JPS6250666A - リポ蛋白質分画定量用試薬 - Google Patents
リポ蛋白質分画定量用試薬Info
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- JPS6250666A JPS6250666A JP19139785A JP19139785A JPS6250666A JP S6250666 A JPS6250666 A JP S6250666A JP 19139785 A JP19139785 A JP 19139785A JP 19139785 A JP19139785 A JP 19139785A JP S6250666 A JPS6250666 A JP S6250666A
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- Japan
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- polyethyleneimine
- lipoprotein
- reagent
- hydroxide
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
本発明はリポ蛋白質を比濁法により分画定量するに有用
な試薬に関するものである。
な試薬に関するものである。
従来より動脈硬化症の進行に脂質が重要な役割を果して
おり、種々の脂質の測定が行われているが、その中でも
リポ蛋白質の測定は臨床的に見ても重要なものの１つで
ある。
おり、種々の脂質の測定が行われているが、その中でも
リポ蛋白質の測定は臨床的に見ても重要なものの１つで
ある。
［従来の技術］
血清リポ蛋白質の測定法としては電気泳動法。
低温エタノール法、カラムクロマトグラフィー法、超遠
心分離法、ヘパリン沈殿法等がある。この中でヘパリン
沈殿法が最も筒便に測定できる方法である。この方法は
ヘパリンと２価の陽イオンとからなる水溶液がβ−リポ
蛋白質が存在すると沈殿を生ずる性質を利用ししたもの
でこの沈殿による濁りを比濁法により測定してリポ蛋白
質を定量する方法である。
心分離法、ヘパリン沈殿法等がある。この中でヘパリン
沈殿法が最も筒便に測定できる方法である。この方法は
ヘパリンと２価の陽イオンとからなる水溶液がβ−リポ
蛋白質が存在すると沈殿を生ずる性質を利用ししたもの
でこの沈殿による濁りを比濁法により測定してリポ蛋白
質を定量する方法である。
血清中のリボ蛋白質はその分子の密度から高比重リポ蛋
白質（ＨＤＬ）、低比重リポ蛋白質（ＬＤＬ）、超低比
重リポ蛋白質（ＶＬＤＬ）、 カイロミクロンの４種に
大別されるが、ヘパリンは２価の陽イオンの存在下でＬ
ＤＬ、ＶＬＤＬ、カイロミクロンの３種と不溶性の複合
体を形成して濁りを形成し、この濁度はリポ蛋白質の濃
度に比例するため、比濁法によりリボ蛋白質を定量でき
るものである。
白質（ＨＤＬ）、低比重リポ蛋白質（ＬＤＬ）、超低比
重リポ蛋白質（ＶＬＤＬ）、 カイロミクロンの４種に
大別されるが、ヘパリンは２価の陽イオンの存在下でＬ
ＤＬ、ＶＬＤＬ、カイロミクロンの３種と不溶性の複合
体を形成して濁りを形成し、この濁度はリポ蛋白質の濃
度に比例するため、比濁法によりリボ蛋白質を定量でき
るものである。
［発明が解決すべき問題点］
しかしヘパリンは抽出する動物の種類あるーいは臓器の
種類によって分子量、活性等が異なるという欠点を有し
て有している０例えば、分子量の差が大きいと生ずる沈
殿により得られる濁度が大きく異なってくるため、リボ
蛋白質と濁度の関係を示す検量線が異なり、従ってヘパ
リンのロフト毎に検量線を測定し直さなければならない
という不便があった。
種類によって分子量、活性等が異なるという欠点を有し
て有している０例えば、分子量の差が大きいと生ずる沈
殿により得られる濁度が大きく異なってくるため、リボ
蛋白質と濁度の関係を示す検量線が異なり、従ってヘパ
リンのロフト毎に検量線を測定し直さなければならない
という不便があった。
又ヘパリン以外にも例えばポリアクリル酸、ポリスチレ
ンスルホン酸及びこれらのアルカリ金属塩等リボ蛋白質
