CN1198144C - 用于血样中血红蛋白的测量和白细胞的测定的试剂 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于血样中血红蛋白的测量和白细胞的测定的试剂。该试剂包括：至少一种阳离子型去污剂；一种糖苷型化合物，尤其是皂苷；至少一种无机盐和/或一种渗透剂和/或白细胞保护剂；以及一种有机缓冲剂和/或无机缓冲剂，该缓冲剂能选择性地调节所述试剂的pH或者至大体上中性值(pH为5～8)，或者至碱性值(pH为8～12)。在人类医学和兽医学中在血液学分析中的应用。

Description

用于血样中血红蛋白的测量和白细胞的测定的试剂
                              技术领域
本发明涉及血液学分析。
更具体地说，本发明涉及一种用于血样中血红蛋白的测量和白细胞的测定的试剂。
                               背景技术
血红蛋白浓度的测量和白细胞(尤其是特定的白细胞亚群)的测定，在人类医学和兽医学的特定病理学诊断中具有基本的重要性。
血红蛋白是一种含于血液红色血细胞(或红细胞)中的色蛋白。
于是血红蛋白浓度的测量需要应用细胞溶解试剂，它能进行红细胞或红色血细胞的溶胞，以便释放血红蛋白，这样就可测量血红蛋白。
为此，已知应用含有氰根离子的试剂，它可进行红细胞的溶胞，并将血红蛋白转化成稳定的色素原化合物，以便能够通过比色测量法测定血红蛋白。这类的一种试剂尤其被描述于美国专利3 874 852中。该试剂的主要缺点在于，它应用氰化物。此外，它不能使鉴定和定量分析含于待分析的血样中的白细胞亚群成为可能。
事实上，白细胞亚群(尤其淋巴细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞)的测定，在特定病理学的鉴定方面具有基本的重要性。
现有技术中人们已提出了不含氰化物的各种试剂，用于血样中白细胞的测定。
这类试剂的实例描述于例如文献EP 0 325 710中。
虽然这些试剂具有不应用氰化物的优点，但它们具有这一缺点，即它们不能准确鉴定和定量分析血液中的白细胞亚群。
因此，EP 0 325 710的试剂例如使得可能测定血样中存在的嗜酸性粒细胞，但不能准确地鉴定其它每种白细胞亚群。
此外，文献EP 0 424 871描述了能够鉴别白细胞亚群的试剂。然而，这些试剂有时在克服存在于人病理学和兽医生物学中的膜抗性时遇到困难。
                          发明内容
本发明的目的尤其是消除前述缺点。
具体地说，本发明的目的是提供一种血液学分析试剂，该试剂用于血样中血红蛋白的测量和白细胞的测定，它尤其使红细胞或红色血细胞的溶胞以及血红蛋白的测量成为可能，但未应用氰化物。
本发明的目的还在于提供一种这类试剂，它使得有可能定量分析总的白细胞或白色血细胞，鉴定至少一种白细胞亚群，以及定量分析至少一种白细胞亚群。
本发明的目的还在于提供一种这类试剂，这可被用于人类医学和兽医学中。
此外，本发明的目的是提供一种这类试剂，它能消除与人病理学和兽医生物学中遇到的膜抗性相关的分析问题。
为此，本发明提出了一种上述类型的试剂，它包括：
-至少一种阳离子型去污剂；
-一种糖苷型化合物，尤其是皂苷；
-至少一种无机盐和/或一种渗透剂和/或白细胞保护剂；以及
-一种有机缓冲剂和/或无机缓冲剂，该缓冲剂能选择性地调节所述试剂的pH或者至大体上中性值(pH为5～8)，或者至碱性值(pH为8～12)。
于是，本发明的血液学试剂包括至少四种主要组分，它们使得有可能实现上述目的。
该阳离子型去污剂起溶解红色血细胞或红细胞的作用，使得有可能释放血红蛋白，于是可通过吸光度测量而测定它。
(阴离子的和阳离子的)离子型去污剂主要被用于解离蛋白质复合体，并溶解膜的蛋白质。它们是所谓的变性。
此外，它们对血液的细胞群(红细胞和白细胞)具有迅速的和非专一性的作用。
糖苷型化合物(尤其是皂苷)有助于红色血细胞的溶胞作用。此外，它起有关血红蛋白稳定的作用，这使得有可能在特定的波长下分析血红蛋白；尤其是该化合物可破坏红色血细胞的抗性膜。
