CN102507957A - 一种用免疫透射比浊法测定载脂蛋白a2的方法及试剂盒 - Google Patents
一种用免疫透射比浊法测定载脂蛋白a2的方法及试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102507957A CN102507957A CN2011103399490A CN201110339949A CN102507957A CN 102507957 A CN102507957 A CN 102507957A CN 2011103399490 A CN2011103399490 A CN 2011103399490A CN 201110339949 A CN201110339949 A CN 201110339949A CN 102507957 A CN102507957 A CN 102507957A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- apoa
- damping fluid
- antibody
- ether
- sodium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明提供了一种用免疫透射比浊法测定载脂蛋白A2的方法及其使用的试剂所组成的试剂盒，其中，该方法所使用的试剂特别包括，选自以下物质中的一种和几种的稳定剂：乙二醇(α-氨基乙基)醚四乙酸、亚氨基二乙酸、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AES)、1，2-环己二醇缩水甘油、二乙烯三胺五乙酸钠和六聚甘油二油酸酯；以及选自以下物质中的一种和几种的高分子加速剂：脂肪醇聚氧乙烯醚、聚乙烯吡咯烷酮、乙二醇聚氧乙烯醚、羟丙基甲基纤维素、羟甲基纤维素钠和聚丙烯酸钠。本发明提供的方法可以批量检测分析，对高脂、黄疸、溶血样本抗干扰能力强。
Description
技术领域
本发明涉及一种测定载脂蛋白A2的方法及所述方法使用的试剂盒，具体地本发明涉及一种用免疫透射比浊法测定载脂蛋白A2的方法及所述方法使用的试剂盒。
背景技术
载脂蛋白A II(ApoA II)是高密度脂蛋白(HDL)中第二种含量多的载脂蛋白。ApoA II由两条多肽链的77个氨基酸残基组成，在不加还原剂的十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)中测出其分子量是17000D，在人血浆中以二聚体形式存在。ApoA II的单体分子量为8700D。人ApoA II蛋白C端氨基酸残基为谷氨酸，N端为吡咯烷酮酸，缺乏组氨酸，精氨酸及色氨酸。ApoA II有多态性存在，最主要的多态型等电点为4.9，而含量较少的多态型的等电点为5.17、4.68、4.42和4.20。
ApoA II的生理功能之一是维持HDL结构，ApoA II肽段12-31和肽段50-77具有与磷脂的结合能力，经二级结构分析认为，残基17-30和51-62形成的双性螺旋结构是人ApoA II与脂质结合的分子基础，也可能参与HDL受体的识别，在HDL的代谢中具有重要作用；其二是激活肝脂酶，用以水解乳糜微粒(CM)和极低密度脂蛋白(VLDL)中的甘油三酯(TG)和磷脂(PL)。体外实验表明，它可能具有抑制卵磷脂胆固醇脂酰转移酶(LCAT)和肝磷脂的作用。测定人血浆中ApoA II的含量对研究HDL代谢，探讨动脉粥样硬化、冠心病的发病机理及临床诊断有重要意义。流行病学及临床研究表明，ApoAII含量与冠心病呈负相关，与心肌梗塞呈高度负相关。测定血浆ApoA II、ApoAI及ApoB100含量，可替代血脂的测定作为冠心病诊断的参考指标。
目前一般采用酶联免疫法测定血清脂蛋白Apoa II。酶联免疫法的原理是：将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体；洗涤除去未结合的抗体及杂质。加待测样品，使之与固相抗体接触反应一段时间，让样品中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。加酶标抗体，使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与样品中待测物质的量正相关。加底物，夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。
现有的测定血清脂蛋白Apoa II的方法存在着操作繁琐，设备要求高，样品预处理复杂，不能直接在全自动生化分析仪上进行批量检测分析，对高脂、黄疸、溶血样本抗干扰能力差的缺点。
发明内容
本发明的一个目的是克服现有的测定载脂蛋白A2的方法操作繁琐，设备要求高，样品预处理复杂，不能直接在全自动生化分析仪上进行批量检测分析，对高脂、黄疸、溶血样本抗干扰能力差的缺点，提供一种操作以及预处理过程简单、能直接在全自动生化分析仪上批量检测分析，且对高脂、黄疸、溶血样本抗干扰能力强的用免疫透射比浊法测定载脂蛋白A2的方法。
