CN102749459A - 一种脂蛋白(a)检测试剂盒及其制备方法 - Google Patents
一种脂蛋白(a)检测试剂盒及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102749459A CN102749459A CN2012102621002A CN201210262100A CN102749459A CN 102749459 A CN102749459 A CN 102749459A CN 2012102621002 A CN2012102621002 A CN 2012102621002A CN 201210262100 A CN201210262100 A CN 201210262100A CN 102749459 A CN102749459 A CN 102749459A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- reagent
- lipoprotein
- 5mmol
- mmol
- damping fluid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Abstract
一种脂蛋白(a)的检测试剂盒。试剂盒盒体内包括:试剂R1:缓冲液、聚乙二醇、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白;试剂R2:缓冲液、结合有脂蛋白(a)单克隆抗体的乳胶粒子、吐温-20、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白。通过将样品与试剂按一定的体积比混合,使之发生一系列反应,再将反应物置于半/全自动生化分析仪下,检测主波长600nm处吸光度变化的速度,从而测算出脂蛋白(a)的浓度大小。本试剂盒具有准确、稳定、方便的优点。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域,具体地说涉及一种检测人脂蛋白(a)的检测试剂盒。
背景技术
脂蛋白(a)是一种富含胆固醇的脂蛋白,核心部分为中性脂质和apoB-100分子,其外围包绕着亲水性的apo(a),二者以二硫键共价连接;其中apo(a) 是脂蛋白(a)的特征性糖蛋白成分,主要由一种称为Kringle的特征性结构构成,Kringle由80~114个氨基酸残基组成,依靠三个内部二硫键稳定。
脂蛋白(a)主要在肝脏合成后分泌入血,血浆脂蛋白(a)浓度主要取决于脂蛋白(a)的合成速率,而与分解速率基本无关。
研究表明血栓闭塞性脉管炎病人,发现其血浆中脂蛋白(a)浓度均升高。认为脂蛋白(a)增强了ICAM-1的mRNA的表达以及ICAM-1在细胞表面的表达,从而促进白细胞(特别是单核细胞)对血管内皮的粘附性及向血管内皮的转移,在动脉粥样硬化的早期和炎性心血管疾病两方面均起重要作用。此外,研究认为,高水平血清脂蛋白(a)浓度作为脑血管疾病的危险因素,不仅与其致动脉硬化和抗纤溶作用有关,而且可能与其降低红细胞膜脂流动性和变形性有关。
脂蛋白(a)能够影响肾小球的血流动力学,加速肾脏疾病的进展。许多肾脏疾病肾小球内脂蛋白(a)的沉积,且沉积的程度与肾小球硬化的程度相关。至于脂蛋白(a)是如何沉积的却未明确。作为一个具有脂质毒性的脂蛋白,脂蛋白(a)在肾小球硬化中应用具有一定的致病作用。
在糖尿病患者中发现脂蛋白(a)血清水平明显高于一般人群,脂蛋白(a)水平的升高是糖尿病并发微血管病变、冠心病的一个重要因素,其作用方式与脂蛋白(a)致动脉粥样硬化相似。也有报道,2型糖尿病患者血清脂蛋白(a)的升高可能通过激活血小板活化途径参与糖尿病血管病变的发生及发展。另外,在肝病患者如原发胆汁性肝硬化患者中未发现有脂蛋白(a)浓度的改变。在子宫内膜异位的女性患者中发现有脂蛋白(a)水平升高,研究表明性激素对脂蛋白(a)血清浓度有影响。
目前已知的测定脂蛋白(a)的方法有放射免疫测定法、荧光免疫测定法、时间分辨荧光免疫测定法、酶联免疫测定法。这些方法具有操作繁琐、耗时长、过度浪费资源的缺点,不适于常规检验。
发明内容
本发明的目的是提供一种脂蛋白(a)的检测试剂盒。该试剂盒可直接应用于全自动生化分析仪上,结果准确性强、试剂稳定性好、使用方便、便于大规模推广。
本发明的另一目的是提供上述检测试剂盒的生产制备及使用方法。
为实现上述目的,本发明提供的试剂盒组成为:
试剂R1:缓冲液、聚乙二醇、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白;
试剂R2:缓冲液、结合有脂蛋白(a)单克隆抗体的乳胶粒子、吐温-20、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白。
本发明提供的上述试剂盒的制备方法及操做步骤如下:
(a)按下列比例配制好试剂:
试剂R1:
Tris缓冲液 200-220mmol/L
聚乙二醇 5-10 mmol/L
叠氮钠 1-5 mmol/L
乙二胺四乙酸钠 1-5mmol/L
牛血清白蛋白 1-5mmol/L;
试剂R2:
Tris缓冲液 200-220mmol/L
结合有脂蛋白(a)单克隆抗体的乳胶粒子 3.5-5%(v/v)
吐温-20 1-5mmol/L
叠氮钠 0.5-3 mmol/L
乙二胺四乙酸钠 1-5mmol/L
牛血清白蛋白 1-5mmol/L
(b)将试剂与待测样本按一定比例混合,使其完全反应;
