JP5431644B2 - 呼吸器感染症の検査方法 - Google Patents
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Description
図2(a)〜(c)は、それぞれ、試験容器1の正面図、平面図及び側面図であり、図2(d)は、図2(a)のI−I断面図である。図2(e)、(f)は、それぞれ、図2(b)のII−II断面図、III−III断面図である。
一例では、受け入れ部15の内断面の面積が開口1aに近づくにつれて大きくなるように、受け入れ部15の側壁21が、テーパー状になっている。
以下の方法に従って、クロマト用膜担体11、標識保持部材9を調製し、さらにこれらを用いて、インフルエンザウイルス検査用試験具31を調製した。
図1(a)に示すように、ニトロセルロースメンブレンからなるクロマト用膜担体11の第1判定部11A、第2判定部11B及び対照部11Cに、抗体塗布機(BioDot社)を用いて、それぞれ、リン酸緩衝液(pH7.0)で2.0mg/mLの濃度になるように希釈した抗インフルエンザA型モノクローナル抗体、リン酸緩衝液(pH7.0)で1.5mg/mLの濃度になるように希釈した抗インフルエンザB型モノクローナル抗体、及びリン酸緩衝液(pH7.0)で1.0mg/mLの濃度になるように希釈したビオチン結合BSA(ウシ血清アルブミン)を塗布し、50℃で30分間乾燥させた。
抗インフルエンザA型モノクローナル抗体を青色着色ポリスチレンラテックス粒子(粒径0.3μm)に感作し、分散用緩衝液(BSA及びシュークロースを含有するリン酸緩衝液(pH7.0))に懸濁し、抗インフルエンザA型モノクローナル抗体感作ラテックス粒子を調製した。
まず、バッキングシートからなる基材5に、図1(a)に示すように、上記1−1で調製したクロマト用膜担体11、上記1−2で調製した標識保持部材9、不織布(レーヨン)からなる試料添加用部材7、不織布(セルロース)からなる吸収部材13を貼り合せた。次に、試料添加用部材7と吸収部材13をそれぞれ図示のように覆う透明シール14を貼った。最後に、裁断機(BioDot社)にて5mm幅に裁断し、インフルエンザウイルス検査用試験具31を調製した。
2−1.クロマト用膜担体11の調製試料
図1(b)に示すように、ニトロセルロースメンブレンからなるクロマト用膜担体11の判定部11D及び対照部11Cに、抗体塗布機(BioDot社)を用いて、それぞれ、リン酸緩衝液(pH7.0)で2.0mg/mLの濃度になるように希釈した抗RSウイルスモノクローナル抗体(RSウイルスのF蛋白と反応)、及びリン酸緩衝液(pH7.0)で1.0mg/mLの濃度になるように希釈したビオチン結合BSA(ウシ血清アルブミン)を塗布し、50℃で30分間乾燥させた。
抗RSウイルスモノクローナル抗体(RSウイルスA及びB型両方と反応)を青色着色ポリスチレンラテックス粒子(粒径0.3μm)に感作し、分散用緩衝液(BSA及びシュークロースを含有するリン酸緩衝液(pH7.0))に懸濁し、抗RSウイルスモノクローナル抗体感作ラテックス粒子を調製した。
まず、バッキングシートからなる基材5に、図1(b)に示すように、上記2−1で調製したクロマト用膜担体11、上記2−2で調製した標識保持部材9、不織布(レーヨン)からなる試料添加用部材7、不織布(セルロース)からなる吸収部材13を貼り合せた。次に、試料添加用部材7と吸収部材13をそれぞれ図示のように覆う透明シール14を貼った。最後に、裁断機(BioDot社)にて5mm幅に裁断し、RSウイルス検査用試験具32を調製した。
3−1.クロマト用膜担体11の調製試料
図1(c)に示すように、ニトロセルロースメンブレンからなるクロマト用膜担体11の判定部11E及び対照部11Cに、抗体塗布機(BioDot社)を用いて、それぞれ、リン酸緩衝液(pH7.0)で2.0mg/mLの濃度になるように希釈した抗アデノウイルスモノクローナル抗体(マウスIgGモノクローナル抗体)、及びリン酸緩衝液(pH7.0)で1.0mg/mLの濃度になるように希釈したビオチン結合BSA(ウシ血清アルブミン)を塗布し、50℃で30分間乾燥させた。
抗アデノウイルスモノクローナル抗体(マウスIgGモノクローナル抗体、判定部11Eに用いたものとは異なる部位でアデノウイルスを認識する)を青色着色ポリスチレンラテックス粒子(粒径0.3μm)に感作し、分散用緩衝液(BSA及びシュークロースを含有するリン酸緩衝液(pH7.0))に懸濁し、抗アデノウイルスモノクローナル抗体感作ラテックス粒子を調製した。
