JP4170903B2 - 有核赤血球の定量のための血球溶解試薬組成物 - Google Patents
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Description
本発明は、血液サンプル中の赤血球を溶解し、そして有核血球を計測するための、血球溶解試薬組成物に関する。この血球溶解試薬組成物は、少なくとも1つの4級アンモニウム界面活性剤、エトキシル化フェノール、及びエトキシル化アルコールを含み、そして約2〜約11のpHをもつ。希釈液で前もって希釈された血液サンプルと混ぜるとき、血球溶解試薬組成物は、赤血球を溶解し、そしてDCインピーダンス測定法によって他の細胞型から有核赤血球を区別することを可能にする。
1の態様において、本発明は、有核血球の測定のための血球溶解試薬組成物に向けられる。より特に、前記血球溶解試薬組成物は、DCインピーダンス測定法によって、血液サンプル中の他の細胞型と有核赤血球との区別を可能にする。この文脈において、有核血球は、有核赤血球と白血球を含みうる。
(a)以下の分子構造:
R1が、12〜16の炭素原子をもつアルキル、アルケニル又はアルキニル基であり、
R2、R3及びR4が、1〜4の炭素原子をもつアルキル基であり、そして
X-が、塩化物又は臭化物アニオンである。}によって表される4級アンモニウム塩;
(b)アルキル基が、6〜12の炭素原子をもち、かつ、エチレン・オキサイドの数が、約10〜約50におよぶ、エトキシル化アルキルフェノール;そして
(c)以下の分子構造:
R1-R2-(CH2CH2O)n-H
{式中、
R1が、10〜22の炭素原子をもつアルキル、アルケニル又はアルキニル基であり、
R2が、-O-であり、そして
nが、20〜35である。}によって表されるエトキシル化アルコール;
の水性溶液を含む。
血球溶解試薬組成物のpHは、約2〜約11の幅広い範囲にある。
(I)以下の水性溶液を含む血球溶解試薬組成物:
(a)以下の分子構造:
R1が、12〜16の炭素原子をもつアルキル、アルケニル又はアルキニル基であり、
R2、R3及びR4が、1〜4の炭素原子をもつアルキル基であり、そして
X-が、塩化物又は臭化物アニオンである。}によって表される4級アンモニウム塩;
(b)アルキル基が、6〜12の炭素原子をもち、かつエチレン・オキサイドの数が、約10〜約50におよぶ、エトキシル化アルキルフェノール;そして
(c)以下の分子構造:
R1-R2-(CH2CH20)n-H
{式中、
R1が、10〜22の炭素原子をもつアルキル、アルケニル又はアルキニル基であり、
R2が、-O-であり、そして
nが、20〜35である。}によって表されるエトキシル化アルコール;そして
(II)希釈液、
を含む。
図4Bは、本発明の血球溶解試薬組成物を使用することによって得られたヘモグロビン濃度と、COULTER(登録商標)GEN・Sにより得られたヘモグロビン濃度の間の相関関係を示す。この結果は、ヘモグロビン測定についての優れた線形相関を説明する。
以下の組成の試薬を準備した。
臭化テトラデシルトリメチルアンモニウム 25.0 g
Igepal SS-837(RhOne-Poulenc製) 15.0 g
Plurofac A38小球状界面活性剤(BASF Corp.製) 4.0 g
1 lに調整するための蒸留水
pH 5.0
以下の組成の試薬を準備した。
臭化テトラデシルトリメチルアンモニウム 25.0 g
Igepal SS-837(RhOne-Poulenc製) 15.0 g
Plurofac A38小球状界面活性剤(BASF Corp.製) 4.0 g
テトラゾール 2.0 g
BHT(エタノール中に前もって溶解) 0.04 g
1 lに調整するための蒸留水
pH 2.9
以下の組成の試薬を準備した。
血球溶解試薬
臭化テトラデシルトリメチルアンモニウム 25.0 g