と不溶性の複合体を形成するポリアニオンの存在が知ら
れている。しかし、これらのポリアニオンは濁度とリボ
蛋白質濃度との間に直線性のある相関性は得られず、こ
のため定量用試薬としては用い得ないものであり、ヘパ
リン以外にこの直線的相関性を示す試薬は知られていな
い。
ンスルホン酸及びこれらのアルカリ金属塩等リボ蛋白質
と不溶性の複合体を形成するポリアニオンの存在が知ら
れている。しかし、これらのポリアニオンは濁度とリボ
蛋白質濃度との間に直線性のある相関性は得られず、こ
のため定量用試薬としては用い得ないものであり、ヘパ
リン以外にこの直線的相関性を示す試薬は知られていな
い。
本発明者等はこのような現状に鑑み、鋭意検討を行った
結果、ポリエチレンイミンのスルホン化物が上記直線的
相関性を示し、しかも組み合わせる陽イオンの種類、量
を適切に選択すればＬＤＬ、ＶＬＤＬ、 カイロミク
ロンの３種のリボ蛋白質の合計量や、ＶＬＤＬ、カイロ
ミクロンの２種のリボ蛋白質の合計量及びカイロミクロ
ンの量を比濁法により測定できることを見出し本発明に
到達したものである。
結果、ポリエチレンイミンのスルホン化物が上記直線的
相関性を示し、しかも組み合わせる陽イオンの種類、量
を適切に選択すればＬＤＬ、ＶＬＤＬ、 カイロミク
ロンの３種のリボ蛋白質の合計量や、ＶＬＤＬ、カイロ
ミクロンの２種のリボ蛋白質の合計量及びカイロミクロ
ンの量を比濁法により測定できることを見出し本発明に
到達したものである。
［問題点を解決するための手段］
即ち、本発明の要旨は分子量３００以上のポリエチレン
イミン中の−ＮＨ−基と−ＮＨ２基との５■ｏ１％以上
がスルホン化されたポリエチレンイミンを含む水溶液か
らなるリポ蛋白質分画定量用試薬にある。
イミン中の−ＮＨ−基と−ＮＨ２基との５■ｏ１％以上
がスルホン化されたポリエチレンイミンを含む水溶液か
らなるリポ蛋白質分画定量用試薬にある。
ポリエチレンイミンはエチレンイミンの開環重合により
作成され、多くの場合第１、第２、第３級アミン窒素を
含む分岐構造となっている０本発明で用いられるポリエ
チレンイミンは重量平均分子量が３００以上であること
が必要である０分子量が３００未満ではリボ蛋白質との
不溶性複合体の生成が不充分となるので好ましくない、
またこのポリエチレンイミンとしては第１、第２、第３
級アミン窒素の含有比率が１：１：１乃至１：２＝１の
範囲のものを用いることができる。
作成され、多くの場合第１、第２、第３級アミン窒素を
含む分岐構造となっている０本発明で用いられるポリエ
チレンイミンは重量平均分子量が３００以上であること
が必要である０分子量が３００未満ではリボ蛋白質との
不溶性複合体の生成が不充分となるので好ましくない、
またこのポリエチレンイミンとしては第１、第２、第３
級アミン窒素の含有比率が１：１：１乃至１：２＝１の
範囲のものを用いることができる。
このようなポリエチレンイミンはエチレンイミンを二酸
化炭素、塩酸、臭１ヒ水素酸、ｐ−１ルエンスルホン酸
、塩化アルミニウム、三弗化硼素等を触媒として開環重
合することにより得られる。
化炭素、塩酸、臭１ヒ水素酸、ｐ−１ルエンスルホン酸
、塩化アルミニウム、三弗化硼素等を触媒として開環重
合することにより得られる。
又、ポリエチレンイミンの−ＮＨ−基と−ＮＨ２基との
５ｍｏ １％以上がスルホン化されている必要があり、
スルホン化度が５ｍｏ １％未満ではスルホン化された
基が少なすぎてリポ蛋白質量と濃度の間に直線的な相関
がみられず、試薬としては不良なものとなる。
５ｍｏ １％以上がスルホン化されている必要があり、
スルホン化度が５ｍｏ １％未満ではスルホン化された
基が少なすぎてリポ蛋白質量と濃度の間に直線的な相関
がみられず、試薬としては不良なものとなる。
このスルホン化されたポリエチレンイミンはそのまま、
即ちスルホン酸型のままで用いることもできるが、スル
ホン酸基の一部又は全部をアルカリ金属あるいはアルカ
リ土類金属の水酸化物又はアンモニアあるいは水酸化ア
ンモニウムで中和しであることが好ましい。
即ちスルホン酸型のままで用いることもできるが、スル
ホン酸基の一部又は全部をアルカリ金属あるいはアルカ
リ土類金属の水酸化物又はアンモニアあるいは水酸化ア