まず、バッキングシートからなる基材5に、図1(c)に示すように、上記3−1で調製したクロマト用膜担体11、上記3−2で調製した標識保持部材9、不織布(レーヨン)からなる試料添加用部材7、不織布(セルロース)からなる吸収部材13を貼り合せた。次に、試料添加用部材7と吸収部材13をそれぞれ図示のように覆う透明シール14を貼った。最後に、裁断機(BioDot社)にて5mm幅に裁断し、アデノウイルス検査用試験具33を調製した。
非イオン性界面活性剤NP40(ポリオキシエチレン(9)オクチルフェニルエーテル)を0.1v/v%、チオシアン酸カリウムを0.03w/v%、2−メルカプトエチルアミン塩酸塩を0.03w/v%、EDTA2Naを0.5w/v%および塩化ナトリウムを1.3w/vを含む0.05molのPIPES緩衝液(pH7.8)を検体処理液として調製した。この検体処理液2.4mlを図3に示すプラスチックボトル41に収容した。
5−1:インフルエンザ疑い患者の検査
2005年10月から2006年3月の期間に医院1を受診した患者のうち、インフルエンザが疑われ、最高体温が38℃以上で、発症から72時間以内という条件に当てはまる患者133名(平均年齢6.7歳、0.4〜22歳)からトラップ付吸引カテーテルを用いて鼻腔吸引液を採取して検体とした。
2005年10月から2006年3月の期間に医院1を受診した患者のうち、37.5℃以上の発熱もしくは鼻汁などの上気道症状、咳きや肺聴診異常などの下気道症状などからRSウイルス感染が疑われた患者102名(平均年齢1.0歳、0.2〜9歳)からトラップ付吸引カテーテルを用いて鼻腔吸引液を採取して検体とした。
また、2005年10月から2006年1月の期間に医院2を受診した患者のうち、37.5℃以上の発熱もしくは鼻汁などの上気道症状、咳きや肺聴診異常などの下気道症状などからRSウイルス感染が疑われた患者105名(平均年齢1.5歳、0.2〜5歳)から綿棒を用いて鼻腔拭い液を採取して検体とした。
5;基材
7;試料添加用部材
9;標識保持部材
11;クロマト用膜担体
11A;A型インフルエンザ判定部
11B;B型インフルエンザ判定部
11C;対照部
11D;RSウイルス判定部
11E;アデノウイルス判定部
13;吸収部材
14;透明シール
15:受入れ部
17;試料収容部
18;中間部
20;段差部
23;突起部
31;インフルエンザウイルス検査用試験具
32;RSウイルス検査用試験具
33;アデノウイルス検査用試験具
34;インフルエンザ・アデノウイルス検査用試験具
40;検体処理容器
41;プラスチックボトル
42;ノズル
43;キャップ
50;ケース
Claims (9)
- 鼻腔吸引液、鼻腔拭い液および咽頭ぬぐい液から選択される一の検体を、非イオン性界面活性剤を含有する水溶液である一の検体処理液で処理することにより、インフルエンザA型およびB型ウイルス検査とRSウイルス検査、またはインフルエンザA型およびB型ウイルス検査とアデノウイルス検査に適した一の検査試料を調製し、
前記調製された検査試料の一部を、インフルエンザA型およびB型ウイルス検査用のイムノクロマトグラフィー法によるラテラルフロータイプの試験具を用いて検査し、さらに前記調製された検査試料の一部を、RSウイルス検査用のイムノクロマトグラフィー法によるラテラルフロータイプの試験具またはアデノウイルス検査用のイムノクロマトグラフィー法によるラテラルフロータイプの試験具を用いて検査することを特徴とする、呼吸器感染症の検査方法。 - 前記インフルエンザA型およびB型ウイルス検査用の試験具による検査結果が陰性の場合に、前記RSウイルス検査用の試験具または前記アデノウイルス検査用の試験具による検査を実施する請求項1記載の呼吸器感染症の検査方法。
- 前記調製された検査試料を、前記インフルエンザA型およびB型ウイルス検査用の試験具で検査し、さらに前記調製された検査試料を、前記RSウイルス検査用の試験具で検査する請求項1又は2に記載の呼吸器感染症の検査方法。
- 検体処理液が、塩化ナトリウムを含有する水溶液である請求項1〜3の何れか1項記載の呼吸器感染症の検査方法。
- 検体処理液が還元剤を含有する請求項1〜4の何れか1項に記載の呼吸器感染症の検査方法。
- 検体処理液がチオシアン酸化合物を含有する請求項1〜5の何れか1項に記載の呼吸器感染症の検査方法。
- 検体処理液がキレート剤を含有する請求項1〜6の何れか1項に記載の呼吸器感染症の検査方法。
- 検体処理液がGood緩衝剤を含有する請求項1〜7の何れか1項に記載の呼吸器感染症の検査方法。
- 検体が被験者からめん棒を用いて採取された鼻腔拭い液または咽頭ぬぐい液である請求項1〜8の何れか1項に記載の呼吸器感染症の検査方法。
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