CN105102959B - 用于血样中的颗粒分析的流通池系统和方法 - Google Patents
用于血样中的颗粒分析的流通池系统和方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及用于分析含有颗粒的样品的装置、系统、组合物和方法。在一些方面，所述系统包括可为视觉分析仪的分析仪。在一个方面，本发明涉及颗粒成像系统，所述颗粒成像系统包括使含有颗粒的样品流过的流通池，以及捕获图像以用于样品的图像分析的高光学分辨率成像设备。本文公开了本发明的其他组合物、方法和特征。
Description
相关专利申请的交叉引用
本申请要求提交于2013年3月15日的美国临时专利申请No.61/799,152的优先权权益，并且要求提交于2014年3月17日的美国专利申请No.14/216,533的优先权，这些专利申请的内容以引用方式并入本文。本申请还涉及美国专利申请No.14/215,834、14/216,533、14/216,339、14/216,811和14/217,034；以及多个国际专利申请，2014年3月17日提交的国际专利申请No.PCT/US2014/030928，PCT/US2014/030850，和PCT/US2014/030851，以及2014年3月18日提交的国际专利申请No.PCT/US2014/030939和PCT/US2014/030942。这些提交文档中的每一者的内容均以引用方式并入本文。
背景技术
本发明涉及用于颗粒分析的装置、系统、组合物和方法的领域，所述颗粒分析包括使用全部或部分自动化的设备使流体样品中的颗粒成像以辨别和定量样品中的颗粒诸如血细胞。本发明还涉及可用于分析来自受试者的样品中的颗粒的颗粒和/或细胞内细胞器配向液(PIOAL)、用于制备所述液体的方法、以及使用所述液体检测和分析颗粒的方法。还公开了可用于进行基于图像的生物流体样品分析的组合物、系统、设备和方法。本发明的组合物、系统、设备和方法也可用于检测、计数和表征生物流体中的颗粒诸如红血细胞、网织红细胞、有核红血细胞、血小板，并且可用于基于图像和形态的白血细胞分类计数、分类、次类划分、表征和/或分析。
血细胞分析是用以提供患者健康状态的概况的最常用的医学测试之一。可从患者身体抽取血样并保存在含有防止凝血的抗凝血剂的试管中。全血样通常包含三种主要类别的血细胞，包括红血细胞(红血球)、白血细胞(白血球)和血小板(凝血细胞)。每一类别可进一步划分成多个成员的亚类别。例如，五种主要类型或亚类别的白血细胞(WBC)具有不同的形状和功能。白血细胞可包括中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞。还有红血细胞类型的亚类别。样品中的颗粒的外观可根据病理条件、细胞成熟度和其他原因而有所差异。红血细胞亚类别可包括网织红细胞和有核红血细胞。
可手动地或使用自动分析仪进行血细胞计数来估计RBC、WBC或血小板浓度。当手动地进行血细胞计数时，将一滴血液施加到显微镜载片上作为薄层涂片。传统上，使用显微镜载片上血液的干燥染色涂片的手动检查来确定五种类型的白血细胞的数量或相对量。使用组织学染料和染液对细胞或细胞结构进行染色。例如，瑞氏染液是用于对血液涂片染色以在光学显微镜下检查的组织学染液。可使用自动化分析仪获得全血细胞计数(CBC)，其中一种类型的自动化分析仪是基于颗粒或细胞沿着小管穿过感测区时的阻抗或动态光散射，对血样中的不同颗粒或细胞的数量进行计数。自动化CBC可采用仪器或方法来区分包括RBC、WBC和血小板(PLT)的不同类型的细胞，这些细胞可单独地进行计数。例如，要求最小粒度或体积的计数技术可用于仅对大细胞计数。血液中的某些细胞诸如异常细胞可能不能被正确地计数或识别。彼此附着的小细胞可能被错误地计数为大细胞。当怀疑存在错误计数时，可能需要对仪器的结果进行人工复核以验证并识别细胞。
自动化血细胞计数技术可涉及流式细胞术。流式细胞术涉及提供窄流路，并且对单个血细胞的通过进行感测和计数。已使用流式细胞方法来检测悬浮于流体中的颗粒，诸如血样中的细胞，并且针对颗粒类型、尺度和体积分布来分析颗粒以便推断血样中的各自的颗粒类型或颗粒体积的浓度。用于分析悬浮于流体中的颗粒的合适方法的例子包括沉降、显微表征、基于阻抗和动态光散射计数。这些工具易出现测试误差。另一方面，颗粒类型和浓度的准确表征在诸如医学诊断的应用中可能是关键的。
在基于成像的计数技术中，使用耦合到数码相机的显微镜物镜镜头捕获可穿过观察区的制备样品的像素数据图像。像素图像数据可使用数据处理技术进行分析，并且也显示于监视器上。
具有流通池的自动化诊断系统的各方面在授予Turner等人的美国专利No.6,825,926、以及均授予Kasdan等人的美国专利No.6,184,978、6,424,415、和6,590,646中有所公开，所述专利据此以引用方式并入如同在本文完全地阐述。
已使用利用动态光散射或阻抗的自动化系统来获得全血细胞计数(CBC)：总白血细胞计数(WBC)、红血细胞的总细胞体积(RBC分布)、血红蛋白HGB(血液中的血红蛋白的量)；平均细胞体积(MCV)(红细胞的平均体积)；MPV(平均PLT体积)；血细胞比容(HCT)；MCH(HGB/RBC)(每个红血细胞的血红蛋白的平均量)；以及MCHC(HGB/HCT)(细胞中的血红蛋白的平均浓度)。已使用自动化或部分自动化方法来促进白血细胞五部分分类计数和血样分析。
虽然此类当前已知的颗粒分析系统和方法以及相关医学诊断技术可为医生、临床医生和患者提供实际益处，但还需要进一步改进。本发明的实施例为这些尚未解决的需求中的至少一些提供解决方案。
发明内容
本发明的实施例涉及用于分析含有颗粒的制备样品的装置、系统、组合物和方法。在一些方面，所述系统包括可为视觉分析仪的分析仪。在一些方面，所述装置包含视觉分析仪和处理器。在一个方面，本发明涉及自动化颗粒成像系统，其中使含有所关注颗粒的液体样品流过具有观察口的流通池，高光学分辨率成像设备通过该观察口来捕获图像。在一些方面，高光学分辨率成像设备包括相机诸如数码相机。在一个方面，高光学分辨率成像设备包括物镜镜头。
流通池耦合到样品流体源诸如制备样品，并且耦合到颗粒和/或细胞内细胞器配向液(PIOAL)源。所述系统允许捕获流动的样品中的颗粒的聚焦图像。在一些实施例中，图像可用于自动化、高通量方法以对颗粒进行分类和次类划分。示例性视觉分析仪可包括处理器以促进图像的自动化分析。在一些情况下，视觉分析仪可用于本发明的方法以提供自动化的基于图像的WBC分类计数或其他血样颗粒分析方案。在一些情况下，本发明的方法涉及自动识别形态异常以便对受试者是健康还是具有疾病、病症、异常和/或感染进行确定、诊断、预后、预测和/或支持诊断，并且监测受试者对治疗响应还是不响应。
在一个方面，本发明的实施例涵盖使用被配置用于实现结合的粘度和几何流体聚焦的颗粒分析系统使颗粒成像的方法。所述颗粒可包含在血液流体样品的第一和第二样品流体内。示例性方法可包括使鞘液沿着颗粒分析仪的流通池的流路流动，并且鞘液可具有与血液流体样品的粘度不同的粘度。在一些情况下，鞘液具有与样品流体粘度相差粘度差的鞘液粘度，并且粘度差具有在预定的粘度差范围内的值。方法还可包括将第一样品流体从样品流体注射管注射到流通池内的流动鞘液中以便提供具有邻近注射管的第一厚度的样品流体料流。流通池的流路可具有流路尺寸上的降低使得样品流体料流的厚度从初始厚度降低到邻近图像捕获位点的第二厚度。方法还可包括在流通池的图像捕获位点处使来自第一样品流体的第一多个颗粒成像，以及通过终止向流动鞘液中注射第一样品流体并向流动鞘液中注射第二样品流体来引发样品流体瞬变。而且，方法可包括在流通池的图像捕获位点处使来自第二样品流体的第二多个颗粒成像。使第二多个颗粒成像可基本上在样品流体瞬变之后并在使第一多个颗粒成像的4秒内进行。在一些情况下，流路尺寸上的降低由具有近侧厚度的近侧流路部分和具有小于近侧厚度的远侧厚度的远侧流路部分限定。样品流体注射管的下游端可定位在近侧流路部分的远侧。鞘液与血液流体样品之间的粘度差，与流路尺寸上的降低相结合，可有效地在图像捕获位点处流体聚焦第一样品流体和第二样品流体，同时鞘液中的粘度剂保持第一样品流体和第二样品流体中的细胞的活力，从而当细胞从样品流体料流延伸到流动鞘液中时细胞的结构和内容物保持完整。
在一些方法中，注射管可包括内部体积，其基于注射管的流动区横截面与流通池的流动区横截面的比率、注射管的流动区横截面与流通池的外径的比率、或注射管的流动区横截面与样品料流的流动区横截面的比率。在一些情况下，流路尺寸上的降低可由流路的相对壁限定，所述相对壁沿着流路径向地向内成角度，总体上关于横向平面对称，所述横向平面平分样品流体料流第一厚度和第二厚度。在一些情况下，流路尺寸上的降低的对称性能有效地将血液流体样品中的红血细胞成像取向失准限制到小于约20％。在一些情况下，血液流体样品包括球形颗粒，并且样品流体与鞘液之间的粘度差能有效地在流通池的图像捕获位点处将球形颗粒的细胞内细胞器配向在焦平面内。在一些情况下，样品流体注射管的远侧部分定位在离图像捕获位点的轴向分隔距离处，并且轴向分隔距离具有约16mm至约26mm范围内的值。在一些情况下，注射管具有小于约30μL的内部体积。
在一些方法中，注射管包括具有第一流动横截面积的近侧部分和具有第二流动横截面积的远侧部分，并且近侧部分的流动横截面积大于远侧部分的流动横截面积的1.5倍。在一些方法中，注射管具有设置在近侧部分与远侧部分之间的中心部分，所述中心部分具有第三流动横截面，并且第三流动横截面大于第一流动横截面和第二流动横截面。
在一些方法中，样品流体注射管的远侧部分包括具有高度和宽度的出口，并且所述高度可小于所述宽度。在一些情况下，高度为约150μm并且宽度为约1350μm。在一些情况下，高度具有约50μm至约250μm范围内的值并且宽度具有约500μm至约3000μm范围内的值。
在一些方法中，鞘液流速与样品流体流速的比率为约70。在一些情况下，鞘液流速与样品流体流速的比率为约200。在一些情况下，鞘液具有约35μL/s的流速并且样品流体具有约0.5μL/s的流速。在一些情况下，在图像捕获位点处样品流体具有约20与200毫米/秒之间的速度。在一些情况下，在邻近注射管管出口的流路位置处鞘液速度和流体样品速度可不同，并且在图像捕获位点处鞘液速度和流体样品速度可相同。在一些情况下，样品流体料流的第一厚度为约150μm，例如在样品流体离开注射管的情况下。在一些情况下，样品流体料流的第二厚度在约2μm至约10μm的范围内，例如在样品流体料流流过图像捕获位点的情况下。在一些情况下，样品流体料流的第二厚度在约2μm至约4μm的范围内。在一些情况下，样品流体料流的第一厚度与样品流体料流的第二厚度的比率具有约20:1至约70:1范围内的值。在一些情况下，样品流体料流的第一厚度与样品流体料流的第二厚度的比率具有约5:1至约200:1范围内的值。在一些情况下，近侧流路部分的近侧厚度与远侧流路部分的远侧厚度的比率具有选自10:1、15:1、20:1、25:1、30:1、35:1、40:1、45:1、50:1、55:1、60:1、65:1、70:1、75:1、80:1、85:1、90:1、95:1、100:1、105:1、110:1、115:1、125:1、130:1、140:1、150:1、160:1、170:1、180:1、190:1和200:1的几何变薄值。在一些情况下，流通池具有约50:1的最小压缩比和约125:1的最大压缩比。
在一些方法中，流通池被取向成使得在流通池内流动的样品流体和鞘液克服重力流动。在一些情况下，流通池被取向成使得在流通池内流动的样品流体和鞘液在重力作用下流动。示例性方法还可包括从流动样品流体中移除气泡。在一些情况下，在将第一样品流体从样品流体注射管注射到流动的鞘液中后约1至3秒内，第一样品流体达到稳定状态。在一些情况下，在将第一样品流体从样品流体注射管注射到流动的鞘液中后小于1秒内，第一样品流体达到稳定状态。在一些情况下，在将第一样品流体从样品流体注射管注射到流动的鞘液中后约1.8秒内，第一样品流体达到稳定状态。在一些情况下，样品流体穿过流通池的通过时间在约1至4秒范围内。在一些情况下，样品流体穿过流通池的通过时间在约2至4秒范围内。在一些情况下，图像捕获位点具有介于约150μm×150μm与400μm×400μm之间的视野。在一些情况下，第一样品流体具有约50至约150μL范围内的体积。在一些情况下，注射管的近侧部分耦合到样品入口配件的样品口。
在另一方面，本发明的实施例涵盖执行结合的粘度和几何流体聚焦以便使血液流体样品中的颗粒成像的颗粒分析系统。所述颗粒可包含在第一样品流体和第二样品流体内。示例性系统可包括具有被配置成用于运输鞘液流的流路的流通池。鞘液可具有与血液流体样品的粘度不同的粘度。在一些情况下，鞘液粘度大于血液流体样品粘度。在一些情况下，鞘液具有与样品流体粘度相差粘度差的鞘液粘度，并且粘度差具有在预定的粘度差范围内的值。系统还可包括与流路流体连通的样品流体注射系统。样品流体注射系统可被配置成用于将样品流体注射到流通池内的流动鞘液中以便提供具有邻近注射管的第一厚度的样品流体料流。流通池的流路可具有流路尺寸上的降低使得样品流体料流的厚度从初始厚度降低到邻近图像捕获位点的第二厚度。此外，系统可包括与图像捕获位点配向的图像捕获设备以便在流通池的图像捕获位点处使来自第一样品流体的第一多个颗粒成像。而且，系统可包括与样品流体注射器系统和图像捕获设备耦合的处理器。处理器可被配置成终止向流动鞘液中注射第一样品流体并向流动鞘液中注射第二样品流体使得样品流体瞬变被引发，以及在样品流体瞬变后并在使第一多个颗粒成像的4秒内，在流通池的图像捕获位点处使来自第二样品流体的第二多个颗粒成像。在示例性系统中，鞘液与血液流体样品之间的粘度差，与流路尺寸上的降低相结合，能有效地在流通池的图像捕获位点处流体聚焦第一样品流体和第二样品流体，同时鞘液中的粘度剂保持第一样品流体和第二样品流体中的细胞的活力，从而当细胞从样品流体料流延伸到流动鞘液中时细胞的结构和内容物保持完整。
在一些系统中，注射管包括内部体积，其基于注射管的流动区横截面与流通池的流动区横截面的比率、注射管的流动区横截面与流通池的外径的比率、或注射管的流动区横截面与样品料流的流动区横截面的比率。在一些情况下，流路尺寸上的降低由流路的相对壁限定，所述相对壁沿着流路径向地向内成角度，总体上关于横向平面对称，所述横向平面平分样品流体料流第一厚度和第二厚度。在一些情况下，流路尺寸上的降低的对称性能有效地将血液流体样品中的红血细胞成像取向失准限制到小于约20％。在一些情况下，样品流体注射管的远侧部分定位在离图像捕获位点的轴向分隔距离处，并且轴向分隔距离具有约16mm至约26mm范围内的值。在一些情况下，注射管包括具有第一流动横截面积的近侧部分和具有第二流动横截面积的远侧部分，并且近侧部分的流动横截面积大于远侧部分的流动横截面积的1.5倍。在一些情况下，样品流体穿过流通池的通过时间在约1至4秒范围内。在一些情况下，样品流体穿过流通池的通过时间在约2至4秒范围内。在一些情况下，流通池被配置成在第一流动方向上接收从鞘液源到流路的鞘液，所述第一流动方向垂直于沿着成像位点处的流路的鞘液的第二流动方向。在一些情况下，流通池包括图像捕获设备的自动对焦靶标。
当结合附图来考虑时通过参考下文的具体实施方式，本发明实施例的上述特征和许多其他特征以及伴随的优点将会变得显而易见和得到进一步地理解。
附图说明
图1为部分剖面且未按比例绘制的示意图，示出了示例性流通池、自动对焦系统和高光学分辨率成像设备的操作方面以便使用数字图像处理进行样品图像分析。
图2为根据示例性实施例的流通池的透视图。
图3为沿着图2中所示流通池的线3-3的纵向正中剖面图。
图3A和图3B提供了根据本发明实施例的流通池的另外的剖面图。
图4描绘了根据本发明实施例的分析仪系统的各方面。
图4A、图4B-1和图4B-2描绘了根据本发明实施例的流通池的各方面。
图4A-1和图4A-2描绘了根据本发明实施例的分别在插管出口和图像捕获位点处的流通池内的鞘液(例如，PIOAL)包层和样品流体料流尺寸的剖面图。
图4C-4G、图4C-1和图4D-1描绘了根据本发明实施例的插管构形的各方面。
图4H描绘了根据本发明实施例的流通池的各方面。
图4I和图4J描绘了根据本发明实施例的相对于重力的流通池中的流体流的各方面。
图4K和图4L描绘了根据本发明实施例的在图像捕获位点处的流通池内的鞘液和样品流的各方面。
图4L-1描绘了根据本发明实施例的在流通池内的流体流速度的各方面。
图4M和图4N描绘了根据本发明实施例的细胞内配向和成像的各方面。
图4O描绘了根据本发明实施例的PIOAL对颗粒和/或细胞内颗粒配向和成像的效应的各方面。在使用PIOAL获得的图像相对于使用非PIOAL鞘液获得的图像的该比较中，可以看出PIOAL的使用得到了更多焦点内细胞内容物，诸如裂片、细胞质和/或颗粒。
图4R示出了根据本发明实施例的使用流通池构形和鞘液组合物获得的某些颗粒配向结果。
图4P和图4Q示出了使用PIOAL获得的图像相对于使用标准鞘液获得的图像的比较。可以看出PIOAL的使用得到了改善的RBC配向。
图5描绘了根据本发明实施例的颗粒成像方法的各方面。
图6描绘了根据本发明实施例的颗粒成像方法的各方面。
图7和图8描绘了根据本发明实施例的流动料流应变速率的各方面。
图9A和图9B描绘了根据本发明实施例的自动对焦靶标的各方面。
图10和图11描绘了根据本发明实施例的自动对焦靶标的各方面。
图12A和图12B描绘了根据本发明实施例的自动对焦靶标的各方面。
图13A、图13B和图13C描绘了根据本发明实施例的流通池温度传感器的各方面。
图13D描绘了根据本发明实施例的流通池气泡移除技术的各方面。
具体实施方式
本发明涉及用于分析含有颗粒的样品的装置、系统、组合物和方法。在一个实施例中，本发明涉及包括分析仪的自动化颗粒成像系统，所述分析仪可为例如视觉分析仪。在一些实施例中，视觉分析仪还可包括处理器以促进图像的自动化分析。
根据本发明，提供了包括视觉分析仪的系统以便获得包含悬浮于液体中的颗粒的样品的图像。所述系统可用于例如表征生物流体中的颗粒，诸如检测和定量红血球、网织红细胞、有核红血细胞、血小板和白血细胞，包括白血细胞分类计数、分类和次类划分以及分析。还可以想到其他类似用途，诸如表征来自其他流体的血细胞。
辨别血样中的血细胞是主题特别适用的示例性应用。通过自动化技术制备样品并以薄带形样品料流形式呈递给高光学分辨率成像设备以在带形样品料流流过视野时使其周期性地成像。可使用像素图像数据编程处理技术仅仅自动地或在有限人工辅助的情况下将颗粒(诸如血细胞)的图像彼此区分开、分类、次类划分和计数，以识别和计数细胞或颗粒。除了细胞图像(其可在颗粒异常或关键特征的情况下存储和供使用)之外，输出数据包括所记录样品图像中区分开的每个特别种类和/或亚种类的细胞或颗粒的事件的计数。
可进一步处理存在于每个图像中的不同颗粒的计数，例如用于积累整体样品中每个区分开的种类和/或亚种类的细胞的准确且统计上显著的比率。可稀释用于视觉辨别的样品，但在稀释样品中每个种类和/或亚种类中的细胞的比例依旧，特别是在已处理多个图像后。
本文所公开的装置和方法可用于基于视觉区别来辨别和定量样品中的细胞。样品可为生物样品，例如包含白血细胞的体液样品，包括但不限于血液、血清、骨髓、灌洗液、渗漏液、渗出液、脑脊液、胸膜液、腹膜液和羊膜液。在一些实施例中，样品可为固体组织样品，例如活检样品，其经过处理以制备细胞悬浮液。样品也可为通过处理粪便样品获得的悬浮液。样品也可为包含颗粒的实验室或生产线样品，诸如细胞培养样品。术语样品可用来指从患者或实验室获得的样品或者其任何级分、部分或等分试样。在一些方法中可将样品稀释、分成多个部分、或染色。
在一个方面，本发明的系统、组合物和方法提供液流中的细胞的令人惊讶地高质量的图像。在一个方面，视觉分析仪可用于本发明的方法以提供自动化的基于图像的WBC分类计数。在某些实施例中，本发明的方法涉及自动识别视觉区别，包括形态特征和/或异常，以便对受试者是健康还是具有疾病、病症、异常和/或感染和/或对治疗响应还是不响应进行确定、诊断、预后、预测和/或支持诊断。在一些实施例中，所述系统还可包括颗粒计数器。应用包括对流体样品诸如血样中的细胞进行分类和/或次类划分和计数。还可以想到用于计数另外类型的颗粒和/或其他流体样品中的颗粒的其他类似用途。本发明的系统、组合物和方法可用于使用任何合适的自动化颗粒识别算法对图像实时分类和次类划分以及观察。可存储每个样品的捕获图像以供之后观察。
在另一方面，本发明的装置、组合物和方法提供令人惊讶地更准确的基于图像的细胞分类和次类划分以及标记，这与使用当前自动化分析仪时的人工复核率相比降低了人工复核率。所述系统、组合物和方法降低了人工复核率并且允许在仪器上进行人工复核。另外，本发明的系统、组合物和方法还降低了在自动分析期间被标记为需要人工复核的样品的百分比。
本发明还涉及这样的系统、方法和组合物，其用于将全血细胞计数(CBC)计数器与分析仪诸如视觉分析仪相结合，以便获得CBC以及基于图像的扩充白血细胞分类计数和基于图像的扩充血小板计数，从而扩展用于计数血小板的有效检测范围。
