CN1834611A

CN1834611A - 一种用于血细胞分析仪的无氰溶血素及其制备方法

Info

Publication number: CN1834611A
Application number: CN 200610078645
Authority: CN
Inventors: 蔡佩娟; 卫五保
Original assignee: BEIJING SUNSTONE MEDICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: BEIJING SUNSTONE MEDICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2006-04-29
Filing date: 2006-04-29
Publication date: 2006-09-20

Abstract

本发明涉及一种用于血细胞分析仪的无氰溶血素及其制备方法，属于医疗检测用试剂技术领域。现有的不含氰的溶血素在进行血红蛋白浓度的测定和白细胞分类计数时，为达到溶解红细胞、白细胞计数分类的测量的目的，一般配方复杂，成本也较高。本发明所述的无氰溶血素，包括如下组分：季铵盐、咪唑或者咪唑衍生物中的一种物质、碱金属氯化盐及水。采用本发明所述的无氰溶血素，可以准确测定血红蛋白的浓度，同时有助于实现白细胞的分类计数，准确性高，无毒性，同时，该溶血素配方简单，成本低，稳定性好。

Description

一种用于血细胞分析仪的无氰溶血素及其制备方法

技术领域

本发明属于医疗检测用试剂技术领域，具体涉及一种用于血细胞分析仪的无氰溶血素及其制备方法。

背景技术

白细胞计数和血红蛋白浓度的测定目前成为医学诊断过程中分析病人血样的重要指标，许多疾病通常都会引起白细胞数量或者血红蛋白浓度的异常改变，如能及时发现白细胞或血红蛋白的异常改变，将有助于患者的及时诊断和治疗。

正常人血液循环中的白细胞由五种类型组成，包括淋巴细胞、单核细胞、中性粒白细胞、嗜碱粒细胞和嗜酸粒细胞，后三者统称为粒细胞，因此，人们将白细胞分为淋巴细胞、单核细胞和粒细胞三个亚群。

随着科学技术的发展，目前，在测定血红蛋白的浓度和白细胞分类计数时均采用血细胞分析仪器进行，通过血细胞分仪器能够同时进行血红蛋白的测定和白细胞的分类计数，但是利用血细胞分仪器进行血红蛋白的测定和白细胞的分类计数时，均需要稀释血样，并且需要使用特异的溶血素溶解红细胞，使其释放出含有的血红蛋白，然后再给释放的血红蛋白结合上适合的配位基形成稳定的色原，使得这种复合物在某一特定的波长下可测定其吸光度有最大的吸收峰值，从而测出血样中血红蛋白的含量。进行白细胞计数时也需要将红细胞进行溶解，因为血样中的红细胞数量远远多余白细胞数量，严重的干扰白细胞的检测；同时为了保证白细胞三个亚群的检测，白细胞的体积也需要有一定程度的改变，此时白细胞的细胞膜需要有一定程度的溶解以便释放出胞浆，同时保留细胞质和细胞核以便进行体积的分群检测。

以前采用氰化物来测定血红蛋白，因氰化物的毒性大而已很少使用，目前多采用不含氰化物的溶血素进行血红蛋白测定和白细胞的分类计数，但是这些不含氰化物的溶血素配方较复杂，成本较高。

专利号为ZL00106117.8的文献公开了一种无氰溶血素，该溶血素组分包括：十六烷基三甲基溴化铵25g/L；聚乙二醇辛基苯基醚20-40ml；医用级乙醇200-400ml/L，其他的是水。

专利申请号为CN03140211.9的文献公开了一种无氰化物溶血素及其使用方法，该溶血素组分包括：至少一种阴离子表面活性剂，选自烷基苯磺酸盐以及烷基硫酸盐；至少一种阳离子表面活性剂，选自季铵盐、吡啶鎓盐、氧化胺型季铵盐；至少一种非离子表面活性剂；其中优选十二烷基硫酸钠1.5g/L、十二烷基三甲基溴化铵25g/L、非离表面活性剂乳化剂OP 0.58g/L。

发明内容

针对现有技术中存在的缺陷，本发明的目的是提供一种环保、无毒性的无氰溶血素，并且该溶血素价格低廉，容易得到，该溶血素能够使红细胞很容易溶解并释放出血红蛋白，使血红蛋白的浓度准确并且容易测定，同时该溶血素有助于白细胞进行分类计数，准确性高。

