CN1834612A - 一种用于血细胞分析仪的多功能稀释液及其制备方法 - Google Patents

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CN1834612A CN 200610078646 CN200610078646A CN1834612A CN 1834612 A CN1834612 A CN 1834612A CN 200610078646 CN200610078646 CN 200610078646 CN 200610078646 A CN200610078646 A CN 200610078646A CN 1834612 A CN1834612 A CN 1834612A
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蔡佩娟
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Abstract

本发明属于医疗检测用试剂技术领域，具体涉及一种用于血细胞分析仪的多功能稀释液及其制备方法。现有的稀释液通常不具备鞘液的作用，需另外购买专门的鞘液，也不含有红细胞球形剂成分，且测量结果易受红细胞体积变化的影响。本发明所述的多功能稀释液包括如下组分：乙二胺四乙酸盐，碱金属硫酸盐，碱金属氯化盐，磷酸盐缓冲液，碱金属的烷基硫酸盐，聚氧乙烯型非离子表面活性剂，山梨酸、苯甲酸、酯、盐、吡啶或者吡啶衍生物中的一种物质，余量为水。采用本发明所述的稀释液能够使红细胞等体积球形化，仪器检测时不易受红细胞体积变化的影响，检测结果更准确可靠；同时该稀释液可以做为鞘液使用，并具有清洗功能。

Description

一种用于血细胞分析仪的多功能稀释液及其制备方法
技术领域
本发明属于医疗检测用试剂技术领域，涉及用于测定血样中红细胞参数、白细胞参数、以及血小板参数的稀释液组合物，具体涉及一种用于血细胞分析仪的多功能稀释液及其制备方法。
背景技术
血细胞分析是医学诊断中重要的手段，其中包括红细胞参数、白细胞参数、以及血小板参数的测定。最初的血细胞分析方法是：将适量血液利用玻璃推片法处理后，医生利用显微镜，通过肉眼对血细胞进行观察和计数，准确性和效率均较低。随着科学技术的发展，目前，多数医院均采用血细胞分析仪进行血细胞的检测和计数，代替了原来的人工操作，效率大大提高，但是利用血细胞分析仪进行血细胞的检测和计数时，由于正常人血样中的血细胞数量众多而不能直接使用采来的血样，需要稀释液对血样进行稀释后才能使用。
现有技术中，针对血细胞分析仪的广泛应用，已出现了一些不同组分的稀释液，通过稀释液对采来的血样进行相应稀释后，再加入相应的溶血素，然后即可利用血细胞分析仪进行检测和分析。
专利申请号为CN99101228.3的文献，公开了一种血球仪稀释液试剂的配方及制作工艺，其配方(重量％)为：硫酸钠0.6-0.95％；氯化钠0.036-0.012％；磷酸氢二钠0.18-0.2％；氢化钠0.12-0.16％；ETDA二钠0.08-0.1％；盐酸普鲁卡因0.04-0.07％；纯净水98.784-98.278％；其他0.16-0.2％。
专利申请号为CN97108416.5的文献公开了自动血球计数仪配套试剂，该试剂包括：血液细胞稀释液、溶血剂和仪器管道清洁剂，其中稀释液的配方为：氯化钠50-90g；氯化钾1-5g；磷酸氢二钠50-80g；磷酸二氢钾4-8g；乙二胺四乙酸二钠20-50g；余量为蒸馏水。
美国专利号为US4521518的专利公开了一种稀释液，该稀释液中含有ADA酸，该物质价格较贵，不易得到，该稀释液成本较高。