因此，在一些实施例中，本发明提供用于分析包含颗粒例如血细胞的样品的装置和方法。根据本发明，提供了视觉分析仪以便获得包含悬浮于液体中的颗粒的样品的图像。在一些实施例中，视觉分析仪包括流通池和自动对焦部件，其中使包含所关注颗粒的液体样品流过具有观察口的流通池，耦合到物镜镜头的相机通过所述观察口捕获颗粒的数字图像。流通池耦合到样品流体诸如稀释和/或处理过的血样或如本文所述的其他体液样品源，并且耦合到澄清鞘液或颗粒和/或细胞内细胞器配向液(PIOAL)源。
在一个实施例中，装置还包括具有至少一个检测范围的颗粒计数器、以及分析仪和处理器。分析仪和处理器被配置成提供另外的信息以校正与颗粒计数器相关的计数、分类和次类划分误差，并且进一步确定样品中不同种类和/或亚种类颗粒的准确颗粒计数或浓度。
本发明提供在进行基于图像的样品分析的过程中可用于颗粒和/或细胞内细胞器配向的方法和组合物。在一些实施例中，本发明涉及用于结合计数和成像的系统的方法和组合物，所述系统有能力执行全血细胞计数(CBC)和基于图像的扩充白血细胞(WBC)分类，能够识别和计数细胞类型，诸如WBC、RBC和/或血小板，包括例如中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、网织红细胞、有核RBC、母细胞、早幼粒细胞、中幼粒细胞或晚幼粒细胞，并且有能力提供基于图像的WBC计数和形态、红血细胞(RBC)计数和形态以及血小板(PLT)计数和形态的信息。
在其他实施例中，本发明涉及可用于如本文所述的基于图像的颗粒分析的PIOAL。血样中的细胞种类和/或亚种类计数在本发明中用作可进行分析的该类样品的非限制性实例。在一些实施例中，存在于样品中的细胞也可包括细菌或真菌细胞以及白血细胞、红血细胞和/或血小板。在一些实施例中，可分析从组织或抽吸物获得的颗粒悬浮液。
辨别血样中的血细胞是主题特别适用的示例性应用。通过自动化技术制备样品并以带形样品料流形式呈递给高光学分辨率成像设备以在样品流过视野时使其周期性地成像。可使用像素图像数据编程处理技术仅仅自动地或在有限人工辅助的情况下将颗粒(诸如血细胞)的图像彼此区分开、分类、次类划分和/或计数，以识别和计数细胞或颗粒。除了细胞图像(其可在异常或关键特征的情况下存储和供使用)之外，输出数据包括所记录样品图像中区分开的每个特别种类和/或亚种类的细胞或颗粒的事件的计数。可进一步处理存在于每个图像中的不同颗粒的计数，例如用于积累整体样品中每个区分开的种类和/或亚种类的细胞的准确且统计上显著的成比例比率或其函数。也可高度稀释用于视觉辨别的样品，但在稀释样品的分布中每个种类和/或亚种类中的细胞的比例依旧，特别是在已处理多个图像后。
在一些方面，以自动化方式呈现、成像和分析样品。就血样而言，可用合适的稀释剂或盐水溶液充分稀释样品，所述稀释剂或盐水溶液降低了未稀释或稀释度较低的样品中一些细胞的视线可能被其他细胞遮挡的程度。可用增强一些细胞方面的对比度的试剂来处理细胞，例如使用透化剂使细胞膜具有透性以及使用组织学染液粘附于结构中并显示结构，诸如颗粒和细胞核。在一些实施例中，可能有利的是对样品的等分试样染色以便计数和表征包括网织红细胞、有核红血细胞和血小板的颗粒，并且进行白血细胞分类、表征和分析。在其他实施例中，可在引入流通池和成像之前稀释包含红血细胞的样品。
用于样品稀释、透化和组织学染色的样品制备装置和方法的详情一般使用由一个或多个可编程控制器操作的精密泵和阀门来实现，并且不是本发明的重点。例子可见于与可编程控制相关的转让给国际遥控影像系统有限公司(International Remote ImagingSystems,Inc.)的专利，诸如US 7,319,907。同样，用于按照其属性诸如相对尺寸和颜色区分某些细胞种类和/或亚种类的技术可见于与白血细胞有关的US 5,436,978。这些专利的公开内容据此以引用方式并入。
为了促进颗粒诸如细胞被分类和/或次类划分的容量、速度和效力，有利的是提供血细胞的清晰高质量图像以便通过数据处理系统进行自动分析。根据本发明，将制备的样品料流布置于在流通池的相对壁之间具有稳定位置的薄带中。样品料流的定位及其变平为薄带形状可通过引入流通池中的粘度与样品流体不同且流过对称流动通道的多层PIOAL之间的液流实现。
PIOAL具有合适的粘度和密度，并且在样品引入流通池时的流速为使得样品流体变平为薄带的流速。将带形样品料流连同PIOAL一起输运，以在观察口前方通过，在观察口处物镜镜头和光源被布置成允许观察带形样品料流。引入样品流体，例如在PIOAL的流路对称地变窄的点处注射。因此，样品流体料流变平并伸展为薄带。本发明的PIOAL可作为鞘液与本发明的任何视觉分析仪一起使用。在一个实施例中，可将PIOAL引入流通池的末端以沿着样品流体朝排放口输运。
观察区中的带形样品料流的尺寸受到PIOAL流路的几何变薄以及样品流体和PIOAL的差分线速度影响，从而导致带形样品料流变薄和伸展。样品比PIOAL的初始差分线速度可在0.5:1至5:1的范围内。可通过将深度降低约10:1、15:1、20:1、25:1、30:1、35:1、40:1、45:1、50:1、55:1、60:1、65:1、70:1、75:1、80:1、85:1、90:1、95:1、100:1、105:1、110:1、115:1、125:1、130:1、140:1、150:1、160:1、170:1、180:1、190:1或200:1的系数，使PIOAL流路横截面变薄。在一个实施例中，几何变薄为40:1。在一个实施例中，几何变薄为30:1。考虑的因素是流过流通池的通过时间、所需的样品通量速率、实现相当于粒度的带形样品料流厚度、获得颗粒和细胞器的配向、实现颗粒内容物在焦点内、使压力、流量和粘度平衡在操作限值内、优化带形样品料流厚度、获得所需线速度、可制造性考虑因素以及所需样品和PIOAL的体积。
可选择插管的长度和体积以及横截面变平以缩短样品流动不稳定性的时间段，从而提高通量。在一些实施例中，流动不稳定性的时间段可小于约3、2.75、2.5、2.25、2、1.75、1.5、1.25秒或小于约1秒。较小插管体积也可降低在样品运行之间清洗插管所需的时间和稀释剂的体积。在一些实施例中，流过流通池的通过时间为1、2、3或4秒，或这些时间任何两者之间的任何范围。在一些实施例中，通过时间可小于4、3或2秒。
样品流体和PIOAL的粘度和流速以及流通池的轮廓被布置成使得PIOAL流将样品流变平和伸展为始终在可靠位置处流过观察区的平带。样品流体料流可被压缩为大约2至3μm的流体流厚度。若干血细胞类型具有大于料流厚度的直径。在平行于流动方向的方向的剪切力导致颗粒在成像条件下在高光学分辨率成像设备的焦平面中的图像投影增大和/或导致颗粒内结构例如细胞内结构、细胞器或裂片定位、再定位和/或更好地定位成基本上平行于流动的方向。高光学分辨率成像设备视野深度为最多至7μm，例如1-4μm。
连同带形样品料流一起输运的PIOAL的流动横截面始终经过在观察口前方的观察区，物镜镜头被导向穿过该观察口。物镜镜头可为高光学分辨率成像设备或数字图像捕获设备的物镜部件。带形样品料流沿着在流通池内的已知且可重复位置处，例如在离流通池的两个壁的已知且可重复距离处穿过观察区的路径，并在下游排放。
当带形样品料流在观察口的前方输运通过观察区时，通过分析仪的检测区段检测来自样品中的颗粒的光学信息，从而生成来自样品中所含的颗粒/细胞的数据。该分析仪的使用允许捕获、处理、分类和次类划分以及计数样品中所含的细胞和/或颗粒。PIOAL液体可通过添加粘度改性剂、缓冲剂、pH调节剂、抗微生物剂、离子强度改性剂、表面活性剂和/或螯合剂来制备。本发明中的分析仪的示例性功能部件和/或结构可包括例如采集和/或处理来自图像分析、样品染色处理、图像处理、和/或颗粒图像识别、计数、和/或分类和次类划分的数据的能力。
在一个实施例中，本发明基于这样的令人惊讶且出人意料的发现：在PIOAL中加入合适量的粘度剂显著改善了流通池中的颗粒/细胞配向，从而得到更高百分比的焦点内细胞或细胞组分、以及流动的细胞和/或颗粒的更高质量图像。粘度剂的加入增加了对细胞如RBC的剪切力，这改善了细胞在基本上平行于流动方向的平面中的配向，从而导致图像优化。这还导致颗粒内结构诸如细胞内结构、细胞器或裂片基本上平行于流动方向的定位、再定位和/或更好定位，从而导致图像优化。粘度剂还降低了细胞的失准，所述细胞一般为但不限于直径比流动料流更小的细胞。
直径比流动料流更小的细胞例如红血细胞的配向可通过例如增加PIOAL的粘度或通过增加流速比率来获得。这导致RBC平行于流动的方向并平行于焦平面FP配向(例如，如图4K中所描绘)。在一些实施例中，RBC失准的降低和/或RBC配向的增加通过增加PIOAL的粘度来实现。
带形样品料流厚度可受到样品流体和PIOAL的相对粘度和流速影响。样品源和/或PIOAL源(例如包括精密排量泵)可被配置成以可控制流速提供样品和/或PIOAL以便优化带形样品料流的尺度，也就是优化为至少与高光学分辨率成像设备或数字图像捕获设备的视野一样宽的薄带。
连同带形样品料流一起输运的PIOAL的流动横截面始终经过在观察口前方的观察区，高光学分辨率成像设备被导向穿过该观察口。带形样品料流沿着在离流通池的前壁和后壁任一者的已知且可重复距离处穿过观察区的路径，并在该路径下游排放。
术语高光学分辨率成像设备可包括能够获得具有足够视觉区别以区分形态特征和/或变化的颗粒图像的设备。示例性高光学分辨率成像设备可包括具有1μm或更低(包括例如0.4至0.5μm，诸如0.46μm)的光学分辨率的设备。
在一些实施例中，在本发明的任何组合物和/或方法中获得的图像可为数字化图像。在一些实施例中，获得的图像为显微镜图像。在某些实施例中，图像可手动地获得。在其他实施例中，用于获得图像的工序的至少一部分为自动化的。在一些实施例中，图像可使用视觉分析仪获得，所述视觉分析仪包括流通池、高光学分辨率成像设备或数字图像捕获设备，任选地具有自动对焦结构。
在一个实施例中，图像提供与细胞的胞质溶胶、细胞核和/或核组分相关的信息。在一个实施例中，图像提供与细胞的颗粒组分和/或其他形态特征相关的信息。在一个实施例中，图像提供与细胞的胞质溶胶、细胞核和/或颗粒组分相关的信息。颗粒和/或细胞核图像和/或特征两者单独地或彼此结合地决定细胞分类和次类划分。
在本发明方法的一个方面，与颗粒造影剂组合物接触和/或成像的细胞为有核红血细胞。在又一个方面，本发明的方法涉及用于执行基于图像的红血细胞分类和次类划分的方法，所述方法包括：a)使红血细胞的一部分成像；以及b)确定成像的红血细胞的形态。如本文所用，红血细胞(RBC)可包括例如正常或异常红血细胞、网织红细胞、有核红血细胞和/或感染疟疾的细胞。在一些实施例中，使用本发明的装置诸如包括颗粒计数器、视觉分析仪和处理器的装置进行成像。
如本文所用，示例性全血细胞计数(CBC)可包括医生或其他医学专业人员通常所要求的测试板，所述测试板提供与患者血样中的颗粒和/或细胞相关的信息。在血流中循环的示例性细胞一般可分成三类：包括但不限于例如白血细胞(例如，白血球)、红血细胞(例如，红血球)和血小板(例如，凝血细胞)。
如本文所用，异常高或低的计数可指示疾病、失调和/或病症的存在。因此，CBC是医学上常常执行的血液检查之一，因为其可提供患者总体健康状态的概况。因此，CBC通常在年度体检期间执行。
如本文所用，通常采血师从受试者采集血样，一般将血液抽入通常含有阻止其凝血的抗凝血剂(例如，EDTA，有时是柠檬酸盐)的试管中。然后将样品送往实验室。有时使用巴斯德吸管从手指针刺处吸出样品，以便立即通过自动化计数器处理。在一个实施例中，在颗粒包围在鞘液或PIOAL中时采集颗粒图像。在某些实施例中，可在用患者血液样品制备的玻片(血膜或外周血涂片)上在显微镜下检查血样。在某些实施例中，通过自动化分析仪执行全血细胞计数。
如本文所用，一般来讲，血液分析仪可通过窄管子抽吸非常少量的样本。传感器可检测通过管子的细胞的计数和/或数量，并且可识别细胞的类型。示例性传感器可包括光(例如，可见光、UV或IR)和/或电阻抗的检测器。示例性检测参数可包括尺寸、体积和/或细胞特征。在某些实施例中，传感器可检测约200nm至约10000nm范围内的波长谱中的可见和不可见光。在某些实施例中，传感器可检测约380nm与约760nm之间的波长。
如本文所用，血细胞计数的数据/参数可包括例如总红血细胞；血红蛋白-血液中的血红蛋白的量；血细胞比容或红细胞压缩体积(PCV)；红细胞平均体积(MCV)-红细胞的平均体积(基于该值高于或低于预期正常范围，将贫血归类为小红细胞性贫血或巨红细胞性贫血。可影响MCV的其他病症包括地中海贫血、网状细胞增多和酒精中毒)；红细胞平均血红蛋白量(MCH)-以皮克计的每个红血细胞的血红蛋白的平均量；红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)-细胞中的血红蛋白的平均浓度；红血细胞分布宽度(RDW)-RBC群体的细胞体积的变化；总白血细胞；中性粒细胞(可指示细菌感染，通常在急性病毒感染中增加)。由于细胞核的分段外观，中性粒细胞有时称为“seg”。不太成熟的中性粒细胞的细胞核不分段，但具有杆状或细长形状。不太成熟的中性粒细胞(最近从骨髓释放到血流中的那些)称为“band”。血细胞计数的其他数据/参数也可包括例如淋巴细胞(例如，随着一些病毒感染诸如腺热以及在慢性淋巴细胞白血病(CLL)中增加，或因HIV感染而减少)；单核细胞(可在细菌感染、肺结核、疟疾、落基山斑疹热、单核细胞白血病、慢性溃疡性结肠炎和局限性肠炎中增加；嗜酸性粒细胞(例如，在寄生虫感染、哮喘或变态反应中增加)；嗜碱性粒细胞(例如，在骨髓相关病症诸如白血病或淋巴瘤中增加。
如本文所用，血细胞计数的数据/参数也可包括例如与血小板相关的数据，包括血小板数量，与其在血液中的尺寸和尺寸范围相关的信息；血小板平均体积(MPV)-血小板的平均尺寸的量度。
在本发明方法的另一个方面，与颗粒造影剂组合物接触和/或成像的细胞为异常细胞，诸如感染疟疾的细胞、非典型淋巴细胞。在本发明的一些方面，细胞为异常细胞，其可用于对病症、疾病、感染和/或综合征进行识别、预测、诊断、预后或支持诊断。
在本发明方法的另一个方面，细胞为血小板。
除非另外明确指明，本发明中提及的“颗粒”应当理解为涵盖分散于流体中的任何离散或有形对象。如本文所用，“颗粒”可包括生物流体中的所有可测量且可检测(例如，通过图像和/或其他可测量参数)的组分。颗粒可为任何材料、任何形状和任何尺寸。在某些实施例中，颗粒可包括细胞。颗粒的例子包括但不限于细胞，包括血细胞、胎儿细胞、上皮细胞、干细胞、肿瘤细胞，或细菌、寄生生物，或任何上述物质的碎片或生物流体中的其他碎片。血细胞可为任何血细胞，包括可能存在于生物流体中的任何正常或异常、成熟或未成熟细胞，例如，红血细胞(RBC)、白血细胞(WBC)、血小板(PLT)和其他细胞。所述成员还包括未成熟或异常细胞。未成熟WBC可包括晚幼粒细胞、中幼粒细胞、早幼粒细胞和母细胞。除了成熟RBC之外，RBC的成员可包括有核RBC(NRBC)和网织红细胞。PLT可包括“巨大”PLT和PLT凝集块。血细胞和有形成分将在本发明别处进一步描述。
示例性颗粒可包括生物流体样品中的有形成分，包括例如球形和非球形颗粒。在某些实施例中，颗粒可包括非球形组分。非球形组分的图像投影可在高光学分辨率成像设备的焦平面中最大化。在某些实施例中，非球形颗粒配向在高光学分辨率成像设备的焦平面中(配向在基本上平行于流动方向的平面中)。在一些实施例中，对血小板、网织红细胞、有核RBC和WBC(包括中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞)以及未成熟WBC(包括母细胞、早幼粒细胞、中幼粒细胞或晚幼粒细胞)计数并作为颗粒进行分析。
如本文所用，可检测且可测量的颗粒参数可包括例如尺寸、形状、对称性、轮廓和/或其他特性的视觉指数和/或基于非图像的指数。
样品可为分离和/或制备的生物样品，包括例如体液样品、血液、血清、脑脊液、胸膜液、腹膜液、唾液、精液、泪液、汗液、母乳、羊膜液、灌洗液、骨髓穿刺液、渗漏液、渗出液、或从受试者获得的其他样品(例如，经处理产生细胞悬浮液的活检样品、或包含颗粒的实验室或生产线样品)。在一些实施例中，样品可为固体组织样品，例如活检样品，其经过处理以制备细胞悬浮液。样品也可为通过处理粪便样品获得的悬浮液。样品也可为包含颗粒的实验室、化学、工业或生产线样品，诸如细胞培养样品。术语样品可用来指从患者或实验室获得的样品或者其任何级分、部分或等分试样。在一些方法中可将样品稀释、分成多个部分、或用造影剂处理。
本文所公开的方法适用于来自广泛生物体的样品，所述生物体包括哺乳动物，例如人类、非人灵长类(例如，猴子)、马、牛或其他牲畜、狗、猫或其他作为宠物饲养的哺乳动物、大鼠、小鼠或其他实验室动物；禽类，例如鸡；爬行动物，例如短吻鳄；鱼类，例如鲑鱼或其他养殖品种；以及两栖动物。
可通过任何常规方法，例如排泄、抽取、收获、抽吸或活检，来获得样品。样品可来自被认为是健康的受试者，例如作为常规体检的一部分而采集的样品。样品也可来自具有紊乱、有紊乱风险或疑似具有紊乱的受试者。紊乱可由疾病、遗传异常、感染、损伤或未知原因引起。作为另外一种选择或除此之外，该方法可用于在治疗紊乱的过程期间监测受试者。如果存在对治疗和/或疗法的非响应性的迹象，临床医生可选择替代或辅助药剂。根据受试者的病症和具体紊乱(如果有的话)，可每日、每周、每月或每年采集一次(或两次、三次等等)样品。
颗粒可根据样品而有所差异。颗粒可为生物细胞，例如，血细胞、胎儿细胞、干细胞、肿瘤细胞或其碎片。在一些实施例中，颗粒可为感染因子，例如病毒或细菌。
本发明中提及的“血细胞”应当理解为涵盖可能存在于生物流体中的任何正常或异常、成熟或未成熟细胞，例如，红血细胞(RBC)、白血细胞(WBC)、血小板(PLT)和其他细胞。一般来讲，正常RBC、PLT和WBC分别具有6-8μm、2-3μm和8-15μm范围内的粒径。正常RBC、PLT和WBC分别以3.9-5.7×1012个细胞/L、1.4-4.5×1011个细胞/L、3.5-11×109个细胞/L的近似浓度范围存在于来自正常患者的全血样中。参见Barbara J.Bain,Blood Cells,APractical Guide,4th ed.,Blackwell Publishing,2007,34-36(Barbara J.Bain，《血细胞，实用指南》，第4版，布莱克威尔出版公司，2007年，第34-36页)。
提及的“有形成分”应当理解为涵盖存在于生物流体样品中的非流体成分。有形成分包括例如基于科学分类或生理功能的血细胞的类别，包括红血球(RBC)、白血球(WBC)和血小板(PLT)、WBC凝集块、白血球的亚类别，所述白血球的亚类别包括成熟淋巴细胞和未成熟白血球诸如单核细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞。可用于本文的“有形成分”也将包括颗粒诸如微生物、细菌、真菌、寄生生物或其碎片或其他细胞碎片。WBC的主要成员包括但不限于中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞。所述成员还包括未成熟或异常细胞。例如，未成熟WBC可包括晚幼粒细胞、中幼粒细胞、早幼粒细胞。除了成熟RBC之外，RBC的成员可包括有核RBC(NRBC)和网织红细胞。PLT可包括正常PLT和“巨大”PLT，“巨大”PLT的尺寸接近正常WBC的尺寸。本发明中提及的一个种类和/或亚种类颗粒的“成员”应当理解为涵盖一个种类或亚种类颗粒内的单独颗粒。
除非另外明确指明，本发明中提及的一个“种类”的颗粒应当理解为涵盖使用至少一种测量的、检测的或推导的检测标准诸如尺寸、形状、质构或颜色所检测的一群颗粒。在一些实施例中，通过本发明的装置计数的至少一个种类和/或亚种类颗粒的成员将为相同类型的有形成分。
此类颗粒可在“通道”中检测。本发明中提及的“通道”应当理解为涵盖颗粒计数器的一部分，该部分包括耦合到信号源的检测器，从而提供随满足至少一个通道检测标准的颗粒的较强或较弱检测而变化的输出。例如，通道检测标准可基于颗粒的尺寸或体积。在一些实施例中，颗粒计数器中的通道数量为一个。在一些其他实施例中，颗粒计数器中的通道数量为两个或更多个。
颗粒计数器的一个通道中检测到的一个种类(category)和/或亚种类(subcategory)颗粒可包括不同类别(class)和亚类别(subclass)的颗粒以及两种或更多种亚类别的颗粒的成群成员。本发明中提及的一个“种类”颗粒应当理解为涵盖与测量的、检测的或推导的标准诸如尺寸、形状、质构或颜色相对应的一群颗粒。在一些实施例中，通过本发明的装置计数的至少一个种类和/或亚种类颗粒的成员将为相同类型的有形成分。
如本文所用，术语高光学分辨率成像设备可包括能够获得具有足够视觉区别以区分形态特征和/或变化的颗粒图像的设备。示例性高光学分辨率成像设备可包括具有1μm或更低(包括例如0.4至0.5μm，诸如0.46μm)的光学分辨率的设备。
如本文所用，颗粒造影剂组合物可适合与颗粒和/或细胞内细胞器配向液(PIOAL)结合用于视觉分析仪以便分析来自受试者的样品中的颗粒。示例性PIOAL可例如用于自动化识别来自受试者的样品中的不同类型的颗粒的方法。
在另一方面，在获得图像时，细胞可包裹在PIOAL中。本文描述了合适的示例性细胞内细胞器配向液。
