CN108489776A - 一种光学质控物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明为一种光学质控物及其制备方法，涉及白细胞模拟物，具体涉及可用于三分类或者五分类方法的白细胞模拟物。本发明还涉及制备白细胞模拟物的方法，其包括将血液进行预分离，溶血，快速收集高浓度白细胞，通过两步法固化白细胞，获得具有超过6个月以上有效期的白细胞模拟物。本发明还涉及包含所述白细胞模拟物的质控物、校准物以及包含所述白细胞模拟物、质控物或校准物的试剂盒。本发明解决了人血带入质控物的生物安全危害等问题，产品原材料能够方便获取和便于监管。

Description

一种光学质控物及其制备方法
技术领域
本发明属于生物检测领域，涉及质控物或校准物，并且具体涉及一种光学质控物或校准物及制备方法，具体涉及制备白细胞模拟物的方法，所制备的白细胞模拟物，包含上述白细胞模拟物的质控物或校准物，包含上述白细胞模拟物或质控物或校准物的试剂盒，上述白细胞模拟物在制备血液质控物或血液校准物或试剂盒中的用途，以及提高白细胞完整性的方法。
背景技术
血细胞分析仪是医院、学校、检验中心等进行血常规检查的必备仪器，现已广泛应用于世界各地。血细胞分析仪不仅提高了检测结果的准确性，而且提供了许多诊断指标，对于疾病的诊断与鉴别发挥了重要作用。
二十世纪五十年代美国科学家库尔特(W.H.Coulter)将其发明的电阻法计数粒子的技术应用于血细胞计数获得成功，其原理是根据阻抗原理，以电解质溶液中悬浮血细胞通过计数小孔时引起的阻抗变化为基础进行检测，对血细胞进行计数和体积测定。
我国到二十世纪八十年代开发了基于白细胞分类(三分类及五分类)的血细胞分析仪。血细胞分析仪的主要分类方式是根据白细胞种类进行划分，分为三分类血细胞分析仪和五分类血细胞分析仪。
三分类血细胞分析仪的主要原理为利用阻抗原理对血细胞进行分类。因此，适用于三分类血细胞分析仪质控物，其在使用性上较为通用。而对于五分类血细胞分析仪来说，虽然其是就白细胞给出五种细胞分类，但因为原理不同，五分类血细胞分析仪涉及多种原理，如阻抗、激光、射频、化学染色、荧光染色等。因此，在阻抗、激光技术、射频技术、化学染色、荧光染色等相关技术的选择上，五分类血细胞分析仪单独采用一种技术或者采用多种技术相匹配使用的分析技术，来对白细胞的五种类型进行分析。
因此，对于五分类血细胞分析仪使用的质控物，存在对应的匹配要求，从而五分类血细胞分析仪对白细胞模拟物的要求较高，这使得五分类质控物对于制备白细胞模拟物的技术要求远远高于三分类质控物。
现有血细胞分析仪质控物多使用人血作为血源，而人血在生物安全性上存在的各项传染病源的危险性。
现有五分类质控物的制备技术，最常见的制备方法有两种。
五分类质控物的第一种制备方法是通过收集人血或动物血的红细胞，进行处理固定后，组合成五分类白细胞模拟粒子，得到五分类质控物的白细胞模拟物；加入其它细胞配制成正常浓度的五分类质控物。例如，国内迈瑞的中国专利申请CN101561443A、美国专利号5,320,964和5,512,485提到的用红细胞处理后作为白细胞模拟物。
五分类质控物的第二种制备方法是将人血或动物血进行溶血处理，将血液里的红细胞和血小板溶解后，得到原始的白细胞，再对白细胞进行固定后，得到五分类质控物的白细胞模拟物；再加入其它细胞配制成正常浓度的五分类质控物。
对于五分类质控物的第一种制备方法，用红细胞模拟五分类白细胞的技术缺点在于：红细胞的细胞形态、细胞膜、细胞核、胞内浆液等等细胞特性都与白细胞的细胞特性差异较大，难以达到五分类血细胞分析仪的高度白细胞分类要求。因此，五分类质控物的第一种制备方法并不能真正适用于五分类血细胞分析仪。
而对于五分类质控物的第二种制备方法，在将红细胞和血小板溶解后得到原始白细胞的过程中，由于常规使用的一般性复杂溶血过程和固化过程不能有效保障白细胞的完整性和有效性，而最终导致五分类质控物产品的诸多不确定性，所得到的五分类质控物的稳定性在时间上通常少于3个月，甚至更短时间。因此，上述五分类质控物的两种制备方法并不能满足五分类血细胞分析仪对于五分类质控物的正常需求。
发明内容
发明概述
本发明涉及制备白细胞模拟物的方法，包括：A、采集血液，B、从血液收集富含白细胞的样品部分，C、从富含白细胞的样品部分分离白细胞，D、使用两步固化法固化白细胞获得白细胞模拟物。
本发明还涉及制备白细胞模拟物的方法，包括：A、采集血液，B、从血液收集富含白细胞的样品部分，C、从富含白细胞的样品部分分离白细胞，所述分离例如采用溶血剂对富含白细胞的样品部分进行溶血处理获得白细胞，任选地，所述溶血剂包含季铵盐、非离子表面活性剂；任选地，所述溶血剂包含氯化钠1-5g/L，季铵盐5-30g/L，非离子表面活性剂例如曲拉通0.01-0.1g/L，缓冲物质例如三羟甲基氨基甲烷0.1-2g/L，皂素0.1-0.5g/L，盐酸0.1-0.5g/L；任选地，溶血处理时间为5-10分钟，D、使用两步固化法固化白细胞获得白细胞模拟物。
本发明还涉及制备白细胞模拟物的方法，包括：A、采集血液，B、从血液收集富含白细胞的样品部分，C、从富含白细胞的样品部分分离白细胞，D、使用两步固化法固化白细胞获得白细胞模拟物，任选地，所述两步固化法包括采用低浓度固化剂的第一步短时间固化和采用高浓度固化剂的第二步长时间固化；任选地，第一步固化采用的低浓度固化剂包含低浓度醛类固化剂，例如所述低浓度固化剂包含氯化钠3-8g/L，硫酸钠8-12g/L，甲醛1-2％，第二步固化采用的高浓度固化剂包含高浓度醛类固化剂，例如所述高浓度固化剂包含氯化钠3-8g/L，硫酸钠8-12g/L，甲醛2-5％；任选地，第一步短时间固化的处理时间为2-5小时，第二步长时间固化的处理时间为48-96小时。