ンモニウムで中和しであることが好ましい。
以下にポリエチレンイミンのスルホン化方法について述
べる。
べる。
ポリエチレンイミンのスルホン化方法としては、クロル
スルホン酸、熱濃硫酸又は発煙硫酸によりスルホン化す
る方法がある。
スルホン酸、熱濃硫酸又は発煙硫酸によりスルホン化す
る方法がある。
クロルスルホン酸によるスルホン化方法は、ポリエチレ
ンイミンをメタノール等の溶媒に溶解させておき、クロ
ルスルホン酸を適当量添加し反応させることにより出来
る。溶媒としてはメタノール、インプロパツール等のア
ルコール類、アセトン、メチルエチルケトン等のケトン
類、クロロホルム等のハロゲン化炭化水素等が使用出来
る。ポリエチレンイミンの溶媒に対する濃度は０．５〜
３０重量％とすべきである。０．５重量％未満では溶媒
使用量が多くなりすぎてクロルスルホン化後のポリマー
の回収が困難となる。又、３０重量％を越える濃度では
クロルスルホン化反応時の反応熱の制御が困難となる。
ンイミンをメタノール等の溶媒に溶解させておき、クロ
ルスルホン酸を適当量添加し反応させることにより出来
る。溶媒としてはメタノール、インプロパツール等のア
ルコール類、アセトン、メチルエチルケトン等のケトン
類、クロロホルム等のハロゲン化炭化水素等が使用出来
る。ポリエチレンイミンの溶媒に対する濃度は０．５〜
３０重量％とすべきである。０．５重量％未満では溶媒
使用量が多くなりすぎてクロルスルホン化後のポリマー
の回収が困難となる。又、３０重量％を越える濃度では
クロルスルホン化反応時の反応熱の制御が困難となる。
又、クロルスルホン酸の使用量はポリエチレンイミン１
００重量部に対し、２０重量部以上とすることが好まし
い、２０重量部未満ではスルホン化反応が充分進行しな
くなる。
００重量部に対し、２０重量部以上とすることが好まし
い、２０重量部未満ではスルホン化反応が充分進行しな
くなる。
なお、ポリエチレンイミンのアミ７基のうち、第１級ア
ミン窒素の２つの水素を両方共スルホン化することは難
しく、通常は片方のみのスルホン化にとどまる。
ミン窒素の２つの水素を両方共スルホン化することは難
しく、通常は片方のみのスルホン化にとどまる。
熱濃硫酸によるスルホン化においては９６乃至１００重
量％の純度を有する濃硫酸をポリエチレンイミンに直接
添加し、加熱することによってスルホン化できる。ここ
で、ポリエチレンイミンに対して反応させる硫酸の量及
び反応温度によりスルホン化の程度がきまる。熱濃硫酸
の使用量はポリエチレンイミン１００重量部に対し、２
０重量部以上とすべきであり、局所的に大量に添加して
ポリエチレンイミンからの脱水反応を引起こさないよう
に濃硫酸をポリエチレンイミンに徐々に加え、濃硫酸添
加後に所望の反応温度になるように加熱することが好ま
しい、該反応温度は１００〜２００℃とし、反応時間は
３０〜１２０分とするのが良い、高温の場合は比較的短
時間で反応が終了し、低温の場合は比較的長時間かかる
。
量％の純度を有する濃硫酸をポリエチレンイミンに直接
添加し、加熱することによってスルホン化できる。ここ
で、ポリエチレンイミンに対して反応させる硫酸の量及
び反応温度によりスルホン化の程度がきまる。熱濃硫酸
の使用量はポリエチレンイミン１００重量部に対し、２
０重量部以上とすべきであり、局所的に大量に添加して
ポリエチレンイミンからの脱水反応を引起こさないよう
に濃硫酸をポリエチレンイミンに徐々に加え、濃硫酸添
加後に所望の反応温度になるように加熱することが好ま
しい、該反応温度は１００〜２００℃とし、反応時間は
３０〜１２０分とするのが良い、高温の場合は比較的短
時間で反応が終了し、低温の場合は比較的長時間かかる
。
発煙硫酸の場合の条件は熱濃硫酸の場合に準じ、これよ
り若干マイルドな条件とすればよい、即ち発煙硫酸は熱
濃硫酸に比べて反応性が高いため発煙硫酸の使用量はポ
リエチレンイミン１００重量部に対し１０重量部以上で
あればよい、また、反応温度は３０℃〜１５０℃とし、
反応時間は３０〜１２０分とするのがよい、高温の場合
は比較的短時間で反応が終了し、低温の場合は比較的時
間がかかる。
り若干マイルドな条件とすればよい、即ち発煙硫酸は熱