如本文所用，“配向”可部分通过球形和/或非球形颗粒的配向来表征。例如，颗粒诸如非球形颗粒可配向在基本上平行于流动方向的平面中。在某些实施例中，非球形颗粒的配向通过这样的颗粒取向来表征，该取向增大了非球形颗粒在成像条件下在高光学分辨率成像设备的焦平面中的图像投影。颗粒诸如球形颗粒可具有增加量的颗粒和细胞的焦点内颗粒内内容物，从而能有效地产生用于颗粒分类和次类划分的视觉区别。颗粒诸如球形颗粒的颗粒内结构可定位、再定位和/或更好定位成基本上平行于流动方向。例如，细胞内结构、细胞器或裂片也可定位、再定位和/或更好定位成基本上平行于流动方向。
本发明中提及的一个“类别”颗粒应当理解为涵盖基于科学分类的一群颗粒。例如，三种主要类别的血细胞存在于全血样中，包括RBC、WBC和PLT。
本发明中提及的颗粒的“成员”应当理解为涵盖一个种类或亚种类颗粒中的颗粒。例如，每个种类的血细胞可进一步分成亚种类或成员。WBC的主要成员包括但不限于中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞。所述成员还包括未成熟或异常细胞。例如，未成熟WBC可包括晚幼粒细胞、中幼粒细胞和早幼粒细胞。除了成熟RBC之外，RBC的成员可包括有核RBC(NRBC)和网织红细胞。PLT可包括正常PLT和“巨大”PLT，“巨大”PLT的尺寸接近正常WBC的尺寸。
提及的“未成熟细胞”应当理解为涵盖某些发育阶段中，例如骨髓内部或从骨髓释放不久之后但在完全发育成成熟细胞之前的细胞。
提及的“异常细胞”应当理解为涵盖具有异常形态特性的细胞或与某些疾病或病症相关的细胞、或者可能在某些情况下与某些疾病或病症相关的异常。特定疾病的例子包括但不限于红细胞增多症、多血症、贫血症、幼红细胞减少症、白细胞增多症、白细胞减少症、淋巴细胞增多症、淋巴细胞减少症、粒细胞增多症、粒细胞减少症或粒细胞缺乏症、中性粒细胞增多症、中性粒细胞减少症、嗜酸性粒细胞增多症、嗜酸性粒细胞减少症、嗜碱性粒细胞增多症、嗜碱性粒细胞减少症、血小板增多症、血小板减少症和全血细胞减少症。一个类别的细胞在血流中可增多或减少。在一些条件下，比正常白细胞大得多的异常细胞以小浓度存在于血样中。尺寸、形状、颜色和/或细胞内结构的变化可与某些疾病或病症相关。
本发明中提及的颗粒的“计数”或“颗粒计数”应当理解为涵盖从颗粒计数器的一个通道获得的颗粒的数量。本发明中提及的颗粒的一个类别或成员的“浓度”应当理解为意指每单位体积(例如每升)或已知体积的每个样品的颗粒的数量。例如，颗粒计数器可为各种类的颗粒提供计数或浓度或其他基于计数的函数，同时视觉分析仪可为每个种类或亚种类的颗粒提供计数、浓度、比率或其他基于浓度的参数。
本发明中提及的“比率”应当理解为涵盖颗粒的两个种类/亚种类、类别或成员的任何定量的和/或成比例的比率。此类比率的例子包括但不限于按浓度、重量和/或按颗粒数量计的比率。通常比率涉及一个种类、类别或成员的计数相对于另一个这样的种类、类别或成员的计数的数字分数。在一些实施例中，也可使用加权的计数或加权的和/或成比例的比率进行确定。
血液学-颗粒分析系统
现在转到附图，图1示意性地示出了示例性流通池22，所述流通池用于将样品流体传送经过高光学分辨率成像设备24的观察区23，所述高光学分辨率成像设备被配置用于使用数字图像处理使样品流动料流32中的微观颗粒成像。流通池22耦合到样品流体源25，所述样品流体源可能已经过处理，诸如与颗粒造影剂组合物接触并加热。流通池22还耦合到颗粒和/或细胞内细胞器配向液(PIOAL)(诸如粘度大于样品流体粘度的澄清甘油溶液)的一个或多个源27。
将样品流体注射通过样品进料管29的远端28处的变平开口，并且在PIOAL流已充分建立的点处进入流通池22的内部中，从而在带形样品料流上方和下方(或在相对侧面上)产生稳定且对称的PIOAL的层流。样品和PIOAL料流可由精密计量泵供应，所述精密计量泵使PIOAL与注射的样品流体一起沿着大幅变窄的流路运动。PIOAL将样品流体包裹并压缩在流路变窄的区域21中。因此，流路厚度在区域21处的降低可有助于样品料流32的几何聚焦。样品流体带32被PIOAL包裹并连同PIOAL一起输运到变窄区域21的下游，通过高光学分辨率成像设备24的观察区23的前方，或以其他方式经过观察区23，在高光学分辨率成像设备24处例如使用CCD 48采集图像。处理器18可从CCD 48接收像素数据作为输入。样品流体带与PIOAL一起流动到排放口33。
如此处所示，变窄区域21可包括具有近侧厚度PT的近侧流路部分21a和具有远侧厚度DT的远侧流路部分21b，使得远侧厚度DT小于近侧厚度PT。因此可在近侧部分21a的远侧和远侧部分21b的近侧的位置将样品流体注射通过样品管29的远端28。因此，当PIOAL料流被区域21压缩时，样品流体可进入PIOAL包层。其中样品流体注射管具有远侧出口，样品流体穿过该远侧出口注射到流动鞘液中，该远侧出口由流通池的流路尺寸的降低界定。
将具有物镜镜头46的数字高光学分辨率成像设备24沿着与带形样品料流32相交的光轴导向。物镜46与流通池33之间的相对距离可通过电机驱动器54的操作来改变，以便在光敏元件阵列上分辨和采集聚焦的数字化图像。
根据一些实施例，系统可起作用以流体聚焦样品流体带32。术语“流体聚焦”或“流体聚焦的”可指受到鞘液与样品流体之间的粘度差、流通池的几何变窄过渡区以及鞘液与样品流体之间的速度差影响的聚焦效应。流体动力流由样品料流与鞘液料流之间的速度差产生，该速度差会影响流动带厚度和形状。
流通池
流通池22的实际实施例在图2和图3中进一步描绘。如此处所示，流通池22可与样品源25耦合并且还耦合到PIOAL材料的源27。经由插管29，例如通过插管29的远侧出口31，将样品流体注射到流通池22中。通常，PIOAL鞘液从源27朝观察区23行进通过流通池中的弯曲通道区段41时，其不处于层流状态。然而，流通池22可被配置成使得PIOAL鞘液在流过样品流体被引入流动鞘液中的远侧出口31时，PIOAL鞘液为层流式或变为层流式，或呈现平坦速度剖面。样品流体和PIOAL可在总体上由箭头A指示的方向上沿着流通池22流动，然后经由排放口33流出流通池22。流通池22限定在流动方向A上对称地变窄(例如，在过渡区21)的内部流路20。流路的对称性有助于样品料流的稳固且居中的流动。流通池22被配置成将被PIOAL包裹的样品的流动32导向通过流通池中的观察区23，即观察口57之后。与观察口57相连的是自动对焦图案44。流通池22还具有圆形或凹陷底座58，其被配置成容纳或接收显微镜物镜(未示出)。
根据一些实施例，自动对焦图案44可具有相对于流通池22固定并且位于离带形样品料流32的平面一定位移距离的位置。在此处所示的实施例中，在通过高光学分辨率成像设备(未示出)穿过观察口57采集的图像中可见的位置处，将自动对焦图案(靶标44)直接应用于流通池22。流通池22可由单件材料构造。或者，流通池22可由第一或上区段或层22a和第二或下区段或层22b构造。如此处所示，玻璃或透明窗玻璃60附接到第一区段22a或与第一区段22a一体化。窗玻璃60可限定流通池内的样品流路的至少一部分。来自光源42的光可行进穿过自动对焦图案44的孔或通路以照明在流动料流32内流动的样品颗粒。
在一些情况下，窗玻璃60的厚度可具有约150μm至约170μm范围内的值。如上指出的，窗玻璃60可限定或形成流路或鞘液(例如，PIOAL)通道的一部分。通过使用薄窗玻璃60，可以将显微镜物镜放置在非常靠近样品流体带的位置，因此获得沿着流路流动的颗粒的高度放大图像。
图3A描绘了流通池实施例的各方面，其中成像轴355与远侧过渡区部分316之间的距离为约8.24mm。远侧过渡区部分316与插管出口331之间的距离为约12.54mm。插管出口331与鞘液入口301之间的距离为约12.7mm。插管出口331与近侧过渡区部分318之间的距离为约0.73mm。图3B描绘了流通池实施例的各方面，其中插管出口已被移动到相对于过渡区更远侧的位置，如相比于图3A实施例。如此处所示，插管远端被推进到流通池的变窄过渡区中，并且成像轴355与远侧过渡区部分316之间的距离在约16mm至约26mm的范围内。在某种情况下，成像轴355与远侧过渡区部分316之间的距离为约21mm。
返回参照图1，流通池内部轮廓(例如，在过渡区21)以及PIOAL和样品流速可被调整成使得样品形成为带形料流32。料流可近似地与包裹在带形样品料流中的颗粒一样薄或比这些颗粒更薄。例如，白血细胞可具有约10μm的直径。通过提供厚度小于10μm的带形样品料流，可在带形样品料流被鞘液或PIOAL伸展时使细胞取向。令人惊讶的是，带形样品料流沿着变窄流路在与带形样品料流不同的粘度诸如更高粘度的PIOAL层内的伸展，有利地趋于使非球形颗粒配向在基本上平行于流动方向的平面中，并对细胞施加力，从而提高了细胞的细胞内结构的焦点内内容物。高光学分辨率成像设备24的光轴基本上正交(垂直)于带形样品料流的平面。成像点处的带形样品料流的线速度可为例如20-200毫米/秒。在一些实施例中，带形样品料流的线速度可为例如50-150毫米/秒。
带形样品料流厚度可受到样品流体和PIOAL的相对粘度和流速影响。样品源25和/或PIOAL源27(例如包括精密排量泵)可被配置成以可控制流速提供样品和/或PIOAL以便优化带形样品料流32的尺度，也就是优化为至少与高光学分辨率成像设备24的视野一样宽的薄带。
在一个实施例中，PIOAL源27被配置成以预定粘度提供PIOAL。该粘度可不同于样品的粘度，并且可高于样品的粘度。可调整PIOAL的粘度和密度、样品材料的粘度、PIOAL的流速和样品材料的流速以在离自动对焦图案的位移距离处保持带形样品料流，且使其具有预定尺度特性，诸如有利的带形样品料流厚度。
在实际实施例中，PIOAL具有比样品更高的线速度和比样品更高的粘度，从而使样品伸展为平带。PIOAL粘度可最多至10厘泊。
还参见图2和图3，流通池的内部流路在向PIOAL中注射带形样品料流的点的下游变窄，以产生带形样品料流厚度，例如最多至7μm，和/或内部流路产生500-3,000μm的带形样品料流宽度。在示例性实施例中，如图1中所描绘，流通池的内部流路在向PIOAL中注射样品料流的点的上游开始出现变窄的过渡区。
在另一个实施例中，内部流路变窄以产生厚度为2-4μm的带形样品料流厚度，和/或内部流路产生宽度为2000μm的带形样品料流。这些尺度特别可用于血液学。在这种情况下料流的厚度小于一些颗粒诸如处于其松弛状态的红血细胞的直径。因此，这些颗粒可被重新取向以将其较宽的尺度面向成像轴，这有助于展现有区别的特性。
带形样品料流的线速度可被充分限制以防止在光敏元件阵列的图像曝光时间时数字化图像出现运动模糊。光源可任选地为频闪灯，该频闪灯闪光而在短暂时间内施加高入射振幅。由于自动对焦图案44和图像处于相同视野，光源被配置成同时照明带形样品料流和自动对焦图案。然而，在其他实施例中，用于成像和用于自动对焦的视野可不同，例如单独地照明和/或成像。
所讨论的开发具有方法以及装置方面。使视觉分析仪聚焦的方法包括使高光学分辨率成像设备24聚焦在相对于流通池22固定的自动对焦图案44上，所述高光学分辨率成像设备24可为数字高光学分辨率成像设备或数字图像捕获设备，其中自动对焦图案44位于离带形样品料流32的位移距离52。数字高光学分辨率成像设备24具有物镜，其光轴与带形样品料流32相交。物镜与流通池22之间的相对距离通过操作电机驱动器54而改变，而沿着光轴的在高光学分辨率成像设备与最佳焦点之间的距离是已知的。数字高光学分辨率成像设备被配置成分辨和采集光敏元件阵列上的数字化图像。在自动对焦过程中操作电机驱动器以聚焦于自动对焦图案上。然后在位移距离内操作电机驱动器，从而使高光学分辨率成像设备聚焦于带形样品料流上。
该方法还可包括使带形样品料流形成为带形。呈现带形使得高光学分辨率成像设备的光轴基本上垂直于带形样品料流，即正交于带形料流的平面。
图4描绘了用于使血液流体样品中的颗粒成像的系统400的各方面。如此处所示，系统400包括样品流体注射系统410、流通池420和图像捕获设备430、以及处理器440。流通池420提供流路422，该流路运输鞘液流，任选地结合样品流体一起运输。根据一些实施例，样品流体注射系统410可包括插管或管412或与插管或管412耦合。样品流体注射系统410可与流路422(例如，经由样品流体入口402)流体连通并且可有效地将样品流体424注射通过插管412的远侧出口413并进入流通池420内的流动鞘液426以便提供样品流体料流428。例如，处理器440可包括存储介质或与存储介质操作性地相连，所述存储介质具有计算机应用程序，所述计算机应用程序被配置成在被处理器执行时导致样品流体注射系统410将样品流体424注射到流动鞘液426中。如此处所示，鞘液426可通过鞘液注射系统450(例如，经由鞘液入口401)引入流通池420中。例如，处理器440可包括存储介质或与存储介质操作性地相连，所述存储介质具有计算机应用程序，所述计算机应用程序被配置成在被处理器执行时导致鞘液注射系统450将鞘液426注射到流通池420中。
样品流体料流428具有邻近注射管412的第一厚度T1。流通池的流路422具有流路尺寸上的降低使得样品流体料流428的厚度从初始厚度T1降低到邻近图像捕获位点432的第二厚度T2。图像捕获设备430与图像捕获位点432配向以便在流通池420的图像捕获位点432处使来自第一样品流体的第一多个颗粒成像。
处理器440与样品流体注射器系统410、图像捕获设备430以及任选地鞘液注射系统450耦合。处理器440被配置成终止向流动鞘液426中注射第一样品流体并开始向流动鞘液426中注射第二样品流体使得样品流体瞬变被引发。例如，处理器440可包括存储介质或与存储介质操作性地相连，所述存储介质具有计算机应用程序，所述计算机应用程序被配置成在被处理器执行时导致样品流体注射系统410将第二样品流体注射到流动鞘液426中使得样品流体瞬变被引发。
此外，处理器440被配置成在样品流体瞬变后并在使第一多个颗粒成像的4秒内，引发在流通池420的图像捕获位点432处捕获来自第二样品流体的第二多个颗粒的图像。例如，处理器440可包括存储介质或与存储介质操作性地相连，所述存储介质具有计算机应用程序，所述计算机应用程序被配置成在被处理器执行时导致图像捕获设备430在样品流体瞬变后并在使第一多个颗粒成像的四秒内，引发在流通池420的图像捕获位点432处捕获来自第二样品流体的第二多个颗粒的图像。
如图4A中所描绘的流通池实施例中所示，流路尺寸上的降低(例如，在过渡区419a)可由流路422a的相对壁421a、423a限定。相对壁421a、423a可沿着流路422a径向地向内成角度，总体上关于横向平面451a对称，所述横向平面平分样品流体料流428a。平面451a可平分样品料流428a，其中在样品料流428a离开插管或样品注射管412a的远侧部分427a的位置处，样品料流具有第一厚度T1。相似地，平面451a可平分样品料流428a，其中在样品料流428a通过图像捕获位点432a的位置处，样品料流具有第二厚度T2。根据一些实施例，第一厚度T1具有约150μm的值并且第二厚度T2具有约2μm的值。在此类情况下，样品带料流的压缩比为75:1。根据一些实施例，第一厚度T1具有约50μm至约250μm范围内的值并且第二厚度T2具有约2μm至约10μm范围内的值。当样品料流流体流过流通池时，随着其加速和伸展，带变薄。流通池的两个特征可有助于样品流体带的变薄。第一，鞘液包层与样品流体带之间的速度差可有效降低带的厚度。第二，过渡区的渐缩几何形状可有效降低带的厚度。
如图4A(以及图4和图4B-1中)所描绘，过渡区419a可由近侧(415a)和远侧(416a)部分处成一定角度的过渡段限定。还应当理解，过渡区419a可相反在近侧(415a)和远侧(416a)部分处呈现平滑或弯曲过渡段，类似于如图1、图3、图3A、图3B和图4B-2中所描绘的平滑或弯曲过渡段。
通常，第一厚度T1远大于样品颗粒的尺寸，因此颗粒完全包含于样品带料流内。然而，第二厚度T2可小于某些样品颗粒的尺寸，因此这些颗粒可延伸出样品流体并进入周围的鞘液。如图4A中所示，样品带料流可总体上沿着与其离开插管并朝图像捕获位点行进的相同平面流动。
流通池还可以在远侧插管部分427a与图像捕获位点432a之间提供间隔距离430a。根据一些实施例，样品流体注射管412a的远侧部分427a可定位在离图像捕获位点432a的轴向间隔距离430a处，其中轴向间隔距离432a具有约21mm的值。在一些情况下，轴向间隔距离430a具有约16mm至约26mm范围内的值。
插管出口与图像捕获位点之间的轴向间隔距离430a可影响样品流体从出口向图像捕获位点行进时流体的过渡时间。例如，相对更短的轴向间隔距离430a可有助于更短的过渡时间，而相对更长的轴向间隔距离430a可有助于更长的过渡时间。
插管远侧部分427a处的出口相对于流路过渡区419a或相对于流路过渡区419a的近侧部分415a的位置也可推断出样品流体从出口向图像捕获位点行进时流体的过渡时间。例如，鞘液可在近侧部分415a具有相对更慢的速度，而在近侧部分415a与远侧部分416a之间的位置具有相对更快的速度。因此，如果将远侧部分427a处的插管出口定位在近侧部分415a，则样品流体到达图像捕获位点将花费更长的时间，这不仅因为行进距离更长，还因为样品流体的初始速度在其离开插管远侧端口后更慢(由于鞘液速度更慢)。换句话说，样品流体存在于流通池的较厚部分(例如，靠近近侧部分415a)的时间越长，则样品到达图像捕获位点所花的时间越长。反之，如果将远侧部分427a的插管出口定位在近侧部分415a的远侧(例如，在近侧部分415a与远侧部分416a之间的中心位置，如图4A中所描绘)，则样品流体到达图像捕获位点所花的时间将更短，这不仅是因为行进距离更短，还因为样品流体在离开插管远侧端口后的初始速度更快(由于更快的鞘液速度)。如本文别处所讨论，鞘液在穿过过渡区419a流动时因区419a的变窄横截面积而被加速。
根据一些实施例，过渡时间越短，图像捕获位点处采集图像可用的时间越多。例如，当从插管远侧顶端到成像区域的过渡持续时间缩短时，可以在特定的时长内处理更多的样品，并相关地可以在特定的时长内获得更多的图像(例如，每分钟的图像数)。
虽然存在与将插管远侧部分427a的出口定位在更靠近图像捕获位点432a的位置相关的优点，但在所述出口与捕获位点之间保持一定的距离也是可取的。例如，如图3中所描绘，成像设备的光学物镜或前透镜可定位在流通池22的底座58中。如果插管的出口31太靠近底座58，则样品流体在被注射到鞘液中后可能不够稳定，而不能在图像捕获位点提供所需的成像性质。相似地，可能有利的是在离观察区23一定的距离处保持渐缩过渡区21，以使得渐缩区不干扰接收图像捕获设备物镜的底座58的定位。
继续参照图4A，样品流体注射管412a的下游端427a可定位在流路过渡区419a的近侧部分415a的远侧。相关地，样品流体注射管412a的下游端427a可定位在流路过渡区419a的远侧部分416a的近侧。因此，根据一些实施例，样品流体可从注射插管412a在过渡区419a内的某一位置注射到流通池中。
根据一些实施例，流路尺寸上降低的对称性(例如，在流路过渡区419a)有效限制血液流体样品中的颗粒失准。例如，这种对称性可有效地将血液流体样品中的红血细胞成像取向失准限制到小于约20％。
根据一些实施例，本文所公开的方法可有效地使血细胞计数分析期间的标记率低于样品的30％、29％、28％、27％、26％、25％、24％、23％、22％、21％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％或5％。
根据一些实施例，图像捕获位点432a具有约150μm×150μm与400μm×400μm之间的视野433a。在一些情况下，图像捕获位点432a具有约275μm×275μm的视野433a。在一些情况下，视野可根据长度乘以宽度加以限定。如果表示为表面积，则275μm×275μm视野具有75,625μm2的面积。根据一些实施例，视野可由成像设备物镜及其放大倍数确定。在一些情况下，视野可对应于由采集光学元件(例如，物镜、镜筒透镜和相机)成像的场(区域)范围。在一些情况下，视野远小于图像捕获位点处的透明区的观察口。
图4A-1和图4A-2示出了当样品料流从插管出口向图像捕获位点行进时流体聚焦对样品料流的影响。如图4A-1中所示，样品料流可具有约150μm的高度H(S)和约1350μm的宽度W(S)。另外，PIOAL鞘液料流可具有约6000μm的高度H(P)和约4000μm的宽度W(P)。在流体聚焦之后，如图4A-2中所示，样品料流可具有约2μm的高度H(S)和约1350μm的宽度W(S)。另外，PIOAL鞘液料流可具有约150μm的高度H(P)和约4000μm的宽度W(P)。在一个实施例中，PIOAL鞘液料流在插管出口处的横截面积比图像捕获位点附近的横截面积大40倍。
根据一些实施例，其可用于确定图像捕获位点处的流通池通道的横截面。这可对应于如图4A-2中所描绘的约150μm的PIOAL鞘液料流高度H(P)和约4000μm的宽度W(P)。其还可用于确定在图像捕获位点处流过流通池的合并样品和鞘液的体积流速。当已知横截面积和流速时，可以确定图像捕获位点处的合并样品和鞘液的速度。