(c)用半/全自动生化分析仪测定吸光度变化值;
(d)根据吸光度变化值计算出样本中脂蛋白(a)的浓度。
具体实施方式
下述实施例是为了更详细的解释本发明,但不应理解为本发明局限于此。
实施例1:
本发明的试剂盒举例是双试剂,其中:
试剂R1:
Tris缓冲液 200mmol/L
聚乙二醇 8 mmol/L
叠氮钠 5 mmol/L
乙二胺四乙酸钠 5mmol/L
牛血清白蛋白 5mmol/L;
试剂R2:
Tris缓冲液 200mmol/L
结合有脂蛋白(a)单克隆抗体的乳胶粒子 5%(v/v)
吐温-20 5mmol/L
叠氮钠 3 mmol/L
乙二胺四乙酸钠 5mmol/L
牛血清白蛋白 5mmol/L。
实施例2:试剂盒使用方法。
1.试剂准备,试剂为液体双试剂,开瓶即用,其中:
试剂R1:
Tris缓冲液 200mmol/L
聚乙二醇 8 mmol/L
叠氮钠 5 mmol/L
乙二胺四乙酸钠 5mmol/L
牛血清白蛋白 5mmol/L;
试剂R2:
Tris缓冲液 200mmol/L
结合有脂蛋白(a)单克隆抗体的乳胶粒子 5%(v/v)
吐温-20 5mmol/L
叠氮钠 3 mmol/L
乙二胺四乙酸钠 5mmol/L
牛血清白蛋白 5mmol/L。
2.全自动生化仪参数设置
(a)检测温度:37℃
(b)检测波长:主波长为600nm;副波长为700 nm;
(c)反应时间:8分钟,其中,温育时间5分钟,反应时间40秒,检测时间5分钟。
3.检测步骤(全部在全自动生化分析仪中完成)
(a)取255μL 试剂1和3μL血清样本混匀;
(b)将混匀后的溶液在37℃温育5分钟;
(c)添加85μL 试剂2,反应40秒后,在600nm条件下读取吸光度A1,再反应5分钟后,读取吸光度A2。
4.通过读取的连词吸光度值的计算出脂蛋白(a)的浓度。
本发明具有的优点:
该试剂盒结果准确性强、试剂稳定性好、使用方便、便于大规模推广。所需检测仪器(生化分析仪)在各大医院和检测中心普遍使用。
Claims (7)
1.一种脂蛋白(a)检测试剂盒,其组成为:试剂R1、试剂R2,其中:
a、试剂R1包括:200-220mmol/L Tris缓冲液、5-10 mmol/L聚乙二醇、1-5 mmol/L叠氮钠、1-5mmol/L乙二胺四乙酸钠、1-5mmol/L牛血清白蛋白;
b、试剂R2:200-220mmol/L Tris缓冲液、结合有脂蛋白(a)单克隆抗体的乳胶粒子、1-5mmol/L吐温-20、0.5-3 mmol/L叠氮钠、1-5mmol/L乙二胺四乙酸钠、1-5mmol/L牛血清白蛋白。
2.权利要求1的试剂盒,其特征在于:试剂R2中的脂蛋白(a)单克隆抗体的乳胶粒子的制备方法为: 10.5mg/ml的脂蛋白(a)单克隆抗体与10%的乳胶颗粒(直径50-100nm),加入到200-220mmol/L Tris缓冲液中,震荡反应4小时,离心去上清,再用200-220mmol/L Tris缓冲液稀释至0.5%,并加入0.1-0.3 mmol/L叠氮钠。
3.上述试剂盒的制备和操作方法,主要步骤为:
(a)按下列比例配制好试剂:
试剂R1:
Tris缓冲液 200-220mmol/L
聚乙二醇 5-10 mmol/L
叠氮钠 1-5 mmol/L
乙二胺四乙酸钠 1-5mmol/L
牛血清白蛋白 1-5mmol/L;
试剂R2:
Tris缓冲液 200-220mmol/L
结合有脂蛋白(a)单克隆抗体的乳胶粒子 3.5-5%(v/v)
吐温-20 1-5mmol/L
叠氮钠 0.5-3 mmol/L
乙二胺四乙酸钠 1-5mmol/L
牛血清白蛋白 1-5mmol/L
(b)将试剂与待测样本按一定比例混合,使其完全反应;
(c)用半/全自动生化分析仪测定吸光度变化值;
(d)根据吸光度变化值计算出样本中脂蛋白(a)的浓度。
4.权利要求3的方法,其特征在于,被测样品与试剂比例应控制在1:105到1:125之间。
5.权利要求3的方法,其特征在于,反应温度为37(±1)℃。
6.权利要求3的方法,其特征在于,反应时间为8-12分钟。
7.权利要求3的方法,其特征在于,用半/全自动生化分析仪检测的主波长为600nm,副波长为700 nm。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN2012102621002A CN102749459A (zh) | 2012-07-27 | 2012-07-27 | 一种脂蛋白(a)检测试剂盒及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN2012102621002A CN102749459A (zh) | 2012-07-27 | 2012-07-27 | 一种脂蛋白(a)检测试剂盒及其制备方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN102749459A true CN102749459A (zh) | 2012-10-24 |
Family
ID=47029819