濃硫酸に比べて反応性が高いため発煙硫酸の使用量はポ
リエチレンイミン１００重量部に対し１０重量部以上で
あればよい、また、反応温度は３０℃〜１５０℃とし、
反応時間は３０〜１２０分とするのがよい、高温の場合
は比較的短時間で反応が終了し、低温の場合は比較的時
間がかかる。
このスルホン化程度はフーリエ変換赤外吸収スペクトル
分析により確認できる。
分析により確認できる。
以上のようにして得られたポリエチレンイミンスルホン
化物は未反応のクロルスルホン酸、硫酸等を含むため、
これを精製により除去する０例えばポリエチレンイミン
のスルホン化物を水に溶解させ、メタノール、インプロ
パツール等のアルコール中に滴下し、得られる沈殿物を
分離後乾燥することにより上記不純物を除去できる。こ
の精製時に使用する水の量はできるだけ少ないことが好
ましい、即ち、アルコール中に適下するポリエチレンイ
ミンのスルホン化物水溶液の濃度は１０〜８０重量％と
するのが好ましく、３０〜６０重量％とすることがより
好ましい、１０重量％未満では精製により回収されるポ
リエチレンイミンスルホン化物の量が少量となる。又８
０重量％を越えると水溶液の調製が困難となる。
化物は未反応のクロルスルホン酸、硫酸等を含むため、
これを精製により除去する０例えばポリエチレンイミン
のスルホン化物を水に溶解させ、メタノール、インプロ
パツール等のアルコール中に滴下し、得られる沈殿物を
分離後乾燥することにより上記不純物を除去できる。こ
の精製時に使用する水の量はできるだけ少ないことが好
ましい、即ち、アルコール中に適下するポリエチレンイ
ミンのスルホン化物水溶液の濃度は１０〜８０重量％と
するのが好ましく、３０〜６０重量％とすることがより
好ましい、１０重量％未満では精製により回収されるポ
リエチレンイミンスルホン化物の量が少量となる。又８
０重量％を越えると水溶液の調製が困難となる。
ポリエチレンイミンスルホン化物の中和は該スルホン化
物の水溶液を作成し、所定量のアルカリ金属あるいはア
ルカリ土類金属の水酸化物やアンモニア、水酸化アンモ
ニウム又はその水溶液を添加して中和することが好まし
い、水酸化アルカリ金属としては水酸化ナトリウム、水
酸化カリウム、水酸化アルカリ土類金属としては水酸化
マグネシウム、水酸化バリウム等を例示することができ
る。
物の水溶液を作成し、所定量のアルカリ金属あるいはア
ルカリ土類金属の水酸化物やアンモニア、水酸化アンモ
ニウム又はその水溶液を添加して中和することが好まし
い、水酸化アルカリ金属としては水酸化ナトリウム、水
酸化カリウム、水酸化アルカリ土類金属としては水酸化
マグネシウム、水酸化バリウム等を例示することができ
る。
この中和したスルホン化物もアルコールを用いた沈殿法
で精製することができる。
で精製することができる。
［作用及び効果］
このようにして得られたポリエチレンイミンスルホン化
物はヘパリン沈殿法の場合と同様に濁度はリポ蛋白質の
濃度と直線的相関を示し、これにより本発明のポリエチ
レンイミンスルホン化物がリポ蛋白質の比濁法による定
量用試薬として用いることができることが明らかである
。さらにポリマー濃度、２価陽イオン濃度、ｐＨ及び系
のイオン濃度を制御するために添加する塩化ナトリウム
等の電解質等の測定条件をかえることにより各種のリポ
蛋白質の分画が可能であり、さらには広義のβ−リポ蛋
白質即ちＬＤＬとＶＬＤＬの合計量を定量することも可
能である。即ち、例えば、試薬中の塩化ナトリウム濃度
を非常に高くすると何れのリポ蛋白質も沈殿となること
はないが、塩化ナトリウム濃度を次第に低下させていく
と最も密度の小さいカイロミクロンのみが沈殿を形成し
、他のリポ蛋白質は沈殿を生じない、さらに塩化ナトリ
ウム濃度を低下させていくとカイロミクロンと次に密度
の小さいＶＬＤＬとのみが沈殿を生ずる。さらに塩化ナ
トリウムを低下させていくとカイロミクロンとＶＬＤＬ
とＬＤＬのみが沈殿を生ずる。このように系に添加する
塩化ナトリウムの量を調節することによりリボ蛋白質の
分画沈殿が可能となる。さらには計算により広義のβ−
リボ蛋白質を定量することも可能である。なお、リボ蛋
