CN107015007A - 一种血红蛋白浓度测定用溶血剂 - Google Patents

一种血红蛋白浓度测定用溶血剂 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种血红蛋白浓度测定用溶血剂，包括缓冲剂、阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂和增溶剂，所述溶血剂的含量是根据不同血细胞分析仪调整某一组分的含量以适用。通过上述方式，本发明的血红蛋白浓度测定用溶血剂，是针对利用比色法检测血红蛋白浓度的血细胞分析仪，通过对血红蛋白溶血剂固定基础配方，仅通过调整一种成分的含量，使得该溶血剂可以适用于不同的血细胞分析仪，简化体外诊断试剂开发步骤，降低研发成本，有实际意义。

Description

一种血红蛋白浓度测定用溶血剂
技术领域
本发明涉及体外诊断领域，特别是涉及一种血红蛋白浓度测定用溶血剂。
背景技术
血红蛋白（Hb）测定是临床上一项常规检查项目，通常通过血液检查的手段来进行测定，血红蛋白含量能更好地反映贫血程度，是诊断相关疾病的重要依据。
血红蛋白含量常采用比色的原理进行测定，处理后的血液样本加入溶血剂，红细胞溶解，释放血红蛋白。血红蛋白可以与溶血剂中的相关成分结合，形成一种稳定的血红蛋白复合物，在一定的波长下进行比色，溶液吸光度的变化与血红蛋白含量成正比，进而对血红蛋白进行定量测定。早期对于血红蛋白的检测通常采用氰化高铁血红蛋白法（HiCN），其致命的弱点是氰化物试剂有剧毒，污染环境，易造成公害，如今该方法已经基本停止使用。现在血红蛋白溶血剂是采用阳离子表面活性剂或阴离子表面活性剂，破坏红细胞释放血红蛋白，并与血红蛋白形成稳定复合物进而比色检测。这种检测手段要借助于全自动血细胞分析仪来完成。目前市场上血细胞分析仪品牌繁杂，血红蛋白溶血剂大多是专机专用，消耗量大，且价格昂贵，给广大医疗机构带来成本上的困扰。因此开发一种配方简易，成本较低，适用多种机型，能够代替原装试剂上机使用的血红蛋白溶血剂，降低对国外进口产品的依赖性，是十分必要的。
发明内容
本发明主要解决的技术问题是提供一种血红蛋白浓度测定用溶血剂，为无氰溶血剂。
为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：提供一种血红蛋白浓度测定用溶血剂，包括缓冲剂、阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂和增溶剂，所述溶血剂的含量是根据不同血细胞分析仪调整某一组分的含量以适用。
在本发明一个较佳实施例中，所述溶血剂的含量是先确定缓冲剂、阴离子表面活性剂和增溶剂的含量，再根据采用的血细胞分析仪调整非离子表面活性剂的含量。
在本发明一个较佳实施例中，所述缓冲剂为硼酸-硼砂缓冲剂、磷酸盐缓冲剂、Tris-HCl缓冲剂、Good’s缓冲剂中的一种或几种。
在本发明一个较佳实施例中，所述缓冲剂为磷酸盐缓冲剂，所述磷酸盐缓冲剂的浓度为10mM。
在本发明一个较佳实施例中，所述阴离子表面活性剂为烷基磺酸盐、烷基苯磺酸盐、烷基硫酸盐中的一种；所述阴离子表面活性剂的用量为4~8g/L。
在本发明一个较佳实施例中，所述阴离子表面活性剂为十二烷基硫酸钠。
在本发明一个较佳实施例中，所述非离子表面活性剂为聚氧乙烯醚类；所述非离子表面活性剂的用量根据血细胞分析仪确定。
在本发明一个较佳实施例中，所述非离子表面活性剂为聚乙二醇辛基苯基醚。
在本发明一个较佳实施例中，所述增溶剂为异丙醇、甲醇、乙醇、乙二醇中的一种或多种；所述增溶剂的用量为5~20mL/L。