为达到以上目的，本发明采用的技术方案是：

一种用于血细胞分析仪的无氰溶血素，包括以下组分：

(1)季铵盐，含量范围是0.5％-5％质量百分比，用于溶解红细胞释放血红蛋白，同时有助于白细胞计数分类；季铵盐的结构如下：

其中，式中的R₁是碳原子数是8-18的烷基、烯基或炔基；R₂、R₃、R₄是碳原子数是1-5的烷基、烯基或炔基；X^-是卤素阴离子。

进一步，所述的R₁选自于碳原子数在12-16之间的烷基，R₂、R₃、R₄均为甲基。

更进一步，所述的季铵盐是：十二烷基三甲基氯化铵DTAC(DodecylTrimethyl Ammonium Chloride)；十四烷基三甲基氯化铵TTAC(TetradecylTrimethyl Ammonium Chloride)；十六烷基三甲基氯化铵HTAC(HexadecylTrimethyl Ammonium Chloride)；十二烷基三甲基溴化铵DTAB(DodecylTrimethyl Ammonium Bromide)；十四烷基三甲基溴化铵TTAB(TetradecylTrimethyl Ammonium Bromide)；十六烷基三甲基溴化铵HTAB(HexadecylTrimethyl Ammonium Bromide)；其中最优选十二烷基三甲基氯化铵DTAC，其中优选的含量范围是0.8％-3％。

(2)咪唑或者咪唑衍生物中的一种物质，含量为0.1％-2％质量百分比，所述的物质用于与红细胞释放出的血红蛋白结合形成稳定的色原，以测定血红蛋白的浓度；

进一步，所述的咪唑或者咪唑衍生物，优选范围为：0.5％-1.5％质量百分比。

再进一步，所述的咪唑衍生物是4(5)-甲基咪唑、4-苯基咪唑；所述的咪唑是1，2，4-三唑。

(3)碱金属氯化盐，其含量范围是5-20g/L，所述的物质用于调节本溶血素的离子强度；

进一步，上述物质使用时，优选的物质是氯化钠、氯化钾。

(4)余量为水，最好是三蒸水。

本发明所述的一种用于血细胞分析仪的无氰溶血素的制备方法如下：

(1)原料称量：将所需的各种原料按本发明所述的配方分别称量；

(2)配制：将各种称量好的原料混合，待自然溶解后，摇匀；

(3)过滤：在过滤器中放入在三蒸水中浸泡过的0.22微米的醋酸纤维滤膜，将上述溶液过滤三次，即为本发明所述的无氰溶血素。

使用本发明所述的溶血素时，需要先用血细胞稀释液将血液稀释，然后再将本溶血素与稀释后的血样混合，利用血细胞分析仪进行血红蛋白的测定和白细胞的计数。

本发明的效果在于：采用本发明所述的无氰溶血素，可以完全溶解红细胞，使其释放出血红蛋白，并且溶血素中的配位基立即跟释放出的血红蛋白进行结合，形成稳定的色原，很容易测定血红蛋白的浓度；本溶血素在溶解红细胞的同时，还有助于白细胞分类计数的实现；同时此溶血素的配方简单，使用成本也很低。

附图说明

图1是血红蛋白衍生物即色原的吸光度示意图；

图2是红细胞计数测试结果比较示意图；

图3是白细胞计数测试结果比较示意图；

图4是红细胞压积测试结果比较示意图；

图5是粒细胞计数测试结果比较示意图；

图6是淋巴细胞计数测试结果比较示意图；

图7是单核细胞计数测试结果比较示意图；

图8是血红蛋白含量测试结果比较示意图。

具体实施方式

下面结合附图及具体实施例对本发明作进一步的描述：

实施例1

按照下列比例配制本发明所述的无氰溶血素：

(1)十六烷基三甲基氯化铵 5g(质量百分比为0.5％)

(2)4-苯基咪唑 1g(质量百分比为0.1％)

(3)氯化钠 5g(质量浓度为5g/L)

(4)三蒸水 1L

原材料：十六烷基三甲基氯化铵，Fluka，250g，52366；4-苯基咪唑，Fluka，100g，78726；氯化钠，北京化学试剂公司，500g，批号050411。

制备方法：将十六烷基三甲基氯化铵，4-苯基咪唑，氯化钠按上述比例混合，加水至1L，室温下摇晃振荡至摇匀，然后在过滤器中放入在三蒸水中浸泡过的0.22微米的醋酸纤维滤膜，将上述溶液过滤三次。

实施例2

按照下列比例配制本发明所述的无氰溶血素：

(1)十二烷基三甲基氯化铵 30g(质量百分比为3％)

(2)1，2，4-三唑 10g(质量百分比为1％)

(3)氯化钠 10g(质量浓度为10g/L)

(4)三蒸水 1L

原材料：十二烷基三甲基氯化铵，Fluka，250g，17104；1，2，4-三唑，Fluka，50g，90630；氯化钠，北京化学试剂公司，500g，批号050411。