由于上述稀释液的广泛应用，使得应用血细胞分析仪时血细胞的测定方便快捷，但是现有的稀释液也在应用中出现许多不足，例如：现有的血细胞分析仪在进行血细胞测量的时候均采用电阻抗法检测血细胞的体积，但红细胞缺少核物质所以非常容易地受外界环境改变的影响，同时红细胞在正常状态下是双凹圆盘状，这样就造成在使用电阻抗法测量血细胞参数时，当红细胞通过电阻抗的小孔进行体积测量时极易发生形变，因为在电阻抗法检测血细胞体积时，加在小孔两端电压的变化跟通过该小孔的血细胞形态存在一个线性的关系，不同形态的细胞有着不同的体积因子，这样就直接造成红细胞相关测量参数就不准确，而现有的血细胞稀释液无法解决这个问题。同时，现有的稀释液一般也不具有鞘液的清洁功能。
美国专利号为US5045472的文献公开了一种处理红细胞使之球形化的试剂的组份，其配方是：戊二醛0.05％-0.3％(w/w％)；十二烷基硫酸钠0.5-3.0mg％；磷酸缓冲液调节溶液pH 6.0-7.5；氯化钠调节渗透压290moS/kg；抗凝剂EDTA。该试剂虽然可以使红细胞的体积保持稳定的球形状态，但是，该试剂在对红细胞进行等体积球形化的同时也对红细胞进行了固定，这样就有可能造成在固定红细胞的同时，白细胞也被固定，这样在进行白细胞分类测量的时候白细胞膜就无法部分溶解，白细胞就没有办法进行分类了，所以不能作为同时满足红细胞、白细胞、血小板测量要求的稀释液。
发明内容
针对现有技术中存在的缺陷，本发明的目的是提供一种用于血细胞分析仪的多功能稀释液，该稀释液能够将红细胞的体积进行球形化，能够使血细胞分析仪更准确的测定血样中的红细胞、白细胞和血小板的参数；同时，该稀释液可以做为鞘液使用，节省总体试剂的使用成本；该稀释液还对血细胞分析仪的管道具有清洗作用，以保持仪器测量的准确性。
为达到以上目的，本发明采用的技术方案是：
一种用于血细胞分析仪的多功能稀释液，包括以下组分：
(1)乙二胺四乙酸(EDTA)盐，含量为：0.1～0.8g/L，该物质为抗凝剂，用于防止血样凝固和抑制血小板的聚集；
进一步，所述的乙二胺四乙酸盐为乙二胺四乙酸二钠(二钠EDTA，即EDTA-2Na)。
(2)碱金属硫酸盐，含量为：3.6～6.5g/L，用于调节溶液离子强度和稀释液的电导率；
进一步，所述的碱金属硫酸盐为硫酸钠；
(3)碱金属氯化盐，含量为：2.0～3.9g/L，用于调节稀释液的渗透压，使细胞处于渗透浓度在280～320mOsm/L的等渗环境中；
进一步，所述的碱金属氯化盐最好为氯化钠；
(4)磷酸盐缓冲液，具体用量为能将溶液的pH值调整到6.8-7.2之间的用量；所述的磷酸盐缓冲液是由磷酸二氢钾(KH2PO4)、十二水磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O)配制而成的溶液；
(5)碱金属的烷基硫酸盐，含量为：0.5g/L-4.0g/L，用于红细胞进行等体积球形化，同时，该物质在0.5g/L～4.0g/L的浓度范围内还具有清洗液的功能，能够有效的防止血细胞分析仪管道堵塞的现象；
进一步，所述的碱金属的烷基硫酸盐是指烷基基团含有10～16个碳原子的碱金属烷基硫酸盐；
更进一步，所述的碱金属的烷基硫酸盐是十二烷基硫酸钠SDS，效果最理想。
(6)聚氧乙烯型非离子表面活性剂，含量为：1～15ml/L，优选含量为1～10ml/L；用于离散血样中的细胞使之分散，便于仪器检测，同时能够降低稀释液的表面张力从而减少气泡的产生，消除气泡给对测量带来的干扰，该物质同时还具有鞘液的作用；
进一步，所述的聚氧乙烯型非离子表面活性剂是指烷基酚聚氧乙烯醚、聚氧乙烯失水梨醇脂肪酸酯；
更进一步，所述的烷基酚聚氧乙烯醚是tert-辛基酚聚氧乙烯醚(Triton X)系列，Triton X-100(曲拉通X 100)效果最理想；
所述的聚氧乙烯失水梨醇脂肪酸酯是吐温(Tween)系列，Tween 80效果最理想。
(7)山梨酸、苯甲酸、酯、盐、吡啶或者吡啶衍生物中的一种物质，作为防腐剂，含量为小于等于0.8g/L；该物质作为防腐剂，具有防止细菌或霉菌的生长的作用，同时能够稳定稀释液；