在本发明一个较佳实施例中，所述溶血剂的组成为：磷酸二氢钾 0.1~2 g/L、十二水合磷酸氢二钠 0.1~5 g/L、十二烷基硫酸钠 4~8 g/L、异丙醇 5~20 ml/L、聚乙二醇辛基苯基醚 1-10 g/L。
本发明的有益效果是：本发明的血红蛋白浓度测定用溶血剂，是针对利用比色法检测血红蛋白浓度的血细胞分析仪，通过对血红蛋白溶血剂固定基础配方，仅通过调整一种成分的含量，使得该溶血剂可以适用于不同的血细胞分析仪，简化体外诊断试剂开发步骤，降低研发成本，有实际意义。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图，其中：
图1是本发明实施例一试剂与BC-5800血细胞分析仪匹配试剂测定的血红蛋白浓度的相关图；
图2是本发明实施例二试剂与BC-6800血细胞分析仪匹配试剂测定的血红蛋白浓度的相关图；
图3是实施例三试剂与KX-21血细胞分析仪匹配试剂测定的血红蛋白浓度的相关图。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明提供一种血红蛋白浓度测定用溶血剂，包括缓冲剂、阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂和增溶剂。所述溶血剂主要用于溶解红细胞，并与血红蛋白特异性结合，形成稳定的血红蛋白复合物，在540nm左右有最大吸收峰，根据吸光度的变化测量血红蛋白含量。
其中所述缓冲剂为硼酸-硼砂缓冲剂、磷酸盐缓冲剂、Tris-HCl缓冲剂、Good’s缓冲剂中的一种或几种，优选磷酸盐缓冲剂，所述磷酸盐缓冲剂的浓度为10mM。所述缓冲剂用于调节溶血剂的pH。
所述阴离子表面活性剂既有破裂细胞和溶解红细胞的作用，又可以与血红蛋白结合形成稳定的复合物，选自烷基磺酸盐、烷基苯磺酸盐、烷基硫酸盐中的一种，具体为十二烷基硫酸钠。所述阴离子表面活性剂的用量为4~8g/L。
所述非离子表面活性剂既可以参与红细胞的溶解，又可以加速血红蛋白复合物的形成，增加十二烷基硫酸钠溶解能力，防止其在低温下析出，增强血红蛋白复合物的稳定性。所述非离子表面活性剂为聚氧乙烯醚类，具体为聚乙二醇辛基苯基醚Triton X-100。所述非离子表面活性剂的用量在不同血细胞分析仪上使用有所不同。
所述增溶剂可以增加阴离子表面活性剂或非离子表面活性剂的溶解度，优选但不限于异丙醇，还可以是甲醇、乙醇、乙二醇等，其使用量为5~20mL/L。
本发明实施例中所用试剂均为分析纯试剂。
本发明血红蛋白溶血剂的组成成分为：磷酸二氢钾 0.1~2 g/L、十二水合磷酸氢二钠 0.1~5 g/L、十二烷基硫酸钠 4~8 g/L、异丙醇 5~20 ml/L、Triton X-100 1-10 g/L。
本发明首先确定磷酸二氢钾、十二水合磷酸氢二钠、十二烷基硫酸钠和异丙醇的含量，其次通过调节Triton X-100的含量使得该溶血剂能够适用于不同的血细胞分析仪，使用本发明的溶血剂在血细胞分析仪上检测血液样品中血红蛋白含量，并与原装试剂血红蛋白检测结果的相关性来评价本发明的溶血剂对不同机型的适用情况。以迈瑞BC-5800、BC-6800、希森美康KX-21机型为例进行试验，但不限于这三种机型。
按照下表配方准确称取各组分，依次溶解后用纯化水定容，用0.22 μm微孔滤膜过滤，即得到本发明所述血红蛋白溶血剂基液A、B。将基液A、B按不同的比例混合，即通过调节Triton X-100的含量，确定适用于不同血细胞分析仪的溶血剂配方。
实施例一：
量取A液290 mL和B液710 mL，混合均匀，用于迈瑞BC-5800血细胞分析仪上，检测10组血样，每组血样检测3次，记录血红蛋白检测结果，并与原装试剂检测结果进行比较，实验结果如图1所示。
实施例二：