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN2012102621002A Pending CN102749459A (zh) | 2012-07-27 | 2012-07-27 | 一种脂蛋白(a)检测试剂盒及其制备方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN102749459A (zh) |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103149370A (zh) * | 2013-02-27 | 2013-06-12 | 宁波美康生物科技股份有限公司 | 脂蛋白(a)检测试剂盒 |
CN103627677A (zh) * | 2013-11-26 | 2014-03-12 | 北京利德曼生化股份有限公司 | 抗Lp(a)单克隆抗体及Lp(a)胶乳增强免疫比浊检测试剂盒 |
CN105675872A (zh) * | 2014-11-21 | 2016-06-15 | 上海科华生物工程股份有限公司 | 脂蛋白(a)定量测定试剂盒及其使用方法和应用 |
CN106990234A (zh) * | 2017-05-31 | 2017-07-28 | 吉林省汇酉生物技术股份有限公司 | 一种脂蛋白(a)的检测试剂及方法 |
CN111239422A (zh) * | 2018-12-25 | 2020-06-05 | 武汉生之源生物科技股份有限公司 | 一种血清脂蛋白(a)胶乳增强比浊检测试剂盒 |
Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS6250666A (ja) * | 1985-08-30 | 1987-03-05 | Mitsubishi Rayon Co Ltd | リポ蛋白質分画定量用試薬 |
CN1065729A (zh) * | 1991-03-25 | 1992-10-28 | 第一化学药品株式会社 | 单克隆抗体 |
JPH06250666A (ja) * | 1993-03-01 | 1994-09-09 | Kawai Musical Instr Mfg Co Ltd | 電子楽器 |
US5378609A (en) * | 1988-12-28 | 1995-01-03 | Ivan E. Modrovich | Lipase single reagent system |
CN101813700A (zh) * | 2010-03-31 | 2010-08-25 | 浙江伊利康生物技术有限公司 | 一种纳米微球免疫比浊法检测β2-微球蛋白试剂盒 |
CN102323225A (zh) * | 2011-06-09 | 2012-01-18 | 董理 | 一种检测低密度脂蛋白胆固醇的方法和试剂盒 |
CN102507957A (zh) * | 2011-11-01 | 2012-06-20 | 北京利德曼生化股份有限公司 | 一种用免疫透射比浊法测定载脂蛋白a2的方法及试剂盒 |
CN102565419A (zh) * | 2011-12-26 | 2012-07-11 | 宁波美康生物科技股份有限公司 | 肌红蛋白检测试剂盒 |
-
2012
- 2012-07-27 CN CN2012102621002A patent/CN102749459A/zh active Pending
Patent Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS6250666A (ja) * | 1985-08-30 | 1987-03-05 | Mitsubishi Rayon Co Ltd | リポ蛋白質分画定量用試薬 |
US5378609A (en) * | 1988-12-28 | 1995-01-03 | Ivan E. Modrovich | Lipase single reagent system |
CN1065729A (zh) * | 1991-03-25 | 1992-10-28 | 第一化学药品株式会社 | 单克隆抗体 |
JPH06250666A (ja) * | 1993-03-01 | 1994-09-09 | Kawai Musical Instr Mfg Co Ltd | 電子楽器 |
CN101813700A (zh) * | 2010-03-31 | 2010-08-25 | 浙江伊利康生物技术有限公司 | 一种纳米微球免疫比浊法检测β2-微球蛋白试剂盒 |
CN102323225A (zh) * | 2011-06-09 | 2012-01-18 | 董理 | 一种检测低密度脂蛋白胆固醇的方法和试剂盒 |
CN102507957A (zh) * | 2011-11-01 | 2012-06-20 | 北京利德曼生化股份有限公司 | 一种用免疫透射比浊法测定载脂蛋白a2的方法及试剂盒 |
CN102565419A (zh) * | 2011-12-26 | 2012-07-11 | 宁波美康生物科技股份有限公司 | 肌红蛋白检测试剂盒 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
A.LOPEZ ET AL: "Automated Simultaneous Turbidimetric Determination of Cholesterol in β-and pre-β-Lipoproteins", 《CLINICAL CHEMISTRY》 * |
KNUT BARTL ET AL: "Turbidimetric kinetic method for serum low density lipoprotein quantitation", 《CLINICA CHIMICA ACTA》 * |