现有技术没有使用免疫透射比浊法测定载脂蛋白A2的先例，本发明的发明人付出了大量地创造性劳动，大胆地采用免疫透射比浊法测定载脂蛋白A2的方法，并且摸索出了该方法实现测量的条件和使用的试剂所组成的试剂盒。
本发明提供了一种用免疫透射比浊法测定载脂蛋白A2的方法，其包括：
向待测样品中加入反应剂，解除样本中抗原周围的电子层和水化层，使抗原位点充分暴露；
向待测样品中加入抗ApoA II抗体溶液，形成不溶性的抗原-抗体复合物；
测定所述不溶性抗原-抗体复合物的吸光度值，与已知ApoA II抗原浓度的校准液的吸光度值比较；
通过以下公式计算出样本中ApoA II的含量：
式中：ΔAu为以空白管吸光度为对照的待测样品的吸光度值
ΔAs为以空白管吸光度为对照的校准品的吸光度值
Cs为校准品中ApoA II的浓度；
其中，所述反应剂包括：防腐剂0.2-1.5g/L、稳定剂0.5-3g/L、电解质0.1-6g/L、表面活性剂1-10g/L，高分子加速剂2-5g/L和反应促进剂0.1-0.5g/L，其余是10-200mmol/L的缓冲液；
所述抗ApoA II抗体溶液包括：抗ApoA II抗体5-60g/L、抗氧化剂0.01-0.8g/L、稳定剂1-30g/L，防腐剂0.01-5g/L、电解质0.1-6g/L、高分子加速剂2-5g/L和表面活性剂0.1-10g/L，其余是10-200mmol/L的缓冲液；
其中，所述稳定剂选自以下物质中的一种和几种：
乙二醇(α-氨基乙基)醚四乙酸、亚氨基二乙酸、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AES)、1，2-环己二醇缩水甘油、二乙烯三胺五乙酸钠和六聚甘油二油酸酯；
所述的高分子加速剂选自以下物质中的一种和几种：
脂肪醇聚氧乙烯醚、聚乙烯吡咯烷酮、乙二醇聚氧乙烯醚、羟丙基甲基纤维素、羟甲基纤维素钠和聚丙烯酸钠。
本发明还提供了上述方法使用的试剂所形成的试剂盒。
本发明所述的方法由于使用了特定的稳定剂和高分子加速剂，使利用免疫透射比浊法测定载脂蛋白A2成为可能，并且本发明的方法操作以及预处理过程简单、能直接在全自动生化分析仪上批量检测分析，且对高脂、黄疸、溶血样本抗干扰能力强。
具体实施方式
本发明提供了一种用免疫透射比浊法测定载脂蛋白A2的方法，其包括：
向待测样品中加入反应剂，解除样本中抗原周围的电子层和水化层，使抗原位点充分暴露；
向待测样品中加入抗ApoA II抗体溶液，形成不溶性的抗原-抗体复合物；
测定所述不溶性抗原-抗体复合物的吸光度值，与已知ApoA II抗原浓度的校准液的吸光度值比较；
通过以下公式计算出样本中ApoA II的含量：
式中：ΔAu为以空白管吸光度为对照的待测样品的吸光度值
ΔAs为以空白管吸光度为对照的校准品的吸光度值
Cs为校准品中ApoA II的浓度；
其中，所述反应剂包括：防腐剂0.2-1.5g/L、稳定剂0.5-3g/L、电解质0.1-6g/L、表面活性剂1-10g/L，高分子加速剂2-5g/L和反应促进剂0.1-0.5g/L，其余是10-200mmol/L的缓冲液；
所述抗ApoA II抗体溶液包括：抗ApoA II抗体5-60g/L、抗氧化剂0.01-0.8g/L、稳定剂1-30g/L，防腐剂0.01-5g/L、电解质0.1-6g/L、高分子加速剂2-5g/L和表面活性剂0.1-10g/L，其余是10-200mmol/L的缓冲液；
其中，所述稳定剂选自以下物质中的一种和几种：
乙二醇(α-氨基乙基)醚四乙酸、亚氨基二乙酸、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AES)、1，2-环己二醇缩水甘油、二乙烯三胺五乙酸钠和六聚甘油二油酸酯；
所述的高分子加速剂选自以下物质中的一种和几种：
脂肪醇聚氧乙烯醚、聚乙烯吡咯烷酮、乙二醇聚氧乙烯醚、羟丙基甲基纤维素、羟甲基纤维素钠和聚丙烯酸钠。
优选地，所述稳定剂选自以下物质中的一种和几种：亚氨基二乙酸、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AES)、1，2-环己二醇缩水甘油和二乙烯三胺五乙酸钠；所述的高分子加速剂为聚乙烯吡咯烷酮和/或乙二醇聚氧乙烯醚。最优选所述稳定剂为二乙烯三胺五乙酸钠和所述的高分子加速剂为聚乙烯吡咯烷酮。
其中，所述反应剂和抗ApoA II抗体溶液的体积比为3∶1至7∶1。更优选所述反应剂和抗ApoA II抗体溶液的体积比为3∶1、4∶1、5∶1、6∶1或7∶1。
优选地，所述的反应剂和所述抗ApoA II抗体溶液中的缓冲液PH值为5-10，所述缓冲液选自磷酸盐缓冲液、哌嗪-1，4-二乙磺酸缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、N-2-羟乙基哌嗪-N′-2-乙磺酸缓冲液、N-三(羟甲基)甲基-3-氨基丙烷磺酸缓冲液、3-环己胺基-2-羟基丙磺酸缓冲液、甘氨酸缓冲液和硼砂-氢氧化钠缓冲液中的至少一种；所述的表面活性剂选自非离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂和两性离子表面活性剂中的一种或多种；所述的电解质是阴离子电解质和/或阳离子电解质；所述的防腐剂选自proclin 300、5溴-5硝基-1，3二