本发明还涉及采用上述任一项制备白细胞模拟物的方法制备得到的白细胞模拟物。
本发明还涉及质控物或校准物，其包含上述白细胞模拟物。
本发明还涉及试剂盒，其包含上述白细胞模拟物或质控物或校准物。
本发明还涉及上述白细胞模拟物在制备血液质控物或血液校准物或试剂盒中的用途，其中试剂盒包含所述白细胞模拟物或质控物或校准物。
本发明还涉及提高白细胞完整性的方法，包括采用溶血剂对血液细胞样品进行溶血处理，使用两步固化法固化白细胞获得白细胞模拟物。
本发明还涉及提高白细胞完整性的方法，包括采用溶血剂对血液细胞样品进行溶血处理，使用两步固化法固化白细胞获得白细胞模拟物；任选地，所述溶血剂包含季铵盐、非离子表面活性剂；任选地，所述溶血剂包含氯化钠1-5g/L，季铵盐5-30g/L，非离子表面活性剂例如曲拉通0.01-0.1g/L，缓冲物质例如三羟甲基氨基甲烷0.1-2g/L，皂素0.1-0.5g/L，盐酸0.1-0.5g/L；任选地，溶血处理时间为5-10分钟。
本发明还涉及提高白细胞完整性的方法，包括采用溶血剂对血液细胞样品进行溶血处理，使用两步固化法固化白细胞获得白细胞模拟物；任选地，所述两步固化法包括采用低浓度固化剂的第一步短时间固化和采用高浓度固化剂的第二步长时间固化；任选地，第一步固化采用的低浓度固化剂包含低浓度醛类固化剂，例如所述低浓度固化剂包含氯化钠3-8g/L，硫酸钠8-12g/L，甲醛1-2％，第二步固化采用的高浓度固化剂包含高浓度醛类固化剂，例如所述高浓度固化剂包含氯化钠3-8g/L，硫酸钠8-12g/L，甲醛2-5％；任选地，第一步短时间固化的处理时间为2-5小时，第二步长时间固化的处理时间为48-96小时。
附图说明
本发明采用以下附图来举例说明本发明的有益效果。应当理解的是，这些仅用于说明本发明的具体实施方案，并不意图限制本发明的范围。
图1是用桂林优利特医疗电子有限公司的五分类细胞分析仪URIT-5500测定狗原血的结果。
图2是用桂林优利特医疗电子有限公司的五分类细胞分析仪URIT-5500测定溶血前的狗血的结果。
图3是用桂林优利特医疗电子有限公司的五分类细胞分析仪URIT-5500测定溶血后的狗血的结果。
图4是用桂林优利特医疗电子有限公司的五分类细胞分析仪URIT-5500测定本发明的质控物的结果。
发明详述
本发明的一个目的是提供一种五分类质控物，其适用于利用光散射原理的血细胞分析仪，其也适用于采用阻抗原理三分类血细胞分析仪。
本发明的另一个目的是提供一种五分类质控物的制备方法，其通过对收集的血液(所述血液来源是在中国国家监管的市场上能够直接获取的动物血源)进行预分离后，进行特殊溶血，使得在最短时间内完整收集白细胞，同时在保证质量前提下，最大可能地收集大量的白细胞，避免繁杂过程中的白细胞损失，并且让收集到的白细胞能在最短控制时间进行特殊固化处理，得到的成品具有超过6个月以上的有效期的稳定性。
本发明采用均为市场合规收集到的动物血源，解决了采用人血作为血源而带入质控物或校准物的危害生物安全等问题，制备质控物或校准物所需的产品原材料能够方便获取并且便于监管。
1、将采集到的血源，在短时间例如1-2小时内，运回实验室，用离心机低速例如2000-3500r/min短时间例如5-15分钟离心，收集细胞血浆分层线上下约2厘米细胞样品即富含白细胞的样品部分。所述富含白细胞的样品部分中，白细胞浓度高达2×1010-2×1011/L，红细胞浓度高达6×1012-1×1013/L。
2、采集到的高浓度白细胞，同样含有少量红细胞，采用溶血剂溶血，同样会对白细胞产生影响。因此，需要采用特殊溶血剂进行溶解，达到使得血液里的红细胞和血小板溶解，并且仅使白细胞的细胞膜穿孔，而不溶解白细胞的细胞膜，保证白细胞的细胞膜的形态，使得光散射原理下分析仪能够正常识别白细胞。
3、溶血处理5-15分钟后离心，倒掉上清液(富含红细胞释放的血红蛋白及其红细胞膜)，保留高纯度白细胞。
4、固化白细胞，最大程度保证白细胞完整性。因此，不能采用导致白细胞受到破坏的高强度固化，而是采用低浓度短时间第一步固化，而后进行第二步高浓度长时间强固化，并且因采用特殊打孔溶血，样本内已无红细胞，因而不必担心有红细胞干扰固化。
因此，在一方面，本发明涉及制备白细胞模拟物的方法，包括：A、采集血液，B、从血液收集富含白细胞的样品部分，C、从富含白细胞的样品部分分离白细胞，D、使用两步固化法固化白细胞获得白细胞模拟物。
在实施方案中，本发明涉及制备白细胞模拟物的方法，包括：A、采集血液，所述血液例如来自动物，所述动物例如选自家畜动物或实验动物，所述家畜动物例如选自兔、狗、羊、猪、牛、马，所述实验动物例如选自小鼠、大鼠；B、从血液收集富含白细胞的样品部分，所述收集例如通过离心弃去上清后收集血浆分层线上下富含白细胞的样品部分；C、从富含白细胞的样品部分分离白细胞，所述分离例如采用溶血剂对富含白细胞的样品部分进行溶血处理获得白细胞；D、使用两步固化法固化白细胞获得白细胞模拟物。
在另一方面，本发明还涉及制备白细胞模拟物的方法，包括：A、采集血液，B、从血液收集富含白细胞的样品部分，C、从富含白细胞的样品部分分离白细胞，所述分离例如采用溶血剂对富含白细胞的样品部分进行溶血处理获得白细胞，任选地，所述溶血剂包含季铵盐、非离子表面活性剂；任选地，所述溶血剂包含氯化钠1-5g/L，季铵盐5-30g/L，非离子表面活性剂例如曲拉通0.01-0.1g/L，缓冲物质例如三羟甲基氨基甲烷0.1-2g/L，皂素0.1-0.5g/L，盐酸0.1-0.5g/L；任选地，溶血处理时间为5-10分钟，D、使用两步固化法固化白细胞获得白细胞模拟物。