制备方法：将十二烷基三甲基氯化铵，1，2，4-三唑，氯化钠按上述比例混合，加水至1L，室温下摇晃振荡至摇匀，然后在过滤器中放入在三蒸水中浸泡过的0.22微米的醋酸纤维滤膜，将上述溶液过滤三次。

实施例3

按照下列比例配制本发明所述的无氰溶血素：

(1)十二烷基三甲基溴化铵 50g(质量百分比为5％)

(2)4-苯基咪唑 15g(质量百分比为1.5％)

(3)氯化钠 20g(质量浓度为20g/L)

(4)三蒸水 1L

原材料：十二烷基三甲基溴化铵，Fluka，250g，44240；4-苯基咪唑，Fluka，100g，78726；氯化钠，北京化学试剂公司，500g，批号050411。

制备方法：十二烷基三甲基溴化铵，4-苯基咪唑，氯化钠按上述比例混合，加水至1L，室温下摇晃振荡至摇匀，然后在过滤器中放入在三蒸水中浸泡过的0.22微米的醋酸纤维滤膜，将上述溶液过滤三次。

实施例4

按照下列比例配制本发明所述的无氰溶血素：

(1)十六烷基三甲基氯化铵 18g(质量百分比为1.8％)

(2)4(5)-甲基咪唑 5g(质量百分比为0.5％)

(3)氯化钠 10g(质量浓度为10g/L)

(4)三蒸水 1L

原材料：十六烷基三甲基氯化铵，Fluka，250g，52366；4(5)-甲基咪唑，Fluka，100g，67580；氯化钠，北京化学试剂公司，500g，批号050411。

制备方法：将十六烷基三甲基氯化铵，4(5)-甲基咪唑，氯化钠按上述比例混合，加水至1L，室温下摇晃振荡至摇匀，然后在过滤器中放入在三蒸水中浸泡过的0.22微米的醋酸纤维滤膜，将上述溶液过滤三次。

实施例5

按照下列比例配制本发明所述的无氰溶血素：

(1)十六烷基三甲基氯化铵 15g(质量百分比为1.5％)

(2)4-苯基咪唑 10g(质量百分比为1％)

(3)氯化钠 10g(质量浓度为10g/L)

(4)三蒸水 1L

本发明所述的溶血素适用于血红胞分析仪进行白细胞分类计数和血红蛋白浓度的测定，可用于日本东亚公司的Sysmex poch100i、迈瑞公司生产的BC-3000plus及北京索通医疗技术有限公司生产的各系列的血红胞分析仪。

为说明本发明所述的溶血素测定结果的准确性，将本发明所述的溶血素利用光度计进行了血红蛋白衍生物测定的试验，试验结果具体如下：

血红蛋白衍生物最大吸光度实验：

(1)仪器：7200可见分光光度计

(2)溶血素：本发明所述的溶血素

(3)实验方法与结果：

取10μL的血样加入1990μL稀释液中混匀，再取500μL此混合液跟500μL本发明所述的无氰溶血素混匀，在7200可见光分光光度计上检测其吸光度，累积检测60个血样，主要检测所形成的衍生物在490nm到590nm之间的吸光度，特别是540nm附近的波长，找出最大吸光度所处的波长，对检测结果作图，全部进行图形处理，结果如图1所示，表明该溶血素经60次重复实验发现其最大吸光度基本都在538nm处，根据国际540nm的标准，本发明所述的溶血素是完全符合测量血红蛋白浓度的要求的，并且稳定性和重复性好，因此，对血红蛋白的测量结果准确性更高。

使用本发明所述的溶血素时，需要先用血细胞稀释液将血液稀释，然后再将本溶血素与稀释后的血样混合，利用血细胞分析仪进行血红蛋白浓度的测定和白细胞的计数，为说明本发明所述的溶血素测试的稳定性和准确性，将本发明所述的溶血素与日本东亚公司生产的溶血素进行了对比试验，对比测量了血红蛋白、白细胞和红细胞等参数的试验数据，试验结果如下：

溶血素稳定性实验

(1)仪器：日本东亚公司的Sysmex poch100i；

(2)溶血素：

1)本发明所述的溶血素，具体采用本发明实施例1中所述的配方；

2)日本东亚公司生产的溶血素；

稀释液：

1)配合本发明所述的溶血素所使用的稀释液是：北京索通医疗技

术有限公司生产的稀释液，其组分为：

EDTA-2Na(乙二胺四乙酸二钠) 0.5g

Na₂SO₄ 4.2g

NaCl 2.7g

磷酸盐缓冲液 1/25M(用于调节溶液pH值

在6.8-7.2的范围内)

