CN109238801A - 一种血细胞分析用溶血剂 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及血液分析的技术领域，更具体地，本发明涉及一种血细胞分析用溶血剂及其制备方法，本发明第一个方面提供一种血细胞分析用溶血剂，包括2～12g/L A组分与0.5～5g/L B组分，A组分包括脂肪醇聚氧乙烯醚与含氮化合物，B组分包括无机碱与有机酸；其中，含氮化合物的结构式为R1、R2、R3、R4分别独立选自碳原子数为1～15的烃基，且有机酸中至少含有一个苯环。
Description
技术领域
本发明涉及血液分析的技术领域，更具体地，本发明涉及一种血细胞分析用溶血剂及其制备方法。
背景技术
溶血剂配合血液细胞分析仪使用，是保证血液分析仪检测血液参数准确的基础，也是是血细胞计数仪试剂中的主要试剂，可用于测定白细胞的数量，同时也可用于用于测定血样中淋巴细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞及嗜酸性粒细胞的比例。
溶血剂在使用过程中它能将红细胞膜溶解，使细胞内的血红蛋白释放，用于血红蛋白的测定；另一方面，溶血剂在破坏红细胞后可以消除红细胞以及红细胞碎片对白细胞分析的干扰，以便后续进行白细胞计数和分类。但在使用过程中有时会存在一些弊端，例如对白细胞形态和结构的破坏、稳定性、保存时间较短以及成本较高等问题。
针对上述一些问题，本发明提供一种血细胞分析用溶血剂，其保存时间久、材料易得，性能稳定，不会内腐，有很好的抗菌性能，且在使用过程中对白细胞不会造成明显的破坏；另一方面，溶血剂在使用过程中无有害气体产生，不会对皮肤、人体产生危害；此外，本发明提供的溶血剂制备方法简单，成本较低，适于工业化生产。
发明内容
本发明第一个方面提供一种血细胞分析用溶血剂，包括2～12g/L A组分与0.5～5g/L B组分，A组分包括脂肪醇聚氧乙烯醚与含氮化合物，B组分包括无机碱与有机酸；其中，含氮化合物的结构式为R1、R2、R3、R4分别独立选自碳原子数为1～15的烃基，且有机酸中至少含有一个苯环。
作为本发明的一种优选技术方案，其中，包括4～10g/L A组分与2～3g/L B组分。
作为本发明的一种优选技术方案，其中，包括6g/L A组分与2.4g/L B组分。
作为本发明的一种优选技术方案，其中，脂肪醇聚氧乙烯醚与含氮化合物的重量比为(1～3)：1；无机碱与有机酸的重量比为(1～4)：1。
作为本发明的一种优选技术方案，其中，脂肪醇聚氧乙烯醚与含氮化合物的重量比为2：1；无机碱与有机酸的重量比为2：1。
作为本发明的一种优选技术方案，其中，R1、R2、R3均为-CH3，R4为-CH3(CH2)11-。
作为本发明的一种优选技术方案，其中，有机酸选自对苯二甲酸、4-氯-苯亚磺酸、2-(3-甲氧基苯基)吡啶-4-羧酸、2,3,4-三羟基-5-甲氧基苯甲酸、4-(2-甲基丙氧基)-1,3-苯二甲酸中的任一种或多种的组合。
作为本发明的一种优选技术方案，其中，无机碱选自氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸氢钠中的任一种或多种的组合。
作为本发明的一种优选技术方案，其中，有机酸为对苯二甲酸，无机碱为氢氧化钾。
本发明的第二各方面提供一种所述血细胞分析用溶血剂的制备方法，其中，包括溶解、调节pH、过滤以及包装；其中，调节pH至2.5～4.5。
本发明的有益效果：本发明提供的溶血剂原材料易得，成本较低；采用含有苯环的有机酸显著提高溶血剂的保存时间，可以长达4年，此外，本发明提供的溶血剂采用特定结构的含氮化合物且与其他成分协同作用下提高溶血剂的稳定性，并能够在使用过程中保证白细胞的完整性以及稳定性。
具体实施方式
本发明第一个方面提供一种血细胞分析用溶血剂，包括2～12g/L A组分与0.5～5g/L B组分，A组分包括脂肪醇聚氧乙烯醚与含氮化合物，B组分包括无机碱与有机酸；其中，含氮化合物的结构式为R1、R2、R3、R4分别独立选自碳原子数为1～15的烃基，且有机酸中至少含有一个苯环。
优选地，所述血细胞分析用溶血剂，包括4～10g/L A组分与2～3g/L B组分。