白質を沈殿させるのに必要な２価陽イオン濃度は同時に
添加した塩化ナトリウム濃度によって変化するので各々
の場合に適した２価陽イオン濃度を選択する必要がある
。同様にポリエチレンスルホン化物の濃度も塩化ナトリ
ウム濃度に影響を受けるので各々の場合に適したポリマ
ー濃度を選択する必要がある。これら上記の測定条件を
適切に選択することによりリボ蛋白質の分画及び比濁法
による定量が可能となるものである。
物はヘパリン沈殿法の場合と同様に濁度はリポ蛋白質の
濃度と直線的相関を示し、これにより本発明のポリエチ
レンイミンスルホン化物がリポ蛋白質の比濁法による定
量用試薬として用いることができることが明らかである
。さらにポリマー濃度、２価陽イオン濃度、ｐＨ及び系
のイオン濃度を制御するために添加する塩化ナトリウム
等の電解質等の測定条件をかえることにより各種のリポ
蛋白質の分画が可能であり、さらには広義のβ−リポ蛋
白質即ちＬＤＬとＶＬＤＬの合計量を定量することも可
能である。即ち、例えば、試薬中の塩化ナトリウム濃度
を非常に高くすると何れのリポ蛋白質も沈殿となること
はないが、塩化ナトリウム濃度を次第に低下させていく
と最も密度の小さいカイロミクロンのみが沈殿を形成し
、他のリポ蛋白質は沈殿を生じない、さらに塩化ナトリ
ウム濃度を低下させていくとカイロミクロンと次に密度
の小さいＶＬＤＬとのみが沈殿を生ずる。さらに塩化ナ
トリウムを低下させていくとカイロミクロンとＶＬＤＬ
とＬＤＬのみが沈殿を生ずる。このように系に添加する
塩化ナトリウムの量を調節することによりリボ蛋白質の
分画沈殿が可能となる。さらには計算により広義のβ−
リボ蛋白質を定量することも可能である。なお、リボ蛋
白質を沈殿させるのに必要な２価陽イオン濃度は同時に
添加した塩化ナトリウム濃度によって変化するので各々
の場合に適した２価陽イオン濃度を選択する必要がある
。同様にポリエチレンスルホン化物の濃度も塩化ナトリ
ウム濃度に影響を受けるので各々の場合に適したポリマ
ー濃度を選択する必要がある。これら上記の測定条件を
適切に選択することによりリボ蛋白質の分画及び比濁法
による定量が可能となるものである。
［実施例］
以下に実施例により本発明をさらに説明する。
実施例１
重量平均分子量１万のポリエチレンイミン２２ｇを３０
０ｇのクロロホルムに溶解し、クロルスルホン酸を３３
ｍ１添加することによってスルホン化を行った。このス
ルホン化ポリエチレンイミンはクロロホルムに不溶であ
り、精製物は沈殿となる。この沈殿を濾別した後、メタ
ノールで充分洗浄し、室温で真空乾燥して白色粉体を得
た。この粉体にさらにクロルスルホン酸３３ｍ１をｆｉ
加して良く攪拌した後、脱気しながら徐々に昇温し、真
空下１００℃で２時間保持した。このようにして得られ
た固体をミキサーを用いてメタノール中で粉砕洗浄する
ことにより白色粉体を得た。この粉体を乾燥後水に溶解
させ、イオン交換樹脂で想理することにより不純物であ
る電解質を除去した後、ＮａＯＨ水溶液を添加して系の
ｐＨを７にコントロールした０次いでエバポレーターを
用いて脱水することによってポリエチレンイミンスルホ
ン化物を得た。この時のスルホン化度は４０ｍｏ１％で
あった。
０ｇのクロロホルムに溶解し、クロルスルホン酸を３３
ｍ１添加することによってスルホン化を行った。このス
ルホン化ポリエチレンイミンはクロロホルムに不溶であ
り、精製物は沈殿となる。この沈殿を濾別した後、メタ
ノールで充分洗浄し、室温で真空乾燥して白色粉体を得
た。この粉体にさらにクロルスルホン酸３３ｍ１をｆｉ
加して良く攪拌した後、脱気しながら徐々に昇温し、真
空下１００℃で２時間保持した。このようにして得られ
た固体をミキサーを用いてメタノール中で粉砕洗浄する
ことにより白色粉体を得た。この粉体を乾燥後水に溶解
させ、イオン交換樹脂で想理することにより不純物であ
る電解質を除去した後、ＮａＯＨ水溶液を添加して系の
ｐＨを７にコントロールした０次いでエバポレーターを
用いて脱水することによってポリエチレンイミンスルホ
ン化物を得た。この時のスルホン化度は４０ｍｏ１％で
あった。
実施例２〜７、比較例１．２
ポリエチレンイミンの分子量及び反応に用いるクロルス