烷、异噻唑啉酮MIT、氯乙酰胺、2-羟基吡啶-N-氧化物和咪唑烷基脲IZU中的一种或几种；所述抗氧化剂选自丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、没食子酸丙酯、特丁基对苯二酚、维生素A、维生素C、维生素E和类胡萝卜素中的一种或几种，反应促进剂是溴化乙二甲胺和/或聚凝胺。
更优选地，所述的反应剂和所述抗ApoA II抗体溶液中的缓冲液PH值为7.0-8.3，所述缓冲液选自磷酸盐缓冲液、哌嗪-1，4-二乙磺酸缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、N-2-羟乙基哌嗪-N′-2-乙磺酸缓冲液、N-三(羟甲基)甲基-3-氨基丙烷磺酸缓冲液、甘氨酸缓冲液和3-环己胺基-2-羟基丙磺酸缓冲液中的至少一种；所述的表面活性剂为非离子表面活性剂，所述非离子表面活性剂包括吐温(Tween)系列(例如，吐温20、吐温40和吐温80中的一种或几种)、聚氧乙烯月桂醚、聚氧乙烯苯基醚、聚氧乙烯辛集苯醚、聚氧乙烯烷基苯基醚和聚氧乙烯壬基苯基醚中的一种或多种；所述的电解质是阳离子电解质；所述的防腐剂选自proclin 300、5溴-5硝基-1，3二烷、异噻唑啉酮MIT、氯乙酰胺、2-羟基吡啶-N-氧化物和咪唑烷基脲IZU中的一种或几种；所述抗氧化剂选自维生素C、丁基羟基茴香醚和二丁基羟基甲苯中的一种或几种，反应促进剂是聚凝胺。优选地，所述的反应剂和所述抗ApoA II抗体溶液中的缓冲液PH值为7.0-8.3，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液；
更优选地所述的表面活性剂为聚氧乙烯月桂醚；所述的电解质是氯化钾；所述的防腐剂为异噻唑啉酮MIT；所述抗氧化剂为维生素C，反应促进剂是聚凝胺。
此外所述校准液的成分与实施例的体积的成分可以相同也可以不同，因此优选校准液包括：防腐剂0.01-2g/L、稳定剂0.1-5g/L、防霉剂0.05-0.1g/L、ApoA II抗原，其余是10-200mmol/L缓冲液；其中，所述防霉剂是丙酸钠和/或脱氧乙酸；所述的抗ApoA II抗体来自哺乳动物；所述的校准液中的缓冲液是pH 5.0-10.0之间有缓冲能力的缓冲液，其选自2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲液、1，3-二[三(羟甲基)甲氨基]丙烷缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、N-(2-乙酰氨基)-亚氨基二乙酸二钠盐缓冲液、N-2-羟乙基哌嗪-N′-2-乙磺酸缓冲液、三乙醇胺缓冲液、磷酸盐缓冲液、2-[[三(羟甲基)甲基]氨基]乙磺酸缓冲液、N-3-(羟甲基)甲基氨丙磺酸缓冲液、哌嗪-1，4-二乙磺酸缓冲液、3-环己胺基-2-羟基丙磺酸缓冲液、两性离子缓冲液和甘氨酸缓冲液中的至少一种。
更优选地，本发明提及的恒定值校准品，是一种用来与样品比较、进行结果计算的液体血清型恒定值校准剂，包括的成分及所占重量百分比为：防腐剂0.01-2g/L、稳定剂0.1-5g/L、防霉剂0.05-0.1g/L和适量ApoA II抗原，其余是10-200mmol/L缓冲液。校准液浓度可以是高浓度单点参考校准品，在使用时用生理盐水稀释成多个不同浓度的参考校准品，也可以直接制备成多个不同浓度的参考校准品，这里没有特别的限制，只要制得的ApoA II恒定校准液能与样本比较，能够测定样本中恒定值校准液的含量即可。
所述的抗ApoA II抗体来自羊、马、鼠或兔等哺乳动物。
抗ApoA II抗体可以是羊抗人ApoA II抗血清、马抗人ApoA II抗血清、鼠抗人ApoA II抗血清、兔抗人ApoA II抗血清等，这些血清均可外购获得，也可自制。一种用来与样品比较、进行结果计算的液体血清型恒定值校准剂，包括防腐剂0.01-2g/L、稳定剂0.1-5g/L、防霉剂0.05-0.1g/L和适量ApoA II抗原，其余是10-200mmol/L缓冲液。
所述校准液浓度可以是高浓度单点参考校准品，在使用时用生理盐水稀释成多个不同浓度的参考校准品，也可以直接制备成多个不同浓度的参考校准品。本发明优选高浓度单点参考校准品，用生理盐水稀释成5种浓度，稀释梯度依次为0、1/4、1/2、2/3、1：
第1点为0g/L，可用生理盐水替代；
第2点为0.18g/L；
第3点为0.35g/L；
第4点为0.47g/L；
第5点为0.7g/L。
ApoA II抗原可直接外购，或者自制。本发明的校准配制为每个双试剂和/或单试剂配置有1瓶高浓度校准品。
本发明还提供了由上述方法使用的试剂所形成的试剂盒。以上本发明所述所有生化原料和试剂均可商业购买获得。也可以通过本领域常用的方法制备。本发明制备获得的产品在2-8℃避光条件下有效期为一年。
以下实施例中的各成分含量，除标有明确的单位之外，均为所占重量百分比。
实施例1
1、ApoA II反应剂(R1)
2、抗ApoA II抗体溶液(R2)
3、液体血清型ApoA II恒定值校准剂
其余为纯化水
