合エピトープを著しく変更しなかった。
抗体‘０２９、‘０１５、‘７６１および‘７６７のエピトープをまた、Chao et al. (2004) J. Mol. Biol. 342:539-550, Oliphant et al. (2006) J. Virol. 80:12149-12159およびKowalsky et al. (2015) J. Biol. Chem. 290:26457-26470の方法に従って、酵母表面ディスプレイおよびＮＧＳを使用してマッピングした。手短には、ＶＩＳＴＡ ＥＣＤの単一点突然変異体の飽和突然変異誘発ライブラリーを作製し、酵母の表面にディスプレイした。マッピングされている抗体との結合を喪失したが、非遮断抗体（ｍＡｂ１）との結合を保持していたＶＩＳＴＡ突然変異体を、選別し、配列決定した。それらは、ｍＡｂ１との結合を保持していたので、これらの突然変異体は、正確にフォールディングされた可能性が高く、マッピングされている抗体に対して見られた結合の喪失は、エネルギー的に重要な接触残基の喪失によるものである可能性が高かった。これらの突然変異の位置は、抗体のエピトープ中のエネルギー的に重要な残基と名付けられ、表１４に示されている。
Figure 2022513421000014
表１５は、表１４からの詳細なデータを含み、酵母表面ディスプレイ／ＮＧＳ法において観察された残基頻度に基づいて、列挙された各抗体の結合を低減する可能性が高いｈＶＩＳＴＡのアミノ酸残基を列挙する。
Figure 2022513421000015
Figure 2022513421000016
図１１Ｂおよび図１１Ｃは、非遮断ｈＶＩＳＴＡ抗体のエピトープ（ｍＡｂ１；図１１Ｃ）と比較した、表１４において列挙されるようなｈＶＩＳＴＡ抗体を遮断するためのすべての残基を包含するエピトープ（図１１Ｂ）の提示を示す。アミノ酸残基６６（Ｈ）および１６２（Ａ）は、分子の配向を表すために示されている。Ｈ６６およびＡ１６２残基は灰色であり、エピトープ残基は黒色である。注目すべきことに、すべての遮断抗ＶＩＳＴＡ ｍＡｂは、同一エピトープ領域を占め、ｏｃｔｅｔビニングデータ（それらが互いに競合したことを示す）と、検索された抗体間にはわずかな残基の相違しかないことと一致する。対照的に、非遮断ｈＶＩＳＴＡ抗体（ｍＡｂ１）は、ｈＶＩＳＴＡ分子上の別個のエピトープ領域を占め、これは、遮断ｍＡｂのうち、ｍＡｂ１と競合するものはないというｏｃｔｅｔビニングデータによってさらに支持される。
‘７６１および‘７６７の生物物理学的特性
Ｐ１－０６８７６１およびＰ１－０６８７６７の物理学的および化学的特性を、以下の分析技術および生物物理学的技術によって親のＰ１－０６１０２９（すべてＩｇＧ１．３定常領域を有する）のものと比較した。
分析用ＳＥＣデータは、０．３０ｍＬ／分の流速で流れる、１００ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ７．３（０．２μｍ濾過した）を含有するバッファー中で、Ｓｈｏｄｅｘ（商標）ＫＷ４０３－４Ｆカラム（４．６ｍｍＩＤ×３００ｍｍＬ）を使用するＡｇｉｌｅｎｔ １２６０ ＨＰＬＣ機器を使用して獲得した。データは、２８０ｎｍで集めるように設定されたＡｇｉｌｅｎｔ １２６０ Ｉｎｆｉｎｉｔｙダイオードアレイ検出器によって集め、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｃｈｅｍｓｔａｔｉｏｎソフトウェア（Ａｇｉｌｅｎｔ、カリフォルニア州、サンタクララ）によって分析した。
画像化キャピラリー等電点電気泳動（ｉｃＩＥＦ）データは、Ａｌｃｏｔｔ ７２０ＮＶオートサンプラーを備えたＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅ ｉＣＥ３機器で獲得した。抗体サンプルを分離混合物と混合して、０．２ｍｇ／ｍｌ抗体、０．３５％メチルセルロース、２．０Ｍ尿素、１％ ｖ／ｖファルマライト（ｐｈａｒｍａｌｙｔｅ）ｐＩ５～８および３％ ｖ／ｖファルマライトｐＩ８～１０．５の最終濃度とした。これらのサンプルを、ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅ ｃＩＥＦカートリッジＦＣコーティングされたもの（製品番号１０１７０１）において１５００Ｖで１分のプレフォーカス時間および３０００Ｖで１０分のフォーカシング時間を使用して分析した。データは、ｉＣＥ ＣＦＲソフトウェアＶ４．３．１．５３５２を使用して分析した。
抗体の流体力学的な大きさを、動的光散乱（ＤＬＳ）によって調べ、熱安定性を、蛍光分光法およびＵＮｃｌｅ分子特性決定機器（Ｕｎｃｈａｉｎｅｄ Ｌａｂｓ）を使用する静的光散乱（ＳＬＳ）によって特性決定した。抗体Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７６１およびＰ１－０６８７６７を１×ＰＢＳバッファー中、２ｍｇ／ｍｌの濃度で調製し、次いで、種々のｐＨの１×ＰＢＳ中の４０ｍＭ Ｔｒｉｓまたは１×ＰＢＳ中の４０ｍＭクエン酸のいずれかを用いて１：１希釈して、ｐＨ３．０、４．０、５．０、６．０、７．０、８．０または９．０の２０ｍＭ Ｔｒｉｓ／１×ＰＢＳまたは２０ｍＭクエン酸／１×ＰＢＳのいずれかでの１ｍｇ／ｍｌ抗体の最終サンプルを得た。これらのサンプルをＵＮｉキュベットカートリッジ中に入れ、種々のｐＨ製剤への希釈の１時間以下に分析した。各５秒の４回獲得を使用して、ＤＬＳデータを２５℃で集めた。ＵＮｃｌｅ分析ソフトウェアバージョンＶ２．０を使用して強度自己相関関数を適合させた。０．５℃／分のスキャン速度で２５℃～９０℃でサンプルをスキャンすることによって熱変性データを得、２６６ｎｍおよび４７３ｎｍで励起した。蛍光データを２５０ｎｍ～７２０ｎｍの範囲にわたって獲得した。蛍光およびＳＬＳデータは、ＵＮｃｌｅ分析ソフトウェアバージョンＶ２．０を使用して分析した。
抗体Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７６１およびＰ１－０６８７６７の見かけの粘度を、ＵＮｃｌｅ分子特性決定機器（Ｕｎｃｈａｉｎｅｄ Ｌａｂｓ）で、Ｕｎｃｈａｉｎｅｄ Ｌａｂｓが推奨するプロトコールのとおりに、製剤化された抗体溶液の存在下でポリスチレンビーズの拡散速度を測定するビーズベースのＤＬＳ法を使用して測定した。手短には、１００ｎｍのポリスチレンビーズ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号３１００Ａ）の１０％溶液を、０．５％ ｔｗｅｅｎ８０を含有する調剤バッファー（製剤化バッファー）で調製した。このポリスチレンビーズ混合物の３μｌを、３０μｌの製剤化された抗体（２０ｍＭヒスチジン、２６０ｍＭスクロースｐＨ６．０中の種々のＡｂ濃度）に添加し、得られたタンパク質／ビーズ混合物を、３連分析のためにＵＮｉキュベットカートリッジ３つの別個のレーン（９μｌ各レーン）にロードした。データを、１．３ｃＰの参照粘度を使用し、ＵＮｃｌｅ分析ソフトウェアバージョンＶ２．０を使用して分析した。
抗体Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７６１およびＰ１－０６８７６７の物理的安定性を、２０ｍＭヒスチジン、２６０ｍＭスクロースｐＨ６．０で５０ｍｇ／ｍｌ抗体サンプルを調製することおよび４０℃熱ストレスに４週間曝露することによって加速ストレス条件下で調べた。アリコートを４０℃インキュベーションの直前（時間ゼロ＝ｔ０）ならびに熱ストレスの１週間後（１ｗ）および４週間後（４ｗ）に採取し、サンプルを、調剤バッファー（製剤化バッファー）を使用して２ｍｇ／ｍｌに希釈し、ａＳＥＣによって分析した。ａＳＥＣデータは、０．３０ｍＬ／分の流速で流れる、１００ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ７．３（０．２μｍ濾過した）を含有するバッファー中で、Ｓｈｏｄｅｘ ＫＷ４０３－４Ｆカラム（４．６ｍｍＩＤ×３００ｍｍＬ）を使用するＡｇｉｌｅｎｔ １２６０ ＨＰＬＣ機器を使用して獲得した。データは、２８０ｎｍで集めるように設定されたＡｇｉｌｅｎｔ １２６０ Ｉｎｆｉｎｉｔｙダイオードアレイ検出器によって集め、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｃｈｅｍｓｔａｔｉｏｎソフトウェア（Ａｇｉｌｅｎｔ、カリフォルニア州、サンタクララ）によって分析した。
結果は以下のとおりである。分析用サイズ排除クロマトグラフィー（ａＳＥＣ）データは、３種の抗体すべてを、高純度に精製することができ、各抗体サンプルは、９９．３％超のモノマー（主要ピーク）、０．７％未満の高分子量（ＨＭＷ）種および検出不可能なレベルの低分子量（ＬＭＷ）種からなることを示した。
Figure 2022513421000017
抗体Ｐ１－０６１０２９の画像化キャピラリー等電点電気泳動（ｉｃＩＥＦ）によって決定されるような電荷変異体プロフィールは、８．５６の等電点（ｐＩ）を有する主要種（６９．４％）および３０．６％酸性種の存在を示した（図１２Ａ～Ｃ）。Ｐ１－０６８７６１は、６．６９のｐＩを有する主要種（６６．４％）および３３．６％の酸性種を実証した。Ｐ１－０６８７６７は、６．６３のｐＩを有する主要種（６１．４％）および３８．６％の酸性種を実証した。したがって、酸性、塩基性および主要種の分布は、３種の抗体について同様であるが、操作された抗体Ｐ１－０６８７６１およびＰ１－０６８７６７は、親のＰ１－０６１０２９抗体よりも著しく低い等電点を有する。
Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７６１およびＰ１－０６８７６７のオリゴマー状態を、種々のｐＨのバッファー中で動的光散乱（ＤＬＳ）を使用して３～９のｐＨ範囲にわたって判定した。各抗体のすべての流体力学半径（Ｒｈ）値は、単量体抗体サンプルにとって通常である４．８～５．７ｎＭの範囲であった、表１７。これは、これらの抗体は、３～９の間のｐＨを有する製剤への希釈後、最初の１時間以内に１ｍｇ／ｍｌの検出可能レベルの高分子量凝集種を形成しないということを示唆する。
Figure 2022513421000018
Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７６１およびＰ１－０６８７６７の熱安定性を、種々のｐＨのバッファーにおける温度の関数として、蛍光および静的光散乱をモニタリングすることによって３～９のｐＨ範囲にわたって測定した。通常ＩｇＧ１抗体のＣＨ２ドメインの変性に相当する第１の熱変性転移（Ｔｍ１）を、蛍光によって決定し、表１８に示されており、通常、ＩｇＧ１抗体のＦＡＢドメインの変性に相当する凝集（Ｔａｇｇ）の発生を、静的光散乱によって測定し、表１９に示されている。Ｔｒｉｓ／ＰＢＳ製剤化における中性ｐＨ（ｐＨ７．０）では、３種の抗体のＴｍ１値は、Ｐ１－０６１０２９（６７．４℃）、Ｐ１－０６８７６１（６７．０℃）およびＰ１－０６８７６７（６５．３℃）であり、Ｐ１－０６１０２９（６７．８℃）、Ｐ１－０６８７６１（６７．５℃）およびＰ１－０６８７６７（６５．８℃）のＴａｇｇ値を有する。同じ中性ｐＨ７．０または６．０というわずかにより酸性ｐＨでのクエン酸／ＰＢＳ製剤中の各抗体のＴｍ１は、すべてＴｒｉｓ／ＰＢＳ ｐＨ７．０値の０．７℃以内であった。しかし、各抗体について、８～９というより塩基性ｐＨでは、Ｔｍ１値はわずかに低く（０．３℃～１．１℃の間低い）、３～５というより酸性ｐＨでは著しく低かった。中性ｐＨと比較して、より塩基性ｐＨ８．０～９．０では、Ｐ１－０６１０２９のＴａｇｇは、ｐＨ７．０値の０．１℃以内であり、ｐＨ５．０では１．０℃低く、最も酸性のｐＨ条件ｐＨ３．０～４．０ではかなり低かった（６．１℃～１９．６℃低い）。Ｐ１－０６８７６１およびＰ１－０６８７６７のＴａｇｇはまた、ｐＨ３．０～４．０で著しく低かった。しかし、ｐＨ５．０では、Ｐ１－０６８７６１のＴａｇｇは、ｐＨ６．０でのＴａｇｇよりも０．２℃のみ低かったのに対し、Ｐ１－０６８７６７のＴａｇｇは、ｐＨ５．０で、ｐＨ６．０でよりも２．２℃低く、各抗体のＴａｇｇの幾分かの相違を実証する、表１９。
Figure 2022513421000019
Figure 2022513421000020
Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７６１およびＰ１－０６８７６７の見かけの粘度を、製剤化された抗体溶液の存在下でポリスチレンビーズの拡散速度を測定するビーズベースのＤＬＳ法を使用して測定した。４４ｍｇ／ｍｌでの３種の抗体すべての比較は、両方の操作された抗体について、これらの条件下で親抗体と同様の粘度を示した、表２０。第２の研究では、Ｐ１－０６８７６１およびＰ１－０６８７６７のための追加のタンパク質材料を、より高い濃度に濃縮し、１３６ｍｇ／ｍｌ、１００ｍｇ／ｍｌおよび５０ｍｇ／ｍｌで粘度を分析した。これらのデータは、高い抗体濃度で見かけの粘度の増大を示し、１３６ｍｇ／ｍｌで、Ｐ１－０６８７６１について５．７±０．７およびＰ１－０６８７６７について５．３±０．６の最大の見かけの粘度を有する。
Figure 2022513421000021
２０ｍＭヒスチジン、２６０ｍＭスクロースｐＨ６．０中の、Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７６１およびＰ１－０６８７６７の５０ｍｇ／ｍｌサンプルの物理的安定性を、４０℃で４週間の加速ストレス条件下で調べた。抗体のオリゴマー状態を。４０℃インキュベーションの直前に（時間ゼロ＝ｔ０）ならびに４０℃ストレスの１週間後（１ｗ）および４週間後（４ｗ）にサンプルについてａＳＥＣによってモニタリングした。これらのデータは、３種の抗体はすべて、４０℃で４週間後に９６％超がモノマーのままであり、低レベルのＨＭＷ種（＜１．６％ ＨＭＷ）および低レベルのＬＭＷ種（＜２．０％ ＬＭＷ）を有することを示す、表２１。
Figure 2022513421000022
中性ｐＨでの結合を低減するための抗ＶＩＳＴＡ抗体の操作
この実施例は、ｐＨ７．０でヒトＶＩＳＴＡと結合する抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体の選択および酸性ｐＨでヒトＶＩＳＴＡと結合する抗体を得るためのその操作を記載する。
抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体を、ＶＩＳＴＡを用いて免疫処置したｈｕＭａｂマウスから得られたハイブリドーマから単離した。４１Ｆ１１と呼ばれるこのＡｂは、ＩｇＧ１アイソタイプのものであり、その重鎖および軽鎖可変領域アミノ酸およびヌクレオチド配列は、図１４Ａ、１４Ｂ、１５Ａ、１５Ｂ、１６Ａ、１６Ｂ、１７Ａおよび１７Ｂにおいて、および以下の配列表において提供されている。３種の可能性ある軽鎖（ＶＫ１、ＶＫ２およびＶＫ３）が同定されたが、ＶＫ１（図１５ＡおよびＢ）は、機能的軽鎖であると思われ、別に明記されない限り、この抗体の組換え発現において使用された。この特定の抗体およびその任意の変異体のために、ＨＣＤＲ１は、ＡｂＭ命名法に従って定義され、すべての他の５つの重鎖および軽鎖ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ命名法に従って定義される。
４１Ｆ１１のＶＨおよびＶＬ（ＶＫ１）ならびに重鎖定常領域ＩｇＧ１．３（および４１Ｆ１１の軽鎖）を含む組換え抗体を作製し、ＶＩＳＴＡ．４．ＩｇＧ１．３と呼ばれる。ＶＫ１軽鎖のアミノ酸６４は、生殖系列突然変異である（その位置の生殖系列アミノ酸残基は、Ｇである）ことが観察され、したがって、このアミノ酸が生殖系列を写すようにＧに変更された、ＶＫ軽鎖を作製した。この抗体は、ＶＩＳＴＡ．４．Ａ６４Ｇ．ＩｇＧ１．３と呼ばれる。