Igepal SS-837(RhOne-Poulenc製) 15.0 g
Plurofac A38小球状界面活性剤(BASF Corp.製) 4.0 g
1 lに調整するための蒸留水
pH 5.0
Na2SO4 10.58 g
NaCl 3.0 g
Na2EDTA 1.5 g
イミダゾール 1.5 g
pHを中性に調整するための6 N HCl
1 lに調整するための蒸留水
pH 7.1
重量オスモル濃度 308 mOsm
実施例2の血球溶解試薬組成物、及び希釈液としてIsoton(登録商標)IIIを使った実施例1に記載の実験的血液学分析器により、有核赤血球を含む、95の正常、及び74の臨床全血サンプルを分析した。同様に、サンプル混合物の吸収を、有核血球を計測した直後に分析器により525 nmにて計測した。サンプル中のヘモグロビン濃度を、分析器によって報告した。その後同じサンプルを、COULTER(登録商標)GEN・S血液学分析器、及びCOULTER COUNTER(登録商標)ZBIにより分析した。血球溶解試薬としてLyseS(登録商標)III diff(Beckman Coulter, Inc. Miami, Florida)を、及び希釈液としてIsoton(登録商標)IIIを使用して、COULTER(登録商標)RGEN・Sを、製造業者マニュアルに従ってその標準構成下で作動させた。血液サンプル中の白血球を、WBCカウントのためのNCCLS基準手順に続いてCOULTER COUNTER(登録商標)ZBIによりカウントした。確実に有核赤血球がカウントされるように、COULTER COUNTER(登録商標)ZBIのしきい値を7.5に設定した。500個の細胞の手作業によるカウントを、有核赤血球の基準として全ての臨床サンプルについて、3人の臨床検査技師によって得、そして100 WBCにつき観察される有核赤血球の数(NRBC数/100 WBC)として報告した。
以下の組成の試薬を準備した。
臭化テトラデシルトリメチルアンモニウム 3.48 g
Igepal SS-837(RhOne-Poulenc製) 2.09 g
Plurofac A38小球状界面活性剤(BASF Corp.製) 0.56 g
テトラゾール 0.28 g
Na2SO4 7.94 g
NaCl 3.46 g
Na2EDTA 0.09 g
ADA 1.21 g
抗菌剤 0.98 g
BHT(エタノール中に前もって溶解) 0.01 g
1 lに調整するための蒸留水
pH 5.8
重量オスモル濃度 312 mOsm
Claims (22)
- 赤血球を溶解し、かつ、有核血球を計測するための血球溶解試薬組成物であって、以下の:
(a)以下の分子構造:
R1が、12〜16の炭素原子をもつアルキル、アルケニル又はアルキニル基であり、
R2、R3及びR4が、1〜4の炭素原子をもつアルキル基であり、そして
X-が、塩化物又は臭化物アニオンである。}によって表される、少なくとも1の4級アンモニウム塩、ここで当該少なくとも1の4級アンモニウム塩は10g/L〜40g/Lの濃度範囲である;
(b)6 〜 12 の炭素原子をもつアルキル基を有し、かつ、エチレン・オキサイドの数が 10 〜 50 の範囲内にあるエトキシル化アルキルフェノール、ここで当該エトキシル化アルキルフェノールは2g/L〜40g/Lの範囲の濃度を有する;並びに
(c)以下の分子構造:
R1-R2-(CH2CH2O)n-H
{式中、
R1が、10〜22の炭素原子をもつアルキル、アルケニル又はアルキニル基であり、
R2が、-O-であり、そして
nが、20〜35である。}によって表されるエトキシル化アルコール、ここで当該エトキシル化アルコールは1g/L〜20g/Lの濃度を有する;
の水性溶液を含み、そして
ここで、そのpHが、2〜11の範囲にある、前記血球溶解試薬組成物。 - 前記少なくとも1つの4級アンモニウム塩が、臭化テトラデシルトリメチルアンモニウムである、請求項1に記載の血球溶解試薬組成物。