皂苷(也称为saponosides)是具有专一性地溶解红细胞的能力的糖苷，但该溶胞作用比离子型去污剂存在下获得的溶胞作用慢。当将皂苷与其它去污剂一起应用时，它们使得有可能达到红细胞的更快速、更专一性的溶胞，这就限制了白细胞的变质。
此外，这类化合物的化学结构(其特征在于多环碳网络)使得保持血红蛋白的氧化衍生物的物理稳定性和化学稳定性。
无机盐干预去污剂的活性。此外，又需要它以便能通过抗性进行测量。
将该试剂在中性pH下应用时，所述渗透剂大体上起白细胞保护作用，以便有助于鉴别白细胞亚群。
最后，所述缓冲剂是一种关键成分，因为该试剂的pH是一个重要特征。实际上，根据pH值，该试剂能鉴定一种或多种白细胞亚群。
当该试剂的pH被调节到大体上中性值(pH为5～8)时，可能定量分析和鉴定下列三种白细胞亚群：淋巴细胞、单核细胞和嗜中性粒细胞。
当该试剂的pH被调节到碱性值(pH为8～12)时，它另外还使得可能鉴定多核嗜酸性粒细胞。
所以，对于要求鉴定多核嗜酸性粒细胞的应用而言，有必要调节该试剂的pH至碱性值。
另一方面，如果不需要鉴定嗜酸性粒细胞，就将该试剂的pH调节至大体上中性的值。
在本发明的试剂中，所述去污剂有利地选自下列组分：
-伯胺，脂肪族胺的乙酸盐和盐酸盐；
-季铵盐，和三甲基羰游基铵的溴化物；
-取代二胺的氨化物(amides)，它们被硫酸乙酯、二羟乙基氨基丙胺、二乙氨基丙酰胺变成阳离子型；以及
-成环的二亚乙基三胺的氨化物。
该去污剂有利地存在的浓度为大于0、至多为50g/l，更具体地约为18g/l。
在糖苷型化合物中，优选具体给定皂苷类，它们可以是三萜化合物或甾类化合物。
在本发明的试剂中，所述糖苷型化合物有利地存在的浓度为0.5～20g/l，更具体地约为2g/l。
所述无机盐有利地选自下列化合物：钠或钾的氯化物、硫酸盐或氟化物。
该无机盐有利地存在的浓度为1～15g/l，更具体地约为8g/l。
本发明试剂的渗透剂和/或白细胞保护剂有利地选自甘露糖醇、D-葡萄糖和类似化合物。
该渗透剂和/或白细胞保护剂有利地存在的浓度为0～30g/l，更具体地约为2.5g/l。
所述有机缓冲剂和/或无机缓冲剂有利地选自下列化合物：
-三乙醇胺；
-钠和钾的氢化磷酸盐；
-N-(2-乙酰氨基)-2-亚氨基二乙酸；
-N-(甲氨酰甲基)亚氨基二乙酸；
-2-氨基-2-甲基-1，3-丙二醇；
-甘氨酸；
-碳酸钠；
-柠檬酸；以及
-三(羟甲基)氨基甲烷。
该缓冲剂有利地存在的浓度为大于0、至多为2wt％。
按本发明的第一个实施方案，该缓冲剂调节所述试剂的pH至5～8之间的值。
按另一个实施方案，该缓冲剂调节所述试剂的pH至8-12之间的值。
                            具体实施方式
现将参照如下非限制性实施例描述本发明。
实施例1
从下列化合物按所示浓度制备了一种试剂：
化合物                             浓度
氯化钠                              9g/l
C15H34NCl(阳离子去污剂)           12g/l
三萜皂苷                            2g/l
碳酸钠(缓冲剂)        2g/l(0.2wt.％)
将这些化合物混合，并将pH调节至8～12之间的碱性值(即10.5)。
借助这样制备的制剂，应用由法国ABX公司制造、以名称“ABX-Micros”出售的自动血液学装置进行两个血液学分析。
为此，预先将一定体积待分析的血样与一定体积稀释剂和前述试剂混合。
在该实施例中，对动物血作了测量。对两个不同血样进行了测量的结果示于图1和2中。
这样图根据相对强度表示出白细胞数。发现存在4种白细胞亚群。
这些图涉及抗性分析，于是从右到左可见由箭头定界的如下亚群：淋巴细胞(LYM)、单核细胞(MO)、有粒白细胞(GRA)和多核嗜酸性粒细胞(EOS)。
自动装置提供了如下测量结果，该结果指示计数的每种白细胞亚群细胞数和相应的百分数。
分析1(图1)
LYM：             3956个细胞            53.23％
MO：              420个细胞             5.65％
GRA：             2576个细胞            34.65％