ＶＩＳＴＡ．４の、ヒトおよびｃｙｎｏ ＶＩＳＴＡとの結合動態学を、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ１００機器（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して調べた。プロテインＡ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号２１１８１）を、１０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ４．５で２０μｇ／ｍｌに希釈し、製造業者のアミンカップリングプロトコール（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に従って、フローセルあたり２，０００ＲＵ固定化密度のプロテインＡを標的として、ＣＭ５バイオセンサーのフローセル上に固定化した。アッセイを、ｐＨ７．４および６．０のＰＢＳＴ（１３７ｍＭ塩化ナトリウム、２．７ｍＭ塩化カリウム、１０ｍＭリン酸バッファー、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０）ランニングバッファーを使用して３７℃で行った。ＶＩＳＴＡ．４ ＩｇＧ１．３を、ＰＢＳＴ ｐＨ７．４で２５ｎＭに希釈し、活性バイオセンサーフローセルにわたって１０μｌ／分で３０秒間捕捉した。１６００～０．７８ｎＭ（ｐＨ７．４）および１００～０．７８ｎＭ（ｐＨ６．０）一価ｈＶＩＳＴＡ－ＥＣＤ（配列番号３２５）およびｃｙｎｏ ＶＩＳＴＡ－ＥＣＤ（配列番号３２６）の濃度系列を、ランニングバッファーで調製し、捕捉した抗体上に４０μｌ／分で注射して、会合および解離を測定した。アッセイサイクルの間に１０ｍＭグリシンｐＨ１．５の２回の１５秒の注射を使用して、プロテインＡ捕捉表面を再生した。Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ２００評価ソフトウェアｖ．２．０において、速度定数ｋａ（ｋｏｎ）およびｋｄ（ｋｏｆｆ）を、参照フローセルから導き、０ｎＭブランクを差し引いたセンサーグラムを、１：１結合モデルにフィッティングした。親和性定数、ＫＤを、速度定数の比ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして算出し、結果は、表２２に提供されている。ＶＩＳＴＡ．４抗体は、試験された両ｐＨで、同等の（２倍以内）ヒトおよびｃｙｎｏ ＶＩＳＴＡ動態学結合パラメータを示し、ｃｙｎｏ ＶＩＳＴＡとの交差反応性が確認された。ＶＩＳＴＡ．４について、測定されたｋｄは、酸性ｐＨで、中性ｐＨよりも約１００倍弱かく、一方で、ＫＤもまた約１０倍弱い。
Figure 2022513421000023
ＶＩＳＴＡ．４は、ｐＨ７．４で、ｐＨ６．０でよりも高い親和性でヒトＶＩＳＴＡと結合する。より詳しくは、ＶＩＳＴＡ．４は、酸性ｐＨで、ｐＨ７．４でよりもかなり速い解離速度（ｏｆｆ－ｒａｔｅ）を有していたが、一方で、－非遮断抗体ＶＩＳＴＡ．５（ｍＡｂ １）の解離速度（ｏｆｆ－ｒａｔｅ）は、ｐＨによって影響を受けなかった（図１８Ｂ）。ＶＩＳＴＡ．４はまた、細胞－結合アッセイにおいて、酸性ｐＨで、ｐＨ７．４でよりも低いＹｍａｘ値を示した（図１８Ａ）。本発明者らは、ＶＩＳＴＡの受容体－リガンド界面に対する抗体は、不活性（少ないまたは全くないヒスチジンプロトン化）および活性（より多いヒスチジンプロトン化）状態の間を区別可能であり得ることと仮定した。したがって、ＶＩＳＴＡ．４の変異体を作製して、ｐＨ７で結合を維持しながら、ｐＨ６で改善された親和性を有するものを同定した。これは、ＶＩＳＴＡ．４の酵母表面ディスプレイ突然変異スキャンライブラリーによるスクリーニングによって行い、ライブラリー中の各変異体は、ループ中に単一突然変異を有し、ループ中の各位置が、すべてのあり得るアミノ酸残基で置換されている。ｈＶＩＳＴＡ－Ｈｉｓを用いてライブラリーをスクリーニングした。突然変異スキャンデータの分析は、ｐＨ６．０で改善された結合を有する突然変異の同定につながった。これらは、各変異体が、ＣＤＲ内およびＣＤＲにわたって２、３の改善された突然変異の組合せを含有する、設計されたＶＩＳＴＡ．４変異体につながった。選択された変異体は、表２３に示されており、これらの変異体におけるアミノ酸変動は、表２４に示されている。中性および酸性ｐＨでの変異体のヒトＶＩＳＴＡタンパク質との結合動態学を、上記で実施例９に記載されたＳＰＲ法を使用して分析し、結果は、表２３において以下で報告されている。
Figure 2022513421000024
Figure 2022513421000025
Figure 2022513421000026
Figure 2022513421000027
Figure 2022513421000028
Figure 2022513421000029
Figure 2022513421000030
Figure 2022513421000031
Figure 2022513421000032
酸性および中性ｐＨでＶＩＳＴＡとのｐＨアゴニスト結合を示す後代について得られた測定された動態学パラメータを確認するために、ｐＨ７．４および６．０で５０～０．３９ｎＭに広がるヒトＶＩＳＴＡ濃度系列に対する表２３および２４の選択された抗体について、ＳＰＲ動態学アッセイを反復した。ｋｄおよびＫＤ比を、前の実施例に記載されたように算出し、結果は、表２５に示されている。
Figure 2022513421000033
この最初のキャンペーンは、ｐＨ６およびｐＨ７でほぼ等価のｋｏｆｆを有するｐＨ独立性ＶＩＳＴＡ．４変異体につながった。ｈＶＩＳＴＡと、ｐＨ６．０で高親和性で、およびｐＨ７．０で低親和性で結合する抗体を得るために、ループ中のアミノ酸残基が、電荷アミノ酸残基と置換された、ｐＨ独立性ＶＩＳＴＡ．４変異体のコンセンサス配列をベースとする新規ライブラリーを設計し、構築し（実施例９を参照のこと）、酵母表面ディスプレイによってスクリーニングした（実施例９を参照のこと）。これまでに記載されたようにライブラリーを分析し（実施例９を参照のこと）、選択された変異体を、さらなる分析のためにＩｇＧ１．３として再度形式を整えた（表２６および２７）。実施例９においてこれまでに記載された条件を使用して、これらの変異体でＳＰＲ分析を実施した。
Figure 2022513421000034
Figure 2022513421000035
上記のスクリーニングから、単一ＶＩＳＴＡ．４変異体（４１Ｆ１１＿ＶＨ＿Ｔ２８Ｐ／Ｙ５０Ｗ／Ｓ５５Ｅ／Ｄ９５Ｈ／Ｌ９６Ｅ／Ｐ９７Ｅ／Ｙ１００Ｅ；ＶＫ＿Ａ６４Ｇ（Ｐ１－０７０９７６））を、ｐＨ６．０でｈＶＩＳＴＡと高親和性で結合し、ｐＨ７．４ではそれと著しくは結合しないと同定した。この変異体で、ｈＶＩＳＴＡおよびｃｙｎｏ ＶＩＳＴＡとのさらなる結合動態学分析を実施し、これまでの実施例において記載されたいくつかの抗ｈＶＩＳＴＡ抗体と比較した。ｐＨ６．０および７．４でのアビジン（高ｐＩ特異性対照タンパク質）との各抗体の結合を分析し、検出不可能であるとわかった。
Figure 2022513421000036
表２８に示されるように、抗体４１Ｆ１１＿ＶＨ＿Ｔ２８Ｐ／Ｙ５０Ｗ／Ｓ５５Ｅ／Ｄ９５Ｈ／Ｌ９６Ｅ／Ｐ９７Ｅ／Ｙ１００Ｅ；ＶＫ＿Ａ６４Ｇ（Ｐ１－０７０９７６とも呼ばれる）は、ｐＨ６．０でヒトおよびｃｙｎｏ ＶＩＳＴＡの両方と高親和性で、ならびにｐＨ７．４でヒトおよびｃｙｎｏ ＶＩＳＴＡの両方と低親和性で結合する。
実施例９において記載された方法に従って、上記で記載されたＶＩＳＴＡ．４突然変異体の一部および新規突然変異体を、ｈＶＩＳＴＡとの結合について試験した。表２９において提供される結果（ＣＤＲのアミノ酸配列は、表３０において提供されている）は、ほとんどの突然変異体は、ｐＨ６．０または７．４のいずれかで結合を示さなかったことを示す。抗体４１Ｆ１１＿ＶＨ＿Ｔ２８Ｐ／Ｙ５０Ｗ／Ｓ５５Ｅ／Ｄ９５Ｈ／Ｌ９６Ｅ／Ｐ９７Ｅ／Ｙ１００Ｅ；ＶＫ＿Ａ６４Ｇ（Ｐ１－０７０９７６）は、ｐＨ選択的である唯一のＶＩＳＴＡ．４誘導体である。
このｐＨ選択的ＶＩＳＴＡ．４誘導体の２種の突然変異体を作出して、ＶＩＳＴＡ．４になされたすべての置換が、ｐＨ選択性にとって必要であるか否かを調べた：ＶＩＳＴＡ．４中のＨ９５またはＥ９７のいずれかが、それぞれ残基ＤおよびＰに復帰した、Ｐ１－０７０９７６＿Ｈ９５ＤおよびＰ１－０７０９７６＿Ｅ９７Ｐ（両方ともＶＫ＿Ａ６４Ｇ軽鎖を有する）。表２９に示されるように（２つの実験の平均速度を示す）、Ｈ９５は、Ｄへのその復帰が、結合動態学に著しく影響を及ぼさなかったので、ｐＨ選択性にとって必ずしも必要ではない。しかし、Ｅ９７は、Ｐへのその復帰が、ｐＨ選択性の喪失をもたらしたのでｐＨ選択性にとって重要である。
Figure 2022513421000037
Figure 2022513421000038
Figure 2022513421000039
したがって、この実施例によって、ヒトＶＩＳＴＡと、酸性ｐＨで、生理学的ｐＨよりも２００～１０，０００倍大きい親和性で結合する抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体が同定された（図１９Ａ）。細胞結合アッセイでは、これらの酸性ｐＨ選択的ＶＩＳＴＡ抗体は、ＶＩＳＴＡのＴ細胞との結合について観察されたものと同様の、およそｐＨ６．５で結合強度において屈曲点を示した。
ＶＩＳＴＡ．４のエピトープマッピング
実施例１５において記載された競合ＢＬＩエピトープビニングアッセイにおいてＶＩＳＴＡ．４を使用した。結果は、ＶＩＳＴＡ．４が、ヒトＶＩＳＴＡとの結合について、上記の抗体Ｐ１－０６１０１５、Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７６１およびＰ１－０６８７６７と競合し、したがって、これらの抗体と同一のエピトープ群（群Ａ）に属することを示す。ＶＩＳＴＡ．４は、ヒトＶＩＳＴＡとの結合について、ＶＩＳＴＡ ｍＡｂ １（ＶＩＳＴＡ．５；図１１Ａを参照のこと）と競合しない。
抗体Ｐ１－０６１０１５、Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７６１およびＰ１－０６８７６７について実施例１５に記載されたように、ＶＩＳＴＡ．４のエピトープをまた、酵母表面ディスプレイおよびＮＧＳを使用してマッピングした。マッピングされている抗体との結合を喪失したが、非遮断抗体（ｍＡｂ１）との結合を保持していたＶＩＳＴＡ突然変異体を、選別し、シーケンシングした。それらは、ｍＡｂ１との結合を保持していたので、これらの突然変異体は、正確にフォールディングされた可能性が高く、マッピングされている抗体に対して見られた結合の喪失は、エネルギー的に重要な接触残基の喪失によるものである可能性が高かった。結合の喪失をもたらし、抗体のエピトープ中のエネルギー的に重要な残基と名付けられた突然変異の位置は、抗体Ｐ１－０６１０１５、Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７６１およびＰ１－０６８７６７のエネルギー的に重要な接触残基とともに表３１に示されている（上記の表１４にも示されている）。
Figure 2022513421000040
水素／重水素交換質量分析（ＨＤＸ－ＭＳ）を利用して、ヒトＶＩＳＴＡとｍＡｂ ＶＩＳＴＡ．４の結合エピトープを探索した。ＨＤＸ－ＭＳは、主鎖アミド水素原子の重水素交換の速度および程度をモニタリングすることによって、溶液中のタンパク質コンホメーションおよびコンホメーション動力学を探索する（Huang and Chen (2014) Analytical and Bioanalytical Chemistry 406, 6541-6558;Wei, et al. Drug Discovery Today (2014) 19, 95-102）。ＨＤＸのレベルは、主鎖アミド水素原子の溶媒到達性およびタンパク質水素結合に応じて変わる。ＨＤＸの際のタンパク質の質量増大は、ＭＳによって正確に測定され得る。この技術が、酵素消化と対をなす場合には、ペプチドレベルでの構造特徴を解明でき、表面に露出されたペプチドを、内側にフォールディングされたものから、またはタンパク質－タンパク質複合体の界面に隔離されたものから区別することが可能となる。通常、重水素標識およびその後のクエンチング実験を実施し、それに、酵素消化、ペプチド分離およびＭＳ分析が続けられる。
エピトープマッピング実験の前に、非重水素化実験を実施して、組換えヒトＶＩＳＴＡ（１５μＭ）およびＶＩＳＴＡとｍＡｂ ＶＩＳＴＡ．４のタンパク質複合体（１：１モル比）の一般的なペプチドのリストを作製した。ＨＤＸ－ＭＳ実験では、各サンプル （ＶＩＳＴＡまたはＶＩＳＴＡとｍＡｂ ＶＩＳＴＡ．４）の５μＬを５５μＬのＤ２Ｏバッファー（１０ｍＭリン酸バッファー、Ｄ２Ｏ、ｐＨ７．０）中に希釈して、反応物の標識を開始した。反応を、種々の期間：１分、１０分および２４０分実施した。各々反応物の標識の終わりまでに、クエンチングバッファー（４Ｍ ＧｄｎＣｌおよび０．４Ｍ ＴＣＥＰを有する、１００ｍＭリン酸バッファー、ｐＨ２．５、１：１、ｖ／ｖ）を添加することによって反応物をクエンチし、５０μＬのクエンチされたサンプルを、分析のためにＷａｔｅｒｓ ＨＤＸ－ＭＳシステムに注入した。一般的な消化性ペプチドの重水素取り込みレベルを、ＶＩＳＴＡ．４の不在下／存在下でモニタリングした。得られたシーケンスカバレッジは、８２％であった。
ＨＤＸ－ＭＳ実験は、ヒトＶＩＳＴＡの８５％シーケンスカバレッジを提供した。図２０Ａに示されるように、ヒトＶＩＳＴＡにおけるＶＩＳＴＡ．４でのＨＤＸ－ＭＳデータ分析は、ＶＩＳＴＡ．４のエピトープは、ヒトＶＩＳＴＡの３つの領域から構成され、領域２が、主エピトープである（残基番号は、天然ヒトＶＩＳＴＡ配列に対応する、図２０Ｂ）ことを示す：
領域１：５７ＬＧＰＶＤＫＧＨＤＶＴＦ６８（配列番号４９８）
領域２：８６ＲＲＰＩＲＮＬＴＦＱＤＬ９７（配列番号４９７）
領域３：１４８ＶＶＥＩＲＨＨＨＳＥＨＲＶＨＧＡＭＥ１６５（配列番号４９９）
上記の実施例に記載されるように、抗体ＶＩＳＴＡ．４は、酸性および中性ｐＨで等しく良好に結合した（図１９Ｂ）。選択のさらなるラウンドは、ＶＩＳＴＡと、ｐＨ６．０で、ｐＨ７．４でよりも２００倍高い親和性で結合する変異体をもたらした（図１９Ｃ）。ＶＩＳＴＡ遮断抗体を用いる同様の試みによって、ｐＨ６．０に対して、ｐＨ７．４と比較して最大１０，０００倍の選択性を有する変異体が生成した（実施例１７の前の実施例を参照のこと）。ＶＩＳＴＡ．５および他の非遮断抗体は、細胞ベースのおよび生物物理学的アッセイにおいて、大部分は酸性ｐＨに対して非感受性である（図１８および１９）。図１８Ｄは、ＶＩＳＴＡ遮断抗体は、頻繁に酸性ｐＨに対して感受性であることを示す。
本発明者らは、これらの抗体を使用して、酸性および中性ｐＨでＶＩＳＴＡの受容体－リガンド結合界面をマッピングした。ｐＨ独立性、中性ｐＨ選択的および酸性ｐＨ選択的ＶＩＳＴＡ遮断抗体は、ほぼ同一のエピトープと結合し、これは、ヒスチジンプロトン化が単独で、際立ったコンホメーション変化を伴わずに、酸性ｐＨでその対抗受容体と会合するＶＩＳＴＡの能力を制御することを示唆する。このエピトープ特異的ｐＨ感受性は、抗体が、ＶＩＳＴＡのリガンド界面の活性（酸性ｐＨ）および不活性（中性ｐＨ）状態を区別できることを示唆した。
ＶＩＳＴＡ．４は、酸性ｐＨでのＴ細胞とのＶＩＳＴＡ結合を阻害する
この実施例は、エピトープ群Ａ中のＶＩＳＴＡ．４および他の抗体が、酸性ｐＨでＴ細胞とのＶＩＳＴＡ結合を遮断したのに対し、エピトープ群Ｂ中のＶＩＳＴＡ．５（ｍＡｂ１）および他の抗体は遮断しなかったことを示す（図２１ＡおよびＢ）。
この実施例は、本質的に実施例４に記載される通りに実施した。
ＶＩＳＴＡ．４は、Ｔ細胞増殖およびＩＦＮ－γ産生を増強する