更优选地，所述血细胞分析用溶血剂，包括6g/L A组分与2.4g/L B组分。
在一种实施方式中，所述脂肪醇聚氧乙烯醚与含氮化合物的重量比为(1～3)：1；优选地，所述脂肪醇聚氧乙烯醚与含氮化合物的重量比为(1.5～2.5)：1；更优选地，所述脂肪醇聚氧乙烯醚与含氮化合物的重量比为2：1，所述脂肪醇聚氧乙烯醚购自广州市鸿都化工有限公司。
在一种实施方式中，所述无机碱与有机酸的重量比为(1～4)：1；优选地，所述无机碱与有机酸的重量比为(1.5～3)：1；更优选地，所述无机碱与有机酸的重量比为2：1。
在一种优选地实施方式中，所述R1、R2、R3均为-CH3，R4为-CH3(CH2)11-。
在一种实施方式中，所述有机酸选自对苯二甲酸、4-氯-苯亚磺酸、2-(3-甲氧基苯基)吡啶-4-羧酸、2,3,4-三羟基-5-甲氧基苯甲酸、4-(2-甲基丙氧基)-1,3-苯二甲酸中的任一种或多种的组合；优选地，所述有机酸选自对苯二甲酸、2,3,4-三羟基-5-甲氧基苯甲酸、2-(3-甲氧基苯基)吡啶-4-羧酸中的任一种或多种的组合；更优选地，所述有机酸为对苯二甲酸。
在一种实施方式中，所述无机碱选自氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸氢钠中的任一种或多种的组合；优选地，所述无机碱为氢氧化钾。
本发明第二个方面提供一种所述血细胞分析用溶血剂的制备方法，其中，包括溶解、调节pH、过滤以及包装。
在一种实施方式中，所述溶解温度为20～65℃；优选地，溶解温度为30～50℃；更优选地，溶解温度为45℃。
在一种实施方式中，所述调节pH至2～5；优选地，pH至2.5～4.5；更优选地，pH为3.5。
在一种实施方式中，所述过滤采用微孔滤膜过滤，其中，过滤膜的孔径不做特别限定。
在一种优选实施方案中，所述血细胞分析用溶血剂的制备方法为：将A组分在45℃溶解；之后利用B组分调节pH至3.5；通过微孔滤膜过滤后，将所得产物根据实际需要包装即可。
本发明采用脂肪醇聚氧乙醚提高溶血剂体系的均一性，以及通过有机酸、无机碱来调节溶血剂的pH至合适的范围内；而在溶血剂体系中添加含氮物质以及含苯环的有机酸可以提高溶血剂的保存时间以及稳定性，这可能因为在血液体系中，苯环为不良导体，在脂肪醇聚氧乙烯醚以及含氮物质的共同作用下，促进细胞的肿胀，使膜结构发生变化，至崩解；另一方面，苯环也能降低渗透压的变化，从而减少在红细胞溶解过程中对白细胞形态的影响；此外，申请人意外的发现，当采用特定结构的含氮物质以及特定比例的有机酸、无机碱时，溶血剂的保存时间以及稳定性会显著提高，这可能是因为特定结构的含氮化合物减少细胞的内腐，并且提高溶血剂体系的均匀性，减少团聚，从而避免在白细胞表面的沉积，使包细胞能够较好的保持自身的形态；而特定比例的有机酸、无机碱会在溶血剂体系形成稳定、平衡的液体环境，减少白细胞内物质与溶血剂体系之间的对流，从而提高溶血剂的保存时间以及稳定性。
实施例1
本发明的实施例1提供一种血细胞分析用溶血剂，包括6g/L A组分与2.4g/L B组分，A组分包括脂肪醇聚氧乙烯醚与含氮化合物，B组分包括无机碱与有机酸；
所述脂肪醇聚氧乙烯醚与含氮化合物的重量比为2：1，无机碱与有机酸的重量比为2：1；
所述含氮化合物的结构式为R1、R2、R3均为-CH3，R4为-CH3(CH2)11-；
无机碱为氢氧化钾；
有机酸为对苯二甲酸；
所述血细胞分析用溶血剂的制备方法为：将A组分在45℃溶解；之后利用B组分调节pH至3.5；通过微孔滤膜过滤后，将所得产物根据实际需要包装即可。
实施例2
本发明的实施例2提供一种血细胞分析用溶血剂，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，所述血细胞分析用溶血剂包括12g/L A组分与5g/L B组分，A组分包括脂肪醇聚氧乙烯醚与含氮化合物，B组分包括无机碱与有机酸；
所述脂肪醇聚氧乙烯醚与含氮化合物的重量比为3：1，无机碱与有机酸的重量比为2：1。
实施例3
本发明的实施例3提供一种血细胞分析用溶血剂，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，所述血细胞分析用溶血剂包括2g/L A组分与0.5g/L B组分，A组分包括脂肪醇聚氧乙烯醚与含氮化合物，B组分包括无机碱与有机酸；
