JP2000055913A - 血液サンプル中のヘモグロビンの測定および白血球の検出用試薬 - Google Patents
血液サンプル中のヘモグロビンの測定および白血球の検出用試薬Info
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Abstract
ヘモグロビンの測定と白血球の検出を可能とする分析試
薬を提供する。 【解決手段】 本発明による試薬は、カチオン型の少な
くとも1つのデタージェントと、配糖体型の化合物、特
にサポニンと、少なくとも1つの無機塩、および/また
は浸透作用および/または白血球保護作用を有する物質
と、実質的な中性値(5〜8の間のpH値)または塩基
性値(8〜12の間のpH値)のいずれかにその試薬の
pHを選択的に調整することができる有機および/また
は無機の緩衝剤とからなる。かかる分析試薬はヒトの医
学および獣医学おける血液学的分析に適用する。
Description
関する。
のヘモグロビンの測定および白血球の検出用試薬に関す
るものである。
出、特に特定の白血球亜細胞(leukocytic sub-populat
ions)の検出の測定は、ヒト医学および獣医学双方の特
定の病理診断にとって根本的に重要なものである。
ule 又はerythrocyte )に含まれている色素タンパク質
である。
は、ヘモグロビンを遊離するために赤血球(red globul
e 又はerythrocyte )を細胞溶解することができる細胞
溶解試薬を使用することが要求され、それによってヘモ
グロビンを測定することができる。
グロビンの検出を可能にするため、赤血球を溶解し、ヘ
モグロビンを安定した色原体化合物(chromogen compou
nd)に変換することができるシアン化物イオンを含む試
薬の使用が知られている。特に、米国特許第38748
52号にこの種類の試薬についての記述がある。この試
薬の主要な欠点は、シアン化物を使用することである。
さらに、かかる試薬では、分析される血液サンプルに含
まれている白血球亜細胞を同定し定量することができな
い。
球、好中球および好酸球の検出は、特定の病理の同定に
おいて根本的に重要なものである。
ン化物を含んでいない様々な試薬がすでに先行技術にお
いて提案されている。
この種類の試薬の実施例が記述されている。
はシアン化物を使用しないという長所を持つが、血液の
白血球亜細胞の正確な同定および定量化が出来ないとい
う欠点がある。
は、血液サンプルの中に存在する好酸球を検出すること
は可能であるが、他の白血球亜細胞の各々を正確に同定
することはできない。
白血球亜細胞の識別を可能にする試薬についての記述が
なされている。しかしながら、これらの試薬は、ヒト病
理学および獣医生物学において生じる膜の耐性の克服と
いう問題に時として遭遇することになる。
とにある。
定および白血球の検出用の血液学的分析試薬を供給する
ことを目指すものであり、そによれば、シアン化物化合
物を使用せずに、ヘモグロビンの測定とともに、赤血球
(red globule 又はerythrocte)の細胞溶解を特別に可
能にすることができる。
es又はwhite globules)の総計を定量し、少なくとも1
つの白血球亜細胞を同定し、かつ少なくとも1つの白血
球亜細胞を定量することを可能にするこの種の試薬を提
供することにある。
獣医学の双方で使用することができるこの種の試薬を提
供することにある。
び獣医生物学で遭遇する膜の耐性に関連づけられる分析
上の問題を解決することができるこの種の試薬を提供す
ることにある。
発明により、カチオン型の少なくとも1つのデタージェ
ント(detergents)と、配糖体型の化合物、特にサポニ
ンと、少なくとも1つの無機塩、および/または浸透作
用および/または白血球保護作用を有する物質と、実質
的に中性値(5〜8の間のpH値)、または塩基性値
(8〜12の間のpH値)のいずれかに試薬のpH値を
選択的に調整することが可能である有機および/または
無機の緩衝剤とからなる上記種類の試薬が提案されてい
る。
は、上記の目的を達成することを可能にする少なくとも
4つの主成分から成っている。
(red globule 又はerythrocyte )の細胞溶解の作用を
なし、ヘモグロビンを遊離させ、吸光度測定による検出
を可能にする。
タージェントは、タンパク質複合体(protein complexe
s )を解離して、膜のタンパク質類を可溶性にするのに