EOS：             481个细胞             6.47％
分析2(图2)
LYM：             1071个细胞            9.34％
MO：              805个细胞             7.00％
GRA：             8906个细胞            77.52％
EOS：             706个细胞             6.14％
因此，本实施例的试剂使得可能鉴定和定量分析上述四种亚群中的每一种。
实施例2
应用了与实施例1中相同的试剂，并对两个不同的人血样进行了相似分析。借助由ABX公司制造的自动ABX-Véga血液学装置进行了这些测量。
结果示于图3和4中。
就相应于图3的样品来说，该分析使得可能鉴定和定量分析如下四种亚群：淋巴细胞(LYM)、单核细胞(MO)、有粒白细胞(GRA)和多核嗜酸性粒细胞(EOS)。后者占整个细胞群的5％。
至于相应于图4的样品，该分析使得可能鉴定和定量分析如下三种亚群：淋巴细胞(LYM)、单核细胞(MO)和有粒白细胞(GRA)。此外，该分析表明，该样品不含任何多核嗜酸性粒细胞(0％的值)。
实施例3
应用了与实施例1和2中相似的试剂，但调节到中性pH，即7.6％。对人血样进行了相似的分析。借助ABX公司制造的自动ABX-Véga血液学装置进行了测量。
测量结果示于图5中。只测得如下三种主要的白细胞亚群：淋巴细胞(LYM)、单核细胞(MO)和有粒白细胞(GRA)。
实施例4
应用了与实施例3中相似的试剂，因而将它调节到中性pH。对人血样进行了相似的分析。借助ABX公司制造的ABX-Micros型自动血液学装置进行了测量。
测量结果示于图6中。如实施例3中那样，只测得如下三种主要的白细胞亚群：淋巴细胞(LYM)、单核细胞(MO)和有粒白细胞(GRA)。

Claims (13)

1.用于血样中血红蛋白的测量和白细胞的测定的试剂，其特征在于，它包括：
-至少一种阳离子型去污剂；
-一种糖苷型化合物；
-至少一种无机盐和/或一种渗透剂和/或白细胞保护剂；以及
-一种有机缓冲剂和/或无机缓冲剂，该缓冲剂能选择性地调节所述试剂的pH或者至5～8的大体上中性pH值，或者至8～12的碱性pH值。
2.权利要求1的试剂，其特征在于，所述阳离子型去污剂选自下列组分：
-伯胺，脂肪族胺的乙酸盐和盐酸盐；
-季铵盐，和三甲基羰游基铵的溴化物；
-取代二胺的氨化物，它们被硫酸乙酯、二羟乙基氨基丙胺、二乙氨基丙酰胺变成阳离子型；以及
-成环的二亚乙基三胺的氨化物。
3.权利要求1或2的试剂，其特征在于，所述阳离子型去污剂存在的浓度为大于0、至多为50g/l。
4.权利要求1或2的试剂，其特征在于，所述糖苷型化合物选自皂苷。
5.权利要求1或2的试剂，其特征在于，所述糖苷型化合物存在的浓度为0.5～20g/l。
6.权利要求1或2的试剂，其特征在于，所述无机盐选自下列化合物：钠或钾的氯化物、硫酸盐或氟化物。
7.权利要求1或2的试剂，其特征在于，所述无机盐存在的浓度为1～15g/l。
8.权利要求1或2的试剂，其特征在于，所述渗透剂和/或白细胞保护剂选自甘露糖醇、D-葡萄糖。
9.权利要求1或2的试剂，其特征在于，所述渗透剂和/或白细胞保护剂存在的浓度为0～30g/l。
10.权利要求1或2的试剂，其特征在于，所述有机缓冲剂和/或无机缓冲剂选自下列化合物：
-三乙醇胺；
-钠和钾的氢化磷酸盐；
-N-(2-乙酰氨基)-2-亚氨基二乙酸；
-N-(甲氨酰甲基)亚氨基二乙酸；
-2-氨基-2-甲基-1，3-丙二醇；
-甘氨酸；
-碳酸钠；
-柠檬酸；以及
-三(羟甲基)氨基甲烷。
11.权利要求1或2的试剂，其特征在于，所述有机缓冲剂和/或无机缓冲剂存在的浓度为大于0、至多为2wt％。
12.权利要求1或2的试剂，其特征在于，所述缓冲剂调节该试剂的pH至5～8之间的值。
13.权利要求1或2的试剂，其特征在于，所述缓冲剂调节该试剂的pH至8～12之间的值。
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