JP4889730B2 - シアニドを含まない溶解試薬組成物;ならびにヘモグロビンおよび白血球の測定のための使用の方法 - Google Patents
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Description
本発明は、溶解試薬組成物;ならびに血液サンプルの総ヘモグロビン濃度および白血球を測定するために用いる方法に関する。
総ヘモグロビンの決定は、全血の酸素運搬能力の指標である。臨床症状をもつ患者の検査に際して、および臨床的に正常な集団の電気泳動による調査によって、300を超える異常ヘモグロビンが発見されている。これらの異常の多くは、改変されたヘモグロビンレベルを有する臨床病状、または酸素を結合する改変された能力を有するヘモグロビンを有する臨床病状を生じる。これらの疾患には、鎌状赤血球貧血、αサラセミアおよびβサラセミアの両方、ならびにヘモグロビンMがある。
1つの局面では、本発明は、シアニドを含まない溶解試薬組成物に関する。このシアニドを含まない溶解試薬組成物は、
以下の分子構造:
R1は、10個〜18個の炭素原子を有するアルキル基、アルケニル基またはアルキニル基であり;R2、R3、およびR4は、1個〜4個の炭素原子を有するアルキル基であり、そしてX−は、塩化物イオンまたは臭化物イオンであり;上記第四級アンモニウム界面活性剤は、赤血球を溶解してヘモグロビンを遊離させるために十分な量である、第四級アンモニウム界面活性剤と;
シュウ酸、リンゴ酸、マロン酸、エチレンジアミン、N,N−ジエチルエチレンジアミン、N,N’−ジエチルエチレンジアミン、ジエチレントリアミン、テトラエチレンペンタアミン、1,6−ヘキサンジアミン、1,3−ペンタンジアミン、2−メチルペンタメチレンジアミン、1,2−ジアミノシクロヘキサン、4−アミノアセトフェノン、ビス−ヘキサメチレントリアミン、ピリダジン、および3,6−ジヒドロキシピリダジンからなる群から選択されるリガンドであって、ヘモグロビンと安定な色原体を形成するために十分な量のリガンドと;
の水溶液を含む。上記溶解試薬組成物のpHは、約3〜約10の範囲内にある。好ましくは、上記第四級アンモニウム界面活性剤は、塩化ドデシルトリメチルアンモニウムである。
1つの実施形態では、本発明は、血液サンプル中の総ヘモグロビン濃度の測定のため、そしてさらに上記血液サンプルの白血球の測定のための、シアニドを含まない溶解試薬組成物を提供する。上記シアニドを含まない溶解試薬組成物は、
(i)以下の分子構造:
R1は、10個〜18個の炭素原子を有するアルキル基、アルケニル基またはアルキニル基であり;R2、R3、およびR4は、1個〜4個の炭素原子を有するアルキル基であり、そしてX−は、塩化物イオンまたは臭化物イオンである、第四級アンモニウム界面活性剤と;
(ii)
(a)シュウ酸、
(b)リンゴ酸、
(c)マロン酸、
(d)エチレンジアミン、
(e)N,N−ジエチルエチレンジアミン、
(f)N,N’−ジエチルエチレンジアミン
(h)ジエチレントリアミン、
(i)テトラエチレンペンタアミン、
(j)1,6−ヘキサンジアミン、
(k)1,3−ペンタンジアミン、
(l)2−メチルペンタメチレンジアミン、
(m)1,2−ジアミノシクロヘキサン、
(n)4−アミノアセトフェノン、
(o)ビス−ヘキサメチレントリアミン、
(p)ピリダジン、および
(r)3,6−ジヒドロキシピリダジン、
からなる群から選択されるリガンドであって、ヘモグロビンと安定な色原体を形成するために十分な量のリガンドと;
の水溶液を含む。
以下の溶解試薬組成物を調製した。
・処方A
1,2−ジアミノシクロヘキサン 10.0g
塩化ドデシルトリメチルアンモニウム(50%溶液) 35.6g
臭化セチルジメチルエチルアンモニウム 1.25g
1リットルに調整するための蒸留水
pH 5.5
・処方B
3,6−ジヒドロキシピリダシン 10.0g
塩化ドデシルトリメチルアンモニウム(50%溶液) 50.0g
臭化テトラデシルトリメチルアンモニウム 3.5g