根据一些实施例，样品和鞘液穿过流通池的流动可用平行板轮廓模型估算。相关地，样品流体料流的中心的流速(例如，如图4A-2中所描绘)可为合并样品和鞘液料流的平均流速的约1.5倍。
根据一些实施例，在插管出口处的样品流的横截面积(例如，图4A-1中的W(S)×H(S))比成像位点处的样品流的横截面积(例如，图4A-2中的W(S)×H(S))大40倍。在成像区域处的鞘液的体积流速可为约45μL/s。在成像区域处的样品流体的体积流速可为约0.232μL/s。在一些情况下，在成像位点处的合并的鞘液和样品料流的横截面积为600,000μm2。在一些情况下，在成像位点处的平均流动料流速度为75mm/s。
流速或速度可作为产生清晰和聚焦的细胞图像的速率而确定。示例性流速和速度基于据观察在成像位点实现一定样品流动料流带形或特性的两个样品的流速而发现。例如，在约75mm/s(或20-200mm/s范围内)的流速下，细胞不会流动得过慢以使得在连续图像中存在细胞的重叠，并且细胞也不会流动得过快以使得形成幻影效应(模糊的图像)。相关地，通过避免过高的流速，可以节省更多的试剂和样品。根据一些实施例，最佳的或所需的线速度可通过改变体积流量(泵速)或插管形状而实现。
穿过图像捕获区的样品料流的流动速度也可与图像捕获设备相对于流通池功能的性能相关。例如，如果样品料流流动得过快，则可能难以获得样品中所含的颗粒的清晰图像(例如，图像捕获设备的快门速度可能过慢，从而产生模糊的图像)。相似地，如果样品料流流动得过慢，则图像捕获设备可能获得同一颗粒的连续图像(例如，同一颗粒在两次图像捕获过程中保持在捕获帧中)。在一些实施例中，样品带的速度可相对于图像捕获速率进行调节(例如，通过调整多个流通池操作参数中的任何一个)，以使得在帧捕获之间存在最少的流动，并因此对高百分比的样品成像。
根据一些实施例，颗粒分析系统和相关部件可被配置成使得当鞘液和流体样品流过流通池时，鞘液可以45μL/s的鞘液体积速度流动，而流体样品可以0.232μL/s(或在0.2至0.35μL/s的范围内)的流体样品体积流速流动。在一些情况下，鞘液流速与样品流体流速的比率为约200。在一些情况下，鞘液流速与样品流体流速的比率具有约70至200范围内的值。在一些情况下，鞘液流速与样品流体流速的比率为约193。在一些情况下，鞘液流速与样品流体流速的比率为约70。在一些情况下，在流通池内流动的鞘液体积与流体样品体积的比率可在25:1至250:1的范围内。
根据一些实施例，所述系统和相关部件可被配置成使得当鞘液和流体样品流过流通池420时，鞘液可以75mm/s的鞘液速度在成像区域前流动，而流体样品可以130mm/s的流体样品速度在成像区域前流动。在一些情况下，在流通池内流动的鞘液体积与流体样品体积的比率可在100:1至200:1的范围内。
在一些情况下，流通池可具有约50:1的最小压缩比和约125:1的最大压缩比。在一些情况下，最小压缩比可为约30:1或20:1。该压缩比是指当将图4A-1与图4A-2相比时的流动料流厚度H(S):H(S)的比率。该压缩比可受几何压缩(例如，当将图4A-1与图4A-2比较时，鞘液厚度H(P):H(P)的比率，其也可总体上对应于图4A中所示的流通池变窄渐缩过渡区419a的尺度)和流体动力压缩(例如，也对应于速度差)的组合的影响。根据一些实施例，几何压缩比率为约40:1。
对应于过渡区的流路尺寸上的降低可由近侧流路部分和远侧流路部分限定，近侧流路部分具有近侧厚度或高度，而远侧流路部分具有比近侧厚度或高度小的远侧厚度或高度。例如，如图4B-1和图4B-2的局部视图所示，流路的过渡区419b可在近侧部分415b与远侧部分416b之间具有长度L，其中近侧部分415b具有近侧高度417b，而远侧部分416b具有远侧高度418b。如图4B-2中所描绘，并如本文别处所述，过渡区的形状或轮廓可以为弯曲的或平滑的，并例如可以S形曲线、蛇形曲线或正切曲线的形状提供。根据一些实施例，近侧高度417b具有约6000μm的值。在一些情况下，近侧高度417b具有约3000μm至约8000μm范围内的值。根据一些实施例，远侧高度418b具有约150μm的值。在一些情况下，远侧高度418b具有约50μm至约400μm范围内的值。
过渡区419a的几何形状可提供在第一流路边界403b与平分横向平面451b之间的第一角度α1，和在第二流路边界404b与平分横向平面451b之间的第二角度α2。在一些情况下，角度α1为约45度而角度α2为约45度。在一些情况下，角度α1具有约10度至约60度范围内的值。在一些情况下，角度α2具有约10度至约60度范围内的值。根据一些实施例，角度α1和角度α2具有相同的值。可对角度α1和角度α2进行选择以便在样品流体从近侧部分415b向远侧部分416b行进时保持样品流体的层流或最大程度降低样品流体的湍流，继而可增强样品内的颗粒沿着横向平面451b的配向。如上文参照图4A所述，过渡区的远侧和近侧边界或部分可以为弯曲的或平滑的，而不是成角度的。
图4C描绘了根据本发明实施例的示例性插管或样品进料管400c的特征，其中插管具有长度L。图4D描绘了插管400d的纵向横截面。如此处所示，插管400d包括远侧变平区段410d、中心渐缩区段420d和近侧管状部分430d。如图4C-1中所描绘，示例性插管或样品进料管400c-1可具有远侧部分410c-1和近侧部分430c-1。在一些情况下，远侧部分410c-1具有约1.359mm的长度和约1.43mm的宽度。在一些情况下，远端的出口具有约1.359mm的出口宽度W(E)。根据一些实施例，插管可具有与图4C和图4D中所描绘的不同的内部流路几何形状。例如，如图4D-1中所示，插管400d-1不包括具有扩展流动区横截面积的渐缩中心区段。如图4D-1中所描绘，插管400d-1具有远侧区段410d-1、内径渐缩的中心渐缩区段420d-1以及近侧区段430d-1。对应于中心区段420d-1的渐缩内径，410d-1的内部横截面积小于430d-1的内部横截面积。
图4E示出了远侧变平区段410e的横截面。如此处所示，远侧区段410e具有内部宽度W(I)和内部高度H(I)，样品料流从中流动。此外，远侧区段410e具有外部宽度W(O)和外部高度H(O)。如图4D和图4E组合在一起所描绘，样品流体注射管的远侧部分410e具有出口P，其具有高度H(I)和宽度W(I)，其中高度H(I)小于宽度W(I)。根据一些实施例，远侧部分410e的出口P的高度H(I)(或远侧部分410d的内部高度)可具有约150μm的值。在一些情况下，高度H(I)可在约50μm至约250μm的范围内。根据一些实施例，远侧部分410e的出口P的宽度W(I)(或远侧部分410d的内部宽度)可具有约1350μm的值。在一些情况下，宽度为约1194μm。在一些情况下，宽度W(I)可具有约500μm至约3000μm范围内的值。在一些情况下，远侧变平区段410d可通过向管或导管施加夹持力而制成。
图4F示出了中心渐缩区段420f的横截面。如此处所示，中心渐缩区段420f具有内径D(I)，样品料流从中流动。另外，中心渐缩区段420f具有外径D(O)。图4G示出了近侧区段430g的横截面。如此处所示，近侧区段430g具有内径D(I)，样品料流从中流动。此外，远侧区段430g具有外径D(O)。
如图4D中所描绘，注射管或插管400d可具有近侧部分430d、远侧部分410d和设置在近侧部分430d与远侧部分410d之间的第三部分420d，近侧部分具有第一流动横截面积(例如，图4G中所示的π*(D/2)2)，远侧部分具有比第一流动横截面积小的第二流动横截面积(例如，图4E中所示的W(I)*H(I))。第三部分420d可具有大于第一和第二流动横截面积的第三流动横截面积(例如，图4F中所示的π*(D/2)2)。在一些情况下，近侧部分430g的外径D(O)为约1067μm，而近侧部分430g的内径D(I)为约813μm。
根据一些实施例，注射管的近侧部分可与样品入口配件的样品口耦合。例如，如图4H中所示，插管400h的近侧部分405h可在样品入口配件420h的出口处直接耦合到样品口410h。
用于使血液流体样品中的颗粒成像的系统的流通池可以相对于重力方向的任何所需角度或方向取向。例如，流通池可在向上方向上取向，以使得流通池内流动的流体(例如，鞘液，任选地与样品流体相结合)可克服重力在向上方向上行进。同样，流通池可在向下方向上取向，以使得流通池内流动的流体(例如，鞘液，任选地与样品流体相结合)可在重力作用下在向下方向上行进。图4I描绘了在向上方向上取向的流通池420i，以使得流通池420i内流动的样品流体424i和鞘液426i克服重力G流动。图4J描绘了在向下方向上取向的流通池420j，以使得流通池420j内流动的样品流体424j和鞘液426j不是克服重力G流动，而是在重力G作用下流动。
如图4K中所示，穿过流通池420k的图像捕获位点432k流动的样品料流带R可具有约2μm的厚度T。在一些情况下，样品料流带R的厚度T可最多为约3μm。通常，小于样品料流厚度的细胞或颗粒将被包含在带内。示例性红血细胞(RBC)可呈现为双面凹陷的圆盘并可具有约6.2μm与约8.2μm之间的直径D。此外，示例性红血细胞可具有约2μm与约2.5μm之间的最大厚度T1和约0.8μm与约1μm之间的最小厚度T2。在一些情况下，红血细胞可具有最多至约3μm的厚度。示例性人血小板的尺寸可以变化，并也可具有约2μm的厚度或直径。虽然此处未按比例示出，但是流通池可在图像捕获位点处限定值为约150μm的流路厚度F。在一些情况下，流路厚度F具有50μm与400μm之间的值。该流路厚度F还可对应于图4B-1和图4B-2中所描绘的远侧部分461b的远侧高度418b。
如图4K中所示，样品流体料流的厚度T与颗粒(红血细胞)的厚度的比率为约1:1。根据一些实施例，在图像捕获位点处的样品流体料流的厚度T与颗粒之一的尺寸的比率在0.25至25的范围内。在一些情况下，厚度T可具有0.5μm至5μm范围内的值。
如本文别处以及共同待审的美国专利申请No.____中所述，样品带R的流体与鞘液之间的粘度差可有效地使样品料流中的颗粒(例如红血细胞)沿着流动方向配向或取向。当如此配向时，如图4K中所示，成像设备或相机可获取红血细胞的图像使得它们看起来为圆的，因为该血细胞的主表面面向相机。这样，红血细胞呈现的配向展示出相对于流动的低阻力。因此，鞘液和样品流体的相对粘度特性可有助于高百分比或数量的红血细胞面向相机，从而增强颗粒分析系统的评估能力。
根据一些实施例，鞘液的粘度特性有效限制血液流体样品中的颗粒失准。例如，粘度差可有效地将血液流体样品中的红血细胞成像取向失准限制到小于约10％。也就是说，样品中的100个红血细胞中的90个或更多个红血细胞可配向以使得其主表面面向成像设备。对称的变窄过渡区可提供20％的值。如本文别处所述，例如参照图4R，可以将从涉及对称变窄流通池过渡区和粘性鞘液的分析仪构形获得的配向结果与从涉及对称变窄流通池过渡区而不使用粘性鞘液的分析仪构形获得的配向结果进行比较。使用粘性鞘液可降低失准细胞的百分比。根据一些实施例，鞘液具有类似于水的折射率(即n＝1.3330)。在一些情况下，鞘液具有约89％的水含量。除了因粘度差而观察到的配向作用外，还因双侧渐缩过渡区观察到了配向作用。在一些情况下，据观察，双侧(即，对称)渐缩过渡区在配向颗粒方面的有效性是不对称渐缩过渡区设计的两倍。
红血细胞的有效配向可有助于改善诊断。在一些情况下，可将成像的红血细胞的形状用于确定从其获取样品的患者是否具有特定的生理病症或疾病。例如，具有镰状细胞病的患者展示出形状异常(即，镰刀形状)的血细胞。因此，通过获得配向红血细胞的高质量图像，可以确保准确的诊断。红血细胞的其他形状变化，例如具有薄周边区域和大平坦中心区域的红血细胞(因此红血细胞看起来具有自行车轮胎轮廓)，可用本发明的配向技术有效地成像。相似地，可出于诊断目的对具有小中心部分和厚周边区域的红血细胞(因此红血细胞看起来具有卡车轮胎轮廓)成像。本文所公开的改进的成像技术还可用于评估其他红血细胞特性，诸如血红蛋白含量、铁含量等等。
不受任何特定理论的束缚，据信，鞘液的粘度与样品流体的粘度之间的高粘度差产生改变的抛物线剖面，其中该剖面总体上为抛物线的，并具有对应于加速度增大的流动中心区域的中心隆起，并且该中心隆起有助于样品颗粒或颗粒内细胞器的配向。根据一些实施例，鞘液与样品带之间的速度差和粘度差生成剪切力以增加细胞器或细胞内颗粒的配向。鞘液抛物线剖面的示例性方面在共同待审的美国专利申请No.________中有所讨论，该专利申请的内容以引用方式并入本文。
白血细胞通常大于红血细胞和血小板。例如，示例性中性粒细胞和嗜酸性粒细胞可具有约10μm与约12μm之间的直径。示例性嗜碱性粒细胞可具有约12μm与约15μm之间的直径。示例性淋巴细胞(小)可具有约7μm与约8μm之间的直径，而示例性淋巴细胞(大)可具有约12μm与约15μm之间的直径。示例性单核细胞可具有约12μm与约20μm之间的直径。颗粒分析系统的构形(包括鞘液和流体样品带在穿过流通池时它们之间的相互作用)可在白血细胞穿过图像捕获位点432l行进时有效压缩白血细胞，如图4L中所指示。因此，例如，白血细胞(WBC)的中心部分可定位于样品料流带R内，而白血细胞的周边部分可定位于鞘液内。因此，当白血细胞通过样品带而穿过流通池传输时，白血细胞的侧面可延伸到鞘液中。如上文参照图4K所讨论的样品料流带R的厚度T和流路的厚度F的数值或范围相似地适用于图4L。
根据一些实施例，鞘液与样品流体之间的粘度差可有效配向存在于诸如白血细胞的细胞内的细胞器或其他细胞内特征。不受任何特定理论的束缚，据信，与鞘液和样品流体之间的粘度差相关的剪切力可作用于白血细胞而配向细胞内特征。在一些情况下，与鞘液和样品流体之间的粘度差相关的剪切力可有助于这种配向。这些配向作用可受颗粒之间的尺寸差异以及样品流体带的影响。例如，如果颗粒的部分延伸到样品流体带之外并进入周围的鞘液中，则与粘度差相关的剪切力可对细胞内特征配向具有明显的影响。
参照图4K和图4L，在一些情况下，细胞或颗粒的部分可延伸到薄样品流体带R之外并进入周围的鞘液中。如在共同待审的美国专利申请No.____中所讨论，鞘液可包含抑制或防止鞘液破坏或裂解细胞或颗粒的细胞保护剂。例如，鞘液可包含当将细胞暴露于鞘液的化学环境时保持细胞的结构完整性的细胞保护剂。相似地，细胞保护剂也可在细胞经历流通池几何形状所引起的任何剪切力和样品流体与鞘液之间的速度和/或粘度差时有效地保持细胞壁的结构完整性。相关地，保护剂可使细胞或颗粒免受样品流体与鞘液之间的速度差所引起的力的影响。这样，细胞在到达图像捕获位点时保持其活力。
剪切力在样品流体带与鞘液包层之间的界面处可能是显著的。根据一些实施例，流通池流路内的流动可由抛物线流动剖面表征。图4L-1描绘了抛物线流动剖面400l-1a和400l-1b的示例性方面。上图中的抛物线剖面400l-1a是存在于本发明的某些流通池实施例内的流动中的典型速度剖面(例如，其中在被包围在鞘液流动料流内的样品流体流动料流之间存在很小的粘度差或不存在粘度差)。可以看出，在流体料流的中间观察到了最高的线速度，并在流通池壁附近观察到了较慢的线速度。剖面400l-1a也可在鞘液与样品流体之间具有轻微粘度差的流体料流中观察到。在鞘液与流体料流之间存在高粘度差的情况下，观察到了如剖面400l-1b中所示的中心隆起，其中存在具有放大的线速度的局部中心区域。根据一些实施例，尺寸足够大的颗粒将经受一定量的剪切力，甚至在此类颗粒被完全包含在单一流体相内时(即，在鞘液包层内或者在样品流体带内)。
在一些情况下，鞘液的速度可与样品流体的速度不同。例如，鞘液可以80mm/s行进而样品流体可以60mm/s行进。因此，在一些情况下，样品流体以慢于周围包层的鞘液速度的样品流体速度离开远侧插管端口。因此，鞘液可有效地沿着插管的流路拖动样品流体，从而加速样品流体并降低样品流体带的厚度。样品流体带保持总体体积和质量不变，因此当其行进得越快时变得越薄。根据一些实施例，鞘液和样品流体在图像捕获位点处具有约20与200mm/s之间的速度。
通常，当样品流体从插管出口向图像捕获位点行进时，样品流体的速度增加。在一些情况下，在图像捕获位点处样品流体的速度是样品流体离开插管远侧部分的插管口时的速度的40倍。根据一些实施例，样品带的横截面积的减小与速度的增加呈线性关系。根据一些实施例，如果插管出口处的鞘液速度高于样品带速度，则这也将增大成像区域处的最终样品带速度。
鞘液可有效地对样品流体带和样品流体带内的颗粒施加显著的剪切力。一些力平行于流动方向，而颗粒也可能遇到垂直于流动方向的力。通常，当鞘液和样品流体接近图像捕获位点或区时，鞘液和样品流体以相同的速度或接近相同的速度行进。因此，当鞘液和样品流体通过图像捕获位点时在其之间的边界或界面可呈现出与远侧插管出口处或渐缩过渡区处的边界或界面相比更低的剪切力。例如，在渐缩过渡区处，鞘液包层与样品流体带之间的边界或界面可处于过渡中，以使得最初较慢和较厚的样品带变得更快且更薄，并且样品流体中的颗粒变得更配向。换句话说，剪切力在渐缩过渡区可能是突出的，并可向图像捕获位点耗散。在图像捕获位点处的剪切力可由抛物线剖面表示，并可远低于渐缩过渡区处的剪切力。因此，细胞或颗粒可在通过过渡区时经受更高的剪切力，并在通过图像捕获位点时经受更低的剪切力。根据一些实施例，鞘液与样品流体之间的粘度差可使红血细胞配向并因而聚焦。根据一些实施例，鞘液与样品流体之间的粘度差可使白血细胞细胞器配向并因而聚焦。相关地，可得到因料流的几何变窄和鞘液与样品流体之间的速度差而配向并聚焦的细胞和细胞器组分的增强的成像结果。
图4M描绘了具有内部细胞器(诸如裂片410m)的示例性中性粒细胞400m(一种白血细胞)。因样品流体与鞘液之间的粘度差，内部细胞器可在细胞内配向，如图4N所指示。因此，细胞内细胞器可通过图像捕获设备430m有效地成像，而细胞器彼此不重叠。也就是说，不是如图4M中所描绘的裂片彼此堆叠，当从图像捕获设备的成像轴或光轴观察时，裂片配向和并排设置，如图4N中所描绘。因此，可在捕获的图像中更有效地看见裂片。内部细胞器配向是样品流体与鞘液之间的粘度差的令人惊讶且出人意料的结果。
可使用流过流通池的样品流体的图像执行多种血液学或血液颗粒分析技术中的任一种。通常，图像分析可涉及确定某些细胞或颗粒参数，或测量、检测或评价某些细胞或颗粒特征。例如，图像分析可涉及评价细胞或颗粒尺寸、细胞核特征、细胞质特征、细胞内细胞器特征等等。相关地，分析技术可涵盖某些计数或分类方法或诊断测试，包括白血细胞(WBC)分类。在一些情况下，使用流通池得到的图像可支持5部分WBC分类测试。在一些情况下，使用流通池得到的图像可支持9部分WBC分类测试。相关地，参照图4，处理器440可包括存储介质或与存储介质操作性地相连，所述存储介质具有计算机应用程序，所述计算机应用程序被配置成在被处理器执行时导致系统400基于得自图像捕获设备的图像区分不同类型的细胞。例如，诊断或测试技术可用于区分各种细胞(例如，中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、晚幼粒细胞、中幼粒细胞、早幼粒细胞和母细胞)。
图4O显示了使用PIOAL得到的图像与使用非PIOAL鞘液得到的图像的比较。使用PIOAL产生了更多的焦点内细胞内容物，诸如裂片、细胞质和/或颗粒。在这个例子中，将包含粘度剂(约30％甘油)的PIOAL用于处理样品。将pH调节到约6.8至7.2的pH，并通过0.9％氯化钠使样品混合物为等渗的。此处所示的结果证实了用在图像分析仪上的示例性PIOAL配向细胞和细胞内细胞器的效力。
图4P和图4Q示出了使用标准鞘液得到的图像(图P上图和下图)与使用示例性PIOAL流体得到的图像(图4Q上图和下图)的比较。如此处所示，使用PIOAL导致了改善的RBC配向。使用仪器聚焦方案(对如图1中所描绘的示例性靶标44)分析样品，并通过视觉分析仪使靶标聚焦。然后使聚焦系统偏置位移距离52，从而使带形样品料流中的颗粒处于焦点内。血样之前用样品稀释剂进行了稀释。样品流过插管并沿着流通池的流路流动，从而产生在两层PIOAL或标准鞘液(在对照中)之间的带形样品料流(例如，2微米厚)。视觉分析仪然后生成将用于分析的带形样品料流中的颗粒的聚焦图像(例如，以每秒约60帧)。血样得自受试者并进行处理以通过血液分析仪进行分析。在使用标准鞘液或PIOAL处理样品的同时，捕获流通池中RBC的图像。基于成像数据(例如，4P和4Q)，相对百分比展示了配向RBC的数量的显著提高。结果证实了：使用如本文所述的聚焦仪器/方案，PIOAL有效地增加了带形样品料流中处于流动中的RBC的配向百分比。
另据观察，基于在对称和不对称流通池中使用浓度渐增的甘油(gly)，PIOAL的具体实施导致了改善的配向。