主に使用され、それらはいわゆる変性である。
と白血球)に対し、速やかでかつ非特異的な作用を持っ
ている。
球の細胞溶解に寄与する。その上、ヘモグロビンに関し
て安定化作用を担い、それによって特定の波長でヘモグ
ロビンを分析することが可能となる。特に、この化合物
は、赤血球の抵抗性膜の破壊に寄与する。
は、赤血球を特異的に細胞溶解する機能を持っている配
糖体であるが、この細胞溶解はイオン性のデタージェン
トが存在する状態で行なわれるほど速くはない。サポニ
ンを他のデタージェントとともに使用する場合、赤血球
をより速く特異的に細胞溶解することができ、それによ
って白血球の劣化が制限される。
付けられるこの種類の化合物の化学構造は、ヘモグロビ
ンの酸化誘導体の物理的かつ化学的安定化を可能にす
る。
る。また無機塩は、抵抗率により測定を行なうことがで
きるようにするのに必要である。
血球亜細胞の識別を促進するために、浸透作用を有する
物質は、実質的に白血球の保護的役割を果たす。
るので、緩衝剤は重要な成分である。実際、pH値に応
じて、試薬は一つあるいは複数の白血球亜細胞を同定す
ることができる。
薬のpHを調整する場合、次の3つの白血球亜細胞、す
なわち、リンパ球、単球および好中球を定量し同定する
ことが可能である。
pHを調整する場合、さらに、多核性の好酸球を同定す
ることが可能である。
適用については、塩基性値に試薬のpHを調整すること
が必要である。
質的な中性値に試薬のpHを調整する。
ントは、次の成分、すなわち、第一級アミン、脂肪アミ
ンの酢酸塩および塩酸塩、第四級アンモニウム塩、およ
びトリメチルケチルアンモニウムの臭化物、エチル硫酸
塩によってカチオン型にされた置換したジアミンのアミ
ド、ジエタノールアミノ−プロピルアミン、ジエチルア
ミノ−プロピルアミド、環状形成されたジエチレントリ
アミンのアミドから選択するのが好ましい。
の濃度で、さらに詳細には、約18g/lの濃度で存在
するのが好ましい。
して公知であるサポニンを選択するのが好ましく、それ
はトリテルペンのあるいはステロイド性のいずれのサポ
ニンでもよい。
は、0.5〜20g/lの範囲の濃度で、さらに詳細に
は、約2g/lの濃度で存在するのが好ましい。
カリウムの塩化物、硫酸塩あるいはフッ化物から選択す
るのが好ましい。
度で、さらに詳しくはは、約8g/lの濃度で存在する
のが好ましい。
は白血球保護作用を有する物質は、マンニトール、D−
グルコースおよびその類似化合物から選択するのが好ま
しい。
用を有する物質は、0〜30g/lの範囲の濃度で、さ
らに詳しくは、約2.5g/lの濃度で存在するのが好
ましい。
の化合物、すなわち、トリエタノールアミン、ナトリウ
ムおよびカリウムの水素化したリン酸塩、N−[2−ア
セトアミド]−2−イミノ二酢酸、N−[カルバモイル
メチル]イミノ二酢酸、2−アミノ−2−メチル−1、
3−プロパンジオール、グリシン、炭酸ナトリウム、ク
エン酸、トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタンとか
ら選択するのが好ましい。この緩衝剤は、0〜2重量%
の範囲の濃度で存在するのが好ましい。
試薬のpH値を5〜8の間に調整する。
pH値を8〜12の間に調整する。
して、この発明をこれより説明する。
示された濃度で調製する。
0.5の塩基性値に調整する。
ンスのABX社によって製造されたABXマイクロ(A
BX−Micros)の名称で販売されている自動血液
装置を使用して、2つの血液学的分析を実施する。
析する血液サンプルを特定の容量の希釈剤および前述の
試薬と混合する。
う。図1および図2に、2つの異なる血液サンプルで行
なった測定の結果を示す。
血球の数を示している。4つの白血球亜細胞の存在が認
められる。
なわち、リンパ球(LYM)、単球(MO)、顆粒球
(GRA)および多核性の好酸球(EOS)を右から左
へ参照することができ、それらは矢印によって定められ
ている。
計測された細胞数とそれに対応する百分率を示す以下の
測定結果を提供する。
各々を同定し定量することができる。
プルについて、実施例1と同じ試薬を使用し、同様の分
析を行なう。ABX社製の自動ABX−ベガ(ABX−
Vega)血液装置によって測定を実施した。
は、次の4つの亜細胞、すなわち、リンパ球(LY
M)、単球(MO)、顆粒球(GRA)および多核性の
好酸球(EOS)を同定および定量することを可能にし
た。EOSの定量は、総細胞数の5%を示している。
