CN102749460A - 一种肌钙蛋白检测试剂盒及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种肌钙蛋白的检测试剂盒。试剂盒盒体内包括：试剂R1：缓冲液、聚乙二醇、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白；试剂R2：缓冲液、结合有肌钙蛋白单克隆抗体的乳胶粒子、吐温-20、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白。通过将样品与试剂按一定的体积比混合，使之发生一系列反应，再将反应物置于半/全自动生化分析仪下，检测主波长500nm处吸光度变化的速度，从而测算出肌钙蛋白的浓度大小。本试剂盒具有准确、稳定、方便的优点。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体地说涉及一种检测人肌钙蛋白的检测试剂盒。
背景技术
肌钙蛋白又称肌钙蛋白I（cTnI），是心肌钙蛋白复合物的亚单位，存在于心肌肌原纤维细肌丝上，是心肌细胞的重要结构蛋白。在心肌细胞膜完整时cTnI不能透过细胞膜进入血循环，当心肌细胞因缺血缺氧而发生变性坏死时，cTnI可通过破损的细胞膜弥散进入细胞间质，经淋巴回流入血。cTnI具有在血中出现时间早、敏感度高、特异性强和诊断窗口期长等特点，是诊断急性心肌梗死的理想指标。
目前已知的测定肌钙蛋白的方法有电化学发光免疫检测法（ECLIA）；酶联荧光分析法（ELFA）。这些方法具有操作繁琐、耗时长、过度浪费资源的缺点，不适于常规检验。
发明内容
本发明的目的是提供一种肌钙蛋白的检测试剂盒。该试剂盒可直接应用于全自动生化分析仪上，结果准确性强、试剂稳定性好、使用方便、便于大规模推广。
本发明的另一目的是提供上述检测试剂盒的生产制备及使用方法。
为实现上述目的，本发明提供的试剂盒组成为：
试剂R1：缓冲液、聚乙二醇、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白；
试剂R2：缓冲液、结合有肌钙蛋白单克隆抗体的乳胶粒子、吐温-20、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白。
本发明提供的上述试剂盒的制备方法及操做步骤如下：
（a）按下列比例配制好试剂：
试剂R1：
Tris缓冲液 200-220mmol/L
聚乙二醇 5-10 mmol/L
叠氮钠 1-5 mmol/L
乙二胺四乙酸钠 1-5mmol/L
牛血清白蛋白 1-5mmol/L；
试剂R2：
Tris缓冲液 200-220mmol/L
结合有肌钙蛋白单克隆抗体的乳胶粒子 3.5-5%（v/v）
吐温-20 1-5mmol/L
叠氮钠 0.5-3 mmol/L
乙二胺四乙酸钠 1-5mmol/L
牛血清白蛋白 1-5mmol/L
（b）将试剂与待测样本按一定比例混合，使其完全反应；
（c）用半/全自动生化分析仪测定吸光度变化值；
（d）根据吸光度变化值计算出样本中肌钙蛋白的浓度。
具体实施方式
下述实施例是为了更详细的解释本发明，但不应理解为本发明局限于此。
实施例1：
本发明的试剂盒举例是双试剂，其中：
试剂R1：
Tris缓冲液 200mmol/L
聚乙二醇 8 mmol/L
叠氮钠 5 mmol/L
乙二胺四乙酸钠 5mmol/L
牛血清白蛋白 5mmol/L；
试剂R2：
Tris缓冲液 200mmol/L
结合有肌钙蛋白单克隆抗体的乳胶粒子 5%（v/v）
吐温-20 5mmol/L
叠氮钠 3 mmol/L
乙二胺四乙酸钠 5mmol/L
牛血清白蛋白 5mmol/L。
实施例2：试剂盒使用方法。
1.试剂准备，试剂为液体双试剂，开瓶即用，其中：
试剂R1：
Tris缓冲液 200mmol/L
聚乙二醇 8 mmol/L
叠氮钠 5 mmol/L
乙二胺四乙酸钠 5mmol/L
牛血清白蛋白 5mmol/L；
试剂R2：
Tris缓冲液 200mmol/L
结合有肌钙蛋白单克隆抗体的乳胶粒子 5%（v/v）
吐温-20 5mmol/L
叠氮钠 3 mmol/L
乙二胺四乙酸钠 5mmol/L
牛血清白蛋白 5mmol/L。
2.全自动生化仪参数设置
(a)检测温度：37℃
(b)检测波长：主波长为500nm；副波长为700 nm；
(c)反应时间：8分20秒，其中，温育时间3分钟，反应时间100秒，检测时间220秒。
3.检测步骤（全部在全自动生化分析仪中完成）
(a)取150μL 试剂1和25μL血清样本混匀；
(b)将混匀后的溶液在37℃温育3分钟；
(c)添加50μL 试剂2，反应100秒后，在500nm条件下检测220秒的吸光度变化。
4.通过读取的连词吸光度值的计算出肌钙蛋白的浓度。
本发明具有的优点：
该试剂盒结果准确性强、试剂稳定性好、使用方便、便于大规模推广。所需检测仪器（生化分析仪）在各大医院和检测中心普遍使用。
Claims (7)
1.一种肌钙蛋白检测试剂盒，其组成为：试剂R1、试剂R2，其中：
a、试剂R1包括：200-220mmol/L Tris缓冲液、5-10 mmol/L聚乙二醇、1-5 mmol/L叠氮钠、1-5mmol/L乙二胺四乙酸钠、1-5mmol/L牛血清白蛋白；
b、试剂R2：200-220mmol/L Tris缓冲液、结合有肌钙蛋白单克隆抗体的乳胶粒子、1-5mmol/L吐温-20、0.5-3 mmol/L叠氮钠、1-5mmol/L乙二胺四乙酸钠、1-5mmol/L牛血清白蛋白。
2.权利要求1的试剂盒，其特征在于：试剂R2中的肌钙蛋白单克隆抗体的乳胶粒子的制备方法为： 10.5mg/ml的肌钙蛋白单克隆抗体与10%的乳胶颗粒（直径50-100nm），加入到200-220mmol/L Tris缓冲液中，震荡反应4小时，离心去上清，再用200-220mmol/L Tris缓冲液稀释至0.5%，并加入0.1-0.3 mmol/L叠氮钠。
3.上述试剂盒的制备和操作方法，主要步骤为：
（a）按下列比例配制好试剂：
试剂R1：
Tris缓冲液 200-220mmol/L
聚乙二醇 5-10 mmol/L
叠氮钠 1-5 mmol/L
乙二胺四乙酸钠 1-5mmol/L
牛血清白蛋白 1-5mmol/L；
试剂R2：
Tris缓冲液 200-220mmol/L
结合有肌钙蛋白单克隆抗体的乳胶粒子 3.5-5%（v/v）
吐温-20 1-5mmol/L
叠氮钠 0.5-3 mmol/L
乙二胺四乙酸钠 1-5mmol/L
牛血清白蛋白 1-5mmol/L
（b）将试剂与待测样本按一定比例混合，使其完全反应；
（c）用半/全自动生化分析仪测定吸光度变化值；
（d）根据吸光度变化值计算出样本中肌钙蛋白的浓度。
4.权利要求3的方法，其特征在于，被测样品与试剂比例应控制在1： 5到1：10之间。
5.权利要求3的方法，其特征在于，反应温度为37（±1）℃。
6.权利要求3的方法，其特征在于，反应时间为8-12分钟。
7.权利要求3的方法，其特征在于，用半/全自动生化分析仪检测的主波长为500nm，副波长为700 nm。
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