所述脂肪醇聚氧乙烯醚与含氮化合物的重量比为1：1，无机碱与有机酸的重量比为2：1。
实施例4
本发明的实施例4提供一种血细胞分析用溶血剂，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，所述无机碱与有机酸的重量比为1：1。
实施例5
本发明的实施例5提供一种血细胞分析用溶血剂，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，所述无机碱与有机酸的重量比为4：1。
实施例6
本发明的实施例6提供一种血细胞分析用溶血剂，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，将所述对苯二甲酸替换为乙二酸。
实施例7
本发明的实施例7提供一种血细胞分析用溶血剂，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，将所述含氮化合物的重量份替换为0。
性能测试：
溶血剂的稳定性
将实施例1-7制备的溶血剂分别放置1年、2年、3年、4年后再在SYSMEX XN-1000全自动五分类血液分析仪上进行白细胞分类计数，每个实施例对应的样品数为100，计算在不同放置时间内，产品的合格率，将白细胞中中粒细胞(NEU)分类计数效果在55～68范围内记为合格，具体测试结果如表1：
表1
由表1可知采用含有苯环的有机酸、含氮化合物可以提高溶血剂的保存时间，而本发明提供的溶血剂采用特定结构的含氮化合物且与其他成分协同作用下提高溶血剂的保存时间，可以长达4年，并能够在使用过程中保证白细胞的完整性以及稳定性。
前述的实例仅是说明性的，用于解释本发明所述方法的一些特征。所附的权利要求旨在要求可以设想的尽可能广的范围，且本文所呈现的实施例仅是根据所有可能的实施例的组合的选择的实施方式的说明。因此，申请人的用意是所附的权利要求不被说明本发明的特征的示例的选择限制。在权利要求中所用的一些数值范围也包括了在其之内的子范围，这些范围中的变化也应在可能的情况下解释为被所附的权利要求覆盖。
Claims (10)
1.一种血细胞分析用溶血剂，其特征在于，包括2～12g/L A组分与0.5～5g/L B组分，A组分包括脂肪醇聚氧乙烯醚与含氮化合物，B组分包括无机碱与有机酸；其中，含氮化合物的结构式为R1、R2、R3、R4分别独立选自碳原子数为1～15的烃基，且有机酸中至少含有一个苯环。
2.根据权利要求1所述血细胞分析用溶血剂，其特征在于，包括4～10g/L A组分与2～3g/L B组分。
3.根据权利要求2所述血细胞分析用溶血剂，其特征在于，包括6g/L A组分与2.4g/L B组分。
4.根据权利要求1所述血细胞分析用溶血剂，其特征在于，脂肪醇聚氧乙烯醚与含氮化合物的重量比为(1～3)：1；无机碱与有机酸的重量比为(1～4)：1。
5.根据权利要求4所述血细胞分析用溶血剂，其特征在于，脂肪醇聚氧乙烯醚与含氮化合物的重量比为2：1；无机碱与有机酸的重量比为2：1。
6.根据权利要求1所述血细胞分析用溶血剂，其特征在于，R1、R2、R3均为-CH3，R4为-CH3(CH2)11-。
7.根据权利要求1所述血细胞分析用溶血剂，其特征在于，有机酸选自对苯二甲酸、4-氯-苯亚磺酸、2-(3-甲氧基苯基)吡啶-4-羧酸、2,3,4-三羟基-5-甲氧基苯甲酸、4-(2-甲基丙氧基)-1,3-苯二甲酸中的任一种或多种的组合。
8.根据权利要求1所述血细胞分析用溶血剂，其特征在于，无机碱选自氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸氢钠中的任一种或多种的组合。
9.根据权利要求7或8所述血细胞分析用溶血剂，其特征在于，有机酸为对苯二甲酸，无机碱为氢氧化钾。
10.根据权利要求1～8任一项所述血细胞分析用溶血剂的制备方法，其特征在于，包括溶解、调节pH、过滤以及包装；其中，调节pH至2.5～4.5。
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