TW554171B - Reagent for measurement of the haemoglobin and determination of the leukocytes in a blood sample - Google Patents
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Description
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 554171 A7 B7 五、發明說明(1 ) 本發明屬於血液學研究分析研究範圍。 更進一步說明,本發明為供血液樣品測量血紅蛋白及测 定白血球之試劑。 測量血紅蛋白濃度及測定白血球,尤其是白血球亞族群 (leukocytic sub-population) ’在人類醫學及獸發學之 特定病理診斷上,是初期重要根據。 血紅蛋白是血液中被包含在紅血球裡的一種色素蛋白質。 因此測量血紅蛋白濃度前需Μ细胞溶解試劑使紅血球溶 解,待釋放出所包含的血紅蛋白質再進行测量。 為此,已知含有氰離子的試劑可使紅血球溶解並使血紅 蛋白質形成穩定的色素原化合物,並藉由比色法而得以測 定血紅蛋白質。US專利387 48 52特別提出此類型試劑。此 類型試劑的主要缺點為其内含第化合物。除此之外,此類 試劑無法鑑定及量化待測血液樣品中所含之白血球亞族群° 實際上分析鑑定白血球亞族群*尤其是淋巴细胞( lymphocytes),單核白血球(monocytes),瞎中性白血球 (neutrophil)及嗜酸性白血球(eosinophil)是判定特定病 理的初期重要依據。 目前已有多種不含氰化合物的試劑被提出K供血液試樣 檢測白血球。 此類試劑之例子可見於EP 0325710文件中。 然而這類具有不含氰儍點之試劑仍有其缺點,即其無法 完全準確測定及測量出血液中之白血球亞族群。 比方說ΕΡ0 3 2 57 1 0所提出的試劑可W檢測血液樣品中的 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210 X 297公釐) 4 ---ί ^---------------訂---------—- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 554171 A7 ___ B7 五、發明說明(2 ) 嗜酸性白血球,但卻無法準確鑑定其它各個種類的白血球 亞族群。 此外;EP0424871所提試劑則可分辨白血球亞族群。但是 此類試劑有時無法克服在人類病理學及獸翳生物學研究中 常遇到的膜抗性(membranous resistance)。 本發明主旨即在於減少前述缺點。 本發明之重點特別是在於提出一種供血液學研究分析之 試劑,其可供血液樣品測量血紅蛋白及測定白血球*特別 /1 在不使用氰化合物情況下可溶解紅血球並測量血紅蛋白。 本發明主旨亦在提出此種類型試劑*其可測量白血球之 總量、鑑定至少一白血球亞族群及定量至少一白血球亞族 群。 本發明主旨亦在提出一種可同時運用於人類發學與獸醫 學研究中的此種類型試劑。 本發明之主旨亦在提出一種可K減低在人類病理學及獸 B生物學中常遇到的膜抗性(membrane resistance)相間 之分析問題的試劑。 根據本發明主旨,在此提出符合以上要求之試劑,其包 含: -至少一陽離子型態的清潔劑; -一醣苷類化合物,特別是皂素; -至少一無機鹽類,及/或一種調節滲透壓及/或-自血球 保護劑; -一種有機及/或無機媛衝液,其可選擇性地調整試劑之 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210 X 297公釐) ---•丨^-----裝·*—------訂------------ · (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 554171 A7 B7 五、發明説明(3 pH值至實質中性(pH值介於5至8), 12)。 由是•本發明血液試劑包含了至 逑發明主旨要求。 陽離子型態的清潔劑可溶解紅血 血紅蛋白質,而可接鑕吸光度測量 維子性(陰離子或陽雛子)清潔劑 解雛並溶解细胞膜上的蛋白質。這 除此之外,它們對於血液中的細 球)的作用極快且為非專一性。 醣苷類化合物,特別像是皂素, 的成分。另外,酿苷成分亦提高血 便稍後K特定波長進行分析;而其 破壊紅血球的膜抗性。 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 费 合 作 社 印 製 或是鹼性(pH值介於8至 少四種主要成分以達前 球*以釋放出其内含的 來測定。 主要是使蛋白質複合物 種作用稱為變性。 