1リットルに調整するための蒸留水
pH 6.0。
・処方C
1,2−ジアミノシクロヘキサン 16.8g
塩化ドデシルトリメチルアンモニウム(50%溶液) 35.5g
臭化セチルジメチルエチルアンモニウム 2.0g
1リットルに調整するための蒸留水
pH 5.5。
111個の血液サンプル、6g/dL〜17g/dLの範囲のそれらのヘモグロビン濃度、および1,000/μL〜40,000/μLの範囲の白血球数を、上記溶解試薬を処方Aによって置換したこと以外は標準的な器具形態の下、較正済みCOULTER(登録商標)LH750器具において分析した。これらのサンプルをまた、溶解試薬としてLYSE S(登録商標)III diffを用いた別の参照LH750器具において分析された。上記サンプルのうちの50%よりも多くが、種々の臨床条件を含む臨床サンプルであった。
Claims (18)
- シアニドを含まない溶解試薬組成物であって:
(i)以下の分子構造:
R1は、10個〜18個の炭素原子を有するアルキル基、アルケニル基またはアルキニル基であり;R2、R3、およびR4は、1個〜4個の炭素原子を有するアルキル基であり、そしてX−は、塩化物イオンまたは臭化物イオンであり;該溶解試薬組成物中の該第四級アンモニウム界面活性剤の濃度は、2g/L〜100g/Lの範囲内にある、第四級アンモニウム界面活性剤と;
(ii)
(a)シュウ酸、
(b)リンゴ酸、
(c)マロン酸、
(d)エチレンジアミン、
(e)N,N−ジエチルエチレンジアミン、
(f)N,N’−ジエチルエチレンジアミン
(h)ジエチレントリアミン、
(i)テトラエチレンペンタアミン、
(j)1,6−ヘキサンジアミン、
(k)1,3−ペンタンジアミン、
(l)2−メチルペンタメチレンジアミン、
(m)1,2−ジアミノシクロヘキサン、
(n)4−アミノアセトフェノン、
(o)ビス−ヘキサメチレントリアミン、
(p)ピリダジン、および
(r)3,6−ジヒドロキシピリダジン、
からなる群から選択されるリガンドと;
の水溶液を含み、
該溶解試薬組成物のpHは、3〜10の範囲内にあり、該溶解試薬組成物中の該リガンドの濃度は、0.3g/L〜25.0g/Lの範囲内にある、溶解試薬組成物。 - 前記第四級アンモニウム界面活性剤が、4g/L〜60g/Lの範囲内にある濃度を有する、請求項1に記載の溶解試薬組成物。
- 請求項1に記載の溶解試薬組成物を用いて血液サンプルの総ヘモグロビン濃度を測定する方法であって:
(a)該血液サンプルを血液希釈剤で希釈して、希釈されたサンプルを形成する工程;
(b)該希釈されたサンプルを請求項1に記載の該溶解試薬組成物と混合してサンプル混合物を形成する工程であって、該溶解試薬組成物は、赤血球を溶解して該サンプル混合物中で安定なヘモグロビン色原体を形成するために十分な量である、工程;
(c)該サンプル混合物のヘモグロビン色原体の吸光度を所定の波長で測定する工程;
(d)工程(c)で得られた吸光度から該血液サンプルの総ヘモグロビン濃度を決定する工程;ならびに
(e)該血液サンプルの総ヘモグロビン濃度を報告する工程、
を包含する、方法。 - 前記吸光度が、510nmと560nmとの間で測定される、請求項3に記載の方法。
- 第1のDCインピーダンス測定を用いて自動血液分析器中で前記サンプル混合物中の白血球の数を計数する工程;ならびに
該血液サンプルの白血球の数を報告する工程、
をさらに包含する、請求項3に記載の方法。 - シアニドを含まない溶解試薬組成物であって:
(i)以下の分子構造:
R1は、10個〜18個の炭素原子を有するアルキル基、アルケニル基またはアルキニル基であり;R2、R3、およびR4は、1個〜4個の炭素原子を有するアルキル基であり、そしてX−は、塩化物イオンまたは臭化物イオンである、2種の第四級アンモニウム界面活性剤と;
(ii)
(a)シュウ酸、
(b)リンゴ酸、
(c)マロン酸、
(d)エチレンジアミン、
(e)N,N−ジエチルエチレンジアミン、
(f)N,N’−ジエチルエチレンジアミン
(h)ジエチレントリアミン、