在实施方案中，本发明涉及制备白细胞模拟物的方法，包括：A、采集血液，所述血液例如来自动物，所述动物例如选自家畜动物或实验动物，所述家畜动物例如选自兔、狗、羊、猪、牛、马，所述实验动物例如选自小鼠、大鼠；B、从血液收集富含白细胞的样品部分，所述收集例如通过离心弃去上清后收集血浆分层线上下富含白细胞的样品部分；C、从富含白细胞的样品部分分离白细胞，所述分离例如采用溶血剂对富含白细胞的样品部分进行溶血处理获得白细胞，任选地，所述溶血剂包含季铵盐、非离子表面活性剂；任选地，所述溶血剂包含氯化钠1-5g/L，季铵盐5-30g/L，非离子表面活性剂例如曲拉通0.01-0.1g/L，缓冲物质例如三羟甲基氨基甲烷0.1-2g/L，皂素0.1-0.5g/L，盐酸0.1-0.5g/L；任选地，溶血处理时间为5-10分钟；D、使用两步固化法固化白细胞获得白细胞模拟物。
在又一方面，本发明还涉及制备白细胞模拟物的方法，包括：A、采集血液，B、从血液收集富含白细胞的样品部分，C、从富含白细胞的样品部分分离白细胞，D、使用两步固化法固化白细胞获得白细胞模拟物，任选地，所述两步固化法包括采用低浓度固化剂的第一步短时间固化和采用高浓度固化剂的第二步长时间固化；任选地，第一步固化采用的低浓度固化剂包含低浓度醛类固化剂，例如所述低浓度固化剂包含氯化钠3-8g/L，硫酸钠8-12g/L，甲醛1-2％，第二步固化采用的高浓度固化剂包含高浓度醛类固化剂，例如所述高浓度固化剂包含氯化钠3-8g/L，硫酸钠8-12g/L，甲醛2-5％；任选地，第一步短时间固化的处理时间为2-5小时，第二步长时间固化的处理时间为48-96小时。
在实施方案中，本发明还涉及制备白细胞模拟物的方法，包括：A、采集血液，B、从血液收集富含白细胞的样品部分，C、从富含白细胞的样品部分分离白细胞，所述分离例如采用溶血剂对富含白细胞的样品部分进行溶血处理获得白细胞，任选地，所述溶血剂包含季铵盐、非离子表面活性剂；任选地，所述溶血剂包含氯化钠1-5g/L，季铵盐5-30g/L，非离子表面活性剂例如曲拉通0.01-0.1g/L，缓冲物质例如三羟甲基氨基甲烷0.1-2g/L，皂素0.1-0.5g/L，盐酸0.1-0.5g/L；任选地，溶血处理时间为5-10分钟，D、使用两步固化法固化白细胞获得白细胞模拟物，任选地，所述两步固化法包括采用低浓度固化剂的第一步短时间固化和采用高浓度固化剂的第二步长时间固化；任选地，第一步固化采用的低浓度固化剂包含低浓度醛类固化剂，例如所述低浓度固化剂包含氯化钠3-8g/L，硫酸钠8-12g/L，甲醛1-2％，第二步固化采用的高浓度固化剂包含高浓度醛类固化剂，例如所述高浓度固化剂包含氯化钠3-8g/L，硫酸钠8-12g/L，甲醛2-5％；任选地，第一步短时间固化的处理时间为2-5小时，第二步长时间固化的处理时间为48-96小时。
在实施方案中，本发明涉及制备白细胞模拟物的方法，包括：A、采集血液，所述血液例如来自动物，所述动物例如选自家畜动物或实验动物，所述家畜动物例如选自兔、狗、羊、猪、牛、马，所述实验动物例如选自小鼠、大鼠；B、从血液收集富含白细胞的样品部分，所述收集例如通过离心弃去上清后收集血浆分层线上下富含白细胞的样品部分；C、从富含白细胞的样品部分分离白细胞，所述分离例如采用溶血剂对富含白细胞的样品部分进行溶血处理获得白细胞，任选地，所述溶血剂包含季铵盐、非离子表面活性剂；任选地，所述溶血剂包含氯化钠1-5g/L，季铵盐5-30g/L，非离子表面活性剂例如曲拉通0.01-0.1g/L，缓冲物质例如三羟甲基氨基甲烷0.1-2g/L，皂素0.1-0.5g/L，盐酸0.1-0.5g/L；任选地，溶血处理时间为5-10分钟；D、使用两步固化法固化白细胞获得白细胞模拟物，任选地，所述两步固化法包括采用低浓度固化剂的第一步短时间固化和采用高浓度固化剂的第二步长时间固化；任选地，第一步固化采用的低浓度固化剂包含低浓度醛类固化剂，例如所述低浓度固化剂包含氯化钠3-8g/L，硫酸钠8-12g/L，甲醛1-2％，第二步固化采用的高浓度固化剂包含高浓度醛类固化剂，例如所述高浓度固化剂包含氯化钠3-8g/L，硫酸钠8-12g/L，甲醛2-5％；任选地，第一步短时间固化的处理时间为2-5小时，第二步长时间固化的处理时间为48-96小时。
在另一方面，本发明还涉及采用上述任一项制备白细胞模拟物的方法制备得到的白细胞模拟物。
在又一方面，本发明还涉及质控物或校准物，其包含上述白细胞模拟物。
在另一方面，本发明还涉及试剂盒，其包含上述白细胞模拟物或质控物或校准物。
在又一方面，本发明还涉及上述白细胞模拟物在制备血液质控物或血液校准物或试剂盒中的用途，其中试剂盒包含所述白细胞模拟物或质控物或校准物。
在另一方面，本发明还涉及提高白细胞完整性的方法，包括采用溶血剂对血液细胞样品进行溶血处理，使用两步固化法固化白细胞获得白细胞模拟物。
在又一方面，本发明还涉及提高白细胞完整性的方法，包括采用溶血剂对血液细胞样品进行溶血处理，使用两步固化法固化白细胞获得白细胞模拟物；任选地，所述溶血剂包含季铵盐、非离子表面活性剂；任选地，所述溶血剂包含氯化钠1-5g/L，季铵盐5-30g/L，非离子表面活性剂例如曲拉通0.01-0.1g/L，缓冲物质例如三羟甲基氨基甲烷0.1-2g/L，皂素0.1-0.5g/L，盐酸0.1-0.5g/L；任选地，溶血处理时间为5-10分钟。
在另一方面，本发明还涉及提高白细胞完整性的方法，包括采用溶血剂对血液细胞样品进行溶血处理，使用两步固化法固化白细胞获得白细胞模拟物；任选地，所述两步固化法包括采用低浓度固化剂的第一步短时间固化和采用高浓度固化剂的第二步长时间固化；任选地，第一步固化采用的低浓度固化剂包含低浓度醛类固化剂，例如所述低浓度固化剂包含氯化钠3-8g/L，硫酸钠8-12g/L，甲醛1-2％，第二步固化采用的高浓度固化剂包含高浓度醛类固化剂，例如所述高浓度固化剂包含氯化钠3-8g/L，硫酸钠8-12g/L，甲醛2-5％；任选地，第一步短时间固化的处理时间为2-5小时，第二步长时间固化的处理时间为48-96小时。
