CN102749458A - 一种胱抑素c检测试剂盒及其制备方法 - Google Patents

Abstract

一种胱抑素C的检测试剂盒。试剂盒盒体内包括：试剂R1：缓冲液、聚乙二醇、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白；试剂R2：缓冲液、结合有胱抑素C单克隆抗体的乳胶粒子、吐温-20、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白。通过将样品与试剂按一定的体积比混合，使之发生一系列反应，再将反应物置于半/全自动生化分析仪下，检测主波长550nm处吸光度变化的速度，从而测算出胱抑素C的浓度大小。本试剂盒具有准确、稳定、方便的优点。

Description

一种胱抑素C检测试剂盒及其制备方法

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体地说涉及一种检测人胱抑素C的检测试剂盒。

背景技术

1983年首次在鸡蛋清中分离纯化得到高纯度的半胱氨酸蛋白酶抑制剂，后被命名为胱抑素C。是一种半胱氨酸蛋白酶抑制剂,也被称为γ-微量蛋白及γ-后球蛋白，广泛存在于各种组织的有核细胞和体液中,是一种低分子量、碱性非糖化蛋白质，分子量为13.3KD,由122个氨基酸残基组成,可由机体所有有核细胞产生，产生率恒定。循环中的胱抑素C仅经肾小球滤过而被清除，是一种反映肾小球滤过率变化的内源性标志物,并在近曲小管重吸收，但重吸收后被完全代谢分解，不返回血液，因此，其血中浓度同肾小球滤过决定，而不依赖任何外来因素，如性别、年龄、饮食的影响，是一种反映肾小球滤过率变化的理想同源性标志物。

目前已知的测定胱抑素C的方法有放射免疫测定法、荧光免疫测定法、时间分辨荧光免疫测定法、酶联免疫测定法。这些方法具有操作繁琐、耗时长、过度浪费资源的缺点，不适于常规检验。

发明内容

本发明的目的是提供一种胱抑素C的检测试剂盒。该试剂盒可直接应用于全自动生化分析仪上，结果准确性强、试剂稳定性好、使用方便、便于大规模推广。

本发明的另一目的是提供上述检测试剂盒的生产制备及使用方法。

为实现上述目的，本发明提供的试剂盒组成为：

试剂R1：缓冲液、聚乙二醇、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白；

试剂R2：缓冲液、结合有胱抑素C单克隆抗体的乳胶粒子、吐温-20、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白。