ルホン酸量を変えた以外は実施例１と同様にして分子量
及びスルホン化度の異なる反応生成物を得、リポ蛋白質
定量への適用性を調べた。
ルホン酸量を変えた以外は実施例１と同様にして分子量
及びスルホン化度の異なる反応生成物を得、リポ蛋白質
定量への適用性を調べた。
また、ＮａＯＨ水溶液による中和を行わない以外は実施
例１と同様にして得たものについても適用性を調べた。
例１と同様にして得たものについても適用性を調べた。
これらの結果を実施例１の結果とともに＄１表に示す、
なお、血清添加及びリポ蛋白血清と吸光度との直線的相
関関係の有無については後述の実施例８に準じた方法で
調べた。
なお、血清添加及びリポ蛋白血清と吸光度との直線的相
関関係の有無については後述の実施例８に準じた方法で
調べた。
実施例８
塩化カルシウム０．０５ ｍ ｏ ｌ ／ ｌ水溶液に
実施例１で得たポリエチレンイミンスルホン化物をポリ
マー濃度が０，０１ｗｔ％になるように添加した。
実施例１で得たポリエチレンイミンスルホン化物をポリ
マー濃度が０，０１ｗｔ％になるように添加した。
この水溶液４ｍＪＬに市販のリポ蛋白血清を０．１ｍ文
添加して生じた濁りを１ｃｍ角の石英セルを用いて波長
５７８ｎｍにて吸光度測定すると０．２４であった。さ
らにこれに上記リポ蛋白血清を０゜１ｍＪｌづつ添加し
ながら吸光度を測定して０．４ｍ文まで測定した。この
時の吸光度は各々０．５０．０．７６．１．０２であり
吸光度と血清量との間に直線的な相関関係のあることが
確認され、比濁法による定量が可能であることが示され
た。得られた沈殿を遠心分離により回収し、電気泳動法
により同定を行ったところ、沈殿はＬＤＬ、ＶＬＤＬ及
びカイロミクロンより構成されていることが確認された
。
添加して生じた濁りを１ｃｍ角の石英セルを用いて波長
５７８ｎｍにて吸光度測定すると０．２４であった。さ
らにこれに上記リポ蛋白血清を０゜１ｍＪｌづつ添加し
ながら吸光度を測定して０．４ｍ文まで測定した。この
時の吸光度は各々０．５０．０．７６．１．０２であり
吸光度と血清量との間に直線的な相関関係のあることが
確認され、比濁法による定量が可能であることが示され
た。得られた沈殿を遠心分離により回収し、電気泳動法
により同定を行ったところ、沈殿はＬＤＬ、ＶＬＤＬ及
びカイロミクロンより構成されていることが確認された
。
実施例９
塩化カルシウム０．０５ｍｏｌ、塩化ナトリウムを０．
１０ｍｏｌを水１Ｍに溶解させた水溶液に実施例１で得
られたポリエチレンイミンスルホン化物をポリマー濃度
が０．０１ｗｔ％となるように添加した。この水溶液に
市販のリポ蛋白血清を０．１ｍｌ添加して生じた濁りを
吸光度測定すると０．１６であった。これにさらに上記
リポ蛋白血清を０゜１ｍＪＬづつ０．４ ｍ ｌまで添
加した時の吸光度は各々０．３３．０．５１．０．６６
であり吸光度と血清量との間に直線的な相関関係のある
ことが確認され。
１０ｍｏｌを水１Ｍに溶解させた水溶液に実施例１で得
られたポリエチレンイミンスルホン化物をポリマー濃度
が０．０１ｗｔ％となるように添加した。この水溶液に
市販のリポ蛋白血清を０．１ｍｌ添加して生じた濁りを
吸光度測定すると０．１６であった。これにさらに上記
リポ蛋白血清を０゜１ｍＪＬづつ０．４ ｍ ｌまで添
加した時の吸光度は各々０．３３．０．５１．０．６６
であり吸光度と血清量との間に直線的な相関関係のある
ことが確認され。
比濁法による定量が可能であることが示された。
また、得られた沈殿を遠心分離により回収し、電気泳動
法により同定を行ったところ、沈殿はカイロミクロン及
びＶＬＤＬのみで構成されていることが確認された。
法により同定を行ったところ、沈殿はカイロミクロン及
びＶＬＤＬのみで構成されていることが確認された。
実施例１Ｏ
塩化カルシウム０．０５ ｍ ｏ １、塩化ナトリウム
を０，１５ｍｏｌを水１１に溶解させた水溶液に実施例
１で得られたポリエチレンイミンスルホン化物をポリマ
ー濃度がＯ，０１ｗｔ％となるよう−に添加した。この
水溶液に市販のリボ蛋白血清を０．１ｍｌ添加して生じ
た濁りを吸光度測定すると０．０１９であった。これに
さらに上記リボ蛋白血清を０、１ ｍ ｌづつ０．４