按照需要的恒定值校准液浓度将相应量的Apoa II抗原加入上述溶液中，制备得Apoa II恒定值校准液。本实例选用的是高浓度单点参考校准品，ApoaII抗原添加浓度为0.7g/L，然后用0.22μm的滤膜抽滤除菌，放2-8℃保存。在使用时用生理盐水稀释成不同浓度梯度的参考校准品，依次为：第1点为0g/L；第2点为0.18g/L；第3点为0.35g/L；第4点为0.47g/L；第5点为0.7g/L。
试剂R1与R2按3∶1的体积比例混合，以作为单一试剂使用。
实施例2：
1、ApoA II反应剂(R1)
2、抗ApoA II抗体溶液(R2)
3、液体血清型ApoA II恒定值校准剂
液体血清型恒定值校准剂分为五份，按照不同的浓度标准(第1点为0g/L；第2点为0.18g/L；第3点为0.35g/L；第4点为0.47g/L；第5点为0.7g/L)将ApoA II抗原加入上述五份溶液中，然后用0.22μm的滤膜抽滤除菌，放2-8℃保存。
将试剂R1与R2按5∶1的体积比例混合，以作为单一试剂使用。
实施例3：
1、ApoA II反应剂(R1)
2、抗ApoA II抗体溶液(R2)
3、液体血清型ApoA II恒定值校准剂
本实例选用的是高浓度单点参考校准品，Apoa II抗原添加浓度为0.7g/L，然后用0.22μm的滤膜抽滤除菌，放2-8℃保存。在使用时用生理盐水稀释成不同浓度梯度的参考校准品，依次为：第1点为0g/L；第2点为0.18g/L；第3点为0.35g/L；第4点为0.47g/L；第5点为0.7g/L。
试剂R1与R2按3∶1的体积比例混合，以作为单一试剂使用。在全自动生化分析仪(奥林巴斯AU400)设置参数如下：反应温度37℃，主波长：410nm，副波长：660nm，两点速率法(RATE1)，R1∶R2∶样本体积比为180∶60∶3(单位μl)，样本与R1在37℃保温3分钟后，加入R2，1分钟后记录吸光度A1，反应100秒后，记录吸光度A2。计算两点间的吸光度变化，对照标准反应曲线可测得样本中的ApoA II含量。
一、双试剂基本操作：
将测量出的结果通过下列公式计算：
式中：ΔAu为以空白管吸光度为对照的样品管吸光度
ΔAs为以空白管吸光度为对照的校准管吸光度
Cs为校准液中ApoA II的浓度
便可计算出样品中ApoA II的含量。
二、单试剂基本操作：
将测量出的结果通过下列公式计算：
式中：ΔAu为以空白管吸光度为对照的样品管吸光度
ΔAs为以空白管吸光度为对照的校准管吸光度
Cs为校准液中ApoA II的浓度
便可计算出样品中ApoAII的含量。
对比例1
罗静聪等人，在华西医大学报，199425(2)：229-232人血清载脂蛋白AII酶联免疫测定法研究中所报道的方法为对比例。以下表1和表2所述“对照结果”是通过罗静聪等人，在华西医大学报，199425(2)：229-232所报道的方法测得。
表1(测得载脂蛋白A2的单位mg/dL)
表1使用的待测样本为配制的浓度为36.65mg/dL的载脂蛋白A2II。其中，分别使用了实施例1-3以及对比例1的试剂盒测定所述样品。由表1可以看出，实施例1-3的试剂盒测试结果比对比例1更接近真实值；并且实施例1-3的试剂盒测试结果标准偏差和变异系数都明显小于对比例1，说明本发明的试剂盒性能更稳定，测量更准确。
表2特殊样本抗干扰效果(测得载脂蛋白A2的单位mg/dL)
以上所用的特殊样本通过抽取正常健康女性受试者血液，静置至血细胞沉淀分层，取上层血清，分别加入不同干扰物制备得到，用于对实施例1和对比例1的试剂盒进行检验。其中，溶血样本中添加的干扰物是终浓度为2.5g/L或5g/L的血红素；高脂样本中添加的干扰物是终浓度为0.15％或0.30％的脂肪乳；肝素样本添加的干扰物是终浓度为50U/mL或100U/mL的肝素钠；黄疸样本添加的干扰物是终浓度为250μmol/L或500μmol/L的胆红素。上述添加的干扰物均为可溶性干扰物，为了保证准确而均匀地添加所述干扰物，可以采用事先配制高浓度(10倍浓度)的干扰物纯物质母液(溶剂为纯水)，然后与正常人血清混合的方式。例如，配制1000U/mL的肝素钠母液，再以母液和人血清体积比1∶9的方式加入正常的人血清中混匀，即得100U/mL的肝素样本。
从表2所示的结果可以看出，本发明实施例1的试剂盒对高脂样本、黄疸样本、肝素样本、溶血样本的抗干扰能力显著强于对比例1的试剂盒。
Claims (10)
1.一种用免疫透射比浊法测定载脂蛋白A2的方法，其特征在于，该方法包括：
向待测样品中加入反应剂，解除样本中抗原周围的电子层和水化层，使抗原位点充分暴露；
向待测样品中加入抗ApoA II抗体溶液，形成不溶性的抗原-抗体复合物；
测定所述不溶性抗原-抗体复合物的吸光度值，与已知ApoA II抗原浓度的校准液的吸光度值比较；
通过以下公式计算出样本中ApoA II的含量：
式中：ΔAu为以空白管吸光度为对照的待测样品的吸光度值
ΔAs为以空白管吸光度为对照的校准品的吸光度值
Cs为校准品中ApoA II的浓度；
其中，所述反应剂包括：防腐剂0.2-1.5g/L、稳定剂0.5-3g/L、电解质0.1-6g/L、表面活性剂1-10g/L，高分子加速剂2-5g/L和反应促进剂0.1-0.5g/L，其余是10-200mmol/L的缓冲液；