在实施方案中，本发明还涉及提高白细胞完整性的方法，包括采用溶血剂对血液细胞样品进行溶血处理，使用两步固化法固化白细胞获得白细胞模拟物；任选地，所述溶血剂包含季铵盐、非离子表面活性剂；任选地，所述溶血剂包含氯化钠1-5g/L，季铵盐5-30g/L，非离子表面活性剂例如曲拉通0.01-0.1g/L，缓冲物质例如三羟甲基氨基甲烷0.1-2g/L，皂素0.1-0.5g/L，盐酸0.1-0.5g/L；任选地，溶血处理时间为5-10分钟；任选地，所述两步固化法包括采用低浓度固化剂的第一步短时间固化和采用高浓度固化剂的第二步长时间固化；任选地，第一步固化采用的低浓度固化剂包含低浓度醛类固化剂，例如所述低浓度固化剂包含氯化钠3-8g/L，硫酸钠8-12g/L，甲醛1-2％，第二步固化采用的高浓度固化剂包含高浓度醛类固化剂，例如所述高浓度固化剂包含氯化钠3-8g/L，硫酸钠8-12g/L，甲醛2-5％；任选地，第一步短时间固化的处理时间为2-5小时，第二步长时间固化的处理时间为48-96小时。
在又一方面，本发明还涉及溶血剂，所述溶血剂包含季铵盐、非离子表面活性剂；任选地，所述溶血剂包含氯化钠1-5g/L，季铵盐5-30g/L，非离子表面活性剂例如曲拉通0.01-0.1g/L，缓冲物质例如三羟甲基氨基甲烷0.1-2g/L，皂素0.1-0.5g/L，盐酸0.1-0.5g/L。
本发明的有益效果：
本发明收集到高纯度白细胞，且图形变化较少，有效期长，制备后180天的数据显示本发明的质控物仍然保持稳定。本发明采用市场动物血(狗血、鼠血、猪血、牛血等)作为原材料，收集渠道受市场监管，杜绝人血生物安全性问题的引入。本发明的质控物适用于市场上采用光散射原理的任何五分类血细胞分析仪，也适用于采用阻抗原理的任何三分类血细胞分析仪。
本领域技术人员应当理解的是，本发明所保护的范围并不会因为本发明的某一项技术方案能够实现或者完全实现某一项本发明明示或暗示的有益效果但不能实现或者完全实现本发明明示或暗示的另一项有益效果而被不恰当地限制。本领域技术人员还应当理解的是，在本发明的保护范围内，任一项产品、方法或者用途只要获得了任意一项本发明明示或暗示的有益效果或者任选地本发明明示或暗示的有益效果的组合即表示所述产品、方法或者用途解决了本发明想要解决的技术问题，实现了相应的技术效果。
以下通过相关定义内容进一步描述本发明。应当理解的是，这样的定义不应当用于不恰当地限制本发明的保护范围。
定义
血细胞分析仪
血细胞分析仪，又称血液分析仪或血球分析仪，基于白细胞分类，血细胞分析仪可以分为三分类血细胞分析仪和五分类血细胞分析仪。
三分类血细胞分析仪
三分类血细胞分析仪的主要原理为利用阻抗原理对血细胞进行分类。代表性三分类血细胞分析仪例如但不限于希森美康公司的KX-21。
五分类血细胞分析仪
五分类血细胞分析仪涉及多种原理，如阻抗、激光、射频、化学染色、荧光染色等。代表性五分类血细胞分析仪例如但不限于桂林优利特医疗电子有限公司的五分类细胞分析仪URIT-5500。
标准物
标准物或标准品是一种已经确定了具有一个或多个足够均匀的特性值的物质或材料，作为分析测量检测领域的“量具”，用于校准分析测量装置、评价分析测量方法、测量物质或材料特性值、在生产或检测过程中进行质量控制等。标准位置具有三个显著特点：(1)具有特性量值的准确性、均匀性、稳定性；(2)量值具有传递性；(3)实物形式的计量标准。
质控物
质控物，又称质控品或校准物，是一种稳定的物质、仪器或程序，用于检查分析仪器或方法的性能。当物质用于检查分析仪器或方法当前性能的常规测试时，它的分析特性必须与患者样本的分析特性相似。血液质控物主要用于对血液分析仪进行质量控制，目的在于检测血液分析仪检测结果的精密度，保证常规检测批间和批内检测结果的一致性。良好的质量控制是血液分析仪检测结果准确性的重要保证，也是不同血液分析仪尤其是不同检测单位之间互相承认检测结果的基础。
均匀性
均匀性是物质的某些特性具有相同组分或相同结构的状态。计量方法或分析仪器的精密度(标准偏差)可以用来衡量标准物质的均匀性。通过测量取自不同包装单元(例如瓶、包等)或取自同一包装单元的特定大小的样品，测量结果落在规定不确定度范围内，则可认为标准物质对指定的特性量值是均匀的。
稳定性
在特定的时间范围和贮存条件下，标准物质的特性量值保持在规定范围内的能力。该时间范围越长，表明标准物质的稳定性越好。
长期稳定性
在规定的贮存条件下标准物质的特性量值的稳定性。
预期结果
检测产品制造商或检测过程或检测服务提供商在技术指标、使用说明等信息中给出的关于检测产品、检测过程或检测服务使用的目标检测结果。在血细胞分析仪上测定相应质控物，检测结果应符合预期结果。
有效期
质控物或校准物的有效期是质控物或校准物在规定的贮存条件下在规定的时间内质量保持稳定。取有效期末的质控物或校准物进行检测，检测结果应符合预期结果。
溶血
本发明的溶血是指对人血或动物血进行溶血处理，将血液里的红细胞和血小板溶解后，得到原始的白细胞。通过本发明的溶血，能够在最短时间内完整收集白细胞，同时在保证质量前提下，最大可能地收集大量的白细胞，避免繁杂过程中的白细胞损失。通过本发明的溶血，使得血液里的红细胞和血小板溶解，并且仅使白细胞的细胞膜穿孔，而不溶解白细胞的细胞膜，保证白细胞的细胞膜的形态，使得血细胞分析仪能够正常识别白细胞。
溶血剂