赵满仓等: "血清脂蛋白(a)免疫比浊法的建立", 《河北医药》 * |
马玉国等: "血清脂蛋白(a)免疫比浊法的建立", 《中国医药指南》 * |
Cited By (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103149370A (zh) * | 2013-02-27 | 2013-06-12 | 宁波美康生物科技股份有限公司 | 脂蛋白(a)检测试剂盒 |
CN103149370B (zh) * | 2013-02-27 | 2015-02-18 | 宁波美康生物科技股份有限公司 | 脂蛋白(a)检测试剂盒 |
CN103627677A (zh) * | 2013-11-26 | 2014-03-12 | 北京利德曼生化股份有限公司 | 抗Lp(a)单克隆抗体及Lp(a)胶乳增强免疫比浊检测试剂盒 |
CN103627677B (zh) * | 2013-11-26 | 2016-08-17 | 北京利德曼生化股份有限公司 | 抗Lp(a)单克隆抗体及Lp(a)胶乳增强免疫比浊检测试剂盒 |
CN105675872A (zh) * | 2014-11-21 | 2016-06-15 | 上海科华生物工程股份有限公司 | 脂蛋白(a)定量测定试剂盒及其使用方法和应用 |
CN106990234A (zh) * | 2017-05-31 | 2017-07-28 | 吉林省汇酉生物技术股份有限公司 | 一种脂蛋白(a)的检测试剂及方法 |
CN106990234B (zh) * | 2017-05-31 | 2019-03-26 | 吉林省汇酉生物技术股份有限公司 | 一种脂蛋白(a)的检测试剂及方法 |
CN111239422A (zh) * | 2018-12-25 | 2020-06-05 | 武汉生之源生物科技股份有限公司 | 一种血清脂蛋白(a)胶乳增强比浊检测试剂盒 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN103604931B (zh) | 一种人s100蛋白检测试剂及制备方法 | |
CN101452001B (zh) | 化学发光磁酶免疫法定量检测rbp4试剂盒 | |
CN102749459A (zh) | 一种脂蛋白(a)检测试剂盒及其制备方法 | |
JP2012530900A (ja) | リポタンパク質特異的アポリポタンパク質を測定する方法 | |
CN102901812A (zh) | 一种人甲状腺球蛋白抗体(TGAb)的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒及其检测方法 | |
US20220113322A1 (en) | Rapid measurement of total vitamin d in blood | |
JPH0720127A (ja) | 各種pivkaの測定方法および測定試薬 | |
CN104034892A (zh) | 一种肿瘤标志物afp磁微粒化学发光免疫分析试剂盒及其检测方法 | |
CN102841210A (zh) | 一种视黄醇检测试剂盒及其制备方法 | |
CN102495215B (zh) | 一种定量检测肿瘤坏死因子α的试剂盒 | |
CN102749460A (zh) | 一种肌钙蛋白检测试剂盒及其制备方法 | |
CN109187971A (zh) | 神经元特异性烯醇化酶化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法 | |
CN102226808A (zh) | 胰蛋白酶原-2化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法 | |
CN102749457A (zh) | 一种β2-微球蛋白检测试剂盒及其制备方法 | |
CN102749458A (zh) | 一种胱抑素c检测试剂盒及其制备方法 | |
Kokko et al. | Homogeneous noncompetitive immunoassay for 17β-estradiol based on fluorescence resonance energy transfer | |
CN102818900A (zh) | 一种载脂蛋白e检测试剂盒及其制备方法 | |
CN105131105A (zh) | 皮质醇免疫原、衍生物、抗体、检测试剂及制备方法 | |
CN106353505B (zh) | 基于催化信号放大的ApoE试剂盒 | |
CN210155150U (zh) | 一种全自动磁微粒化学发光免疫分析仪 | |
CN104730231B (zh) | 一种用于荧光免疫定量检测的样本缓冲液及其应用 | |
CN107870244A (zh) | 一种用于蛋白质超敏检测的免疫脂质体lamp方法 | |
CN102788878A (zh) | 一种d二聚体检测试剂盒及其制备方法 | |
CN104569430B (zh) | 一种快速定量检测心脏型脂肪酸结合蛋白的均相荧光免疫试剂组及其制备方法 | |
CN102967713A (zh) | 同型半胱氨酸检测试剂盒及其制备方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20121024 |