进一步，所述的防腐剂最好采用1-羟基吡啶-2-硫酮，优选含量为：0.05g/L～0.5g/L；
(8)余量为水，最好是三蒸水。
本发明所述的一种用于血细胞分析仪的多功能稀释液的制备方法如下：
(1)原料称量：将所需的各种原料按本发明所述的配方分别称量；
(2)配制：将各种称量好的原料混合，待自然溶解后，摇匀；
(3)过滤：在过滤器中放入在三蒸水中浸泡过的0.22微米的醋酸纤维滤膜，将上述溶液过滤三次，即为本发明所述的稀释液。
利用血细胞分析仪测定血样中的红细胞、白细胞和血小板的参数时，需要先用本发明所述的稀释液将采集的血样进行稀释，然后再加入相应的溶血素，即可利用血细胞分析仪进行血细胞参数的测定。
本发明的效果在于：采用本发明所述的稀释液能够使红细胞等体积球形化，利用血细胞分析仪进行测定时，使得红细胞参数的检测更加准确和可靠；同时该稀释液可以做为鞘液使用，大大减少试剂消耗的成本，因为不需要再另行购买专门的鞘液；同时在此稀释液具有清洗功能，防止了由于血细胞分析仪的管道堵塞所造成的测量误差。
附图说明
图1是红细胞计数测试结果比较示意图；
图2是白细胞计数测试结果比较示意图；
图3是红细胞压积测试结果比较示意图；
图4是粒细胞计数测试结果比较示意图；
图5是淋巴细胞计数测试结果比较示意图；
图6是单核细胞计数测试结果比较示意图；
图7是血红蛋白含量测试结果比较示意图。
具体实施方式
下面结合具体实施例和附图对本发明所述的稀释液进行进一步的描述：
实施例1
按照下列比例配制本发明所述的稀释液：
(1)EDTA-2Na                 0.5g
(2)Na2SO4               4.2g
(3)NaCl                   2.7g
(4)磷酸盐缓冲液             1/25M
(5)十二烷基硫酸钠SDS        2.5g
(6)Triton X-100             3ml
(7)1-羟基吡啶-2-硫酮        0.2g
(8)三蒸水                   1L
原材料：Na2SO4，北京化学试剂公司，500g，批号050411；NaCl，北京化学试剂公司，500g，批号050411；KH2PO4，北京化学试剂公司，500g，批号20050512；Na2HPO4.12H2O，北京化学试剂公司，500g，批号20050512；SDS，北京化学试剂公司，250g，批号050113；EDTA-2Na，北京化学试剂公司，250g，批号041104；Triton X-100北京化学试剂公司，500ml，批号041014；1-羟基吡啶-2-硫酮，sigma，100g，034K2608。
制备方法：将Na2SO4、NaCl、磷酸盐缓冲液、SDS、EDTA-2Na、1-羟基吡啶-2-硫酮和Triton X-100按上述比例混合，加三蒸水至1L，室温下摇晃振荡至摇匀，然后在过滤器中放入在三蒸水中浸泡过的0.22微米的醋酸纤维滤膜，将上述溶液过滤三次。
实施例2
按照下列比例配制本发明所述的稀释液：
(1)EDTA-2Na                      0.4g
(2)Na2SO4                    3.8g
(3)KCl                         3.2g
(4)磷酸盐缓冲液                  1/25M
(5)十四烷基硫酸钠                1.5g
(6)Triton X-100                  1.0ml
(7)1-羟基吡啶-2-硫酮             0.8g
(8)三蒸水                        1L