本发明采用溶血剂对血液进行溶血处理。本发明的溶血剂包含季铵盐、非离子表面活性剂；任选地，所述溶血剂包含氯化钠1-5g/L，季铵盐5-30g/L，非离子表面活性剂例如曲拉通0.01-0.1g/L，缓冲物质例如三羟甲基氨基甲烷0.1-2g/L，皂素0.1-0.5g/L，盐酸0.1-0.5g/L。任选地，本发明采用溶血剂对血液的溶血处理时间为5-10分钟。
固化
本发明的固化是指固化白细胞，最大程度保证白细胞完整性。本发明的固化采用低浓度短时间第一步固化，而后进行第二步高浓度长时间强固化的两步固化法。
固化剂
本发明使用的固化剂包括但不限于醛类固化剂。任选地，所述固化剂包含氯化钠、硫酸钠和甲醛。任选地，低浓度固化剂包含氯化钠3-8g/L，硫酸钠8-12g/L，甲醛1-2％。任选地，高浓度固化剂包含氯化钠3-8g/L，硫酸钠8-12g/L，甲醛2-5％。
两步固化法
为了固化白细胞，并且最大程度保证白细胞完整性，本发明没有采用导致白细胞受到破坏的高强度固化，而是采用了两步固化法，即低浓度短时间第一步固化，而后进行第二步高浓度长时间强固化，并且因采用特殊打孔溶血，样本内已无红细胞，因而不必担心有红细胞干扰固化。因此，本发明采取的是采用低浓度固化剂的第一步短时间固化和采用高浓度固化剂的第二步长时间固化的两步固化法。本发明的两步固化法采用的固化剂包括但不限于醛类固化剂。任选地，所述固化剂包含氯化钠、硫酸钠和甲醛。任选地，低浓度固化剂包含氯化钠3-8g/L，硫酸钠8-12g/L，甲醛1-2％。任选地，高浓度固化剂包含氯化钠3-8g/L，硫酸钠8-12g/L，甲醛2-5％。任选地，本发明的两步固化法包括采用低浓度固化剂的第一步短时间固化和采用高浓度固化剂的第二步长时间固化；任选地，第一步固化采用的低浓度固化剂包含低浓度醛类固化剂，例如所述低浓度固化剂包含氯化钠3-8g/L，硫酸钠8-12g/L，甲醛1-2％，第二步固化采用的高浓度固化剂包含高浓度醛类固化剂，例如所述高浓度固化剂包含氯化钠3-8g/L，硫酸钠8-12g/L，甲醛2-5％；任选地，第一步短时间固化的处理时间为2-5小时，第二步长时间固化的处理时间为48-96小时。
短时间
本文所使用的术语“短时间”是指相对于“长时间”而言，在操作过程中该操作步骤持续的时间相对较短。例如血液运输过程中，0.5-2.5小时可以认为是“短时间”，例如0.5-1小时、1-1.5小时、1.5-2小时、2-2.5小时，或者，例如0.5-1.5小时、1-2小时、1.5-2.5小时，或者，上述时间范围内的任意时间，例如0.5小时、1小时、1.5小时、2小时、2.5小时，或者比上述时间或时间范围略长或略短的时间。本领域技术人员知晓这些时间变化的程度，并且知晓根据需要如何调整相应的时间。例如离心时间，5-15min可以认为是“短时间”，例如5-10min、8-12min、10-15min，或者5-8min、6-9min、7-10min、8-11min、9-12min、10-13min、11-14min、12-15min，或者，上述时间范围内的任意时间，例如5min、6min、7min、8min、9min、10min、11min、12min、13min、14min、15min，或者比上述时间或时间范围略长或略短的时间。本领域技术人员知晓这些时间变化的程度，并且知晓根据需要如何调整相应的时间。例如固化白细胞过程中，1-5小时可以认为是“短时间”，例如1-1.5小时、1.5-2小时、2-2.5小时、2.5-3小时、3-3.5小时、3.5-4小时、4-4.5小时、4.5-5小时，或者，例如1-2小时、2-3小时、3-4小时、4-5小时，或者，例如1-2小时、1-3小时、1-4小时、1-5小时，或者，例如2-3小时、2-4小时、2-5小时，或者，上述时间范围内的任意时间，例如1小时、1.5小时、2小时、2.5小时、3小时、3.5小时、4小时、4.5小时、5小时，或者比上述时间或时间范围略长或略短的时间。本领域技术人员知晓这些时间变化的程度，并且知晓根据需要如何调整相应的时间。
长时间
本文所使用的术语“长时间”是指相对于“短时间”而言，在操作过程中该操作步骤持续的时间相对较长。例如固化白细胞过程中，24-96小时可以认为是“长时间”，例如24-36小时、36-48小时、48-60小时、60-72小时、72-84小时、84-96小时，或者，例如24-48小时、36-60小时、48-72小时、60-84小时、72-96小时，或者，例如24-96小时、48-96小时，或者，上述时间范围内的任意时间，例如24小时、36小时、48小时、60小时、72小时、84小时、96小时，或者，例如24小时、25小时、26小时、27小时、28小时、29小时、30小时、31小时、32小时、33小时、34小时、35小时、36小时、37小时、38小时、39小时、40小时、41小时、42小时、43小时、44小时、45小时、46小时、47小时、48小时、49小时、50小时、51小时、52小时、53小时、54小时、55小时、56小时、57小时、58小时、59小时、60小时、61小时、62小时、63小时、64小时、65小时、66小时、67小时、68小时、69小时、70小时、71小时、72小时、73小时、74小时、75小时、76小时、77小时、78小时、79小时、80小时、81小时、82小时、83小时、84小时、85小时、86小时、87小时、88小时、89小时、90小时、91小时、92小时、93小时、94小时、95小时、96小时，或者比上述时间或时间范围略长或略短的时间。本领域技术人员知晓这些时间变化的程度，并且知晓根据需要如何调整相应的时间。
离心机转速