图4R中的图表显示了对称与不对称流通池相比时在PIOAL中使用0％-30％甘油得到的未配向细胞的百分比。在PIOAL中使用30％甘油并使用对称流通池使失准细胞的百分比降低到仅8％。注意，在PIOAL中没有甘油并使用不对称池时，失准细胞的百分比增至87％。因此，该图表证实了甘油百分比和流通池几何形状对颗粒(例如，RBC)配向的作用。在使用对称或不对称流通池几何形状时，添加甘油降低了失准RBC细胞的百分比。未配向RBC的百分比在不对称池中从87％降至15％，在对称池中从46％降至8％。因此，该图表提供了以下两种失准结果的比较：得自涉及对称变窄流通池过渡区和粘性鞘液的分析仪构形的失准结果(8％)，和得自涉及对称变窄流通池过渡区而不使用粘性鞘液的分析仪构形的失准结果(46％)。
这些结果为以下令人惊讶且出人意料的发现提供了证据：某些PIOAL组合物在用于执行基于图像的颗粒/细胞分析时具有出人意料的配向细胞和再定位细胞内结构的性质。
以举例的方式，开发了若干示例性PIOAL配方及其使用方法。以下是具有所需性质的PIOAL配方的一些示例。PIOAL包含稀释剂和至少一种粘度改性剂。
示例性PIOAL配方A包含具有300mL甘油的30％(v/v)甘油溶液，并用稀释剂适量至1L(足够的或使最终体积定容至1L的量)，所述稀释剂包含9.84g硫酸钠、4.07g氯化钠、0.11g盐酸普鲁卡因、0.68g磷酸二氢钾、0.71g磷酸氢二钠和1.86g乙二胺四乙酸二钠。然后将初始混合物用去离子水适量至1L，同时用氢氧化钠将pH调至7.2。
示例性PIOAL配方B包含具有65mL甘油的6.5％(v/v)甘油溶液，并用合适的示例性稀释剂适量至1L，所述稀释剂包含9.84g硫酸钠、4.07g氯化钠、0.11g盐酸普鲁卡因、0.68g磷酸二氢钾、0.71g磷酸氢二钠和1.86g乙二胺四乙酸二钠。然后将初始混合物用去离子水适量至1L，同时用氢氧化钠将pH调至7.2。
示例性PIOAL配方C包含在缓冲液中具有1％PVP(w/v)的5％甘油(v/v)溶液，其具有50mL甘油、10g PVP(分子量：360,000)、1包Sigma PBS粉末，pH为7.4(0.01M磷酸盐缓冲盐水；0.138M氯化钠；0.0027M氯化钾)，并用去离子水适量至1L。
示例性PIOAL配方D包含1.6％PVP(w/v)溶液，其具有16g PVP(分子量：360,000)和1包Sigma PBS粉末，pH为7.4(0.01M磷酸盐缓冲盐水；0.138M氯化钠；0.0027M氯化钾)，并用去离子水适量至1L。
通量
图5描绘了与流通池中一种或多种样品流体的注射相对应的时间线500。如此处所示，可引发第一样品流体向流通池中的注射，如步骤510所指示。随后，可在流通池中使来自第一样品流体的颗粒成像，如步骤515所指示。根据一些实施例，第一样品流体可具有约5μL至约150μL范围内的体积。在一些情况下，在成像区域处的流速为0.232μL/s(或在0.2μL/s至0.35μL/s的范围内)。可终止第一样品流体的注射，如步骤520所指示，并且可引发第二样品流体向流通池中的注射，如步骤530所指示。由于第一样品流体注射的终止和第二样品流体注射的引发，可引发样品流体瞬变，如步骤535所指示。随后，流通池中的样品流体瞬变可耗散，如步骤445所指示。可在流通池中使来自第二样品流体的颗粒成像，如步骤550所指示。可终止第二样品流体的注射，如步骤560所指示。在一些情况下，在约18℃至约40℃范围内的温度下执行注射和流动程序。
通常，在注射样品时并且在终止注射时，鞘液的料流保持在流通池内流动。因此，根据一些实施例，在样品流体脉冲式注射到流动鞘液的同时保持鞘液的连续流。当样品流体沿着流通池流动时，鞘液的连续流可有助于保持样品流体中的带形。
根据一些实施例，可在与步骤515相关的图像捕获的四秒内执行与步骤550相关的图像捕获。根据一些实施例，第一与第二样品流体注射之间(例如，步骤510与530之间)的时间为约30秒。相关地，根据一些实施例，第一与第二样品流体的成像的引发之间(例如，步骤515的引发与步骤550的引发之间)的时间为约30秒。这样，可以每小时处理120个样品流体。在一些情况下，图像捕获设备以180帧/秒(FPS)的帧速率操作，从而以高频率或高速率产生多个独特的连续图像或帧。如此处所示，成像步骤(例如515或550)的持续时间可为15秒，从而每个样品流体产生2,700张图像。
在一些情况下，在将第一样品流体从样品流体注射管注射到流动鞘液中(例如，步骤510)后约1至3秒内，第一样品流体达到稳定状态。在一些情况下，在将第一样品流体从样品流体注射管注射到流动鞘液中(例如，步骤510)后小于1秒内，第一样品流体达到稳定状态。样品向流通池中的注射可为两步过程。根据该实施例，第一步为将所有稀释剂从插管清除的高速推进，并且在初始推进后，样品的流速显著下降。过渡时间可被定义为样品(例如细胞)在成像流动条件(较慢样品流速)下从插管出口行进到成像区域花费的时间。在一些情况下，样品流体从插管出口行进到成像区域要花费约4秒。在一些情况下，在将第一样品流体从样品流体注射管注射到流动鞘液中(例如，步骤510)后约1.8秒内，第一样品流体达到稳定状态。在一些情况下，样品流体具有约2至4秒范围内流过流通池(例如，从插管出口到图像捕获位点)的通过时间。在一些情况下，样品流体穿过流通池的通过时间在约1至4秒范围内。
根据一些实施例，流体稳定或从插管的远侧出口行进到成像区域要花费约2至约5秒。在一些情况下，图像捕获持续时间段可为约20秒。
根据本发明实施例的血液学系统可处理体积为约150μL的血样。抽出的血液体积可为约120-150μL。在一些情况下，样品管中的最低可用血液体积对于自动采样模式为约500μL，而对于人工采样模式为约250μL。图4D中所示的插管或注射管400d具有约13μL的内部体积。根据一些实施例，插管或注射管具有小于约30μL的内部体积。在开始图像采集之前血样的体积能有效地注满插管，因此可避免延长的样品流不稳定的时间段。例如，具有约13μL的内部体积的插管的使用可对应于约2至3秒的样品流不稳定时间段。根据一些实施例，插管内部体积可能不会影响样品流稳定性。根据一些实施例，如果初始高速样品推进不足以置换插管内的所有稀释剂，则插管内部体积可能会影响样品带自身中的细胞浓度稳定性。相关地，可使用少量稀释剂在少量时间内在样品之间清洗插管。这样，可以实现有利于捕获高质量图像的稳定样品流，并且同时实现高通量，且具有低残留。根据一些实施例，具有高内部体积的插管可需要样品的高体积初始高速推进以清除管线和插管中的所有稀释剂。本发明的实施例涵盖较低内部插管体积的具体实施，所述较低内部插管体积适用于这样的血液学应用，其中可用样品体积较低，并且其中可在少量时间内完成较低体积推进。
根据一些实施例，血液学系统可被配置成限制瞬变和顺序的样品交叉污染以加速从血液流体样品的图像采集。
方法
图6描绘了根据本发明实施例的用于使血液流体样品中的颗粒成像的示例性方法600的各方面。如此处所示，血样610包含颗粒，并且可分成一个或多个样品流体，诸如包含颗粒的第一样品流体612和包含颗粒的第二样品流体614。该方法可包括如步骤620所指示的使鞘液沿着流通池的流路流动。此外，该方法可包括将第一样品流体612从样品流体注射管注射到流通池内的流动鞘液中，如步骤630所指示，以便提供具有邻近注射管的第一厚度的样品流体料流。流通池的流路可具有流路尺寸上的降低使得样品流体料流的厚度从初始厚度降低到邻近图像捕获位点的第二厚度。方法600还可包括在流通池的图像捕获位点处使来自第一样品流体的第一多个颗粒成像，如步骤640所指示。
方法600还可包括引发样品流体瞬变。例如，可通过如下方式引发样品流体瞬变：终止向流动鞘液中注射第一样品流体，以及将第二样品流体注射到流动鞘液中，如步骤650所指示。此外，方法600可包括在流通池的图像捕获位点处使来自第二样品流体的第二多个颗粒成像，如步骤660所指示。根据一些实施例，使第二多个颗粒成像可基本上在样品流体瞬变之后和在使第一多个颗粒成像的4秒内进行。
剪切应变速率
图7和图8描绘了根据本发明实施例的针对流通池中某些流动条件的剪切应变速率值的各方面。在这些附图的每一个中，使用30％甘油鞘液。在一些情况下，粘度可具有2.45×10-3的值。剪切应力值可等于粘度值乘以应变速率值得到的乘积。参照图7，样品可具有0.3μL/s的流速，而鞘液可具有21μL/s的流速。参照图8，样品可具有1μL/s的流速，而鞘液可具有70μL/s的流速。在这些图的每一个中，可以看出，流动展示出朝向中心(C)的更低的应变值和朝向周边(P)的更高的应变值。此类应变值在一些实施例中可对应于不对称流通池构形。
如图7中所描绘，根据一些实施例，朝向流动料流的中心(C)部分的更低的应变速率可具有约500(1/s)或更低的值，而朝向流动料流的周边(P)的更高的应变速率可具有约3000(1/s)或更高的值。如图8中所描绘，根据一些实施例，朝向流动料流的中心(C)部分的更低的应变速率可具有约1000(1/s)或更低的值，而朝向流动料流的周边(P)的更高的应变速率可具有约9000(1/s)或更高的值。
因此，可以看出，更低的样品和鞘液速率(例如，图7)对应于更低的应变速率，而更高的样品和鞘液速率(例如，图8)对应于更高的应变速率。应当理解，本发明的实施例涵盖使用对应于各种粘度值、各种应变速率值和/或各种剪切应力值的样品和/或鞘液。
自动对焦靶标
返回参照图1，颗粒成像系统可包括相对于流通池22固定的自动对焦图案或靶标44。自动对焦靶标44可用于获得流过流通池的血液流体颗粒的聚焦图像。
图9A描绘了根据本发明实施例的示例性自动对焦靶标900。如此处所示，靶标900包括不透明环形带910和透明中心或孔920。在操作中，成像设备聚焦于带910并通过孔捕获图像。如本文别处和共同待审的美国专利申请No.____中所讨论，图像捕获方法可涉及首先聚焦(或自动对焦)于带910，然后在通过孔920获得图像之前调节图像捕获设备与样品流体料流之间的距离。因此，带910可提供图像捕获设备的自动对焦系统可对其检测和聚焦的靶标，并且靶标的某些部分(例如，边缘或段)可包括在图像中。在一些情况下，靶标可以具有中心孔的铬圆盘的形式提供。示例性靶标可设置有胶粘或固定到流通池的直径为约0.5mm的中心针孔。中心针孔或孔920的尺寸可被选择为使得不透明环形带910的仅四个边缘部分930在捕获的图像940中可见，如图9B中所示。因此，环形带910不干扰细胞图像的捕获(例如，光可穿过孔920以照明样品颗粒，并且视野基本上不受环形带妨碍)。这样，带910仅在图像的拐角中显现。
图10描绘了根据本发明实施例的示例性自动对焦靶标1000。靶标1000包括带或边界1010和中心孔1020。图11示出了根据本发明实施例的另一个示例性自动对焦靶标1100。靶标1100包括带或边界1110和中心孔1120。根据一些实施例，自动对焦靶标1100提供顶部和底部上具有50黑色像素的图像。在一些情况下，自动对焦靶标1100提供约65.3μm的流通池聚焦偏移(FCFO)。FCFO的各方面在共同待审的美国专利申请No._____中进一步讨论，该专利申请的内容以引用方式并入本文。
图12A描绘了根据本发明实施例的示例性自动对焦靶标1200。靶标1200呈现为信箱设计，并且包括第一或上边界1210和第二或下边界1220。靶标1200还包括第一与第二边界之间的孔或透明通路1230。根据一些实施例，靶标具有约4mm的直径，并且信箱的高度为265μm。在一些情况下，上边界和下边界可呈现为半圆，并且可用沉积金属诸如氧化铬或一些其他不透明材料制备。
图12B示出了自动对焦靶标1200的中心部分的近距离视图。如此处所示，第一边界1210包括负/正数值刻度和居中的零值。第二边界1220包括类似的刻度。在一些情况下，刻度增量为100μm。根据一些实施例，刻度可用于有利于流通池的定位使得成像设备或相机的视野可集中于样品料流。如此处所示，样品料流1240在垂直于第一和第二边界的刻度的方向上流动。作为聚焦方案的一部分，图像捕获设备可有效地聚焦于存在于边界1210、1220上的数字或其他字符或可成像对象。
本发明的实施例涵盖用于解决与使用颗粒分析系统相关的热漂移的技术，此类热效应可能损害由成像设备获得的图像的质量。图13A描绘了具有热传感器1370、反射器1380和自动对焦靶标1344的流通池1320的局部侧视图。在颗粒分析系统的操作期间，热效应可导致样品料流缓慢漂移偏离成像设备的焦点。例如，热效应可通过来自灯的辐射热使流通池热膨胀而引起。此外，热效应可通过传导加热和辐射加热使流通池和光具座组件(OBA)组件热膨胀而引起。在一些实施例中，OBA的某些部件可膨胀，这可导致聚焦误差。例如，此类部件可包括将相机24保持在一起的金属板、保持或连接到流通池的金属板、或将流通池和相机24保持在一起的金属板。图13B描绘了具有热传感器1370和自动对焦靶标1344的流通池1320的局部透视图。此外，图13C描绘了具有热传感器1370、反射器1380和自动对焦靶标1344的流通池1320的另一个透视图。
反射器1380可有效地减少或限制被流通池1320吸收的热的量。例如，反射器1380可阻断由闪光灯1342辐射的热，如图13A中所指示。因此，反射器1380可使灯的热冲击最小化。反射器1342也可减少灯所产生的炫光和光散射，从而得到改善的图像质量。热传感器1370定位在流体流通道附近并与图像捕获位点相邻，以使得可以获得准确的温度读数。来自温度传感器的信息可用于使图像捕获设备聚焦于样品流体带料流。
如图13D中所描绘，流通池1300d可包括具有口或排放口1301d的流路1322d，气泡1302d可通过所述口或排放口1301d释放或移除。如此处所描绘，可通过其施加真空的管1303d可与口1301d接触以便从流动料流抽出气泡1302d。此类气泡移除机构适用于从流通池内的流动流体移除气泡，并且可有效地防止气泡或微气泡驻留或滞留在流通池的内部。
可使用计算机或具有硬件、软件和/或固件的其他处理器来执行本文描述的计算或操作中的每一个。各个方法步骤可通过模块执行，并且所述模块可包括被布置用于执行本文所述的方法步骤的多种多样的数字和/或模拟数据处理硬件和/或软件中的任何一种。所述模块任选地包括数据处理硬件，该数据处理硬件由于具有与其相关联的适当机器编程代码而适于执行这些步骤中的一个或多个，用于两个或更多个步骤(或两个或更多个步骤的部分)的模块被集成到单个处理器板中或采用多种多样的集成式和/或分布式处理架构中的任何一种被分成不同的处理器板。这些方法和系统通常将采用有形介质，该有形介质收录具有用于执行上述方法步骤的指令的机器可读代码。合适的有形介质可包括存储器(包括易失性存储器和/或非易失性存储器)、存储介质(诸如软盘、硬盘、磁带等上的磁记录；光学存储器诸如CD、CD-R/W、CD-ROM、DVD等上的磁记录；或任何其他数字或模拟存储介质)，等等。
本公开中所论述的所有专利、专利公布、专利申请、期刊论文、书籍、技术参考手册等全文以引用方式并入本文中以用于所有目的。
在附图中描绘或上文所述的组件的不同布置，以及未示出或描述的组件和步骤也是可行的。相似地，一些特征结构和子组合是可用的，且它们可以在与其他特征结构和子组合无关的情况下被采用。出于例示性和非限制性的目的描述了本发明的实施例，但可供选择的实施例对于本专利的读者而言将是显而易见的。在某些情况下，方法步骤或操作可按不同的顺序执行或实施，或者可对操作进行添加、删除或修改。应当理解，在本发明的某些方面，可用多个部件来替换单个部件，并且可用单个部件来替换多个部件，以提供元件或结构或者执行给定的一种或多种功能。除了这种替换将不能有效实践本发明的某些实施例的情况之外，这种替换被视为在本发明的范围之内。因此，本发明不限于上文所述或在附图中描绘的实施例，并且可以在不脱离以下权利要求的范围的前提下，创造各种实施例和进行各种修改。
Claims (24)
1.一种使用颗粒分析系统使颗粒成像的方法，所述颗粒分析系统被配置成用于实现结合的粘度和几何流体聚焦，所述颗粒包含于血液流体样品内，所述方法包括：
沿着所述颗粒分析仪的流通池的流路注射鞘液，所述鞘液具有与所述血液流体样品的粘度不同的粘度；
将所述血液流体样品以一定的流速从样品流体注射管注射到所述流通池内的所述流动鞘液中以便提供具有邻近所述注射管的第一厚度的样品流体料流，所述流通池的所述流路具有流路尺寸上的降低使得所述样品流体料流的厚度从初始厚度降低到邻近图像捕获位点的第二厚度；
在所述流通池的所述图像捕获位点处使来自所述样品流体料流的第一多个所述颗粒成像；
其中所述流路尺寸上的降低由具有近侧厚度的近侧流路部分和具有小于所述近侧厚度的远侧厚度的远侧流路部分限定，
其中所述样品流体注射管的下游端定位在所述近侧流路部分的远侧，
其中所述鞘液与所述血液流体样品之间的粘度差，与所述流路尺寸上的降低和所述样品流体料流的所述流速相结合，能有效地在四秒或更短的非零通过时间内将所述血液流体样品中的细胞从所述样品流体注射管递送到所述图像捕获位点，同时所述鞘液中的粘度剂保持细胞的活力，使得随着所述细胞从所述样品流体注射管行进到所述图像捕获位点，当所述细胞从所述样品流体料流延伸到所述流动鞘液中时所述细胞的结构和内容物保持完整。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述注射管包括内部体积，所述内部体积基于所述注射管的流动区横截面与所述流通池的流动区横截面的比率、所述注射管的所述流动区横截面与所述流通池的外径的比率、或所述注射管的所述流动区横截面与所述样品流体料流的流动区横截面的比率被确定。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述鞘液以一定的鞘液流速沿着所述流路注射，其中所述鞘液的所述流速和所述流通池的所述流动区横截面对应于鞘液速度，其中所述血液流体样品的所述流速和所述注射管的出口的所述流动区横截面对应于样品速度，并且其中在所述鞘液速度和所述血液流体样品速度之间存在速度差。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述粘度和速度差以及所述流路尺寸上的降低能有效地在所述图像捕获位点流体聚焦所述血液流体样品中的细胞。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述流路尺寸上的降低由所述流路的相对壁限定，所述相对壁沿着所述流路径向地向内成角度，总体上关于横向平面对称，所述横向平面平分所述样品流体料流第一厚度和第二厚度。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述流路尺寸上的降低的对称性能有效地将所述血液流体样品中的红血细胞成像取向失准限制到小于20％。
7.根据权利要求1所述的方法，其中所述血液流体样品包括球形颗粒，并且所述样品流体与所述鞘液之间的粘度差能有效地在所述流通池的所述图像捕获位点处将所述球形颗粒的细胞内细胞器配向在焦平面内。
8.根据权利要求1所述的方法，其中所述注射管包括具有第一流动横截面积的近侧部分和具有第二流动横截面积的远侧部分，并且其中所述近侧部分的所述流动横截面积大于所述远侧部分的所述流动横截面积的1.5倍。
9.根据权利要求1所述的方法，其中鞘液流速与样品流体流速的比率为约200。
10.根据权利要求1所述的方法，其中所述样品流体料流的所述第二厚度在2μm至10μm的范围内。
11.根据权利要求1所述的方法，其中所述样品流体料流的所述第一厚度与所述样品流体料流的所述第二厚度的比率具有20:1至70:1范围内的值。
12.一种颗粒分析系统，所述颗粒分析系统执行结合的粘度和几何流体聚焦以便使血液流体样品中的颗粒成像，所述系统包括：
流通池，所述流通池具有被配置用于运输鞘液流的流路，所述鞘液具有与所述血液流体样品的粘度不同的粘度；
样品流体注射系统，所述样品流体注射系统与所述流路流体连通并且被配置用于将所述样品注射到所述流通池内的流动鞘液中以便提供具有邻近注射管的第一厚度的样品流体料流，所述流通池的所述流路具有流路尺寸上的降低使得所述样品流体料流的厚度从初始厚度降低到邻近图像捕获位点的第二厚度；
图像捕获设备，所述图像捕获设备与所述图像捕获位点配向以便在所述流通池的所述图像捕获位点处使来自所述样品流体的多个所述颗粒成像；以及
处理器和有形的永久的计算机可读介质，所述处理器与所述样品流体注射器系统和所述图像捕获设备耦合，所述计算机可读介质利用计算机应用程序被编程，当所述计算机应用程序被所述处理器执行时，使得所述处理器引发所述样品流体以一定的样品流速向所述流动鞘液中注射，使得所述鞘液与所述血液流体样品之间的粘度差，与所述流路尺寸上的降低和所述样品流体料流的所述流速相结合，能有效地在四秒或更短的非零通过时间内将所述血液流体样品中的细胞从所述样品流体注射管递送到所述图像捕获位点，同时所述鞘液中的粘度剂保持细胞的活力，使得随着所述细胞从所述样品流体注射管行进到所述图像捕获位点，当所述细胞从所述样品流体料流延伸到所述流动鞘液中时所述细胞的结构和内容物保持完整。
13.根据权利要求12所述的系统，其中所述注射管包括内部体积，所述内部体积基于所述注射管的流动区横截面与所述流通池的流动区横截面的比率、所述注射管的所述流动区横截面与所述流通池的外径的比率、或所述注射管的所述流动区横截面与所述样品流体料流的流动区横截面的比率。
14.根据权利要求12所述的系统，其中所述流路尺寸上的降低由所述流路的相对壁限定，所述相对壁沿着所述流路径向地向内成角度，总体上关于横向平面对称，所述横向平面平分所述样品流体料流第一厚度和第二厚度。