所述抗ApoA II抗体溶液包括：抗ApoA II抗体5-60g/L、抗氧化剂0.01-0.8g/L、稳定剂1-30g/L，防腐剂0.01-5g/L、电解质0.1-6g/L、高分子加速剂2-5g/L和表面活性剂0.1-10g/L，其余是10-200mmol/L的缓冲液；
其中，所述稳定剂选自以下物质中的一种和几种：
乙二醇(α-氨基乙基)醚四乙酸、亚氨基二乙酸、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠、1，2-环己二醇缩水甘油、二乙烯三胺五乙酸钠和六聚甘油二油酸酯；
所述的高分子加速剂选自以下物质中的一种和几种：
脂肪醇聚氧乙烯醚、聚乙烯吡咯烷酮、乙二醇聚氧乙烯醚、羟丙基甲基纤维素、羟甲基纤维素钠和聚丙烯酸钠。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述稳定剂选自以下物质中的一种和几种：亚氨基二乙酸、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠、1，2-环己二醇缩水甘油和二乙烯三胺五乙酸钠；
所述的高分子加速剂为聚乙烯吡咯烷酮和/或乙二醇聚氧乙烯醚。
3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述稳定剂为二乙烯三胺五乙酸钠；
所述的高分子加速剂为聚乙烯吡咯烷酮。
4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述反应剂和抗ApoA II抗体溶液的体积比为3∶1至7∶1。
5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述反应剂和抗ApoA II抗体溶液的体积比为3∶1、4∶1、5∶1、6∶1或7∶1。
6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述的反应剂和所述抗ApoA II抗体溶液中的缓冲液PH值为5-10，所述缓冲液选自磷酸盐缓冲液、哌嗪-1，4-二乙磺酸缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、N-2-羟乙基哌嗪-N′-2-乙磺酸缓冲液、N-三(羟甲基)甲基-3-氨基丙烷磺酸缓冲液、3-环己胺基-2-羟基丙磺酸缓冲液、甘氨酸缓冲液和硼砂-氢氧化钠缓冲液中的至少一种；
所述的表面活性剂选自非离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂和两性离子表面活性剂中的一种或多种；
所述的电解质是阴离子电解质和/或阳离子电解质；
所述的防腐剂选自proclin 300、5溴-5硝基-1，3二烷、异噻唑啉酮、氯乙酰胺、2-羟基吡啶-N-氧化物和咪唑烷基脲中的一种或多种；
所述抗氧化剂选自丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、没食子酸丙酯和特丁基对苯二酚、维生素A、维生素C、维生素E和类胡萝卜素中的一种或几种，
反应促进剂是溴化乙二甲胺和/或聚凝胺。
7.根据权利要求1所述的方法，其中，所述的反应剂和所述抗ApoA II抗体溶液中的缓冲液PH值为7.0-8.3，所述缓冲液选自磷酸盐缓冲液、哌嗪-1，4-二乙磺酸缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、N-2-羟乙基哌嗪-N′-2-乙磺酸缓冲液、N-三(羟甲基)甲基-3-氨基丙烷磺酸缓冲液、甘氨酸缓冲液和3-环己胺基-2-羟基丙磺酸缓冲液中的至少一种；
所述的表面活性剂为非离子表面活性剂，所述非离子表面活性剂包括吐温系列、聚氧乙烯月桂醚、聚氧乙烯苯基醚、聚氧乙烯辛集苯醚、聚氧乙烯烷基苯基醚和聚氧乙烯壬基苯基醚中的一种或多种；
所述的电解质是阳离子电解质；
所述的防腐剂选自proclin 300、5溴-5硝基-1，3二
烷、异噻唑啉酮、氯乙酰胺、2-羟基吡啶-N-氧化物和咪唑烷基脲中的一种或多种；
所述抗氧化剂选自维生素C、丁基羟基茴香醚和二丁基羟基甲苯中的一种或几种，
反应促进剂是聚凝胺。
8.根据权利要求1所述的方法，其中，所述的反应剂和所述抗ApoA II抗体溶液中的缓冲液PH值为7.0-8.3，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液；
所述的表面活性剂为聚氧乙烯月桂醚；
所述的电解质是氯化钾；
所述的防腐剂是异噻唑啉酮；
所述抗氧化剂为维生素C；
反应促进剂是聚凝胺。