离心机转速的划分线为10000r/min，离心机转速≥10000r/min的称为高速离心机；离心机转速<10000r/min的称为低速离心机。为了保证细胞完整，本发明的离心采用低转速即可，例如1000-4000r/min、1500-3500r/min、2000-3000r/min，或者，例如1000-3500r/min、2000-3500r/min、3000-3500r/min，或者，例如2000-4000r/min、3000-4000r/min，或者，所述范围中任意值的转速，例如1000r/min、1500r/min、2000r/min、2500r/min、3000r/min、3500r/min、4000r/min，或者比上述范围或值略高或略低的转速。本领域技术人员知晓这些转速变化的程度，并且知晓根据需要如何调整相应的转速。
模拟物
现代血细胞分析仪大部分是通过制造商制备的标准质控物进行室内或室间质量控制的，血细胞分析仪质控物是模拟全血的，因此需要分别制备血液组分的模拟物，例如红细胞模拟物、白细胞模拟物、血小板模拟物等。本发明的白细胞模拟物是通过获得市场合规收集到的动物血源作为血液来源，经溶血处理获得高浓度白细胞，再经过固化白细胞并且最大程度保证白细胞完整性而得到的白细胞模拟物。为了最大程度保证白细胞完整性，本发明采用低浓度短时间第一步固化，而后进行第二步高浓度长时间强固化的两步固化法来对白细胞进行固化处理，最终获得具有较长稳定性时间间隔的白细胞模拟物。通过本发明的白细胞模拟物获得的质控物产品具有稳定性长的特点，有效期可长达180天，甚至更长。
醛类固定剂
本发明的醛类固定剂选自但不限于甲醛、乙醛、多聚甲醛及戊二醛。任选地，本发明的两步固化法包括采用低浓度固化剂的第一步短时间固化和采用高浓度固化剂的第二步长时间固化；任选地，第一步固化采用的低浓度固化剂包含低浓度醛类固化剂，例如所述低浓度固化剂包含氯化钠3-8g/L，硫酸钠8-12g/L，甲醛1-2％，第二步固化采用的高浓度固化剂包含高浓度醛类固化剂，例如所述高浓度固化剂包含氯化钠3-8g/L，硫酸钠8-12g/L，甲醛2-5％。任选地，所述低浓度固化剂包含1-2％的甲醛，例如，1-1.5％的甲醛、1.5-2％的甲醛，例如所述范围中任意值的甲醛，例如1％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％、2％的甲醛，或者比上述范围或值略高或略低的甲醛。任选地，所述高浓度固化剂包含2-5％的甲醛，例如2-2.5％的甲醛、2.5-3％的甲醛、3-3.5％的甲醛、3.5-4％的甲醛、4-4.5％的甲醛、4.5-5％的甲醛，或者，例如2-3％、3-4％的甲醛、4-5％的甲醛，例如所述范围中任意值的甲醛，例如2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％的甲醛，或者比上述范围或值略高或略低的甲醛。
具体实施方式
为了促进对本发明的理解，以下将参考某些实施方式，并且将使用特定语言来描述本发明。然而，应当理解的是，这些具体实施方式不意图限制本发明的范围。所描述的实施方式中的任何改变和进一步的修改，以及本发明的任何进一步应用，均为本领域技术人员通常会想到的。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中，所述百分含量如无特别说明，均为质量百分含量。
实施例1
五分类质控物的制备
在本实施例中，本发明的五分类质控物如下制备：
1、宠物医院取狗血，原血采用桂林优利特医疗电子有限公司的五分类细胞分析仪URIT-5500进行分析，分析结果见图1；
2、3000r/min、5min离心，去掉上清，收集细胞血浆分层线上下约2厘米细胞样品。经分析，白细胞浓度测试高达2.103×1010/L，红细胞浓度高达6.77×1012/L(图2)；
3、倒入溶血剂(氯化钠4g/L，季铵盐5g/L，曲拉通0.07g/L，三羟甲基氨基甲烷1.5g/L，皂素0.5g/L，盐酸0.5g/L)溶解，10分钟后，离心，去掉上清。经分析，白细胞测试为5.284×1010/L，红细胞残留3×107/L(图3)；
4、加入固化剂(氯化钠4g/L，硫酸钠9g/L，甲醛1.5％)，放置4小时，离心，去掉上清；
5、加入固化剂(氯化钠4g/L，硫酸钠9g/L，甲醛3.5％)，放置72小时(3天)，离心，去掉上清，加入稀释液，得到高浓度白细胞，白细胞浓度为9.027×1010/L；
6、加入其它细胞配制得到正常浓度的五分类质控物(图4)，观察至少半年。
实施例2
将实施例1得到五分类质控物在存放的不同时间取出，上机检测。检测机器为希森美康公司的KX-21(三分类全血细胞分析仪)、桂林优利特医疗电子有限公司的URIT-5500(五分类全血细胞分析仪)，检测结果如表1、表2所示。其中WBC表示白细胞数(×109/L)，RBC表示红细胞数(×1012/L)，HGB表示血红蛋白含量(g/L)，MCV表示红细胞平均体积(fL)，PLT表示血小板数(×109/L)，NEU表示嗜中性粒细胞百分数，LY表示淋巴细胞百分数，MO表示单核细胞百分数，EOS表示嗜酸性粒细胞百分数，BASO表示嗜碱性粒细胞百分数。
表1 质控物稳定性检测结果(KX-21)
测试日期 样品天数 WBC RBC HGB MCV PLT
×109/L ×1012/L g/L fL ×109/L
15-5-25 11 10.2 3.91 78 61.9 140
15-5-26 12 10.2 3.91 77 62.5 138
15-5-29 15 10.0 3.92 79 61.3 142
15-6-2 19 10.1 3.92 79 63.1 140
15-6-6 23 10.2 3.90 78 62.4 139
15-6-11 28 10.1 3.92 79 64.6 142