この実施例は、生理学的ｐＨで、ＶＩＳＴＡおよびＣＤ３アゴニスト抗体ＯＫＴ３の単鎖可変断片を発現するように操作された２９３Ｔ細胞（２９３Ｔ－ｓｃＯＫＴ３－ＶＩＳＴＡ）と同時培養されたＣＤ４＋細胞に対する、ＶＩＳＴＡ遮断および非遮断抗体（それぞれ、ＶＩＳＴＡ．４およびＶＩＳＴＡ．５）の効果を記載する。この実験は、ヒトＶＩＳＴＡおよびＴ細胞受容体アゴニスト抗体ＯＫＴ３の単鎖可変断片を発現するように操作された２９３Ｔ細胞（２９３Ｔ－ＯＫＴ３－ＶＩＳＴＡ）と同時培養されたＣＤ４＋Ｔ細胞に、ＶＩＳＴＡ抗体を添加することによって実施した。ＣＤ４＋Ｔ細胞を、陰性選択（ＳｔｅｍＣｅｌｌ ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ）によって健常ドナー血液から濃縮し、増殖色素細胞Ｔｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ （ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を用いて標識した。２９３Ｔ細胞を、アゴニストＣＤ３モノクローナル抗体ＯＫＴ３の単鎖可変断片およびヒトＶＩＳＴＡを異所性に発現するように操作した（「２９３Ｔ－ＯＫＴ３－ＶＩＳＴＡ」）。ＣＤ４＋Ｔ細胞および照射された２９３Ｔ－ＯＫＴ３－ＶＩＳＴＡ細胞を、１０％ Ｖ／Ｖ熱不活化ウシ胎児血清、２ｍＭ Ｌ－グルタミン（Ｇｉｂｃｏ）、２ｍＭ非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、１ｍＭピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、５５μＭ Ｂ－メルカプトエタノールおよび力価測定したヒト抗ヒトＶＩＳＴＡまたはアイソタイプ対応非ＶＩＳＴＡ結合対照抗体を補給したＲＰＭＩ－１６４０中で、４：１の比で５日間同時培養した。増殖は、フローサイトメトリーによって決定されるような、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ色素希釈を受けているＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージとして算出した。
結果は、ＶＩＳＴＡ遮断Ａｂ（エピトープ群Ａ）は、Ｔ細胞増殖およびＩＦＮ－γ産生を中程度に増強したことを示す（図２２）。遮断抗体ではないＶＩＳＴＡ．５（ｍＡｂ１）は、Ｔ細胞増殖またはＩＦＮ－γ産生を増強しなかった。ＶＩＳＴＡ．４は、Ｔ細胞が。ＶＩＳＴＡを発現しない２９３Ｔ－ＯＫＴ３と同時培養された場合にも効果がなかった。
ＶＩＳＴＡは、Ｔ細胞受容体媒介性ＮＦ－ｋＢシグナル伝達を抑制した
この実施例は、ＶＩＳＴＡ機能に対するｐＨの効果をさらに評価するために実施し、ＶＩＳＴＡが、ｐＨ７．０を超えると中程度のレベルの活性が維持されたが、Ｔ細胞受容体媒介性ＮＦ－ｋＢシグナル伝達を、酸性ｐＨで、中性ｐＨよりも強力に抑制したことを示す（図２３）。最大抑制は、ＶＩＳＴＡ：Ｔ細胞結合と同様にｐＨ６．５未満で達した（図２３および図４Ａ）。
ＮＦ－ｋＢシグナル伝達を、ＮＦｋＢを報告するＪｕｒｋａｔＴ細胞を使用して、本質的に実施例５および１３に記載されるとおりに測定した。Ｊｕｒｋａｔ細胞を、ＮＦ－ｋＢ－誘導プロモーターの制御下でルシフェラーゼを発現するように操作した。これらのＪｕｒｋａｔ ＮＦｋＢ－ルシフェラーゼレポーター細胞を、ＭＥＳを用いて種々のｐＨに酸性化したＨＢＳＳ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）中で４：１の比の非照射２９３Ｔ－ＯＫＴ３－ＶＩＳＴＡ細胞およびヒト抗ヒトＶＩＳＴＡ抗体と４時間同時培養した。Ｊｕｒｋａｔ細胞活性化は、ルシフェラーゼ基質アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）によって測定した。
同様に、プレートコーティングされた組換えＶＩＳＴＡは、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞ＮＦｋＢリン酸化を、ｐＨ７．０未満で最も効率的に抑制した（図２３ＣおよびＤ）。これらの実験のために、組織培養処置された９６ウェル平底プレートを、ＯＫＴ３（０．５μｇ／ｍＬ）と、ヒトＶＩＳＴＡ－Ｆｃ（Ｆｃドメインに連結された、配列番号１のアミノ酸３３～１９４を含むｈＶＩＳＴＡ細胞外ドメインを含む）またはアイソタイプ対応対照抗体（５．０μｇ／ｍＬ）のいずれかを用い、ＰＢＳ中、３７℃でおよそ２時間コーティングした。次いで、ウェルをＰＢＳを用いて洗浄し、５．０μｇ／ｍＬに希釈したヒト抗ヒトＶＩＳＴＡまたは非ＶＩＳＴＡ結合対照抗体とともに、ＭＥＳを用いて種々のｐＨに酸性化したＨＢＳＳ中で３０分間プレインキュベートした。Ｔ細胞を、同一ＨＢＳＳ＋ＭＥＳバッファーに懸濁し、ウェルに添加し、遠心分離し、３７℃で１５分間培養した。次いで、細胞を固定化し（Ｃｙｔｏｆｉｘバッファー、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、透過処理し（Ｐｈｏｓｆｌｏｗ透過処理バッファーＩＩＩ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、抗ｐＮＦｋＢ Ｓ５２９（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて染色し、その後、抗ｍＩｇＧ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）をフローサイトメーターで獲得した。ＮＦｋＢリン酸化は、ＯＫＴ３およびアイソタイプ対応対照を用いてコーティングされ、可溶性非結合アイソタイプ対応対照抗体とともにプレインキュベートされたウェル中のｐＨ７．４で刺激された細胞のｐＮＦｋＢ ＭＦＩのパーセンテージとして算出した。
これらの結果は、ＶＩＳＴＡは、酸性ｐＨで、中性ｐＨよりも強力であることおよびその機能は、酸性ｐＨでＴ細胞とのＶＩＳＴＡ結合を遮断する同抗体によって逆転されることを示す。したがって、これらのデータおよび実施例２０のものは、ＶＩＳＴＡの酸性ｐＨ選択的受容体－リガンド界面の遮断は、免疫抑制を逆転し得ることを示唆する。
抗ＶＩＳＴＡ抗体および抗ＰＤ－１抗体は、腫瘍拒絶を誘発するように相乗的に作用する
腫瘍における遮断ＶＩＳＴＡの酸性ｐＨ選択的リガンド界面の効果を特性決定するために、マウスサロゲート抗体、酸性ｐＨでマウスＴ細胞とのマウスＶＩＳＴＡ結合を遮断するＶＩＳＴＡ．１０を生成した（ＶＩＳＴＡ．１０はまた、生理学的ｐＨでもｍＶＩＳＴＡと結合する）。抗マウスＶＩＳＴＡ抗体は、組換えマウスＶＩＳＴＡを用いて免疫処置されたＶＩＳＴＡノックアウトマウスにおいて産生された。免疫処置マウスから得た脾細胞を、Ｓｐ２／０骨髄腫細胞株と融合した。ハイブリドーマ上清を、ＥＬＩＳＡによって組換えマウスＶＩＳＴＡとの反応性について、フローサイトメトリーによって細胞表面マウスＶＩＳＴＡとの反応性についてスクリーニングした。ＶＩＳＴＡ．１０を選択し、ａｎｄ、ｔｏ ａｖｏｉｄ Ｆｃ受容体会合および任意のその後のエフェクター機能を避けるために、ＶＩＳＴＡ．１０を、Ｆｃ受容体会合およびエフェクター機能を避けるための点突然変異、Ｄ２６５Ａを用いてＩｇＧ１アイソタイプに変換した（Clynes et al. (2000) Nat Med 6, 443-446）。マウスにＭＣ３８腫瘍を皮下移植し、腫瘍が約７０ｍｍ２に到達した時点で、マウスに以下の処置を３日毎に施した：群１：４用量の、３０ｍｐｋの抗ＫＬＨ ｍＩｇＧ１－Ｄ２６５Ａ；群２：２用量の、５ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ－１ ｍＩｇＧ１－Ｄ２６５Ａ；群３：４用量の、３０ｍｇ／ｋｇの抗ＶＩＳＴＡｍＩｇＧ１－Ｄ２６５Ａ；および群４：ｎｔｉ－ＰＤ－１＋抗ＶＩＳＴＡ組合せ。ＶＩＳＴＡ．１０およびＰＤ－１遮断抗体の組合せ処置は、ＭＣ３８結腸直腸腺癌腫瘍を移植されたマウスのおよそ７０％において腫瘍拒絶を誘発した（図２４Ａ～ＤおよびＧ～Ｈ）。単一物質として抗ＰＤ－１またはＶＩＳＴＡ．１０を用いる処置は、腫瘍進行をわずかに遅延させたが、防がなかった（図２４ＨＢ、Ｃ、ＧおよびＨ）。
これらの結果と一致して、ＶＩＳＴＡ．１０および抗ＰＤ－１療法を用いて７日間処置されたマウスから得た腫瘍のｅｘ ｖｉｖｏ分析は、対照マウスと比較して、腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋Ｔ細胞の５～１０倍の増大を有していた（図２４Ｅ～Ｆ）。併用療法はまた、腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞でのＰＤ－１、ＬＡＧ－３およびＴＩＭ－３、すべてＴ細胞消耗および機能不全（Ｔ細胞機能不全と関連する阻害性受容体）のマーカーの著しく低い発現ももたらした（図２５Ａ～Ｃ）。有効性データと一致して、ＰＤ－１またはＶＩＳＴＡ抗体単独を用いる処置は、Ｔ細胞頻度および表現型に対してより小さい効果を有していた（図２４Ａ～Ｆ）。マクロファージ、単球（例えば、単球性骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ））および顆粒球（例えば、顆粒球性ＭＤＳＣ）のものを含む腫瘍内骨髄系細胞サブセット頻度は、ＶＩＳＴＡ抗体処置によってほとんど影響を受けなかった。
ＶＩＳＴＡ抗体活性を状況にあてはめるために、ＶＩＳＴＡノックアウトマウスにＭＣ３８腫瘍を移植し、ＰＤ－１遮断または対照抗体を用いて処置した。図２４Ｉに示されるように、対照処置群では、ＭＣ３８腫瘍は、ＶＩＳＴＡノックアウトマウスおよびその野生型同腹仔において同じ程度に成長した。ＶＩＳＴＡノックアウトマウスは、ＶＩＳＴＡおよびＰＤ－１組合せの有効性を彷彿とさせる、抗ＰＤ－１に対する応答性の増大を示した。この応答性は、やはり腫瘍内ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の増大と相関していた。これらのデータは、ＶＩＳＴＡ結合を酸性ｐＨで遮断する抗体は、ＶＩＳＴＡ媒介性免疫抑制を逆転させ、ＶＩＳＴＡノックアウトマウスを模写し得ることを示す。
ＶＩＳＴＡは、インビトロで酸性ｐＨでＴ細胞と優先的に結合し、抑制するので、本発明者らは、抗腫瘍応答のＶＩＳＴＡ媒介性抑制は、腫瘍微小環境内で主に生じると仮定した。本発明者らは、内因性ＶＩＳＴＡ細胞外ドメインの代わりにヒトＶＩＳＴＡ細胞外ドメインを発現するトランスジェニックマウス（ヒトＶＩＳＴＡノックインマウス、ｇｅｎＯｗａｙ）において、酸性ｐＨ選択的ヒトＶＩＳＴＡ遮断抗体Ｐ１－０６８７６７（‘７６７）およびその非ｐＨ選択的親抗体Ｐ１－０６１０２９（‘０２９）を使用してこの仮説を試験した。ＭＣ３８腫瘍を移植したヒトＶＩＳＴＡノックインマウスでは、抗ＰＤ－１単独を用いる処置は、マウスの１３％において腫瘍拒絶を誘発し、マウスのおよそ２０％において腫瘍進行を遅延させた（図２４Ｊ～Ｍ）。‘０２９または‘７６７単独を用いる処置は、治療的利益をほとんど有さなかった（図２４ＮおよびＯ）。抗ＰＤ－１、‘０２９処置を用いる組合せは、腫瘍拒絶の割合を５０％に増大した（図２４Ｊ～Ｍ）。際立ったことに、‘７６７組合せ処置有効性は、‘０２９のものとほぼ同一であった（５６％の拒絶率、図２４Ｊ～Ｍ）。これらの結果は、ＶＩＳＴＡの免疫抑制活性は、血液または他の非酸性組織においてではなく、酸性腫瘍微小環境において主に生じるということを示唆する。
ヒトＶＩＳＴＡノックインマウスにおいてＰ１－０６８７６７（酸性ｐＨ選択的）およびＰ１－０６１０２９（非ｐＨ選択的）の半減期を測定した。野生型マウスでは、血液およびリンパ球臓器における骨髄系細胞での高ＶＩＳＴＡ発現が、ＶＩＳＴＡ抗体に標的媒介性薬物動態（ＴＭＤＤ）の影響を受けさせ、血清平均滞留時間を短縮させた（ＭＲＴ図２４Ｒ）。同様に、‘０２９は、ヒトＶＩＳＴＡノックインマウスにおいて短いＭＲＴを有していた（４．１時間、図２４Ｎ）。図２４Ｎに示されるように、Ｐ１－０６８７６７は、Ｐ１－０６１０２９が示したものよりもほぼ２０倍長い平均滞留時間（ＭＲＴ）を示し、これは、ｐＨ７．４（例えば、循環血液中）でのＶＩＳＴＡとの弱い結合および結果として、低減されたＴＭＤＤを示す（それぞれ、７１時間および４．１時間）。
非トランスジェニックモデルにおいて末梢ＶＩＳＴＡの抗体会合を評価するために、本発明者らは、カニクイザルを、Ｐ１－０６８７６７および中性ｐＨを好む抗体ＶＩＳＴＡ．４を用いて以下のとおりに処置した。５ｍｇ／ｋｇの用量でのタンパク質ナイーブなカニクイザルへの静脈内注入の１０分後にＶＩＳＴＡ．４およびＰ１－０６８７６７を評価した（抗体あたりｎ＝１）。組換えＶＩＳＴＡを捕捉物質として、および抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ ｍＡｂを検出物質として使用するリガンド結合アッセイを使用する抗体濃度分析のために、注入後０．１７、０．５、２、４、６、２４、４８、７２、１６８、２１６、２４０、３３６時間で連続血液サンプルを集めた。その後、血清サンプルを得た。アッセイの定量化の下限は、１ｎｇ／ｍＬとした。平均滞留時間は、Ｋｉｎｅｔｉｃａソフトウェア（バージョン５．０、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用する血清ｍＡｂ濃度－時間データの非コンパートメント分析によって推定した。結果は、Ｐ１－０６８７６７が、やはり、かなり長いＭＲＴを示したことを示す（それぞれ、７１７時間および７．６時間、図２４Ｏ）。これらのデータは、‘７６７は、インビボでその酸性ｐＨ選択性保持しているということを示す。これらの結果は、ＶＩＳＴＡが、血液および非酸性組織においてではなく腫瘍微小環境において遮断し、を抗腫瘍効力駆動することを示唆する。
ＶＩＳＴＡ．４は、ＰＳＧＬ－１とのＶＩＳＴＡ結合を阻害する
免疫受容体Ｐ－セレクチン糖タンパク質リガンド－１（ＰＳＧＬ－１）は、ＶＩＳＴＡリガンドとしてこれまでに同定された（ＷＯ２０１８１３２４７６を参照のこと）。ＰＳＧＬ－１は、セレクチン、特に、Ｐ－セレクチンの受容体であり、その一次リガンド、Ｐ－セレクチンとの結合は、白血球、血小板および内皮細胞間の接着相互作用の十分に特性決定された促進役である（Carlow, D.A., et al., PSGL-1 function in immunity and steady state homeostasis. Immunol Rev, 2009. 230(1): p. 75-96およびAbadier, M. and K. Ley, P-selectin glycoprotein ligand-1 in T cells. Curr Opin Hematol, 2017. 24(3): p. 265-273. 18）。ＰＳＧＬ－１はまた、慢性ウイルス感染症、癌腫瘍免疫および一部の自己免疫疾患の状況におけるＴ細胞応答の負のレギュレーターとしても同定されている（Angiari, S., et al., Regulatory T cells suppress the late phase of the immune response in lymph nodes through P-selectin glycoprotein ligand-1. J Immunol, 2013. 191(11): p. 5489-500、Matsumoto, M., M. Miyasaka, and T. Hirata, P-selectin glycoprotein ligand-1 negatively regulates T-cell immune responses. J Immunol, 2009. 183(11): p. 7204-11、Nunez-Andrade, N., et al., P-selectin glycoprotein ligand-1 modulates immune inflammatory responses in the enteric lamina propria. J Pathol, 2011. 224(2): p. 212-21、Perez-Frias, A., et al., Development of an autoimmune syndrome affecting the skin and internal organs in P-selectin glycoprotein ligand 1 leukocyte receptor-deficient mice. Arthritis Rheumatol, 2014. 66(11): p. 3178-89、Tinoco, R., et al., PSGL-1 Is an Immune Checkpoint Regulator that Promotes T Cell Exhaustion. Immunity, 2016. 44(5): p. 1190-203）。この免疫抑制機能は、既知ＰＳＧＬ－１リガンドとは独立していると思われる（Tinoco, R., et al., PSGL-1: A New Player in the Immune Checkpoint Landscape. Trends Immunol, 2017. 38(5): p. 323-335）。