9.根据权利要求1所述的方法，其中，所述校准液包括：防腐剂0.01-2g/L、稳定剂0.1-5g/L、防霉剂0.05-0.1g/L、ApoA II抗原，其余是10-200mmol/L缓冲液；其中，所述防霉剂是丙酸钠和/或脱氧乙酸；所述的抗ApoA II抗体来自哺乳动物；所述的校准液中的缓冲液是pH 5.0-10.0之间有缓冲能力的缓冲液，其选自2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲液、1，3-二[三(羟甲基)甲氨基]丙烷缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、N-(2-乙酰氨基)-亚氨基二乙酸二钠盐缓冲液、N-2-羟乙基哌嗪-N′-2-乙磺酸缓冲液、三乙醇胺缓冲液、磷酸盐缓冲液、2-[[三(羟甲基)甲基]氨基]乙磺酸缓冲液、N-3-(羟甲基)甲基氨丙磺酸缓冲液、哌嗪-1，4-二乙磺酸缓冲液、3-环己胺基-2-羟基丙磺酸缓冲液、两性离子缓冲液和甘氨酸缓冲液中的至少一种。
10.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括实现权利要求1-9中任意一项所述的方法的所有试剂。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2011103399490A CN102507957A (zh) | 2011-11-01 | 2011-11-01 | 一种用免疫透射比浊法测定载脂蛋白a2的方法及试剂盒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2011103399490A CN102507957A (zh) | 2011-11-01 | 2011-11-01 | 一种用免疫透射比浊法测定载脂蛋白a2的方法及试剂盒 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102507957A true CN102507957A (zh) | 2012-06-20 |
Family
ID=46220063
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2011103399490A Pending CN102507957A (zh) | 2011-11-01 | 2011-11-01 | 一种用免疫透射比浊法测定载脂蛋白a2的方法及试剂盒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102507957A (zh) |
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102749459A (zh) * | 2012-07-27 | 2012-10-24 | 北京恩济和生物科技有限公司 | 一种脂蛋白(a)检测试剂盒及其制备方法 |
| CN103076456A (zh) * | 2012-12-26 | 2013-05-01 | 潍坊三维生物工程集团有限公司 | 一种用免疫透射比浊法检测α1-酸性糖蛋白的试剂盒 |
| CN103076454A (zh) * | 2012-12-26 | 2013-05-01 | 潍坊三维生物工程集团有限公司 | 一种检测载脂蛋白c3的试剂盒及利用其实现的检测方法 |
| CN104076150A (zh) * | 2013-03-28 | 2014-10-01 | 沈萍萍 | 一种hpv-e6蛋白的检测方法 |
| CN105738300A (zh) * | 2016-02-02 | 2016-07-06 | 潍坊三维生物工程集团有限公司 | 检测kappa轻链含量的试剂盒、方法及用途 |
| CN106053808A (zh) * | 2016-05-26 | 2016-10-26 | 安徽伊普诺康生物技术股份有限公司 | 一种测定脂蛋白磷脂酶a2的试剂盒及其制备方法 |
| CN106814193A (zh) * | 2016-12-23 | 2017-06-09 | 美康生物科技股份有限公司 | 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白含量检测试剂盒 |
| CN107656070A (zh) * | 2017-11-16 | 2018-02-02 | 山东诺安爱迪尔生物工程有限公司 | 一种稳定、特异性高的降钙素原检测试剂盒 |
| CN109738626A (zh) * | 2019-02-19 | 2019-05-10 | 上海复星长征医学科学有限公司 | Ngal胶乳免疫比浊法检测试剂盒及其制备方法 |
| CN110031631A (zh) * | 2019-04-02 | 2019-07-19 | 山东博科生物产业有限公司 | 稳定、特异性强的结合珠蛋白检测试剂盒 |
| CN114058676A (zh) * | 2020-07-31 | 2022-02-18 | 北京九强生物技术股份有限公司 | 抗因子Xa活性测定试剂盒 |
| CN115993457A (zh) * | 2023-03-22 | 2023-04-21 | 广州科方生物技术股份有限公司 | 一种用于化学发光免疫分析仪检测光子含量的发光剂及其制配方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030180809A1 (en) * | 1995-07-21 | 2003-09-25 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Method for measuring the amount of constituent contained in a specific lipoprotein |