ｍ ｉまで添加した時の吸光度は各々０，０３７．０．
０５４．０．０７３であり吸光度と血清量との間に直線
的な相関関係のあることが確認され、比濁法による定量
が可能であることが示された。また、得られた沈殿を遠
心分離により回収し、電気泳動法により同定を行ったと
ころ、沈殿はカイロミクロンのみで構成されていること
が確認された。
を０，１５ｍｏｌを水１１に溶解させた水溶液に実施例
１で得られたポリエチレンイミンスルホン化物をポリマ
ー濃度がＯ，０１ｗｔ％となるよう−に添加した。この
水溶液に市販のリボ蛋白血清を０．１ｍｌ添加して生じ
た濁りを吸光度測定すると０．０１９であった。これに
さらに上記リボ蛋白血清を０、１ ｍ ｌづつ０．４
ｍ ｉまで添加した時の吸光度は各々０，０３７．０．
０５４．０．０７３であり吸光度と血清量との間に直線
的な相関関係のあることが確認され、比濁法による定量
が可能であることが示された。また、得られた沈殿を遠
心分離により回収し、電気泳動法により同定を行ったと
ころ、沈殿はカイロミクロンのみで構成されていること
が確認された。
以上述べた実施例の結果から本願発明のリボ蛋白質分画
定量用試薬を用いるとリボ蛋白質の各構成成分を算出す
ることが可能であることがわかる。
定量用試薬を用いるとリボ蛋白質の各構成成分を算出す
ることが可能であることがわかる。
また、広義のβ−リボ蛋白質、即ちＶＬＤＬとＬＤＬと
の和を求めることも可能である。
の和を求めることも可能である。
第１表
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）分子量３００以上のポリエチレンイミン中の−ＮＨ
−基と−ＮＨ２基との５ｍｏｌ％以上がスルホン化され
たポリエチレンイミンを含む水溶液からなるリポ蛋白質
分画定量用試薬。 ２）スルホン化されたポリエチレンイミンがアルカリ金
属あるいはアルカリ土類金属の水酸化物又はアンモニウ
ムあるいは水酸化アンモニウムで少なくとも部分的に中
和されていることを特徴とする特許請求の範囲第１項記
載のリポ蛋白質分画定量用試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19139785A JPS6250666A (ja) | 1985-08-30 | 1985-08-30 | リポ蛋白質分画定量用試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19139785A JPS6250666A (ja) | 1985-08-30 | 1985-08-30 | リポ蛋白質分画定量用試薬 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6250666A true JPS6250666A (ja) | 1987-03-05 |
Family
ID=16273921
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP19139785A Pending JPS6250666A (ja) | 1985-08-30 | 1985-08-30 | リポ蛋白質分画定量用試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6250666A (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5491093A (en) * | 1991-09-09 | 1996-02-13 | Canon Kabushiki Kaisha | Quantitative determination of lipid, and of co-existing two compounds |
| CN102749459A (zh) * | 2012-07-27 | 2012-10-24 | 北京恩济和生物科技有限公司 | 一种脂蛋白(a)检测试剂盒及其制备方法 |
| JP2015180891A (ja) * | 2007-06-08 | 2015-10-15 | クエスト ダイアグノスティックス インヴェストメンツ インコーポレイテッド | 差異荷電粒子移動度によるリポ蛋白質の分析 |