本发明提供的上述试剂盒的制备方法及操做步骤如下：

（a）按下列比例配制好试剂：

试剂R1：

Tris缓冲液      200-220mmol/L

聚乙二醇        5-10 mmol/L

叠氮钠          1-5 mmol/L

乙二胺四乙酸钠  1-5mmol/L

牛血清白蛋白    1-5mmol/L；

试剂R2：

Tris缓冲液      200-220mmol/L

结合有胱抑素C单克隆抗体的乳胶粒子   3.5-5%（v/v）

吐温-20         1-5mmol/L

叠氮钠          0.5-3 mmol/L

乙二胺四乙酸钠  1-5mmol/L

牛血清白蛋白    1-5mmol/L

（b）将试剂与待测样本按一定比例混合，使其完全反应；

（c）用半/全自动生化分析仪测定吸光度变化值；

（d）根据吸光度变化值计算出样本中胱抑素C的浓度。

具体实施方式

下述实施例是为了更详细的解释本发明，但不应理解为本发明局限于此。

实施例1：

本发明的试剂盒举例是双试剂，其中：

试剂R1：

Tris缓冲液      200mmol/L

聚乙二醇        8 mmol/L

叠氮钠          5 mmol/L

乙二胺四乙酸钠  5mmol/L

牛血清白蛋白    5mmol/L；

试剂R2：

Tris缓冲液      200mmol/L

结合有胱抑素C单克隆抗体的乳胶粒子   5%（v/v）

吐温-20         5mmol/L

叠氮钠          3 mmol/L

乙二胺四乙酸钠  5mmol/L

牛血清白蛋白    5mmol/L。

实施例2：试剂盒使用方法。

1.试剂准备，试剂为液体双试剂，开瓶即用，其中：

试剂R1：

Tris缓冲液      200mmol/L

聚乙二醇        8 mmol/L

叠氮钠          5 mmol/L

乙二胺四乙酸钠  5mmol/L

牛血清白蛋白    5mmol/L；

试剂R2：

Tris缓冲液      200mmol/L

结合有胱抑素C单克隆抗体的乳胶粒子   5%（v/v）

吐温-20         5mmol/L

叠氮钠          3 mmol/L

乙二胺四乙酸钠  5mmol/L

牛血清白蛋白    5mmol/L。

2.全自动生化仪参数设置

(a)检测温度：37℃

(b)检测波长：主波长为550nm；副波长为700 nm；

(c)反应时间：8分钟，其中，温育时间5分钟，反应时间1分钟，检测时间2分钟。

3.检测步骤（全部在全自动生化分析仪中完成）

(a)取240μL 试剂1和3μL血清样本混匀；

(b)将混匀后的溶液在37℃温育5分钟；

(c)添加60μL 试剂2，反应1分钟后，在550nm条件下检测2分钟的吸光度变化。

4.通过吸光度变化的计算出胱抑素C的浓度。

本发明具有的优点：

该试剂盒结果准确性强、试剂稳定性好、使用方便、便于大规模推广。所需检测仪器（生化分析仪）在各大医院和检测中心普遍使用。

Claims (7)

1.一种胱抑素C检测试剂盒，其组成为：试剂R1、试剂R2，其中：

a、试剂R1包括：200-220mmol/L Tris缓冲液、5-10 mmol/L聚乙二醇、1-5 mmol/L叠氮钠、1-5mmol/L乙二胺四乙酸钠、1-5mmol/L牛血清白蛋白；

b、试剂R2：200-220mmol/L Tris缓冲液、结合有胱抑素C单克隆抗体的乳胶粒子、1-5mmol/L吐温-20、0.5-3 mmol/L叠氮钠、1-5mmol/L乙二胺四乙酸钠、1-5mmol/L牛血清白蛋白。

2.权利要求1的试剂盒，其特征在于：试剂R2中的胱抑素C单克隆抗体的乳胶粒子的制备方法为： 10.5mg/ml的胱抑素C单克隆抗体与10%的乳胶颗粒（直径50-100nm），加入到200-220mmol/L Tris缓冲液中，震荡反应4小时，离心去上清，再用200-220mmol/L Tris缓冲液稀释至0.5%，并加入0.1-0.3 mmol/L叠氮钠。

3.上述试剂盒的制备和操作方法，主要步骤为：

（a）按下列比例配制好试剂：

试剂R1：

Tris缓冲液      200-220mmol/L

聚乙二醇        5-10 mmol/L

叠氮钠          1-5 mmol/L

乙二胺四乙酸钠  1-5mmol/L

牛血清白蛋白    1-5mmol/L；

试剂R2：

Tris缓冲液      200-220mmol/L

结合有胱抑素C单克隆抗体的乳胶粒子   3.5-5%（v/v）

吐温-20         1-5mmol/L

叠氮钠          0.5-3 mmol/L

乙二胺四乙酸钠  1-5mmol/L

牛血清白蛋白    1-5mmol/L

（b）将试剂与待测样本按一定比例混合，使其完全反应；

（c）用半/全自动生化分析仪测定吸光度变化值；

（d）根据吸光度变化值计算出样本中胱抑素C的浓度。

4.权利要求3的方法，其特征在于，被测样品与试剂比例应控制在1：60到1：80之间。

5.权利要求3的方法，其特征在于，反应温度为37（±1）℃。

6.权利要求3的方法，其特征在于，反应时间为8-10分钟。

7.权利要求3的方法，其特征在于，用半/全自动生化分析仪检测的主波长为550nm，副波长为700 nm。