原材料：Na2SO4，北京化学试剂公司，500g，批号050411；KCl，北京化学试剂公司，500g，批号050301；KH2PO4，北京化学试剂公司，500g，批号20050512；Na2HPO4.12H2O，北京化学试剂公司，500g，批号20050512；EDTA-2Na，北京化学试剂公司，250g，批号041104；Triton X-100北京化学试剂公司，500ml，批号041014；1-羟基吡啶-2-硫酮，sigma，100g，034K2608。
制备方法：将Na2SO4、KCl、磷酸盐缓冲液、十四烷基硫酸钠、EDTA-2Na、1-羟基吡啶-2-硫酮和Triton X-100按上述比例混合，加三蒸水至1L，室温下摇晃振荡至摇匀，然后在过滤器中放入在三蒸水中浸泡过的0.22微米的醋酸纤维滤膜，将上述溶液过滤三次。
实施例3
按照下列比例配制本发明所述的稀释液：
(1)EDTA-2Na                 0.6g
(2)K2SO4                4.5g
(3)NaCl                   3.2g
(4)磷酸盐缓冲液             1/25M
(5)SDS                      0.8g
(6)Triton X-100             8ml
(7)1-羟基吡啶-2-硫酮            0.1g
(8)三蒸水                       1L
原材料：K2SO4，北京化学试剂公司，500g，批号050411；NaCl，北京化学试剂公司，500g，批号050411；KH2PO4，北京化学试剂公司，500g，批号20050512；Na2HPO4.12H2O，北京化学试剂公司，500g，批号20050512；SDS，北京化学试剂公司，250g，批号050113；EDTA-2Na，北京化学试剂公司，250g批号041104；Triton X-100北京化学试剂公司，500ml，批号041014；1-羟基吡啶-2-硫酮，sigma，100g，034K2608。
制备方法：将K2SO4、NaCl、磷酸盐缓冲液、SDS、EDTA-2Na、1-羟基吡啶-2-硫酮和Triton X-100按上述比例混合，加三蒸水至1L，室温下摇晃振荡至摇匀，然后在过滤器中放入在三蒸水中浸泡过的0.22微米的醋酸纤维滤膜将上述溶液过滤三次。
实施例4
按照下列比例配制本发明所述的稀释液：
(1)EDTA-2Na               0.2g
(2)Na2SO4             6.5g
(3)KCl                  2.0g
(4)磷酸盐缓冲液           1/25M
(5)十六烷基硫酸钠         0.5g
(6)Tween 80               10ml
(7)1-羟基吡啶-2-硫酮      0.05g
(8)三蒸水                 1L
原材料：Na2SO4，北京化学试剂公司，500g，批号050411；KCl，北京化学试剂公司，500g，批号050301；KH2PO4，北京化学试剂公司，500g，批号20050512；Na2HPO4.12H2O，北京化学试剂公司，500g，批号20050512；EDTA-2Na，北京化学试剂公司，250g，批号041104；Tween 80，北京化学试剂公司，500ml，批号050127；1-羟基吡啶-2-硫酮，sigma，100g，034K2608。
制备方法：将Na2SO4、KCl、磷酸盐缓冲液、十六烷基硫酸钠、EDTA-2Na、1-羟基吡啶-2-硫酮和Tween 80按上述比例混合，加三蒸水至1L，室温下摇晃振荡至摇匀，然后在过滤器中放入在三蒸水中浸泡过的0.22微米的醋酸纤维滤膜，将上述溶液过滤三次。
实施例5
按照下列比例配制本发明所述的稀释液：