| US9791464B2 (en) | 2007-06-08 | 2017-10-17 | Quest Diagnostics Investments Incorporated | Lipoprotein analysis by differential charged-particle mobility |
| US10119971B2 (en) | 2008-08-07 | 2018-11-06 | Quest Diagnostics Investments Incorporated | Detection apparatus for differential-charged particle mobility analyzer |
| US10308680B2 (en) | 2010-12-30 | 2019-06-04 | Quest Diagnostics Investments Incorporated | Magnetic separation of lipoproteins using dextran sulfate |
-
1985
- 1985-08-30 JP JP19139785A patent/JPS6250666A/ja active Pending
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5491093A (en) * | 1991-09-09 | 1996-02-13 | Canon Kabushiki Kaisha | Quantitative determination of lipid, and of co-existing two compounds |
| JP2015180891A (ja) * | 2007-06-08 | 2015-10-15 | クエスト ダイアグノスティックス インヴェストメンツ インコーポレイテッド | 差異荷電粒子移動度によるリポ蛋白質の分析 |
| US9791464B2 (en) | 2007-06-08 | 2017-10-17 | Quest Diagnostics Investments Incorporated | Lipoprotein analysis by differential charged-particle mobility |
| US11680949B2 (en) | 2007-06-08 | 2023-06-20 | Quest Diagnostics Investments Incorporated | Lipoprotein analysis by differential charged-particle mobility |
| US10119971B2 (en) | 2008-08-07 | 2018-11-06 | Quest Diagnostics Investments Incorporated | Detection apparatus for differential-charged particle mobility analyzer |
| US10488419B2 (en) | 2008-08-07 | 2019-11-26 | Quest Diagnostics Investments Incorporated | Detection apparatus for differential-charged particle mobility analyzer |
| US10308680B2 (en) | 2010-12-30 | 2019-06-04 | Quest Diagnostics Investments Incorporated | Magnetic separation of lipoproteins using dextran sulfate |
| CN102749459A (zh) * | 2012-07-27 | 2012-10-24 | 北京恩济和生物科技有限公司 | 一种脂蛋白(a)检测试剂盒及其制备方法 |
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