15.根据权利要求12所述的系统，其中所述流路尺寸上的降低的对称性能有效地将所述血液流体样品中的红血细胞成像取向失准限制到小于20％。
16.根据权利要求12所述的系统，其中所述注射管包括具有第一流动横截面积的近侧部分和具有第二流动横截面积的远侧部分，并且其中所述近侧部分的所述流动横截面积大于所述远侧部分的所述流动横截面积的1.5倍。
17.根据权利要求12所述的系统，其中所述样品流体料流流过所述流通池的通过时间在1至4秒的范围内。
18.根据权利要求12所述的系统，其中所述流通池被配置成在第一流动方向上接收从鞘液源进入所述流路的所述鞘液，所述第一流动方向垂直于沿着所述图像捕获位点处的所述流路的所述鞘液的第二流动方向。
19.根据权利要求12所述的系统，其中所述流通池包括用于所述图像捕获设备的自动对焦靶标。
20.根据权利要求12所述的系统，还包括具有相对于所述流通池的固定位置的自动对焦靶标。
21.根据权利要求12所述的系统，其中所述鞘液与所述血液流体样品之间的粘度差，与所述流路尺寸上的降低和所述样品流体料流的所述流速相结合，能有效地在1秒到4秒的时间内将所述血液流体样品中的细胞从所述样品流体注射管递送到所述图像捕获位点。
22.根据权利要求12所述的系统，其中所述图像捕获设备包括高光学分辨率成像设备。
23.根据权利要求12所述的系统，其中所述图像捕获设备具有1μm以下的光学分辨率。
24.根据权利要求12所述的系统，其中所述图像捕获设备包括数字图像捕获装置。
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| KR102055474B1 (ko) | 2013-03-15 | 2019-12-12 | 아이리스 인터내셔널 인크. | 혈액 샘플에서의 입자 분석을 위한 플로우셀 시스템 및 방법 |
| US9857361B2 (en) | 2013-03-15 | 2018-01-02 | Iris International, Inc. | Flowcell, sheath fluid, and autofocus systems and methods for particle analysis in urine samples |
| WO2015013605A1 (en) * | 2013-07-26 | 2015-01-29 | Abbott Point Of Care, Inc. | Method and apparatus for producing an image of undiluted whole blood sample having wright stain coloration |
| EP3149522A4 (en) | 2014-05-27 | 2018-02-21 | Skorpios Technologies, Inc. | Waveguide mode expander using amorphous silicon |
| EP3176563B1 (en) * | 2014-07-29 | 2021-06-30 | National University Corporation Hamamatsu University School of Medicine | Identification device and identification method |
| JP6104475B2 (ja) * | 2014-08-28 | 2017-04-05 | シスメックス株式会社 | 粒子撮像装置および粒子撮像方法 |
| US9832366B2 (en) | 2014-09-29 | 2017-11-28 | Biosurfit, S.A. | Focusing method |
| EP3200917B1 (en) * | 2014-09-29 | 2020-02-19 | Biosurfit, S.A. | Cell counting |
| WO2016050837A1 (en) * | 2014-09-30 | 2016-04-07 | Foss Analytical A/S | Method, device and system for hydrodynamic flow focusing |
| CN107003223B (zh) * | 2014-10-17 | 2021-08-17 | 艾瑞思国际股份有限公司 | 用于使流体样品成像的系统和方法 |
| JP6282969B2 (ja) * | 2014-10-31 | 2018-02-21 | 日本光電工業株式会社 | フロー解析装置、フローサイトメータ、及びフロー解析方法 |
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| WO2016157982A1 (ja) * | 2015-03-31 | 2016-10-06 | シスメックス株式会社 | 尿分析システム、撮像装置、細胞撮像装置、尿分析方法、管理装置および情報処理方法 |
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| CN105067488A (zh) * | 2015-08-11 | 2015-11-18 | 长春瑞克医疗科技有限公司 | 一种粒子成像室 |
| KR101873318B1 (ko) | 2015-09-30 | 2018-07-03 | 주식회사 싸이토젠 | 세포 이미징 장치 및 그 방법 |
| WO2017057966A1 (ko) * | 2015-09-30 | 2017-04-06 | 주식회사 싸이토젠 | 세포 이미징 장치 및 그 방법 |
| WO2017106342A1 (en) * | 2015-12-18 | 2017-06-22 | Abbott Laboratories | Spectral differentiation of histological stains |
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| KR101807256B1 (ko) * | 2016-01-26 | 2017-12-08 | 한양대학교 에리카산학협력단 | 입자 분리 장치 및 입자 분리 방법 |
| WO2017167361A1 (en) * | 2016-03-30 | 2017-10-05 | Siemens Healthcare Gmbh | Aligning a non-spherical biological entity in a sample flow using ambient viscoelastic fluid flows |
| US10362238B2 (en) | 2016-04-06 | 2019-07-23 | Biosurfit, S.A. | Method and system for capturing images of a liquid sample |
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| EP4092403A1 (en) * | 2016-06-24 | 2022-11-23 | Beckman Coulter Inc. | Image atlas systems and methods |
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| CN107144521B (zh) * | 2017-06-06 | 2020-05-05 | 深圳小孚医疗科技有限公司 | 成像室姿态调节机构和调节方法 |
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| CN107643238A (zh) * | 2017-09-19 | 2018-01-30 | 中山大学附属第医院 | 一种定量检测血液循环微粒浓度的方法 |
| US10466173B2 (en) * | 2017-10-06 | 2019-11-05 | Wyatt Technology Corporation | Optical flow cell assembly incorporating a replaceable transparent flow cell |
| EP4292520A2 (en) | 2017-10-16 | 2023-12-20 | Massachusetts Institute of Technology | Systems, devices and methods for non-invasive hematological measurements |
| US11609224B2 (en) | 2017-10-26 | 2023-03-21 | Essenlix Corporation | Devices and methods for white blood cell analyses |
| CN108073547B (zh) * | 2017-12-06 | 2021-05-18 | 苏州大学 | 一种基于能量耗散的溶血经验预测方法及装置 |
| US10267723B1 (en) * | 2018-01-23 | 2019-04-23 | Cbrn International, Ltd. | Bioaerosol particle detector |
| CN108489872B (zh) * | 2018-03-23 | 2022-03-04 | 奥星制药设备（石家庄）有限公司 | 在线粒度监测方法和系统 |
| CN108801740B (zh) * | 2018-03-28 | 2021-08-06 | 迈克生物股份有限公司 | 铁染色试剂 |
| KR102026983B1 (ko) * | 2018-03-29 | 2019-09-30 | 두산중공업 주식회사 | 가스터빈 내 파이프를 통과하는 유체의 오염물을 모니터링 하는 시스템 및 그 방법 |
| JP7109229B2 (ja) * | 2018-03-30 | 2022-07-29 | シスメックス株式会社 | フローサイトメーター及び粒子検出方法 |
| SE542402C2 (en) * | 2018-07-02 | 2020-04-21 | Cellavision Ab | Method and apparatus for training a neural network classifier to classify an image depicting one or more objects of a biological sample |
| US11248994B2 (en) | 2018-08-16 | 2022-02-15 | Essenlix Corporation | Optical adapter with a card slot for imaging a thin sample layer |
| KR102100197B1 (ko) * | 2018-08-17 | 2020-04-14 | (주)엠큐빅 | 플로우 셀을 이용한 미세조류 연속 모니터링 장치 |
| JP7066001B2 (ja) * | 2018-10-29 | 2022-05-12 | 京セラ株式会社 | 計測装置 |
| WO2020091720A1 (en) * | 2018-10-29 | 2020-05-07 | University Of Wyoming | Enhancement of fountain flow cytometry by reducing background light intensity |
| CN109100286A (zh) * | 2018-10-31 | 2018-12-28 | 江苏卓微生物科技有限公司 | 细胞计数仪 |
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| CN109919946B (zh) * | 2019-02-19 | 2021-04-20 | 温州医科大学 | 一种基于光学相干层析成像技术预测巩膜透氧型接触镜镜后泪液形态变化止点的方法 |
| US20220146399A1 (en) * | 2019-02-27 | 2022-05-12 | Kyocera Corporation | Particle separating and measuring device and particle separating and measuring apparatus |
| EP3957977B1 (en) * | 2019-04-18 | 2023-08-30 | Fundació Institut de Ciències Fotòniques | Fluidic apparatus for optical interrogation of individual microorganisms |
| CN111760795B (zh) * | 2019-07-16 | 2022-02-01 | 北京京东乾石科技有限公司 | 用于分拣货物的方法和装置 |
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| CN114502941A (zh) * | 2019-10-11 | 2022-05-13 | 贝克曼考尔特公司 | 用于染色和样品处理的方法及组合物 |
| US11125675B2 (en) * | 2019-10-18 | 2021-09-21 | Roger Lawrence Deran | Fluid suspended particle classifier |
| US20220412871A1 (en) * | 2019-12-10 | 2022-12-29 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Device for visualization of components in a blood sample |
| US11877731B2 (en) * | 2020-03-07 | 2024-01-23 | Hall Labs Llc | Toilet with integral microscope slide |
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| CN111721950A (zh) * | 2020-05-29 | 2020-09-29 | 迪瑞医疗科技股份有限公司 | 一种稳定的有形成分分析聚焦液及其制备方法 |
| CN112881246A (zh) * | 2021-01-26 | 2021-06-01 | 苏州胤煌精密仪器科技有限公司 | 一种可连续变倍的图像法粒度仪 |
| WO2022208480A1 (en) * | 2021-04-02 | 2022-10-06 | Noul Co., Ltd. | Hydrogel-based stamping for solution-free blood cell staining |
| CN113326743B (zh) * | 2021-05-10 | 2023-10-13 | 大连海洋大学 | 一种养殖背景条件下鱼群运动行为参数提取和分析方法 |
| WO2023010059A1 (en) * | 2021-07-27 | 2023-02-02 | Gateway Genomics, Llc | Methods, compositions, and kits for the preservation of nucleic acids |
| US20230046207A1 (en) * | 2021-08-10 | 2023-02-16 | Becton, Dickinson And Company | Outlet fittings for reducing bubbles at the interface with a flow cell, and flow cytometers and methods using the same |
| KR102572517B1 (ko) * | 2021-08-18 | 2023-08-31 | 주식회사 아폴론 | 인공지능 기반 호산구의 라만 데이터 처리 방법 및 장치 |
| WO2023049047A1 (en) * | 2021-09-27 | 2023-03-30 | Beckman Coulter, Inc. | Adjustable mounting apparatus |
| AU2022394321A1 (en) * | 2021-11-17 | 2024-03-21 | Becton, Dickinson And Company | Methods for dynamic real-time adjustment of a data acquisition parameter in a flow cytometer |
| WO2023114204A1 (en) | 2021-12-17 | 2023-06-22 | Beckman Coulter, Inc. | Focus quality determination through multi-layer processing |
| CN114441271B (zh) * | 2021-12-27 | 2023-06-27 | 桂林优利特医疗电子有限公司 | 一种新型染色液的配置及染色方法 |
| WO2023129647A1 (en) | 2021-12-29 | 2023-07-06 | Beckman Coulter, Inc. | Biological sample driving system and method |
| WO2023140235A1 (ja) * | 2022-01-20 | 2023-07-27 | 株式会社堀場製作所 | 粒子径分布測定装置、粒子径分布測定方法、及び粒子径分布測定用プログラム |
| WO2023150064A1 (en) | 2022-02-02 | 2023-08-10 | Beckman Coulter, Inc. | Measure image quality of blood cell images |
| WO2023172763A1 (en) | 2022-03-11 | 2023-09-14 | Beckman Coulter, Inc. | Controls and their use in analyzers |
| US20240027310A1 (en) | 2022-07-22 | 2024-01-25 | Beckman Coulter, Inc. | Biological sample staining module and biological analysis systems and methods |
| FR3138211A1 (fr) * | 2022-07-25 | 2024-01-26 | Horiba Abx Sas | Dispositif pour le comptage et la différenciation de particules d’un flux d’échantillon |
| WO2024030620A1 (en) | 2022-08-05 | 2024-02-08 | Beckman Coulter, Inc. | Identification of immature cell types utilizing imaging |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1471976A (en) * | 1974-09-20 | 1977-04-27 | Coulter Electronics | Particle sensing apparatus including a device for orienting generally flat particles |
| GB1557691A (en) * | 1975-09-27 | 1979-12-12 | Strahlen Umweltforsch Gmbh | Apparatus for absorption measurement and size investigation of particles |
| GB2121976A (en) * | 1982-04-29 | 1984-01-04 | Int Remote Imaging Systems Inc | A method of aligning particles in a moving fluid sample |