分析は、次の3つの亜細胞、すなわち、リンパ球(LY
M)、単球(MO)および顆粒球(GRA)を同定し定
量することを可能にした。さらに、この分析は、サンプ
ルがいかなる多核性の好酸球も含まないこと(0%レベ
ル)を示している。
用した試薬と同様の試薬を用いるが、pHは中性pH、
すなわち7.6%に調整する。ヒト血液のサンプルで同
様の分析を実施する。ABX社製の自動ABX−ベガ
(ABX−Vega)血液装置を用いて測定を実施す
る。
白血球亜細胞、リンパ球(LYM)、単球(MO)およ
び顆粒球(GRA)のみが検知された。
するため、中性のpHに調整する。ヒト血液のサンプル
で同様の分析を実施する。ABX社製の自動ABX−マ
イクロ(ABX−Micros)血液装置によって測定
を実施する。
に、次の3つの主要な白血球亜細胞、すなわち、リンパ
球(LYM)、単球(MO)、および顆粒球(GRA)
のみが検知された。
図である。
図である。
図である。
図である。
図である。
図である。
Claims (13)
- 【請求項1】 血液サンプル中のヘモグロビンの測定お
よび白血球の検出用試薬であって、 少なくとも1つのカチオン型のデタージェントと、 配糖体型の化合物、特にサポニンと、 少なくとも1つの無機塩、および/または浸透作用およ
び/または白血球保護作用を有する物質と、 実質的な中性値(5〜8の間のpH)、または塩基性値
(8〜12の間のpH)のいずれかにその試薬のpHを
選択的に調整することができる有機および/または無機
の緩衝剤とからなることを特徴とする試薬。 - 【請求項2】前記デタージェントが次の成分、すなわ
ち、 第一級アミン、脂肪アミンの酢酸塩および塩酸塩と、 第四級アンモニウム塩、およびトリメチルケチルアンモ
ニウムの臭化物と、 エチル硫酸塩によってカチオン型にされた置換したジア
ミンのアミド、ジエタノールアミノプロピルアミン、ジ
エチルアミノプロピルアミドと、 環状形成されたジエチレントリアミンのアミドとから選
択されることを特徴とする請求項1に記載の試薬。 - 【請求項3】前記デタージェントが、0〜50g/lの
範囲の濃度で存在することを特徴とする請求項1または
2に記載の試薬。 - 【請求項4】前記配糖体型の化合物が、サポニン(また
はサポノシド)から選択されることを特徴とする請求項
1〜3のいずれか1項に記載の試薬。 - 【請求項5】前記配糖体型の化合物が、0.5〜20g
/lの範囲の濃度で存在することを特徴とする請求項1
〜4のいずれか1項に記載の試薬。 - 【請求項6】前記無機塩が次の化合物、すなわち、ナト
リウムまたはカリウムの塩化物、硫酸塩またはフッ化物
から選択されることを特徴とする請求項1〜5のいずれ
か1項に記載の試薬。 - 【請求項7】前記無機塩が、1〜15g/lの範囲の濃
度で存在することを特徴とする請求項1〜6のいずれか
1項に記載の試薬。 - 【請求項8】前記浸透作用および/または白血球保護作
用を有する物質をマンニトール、D−グルコース等から
選択することを特徴とする請求項1〜7のいずれか1項
に記載の試薬。 - 【請求項9】前記浸透作用および/または白血球保護作
用を有する物質が、0〜30g/lの範囲の濃度で存在
することを特徴とする請求項1〜8のいずれか1項に記
載の試薬。 - 【請求項10】前記有機および/または無機の緩衝剤
が、次の化合物、すなわち、 トリエタノールアミン、 ナトリウムとカリウムの水素化したリン酸塩、 N−[2−アセトアミド]−2−イミノ二酢酸、 N−[カルバモイルメチル]イミノ二酢酸、 2−アミノ−2−メチル−1,3−プロパンジオール、 グリシン、 炭酸ナトリウム、 クエン酸、 トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタンから選択され
ることを特徴とする請求項1〜9のいずれか1項に記載
の試薬。 - 【請求項11】前記有機および/または無機の緩衝剤
が、0〜2重量%の範囲の濃度で存在することを特徴と
する請求項1〜10のいずれか1項に記載の試薬。 - 【請求項12】前記緩衝剤が、試薬のpHを5〜8の間
の値に調整することを特徴とする請求項1〜11のいず
れか1項に記載の試薬。 - 【請求項13】前記緩衝剤が、試薬のpHを8〜12の
間の値に調整することを特徴とする請求項1〜11のい
ずれか1項に記載の試薬。
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