細胞ベースのアッセイにおいて、組換えＰＳＧＬ－１および組換えＰ－セレクチンは、活性化ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞とのＶＩＳＴＡ多量体結合を両方とも遮断可能であるとわかった。ＣＲＩＳＰＲによる活性化されたＣＤ４＋Ｔ細胞からのＰＳＧＬ－１の欠失はまた、ＶＩＳＴＡ多量体結合も取り除いた。さらに、ＰＳＧＬ－１の異所発現は、酸性ｐＨでのＣＨＯ細胞とのＶＩＳＴＡ結合を可能にするのに十分であるとわかり、ＶＩＳＴＡ発現は、酸性ｐＨでの２９３Ｔ細胞とのＰＳＧＬ－１結合を可能にするのに十分であった。さらに、等温滴定熱量測定法（ＩＴＣ）によって、ｈＰＳＧＬ１およびｈＶＩＳＴＡ相互作用が確認され、相互作用はｐＨ６．０で生じるが、ｐＨ７．４では著しくはないということが確認された。ＩＴＣはまた、ＰＳＧＬ１－ＦｃのＶＩＳＴＡ－Ｆｃとの化学量論は、１：１に近いことおよびｐＨ６．０でのＫＤは、高ｎＭ範囲にある（０．６５μＭおよび０．８５μＭでの２つの測定値）ことを示した。３７℃で、２５℃と比較しておよそ４倍弱い結合が観察された。ＶＩＳＴＡ－Ｆｃの代わりにＶＩＳＴＡ－Ｈｉｓを使用した場合には、２．７３μＭのＫＤが観察され、これは、おそらくはＨｉｓタグを有するＶＩＳＴＡの結合力の欠如のために、ＶＩＳＴＡ－Ｆｃを用いた場合よりも約４倍弱い。
この実施例はまた、ＰＳＧＬ－１が、Ｐ－セレクチンと、酸性および生理学的ｐＨで同じ程度に結合したが、ＶＩＳＴＡとは酸性ｐＨでのみ結合したということを示す（図２６Ａ）。実験は、ＶＩＳＴＡ、Ｐ－セレクチンおよび高親和性Ｐ－セレクチン結合を支持するとこれまでに示された最小ＰＳＧＬ－１グリコペプチド（スルホチロシンおよびシアリルルイス（ｓｉａｙｌ ｌｅｗｉｓ）Ｘ炭水化物翻訳後修飾の両方を有するアミノ酸１～１９）を用いて、Ｏｃｔｅｔバイオセンサーアッセイを使用して実施した（Sako, D., et al., A sulfated peptide segment at the amino terminus of PSGL-1 is critical for P-selectin binding. Cell, 1995. 83(2): p. 323-319）。
ＰＳＧＬ－１のリガンド界面は、高親和性でＰ－セレクチンと結合するための、負電荷を有するスルホチロシンおよびシアリルルイス（ｓｉａｙｌ ｌｅｗｉｓ）Ｘ翻訳後修飾に応じて変わり（Sako et al. 1995 Cell 83(2): p. 323-319）、非シアリルルイス（ｓｉａｙｌ ｌｅｗｉｓ）Ｘ装飾ＰＳＧＬ－１を発現するナイーブＴ細胞は、結果的に、Ｐ－セレクチンと効率的に会合できない。シアリルルイス（ｓｉａｙｌ ｌｅｗｉｓ）Ｘ装飾ＰＳＧＬ－１は、循環単球および好中球上で構成的に発現され、活性化Ｔ細胞上で誘導によって発現され、酸性ｐＨでのこれらの細胞種との強力なＶＩＳＴＡ結合と一致する。しかし、ＶＩＳＴＡは、ナイーブおよび活性化Ｔ細胞の両方と結合するとわかり、これは、ＶＩＳＴＡは、Ｐ－セレクチンとは異なり、シアリルルイス（ｓｉａｙｌ ｌｅｗｉｓ）Ｘとは独立にＰＳＧＬ－１と結合するということを示唆する。追加のＯｃｔｅｔバイオセンサーアッセイにおいて、ＶＩＳＴＡおよびＰ－セレクチンは両方とも、シアリルルイス（ｓｉａｙｌ ｌｅｗｉｓ）Ｘ装飾を有するＰＳＧＬ－１グリコペプチドと優先的に結合するが、ｏｎｌｙ ＶＩＳＴＡのみは、シアリルルイス（ｓｉａｙｌ ｌｅｗｉｓ）Ｘを有さないＰＳＧＬ－１グリコペプチドと結合することを見出した。さらに、酵素グルコサミニル（Ｎ－アセチル）トランスフェラーゼ（ＧＣＮＴ１）およびアルファ（１，３）－フコシルトランスフェラーゼ－７酵素（ＦＵＴ７）を発現しない細胞において産生されたＰＳＧＬ－１は、シアリルルイスＸ装飾を欠き、Ｐ－セレクチンと不十分にしか結合しなかった（図２９Ａ）。対照的に、ＶＩＳＴＡは、シアリルルイスＸとは独立にＰＳＧＬ－１と結合した（図２９Ａ）。この結果は、Ｐ－セレクチンではなく、シアリルルイスＸを欠くナイーブＴ細胞と結合するＶＩＳＴＡと一致する。
また、Ｐ－セレクチンと同様に、ＶＩＳＴＡは、酸性ｐＨでヘパラン硫酸と中程度に結合した。
さらに、Ｐ－セレクチン結合を遮断するＰＳＧＬ－１抗体は、ＶＩＳＴＡ結合を遮断できなかった。これらのデータは、ＶＩＳＴＡは、Ｐ－セレクチンによって結合されるものと同様であるが、別個のＰＳＧＬ－１界面と結合することを示す。
この実施例は、Ｔ細胞とのＶＩＳＴＡ結合を遮断する抗体Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７６１、Ｐ１－０６８７６７およびＶＩＳＴＡ．４はまた、ＰＳＧＬ－１グリコペプチドとのＶＩＳＴＡ結合も遮断したことをさらに示す。競合Ｏｃｔｅｔアッセイを実施して、酸性ｐＨ選択的α－ＶＩＳＴＡ抗体Ｐ１－０６８７６１およびＰ１－０６８７６７、Ｐ１－０６１０２９ ｐＨ独立性親および酸性ｐＨ感受性ＶＩＳＴＡ．４が、ＰＳＧＬ１とのＶＩＳＴＡ結合を遮断したか否かを評価した。結合アッセイは、ＯｃｔｅｔＲｅｄ３８４バイオレイヤーインターフェロメトリー（ＢＬＩ）機器（ＰＡＬＬ／ＦｏｒｔｅＢｉｏ）で実施した。すべてのアッセイステップは、３０℃で、１０００ｒｐｍ振盪速度で実施し、使用したバッファーは、ＰＢＳＴ、ｐＨ６．０（１３７ｍＭ塩化ナトリウム、２．７ｍＭ塩化カリウム、１０ｍＭリン酸バッファー、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０）であった。ヒトＶＩＳＴＡ－Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ番号７１２６－Ｂ７）を、ＰＢＳＴ ｐＨ６．０で４００ｎＭに希釈し、０ｎＭ、４０ｎＭおよび４００ｎＭ力価測定シリーズのＰ１－０６８７６１、Ｐ１－０６８７６７、Ｐ１－０６１０２９およびＶＩＳＴＡ．４と３０分間予混合した。ヒトＦｃに融合された成熟ＰＳＧＬ１のアミノ末端１９アミノ酸からなるヒトＰＳＧＬ１ １９マーｈｕＦｃタンパク質を、抗ヒトＩｇＧ－Ｆｃセンサー（ＡＨＣ、ＰＡＬＬ／ＦｏｒｔｅＢｉｏ）上に捕捉した。次いで、抗ヒト捕捉センサーを、総ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ番号００９－０００－００２）を用いて遮断した。次いで、ＶＩＳＴＡ－Ｆｃ／α－ＶＩＳＴＡ抗体混合物との、捕捉されたＰＳＧＬ１の結合を測定して、α－ＶＩＳＴＡ抗体が、ＶＩＳＴＡがＰＳＧＬ１と結合するのを防いだか否かを評価した。各抗体力価測定シリーズについて、ＰＳＧＬ１とのＶＩＳＴＡ結合（ｎｍシフト）の規模は、１００％に設定された０ｎＭの非遮断ＶＩＳＴＡ：ＰＳＧＬ１応答に対して正規化された。このアッセイからの結果は、図２６Ｂにまとめられている。このアッセイでは、４００ｎＭ濃度のＰ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７６１、Ｐ１－０６８７６７およびＶＩＳＴＡ．４はすべて、遮断活性を実証した。観察された低減されたＶＩＳＴＡ結合によって示されたように、ＶＩＳＴＡ－Ｆｃタンパク質は、捕捉されたヒトＰＳＧＬ１－１９マーｈｕＦｃタンパク質と結合するのを妨げられた。
さらに、ＣＨＯ－ＰＳＧＬ－１細胞とのＶＩＳＴＡ結合は、ＶＩＳＴＡ．４およびＰ－セレクチン遮断ＰＳＧＬ－１抗体ＫＰＬ－１の両方によって遮断されたことが実証された（図２６Ｃ）。ＰＳＧＬ－１抗体遮断アッセイでは、細胞を、ＫＰＬ－１（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｒ Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）またはＰＬ２（ＭＢＬ）とともにプレインキュベートし、その後、３２ｎＭ負荷ＶＩＳＴＡ多量体またはＶＩＳＴＡ－Ｆｃキメラタンパク質を用いて標識した。ＶＩＳＴＡ－Ｆｃ結合は、抗ＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）または抗６×ｈｉｓ（Ｃｏｌｕｍｂｉａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）抗体によって検出した。細胞は、フローサイトメトリーまたは均一な時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）によって獲得した。
ｈＶＩＳＴＡと結合している‘７６７の結晶構造
ＶＩＳＴＡの構造およびＶＩＳＴＡ抗体結合の分子決定基を特性決定するために、ｈＶＩＳＴＡ ＩｇＶドメインとＰ１－０６８７６７断片抗原結合（Ｆａｂ）の共結晶を作製した。得られた複合体の構造を、１．６Å解像度で調べた（図２７Ａ～Ｄ）。ＶＩＳＴＡ ＩｇＶドメインは、全般的にそのファミリーに特有であり、ＰＤ－Ｌ１に対して幾分かの類似点を有する（図２４Ｂ）。しかし、ＰＤ－Ｌ１およびほとんどの他のＢ７ファミリーまたは免疫グロブリンスーパーファミリーメンバーとは異なり、ＶＩＳＴＡ ＩｇＶドメインの２つのＣ末端β鎖は、複数のさらなる残基を含有し、その結果、普通ではなく伸長された、ヒスチジンが豊富な中央βシートが生じた（図２７Ｂ）。Ｐ１－０６８７６７、遮断抗体は、このβシート伸長でＶＩＳＴＡと結合し（図２７Ｃ）、一方で、非遮断抗体ＶＩＳＴＡ．５は、異なる領域と結合する（図２７Ｅ）。ＶＩＳＴＡのβシート伸長は、β鎖と接続しているループによってキャップされており、このループは、３個のヒスチジン残基：Ｈ１２１、Ｈ１２２およびＨ１２３を含む。遮断抗体‘７６７は、この領域と結合し、一方で、非遮断抗体ＶＩＳＴＡ．５は、ＩｇＶドメインの異なる領域と結合する（それぞれ、図２７ＣおよびＥ）。Ｐ１－０６８７６７重鎖残基Ｅ１１０およびＤ１１２（図２７ＤにおいてＥ１００およびＤ１０２として示される）は、それぞれ、ＶＩＳＴＡ残基Ｈ１２１およびＨ１２２と水素結合を形成する（図２７Ｄ）。これらの相互作用は、抗体に酸性ｐＨ選択性を付与するために、Ｐ１－０６８７６７残基Ｅ１１０およびＤ１１２が必要であり、十分であるという、これまでの実施例において記載された知見と十分に適合する。ＶＩＳＴＡ Ｈ１２３が、硫酸塩の不在下でＰ１－０６８７６７と本物の水素結合を形成し得ることもあり得るが、共結晶では、ＶＩＳＴＡ残基Ｈ１２３は、沈殿剤に由来する硫酸塩分子と相互作用し、Ｐ１－０６８７６７残基Ｅ１と塩橋を形成する（図２７Ｄ）。さらなる相互作用が表３２に提供されている。これらのデータは、ＶＩＳＴＡ ＩｇＶドメインの普通ではない、ヒスチジンが豊富なβシート伸長が、ＶＩＳＴＡの酸性ｐＨ選択的受容体－リガンド界面の重要な成分であるということを示唆する。特に残基Ｈ１５３、Ｈ１５４およびＨ１５５（成熟ｈＶＩＳＴＡ中の、それぞれ、Ｈ１２１、Ｈ１２２およびＨ１２３）でのヒスチジンプロトン化は、その対抗受容体とのｐＨ選択的ＶＩＳＴＡ結合を駆動し得る。
表３２は、ＶＩＳＴＡ原子の４Å内の‘７６７ Ｆａｂ ＨＣ原子間のオングストローム（Å）での距離を詳述する。
Figure 2022513421000041
 結晶学に関するさらなる特徴は、以下の表３３に提供されている。
Figure 2022513421000042
ＶＩＳＴＡ：ＰＳＧＬ－１結合特異性は、ヒスチジンおよびスルホチロシン残基によって決定される
ＰＳＧＬ－１結合特異性を特性決定するために、本発明者らは、シアリルルイスＸによって提供されるもの（実施例２３に記載される）に加えて、Ｐ－セレクチン結合に貢献するチロシン硫酸化翻訳後修飾を調べた。チロシン硫酸化の役割を試験するために、ＰＳＧＬ－１グリコペプチドを、陰イオン交換液体クロマトグラフィーによって、スルホチロシンが豊富な（＞９０％）およびスルホチロシンが乏しい（＜１％）ピークに分画した。ＶＩＳＴＡもＰ－セレクチンも、スルホチロシンが乏しいＰＳＧＬ－１と検出可能に結合しなかった（図２８ＢおよびＩ）。ＶＩＳＴＡはまた、チロシンがアラニンで置換されたＰＳＧＬ－１グリコペプチドと結合できなかった（図２８Ｊ）。これらの結果は、スルホチロシン残基が、ＶＩＳＴＡとのＰＳＧＬ－１結合の重要なメディエーターであることを示す。
本発明者らは、ＶＩＳＴＡ結合特異性が、ＶＩＳＴＡ遮断抗体エピトープ内で見出された同一ヒスチジン残基によって媒介されることを仮定した：Ｈ１５３、Ｈ１５４およびＨ１５５（シグナル配列を有するｈＶＩＳＴＡにおいて番号付けされ、成熟ヒトＶＩＴＡ中の、それぞれＨ１２１、Ｈ１２２およびＨ１２３に対応する；実施例２４を参照のこと）。これらのヒスチジン残基の、負電荷を有するアスパラギン酸での置き換え（Ｈ２Ｄ）は、組換えＰＳＧＬ－１およびＣＨＯ－ＰＳＧＬ－１細胞とのＶＩＳＴＡ結合を著しく低減した（図２９Ｃ～Ｄ）。対照的に、正電荷を有するアルギニン（Ｈ２Ｒ）残基での置き換えは（正電荷を有する側鎖は、プロトン化ヒスチジンのものを模倣する）、ＶＩＳＴＡ結合および機能を酸性ｐＨで未変化のままにしたが、ｐＨ７．４では結合を付与しなかった（図２８Ｃ～ＤおよびＦ）。電荷のないアラニンでの置き換え（Ｈ２Ａ）は、中間の効果を有していた（図８－Ｄ）。機能試験は、これらの結合データを再現した；Ｈ２Ｒ突然変異体ＶＩＳＴＡは、酸性ｐＨでＴ細胞活性化を、野生型ＶＩＳＴＡが行ったものと同程度に強力に抑制したが、一方で、Ｈ２Ｄ突然変異体ＶＩＳＴＡは、ほとんど効果がなかった（図２８Ｆ）。ＶＩＳＴＡ遮断および非遮断抗体は、野生型およびすべての突然変異体ＶＩＳＴＡタンパク質と同じ程度に結合した（図２８ＧおよびＨ）。これらの結果は、それぞれ、ＶＩＳＴＡ残基Ｈ１５３、Ｈ１５４、Ｈ１５５および潜在的に他のヒスチジンのプロトン化が、ＰＳＧＬ－１結合にとって必要であるということを示唆する。
Ｈ１５３、Ｈ１５４およびＨ１５５残基がアラニン、アスパラギン酸またはアルギニンに突然変異されたＶＩＳＴＡ－Ｆｃタンパク質を、Ｅｘｐｉ２９３細胞の一過性のトランスフェクションによって製造した。
次いで、本発明者らは、Ｐ－セレクチンに結合されたＰＳＧＬ－１およびＰ１－０６８７６７ Ｆａｂに結合されたＶＩＳＴＡの解明された構造を使用して（Somers, W. S., Tang, J., Shaw, G. D. & Camphausen, R. T. Cell 103, 467-479 (2000）（図２７）、ＶＩＳＴＡにドッキングされたＰＳＧＬ－１ １９マーグリコペプチドのコンピュータによるモデルを開発した（図２８ＥおよびＫ）。このモデルでは、硫酸化ＰＳＧＬ－１チロシン残基Ｙ４６およびＹ４８は、ＶＩＳＴＡヒスチジン残基Ｈ１５３およびＨ１５４とイオン性相互作用する（２．５～３．０Å距離）。ＰＳＧＬ－１ Ｅ５６および硫酸化Ｙ５１残基は、ＶＩＳＴＡからより大きい距離にあるが、ＶＩＳＴＡ残基９９～１１０に広がる可動性のヒスチジンが豊富なループと相互作用し得る。ＰＳＧＬ－１ Ｙ５１は、ＶＩＳＴＡからより大きい距離にある（約４．５Å）が、ＶＩＳＴＡ Ｈ１００と有意義に相互作用し得る。ＰＳＧＬ－１ Ｅ５６はまた、ＶＩＳＴＡ Ｈ９８およびＨ１００とのイオン性相互作用を形成する。シアリルルイスＸで装飾され得るＰＳＧＬ－１ Ｔ５７のヒドロキシル基は、ＶＩＳＴＡから離れて向いており、ＶＩＳＴＡ：ＰＳＧＬ－１結合に対するシアリルルイスＸの無視できる影響と一致する。総合すると、これらのデータおよびモデリングは、酸性ｐＨでのＰＳＧＬ－１とのＶＩＳＴＡ結合は、ＶＩＳＴＡヒスチジン残基Ｈ１５３、Ｈ１５４およびＨ１５５によって、およびＰＳＧＬ－１硫酸化チロシン（スルホチロシン）残基Ｙ４６およびＹ４８によって主に駆動されることを示唆する。これらの結果は、プロトン化ＶＩＳＴＡヒスチジン残基および硫酸化ＰＳＧＬ－１チロシン残基が、結合を駆動することを示唆する。