(i)テトラエチレンペンタアミン、
(j)1,6−ヘキサンジアミン、
(k)1,3−ペンタンジアミン、
(l)2−メチルペンタメチレンジアミン、
(m)1,2−ジアミノシクロヘキサン、
(n)4−アミノアセトフェノン、
(o)ビス−ヘキサメチレントリアミン、
(p)ピリダジン、および
(r)3,6−ジヒドロキシピリダジン、
からなる群から選択されるリガンドと;
の水溶液を含み、
該溶解試薬組成物のpHは、3〜10の範囲にあり;該溶解試薬組成物中の該界面活性剤の濃度は、2g/L〜100g/Lの範囲内にあり、そして該溶解試薬組成物中の該リガンドの濃度は、0.3g/L〜25.0g/Lの範囲内にある、溶解試薬組成物。 - 第1の第四級アンモニウム界面活性剤が、塩化ドデシルトリメチルアンモニウムである、請求項6に記載の溶解試薬組成物。
- 前記塩化ドデシルトリメチルアンモニウムが、30g/L〜60g/Lの範囲の濃度にある、請求項7に記載の溶解試薬組成物。
- 第2の第四級アンモニウム界面活性剤が、臭化テトラデシルトリメチルアンモニウムである、請求項6に記載の溶解試薬組成物。
- 第2の面活性剤が、臭化セチルジメチルエチルアンモニウムである、請求項6に記載の溶解試薬組成物。
- 請求項6に記載の溶解試薬組成物を用いて血液サンプルの総ヘモグロビン濃度を測定する方法であって:
(a)該血液サンプルを血液希釈剤で希釈して、希釈されたサンプルを形成する工程;
(b)該希釈されたサンプルを請求項6に記載の該溶解試薬組成物と混合してサンプル混合物を形成する工程であって、該溶解試薬組成物は、赤血球を溶解して該サンプル混合物中で安定なヘモグロビン色原体を形成するために十分な量である、工程;
(c)該サンプル混合物のヘモグロビン色原体の吸光度を所定の波長で測定する工程;
(d)工程(c)で得られた吸光度から該血液サンプルの総ヘモグロビン濃度を決定する工程;ならびに
(e)該血液サンプルの総ヘモグロビン濃度を報告する工程、
を包含する、方法。 - 前記吸光度が、510nmと560nmとの間で測定される、請求項11に記載の方法。
- 第1のDCインピーダンス測定を用いて自動血液分析器中で前記サンプル混合物中の白血球の数を計数する工程;ならびに
該血液サンプルの白血球の数を報告する工程、
をさらに包含する、請求項11に記載の方法。 - 前記自動血液分析器において第2のDCインピーダンス測定により前記サンプル混合物中の白血球のサイズを測定して該白血球のサイズ分布ヒストグラムを得る工程;
該分布ヒストグラムに従って、白血球部分集団を識別する工程;ならびに
白血球部分集団を報告する工程、
をさらに包含する、請求項13に記載の方法。 - 前記白血球部分集団が、リンパ球、単球および顆粒球からなる群から選択される2つ以上の集団である、請求項14に記載の方法。
- シアニドを含まない溶解試薬組成物であって:
(i)以下の分子構造:
R1は、10個〜18個の炭素原子を有するアルキル基、アルケニル基またはアルキニル基であり;R2、R3、およびR4は、1個〜4個の炭素原子を有するアルキル基であり、そしてX−は、塩化物イオンまたは臭化物イオンである、2種の第四級アンモニウム界面活性剤と;
(ii)1,2−ジアミノシクロヘキサン、および3,6−ジヒドロキシピリダジンからなる群から選択されるリガンドと;
の水溶液を含み、
該溶解試薬組成物のpHは、3〜10の範囲にあり;該溶解試薬組成物中の該界面活性剤の濃度は、2g/L〜100g/Lの範囲内にあり、そして該溶解試薬組成物中の該リガンドの濃度は、0.3g/L〜25.0g/Lの範囲内にある、溶解試薬組成物。 - 第1の第四級アンモニウム界面活性剤が、塩化ドデシルトリメチルアンモニウムである、請求項16に記載の溶解試薬組成物。
- 第2の第四級アンモニウム界面活性剤が、臭化テトラデシルトリメチルアンモニウムまたは臭化セチルジメチルエチルアンモニウムである、請求項17に記載の溶解試薬組成物。
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