- 血液サンプル中のヘモグロビン濃度を計測するために、ヘモグロビンとクロモゲンを形成するのに十分な量の有機リガンドをさらに含む、請求項 1 に記載の血球溶解試薬組成物。
- 前記有機リガンドが、 (a) テトラゾール及びその誘導体、 (b) イミダゾール及びその誘導体、 (c) キナルジン酸、並びに (d) 安息香酸及び安息香酸のアルカリ金属塩から成る群から選ばれる、請求項3に記載の血球溶解試薬組成物。
- 前記有機リガンドが、 1 g/L 〜 10 g/L の濃度を有する、請求項4に記載の血球溶解試薬組成物。
- 前記有機リガンドが、テトラゾール及びその誘導体である、請求項4に記載の血球溶解試薬組成物。
- 前記有核血球が、有核赤血球及び白血球を含む、請求項 1 に記載の血球溶解試薬組成物。
- 赤血球を溶解し、血液サンプル中の有核血球及びヘモグロビン濃度を計測するための血球溶解試薬組成物であって、以下の:
(a) 以下の分子構造:
R 1 が、 14 の炭素原子をもつアルキル、アルケニル又はアルキニル基であり、
R 2 、 R 3 及び R 4 が、 1 〜 4 の炭素原子をもつアルキル基であり、そして
X - が、塩化物又は臭化物アニオンである。}によって表される、少なくとも 1 の 4 級アンモニウム塩;
(b)6 〜 12 の炭素原子をもつアルキル基を有し、かつエチレン・オキサイドの数が 10 〜 50 の範囲内にあるエトキシル化アルキルフェノール;
(c) 以下の分子構造:
R 1 -R 2 -(CH 2 CH 2 O) n -H
{式中、
R 1 が、 10 〜 22 の炭素原子をもつアルキル、アルケニル又はアルキニル基であり、
R 2 が、 -O- であり、そして
n が、 20 〜 35 である。}によって表されるエトキシル化アルコール;並びに
( d ) テトラゾール、
の水性溶液からなる、前記血球溶解試薬組成物。 - 前記 4 級アンモニウム塩が、臭化テトラデシルトリメチルアンモニウムである、請求項8に記載の血球溶解試薬組成物。
- 赤血球を溶解し、かつ、有核血球を計測するための試薬システムであって、以下の:
( I ) 以下の水性溶液を含む血球溶解試薬組成物:
(a) 以下の分子構造:
R 1 が、 12 〜 16 の炭素原子をもつアルキル、アルケニル又はアルキニル基であり、
R 2 、 R 3 及び R 4 が、 1 〜 4 の炭素原子をもつアルキル基であり、そして
X - が、塩化物又は臭化物アニオンである。}によって表される、少なくとも 1 の 4 級アンモニウム塩、ここで当該少なくとも1の4級アンモニウム塩は10g/L〜40g/Lの濃度範囲である;
(b)6 〜 12 の炭素原子をもつアルキル基を有し、かつエチレン・オキサイドの数が 10 〜 50 の範囲内にあるエトキシル化アルキルフェノール、ここで当該エトキシル化アルキルフェノールは2g/L〜40g/Lの範囲の濃度を有する;並びに
(c) 以下の分子構造:
R 1 -R 2 -(CH 2 CH 2 O) n -H
{式中、
R 1 が、 10 〜 22 の炭素原子をもつアルキル、アルケニル又はアルキニル基であり、
R 2 が、 -O- であり、そして
n が、 20 〜 35 である。}によって表されたエトキシル化アルコール、ここで当該エトキシル化アルコールは1g/L〜20g/Lの濃度を有する;
であって、ここでその pH が 2 〜 11 の範囲にある、前記血球溶解試薬組成物;そして
(II) 希釈液、
を含む、前記試薬システム。 - 前記血球溶解試薬組成物が、血液サンプル中のヘモグロビン濃度を計測するために、ヘモグロビンとクロモゲンを形成するのに十分な量の有機リガンドをさらに含む、請求項10に記載の試薬システム。
- 前記有機リガンドが、 (a) テトラゾール及びその誘導体、 (b) イミダゾール及びその誘導体、 (c) キナルジン酸、並びに (d) 安息香酸及び安息香酸のアルカリ金属塩から成る群から選ばれる、請求項11に記載の試薬システム。