ＶＩＳＴＡは、Ｖセット免疫グロブリンドメイン含有３（ＶＳＩＧ－３）、脳、精巣および一部のがん組織において発現される表面受容体と結合すると最近報告された（Wang, J. et al. VSIG-3 as a ligand of VISTA inhibits human T-cell function. Immunology 156, 74-85 (2019)）。この報告と一致して、本発明者らは、組換えＶＳＩＧ－３と結合する組換えＶＩＳＴＡを観察した。ＶＩＳＴＡ：ＶＳＩＧ－３結合は、酸性ｐＨで中程度に増強された。しかし、組換えＶＳＩＧ－３は、ＶＩＳＴＡ発現細胞と特異的に結合することはなく、組換えＶＩＳＴＡは、ＶＳＩＧ－３発現細胞と特異的に結合しなかった。ＶＳＩＧ３はまた、ＶＩＳＴＡとの結合についてＰＳＧＬ－１と競合できなかった。これらのデータは、ＶＳＩＧ－３がＶＩＳＴＡ：ＰＳＧＬ－１媒介性Ｔ細胞結合を損なう可能性が低いことを示唆する。
ＶＳＩＧ－３結合アッセイでは、ＣＨＯおよびＨＥＫ２９３細胞を、それぞれヒトＶＳＩＧ－３およびＶＩＳＴＡを異所性に発現するように操作した。ＶＳＩＧ－３発現は、抗ＶＳＩＧ－３（ｐＡｂ ＡＦ４９１５、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用するフローサイトメトリーによって確認した。ＶＩＳＴＡ発現は、抗ＶＩＳＴＡ（クローン７４０８０４、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用するフローサイトメトリーによって確認した。細胞結合アッセイは、Ｎａ２ＨＰＯ４およびＫＨ２ＰＯ４の比を変えることによって示されたｐＨに調整された、０．９ｍＭ ＣａＣｌ２、０．０５ｍＭ ＭｇＣｌ２および０．５％ ＢＳＡを含有するＰＢＳバッファー中で実施した。ＶＩＳＴＡ－ＦｃおよびＶＳＩＧ－３－Ｆｃは、１０μｇ／ｍＬで使用した。結合は、抗ヒトＩｇＧ Ｆａｂ’２ ＰＥ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて検出した。
ＶＩＳＴＡはまた、同型結合で会合すると報告された（Yoon, K. W. et al. Control of signaling-mediated clearance of apoptotic cells by the tumor suppressor p53. Science 349, 1261669 (2015)）が、本発明者らは、酸性または中性ｐＨでこの相互作用を検出できなかった。
ＰＳＧＬ１およびＶＩＳＴＡ抗体との結合におけるＶＩＳＴＡのＨ９８およびＨ１００の潜在的な役割をさらに調査するために、Ｈ９８およびＨ１００でのヒスチジンのアラニン、アルギニンおよびアスパラギン酸への突然変異の影響を、個別におよびｈＶＩＳＴＡＦｃ（ヒトＦｃ）中のＨ１５３、Ｈ１５４およびＨ１５５突然変異と組み合わせて調べた。これらのＦｃ融合物サンプルは、ｐＨ６または７．４バッファー中の約２５０ｎＭに対して正規化された、一過性にトランスフェクトされたＥｘｐｉ２９３細胞において産生された。図２９において示される結合反応は、参照（遮断されたセンサー）が差し引かれており、５００ｎＭ ｈｕＰＳＧＬ１または２５０ｎＭの各々示された抗体に対する反応である。
図２９において示されるデータは、結合におけるｈＶＩＳＴＡのＨ９８／Ｈ１００をＰＳＧＬ１と関連付け、（上記の酵母表面ディスプレイアッセイに基づいて予測されるように）酸性選択的抗体Ｐ１－０６８７６１（‘７６１）およびＰ１－０６８７６７（‘７６７）の結合においても重要である。前のデータと一致して、ＶＩＳＴＡ．５およびＰ１－０６１０２９は、すべての突然変異体と結合した。Ｈ１５３Ｒ／Ｈ１５４／Ｈ１５５Ｒ突然変異体と同様に、Ｈ９８Ｒ／Ｈ１００Ｒ突然変異体は、５重突然変異体組合せが保持していたように、ＰＳＧＬ１結合を保持していた。したがって、このデータによって、ＰＳＧＬ１との、ならびにｐＨ選択的抗体‘７６１および‘７６７との結合の媒介におけるｈＶＩＳＴＡ中のヒスチジン残基９８および１００の役割がさらに確認される。
配列表
以下は、本出願において言及されるある特定の配列の表である。配列番号２では、アミノ酸位置１８７は、ＤまたはＥのいずれかであり得る。
以下の抗体配列では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列は、それぞれアミノ酸２６～３５、５０～６６および９９～１１０を含むアミノ酸位置に位置しており、ＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列は、それぞれアミノ酸２４～３５、５１～５７および９０～９８を含むアミノ酸位置に位置する。ＶＨ ＣＤＲ１は、ＡｂＭに従って番号付けされており（ＡＡ２６～３５；Abhinandan and Martin (2008) Mol. Immunol. 45:3832-3839、Swindells et al. (2017) J. Mol. Biol. 429:356-364）、すべての他のＣＤＲ（ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１－３）は、Ｋａｂａｔに従って番号付けされている。個々の抗体種のＣＤＲ配列は、そのＶＨおよびＶＬ配列で太字で下線が引かれている。
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Claims (171)

  1. 酸性条件でヒトＶＩＳＴＡ（ｈＶＩＳＴＡ）と特異的に結合する単離抗体。
  2. 酸性条件でｈＶＩＳＴＡに特異的に結合するが、中性または生理学的条件では著しく結合しない、請求項１に記載の単離抗体。
  3. 酸性条件で、中性または生理学的条件におけるそのＫＤよりも少なくとも１０倍低いＫＤでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１または２に記載の単離抗体。
  4. 酸性条件で、中性または生理学的条件におけるそのＫＤよりも少なくとも１００倍低いＫＤでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から３のいずれか一項に記載の単離抗体。
  5. 酸性条件で、中性または生理学的条件におけるそのＫＤよりも少なくとも１０００倍低いＫＤでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から４のいずれか一項に記載の単離抗体。
  6. 中性または生理学的条件で、１０－５Ｍ以上のＫＤでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から５のいずれか一項に記載の単離抗体。
  7. 中性または生理学的条件で、１０－４Ｍ以上のＫＤでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から６のいずれか一項に記載の単離抗体。
  8. 中性または生理学的条件で、１０－３Ｍ以上のＫＤでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から７のいずれか一項に記載の単離抗体。
  9. 酸性条件で、１０－７Ｍ以下のＫＤでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から８のいずれか一項に記載の単離抗体。
  10. 酸性条件で、１０－８Ｍ以下のＫＤでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から９のいずれか一項に記載の単離抗体。
  11. 酸性条件で、１０－９Ｍ以下のＫＤでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から１０のいずれか一項に記載の単離抗体。
  12. 酸性条件で、１０－７Ｍ以下のＫＤでｈＶＩＳＴＡと結合する、または中性または生理学的条件で１０－４以上のＫＤでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から１１のいずれか一項に記載の単離抗体。
  13. 酸性条件で、１０－７Ｍ以下のＫＤでｈＶＩＳＴＡと結合する、または中性または生理学的条件で１０－５以上のＫＤでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から１２のいずれか一項に記載の単離抗体。
  14. 酸性条件で、中性または生理学的条件におけるそのｋｏｆｆよりも少なくとも５倍低いｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から１３のいずれか一項に記載の単離抗体。
  15. 酸性条件で、中性または生理学的条件におけるそのｋｏｆｆよりも少なくとも１０倍低いｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から１４のいずれか一項に記載の単離抗体。
  16. 酸性条件で、中性または生理学的条件におけるそのｋｏｆｆよりも少なくとも５０倍低いｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から１５のいずれか一項に記載の単離抗体。
  17. 酸性条件で、中性または生理学的条件におけるそのｋｏｆｆよりも少なくとも１００倍低いｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から１６のいずれか一項に記載の単離抗体。
  18. 酸性条件で、７×１０－３ｓ－１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から１７のいずれか一項に記載の単離抗体。
  19. 酸性条件で、５×１０－３ｓ－１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から１８のいずれか一項に記載の単離抗体。
  20. 酸性条件で、３×１０－３ｓ－１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から１９のいずれか一項に記載の単離抗体。
  21. 酸性条件で、１０－３ｓ－１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から２０のいずれか一項に記載の単離抗体。
  22. 酸性条件で、７×１０－４ｓ－１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から２１のいずれか一項に記載の単離抗体。
  23. 酸性条件で、５×１０－４ｓ－１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から２２のいずれか一項に記載の単離抗体。
  24. 酸性条件で、３×１０－４ｓ－１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から２３のいずれか一項に記載の単離抗体。
  25. 酸性条件で、１０－４ｓ－１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から２４のいずれか一項に記載の単離抗体。
  26. 酸性条件で、７×１０－５ｓ－１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から２５のいずれか一項に記載の単離抗体。
  27. 酸性条件で、５×１０－５ｓ－１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から２６のいずれか一項に記載の単離抗体。
  28. 酸性条件で、３×１０－５ｓ－１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から２１のいずれか一項に記載の単離抗体。
  29. 酸性条件で、１０－５ｓ－１以下のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から２８のいずれか一項に記載の単離抗体。
  30. 中性または生理学的条件で、１０－３ｓ－１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から２９のいずれか一項に記載の単離抗体。
  31. 中性または生理学的条件で、３×１０－３ｓ－１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から３０のいずれか一項に記載の単離抗体。
  32. 中性または生理学的条件で、５×１０－３ｓ－１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から３１のいずれか一項に記載の単離抗体。
  33. 中性または生理学的条件で、７×１０－３ｓ－１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から３２のいずれか一項に記載の単離抗体。
  34. 中性または生理学的条件で、１０－２ｓ－１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から３３のいずれか一項に記載の単離抗体。
  35. 中性または生理学的条件で、３×１０－２ｓ－１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から３４のいずれか一項に記載の単離抗体。
  36. 中性または生理学的条件で、５×１０－２ｓ－１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から３５のいずれか一項に記載の単離抗体。
  37. 中性または生理学的条件で、７×１０－２ｓ－１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から３６のいずれか一項に記載の単離抗体。
  38. 中性または生理学的条件での抗体のｈＶＩＳＴＡとの結合が、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって検出可能ではない、請求項１から３７のいずれか一項に記載の単離抗体。
  39. 酸性条件で、５×１０－３ｓ－１以下のｋｏｆｆで、および中性または生理学的条件で、７×１０－３ｓ－１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から３８のいずれか一項に記載の単離抗体。
  40. 酸性条件で、１０－４ｓ－１以下のｋｏｆｆで、および中性または生理学的条件で、１０－２ｓ－１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から３９のいずれか一項に記載の単離抗体。
  41. 酸性条件で、１０－８Ｍ以下のＫＤおよび５×１０－３ｓ－１以下のｋｏｆｆで、ならびに中性または生理学的条件（ｎｅｕｔｒａｌ ｏｆ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ）で、１０－６Ｍ以上のＫＤおよび７×１０－３ｓ－１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から４０のいずれか一項に記載の単離抗体。
  42. 酸性条件で、１０－８Ｍ以下のＫＤおよび３×１０－３ｓ－１以下のｋｏｆｆで、ならびに中性または生理学的条件（ｎｅｕｔｒａｌ ｏｆ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ）で、１０－６Ｍ以上のＫＤおよび１０－２ｓ－１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から４１のいずれか一項に記載の単離抗体。