(1)EDTA-2Na                0.8g
(2)Na2SO4              3.6g
(3)NaCl                  3.9g
(4)磷酸盐缓冲液            1/25M
(5)SDS                     4.0g
(6)Tween 80                15ml
(7)1-羟基吡啶-2-硫酮       0.5g
(8)三蒸水                  1L
原材料：Na2SO4，北京化学试剂公司，500g，批号050411；NaCl，北京化学试剂公司，500g，批号050411；KH2PO4，北京化学试剂公司，500g，批号20050512；Na2HPO4.12H2O，北京化学试剂公司，500g，批号20050512；SDS，北京化学试剂公司，250g，批号050113；EDTA-2Na，北京化学试剂公司，250g，批号041104；Tween 80，北京化学试剂公司，500ml，批号050127；1-羟基吡啶-2-硫酮，sigma，100g，034K2608。
制备方法：将Na2SO4、NaCl、磷酸盐缓冲液、SDS、EDTA-2Na、1-羟基吡啶-2-硫酮和Tween 80按上述比例混合，加三蒸水至1L，室温下摇晃振荡至摇匀，然后在过滤器中放入在三蒸水中浸泡过的0.22微米的醋酸纤维滤膜，将上述溶液过滤三次。
本发明所述的多功能稀释液适用于血红胞分析仪进行血细胞各项参数的测定，可用于日本东亚公司的Sysmex poch100i、迈瑞公司生产的BC-3000plus及北京索通医疗技术有限公司生产的各系列的血红胞分析仪。
使用本发明所述的多功能稀释液进行血细胞的参数测定时，需要先用稀释液将血液稀释，然后再加入相应的溶血素，并与稀释后的血样混合，然后利用血细胞分析仪即可进行进行血细胞的参数测定，为说明本发明所述的多功能稀释液测试的稳定性和准确性，将本发明所述的多功能稀释液与日本东亚公司生产的多功能稀释液进行了对比试验，对比测量了血红蛋白、白细胞和红细胞等参数的试验数据，试验结果如下：
多功能稀释液稳定性实验
(1)仪器：日本东亚公司的Sysmex pochl00i；
(2)稀释液：
1)本发明所述的多功能稀释液，具体采用本发明实施例1中所述的配方；
2)日本东亚公司生产的稀释液；
溶血素：
1)配合本发明所述的多功能稀释液所使用的溶血素是：北京索通医疗技术有限公司生产的溶血素，其组分为：
十六烷基三甲基氯化铵            18g(质量百分比为1.8％)
4(5)-甲基咪唑                   5g(质量百分比为0.5％)
氯化钠                          10g(质量浓度为10g/L)
三蒸水                          1L
2)配合日本东亚公司的稀释液使用的溶血素是：日本东亚公司生产的溶血素；
(3)实验方法与结果：
对同一血样用本发明所述的多功能稀释液将血样进行稀释后，然后再加入北京索通医疗技术有限公司生产的溶血素，而后用日本东亚公司的Sysmexpoch100i血细胞分析仪进行测定；同时对上述同一血样用日本东亚公司生产的稀释液和溶血素按照上述步骤进行测量，共计测量6次，记录6次测量结果，并对结果进行比较，结果如图1～图7所示。由图1～图7所示可见，利用本发明所述的多功能稀释液测试结果形成的曲线比较平滑，每次测试结果的差别比较小；而日本东亚公司生产的稀释液的测试结果形成的曲线波动比较大，每次测试结果的差别较大，因为最终的测试结果取平均值，所以显然日本东亚公司生产的稀释液所得平均值的准确性不如本发明所述的多功能稀释液。通过本次对比实验表明，利用本发明所述的多功能稀释液，配合北京索通医疗技术有限公司生产的溶血素，通过血细胞分析仪测试出来的结果具有更好得稳定性和重现性。