| CN101374957A (zh) * | 2006-01-20 | 2009-02-25 | 株式会社Jimro | 残粒样脂蛋白中的胆固醇的测定方法 |
| CN101799475A (zh) * | 2010-03-31 | 2010-08-11 | 浙江伊利康生物技术有限公司 | 一种载脂蛋白e检测试剂 |
| WO2010148130A1 (en) * | 2009-06-17 | 2010-12-23 | Maine Standards Company, Llc | Method for measuring lipoprotein-specific apolipoproteins |
-
2011
- 2011-11-01 CN CN2011103399490A patent/CN102507957A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030180809A1 (en) * | 1995-07-21 | 2003-09-25 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Method for measuring the amount of constituent contained in a specific lipoprotein |
| CN101374957A (zh) * | 2006-01-20 | 2009-02-25 | 株式会社Jimro | 残粒样脂蛋白中的胆固醇的测定方法 |
| WO2010148130A1 (en) * | 2009-06-17 | 2010-12-23 | Maine Standards Company, Llc | Method for measuring lipoprotein-specific apolipoproteins |
| CN101799475A (zh) * | 2010-03-31 | 2010-08-11 | 浙江伊利康生物技术有限公司 | 一种载脂蛋白e检测试剂 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 赵叶，等: "免疫比浊法测定动物血清中免疫球蛋白的研究", 《中国饲料》, no. 5, 5 March 2006 (2006-03-05), pages 25 - 28 * |
Cited By (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102749459A (zh) * | 2012-07-27 | 2012-10-24 | 北京恩济和生物科技有限公司 | 一种脂蛋白(a)检测试剂盒及其制备方法 |
| CN103076456A (zh) * | 2012-12-26 | 2013-05-01 | 潍坊三维生物工程集团有限公司 | 一种用免疫透射比浊法检测α1-酸性糖蛋白的试剂盒 |
| CN103076454A (zh) * | 2012-12-26 | 2013-05-01 | 潍坊三维生物工程集团有限公司 | 一种检测载脂蛋白c3的试剂盒及利用其实现的检测方法 |
| CN103076456B (zh) * | 2012-12-26 | 2015-02-04 | 潍坊三维生物工程集团有限公司 | 一种用免疫透射比浊法检测α1-酸性糖蛋白的试剂盒 |
| CN103076454B (zh) * | 2012-12-26 | 2015-06-03 | 潍坊三维生物工程集团有限公司 | 一种检测载脂蛋白c3的试剂盒及利用其实现的检测方法 |
| CN104076150A (zh) * | 2013-03-28 | 2014-10-01 | 沈萍萍 | 一种hpv-e6蛋白的检测方法 |
| CN105738300B (zh) * | 2016-02-02 | 2019-04-30 | 潍坊三维生物工程集团有限公司 | 检测kappa轻链含量的试剂盒、方法及用途 |
| CN105738300A (zh) * | 2016-02-02 | 2016-07-06 | 潍坊三维生物工程集团有限公司 | 检测kappa轻链含量的试剂盒、方法及用途 |
| CN106053808A (zh) * | 2016-05-26 | 2016-10-26 | 安徽伊普诺康生物技术股份有限公司 | 一种测定脂蛋白磷脂酶a2的试剂盒及其制备方法 |
| CN106814193A (zh) * | 2016-12-23 | 2017-06-09 | 美康生物科技股份有限公司 | 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白含量检测试剂盒 |