- 前記希釈液が、以下の:
(a) インピーダンス計測に十分な上記希釈液の伝導度を調整するための量の、少なくとも 1 の塩;及び
(b) 抗菌剤、
を含む水性溶液である、請求項10に記載の試薬システム。 - 前記希釈液が、血液サンプル中のヘモグロビン濃度を計測するために、ヘモグロビンとクロモゲンを形成するのに十分な量の有機リガンドをさらに含む、請求項13に記載の試薬システム。
- 前記有機リガンドが、 (a) テトラゾール及びその誘導体、 (b) イミダゾール及びその誘導体、 (c) キナルジン酸、並びに (d) 安息香酸及び安息香酸のアルカリ金属塩から成る群から選ばれる、請求項14に記載の試薬システム。
- 前記希釈液が、当該希釈液の pH を中性に調整するための緩衝物質をさらに含む、請求項13に記載の試薬システム。
- 赤血球を溶解し、かつ、有核血球を計測するための血球溶解試薬組成物であって、以下の:
(a) 以下の分子構造:
R 1 が、 12 〜 16 の炭素原子をもつアルキル、アルケニル又はアルキニル基であり、
R 2 、 R 3 及び R 4 が、 1 〜 4 の炭素原子をもつアルキル基であり、そして
X - が、塩化物又は臭化物アニオンである。}によって表される、少なくとも 1 の 4 級アンモニウム塩;
(b)6 〜 12 の炭素原子をもつアルキル基を有し、かつエチレン・オキサイドの数が 10 〜 50 の範囲内にあるエトキシル化アルキルフェノール;並びに
(c) 以下の分子構造:
R 1 -R 2 -(CH 2 CH 2 O) n -H
{式中、
R 1 が、 10 〜 22 の炭素原子をもつアルキル、アルケニル又はアルキニル基であり、
R 2 が、 -O- であり、そして
n が、 20 〜 35 である。}によって表されるエトキシル化アルコール;並びに
(d) インピーダンス計測に十分な、上記血球溶解試薬組成物の伝導度を調整するための量の、少なくとも 1 の塩、
の水性溶液からなる、前記血球溶解試薬組成物。 - 前記少なくとも1の塩が、硫酸、塩化物、リン酸、及びクエン酸のアルカリ金属塩から成る群から選ばれる、請求項17に記載の血球溶解試薬組成物。
- 前記少なくとも1の 4 級アンモニウム塩が、臭化テトラデシルトリメチルアンモニウムである、請求項17に記載の血球溶解試薬組成物。
- 前記有核血球が、有核赤血球及び白血球を含む、請求項17に記載の血球溶解試薬組成物。
- 赤血球を溶解し、かつ、有核血球を計測するための血球溶解試薬組成物であって、以下の:
(a) 以下の分子構造:
R 1 が、 12 〜 16 の炭素原子をもつアルキル、アルケニル又はアルキニル基であり、
R 2 、 R 3 及び R 4 が、 1 〜 4 の炭素原子をもつアルキル基であり、そして
X - が、塩化物又は臭化物アニオンである。}によって表される、少なくとも 1 の 4 級アンモニウム塩;
(b)6 〜 12 の炭素原子をもつアルキル基を有し、かつエチレン・オキサイドの数が 10 〜 50 の範囲内にあるエトキシル化アルキルフェノール;並びに
(c) 以下の分子構造:
R 1 -R 2 -(CH 2 CH 2 O) n -H
{式中、
R 1 が、 10 〜 22 の炭素原子をもつアルキル、アルケニル又はアルキニル基であり、
R 2 が、 -O- であり、そして
n が、 20 〜 35 である。}によって表されるエトキシル化アルコール;
の水性溶液からなり、
ここで、その pH が 2 〜 11 の範囲にある、前記血球溶解試薬組成物。 - 前記4級アンモニウム塩が臭化テトラデシルトリメチルアンモニウムである、請求項21に記載の血球溶解試薬組成物。
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