  43. 酸性条件で、１０－１２～１０－８ＭのＫＤおよび１０－４～５×１０－３ｓ－１のｋｏｆｆで、ならびに中性または生理学的条件（ｎｅｕｔｒａｌ ｏｆ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ）で、１０－７～１０－４ＭのＫＤおよび３×１０－３～１０－２ｓ－１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から４２のいずれか一項に記載の単離抗体。
  44. 酸性条件で、１０－１２～１０－８ＭのＫＤおよび１０－４～５×１０－３ｓ－１のｋｏｆｆで、ならびに中性または生理学的条件（ｎｅｕｔｒａｌ ｏｆ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ）で、１０－７～１０－４ＭのＫＤおよび３×１０－３～１０－２ｓ－１以上のｋｏｆｆでｈＶＩＳＴＡと結合し、ｃｙｎｏ ＶＩＳＴＡと１０－７以下のＫＤで結合する、請求項１から４３のいずれか一項に記載の単離抗体。
  45. ｐＨ６．９でｐＨ７．４でよりも少なくとも１０倍低いＫＤで、ならびに／またはｐＨ６．５でｐＨ７．４でよりも少なくとも１００倍低い、およびｐＨ６．０でｐＨ７．４でよりも少なくとも１０００倍低いＫＤで、ｈＶＩＳＴＡと結合する、請求項１から４４のいずれか一項に記載の単離抗体。
  46. カニクイザル（ｃｙｎｏ）ＶＩＳＴＡと特異的に結合する、請求項１から４５のいずれか一項に記載の単離抗体。
  47. 酸性条件で、生理学的条件と比較してより高い親和性でｃｙｎｏ ＶＩＳＴＡと結合する、請求項４６に記載の単離抗体。
  48. 酸性条件で、１０－８以下のＫＤおよび／または１０－２以下のｋｏｆｆで、ならびに生理学的条件で、１０－６以上のＫＤおよび／または１０－２以上のｋｏｆｆでｃｙｎｏ ＶＩＳＴＡと結合する、請求項４５から４７のいずれか一項に記載の単離抗体。
  49. 酸性条件が、６．５以下のｐＨを有する条件である、請求項１から４８のいずれか一項に記載の単離抗体。
  50. 酸性条件が、６．０～６．５のｐＨを有する条件である、請求項１から４９のいずれか一項に記載の単離抗体。
  51. 中性条件が、７．０のｐＨを有する条件である、請求項１から５０のいずれか一項に記載の単離抗体。
  52. 生理学的条件が、７．３５～７．４５のｐＨを有する条件である、請求項１から５１のいずれか一項に記載の単離抗体。
  53. 生理学的条件が、７．４のｐＨを有する条件である、請求項１から５２のいずれか一項に記載の単離抗体。
  54. ｈＶＩＳＴＡの、ヒトＴ細胞、例えば、ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞との結合を阻害する（アンタゴニスト抗体）、請求項１から５３のいずれか一項に記載の単離抗体。
  55. ｐＨ７．０未満のｐＨを有する条件において、ｈＶＩＳＴＡの、ヒトＴ細胞との結合を阻害する、請求項５４に記載の単離抗体。
  56. ｈＶＩＳＴＡの、ヒトＰＳＧＬ－１（ｈｕＰＳＧＬ－１）との結合を阻害し、および／またはｈｕＰＳＧＬ１と、ｈＶＩＳＴＡとの結合について競合する、請求項１から５５のいずれか一項に記載の単離抗体。
  57. ｐＨ７．０未満のｐＨを有する条件において、ｈＶＩＳＴＡの、ｈｕＰＳＧＬ－１との結合を阻害する、請求項５６に記載の単離抗体。
  58. ｈＶＩＳＴＡの、ヘパラン硫酸プロテオグリカンとの結合を阻害する、請求項１から５７のいずれか一項に記載の単離抗体。
  59. ｐＨ７．０未満のｐＨを有する条件において、ｈＶＩＳＴＡの、ヘパラン硫酸プロテオグリカンとの結合を阻害する、請求項５８に記載の単離抗体。
  60. ｐＨ７．０未満のｐＨを有する条件が、対象における、および免疫賦活が望まれるｐＨ７．０未満のｐＨを有する腫瘍または任意の患部である、請求項５５、５７または５９のいずれか一項に記載の単離抗体。
  61. 例えば、実施例に記載されるように決定されるように、例えば、Ｔ細胞増殖を増強すること、Ｔ細胞からのＩＦＮ－γ産生を増強することおよび／またはＴ細胞受容体媒介性ＮＦ－ｋＢシグナル伝達を刺激することによって証明されるように、Ｔ細胞活性化を刺激する、請求項１から６０のいずれか一項に記載の単離抗体。
  62. ｐＨ７．０未満のｐＨを有する条件において、Ｔ細胞活性化を刺激する、請求項６１に記載の単離抗体。
  63. ＶＩＳＴＡ媒介性細胞間接着を低減する、請求項１から６２のいずれか一項に記載の単離抗体。
  64. カニクイザルにおいて少なくとも１００、２００、３００、４００または５００日の平均滞留時間（ＭＲＴ）を有する、請求項１から６３のいずれか一項に記載の単離抗体。
  65. 投与される対象の末梢血においてＶＩＳＴＡ陽性細胞、例えば、好中球と著しく結合しない、請求項１から６４のいずれか一項に記載の単離抗体。
  66. 投与される対象の末梢血においてＶＩＳＴＡ陽性細胞、例えば、好中球を著しく枯渇させない、請求項１から６５のいずれか一項に記載の単離抗体。
  67. 酸性ｐＨでｈＶＩＳＴＡと結合するように操作されているが、中性または生理学的ｐＨではｈＶＩＳＴＡと特異的に結合しない、請求項１から６６のいずれか一項に記載の単離抗体。
  68. ｈＶＩＳＴＡのヒスチジンが豊富な領域、例えば、ヒスチジンが豊富なβシート伸長でまたはその付近で結合する、請求項１から６７のいずれか一項に記載の単離抗体。
  69. ６．０～６．５のｐＨを有する条件において、ｈＶＩＳＴＡのヒスチジンが豊富な領域、例えば、ヒスチジンが豊富なβシート伸長でまたはその付近で結合する、請求項６８に記載の単離抗体。
  70. 例えば、実施例１５に記載される競合ＢＬＩエピトープビニングアッセイによって決定されるように、ｈＶＩＳＴＡとの結合について、例えば、Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７５７、Ｐ１－０６８７５９、Ｐ１－０６８７６１、Ｐ１－０６８７６３、Ｐ１－０６８７６５、Ｐ１－０６８７６７、Ｐ１－０６８７６９、Ｐ１－０６８７７１、Ｐ１－０６８７７３、Ｐ１－０６８７７５、Ｐ１－０６９０５９、Ｐ１－０６９０６１、Ｐ１－０６９０６３、Ｐ１－０６９０６５、Ｐ１－０６９０６７、Ｐ１－０６９０６９、Ｐ１－０６９０７１、Ｐ１－０６９０７３、Ｐ１－０６９０７５、Ｐ１－０６９０７７、Ｐ１－０６９０７７、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｈ１００Ｇ、またはＰ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｈ１００Ｇ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ５６Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ５６Ｎ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ３２Ｙ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｈ１００Ｇ、Ｐ１－０６８７６１＿Ｅ３２Ｙ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ５２Ｎ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ５５Ａ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ＿Ｄ１０２Ｖ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ５５Ａ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｄ５２Ｎ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６８７６７＿Ｅ３０Ｄ＿Ｅ１００ｆＦ、Ｐ１－０６１０１５、Ｐ１－０６８７３６、Ｐ１－０６８７３８、Ｐ１－０６８７４０、Ｐ１－０６８７４２、Ｐ１－０６８７４４、Ｐ１－０６８７４８、Ｐ１－０６８７５０、Ｐ１－０６８７５２ Ｐ１－０６８７５４、ＶＩＳＴＡ．４またはその誘導体、例えば、Ｐ１－０７０９７６、Ｐ１－０６５３３３、Ｐ１－０７０９７６＿Ｈ９５ＤまたはＰ１－０７０９７６＿Ｅ９７Ｐ、（例えば、ＩｇＧ１．３との関連で）のＶＨおよびＶＬを含む、本明細書において記載される１つまたは複数の抗体と競合または交差競合する、請求項１から６８のいずれか一項に記載の単離抗体。
  71. 例えば、実施例１５に記載される競合ＢＬＩエピトープビニングアッセイによって決定されるように、エピトープ群Ａと結合する、請求項１から７０のいずれか一項に記載の単離抗体。
  72. 以下のアミノ酸残基：Ｖ３４、Ｔ３５、Ｙ３７、Ｋ３８、Ｔ３９、Ｙ４１、Ｓ５２、Ｒ５４、Ｔ６１、Ｆ６２、Ｑ６３、Ｌ６５、Ｈ６６、Ｌ６７、Ｈ６８、Ｈ６９、Ｆ９７、Ｌ１１５、Ｖ１１７、Ｉ１１９、Ｈ１２１、Ｈ１２２、Ｓ１２４、Ｅ１２５、Ｒ１２７のうち１つまたは複数が、突然変異されており、番号付けが成熟ｈＶＩＳＴＡのものである、ｈＶＩＳＴＡと著しく結合しない、請求項１から７０のいずれか一項に記載の単離抗体。
  73. 例えば、実施例において記載される酵母突然変異解析によって決定されるような、配列番号１または２からなるｈＶＩＳＴＡと特異的に結合するが、以下のアミノ酸残基：Ｖ３４、Ｔ３５、Ｙ３７、Ｋ３８、Ｔ３９、Ｙ４１、Ｓ５２、Ｒ５４、Ｔ６１、Ｆ６２、Ｑ６３、Ｌ６５、Ｈ６６、Ｌ６７、Ｈ６８、Ｈ６９、Ｆ９７、Ｌ１１５、Ｖ１１７、Ｉ１１９、Ｈ１２１、Ｈ１２２、Ｓ１２４、Ｅ１２５、Ｒ１２７のうち１つまたは複数が、突然変異されており、番号付けが成熟ｈＶＩＳＴＡのものである、ｈＶＩＳＴＡと著しく結合しない、単離抗体。
  74. 以下のアミノ酸残基：Ｖ３４、Ｔ３５、Ｙ３７、Ｋ３８、Ｔ３９、Ｙ４１、Ｓ５２、Ｒ５４、Ｔ６１、Ｆ６２、Ｑ６３、Ｌ６５、Ｈ６６、Ｌ６７、Ｈ６８、Ｈ６９、Ｆ９７、Ｌ１１５、Ｖ１１７、Ｉ１１９、Ｈ１２１、Ｈ１２２、Ｓ１２４、Ｅ１２５、Ｒ１２７のうち２つ、３つ、４つ、５つまたはそれより多くが突然変異されており、番号付けが成熟ｈＶＩＳＴＡのものである、ｈＶＩＳＴＡと著しく結合しない、請求項１から７３のいずれか一項に記載の単離抗体。
  75. 以下の残基：Ｖ３４、Ｔ３５、Ｙ３７、Ｋ３８、Ｔ３９、Ｙ４１、Ｓ５２、Ｒ５４、Ｔ６１、Ｆ６２、Ｑ６３、Ｌ６５、Ｈ６６、Ｌ６７、Ｈ６８、Ｈ６９、Ｆ９７、Ｌ１１５、Ｖ１１７、Ｉ１１９、Ｈ１２１、Ｈ１２２、Ｓ１２４、Ｅ１２５、Ｒ１２７のうち１つまたは複数が、表１５において示される対応する残基のうち１つに突然変異されており、番号付けが成熟ｈＶＩＳＴＡのものである、ｈＶＩＳＴＡと著しく結合しない、請求項７２から７４のいずれか一項に記載の単離抗体。
  76. 実施例において記載されるように、ＨＤＸ－ＭＳによって決定されるように、ｈＶＩＳＴＡのアミノ酸領域８６ＲＲＰＩＲＮＬＴＦＱＤＬ９７（配列番号４９７）と結合する、請求項１から７５のいずれか一項に記載の単離抗体。
  77. ｈＶＩＳＴＡのアミノ酸領域８６ＲＲＰＩＲＮＬＴＦＱＤＬ９７（配列番号４９７）と結合し、アミノ酸５７ＬＧＰＶＤＫＧＨＤＶＴＦ６８（配列番号４９８）および１４８ＶＶＥＩＲＨＨＨＳＥＨＲＶＨＧＡＭＥ１６５（配列番号４９９）ともあまり強くはないが結合する、請求項１から７６のいずれか一項に記載の単離抗体。
  78. 酸性条件下で、例えば、６．５のｐＨでｈＶＩＳＴＡと特異的に結合し（例えば、実施例において記載されるアッセイのうちの１つによって測定されるように）、ＶＩＳＴＡと（ａ）Ｔ細胞または（ｂ）ＰＳＧＬ－１の間の相互作用を阻害し、例えば、実施例１５に記載される酵母表面ディスプレイおよびＮＧＳアッセイを使用して決定されるように、本明細書において記載される抗体、例えば、ＶＩＳＴＡ．４、Ｐ１－０７０９７６、Ｐ１－０６５３３３、Ｐ１－０７０９７６＿Ｈ９５Ｄ、Ｐ１－０７０９７６＿Ｅ９７Ｐ、Ｐ１－０６１０１５、Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７６１、またはＰ１－０６８７６７の１つまたは複数（例えば、少なくとも１～３、１～５、１～１０、５～１０、５～１５またはすべて）のエネルギー的に重要な接触残基、例えば、エネルギー的に重要な接触残基の以下の群：（ｉ）Ｖ３４、Ｔ３５、Ｙ３７、Ｋ３８、Ｔ３９、Ｙ４１、Ｓ５２、Ｒ５４、Ｔ６１、Ｆ６２、Ｑ６３、Ｌ６５、Ｈ６６、Ｌ６７、Ｈ６８、Ｈ６９、Ｆ９７、Ｌ１１５、Ｖ１１７、Ｉ１１９、Ｈ１２１、Ｈ１２２、Ｓ１２４、Ｅ１２５、Ｒ１２７；（ｉｉ）Ｖ３４、Ｔ３５、Ｙ３７、Ｔ３９、Ｙ４１、Ｓ５２、Ｒ５４、Ｆ６２、Ｌ６５、Ｈ６６、Ｈ６８、Ｌ１１５、Ｖ１１７、Ｉ１１９、Ｒ１２０、Ｈ１２１、Ｈ１２２、Ｓ１２４、Ｅ１２５；または（ｉｉｉ）Ｙ３７、Ｔ３９、Ｒ５４、Ｆ６２、Ｈ６６、Ｌ１１５またはＶ１１７のうち１つから選択される１つまたは複数のアミノ酸によってｈＶＩＳＴＡと接触し、番号付けが成熟ｈＶＩＳＴＡのものである、単離抗体（Ａｂ）。
  79. 酸性条件下、例えば、６．５のｐＨでｈＶＩＳＴＡと特異的に結合し（例えば、実施例において記載されるアッセイのうちの１つによって測定されるように）、ＶＩＳＴＡと（ａ）Ｔ細胞または（ｂ）ＰＳＧＬ－１の間の相互作用を阻害し、例えば、実施例１５に記載される酵母表面ディスプレイおよびＮＧＳアッセイを使用して決定されるように、１つまたは複数（例えば、少なくとも１～３、１～５、１～１０、５～１０、５～１５またはすべて）のエネルギー的に重要な接触残基Ｙ３７、Ｔ３９、Ｒ５４、Ｆ６２、Ｈ６６、Ｖ１１７、Ｉ１１９またはＳ１２４によってｈＶＩＳＴＡと接触し、番号付けが成熟ｈＶＩＳＴＡのものである単離抗体（Ａｂ）。
  80. 酸性条件下、例えば、６．５のｐＨでｈＶＩＳＴＡと特異的に結合し（例えば、実施例において記載されるアッセイのうちの１つによって測定されるように）、例えば、実施例１５に記載される酵母表面ディスプレイおよびＮＧＳアッセイを使用して決定されるように、ＶＩＳＴＡと（ａ）Ｔ細胞または（ｂ）ＰＳＧＬ－１の間の相互作用を阻害し、ＶＩＳＴＡ．４の１つまたは複数（例えば、少なくとも１～３、１～５、１～１０、５～１０、５～１５またはすべて）のエネルギー的に重要な接触残基によってｈＶＩＳＴＡと接触する、単離抗体（Ａｂ）。
  81. ｈＶＩＳＴＡのＦＧループと結合する、請求項１から８０のいずれか一項に記載の単離抗体。
  82. 例えば、実施例において記載されるように、例えば、結晶学によって決定されるように、ｈＶＩＳＴＡのヒスチジンが豊富なβシート伸長と結合する、請求項１から８１のいずれか一項に記載の単離抗体。
  83. 例えば、実施例において記載されるように、例えば、結晶学によって決定されるように、水素結合などによって、ｈＶＩＳＴＡのＨ１２１、Ｈ１２２およびＨ１２３（例えば、４．０オングストローム（Å）またはそれ以下の距離）と接触する、請求項１から８２のいずれか一項に記載の単離抗体。
  84. ＶＨ ＣＤＲ１およびＶＨ ＣＤＲ３によってｈＶＩＳＴＡと接触する、例えば、ＶＨ ＣＤＲ２によって、および／またはＶＬ ＣＤＲによって著しく結合しない、請求項１から８３のいずれか一項に記載の単離抗体。
  85. 抗体の重鎖アミノ酸残基１１０および１１２が、それぞれ、ｈＶＩＳＴＡのＨ１２１およびＨ１２２と水素結合を形成し、抗体のアミノ酸残基がｈＶＩＳＴＡのＨ１２３と水素結合を形成してもよく、抗体のアミノ酸番号付けが、実施例において使用されるものに従う、請求項１から８４のいずれか一項に記載の単離抗体。
  86. ＶＩＳＴＡ．４下の表３１に列挙されるｈＶＩＳＴＡとの１つまたは複数（例えば、１～５、５～１０、１０～１５、１０～２０または１５～２０）の相互作用を含む、請求項８５に記載の抗体。
  87. ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３中に位置する、少なくとも１つまたは複数のグルタミン酸、アスパラギン酸またはヒスチジン残基によってｈＶＩＳＴＡと接触する、請求項１から８６のいずれか一項に記載の単離抗体。