15-6-15 32 10.2 3.91 78 64.0 142
15-6-19 36 10.4 3.94 79 63.1 143
15-6-26 43 10.0 3.97 77 62.9 143
15-7-1 48 10.1 3.97 76 62.0 141
15-7-4 51 10.4 3.98 78 62.5 141
15-7-8 55 10.3 3.96 78 64.0 142
15-7-10 57 10.3 3.97 79 63.2 142
15-7-14 61 10.1 3.98 78 62.3 141
15-7-17 64 10.2 3.98 78 61.7 146
15-7-24 71 10.2 4.03 80 61.3 142
15-7-28 75 10.3 4.01 80 62.3 151
15-7-30 77 10.7 4.05 81 61.2 142
15-8-7 85 10.0 3.99 80 61.3 143
15-9-18 127 10.4 4.05 79 59.0 144
15-9-24 133 10.1 4.05 78 59.2 151
15-10-10 149 10.3 4.03 80 60.6 146
15-10-12 151 10.2 4.03 79 60.0 146
15-10-23 162 10.3 4.03 79 60.2 145
15-10-26 165 10.2 4.03 79 60.0 146
15-11-3 173 10.2 4.04 79 59.8 146
15-11-6 176 10.2 4.03 79 60.0 147
15-11-12 182 10.2 4.03 79 60.1 146
表2 质控物稳定性检测结果(URIT-5500)
测试日期 天数 WBC NEU LY MO EOS BASO RBC HGB MCV PLT
×109/L ％ ％ ％ ％ ％ ×1012/L g/L fL ×109/L
15-5-25 11 9.6 58.3 30.8 8.6 2.4 0.1 3.79 77 65.9 205
15-5-26 12 9.6 59.1 30.6 7.9 2.2 0.1 3.85 77 65.8 199
15-5-28 15 9.5 59.1 30.2 8.1 2.4 0.1 3.84 78 65.2 207
15-6-2 19 9.4 59.1 30.0 8.7 1.9 0.1 3.79 76 64.4 202
15-6-6 23 9.5 58.5 30.4 8.6 2.5 0.1 3.75 78 64.6 202
15-6-11 28 9.6 58.5 29.9 9.5 2.0 0.1 3.77 78 66.8 194
15-6-15 32 9.5 59.4 29.7 8.8 2.0 0.1 3.80 78 66.3 203
15-6-19 36 9.6 58.8 29.9 8.4 2.8 0.1 3.81 77 67.0 192
15-6-26 43 9.9 58.3 30.0 8.6 3.1 0.1 3.81 78 66.8 195
15-7-1 48 9.7 59.3 31.4 7.7 1.6 0.1 3.76 78 67.3 199
15-7-4 51 9.9 57.7 29.0 9.2 4.0 0.1 3.76 80 67.3 198
15-7-8 55 9.7 59.5 29.2 8.4 2.7 0.2 3.80 79 68.3 198
15-7-14 61 9.9 57.9 30.2 9.2 2.5 0.2 3.78 79 68.2 203
15-7-17 64 9.7 58.5 29.1 8.7 3.5 0.1 3.83 79 68.3 193
15-7-22 69 9.8 59.0 28.9 8.9 3.1 0.1 3.74 79 69.0 197
15-7-28 75 10 57.5 28.8 8.8 4.7 0.2 3.83 80 67.9 204
15-7-30 77 10.3 57.4 28.3 8.6 5.5 0.1 3.88 82 66.9 210
15-8-6 84 9.8 58.6 29.2 8.5 3.6 0.2 3.73 81 67.5 211
15-8-18 96 9.4 58.1 29.6 9.1 3.2 0.2 3.75 80 67.2 214
15-8-20 98 9.4 57.2 30.1 7.9 4.7 0.1 3.75 79 67.7 215
15-9-9 118 9.4 57.2 30.6 7.5 4.4 0.3 3.78 79 67.3 212
15-10-10 149 9.4 56.9 30.8 7.7 4.4 0.2 3.82 79 67.1 213
15-11-12 182 9.6 57.2 30.6 8.0 3.9 0.3 3.78 79 67.4 218
在实施例1所制备的质控物制备后的第11、12、15、19、23、28、32、36、43、48、51、55、61、64、69、75、77、84、96、98、118、149、182天，采用桂林优利特医疗电子有限公司的五分类细胞分析仪URIT-5500对本发明的五分类质控物的检测显示(参见表2)，该质控物的白细胞数的机器检测结果一直稳定在9.66×109/L左右，其中白细胞中的嗜中性粒细胞百分数稳定在58.30％左右，淋巴细胞百分数稳定在29.88％左右，单核细胞百分数稳定在8.50％左右，嗜酸性粒细胞百分数稳定在3.18％左右，嗜碱性粒细胞百分数稳定在0.14％左右；该质控物的红细胞数的机器检测结果一直稳定在3.79×1012/L左右，血红蛋白含量的机器检测结果稳定在78.70g/L左右，红细胞平均体积的机器检测结果稳定在66.97fL左右，血小板数的机器检测结果稳定在2.04×1011/L左右。