十二烷基硫酸钠SDS 2.5g

Triton X-100(曲拉通X100) 3ml

1-羟基吡啶-2-硫酮 0.2g

三蒸水 1L；

2)配合日本东亚公司的溶血素使用的稀释液是：日本东亚公司生产的稀释液；

(3)实验方法与结果：

对同一血样用北京索通医疗技术有限公司生产的稀释液将血样稀释后，然后再加入本发明所述的溶血素，而后用日本东亚公司的Sysmex poch100i血细胞分析仪进行测定；同时对上述同一血样用日本东亚公司生产的稀释液和溶血素按照上述步骤进行测量，共计测量6次，记录6次测量结果，并对结果进行比较，结果如图2～图8所示。由图2～图8所示可见，本发明所述的溶血素测试结果形成的曲线比较平滑，每次测试结果的差别比较小；而日本东亚公司生产的溶血素的测试结果形成的曲线波动比较大，每次测试结果的差别较大，显然日本东亚公司生产的溶血素测量结果的偏差大于本发明溶血素测量结果的偏差，所以其稳定性和重现性不如本发明所述的溶血素。通过本次对比实验表明，利用本溶血素，配合北京索通医疗技术有限公司生产的多功能稀释液，通过血细胞分析仪测试出来的结果具有更好得稳定性和重现性。

本发明所使用的北京索通医疗技术有限公司生产的稀释液配方，并不用以限定该稀释液的组分和含量，对本发明也不构成任何限制。

Claims

1.一种用于血细胞分析仪的无氰溶血素，包括以下组分：

(1)季铵盐，含量范围是0.5％-5％质量百分比，季铵盐的结构如下：

其中，式中的R₁是碳原子数是8-18的烷基、烯基或炔基；R₂、R₃、R₄是碳原子数是1-5的烷基、烯基或炔基；X^-是卤素阴离子；

(2)咪唑或者咪唑衍生物中的一种物质，含量范围是0.1％-2％质量百分比；

(3)碱金属氯化盐，含量范围是5-20g/L；

(4)余量为水。

2.如权利要求1所述的一种用于血细胞分析仪的无氰溶血素，其特征是：所述的R₁是碳原子数在12-16之间的烷基，R₂、R₃、R₄均为甲基。

3.如权利要求2所述的一种用于血细胞分析仪的无氰溶血素，其特征是：所述的季铵盐是：十二烷基三甲基氯化铵；十四烷基三甲基氯化铵；十六烷基三甲基氯化铵；十二烷基三甲基溴化铵；十四烷基三甲基溴化铵；十六烷基三甲基溴化铵。

4.如权利要求3所述的一种用于血细胞分析仪的无氰溶血素，其特征是：所述的季铵盐是十二烷基三甲基氯化铵。

5.如权利要求4所述的一种用于血细胞分析仪的无氰溶血素，其特征是：十二烷基三甲基氯化铵优选的含量范围是0.8％-3％质量百分比。

6.如权利要求1、2、3、4或5所述的一种用于血细胞分析仪的无氰溶血素，其特征是：所述的咪唑或者咪唑衍生物的用量为：0.5％-1.5％质量百分比。

7.如权利要求6所述的一种用于血细胞分析仪的无氰溶血素，其特征是：所述的咪唑衍生物是4(5)-甲基咪唑、4-苯基咪唑；所述的咪唑是1，2，4-三唑。

8.如权利要求7所述的一种用于血细胞分析仪的无氰溶血素，其特征是：所述的碱金属氯化盐是氯化钠、氯化钾。

9.如权利要求1、2、3、4或5所述的一种用于血细胞分析仪的无氰溶血素，其特征是：所述的水为三蒸水。

10.一种用于血细胞分析仪的无氰溶血素的制备方法，包括如下步骤：

(1)原料称量：将所需的各种组分分别称量，组分及含量如下：

1)季铵盐，含量范围是0.5％-5％质量百分比，所述的季铵盐的结构如下：

其中，式中的R₁是碳原子数是8-18的烷基、烯基或炔基；R₂、R₃、R₄是碳原子数是1-5的烷基、烯基或炔基；X^-卤素阴离子；

2)咪唑或者咪唑衍生物中的一种物质，含量范围是0.1％-2％质量百分比；

3)碱金属氯化盐，含量范围是5-20g/L；

4)余量为水；

(2)配制：将步骤(1)中所述的已称量好的原料混合，待自然溶解后，摇匀；

(3)过滤：在过滤器中放入在三蒸水中浸泡过的0.22微米的醋酸纤维滤膜，将步骤(2)中得到的溶液过滤三次，即为本发明所述的无氰溶血素。