胞族群(紅血球與白血 是專門用來溶解紅血球 紅蛋白質之穩定性,Μ 最特別之處則在於其可 溶解紅血球能力的酿苷 清潔劑後的溶解速度。 Κ增快並更特定溶解紅 碳架構特色,在物理、 生物結構。 性。但為了增加電阻以 血球之角色,當在中性 辨白血球亞族群。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 皂素·即皂苷,是一種特定具有 ,但是其溶解速度不如加入離子性 當皂素與其他清潔劑一起施用時可 血球,而減少對白血球的破壊。 由於此類化合物化學結構之多環 化學因素上可穗定血紅蛋白氧化衍 無機鹽類的加入會影響清潔劑活 便測量仍必須加入無機鹽類。 調節滲透壓成分主要扮演保護白 pH值環境中施用試劑時,可幫肋分 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格( 210X297公釐) -6 - 554171 A7 B7 五、發明説明(4 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 最後,緩衝液為試劑的關鏈成分,因為pH值為試劑的重 要特徵。事實上,根據不同pH值該試劑可測定一種或多種 白血球亞族群。 當試劑pH值被調整至中性(pH值介於5〜8)時,便可測量 及测定Μ下三種白血球亞族群:淋巴细胞、單核白血球及 嗜中性白血球。 而當pH值被調至鹼性(pH值介於8〜12)時,試劑便可測 定多核嗜酸性白血球(polynuclear eosinophils)。 因此,為使試劑能夠測定多核嗜酸性白血球,其pH值必 須調整至鹼性pH值。 當血液測試項目中不需測定多核瞎酸性白血球,就僅需 將試劑pH值調整至實質中性pH值。 本發明試劑中,清潔劑成分較優選自下列物質: -一級胺(primary amine)、脂肪胺的乙酸酯類及氫氛酸 酯類; -四級結構銨鹽及三甲基嗣銨之溴化物; 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -被取代二胺的醢胺,其被K下物質陽離子化:硫化乙 酯、二乙醇胺丙胺、二乙基胺丙胺;及 -含環的二伸乙基三胺之醢胺。 清潔劑之湄度介於0至50g/L為有利測試環境,特別是接 近18g/L之濃度。 試劑中酷苷類化合物較佳為選擇春素,亦即皂苷( saponoside),為較好選擇,也可如三烯類 (triterpenic)或類固醇類(steroidal)醣苷亦可使用。 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) A4規格(210X297公釐) 一 7 一 "" 554171 A7 — _B7_ 五、發明説明(5 ) 根據本發明試劑,醣苷類化合物較佳為在0.5至20g/L 的濃度,而更佳為近2g/L之濃度。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 無機鹽成分較佳選自下列化合物質中:鈉或鉀之氯、硫 或氟化物。 無機鹽濃度較佳在介於1至15g/L濃度之間更佳為接近 8g/L之濃度。 本發明試劑之調節滲透壓及/或白血球保護劑義隹遽自:會I糖 酵* D-葡萄糖及相似性質化合物。 此類調節滲透壓及/或白血球保護劑在試劑中的濃度較 佳為0至30g/L,更佳為約2.5g/L。 有機及/或無機鍰衝液較佳選自下列化合物: 三乙醇胺·, 磷酸氳化鈉及鉀; N-[乙醯胺基]-2-亞胺二乙酸; Η-[胺甲醯基甲基]-亞胺二乙酸; I 基 甲 I 2 - 胺 1 2 酵 二 丙 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 酸納酸鑀明5:具 胺酸樣(^類發於 一 甘碳檸三這本介另. 值 基 甲 於例 介範 霈體 度具 。 濃的 烷適舉 甲合列 丨液一 衝第 比 分 百 量 i 遷 Η Ρ 劑 試 整 液 衝 鍰 Μ 乃 至 至 8 於 介 值 Η Ρ 劑 試 整 fflw 液 ff 緩 Μ 則 中 例 範 體 準 標 家 國 國 中 用 適 尺 張 紙 I釐 公 97· 8 554171 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明(7 ) 分析 1 (圖 1) LYM :3956细胞 53.23¾ M0 : 420细胞 5,65¾ GRA :2576细胞 34.65¾ EOS :481细胞 6.47¾ 分析 2 (圖 2) LYH :1071细胞 9· 3U H0 : 805细胞 7.00¾ GRA :8906细胞 77·52* EOS :706细胞 6.14¾ 因 此,本發明 試劑 可Μ同時测定及測量Μ上四種白血球 亞族 群。 實施 例2 使 用在本發明 實施 例1中之試劑,針對兩份人類 血液樣 品進 行相似分析 〇 K ΑΒΧ公司出品ABX-Vega血液自 動分析 儀器 測量。 