| EP0486747A2 (en) * | 1990-11-22 | 1992-05-27 | Toa Medical Electronics Co., Ltd. | Flow cell mechanism in flow imaging cytometer |
| CN1265195A (zh) * | 1997-07-24 | 2000-08-30 | 美国政府农业部 | 用于高效细胞分类的流动细胞光度计管嘴 |
| CN1739018A (zh) * | 2002-11-19 | 2006-02-22 | 国际遥距成象系统公司 | 尿液分析诊断系统的贯流分析器及其制造方法 |
Family Cites Families (141)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3888782A (en) | 1972-05-08 | 1975-06-10 | Allergan Pharma | Soft contact lens preserving solution |
| US3822095A (en) * | 1972-08-14 | 1974-07-02 | Block Engineering | System for differentiating particles |
| US3819270A (en) * | 1972-10-02 | 1974-06-25 | Block Engineering | Blood cell analyzer |
| US4338024A (en) | 1980-05-02 | 1982-07-06 | International Remote Imaging Systems, Inc. | Flow analyzer and system for analysis of fluids with particles |
| FR2484077B1 (fr) | 1980-06-06 | 1984-07-06 | Inst Nat Sante Rech Med | Procede et dispositif de mesure de la deformabilite de cellules vivantes, notamment des globules rouges du sang |
| US4393466A (en) | 1980-09-12 | 1983-07-12 | International Remote Imaging Systems | Method of analyzing particles in a dilute fluid sample |
| JPS5774372A (en) | 1980-10-27 | 1982-05-10 | Seiko Epson Corp | Fluid ink for printer |
| US4606631A (en) * | 1983-05-12 | 1986-08-19 | Kabushiki Kaisha Toshiba | Particle counter |
| US4647531A (en) * | 1984-02-06 | 1987-03-03 | Ortho Diagnostic Systems, Inc. | Generalized cytometry instrument and methods of use |
| AU563260B2 (en) | 1984-11-29 | 1987-07-02 | International Remote Imaging Systems Inc. | Method of operating a microscopic instrument |
| US4732479A (en) * | 1985-10-18 | 1988-03-22 | Canon Kabushiki Kaisha | Particle analyzing apparatus |
| DE3851458T2 (de) | 1987-04-08 | 1995-02-09 | Hitachi Ltd | Vorrichtung mit einer scheideförmigen Durchflusszelle. |
| JPS63262565A (ja) * | 1987-04-20 | 1988-10-28 | Hitachi Ltd | フロ−セル |
| DE3902079A1 (de) | 1988-04-15 | 1989-10-26 | Bayer Ag | I.m. injektionsformen von gyrase-inhibitoren |
| US5123055A (en) | 1989-08-10 | 1992-06-16 | International Remote Imaging Systems, Inc. | Method and an apparatus for differentiating a sample of biological cells |
| JP2939647B2 (ja) * | 1990-07-24 | 1999-08-25 | シスメックス株式会社 | フローイメージングサイトメータにおける自動焦点調整方法 |
| JP3075370B2 (ja) * | 1991-07-26 | 2000-08-14 | シスメックス株式会社 | 粒子分析用のサンプル扁平流形成装置 |
| US5412466A (en) * | 1991-07-26 | 1995-05-02 | Toa Medical Electronics Co., Ltd. | Apparatus for forming flattened sample flow for analyzing particles |
| JP3111706B2 (ja) | 1992-02-18 | 2000-11-27 | 株式会社日立製作所 | 粒子分析装置及び粒子分析方法 |
| DE69327182T2 (de) | 1992-02-18 | 2000-06-15 | Hitachi Ltd | Gerät und Verfahren zur Untersuchung von Teilchen in einem Fluid |
| US5308526A (en) | 1992-07-07 | 1994-05-03 | The Procter & Gamble Company | Liquid personal cleanser with moisturizer |
| JP3215175B2 (ja) | 1992-08-10 | 2001-10-02 | シスメックス株式会社 | 粒子分析装置 |
| US5889881A (en) * | 1992-10-14 | 1999-03-30 | Oncometrics Imaging Corp. | Method and apparatus for automatically detecting malignancy-associated changes |
| CN1040888C (zh) * | 1993-01-14 | 1998-11-25 | 方奉谁 | 快速细胞染色剂 |
| JP3052665B2 (ja) * | 1993-01-26 | 2000-06-19 | 株式会社日立製作所 | フローセル装置 |
| US5585246A (en) | 1993-02-17 | 1996-12-17 | Biometric Imaging, Inc. | Method for preparing a sample in a scan capillary for immunofluorescent interrogation |
| JP2826448B2 (ja) * | 1993-09-17 | 1998-11-18 | 株式会社日立製作所 | フロー式粒子画像解析方法およびフロー式粒子画像解析装置 |
| JP3039594B2 (ja) * | 1993-10-08 | 2000-05-08 | 株式会社日立製作所 | 染色試薬およびその使用方法 |
| JP3290786B2 (ja) | 1993-11-26 | 2002-06-10 | シスメックス株式会社 | 粒子分析装置 |
| US5812419A (en) * | 1994-08-01 | 1998-09-22 | Abbott Laboratories | Fully automated analysis method with optical system for blood cell analyzer |
| ES2156927T3 (es) | 1994-10-20 | 2001-08-01 | Sysmex Corp | Reactivo y metodo para analizar componentes solidos en orina. |
| AU4741796A (en) | 1994-12-23 | 1996-07-19 | International Remote Imaging Systems Inc. | Method and apparatus of analyzing particles in a fluid sample and displaying same |
| US5619032A (en) | 1995-01-18 | 1997-04-08 | International Remote Imaging Systems, Inc. | Method and apparatus for automatically selecting the best focal position from a plurality of focal positions for a focusing apparatus |
| JPH0989753A (ja) * | 1995-09-25 | 1997-04-04 | Hitachi Ltd | 粒子分析装置 |
| US5808737A (en) | 1996-02-29 | 1998-09-15 | Sienna Biotech, Inc. | Pre-analysis chamber for a flow particle analyzer |
| US6184978B1 (en) | 1996-05-15 | 2001-02-06 | International Remote Imaging Systems, Inc. | Method and apparatus for verifying uniform flow of a fluid sample through a flow cell and distribution on a slide |
| AU3121297A (en) | 1996-05-15 | 1997-12-05 | International Remote Imaging Systems Inc. | Selectiely emphasizing particles of interest from a fluid sample for analysis |
| US5872627A (en) * | 1996-07-30 | 1999-02-16 | Bayer Corporation | Method and apparatus for detecting scattered light in an analytical instrument |
| KR100200734B1 (ko) | 1996-10-10 | 1999-06-15 | 윤종용 | 에어리얼 이미지 측정 장치 및 방법 |
| US5935857A (en) * | 1997-08-01 | 1999-08-10 | Coulter International Corp. | Blood diluent |
| US20020028471A1 (en) * | 1998-02-20 | 2002-03-07 | Oberhardt Bruce J. | Cell analysis methods and apparatus |
| JP3867880B2 (ja) | 1998-04-08 | 2007-01-17 | シスメックス株式会社 | 尿中赤血球の鑑別装置および方法 |
| ATE376175T1 (de) * | 1998-08-21 | 2007-11-15 | Union Biometrica Inc | Instrument zur analyse und selektiven verteilung von objektproben |
| US20030059440A1 (en) | 1998-09-01 | 2003-03-27 | Tim Clarot | Composition and method for moisturizing nasal tissue |
| US6130745A (en) | 1999-01-07 | 2000-10-10 | Biometric Imaging, Inc. | Optical autofocus for use with microtiter plates |
| JP2000214070A (ja) | 1999-01-21 | 2000-08-04 | Sysmex Corp | シ―スフロ―セルとそれを用いた血液分析装置 |
| US6575930B1 (en) * | 1999-03-12 | 2003-06-10 | Medrad, Inc. | Agitation devices and dispensing systems incorporating such agitation devices |
| JP4824157B2 (ja) | 1999-08-06 | 2011-11-30 | インベンテイオ・アクテイエンゲゼルシヤフト | 長いエスカレータと動く歩道の支持構造体 |
| US6632676B1 (en) | 1999-09-24 | 2003-10-14 | Clinical Diagnostic Solutions | Multi-purpose reagent system and method for enumeration of red blood cells, white blood cells and thrombocytes and differential determination of white blood cells |
| EP1242050A4 (en) | 1999-12-21 | 2004-05-26 | Univ Yale | STIMULATION OF ANGIOGEN SE BY THE USE OF SURVIVIN |
| CA2396015A1 (en) | 1999-12-29 | 2001-07-05 | Union Biometrica, Inc. | High viscosity sheath reagent for flow cytometry |
| US6974938B1 (en) | 2000-03-08 | 2005-12-13 | Tibotec Bvba | Microscope having a stable autofocusing apparatus |
| JP2001290161A (ja) | 2000-04-04 | 2001-10-19 | Advanced Display Inc | 液晶表示装置およびその製法 |
| KR100347760B1 (ko) * | 2000-04-19 | 2002-08-09 | 엘지전자주식회사 | 기울어진 세탁조가 구비된 세탁기 |
| PT1301894E (pt) | 2000-04-24 | 2009-08-21 | Iris Int Inc | Aparelho e método de imagiologia por redes neuronais múltiplas |
| US7236623B2 (en) | 2000-04-24 | 2007-06-26 | International Remote Imaging Systems, Inc. | Analyte recognition for urinalysis diagnostic system |
| US7283223B2 (en) | 2002-08-21 | 2007-10-16 | Honeywell International Inc. | Cytometer having telecentric optics |
| CA2349995A1 (en) | 2000-06-14 | 2001-12-14 | Lianne Ing | Viewing particles in a relatively translucent medium |
| US7061595B2 (en) * | 2000-08-02 | 2006-06-13 | Honeywell International Inc. | Miniaturized flow controller with closed loop regulation |
| US6875973B2 (en) * | 2000-08-25 | 2005-04-05 | Amnis Corporation | Auto focus for a flow imaging system |
| EP1334347A1 (en) * | 2000-09-15 | 2003-08-13 | California Institute Of Technology | Microfabricated crossflow devices and methods |
| US20040070757A1 (en) * | 2000-12-29 | 2004-04-15 | Moore Richard Channing | High viscosity sheath reagent for flow cytometry |
| FR2821428B1 (fr) * | 2001-02-23 | 2004-08-06 | Abx Sa | Reactif et procede pour l'identification et le comptage de cellules biologiques |
| US7907765B2 (en) | 2001-03-28 | 2011-03-15 | University Of Washington | Focal plane tracking for optical microtomography |
| EP1395374B1 (en) * | 2001-05-17 | 2013-04-17 | Beckman Coulter, Inc. | Flow cytometer with active automated optical alignment system |
| JP4838446B2 (ja) | 2001-06-20 | 2011-12-14 | オリンパス株式会社 | 顕微鏡装置 |
| JP2003005088A (ja) | 2001-06-22 | 2003-01-08 | Nikon Corp | 顕微鏡用焦点合わせ装置およびそれを備えた顕微鏡 |
| JP2005502872A (ja) * | 2001-09-07 | 2005-01-27 | バースタイン テクノロジーズ，インコーポレイティド | 光バイオディスクシステムを使用した、核の形態に基づく白血球の型の識別および定量 |
| JP4021183B2 (ja) | 2001-11-29 | 2007-12-12 | オリンパス株式会社 | 合焦状態信号出力装置 |
| US20060050946A1 (en) * | 2002-05-10 | 2006-03-09 | Mitchison Timothy J | Computer-assisted cell analysis |
| JP4370554B2 (ja) | 2002-06-14 | 2009-11-25 | 株式会社ニコン | オートフォーカス装置およびオートフォーカス付き顕微鏡 |
| WO2004022774A1 (ja) | 2002-09-05 | 2004-03-18 | Fuji Electric Systems Co.,Ltd. | 微生物または細胞の検出方法 |
| PT1565795E (pt) | 2002-11-18 | 2009-02-19 | Iris Int Inc | Sistema de controladores multi-nível |
| JP2004188042A (ja) | 2002-12-13 | 2004-07-08 | Hitachi Hometec Ltd | 炊飯器 |
