CN112985966A - 一种尿液有形成分分析用稀释液及制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种尿液有形成分分析用稀释液及制备方法，所述尿液有形成分分析用稀释液包括抗凝剂、缓冲液、碱性试剂、表面活性剂、渗透压调节剂、抑菌剂，称量抗凝剂和纯化水在对应的容器中进行溶解，并称量除所述抗凝剂外的多种原料与纯化水进行溶解，得到两种混合溶液；将两种所述混合溶液进行混合，并将清洗所述容器得到的洗涤液加入基础稀释液中，利用碱性试剂进行pH调节，得到稀释液，提供一种适宜的稀释液进行稀释过渡，保证有形成分的完整性。

Description

一种尿液有形成分分析用稀释液及制备方法
技术领域
本发明涉及医疗器械技术领域，尤其涉及一种尿液有形成分分析用稀释液及制备方法。
背景技术
流式细胞术是一种生物学技术，用来对流过光学或电子检测器的一个个细胞进行连续的多种参数分析。流式细胞术可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，具有速度快、精度高、准确性好的优点，是当代最先进的细胞定量分析技术之一。在临床检测中，由于尿液样本内容物复杂，且浓度不一，为了对尿液有形成分进行区分，会对样本进行荧光染色处理，保证仪器可接收有形成分发出的荧光信号。
目前Sysmex的UF-5000i全自动尿液分析仪采用搭载此方法进行临床尿液样本分析，其仪器通过设计两种通道，通过两个反应池将有核成分与无核成分区分，进行流式细胞术分析检测，因此，在此条件下，仪器必须搭载两种不同染色剂以及两种不同的稀释液才能满足仪器的测试条件，所以，仪器需要进行两个通道的检验，这样会大大降低仪器的检测效率。
单通道设计对尿液有形成分进行分析，既可以减少仪器检测工序，降低材料损耗，又可以提高检测效率，但是，单通道法检测需要考虑到红细胞对溶液渗透压的灵敏性，也需要考虑到对有核成分的样本核酸染色问题，因此，需要适宜的稀释液进行稀释过渡，保证有形成分的完整性。
发明内容
本发明的目的在于提供一种尿液有形成分分析用稀释液及制备方法，提供一种适宜的稀释液进行稀释过渡，保证有形成分的完整性。
为实现上述目的，第一方面，本发明提供了一种尿液有形成分分析用稀释液的制备方法，包括以下步骤：
称量抗凝剂和纯化水在对应的容器中进行溶解，并称量除所述抗凝剂外的多种原料与纯化水进行溶解，得到两种混合溶液；
将两种所述混合溶液进行混合，并将清洗所述容器得到的洗涤液加入基础稀释液中，利用碱性试剂进行pH调节，得到稀释液。
其中，称量抗凝剂和纯化水在对应的容器中进行溶解，并称量除所述抗凝剂外的多种原料与纯化水进行溶解，得到两种混合溶液，包括：
称量0.5g～3g/L的抗凝剂和占总质量约1％-2％的纯化水，并加入对应的容器中进行搅拌溶解，得到第一混合溶液；
称量除所述抗凝剂外的缓冲液、表面活性剂、抑菌剂和渗透压调节剂，并加入占总质量约60％的纯化水，在另一个容器中进行搅拌混匀，得到第二混合溶液。
其中，将两种所述混合溶液进行混合，并将清洗所述容器得到的洗涤液加入基础稀释液中，利用碱性试剂进行pH调节，得到稀释液，包括：
将所述第一混合溶液和所述第二混合溶液进行搅拌混匀，得到基础稀释液；
利用纯化水将所述第一混合溶液和所述第二混合溶液对应的所述容器清洗三遍，并将得到的洗涤液加入所述基础稀释液中；
加入碱性试剂将所述基础稀释液的pH调节至6.5-8.5，得到稀释液。
第二方面，本发明提供了一种尿液有形成分分析用稀释液，适用于如第一方面所述的一种尿液有形成分分析用稀释液的制备方法，所述尿液有形成分分析用稀释液包括抗凝剂0.5g～3g/L、缓冲液10～30g/L、碱性试剂1～3g/L、表面活性剂0.1～3％、渗透压调节剂0～5g/L和抑菌剂1-5g/L。