  88. 中性または生理学的ｐＨでｈＶＩＳＴＡと著しく結合しない（例えば、実施例において記載されるアッセイのうちの１つによって測定されるように）、請求項１から８７のいずれか一項に記載の単離抗体。
  89. 酸性条件下で、例えば、６．５のｐＨで、中性または生理学的ｐＨ下でのｈＶＩＳＴＡとの結合のＫＤおよび／またはｋｏｆｆよりも少なくとも１０倍、１００倍または１０００倍低いＫＤ（またはｋｏｆｆ）で、ｈＶＩＳＴＡと結合する（例えば、実施例において記載されるアッセイのうちの１つによって測定されるように）、請求項１から８８のいずれか一項に記載の単離抗体。
  90. 中性または生理学的ｐＨでｈＶＩＳＴＡと著しく結合しない（例えば、実施例において記載されるアッセイのうちの１つによって測定されるように）、請求項１から８９のいずれか一項に記載の単離抗体。
  91. 酸性条件下、例えば、６．５のｐＨでｈＶＩＳＴＡと特異的に結合する（例えば、実施例において記載されるアッセイのうちの１つによって測定されるように）単離抗体（Ａｂ）であって、
    ・ｈＶＩＳＴＡと（ａ）Ｔ細胞および／または（ｂ）ＰＳＧＬ－１の間の相互作用を阻害する（例えば、配列番号１を有するｈＶＩＳＴＡのＨ１５３およびＨ１５４と、ＰＳＧＬ－１チロシンＹ４６およびＹ４８の間の相互作用を阻害する）、
    ・例えば、Ｔ細胞増殖を増強すること、Ｔ細胞からのＩＦＮ－γ産生を増強することおよび／またはＴ細胞受容体媒介性ＮＦ－ｋＢシグナル伝達を刺激することによってＴ細胞活性化を増強する、
    ・例えば、実施例１５に記載される酵母表面ディスプレイおよびＮＧＳアッセイを使用して決定されるように、番号付けが成熟ｈＶＩＳＴＡのものである、１つまたは複数（例えば、少なくとも１～３、１～５、１～１０、５～１０、５～１５またはすべて）のエネルギー的に重要な接触残基Ｙ３７、Ｔ３９、Ｒ５４、Ｆ６２、Ｈ６６、Ｖ１１７、Ｉ１１９またはＳ１２４によって、ｈＶＩＳＴＡと接触する、
    ・例えば、実施例において記載されるように、例えば、結晶学によって決定されるように、ｈＶＩＳＴＡのヒスチジンが豊富なβシート伸長と結合する、
    ・例えば、実施例において記載されるように、例えば、結晶学によって決定されるように、例えば、水素結合によって、成熟ｈＶＩＳＴＡの（ｉ）Ｈ１２１、Ｈ１２２および／もしくはＨ１２３または（ｉｉ）Ｈ６６、Ｈ６８、Ｈ１２１、Ｈ１２２および／もしくはＨ１２３（４．０オングストローム（Å）またはそれ以下の距離）と接触する、
    ・実施例１８に記載されるようにＭＳ－ＨＤＸによって決定されるように、領域２との結合が最強であってもよく、配列番号１を有するｈＶＩＳＴＡの領域１：５７ＬＧＰＶＤＫＧＨＤＶＴＦ６８（配列番号４９８）、領域２：８６ＲＲＰＩＲＮＬＴＦＱＤＬ９７（配列番号４９７）および領域３：１４８ＶＶＥＩＲＨＨＨＳＥＨＲＶＨＧＡＭＥ１６５（配列番号４９９）と結合する、
    ・ｈＶＩＳＴＡとの結合について、本明細書において記載される１つまたは複数の抗体、例えば、Ｐ１－０６１０１５、Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７６１、Ｐ１－０６８７６７およびＶＩＳＴＡ．４と競合する（二元配置競合）、
    ・ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３中に位置する、少なくとも１つまたは複数のグルタミン酸、アスパラギン酸またはヒスチジン残基によってｈＶＩＳＴＡと接触する、
    ・低い標的媒介性薬物動態を有し、例えば、実施例に記載されるように測定されるように、少なくとも１００、２００、３００、４００、５００、６００または７００時間の平均滞留時間（ＭＲＴ）につながる、
    ・ＴＭＤＤの低いまたは検出不可能なレベルを有する、および／または
    ・低いまたは検出不可能なレベルの好中球減少を有する
    単離抗体。
  92. 酸性条件下、例えば、６．５のｐＨで、中性または生理学的ｐＨ下でのｈＶＩＳＴＡとの結合のＫＤおよび／またはｋｏｆｆよりも少なくとも１０倍、１００倍または１０００倍低いＫＤ（および／またはｋｏｆｆ）で（例えば、実施例において記載されるアッセイのうちの１つによって測定されるように）ｈＶＩＳＴＡと特異的に結合する単離抗体であって、
    ・ｈＶＩＳＴＡと（ａ）Ｔ細胞および／または（ｂ）ＰＳＧＬ－１の間の相互作用を阻害する（例えば、配列番号１を有するｈＶＩＳＴＡのＨ１５３およびＨ１５４と、ＰＳＧＬ－１チロシンＹ４６およびＹ４８の間の相互作用を阻害する）、
    ・例えば、Ｔ細胞増殖を増強すること、Ｔ細胞からのＩＦＮ－γ産生を増強することおよび／またはＴ細胞受容体媒介性ＮＦ－ｋＢシグナル伝達を刺激することによってＴ細胞活性化を増強する、
    ・例えば、実施例１５に記載される酵母表面ディスプレイおよびＮＧＳアッセイを使用して決定されるように、番号付けが成熟ｈＶＩＳＴＡのものである、１つまたは複数（例えば、少なくとも１～３、１～５、１～１０、５～１０、５～１５またはすべて）のエネルギー的に重要な接触残基Ｙ３７、Ｔ３９、Ｒ５４、Ｆ６２、Ｈ６６、Ｖ１１７、Ｉ１１９またはＳ１２４によって、ｈＶＩＳＴＡと接触する、
    ・例えば、実施例において記載されるように、例えば、結晶学によって決定されるように、ｈＶＩＳＴＡのヒスチジンが豊富なβシート伸長と結合する、
    ・例えば、実施例において記載されるように、例えば、結晶学によって決定されるように、例えば、水素結合によって、成熟ｈＶＩＳＴＡの（ｉ）Ｈ１２１、Ｈ１２２および／もしくはＨ１２３または（ｉｉ）Ｈ６６、Ｈ６８、Ｈ１２１、Ｈ１２２および／もしくはＨ１２３（４．０オングストローム（Å）またはそれ以下の距離）と接触する、
    ・実施例１８に記載されるようにＭＳ－ＨＤＸによって決定されるように、領域２との結合が最強であってもよく、配列番号１を有するｈＶＩＳＴＡの領域１：５７ＬＧＰＶＤＫＧＨＤＶＴＦ６８（配列番号４９８）、領域２：８６ＲＲＰＩＲＮＬＴＦＱＤＬ９７（配列番号４９７）および領域３：１４８ＶＶＥＩＲＨＨＨＳＥＨＲＶＨＧＡＭＥ１６５（配列番号４９９）と結合する、
    ・ｈＶＩＳＴＡとの結合について、本明細書において記載される１つまたは複数の抗体、例えば、Ｐ１－０６１０１５、Ｐ１－０６１０２９、Ｐ１－０６８７６１、Ｐ１－０６８７６７およびＶＩＳＴＡ．４と競合する（例えば、二元配置競合）、
    ・ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３中に位置する、少なくとも１つまたは複数のグルタミン酸、アスパラギン酸またはヒスチジン残基によってｈＶＩＳＴＡと接触する、
    ・低い標的媒介性薬物動態を有し、例えば、実施例に記載されるように測定されるように、少なくとも１００、２００、３００、４００、５００、６００または７００時間の平均滞留時間（ＭＲＴ）につながる、
    ・ＴＭＤＤの低いまたは検出不可能なレベルを有する、および／または
    ・低いまたは検出不可能なレベルの好中球減少を有する、
    単離抗体。
  93. 例えば、ｉｃＩＥＦによって測定されるような、６．５から６．８の間の等電点（ｐＩ）を有する、請求項１から９２のいずれか一項に記載の単離抗体。
  94. 例えば、実施例において決定されたように、低い凝集、例えば、ＶＩＳＴＡ．４またはその誘導体、例えば、Ｐ１－０７０９７６、Ｐ１－０６５３３３、Ｐ１－０７０９７６＿Ｈ９５ＤまたはＰ１－０７０９７６＿Ｅ９７Ｐ（例えば、ＩｇＧ１．３に関連して、およびＶＫ１．Ａ６４Ｇを有する）のものと同様またはそれより低い凝集を示す、請求項１から９３のいずれか一項に記載の単離抗体。
  95. 実施例において決定されたように、ＶＩＳＴＡ．４またはその誘導体、例えば、Ｐ１－０７０９７６、Ｐ１－０６５３３３、Ｐ１－０７０９７６＿Ｈ９５ＤまたはＰ１－０７０９７６＿Ｅ９７Ｐ（例えば、ＩｇＧ１．３に関連して、およびＶＫ１．Ａ６４Ｇを有する）のものと同様またはそれより低い粘性を示す、請求項１から９４のいずれか一項に記載の単離抗体。
  96. 例えば、実施例において決定されたように、ＶＩＳＴＡ．４またはその誘導体、例えば、Ｐ１－０７０９７６、Ｐ１－０６５３３３、Ｐ１－０７０９７６＿Ｈ９５ＤまたはＰ１－０７０９７６＿Ｅ９７Ｐ（例えば、ＩｇＧ１．３に関連して、およびＶＫ１．Ａ６４Ｇを有する）のものと同様またはそれより低い流体力学半径を示す、請求項１から９５のいずれか一項に記載の単離抗体。
  97. 例えば、実施例（例えば、実施例１６）において決定されたように、ＶＩＳＴＡ．４またはその誘導体、例えば、Ｐ１－０７０９７６、Ｐ１－０６５３３３、Ｐ１－０７０９７６＿Ｈ９５ＤまたはＰ１－０７０９７６＿Ｅ９７Ｐ（例えば、ＩｇＧ１．３に関連して、およびＶＫ１．Ａ６４Ｇを有する）のものと同様またはそれより高い融解温度（Ｔｍ１）を示す、請求項１から９６のいずれか一項に記載の単離抗体。
  98. 例えば、実施例（例えば、実施例１６）において決定されたように、ＶＩＳＴＡ．４またはその誘導体、例えば、Ｐ１－０７０９７６、Ｐ１－０６５３３３、Ｐ１－０７０９７６＿Ｈ９５ＤまたはＰ１－０７０９７６＿Ｅ９７Ｐ（例えば、ＩｇＧ１．３に関連して、およびＶＫ１．Ａ６４Ｇを有する）のものと同様またはそれより低い高分子量種の量を示す、請求項１から９７のいずれか一項に記載の単離抗体。
  99. ＩｇＧ抗体である、請求項１から９８のいずれか一項に記載の単離抗体。
  100. ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４抗体（Ｓ２２８Ｐ置換（ＥＵ番号付け）を有していてもよいＩｇＧ４）である、請求項９９に記載の単離抗体。
  101. エフェクターがない抗体である、例えば、ＡＤＣＣおよび／もしくはＣＤＣを欠く、ならびに／または１つもしくは複数のＦｃγＲｓ、例えば、ＦｃγＲＩＩＩと著しく結合しない抗体である、請求項１から１００のいずれか一項に記載の単離抗体。
  102. 定常領域が、抗体のエフェクター機能（例えば、ＡＤＣＣおよび／もしくはＣＤＣ）ならびに／または１つもしくは複数のＦｃγＲｓ、例えば、ＦｃγＲＩＩＩと結合する能力を、対応する野生型重鎖定常領域のものと比較して低減する、野生型重鎖定常領域中に１～５つの突然変異を含む、請求項１０１に記載の単離抗体。
  103. 抗体の定常領域が、ＩｇＧ１．３、ＩｇＧ１．１である、またはＰ２３８Ｋ置換を有するＩｇＧ１（例えば、ＩｇＧ１．Ｐ２３８Ｋ）である、請求項１から１０２のいずれか一項に記載の単離抗体。
  104. エフェクター機能を有する、および／または１つもしくは複数のＦｃγＲｓ、例えば、ＦｃγＲＩＩＩと結合する、請求項１から１０３のいずれか一項に記載の単離抗体。
  105. 脱フコシル化されている（例えば、脱フコシル化ＩｇＧ１抗体）、請求項１０４に記載の単離抗体。
  106. 定常領域が、抗体のエフェクター機能ならびに／または１つもしくは複数のＦｃγＲｓ、例えば、ＦｃγＲＩＩＩと結合する能力を、対応する野生型定常領域と比較して増強する１～５つの突然変異を含む、請求項１０５に記載の単離抗体。
  107. ４１Ｆ１１またはＶＩＳＴＡ．４またはその変異体である、単離抗体または請求項１から１０６のいずれか一項に記載の単離抗体。
  108. 変異体が、組み合わされた、４１Ｆ１１またはＶＩＳＴＡ．４のものに対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９８％同一である、または１～２０、１～１５、１～１０もしくは１～５個のアミノ酸残基、例えば、アミノ酸置換（例えば、Ｄ、ＥまたはＨへの置換）でそれから異なっている、ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３およびＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、請求項１から１０７のいずれか一項に記載の単離抗体。
  109. 変異体が、４１Ｆ１１またはＶＩＳＴＡ．４のものに対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９８％同一である、または１～５０、１～４０、１～３０もしくは１～２０、１～１０もしくは１～５個のアミノ酸残基、例えば、アミノ酸置換（例えば、Ｄ、ＥまたはＨへの置換）でそれから異なっているＶＨおよびＶＬアミノ酸配列を含む、請求項１から１０８のいずれか一項に記載の単離抗体。
  110. 実施例１７において、または配列表において開示される抗ＶＩＳＴＡ抗体のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、請求項１から１０９のいずれか一項に記載の単離抗体。
  111. 実施例１において、または配列表において開示される抗ＶＩＳＴＡ抗体のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、請求項１から１１０のいずれか一項に記載の単離抗体。
  112. 実施例１７において、または配列表において開示される抗ＶＩＳＴＡ抗体のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ならびにＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、請求項８３から１１１のいずれか一項に記載の単離抗体。
  113. 実施例１７において、または配列表において開示される抗ＶＩＳＴＡ抗体のＶＨアミノ酸配列を含む、請求項１から１１２のいずれか一項に記載の単離抗体。
  114. 実施例１７において、または配列表において開示される抗ＶＩＳＴＡ抗体のＶＬアミノ酸配列を含む、請求項１から１１３のいずれか一項に記載の単離抗体。
  115. 実施例１７において、または配列表において開示される抗ＶＩＳＴＡ抗体のＶＨおよびＶＬアミノ酸配列を含む、請求項１から１１４のいずれか一項に記載の単離抗体。
  116. ヒトＶＩＳＴＡと特異的に結合し、４１Ｆ１１もしくはＶＩＳＴＡ．４のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３アミノ酸配列または組み合わされた、４１Ｆ１１もしくはＶＩＳＴＡ．４のものに対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９８％同一である、もしくは１～２０、１～１５、１～１０もしくは１～５個のアミノ酸残基、例えば、アミノ酸置換（例えば、Ｄ、ＥまたはＨへの置換）でそれから異なっているアミノ酸配列を含む単離抗体。
  117. ヒトＶＩＳＴＡと特異的に結合し、４１Ｆ１１もしくはＶＩＳＴＡ．４のＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３アミノ酸配列または組み合わされた、４１Ｆ１１もしくはＶＩＳＴＡ．４のものに対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９８％同一である、もしくは１～２０、１～１５、１～１０もしくは１～５個のアミノ酸残基、例えば、アミノ酸置換（例えば、Ｄ、ＥまたはＨへの置換）でそれから異なっているアミノ酸配列を含む、単離抗体。
  118. ４１Ｆ１１もしくはＶＩＳＴＡ．４のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ならびにＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３アミノ酸配列または組み合わされた、４１Ｆ１１もしくはＶＩＳＴＡ．４のものに対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９８％同一である、もしくは１～２０、１～１５、１～１０もしくは１～５個のアミノ酸残基、例えば、アミノ酸置換（例えば、Ｄ、ＥまたはＨへの置換）でそれから異なっているアミノ酸配列を含む、請求項１から１１７のいずれか一項に記載の単離抗体。