| EP1447454A1 (en) | 2003-02-14 | 2004-08-18 | DR. Chip Biotechnology Incorporation | Method and apparatus for detecting pathogens |
| ATE349010T1 (de) * | 2003-02-27 | 2007-01-15 | Dako Denmark As | Standard für immunhistochemie, immunzytologie und molekulare zytogenetika |
| GB0304515D0 (en) * | 2003-02-27 | 2003-04-02 | Dakocytomation Denmark As | Standard |
| DE10308171A1 (de) | 2003-02-27 | 2004-09-09 | Leica Microsystems Jena Gmbh | Verfahren zur automatischen Fokussierung |
| US6900058B2 (en) * | 2003-03-11 | 2005-05-31 | Bionostics, Inc. | Control solution for photometric analysis |
| US7324694B2 (en) | 2003-05-23 | 2008-01-29 | International Remote Imaging Systems, Inc. | Fluid sample analysis using class weights |
| US20040241677A1 (en) | 2003-05-29 | 2004-12-02 | Lin Jeffrey S | Techniques for automated diagnosis of cell-borne anomalies with digital optical microscope |
| JP4057539B2 (ja) * | 2004-01-09 | 2008-03-05 | 浜松ホトニクス株式会社 | シースフローセルキュベット及びその製造方法 |
| US9176121B2 (en) | 2004-02-13 | 2015-11-03 | Roche Diagnostics Hematology, Inc. | Identification of blood elements using inverted microscopy |
| US7394943B2 (en) | 2004-06-30 | 2008-07-01 | Applera Corporation | Methods, software, and apparatus for focusing an optical system using computer image analysis |
| JP2006039315A (ja) | 2004-07-28 | 2006-02-09 | Hamamatsu Photonics Kk | 自動焦点装置及びそれを用いた顕微鏡装置 |
| US7340957B2 (en) * | 2004-07-29 | 2008-03-11 | Los Alamos National Security, Llc | Ultrasonic analyte concentration and application in flow cytometry |
| US7822276B2 (en) | 2005-02-17 | 2010-10-26 | Iris International, Inc. | Method and apparatus for analyzing body fluids |
| US8034296B2 (en) | 2005-07-01 | 2011-10-11 | Honeywell International Inc. | Microfluidic card for RBC analysis |
| JP2007024844A (ja) * | 2005-07-21 | 2007-02-01 | Sysmex Corp | 血液分析方法及び血液分析装置 |
| DE102005034441A1 (de) | 2005-07-22 | 2007-02-22 | Carl Zeiss Microimaging Gmbh | Mikroskopobjektiv |
| CN101278190B (zh) | 2005-09-29 | 2012-12-19 | 奥林巴斯株式会社 | 焦点位置决定方法、焦点位置决定装置、微弱光检测装置及微弱光检测方法 |
| JP4896534B2 (ja) * | 2006-01-31 | 2012-03-14 | シスメックス株式会社 | 粒子分析装置用シース液 |
| US20070209938A1 (en) * | 2006-03-13 | 2007-09-13 | Jianzhong Zhang | Method and apparatus for biopolymer analysis |
| CA2648149A1 (en) * | 2006-03-31 | 2007-11-01 | Solexa, Inc. | Systems and devices for sequence by synthesis analysis |
| CN1834612A (zh) * | 2006-04-29 | 2006-09-20 | 北京索通医疗技术有限公司 | 一种用于血细胞分析仪的多功能稀释液及其制备方法 |
| EP2021491A4 (en) * | 2006-05-10 | 2010-02-24 | Univ Texas | DETECTION OF TUMOR BIOMARKERS IN MOUTH CANCER |
| EP2028264A4 (en) | 2006-06-15 | 2012-10-24 | Nikon Corp | CELL INCUBATOR |
| DE102006027836B4 (de) | 2006-06-16 | 2020-02-20 | Carl Zeiss Microscopy Gmbh | Mikroskop mit Autofokuseinrichtung |
| SE530750C2 (sv) | 2006-07-19 | 2008-09-02 | Hemocue Ab | En mätapparat, en metod och ett datorprogram |
| CN1945326A (zh) | 2006-10-13 | 2007-04-11 | 江西特康科技有限公司 | 基于视觉形态的五分类全血细胞分析方法 |
| US7835000B2 (en) * | 2006-11-03 | 2010-11-16 | Los Alamos National Security, Llc | System and method for measuring particles in a sample stream of a flow cytometer or the like |
| US7799575B2 (en) * | 2006-11-07 | 2010-09-21 | Genetix Limited | Flow cytometers |
| JP2008276070A (ja) | 2007-05-02 | 2008-11-13 | Olympus Corp | 拡大撮像装置 |
| US9110010B2 (en) | 2007-05-11 | 2015-08-18 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Navy | Electrical detection using confined fluids |
| JP5337151B2 (ja) | 2007-06-07 | 2013-11-06 | テクニオン リサーチ アンド ディベロップメント ファウンデーション リミテッド | 粒子を集束するためのシステムおよび方法 |
| US8941826B2 (en) * | 2007-09-10 | 2015-01-27 | The Penn State Research Foundation | Three-dimensional (3D) hydrodynamic focusing using a microfluidic device |
| JP5393013B2 (ja) | 2007-10-04 | 2014-01-22 | 株式会社タイトー | 制御プログラム、Ｗｅｂサーバ及びゲーム配信システム |
| JP2009089753A (ja) | 2007-10-04 | 2009-04-30 | Olympia:Kk | 遊技機、遊技機用プログラム、及び、遊技機用プログラムを記録したコンピュータ読み取り可能な記録媒体 |
| US8266950B2 (en) * | 2007-12-19 | 2012-09-18 | Los Alamos National Security, LLP | Particle analysis in an acoustic cytometer |
| US8714014B2 (en) * | 2008-01-16 | 2014-05-06 | Life Technologies Corporation | System and method for acoustic focusing hardware and implementations |
| JP2012515931A (ja) | 2008-04-25 | 2012-07-12 | ウィンケルマン、ジェイムズ | 全血球数及び白血球百分率を決定するシステム及び方法 |
| US9602777B2 (en) | 2008-04-25 | 2017-03-21 | Roche Diagnostics Hematology, Inc. | Systems and methods for analyzing body fluids |
| US8538119B2 (en) * | 2008-06-04 | 2013-09-17 | Hitachi High-Technologies Corporation | Particle image analysis method and apparatus |
| CA2727478A1 (en) | 2008-06-13 | 2009-12-17 | Xy, Llc | Lubricious microfluidic flow path system |
| NZ590166A (en) * | 2008-06-30 | 2013-09-27 | Microbix Biosystems Inc | Method and apparatus for sorting cells |
| US8343978B2 (en) | 2008-08-04 | 2013-01-01 | Adds Pharmaceuticals Llc | Fast onset orodispersable tablets |
| US8603773B2 (en) * | 2008-09-19 | 2013-12-10 | Beckman Coulter | Method and system for analyzing a blood sample |
| US9494570B2 (en) | 2008-10-02 | 2016-11-15 | Pixcell Medical Technologies Ltd. | Optical imaging based on viscoelastic focusing |
| US20100221752A2 (en) * | 2008-10-06 | 2010-09-02 | Somalogic, Inc. | Ovarian Cancer Biomarkers and Uses Thereof |
| FR2940976B1 (fr) | 2009-01-13 | 2017-11-03 | Oreal | Utilisation a des fins de criblage d'actifs anti-ages de formes solubles de la proteine de type desmogleine i |
| CN102713640B (zh) | 2009-06-10 | 2015-09-16 | 辛温尼奥生物系统公司 | 鞘流装置和方法 |
| EP2288056A3 (en) * | 2009-07-22 | 2012-07-11 | Yamaha Corporation | Audio signal processing system comprising a plurality of devices connected by an audio network |
| JP5586889B2 (ja) * | 2009-07-29 | 2014-09-10 | 株式会社日立ハイテクノロジーズ | 粒子画像解析装置 |
| WO2011026128A2 (en) | 2009-08-31 | 2011-03-03 | Life Technologies Corporation | Flowcells and methods of filling and using same |
| US8362409B2 (en) | 2009-10-29 | 2013-01-29 | Applied Precision, Inc. | System and method for continuous, asynchronous autofocus of optical instruments |
| US9068916B2 (en) * | 2010-03-15 | 2015-06-30 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Microassembled imaging flow cytometer |
| JP4805416B1 (ja) * | 2010-03-31 | 2011-11-02 | 古河電気工業株式会社 | 光情報解析装置及び光情報解析方法 |
| US8528427B2 (en) | 2010-10-29 | 2013-09-10 | Becton, Dickinson And Company | Dual feedback vacuum fluidics for a flow-type particle analyzer |
| US9090865B2 (en) * | 2010-10-29 | 2015-07-28 | The Regents Of The University Of California | Systems and methods for particle classification and sorting |
| EP2721391B1 (en) * | 2011-06-17 | 2022-04-06 | Roche Diagnostics Hematology, Inc. | Solution and method for histoprocessing of biological samples |
| EP2568288A1 (en) | 2011-09-08 | 2013-03-13 | Koninklijke Philips Electronics N.V. | Means and methods for staining acid-fast cells |
| KR101849974B1 (ko) | 2011-09-16 | 2018-04-19 | 삼성전자주식회사 | 개구수 제어 유닛, 이를 채용한 가변형 광 프로브 및 깊이 스캐닝 방법 |
| US9810704B2 (en) | 2013-02-18 | 2017-11-07 | Theranos, Inc. | Systems and methods for multi-analysis |
| US20140193892A1 (en) * | 2012-07-25 | 2014-07-10 | Theranos, Inc. | Image analysis and measurement of biological samples |
| JP6396305B2 (ja) * | 2012-10-24 | 2018-09-26 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニアＴｈｅ Ｒｅｇｅｎｔｓ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｏｆ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ | 粒子の変形及び分析システム及び方法 |
| CN102998437A (zh) | 2012-11-26 | 2013-03-27 | 江苏美诚生物科技有限公司 | 尿沉渣分析用鞘液及其制备方法 |
| KR102055474B1 (ko) | 2013-03-15 | 2019-12-12 | 아이리스 인터내셔널 인크. | 혈액 샘플에서의 입자 분석을 위한 플로우셀 시스템 및 방법 |
| BR112015021902B1 (pt) | 2013-03-15 | 2021-06-15 | Iris International, Inc | Líquido para alinhamento de partícula e organela intracelular |
| BR112015023425B1 (pt) | 2013-03-15 | 2021-01-12 | Iris International, Inc. | método e composição para coloração e processamento de uma amostra de urina |
| US9857361B2 (en) * | 2013-03-15 | 2018-01-02 | Iris International, Inc. | Flowcell, sheath fluid, and autofocus systems and methods for particle analysis in urine samples |
| JP6112066B2 (ja) | 2014-05-27 | 2017-04-12 | 横河電機株式会社 | モジュール式電子機器連結用収納部材 |
-
2014
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- 2023-04-11 US US18/133,243 patent/US20230243730A1/en active Pending
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1471976A (en) * | 1974-09-20 | 1977-04-27 | Coulter Electronics | Particle sensing apparatus including a device for orienting generally flat particles |
| GB1557691A (en) * | 1975-09-27 | 1979-12-12 | Strahlen Umweltforsch Gmbh | Apparatus for absorption measurement and size investigation of particles |
| GB2121976A (en) * | 1982-04-29 | 1984-01-04 | Int Remote Imaging Systems Inc | A method of aligning particles in a moving fluid sample |
| EP0486747A2 (en) * | 1990-11-22 | 1992-05-27 | Toa Medical Electronics Co., Ltd. | Flow cell mechanism in flow imaging cytometer |
| CN1265195A (zh) * | 1997-07-24 | 2000-08-30 | 美国政府农业部 | 用于高效细胞分类的流动细胞光度计管嘴 |
| CN1739018A (zh) * | 2002-11-19 | 2006-02-22 | 国际遥距成象系统公司 | 尿液分析诊断系统的贯流分析器及其制造方法 |
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