本实施例中所使用的北京索通医疗技术有限公司生产的溶血素配方，并不用以限定该溶血素的组分和含量，对本发明也不构成任何限制。

Claims (15)

1.一种用于血细胞分析仪的多功能稀释液，包括以下组分：
(1)乙二胺四乙酸盐，含量为：0.1～0.8g/L；
(2)碱金属硫酸盐，含量为：3.6～6.5g/L；
(3)碱金属氯化盐，含量为：2.0～3.9g/L；
(4)磷酸盐缓冲液，具体用量为能将溶液的pH值调整到6.8-7.2之间的用量；
(5)碱金属的烷基硫酸盐，含量为：0.5～4.0g/L；
(6)聚氧乙烯型非离子表面活性剂，含量为：1～15ml/L；
(7)山梨酸、苯甲酸、酯、盐、吡啶或者吡啶衍生物中的一种物质，作为防腐剂，含量为：小于等于0.8g/L；
(8)余量为水。
2.如权利要求1所述的一种用于血细胞分析仪的多功能稀释液，其特征是：所述的乙二胺四乙酸盐为乙二胺四乙酸二钠。
3.如权利要求1或2所述的一种用于血细胞分析仪的多功能稀释液，其特征是：所述的碱金属硫酸盐为硫酸钠。
4.如权利要求1或2所述的一种用于血细胞分析仪的多功能稀释液，其特征是：所述的碱金属氯化盐为氯化钠。
5.如权利要求1或2所述的一种用于血细胞分析仪的多功能稀释液，其特征是：所述的碱金属的烷基硫酸盐是指烷基基团含有10～16个碳原子的碱金属烷基硫酸盐。
6.如权利要求5所述的一种用于血细胞分析仪的多功能稀释液，其特征是：所述的碱金属的烷基硫酸盐是十二烷基硫酸钠SDS。
7.如权利要求1或2所述的一种用于血细胞分析仪的多功能稀释液，其特征是：所述的聚氧乙烯型非离子表面活性剂，优选含量为1～10ml/L。
8.如权利要求7所述的一种用于血细胞分析仪的多功能稀释液，其特征是：所述的聚氧乙烯型非离子表面活性剂是烷基酚聚氧乙烯醚、聚氧乙烯失水梨醇脂肪酸酯。
9.如权利要求8所述的一种用于血细胞分析仪的多功能稀释液，其特征是：所述的烷基酚聚氧乙烯醚是tert-辛基酚聚氧乙烯醚系列，所述的聚氧乙烯失水梨醇脂肪酸酯是吐温系列。
10.如权利要求9所述的一种用于血细胞分析仪的多功能稀释液，其特征是：所述的吐温系列是Tween 80。
11.如权利要求9所述的一种用于血细胞分析仪的多功能稀释液，其特征是：所述的tert-辛基酚聚氧乙烯醚系列是Triton X-100。
12.如权利要求1或2所述的一种用于血细胞分析仪的多功能稀释液，其特征是：所述的防腐剂最好采用1-羟基吡啶-2-硫酮。
13.如权利要求12所述的一种用于血细胞分析仪的多功能稀释液，其特征是：1-羟基吡啶-2-硫酮的优选含量为0.05g/L～0.5g/L。
14.如权利要求1所述的一种用于血细胞分析仪的多功能稀释液，其特征是：所述的水为三蒸水。
15.一种用于血细胞分析仪的多功能稀释液的制备方法，包括如下步骤：
(1)原料称量：将所需的各种组分分别称量，组分及含量如下：
1)乙二胺四乙酸盐，含量为：0.1～0.8g/L；
2)碱金属硫酸盐，含量为：3.6～6.5g/L；
3)碱金属氯化盐，含量为：2.0～3.9g/L；
4)磷酸盐缓冲液，具体用量为能将溶液的pH值调整到6.8-7.2之间的用量；
5)碱金属的烷基硫酸盐，含量为：0.5～4.0g/L；
6)聚氧乙烯型非离子表面活性剂，含量为：1～15ml/L；
7)山梨酸、苯甲酸、酯、盐、吡啶或者吡啶衍生物中的一种物质，作为防腐剂，含量为小于等于0.8g/L；
8)余量为水；
(2)配制：将步骤(1)中所述的已称量好的原料混合，待自然溶解后，摇匀；
(3)过滤：在过滤器中放入在三蒸水中浸泡过的0.22微米的醋酸纤维滤膜，将步骤(2)中得到的溶液过滤三次，即为本发明所述的多功能稀释液。
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