以上结果表明本发明实施例1所制备的五分类质控物的有效期长，稳定性优异，在制备后180天的数据分析结果显示本发明的五分类质控物仍然保持稳定。
在实施例1所制备的质控物制备后的第11、12、15、19、23、28、32、36、43、48、51、55、57、61、64、71、75、77、85、127、133、149、151、162、165、173、176、182天，采用希森美康公司的KX-21三分类全血细胞分析仪对本发明的五分类质控物的检测显示(参见表1)，该质控物的白细胞数的机器检测结果一直稳定在1.02×1010/L左右，红细胞数的机器检测结果稳定在3.98×1012/L左右，血红蛋白含量的机器检测结果稳定在78.68g/L左右，红细胞平均体积的机器检测结果稳定在61.66fL左右，血小板数的机器检测结果稳定在1.43×1011/L左右。
以上结果表明本发明实施例1所制备的五分类质控物不仅有效期长、稳定性优异，在制备后180天的数据分析结果显示其在三分类血细胞分析仪中的检测结果也仍然保持稳定，而且显示本发明的五分类质控物很好地适用于三分类血细胞分析仪。
此外，发明人的数据显示，在超过180天之后，本发明的质控物无论是在五分类血细胞分析仪还是在三分类血细胞分析仪中均依旧保持优异的稳定性。
实施例3
采用市场上获取的小鼠原血、大鼠原血、兔原血、狗原血、羊原血、猪原血、牛原血、马原血按照实施例1的制备步骤分别制得相应的五分类质控物，通过三分类血细胞分析仪和五分类血细胞分析仪均分别得到具有与实施例2类似的优异的稳定性的检测结果。
这表明本发明的制备白细胞模拟物的方法适用于各种动物血源，能够制得稳定性优异的质控物或校准物，本发明的制备白细胞模拟物的方法能够提高白细胞完整性，最大程度保证最终质控物或校准物产品中白细胞的完整性。
本文提供的任何和所有实施例或示例性语言的使用仅旨在更好地说明本发明，而不对本发明的范围构成限制，除非另有要求。说明书中的语言不应被解释为指示任何未要求保护的元素对于实施本发明是必要的。
本说明书中引用的所有出版物和专利申请通过引用并入本文，如同每个单独的出版物或专利申请被具体地和单独地指明通过引用并入。此外，本文所述的任何理论、机制、证明或发现旨在进一步增强对本发明的理解，并且不意图以任何方式将本发明限制到这样的理论、机制、证明或发现。尽管已经在附图和前面的描述中详细地示出和描述了本发明，但是本发明应当被认为是说明性的而不是限制性的。

Claims (10)

1.制备白细胞模拟物的方法，包括：
A、采集血液，所述血液例如来自动物，所述动物例如选自家畜动物或实验动物，所述家畜动物例如选自兔、狗、羊、猪、牛、马，所述实验动物例如选自小鼠、大鼠；
B、从血液收集富含白细胞的样品部分，所述收集例如通过离心弃去上清后收集血浆分层线上下富含白细胞的样品部分；
C、从富含白细胞的样品部分分离白细胞，所述分离例如采用溶血剂对富含白细胞的样品部分进行溶血处理获得白细胞；
D、使用两步固化法固化白细胞获得白细胞模拟物。
2.根据权利要求1所述的方法，其中C步骤中的溶血剂包含季铵盐、非离子表面活性剂；任选地，所述溶血剂包含氯化钠1-5g/L，季铵盐5-30g/L，非离子表面活性剂例如曲拉通0.01-0.1g/L，缓冲物质例如三羟甲基氨基甲烷0.1-2g/L，皂素0.1-0.5g/L，盐酸0.1-0.5g/L；任选地，C步骤的处理时间为5-10分钟。
3.根据权利要求1或2的方法，其中D步骤中的两步固化法包括采用低浓度固化剂的第一步短时间固化和采用高浓度固化剂的第二步长时间固化；任选地，第一步固化采用的低浓度固化剂包含低浓度醛类固化剂，例如所述低浓度固化剂包含氯化钠3-8g/L，硫酸钠8-12g/L，甲醛1-2％，第二步固化采用的高浓度固化剂包含高浓度醛类固化剂，例如所述高浓度固化剂包含氯化钠3-8g/L，硫酸钠8-12g/L，甲醛2-5％；任选地，第一步短时间固化的处理时间为2-5小时，第二步长时间固化的处理时间为48-96小时。
4.由权利要求1-3中任一项所述的方法制备得到的白细胞模拟物。
5.质控物或校准物，其包含权利要求4的白细胞模拟物。
6.试剂盒，其包含权利要求4的白细胞模拟物或权利要求5的质控物或校准物。
7.权利要求4的白细胞模拟物在制备血液质控物或血液校准物或试剂盒中的用途，其中试剂盒包含权利要求4的白细胞模拟物或权利要求5的质控物或校准物。
8.提高白细胞完整性的方法，包括采用溶血剂对血液细胞样品进行溶血处理，使用两步固化法固化白细胞获得白细胞模拟物。
9.权利要求8的方法，其中所述溶血剂包含季铵盐、非离子表面活性剂；任选地，所述溶血剂包含氯化钠1-5g/L，季铵盐5-30g/L，非离子表面活性剂例如曲拉通0.01-0.1g/L，缓冲物质例如三羟甲基氨基甲烷0.1-2g/L，皂素0.1-0.5g/L，盐酸0.1-0.5g/L；任选地，溶血处理时间为5-10分钟。
10.权利要求8或9的方法，其中所述两步固化法包括采用低浓度固化剂的第一步短时间固化和采用高浓度固化剂的第二步长时间固化；任选地，第一步固化采用的低浓度固化剂包含低浓度醛类固化剂，例如所述低浓度固化剂包含氯化钠3-8g/L，硫酸钠8-12g/L，甲醛1-2％，第二步固化采用的高浓度固化剂包含高浓度醛类固化剂，例如所述高浓度固化剂包含氯化钠3-8g/L，硫酸钠8-12g/L，甲醛2-5％；任选地，第一步短时间固化的处理时间为2-5小时，第二步长时间固化的处理时间为48-96小时。
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