量取A液230 mL和B液770 mL，混合均匀，用于迈瑞BC-6800血细胞分析仪上，检测10组血样，每组血样检测3次，记录血红蛋白检测结果，并与原装试剂检测结果进行比较，实验结果如图2所示。
实施例三：
量取A液320 mL和B液680 mL，混合均匀，用于希森美康KX-21血细胞分析仪上，检测10组血样，每组血样检测3次，记录血红蛋白检测结果，并与原装试剂检测结果进行比较，实验结果如图3所示。
由图1可见，当TritonX-100含量为7.1g/L时，本发明血红蛋白溶血剂测量结果与BC-5800原装溶血剂测量结果基本一致，其相关系数为0.998，说明按照本发明开发的血红蛋白溶血剂完全可以代替BC-5800原装血红蛋白溶血剂使用。
由图2、图3可见，当TritonX-100含量分别为7.7g/L、6.8g/L时，本发明血红蛋白溶血剂测量结果分别与BC-6800、KX-21原装血红蛋白溶血剂测量结果基本一致，其相关系数为0.997、0.997，说明按照本发明开发的血红蛋白溶血剂完全可以代替BC-6800、KX-21原装血红蛋白溶血剂使用。
由图1、图2、图3可见，说明TritonX-100含量为6~8g/L时，按照本发明开发方法所配制血红蛋白溶血剂，完全可以代替原装试剂在BC-5800、BC-6800、KX-21等全自动血细胞分析仪上进行血红蛋白浓度检测。综上，本发明所提供的一种用于血红蛋白溶血剂开发的方法操作简单，易于实现，且按照其所配制的试剂成本较低，能满足市场上多数血细胞分析仪检测血红蛋白浓度的需求。
本发明通过对血红蛋白溶血剂基础配方中的一种有效成分含量的调节，使得该溶血剂能够适用于不同的血细胞分析仪，可以满足不同仪器检测血红蛋白的需要。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其它相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (10)

1.一种血红蛋白浓度测定用溶血剂，其特征在于，包括缓冲剂、阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂和增溶剂，所述溶血剂的含量是根据不同血细胞分析仪调整某一组分的含量以适用。
2.根据权利要求1所述的溶血剂，其特征在于，所述溶血剂的含量是先确定缓冲剂、阴离子表面活性剂和增溶剂的含量，再根据采用的血细胞分析仪调整非离子表面活性剂的含量。
3.根据权利要求1所述的溶血剂，其特征在于，所述缓冲剂为硼酸-硼砂缓冲剂、磷酸盐缓冲剂、Tris-HCl缓冲剂、Good’s缓冲剂中的一种或几种。
4.根据权利要求1所述的溶血剂，其特征在于，所述缓冲剂为磷酸盐缓冲剂，所述磷酸盐缓冲剂的浓度为10mM。
5.根据权利要求1所述的溶血剂，其特征在于，所述阴离子表面活性剂为烷基磺酸盐、烷基苯磺酸盐、烷基硫酸盐中的一种；所述阴离子表面活性剂的用量为4~8g/L。
6.根据权利要求1所述的溶血剂，其特征在于，所述阴离子表面活性剂为十二烷基硫酸钠。
7.根据权利要求1所述的溶血剂，其特征在于，所述非离子表面活性剂为聚氧乙烯醚类；所述非离子表面活性剂的用量根据血细胞分析仪确定。
8.根据权利要求1所述的溶血剂，其特征在于，所述非离子表面活性剂为聚乙二醇辛基苯基醚。
9.根据权利要求1所述的溶血剂，其特征在于，所述增溶剂为异丙醇、甲醇、乙醇、乙二醇中的一种或多种；所述增溶剂的用量为5~20mL/L。
10.根据权利要求1所述的溶血剂，其特征在于，所述溶血剂的组成为：磷酸二氢钾 0.1~2 g/L、十二水合磷酸氢二钠 0.1~5 g/L、十二烷基硫酸钠 4~8 g/L、异丙醇 5~20 ml/L、聚乙二醇辛基苯基醚 1-10 g/L。
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