| CN106814193B (zh) * | 2016-12-23 | 2018-11-23 | 美康生物科技股份有限公司 | 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白含量检测试剂盒 |
| CN107656070A (zh) * | 2017-11-16 | 2018-02-02 | 山东诺安爱迪尔生物工程有限公司 | 一种稳定、特异性高的降钙素原检测试剂盒 |
| CN109738626A (zh) * | 2019-02-19 | 2019-05-10 | 上海复星长征医学科学有限公司 | Ngal胶乳免疫比浊法检测试剂盒及其制备方法 |
| CN109738626B (zh) * | 2019-02-19 | 2021-11-26 | 复星诊断科技(上海)有限公司 | Ngal胶乳免疫比浊法检测试剂盒及其制备方法 |
| CN110031631A (zh) * | 2019-04-02 | 2019-07-19 | 山东博科生物产业有限公司 | 稳定、特异性强的结合珠蛋白检测试剂盒 |
| CN114058676A (zh) * | 2020-07-31 | 2022-02-18 | 北京九强生物技术股份有限公司 | 抗因子Xa活性测定试剂盒 |
| CN114058676B (zh) * | 2020-07-31 | 2023-12-01 | 北京九强生物技术股份有限公司 | 抗因子Xa活性测定试剂盒 |
| CN115993457A (zh) * | 2023-03-22 | 2023-04-21 | 广州科方生物技术股份有限公司 | 一种用于化学发光免疫分析仪检测光子含量的发光剂及其制配方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102507957A (zh) | 一种用免疫透射比浊法测定载脂蛋白a2的方法及试剂盒 | |
| CN102628864B (zh) | 胶乳增强免疫比浊法测定血清或尿液中心脏型脂肪酸结合蛋白的试剂盒 | |
| Warnick et al. | Dextran sulfate-Mg2+ precipitation procedure for quantitation of high-density-lipoprotein cholesterol. | |
| Dixon | Measurement of antibodies to insulin in serum | |
| CN106568978A (zh) | 血清淀粉样蛋白a检测方法及试剂 | |
| CN101571539B (zh) | 检测头孢类药物的酶联免疫试剂盒及其应用 | |
| CN107076728A (zh) | 稀释生物样品成分的分析方法 | |
| CN102023158A (zh) | 血清中肌酐的两步酶测定方法 | |
| CN103760331B (zh) | 精浆联检试剂盒 | |
| CN101819208B (zh) | 一种纳米微球免疫比浊法检测脑钠肽试剂盒 | |
| CN112501245B (zh) | 一种新型N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶检测试剂 | |
| CN102393456A (zh) | 一种用于检测hps的试剂盒 | |
| CN101503732A (zh) | 一种葡萄糖氧化酶单一液体测定试剂 | |
| CN107656069A (zh) | 全血中全量程c‑反应蛋白定量检测试剂及方法 | |
| CN107870170A (zh) | 一种酶化学发光法测定糖化血清白蛋白的试剂盒 | |
| CN104076154A (zh) | 检测叶酸的酶联免疫试剂盒及其应用 | |
| CN106086161A (zh) | 一种脂蛋白磷脂酶a2检测试剂及其制备与使用方法 | |
| CN106404686B (zh) | 一种抗肝素的血清总胆红素(钒酸盐氧化法)检测试剂盒 | |
| Steinmetz et al. | Reference limits of apolipoprotein AI and apolipoprotein B using an IFCC standardized immunonephelometric method | |
| CN106771247A (zh) | 一种β2‑微球蛋白的诊断试剂盒 | |
| CN101374957A (zh) | 残粒样脂蛋白中的胆固醇的测定方法 | |
| EP0636247B1 (en) | Method and composition for reducing the effects of endogenous alkaline phosphatase | |
| CN101762577B (zh) | 血清中甘油三酯的两步酶测定方法 | |
| CN105445409B (zh) | 一种利用同位素稀释质谱法测量糖化血红蛋白的方法 | |
| CN106353505B (zh) | 基于催化信号放大的ApoE试剂盒 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20120620 |