結 果如圖3及圖4。 圖 3結果顯示, •此種分析方法可以測定及測量下 列四種 白血 球亞族群: 淋巴 细胞(LYM),單核白血球(M0) ,粒细 胞(GRA),及多核瞎酸性白血球(EOS)。後者佔了總族群的 5¾ 〇 由 圖4對應的樣品, f可測定及測羞出K下三種白 血球亞 族群 :淋巴细胞 (LYM),單核白血球(M0)及粒细胞 (GRA)。 圖中 並顯示此樣 品未 含多核嗜酸性白血球(0¾)。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS )八4規格(2!0X297公釐) 554171 A7 B7五、發明説明(8 ) 實施例3 使用如實施例1及範例2中相似之試劑,但須特別調整pH 至中性,如7.6。取一人類血液樣品進行相似的嫌小ABX公司 出品之ABX-Vega自動分析儀器測量分析。 結果見於圖5。僅偵測到三種主要白血球亞族群:淋巴 细胞(LYM),單核白血球(M0)及粒细胞(GRA)。 實施例4 使用相似於實施例3中所使用的試劑,其pH值調為中性。 並取一人類血液樣品進行以上相似之分析。Μ ABX公司出 品之ΑΒΧ-Vega自動分析儀器测量分析。 分析結果見於圖6。如實施例3般,僅偵測到下列三種主 要白血球亞族群·•淋巴细胞(LYM),單核白血球(M0)及粒 细胞(GRA) 〇 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) A4規格(2丨0'〆29?公釐) 11 554171 【圖式簡單說明】 圖1爲利用法國ABX公司血液學硏究自動分析裝置 (ABX-Micros)進行血液學分析之結果,其中係根據相對密 度顯示白血球種類之數目。 圖2爲採用不同於圖1之動物血液樣本之血液學分析結 果。 圖3爲人類血液樣本之分析結果,其中顯示出不同的白 血球亞族群:LYM、MO、GRA及EOS。 圖4爲不同於圖3之人類血液樣本之分析結果,其中顯 示出不同的白血球亞族群:LYM、MO、GRA及EOS。 圖5爲人類血液樣本之分析結果,其中顯示出不同的白 血球亞族群:LYM、M0及GRA。 圖6爲不同於圖5之人類血液樣本之分析結果’其中顯 示出不同的白血球亞族群:LYM、M0及GRA。 326\總檔\88\88112217\88112217(替換)-2 12
Claims (1)
- 554171 ':l-i 、::人 靑利賴92. 3. 12 替換本 串 種供血液樣品測量血紅蛋白及測定白血球的試劑 其特徵爲包含: -至少一陽離子性之淸潔劑; -一醣苷類化合物; -至少一無機鹽類及/或一種調節滲透壓物質及/或白血 球保護劑; -一有機及/或無機緩衝液,其可選擇性地調整試劑之pH 値’至中性狀態(p Η値介於5及8 ),或是鹼性狀態(ρ η値 介於8及1 2), 其中淸潔劑乃選自下列成分·· -一級胺、脂肪胺的乙酸酯類及氫氯酸酯類; -四級結構銨鹽及三甲基酮銨之溴化物; -被取代二胺的醯胺,其被以下物質陽離子化:硫化乙 酯’二乙醇胺丙胺,二乙基胺丙胺;及 -含環的二伸乙基三胺之醯胺, 其中醣苷類化合物乃選自皂素(或皂苷)類物質。 2 ·如申請專利範圍第丨項之試劑,其中內含之淸潔劑濃 度爲介於〇至50g/L。 3 ·如申請專利範圍第1項之試劑,其中醣苷類化合物濃 度爲介於0.5至20g/L。 4 ·如申請專利範圍第1項之試劑,其中無機鹽類乃選自 下列化合物:鈉或鉀之氯化物、硫化物或氟化物。 5 ·如申請專利範圍第丨項之試劑,其中無機鹽濃度爲介 1 326\專利案件總檔案\88\88112217\88112217(替換)-1 554171 於 1 至 15g/L。 6·如申請專利範圍第1項之試劑,其中調節滲透壓及/或 白血球保護劑乃選自甘露糖醇,D-葡萄糖及其他相似成分。 7 ·如申請專利範圍第1項之試劑’其中調節滲透壓及/或 白血球保護劑濃度爲介於〇至30g/L。 8.如申請專利範圍第1項之試劑,其中有機及/或無機緩 衝液成分乃選自下列化合物: 三乙醇胺; 磷酸氫化鈉及鉀; N-[乙醯胺基]-2-亞胺二乙酸; N-[胺甲醯基甲基]-亞胺二乙酸; 2 -胺· 2 -甲基-1,3 -丙二醇; 甘胺酸; 碳酸鈉; 檸檬酸;及 三(羥甲基)胺甲烷。 9 ·如申請專利範圍第1項之試劑,其中有機及/或無機緩 衝液濃度爲介於0至2重量百分比。 1 0 ·如申請專利範圍第1項之試劑,其中緩衝液調整後之 P Η値介於5及8。 1 1 ·如申請專利範圍第1項之試劑,其中緩衝液調整後之 ρ Η値介於8及1 2。 2 326\專利案件總檔案\88\88丨〗2217\88112217(替換)-1
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