  119. ４１Ｆ１１もしくはＶＩＳＴＡ．４のＶＨアミノ酸配列またはそれに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％同一である、もしくはそれに対して１～５０、１～４０、１～３０、１～２０、１～１０もしくは１～５つのアミノ酸変化、例えば、置換を含むアミノ酸配列を含む、請求項１から１１８のいずれか一項に記載の単離抗体。
  120. ４１Ｆ１１もしくはＶＩＳＴＡ．４のＶＬアミノ酸配列またはそれに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％同一である、もしくはそれに対して１～５０、１～４０、１～３０、１～２０、１～１０もしくは１～５つのアミノ酸変化、例えば、置換を含むアミノ酸配列を含む、請求項１から１１９のいずれか一項に記載の単離抗体。
  121. ４１Ｆ１１もしくはＶＩＳＴＡ．４のＶＨおよびＶＬアミノ酸配列またはそれに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％同一である、もしくはそれに対して１～５０、１～４０、１～３０、１～２０、１～１０もしくは１～５つのアミノ酸変化、例えば、置換を含むアミノ酸配列を含む、請求項１から１２０のいずれか一項に記載の単離抗体。
  122. 実施例１７において、または配列表において開示される抗ＶＩＳＴＡ抗体のＨＣアミノ酸配列またはそれに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％もしくは１００％同一である、もしくはそれに対して１～５０、１～４０、１～３０、１～２０、１～１０もしくは１～５つのアミノ酸変化、例えば、置換を含むアミノ酸配列を含む、請求項１から１２１のいずれか一項に記載の単離抗体。
  123. 実施例１７において、または配列表において開示される抗ＶＩＳＴＡ抗体のＬＣアミノ酸配列またはそれに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％もしくは１００％同一である、もしくはそれに対して１～５０、１～４０、１～３０、１～２０、１～１０もしくは１～５つのアミノ酸変化、例えば、置換を含むアミノ酸配列を含む、請求項１から１２２のいずれか一項に記載の単離抗体。
  124. 実施例１７において、または配列表において開示される抗ＶＩＳＴＡ抗体のＨＣおよびＬＣアミノ酸配列またはそれに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％もしくは１００％同一である、もしくはそれに対して１～５０、１～４０、１～３０、１～２０、１～１０もしくは１～５つのアミノ酸変化、例えば、置換を含むアミノ酸配列を含む、請求項１から１２３のいずれか一項に記載の単離抗体。
  125. ＶＩＳＴＡ．４（配列番号５０３～５０５）、Ｐ１－０７０９７６（配列番号５０９～５１１）、Ｐ１－０６５３３３（配列番号５０６～５０８）、Ｐ１－０７０９７６＿Ｈ９５Ｄ（配列番号５１２～５１４）またはＰ１－０７０９７６＿Ｅ９７Ｐ（配列番号５１５～５１７）のＶＨ ＣＤＲを含む、請求項１から１２４のいずれか一項に記載の単離抗体。
  126. ＶＩＳＴＡ．４、Ｐ１－０７０９７６、Ｐ１－０６５３３３、Ｐ１－０７０９７６＿Ｈ９５ＤまたはＰ１－０７０９７６＿Ｅ９７ＰのＶＬ ＣＤＲ（配列番号５００～５０２）を含む、請求項１から１２５のいずれか一項に記載の単離抗体。
  127. ＶＩＳＴＡ．４（それぞれ、配列番号５０３～５０５および５００～５０２）、Ｐ１－０７０９７６（それぞれ、配列番号５０９～５１１および５００～５０２）、Ｐ１－０６５３３３（それぞれ、配列番号５０６～５０８および５００～５０２）、Ｐ１－０７０９７６＿Ｈ９５Ｄ（それぞれ、配列番号５１２～５１４および５００～５０２）またはＰ１－０７０９７６＿Ｅ９７Ｐ（それぞれ、配列番号５１５～５１７および５００～５０２）のＶＨおよびＶＬ ＣＤＲを含む、請求項１から１２６のいずれか一項に記載の単離抗体。
  128. ＶＩＳＴＡ．４（配列番号４９２）、Ｐ１－０７０９７６（配列番号４７４）、Ｐ１－０６５３３３（配列番号４７３）、Ｐ１－０７０９７６＿Ｈ９５Ｄ（配列番号４７７）またはＰ１－０７０９７６＿Ｅ９７Ｐ（配列番号４７８）のＶＨを含む、請求項１から１２７のいずれか一項に記載の単離抗体。
  129. ＶＩＳＴＡ．４、Ｐ１－０７０９７６、Ｐ１－０６５３３３、Ｐ１－０７０９７６＿Ｈ９５ＤまたはＰ１－０７０９７６＿Ｅ９７Ｐ（Ａ６４Ｇを有する、または有さない）のＶＬ（配列番号４９３（Ａ６４Ｇを有さない）または配列番号４７９（Ａ６４Ｇを有する）に対応する）を含む、請求項１から１２８のいずれか一項に記載の単離抗体。
  130. ＶＩＳＴＡ．４（配列番号４９２および４７９または配列番号４９２および４９３）、Ｐ１－０７０９７６（配列番号４７４および４７９または配列番号４７４および４９３）、Ｐ１－０６５３３３（配列番号４７５および４７９または配列番号４７５および４９３）、Ｐ１－０７０９７６＿Ｈ９５Ｄ（配列番号４７７および４７９または配列番号４７７および４９３）またはＰ１－０７０９７６＿Ｅ９７Ｐ（配列番号４７８および４７９または配列番号４７８および４９３）のＶＨおよびＶＬ（ＶＬ中にＡ６４Ｇを有する、または有さない）を含む、請求項１から１２９のいずれか一項に記載の単離抗体。
  131. ＶＩＳＴＡ．４．ＩｇＧ１．３（配列番号４９１）、Ｐ１－０７０９７６．ＩｇＧ１．３（配列番号４７６）、Ｐ１－０６５３３．ＩｇＧ１．３（配列番号４７５）、Ｐ１－０７０９７６＿Ｈ９５Ｄ．ＩｇＧ１．３（配列番号４８０）またはＰ１－０７０９７６＿Ｅ９７Ｐ．ＩｇＧ１．３（配列番号４８１）のＨＣを含む、請求項１から１３０のいずれか一項に記載の単離抗体。
  132. ＶＩＳＴＡ．４．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０７０９７６．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０６５３３．ＩｇＧ１．３、Ｐ１－０７０９７６＿Ｈ９５Ｄ．ＩｇＧ１．３またはＰ１－０７０９７６＿Ｅ９７Ｐ．ＩｇＧ１．３（ＶＬ中にＡ６４Ｇを有する、または有さない）のＬＣ（配列番号４９４（Ａ６４Ｇを有さない）または配列番号４８２（Ａ６４Ｇを有する）を含む、請求項１から１３１のいずれか一項に記載の単離抗体。
  133. ＶＩＳＴＡ．４．ＩｇＧ１．３（配列番号４９１および４９４または配列番号４９１および４８２）、Ｐ１－０７０９７６．ＩｇＧ１．３（配列番号４７６および４９４または配列番号４７６および４８２）、Ｐ１－０６５３３３．ＩｇＧ１．３（配列番号４７５および４９４または配列番号４７５および４８２）、Ｐ１－０７０９７６＿Ｈ９５Ｄ．ＩｇＧ１．３（配列番号４８０および４９４または配列番号４８０および４８２）またはＰ１－０７０９７６＿Ｅ９７Ｐ．ＩｇＧ１．３（配列番号４８１および４９４または配列番号４８１および４８２）のＨＣおよびＬＣ（ＶＬ中にＡ６４Ｇを有する、または有さない）を含む、請求項１から１３２のいずれか一項に記載の単離抗体。
  134. 全長抗体または全長重鎖（Ｃ末端リシンを有する、または有さない）および全長軽鎖を含む抗体である、請求項１から１３３のいずれか一項に記載の単離抗体。
  135. 抗原結合断片である、請求項１から１３０のいずれか一項に記載の単離抗体。
  136. 多量体（例えば、二量体または三量体）抗体である、請求項１から１３５のいずれか一項に記載の単離抗体。
  137. 別の分子に連結されている（例えば、共有結合によって）、請求項１から１３６のいずれか一項に記載の単離抗体。
  138. 他の分子が、標識である、請求項１３７に記載の単離抗体。
  139. 他の分子が、ペプチドである、請求項１３７または１３８に記載の単離抗体。
  140. 抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）または活性化できる抗体である、請求項１から１３９のいずれか一項に記載の単離抗体。
  141. 請求項１から１４０のいずれか一項に記載の抗体をコードする単離核酸。
  142. 請求項１から１４０のいずれか一項に記載の抗体の重鎖および／または軽鎖をコードする単離核酸。
  143. 請求項１から１４０のいずれか一項に記載の抗体の重鎖をコードする核酸および抗体の軽鎖をコードする核酸を含む組成物。
  144. 請求項１４１から１４２のいずれか一項に記載の単離核酸または請求項１４３に記載の組成物を含む細胞。
  145. 抗体を調製する方法であって、抗体が発現される条件下で請求項１４４に記載の細胞を培養することを含む、方法。
  146. 請求項１から１４５のいずれか一項に記載の単離抗体、核酸、組成物または細胞および薬学的に許容される担体を含む組成物。
  147. 第２の治療薬を含む、請求項１４６に記載の組成物。
  148. 第２の治療薬が、免疫賦活剤を含む、請求項１４７に記載の組成物。
  149. 免疫賦活剤が、免疫抑制分子のアンタゴニスト、例えば、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４およびＬＡＧ－３または免疫賦活分子のアゴニスト、例えば、ＧＩＴＲおよびＯＸ４０を含む、請求項１４８に記載の組成物。
  150. 対象においてがんを処置する方法であって、対象に、免疫応答を刺激するおよび／またはＶＩＳＴＡアンタゴニスト抗体である請求項１から１４９のいずれか一項に記載の組成物または単離抗体の治療上有効量を投与することを含む、方法。
  151. 対象が、例えば、がんの腫瘍中にＶＩＳＴＡ陽性細胞を有する、請求項１５０に記載の方法。
  152. ＶＩＳＴＡ陽性細胞が、ＶＩＳＴＡ陽性浸潤性リンパ性（例えば、Ｔ細胞）または骨髄単球性細胞を含む、請求項１５１に記載の方法。
  153. 対象が、腫瘍中のＶＩＳＴＡ陽性細胞の存在についてまず試験され、対象が例えば、腫瘍中にＶＩＳＴＡ陽性細胞を有する場合には、対象が処置される、請求項１５０から１５２のいずれか一項に記載の方法。
  154. 第２の療法を投与することをさらに含む、請求項１５０から１５３のいずれか一項に記載の方法。
  155. 第２の療法が、化学療法、放射線療法、手術または第２の薬剤の投与を含む、請求項１５４に記載の方法。
  156. 第２の療法が、第２の薬剤を含み、第２の薬剤が、免疫賦活剤である、請求項１５５に記載の方法。
  157. 免疫賦活性剤が、免疫抑制分子のアンタゴニスト、例えば、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４およびＬＡＧ－３または免疫賦活分子のアゴニスト、例えば、ＧＩＴＲおよびＯＸ４０を含む、請求項１５６に記載の方法。
  158. 対象において感染性疾患（例えば、ウイルス性疾患）を処置する方法であって、対象に、免疫応答を刺激するおよび／またはＶＩＳＴＡアンタゴニストである請求項１から１５７のいずれか一項に記載の組成物または単離抗体の治療上有効量を投与することを含む、方法。
  159. サンプルにおいてＶＩＳＴＡを検出する方法であって、サンプルを、請求項１から１４０のいずれか一項に記載のＶＩＳＴＡ抗体と接触させることを含む、方法。
  160. ｈＶＩＳＴＡと特異的に結合し、ＶＩＳＴＡ媒介性Ｔ細胞活性化を阻害する単離抗体であって、配列番号４６３、４７３、４７４、４７７、４７８または４９２を含むかまたはからなるＶＨのＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列（例えば、配列番号５０３～５０５、５０６～５０８、５０９～５１１、５１２～５１４または５１５～５１７）を含む、単離抗体。
  161. 配列番号４６４、４７１、４９３または４７９を含むかまたはからなるＶＬのＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列（例えば、配列番号５００～５０２）を含む、請求項１６０に記載の単離抗体。
  162. シグナルペプチドを有する、または有さない配列番号４６３、４７３、４７４、４７７、４７８または４９２を含むかまたはからなるＶＨを含む、請求項１６０または１６１に記載の単離抗体。
  163. シグナルペプチドを有する、または有さない配列番号４６４、４７１、４７９または４９３を含むかまたはからなるＶＬを含む、請求項１６０から１６２のいずれか一項に記載の単離抗体。
  164. Ｃ末端リシンを有する、または有さない、野生型ＩｇＧ１（例えば、配列番号１８２）、野生型ＩｇＧ２、野生型ＩｇＧ３、野生型ＩｇＧ４、Ｓ２２８Ｐを含む野生型ＩｇＧ４、ＩｇＧ１．１（配列番号１８３）、ＩｇＧ１．３（配列番号１６３）、ＩｇＧ１．Ｐ２３８Ｋ（配列番号１８４）を含むかまたはからなる重鎖定常領域を含む、請求項１６０から１６３のいずれか一項に記載の単離抗体。
  165. シグナルペプチドを有する、または有さない、配列番号４７５、４７６、４９１、４８０または４８１を含むかまたはからなる重鎖を含む、請求項１６０から１６４のいずれか一項に記載の単離抗体。
  166. シグナルペプチドを有する、または有さない、配列番号４７２、４９４または４８２を含むかまたはからなる軽鎖を含む、請求項１６０から１６５のいずれか一項に記載の単離抗体。
  167. （ａ）それぞれ、配列番号４７５および配列番号４８２もしくは４７２、
    （ｂ）それぞれ、配列番号４７５および配列番号４９４、
    （ｃ）それぞれ、配列番号４７６および配列番号４８２もしくは４７２、
    （ｄ）それぞれ、配列番号４７６および配列番号４９４、
    （ｅ）それぞれ、配列番号４９１および配列番号４８２もしくは４７２、
    （ｆ）それぞれ、配列番号４９１および配列番号４９４、
    （ｇ）それぞれ、配列番号４８０）および配列番号４８２もしくは４７２、
    （ｈ）それぞれ、配列番号４８０）および配列番号４９４、
    （ｉ）それぞれ、配列番号４８１）および配列番号４８２もしくは４７２、または
    （ｊ）それぞれ、配列番号４８１）および配列番号４９４
    を含むかまたはからなる重鎖および軽鎖を含む、請求項１６６に記載の単離抗体。
  168. 対象においてがんを処置する方法であって、対象に、ｈＶＩＳＴＡと特異的に結合する、ｈＶＩＳＴＡ（例えば、Ｔ細胞活性化）ならびに例えば、対象の腫瘍において、例えば、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞数の増大をもたらすＰＤ１／ＰＤ－Ｌ１経路アンタゴニストの活性を阻害する抗体を投与することを含む、方法。
  169. 対象においてがんを処置する方法であって、対象に、ｈＶＩＳＴＡと特異的に結合し、ｈＶＩＳＴＡ（例えば、Ｔ細胞活性化）ならびに例えば、対象の腫瘍において、例えば、消耗したＴ細胞ならびに／またはＰＤ－１、ＬＡＧ３および／もしくはＴＩＭ－３を発現するＴ細胞数の低減をもたらすＰＤ１／ＰＤ－Ｌ１経路アンタゴニストの活性を阻害する抗体を投与することを含む、方法。
  170. 対象においてがんを処置する方法であって、対象に、ｈＶＩＳＴＡと特異的に結合し、ｈＶＩＳＴＡ（例えば、Ｔ細胞活性化）ならびに例えば、対象の腫瘍における、例えば、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞数の増大および例えば、対象の腫瘍における、消耗したＴ細胞ならびに／またはＰＤ－１、ＬＡＧ３および／もしくはＴＩＭ－３を発現するＴ細胞数の低減ならびに／または本明細書において記載される他の特徴をもたらすＰＤ１／ＰＤ－Ｌ１経路アンタゴニストの活性を阻害する抗体を投与することを含む、方法。
  171. ｈＶＩＳＴＡと特異的に結合する抗体が、本明細書において記載される抗体である、請求項１６８から１７０のいずれか一項に記載の方法。
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