其中，所述抗凝剂为乙二胺四乙酸二钾、乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸三钾中的任一种。
其中，所述表面活性剂为吐温20、吐温40、吐温60、吐温80中的任一种。
本发明的一种尿液有形成分分析用稀释液及制备方法，所述尿液有形成分分析用稀释液包括抗凝剂、缓冲液、碱性试剂、表面活性剂、渗透压调节剂、抑菌剂，称量抗凝剂和纯化水在对应的容器中进行溶解，并称量除所述抗凝剂外的多种原料与纯化水进行溶解，得到两种混合溶液；将两种所述混合溶液进行混合，并将清洗所述容器得到的洗涤液加入基础稀释液中，利用碱性试剂进行pH调节，得到稀释液，提供一种适宜的稀释液进行稀释过渡，保证有形成分的完整性。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明提供的一种尿液有形成分分析用稀释液的制备方法的步骤示意图。
图2是本发明提供的红细胞与细菌散点图。
图3是本发明提供的高浓度红细胞样本。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
在本发明的描述中，“多个”的含义是两个或两个以上，除非另有明确具体的限定。
请参阅图1，本发明提供一种尿液有形成分分析用稀释液的制备方法，包括以下步骤：
S101、称量抗凝剂和纯化水在对应的容器中进行溶解，并称量除所述抗凝剂外的多种原料与纯化水进行溶解，得到两种混合溶液。
具体的，取合适容器加入准确称量的EDTA.2K，加入占总质量约1％-2％的纯化水，搅拌溶解后，得到第一混合溶液待用；取合适容器加入准确称量的配方内余下药品(包括缓冲液、渗透压调节剂、表面活性剂、抑菌剂)，加入占总质量约60％的纯化水，不断搅拌并溶解，得到第二混合溶液。
S102、将两种所述混合溶液进行混合，并将清洗所述容器得到的洗涤液加入基础稀释液中，利用碱性试剂进行pH调节，得到稀释液。
具体的，将两个溶液混合后搅拌溶解，得到基础稀释液，并用纯化水清洗容器三遍，将洗涤液一并加入基础稀释液中；加入碱性试剂并不断搅拌溶解，调节PH值到合适范围即可。
流式细胞术的原理是利用荧光染料对有形成分中的核酸或蛋白质进行染色标记，仪器收集激光照射至粒子上产生的荧光进行粒子特性分析。因此，增强荧光信号会有助于仪器进行分析。仪器所采用的染色剂属于亲脂类染料，在与细胞膜结合时荧光信号显著增强。尿液有形成分分析仪用稀释液在配方中加入了对亲脂性药物具有助溶性的表面活性剂，例如吐温20、吐温40、吐温60、吐温80，添加选定范围在0.5g/L～3g/L，由于结构中具有较长碳链，对亲脂性药物具有较好的助溶作用，有助于增强尿液样本中有形成分的荧光信号。
正常情况下，哺乳类动物红细胞内的渗透压与血浆的渗透压相等，约相当于0.9％NaCl溶液的渗透压。将红细胞悬浮于等渗的NaCl溶液中，其体积和形态可保持不变。若将红细胞悬浮于低渗的NaCl溶液中，由于红细胞内的渗透压大于细胞外溶液的渗透压，根据半透膜的渗透原理，水分子将从细胞外进入细胞内，使红细胞的体积膨大，甚至破裂溶解，红细胞的破裂溶解又称为溶血。为减少对红细胞的局部刺激，保证溶液稳定性，因此需要提供一个合适的缓冲环境同时对细菌和红细胞进行染色。尿液分析仪用稀释液调整配方添加酸碱药物，例如氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸氢钠、磷酸氢二钾等，调节PH值范围在6.5-8.5，在采用单通道情况下，保证细菌被染色标记的同时不会使红细胞发生溶血现象，使有形成分在加入稀释液之后可以被染上不同染剂从而发出荧光，便于仪器进行区分。
在尿液样本中时常会有血尿样本的出现，内含大量红细胞，有时会伴有血凝块。因此为了使这些血凝块分散开来，在配方中添加了抗凝剂，例如EDTA.2K，EDTA.2Na、EDTA.3K，但是EDTA2K在临床上作为抗凝剂浓度高的时候会对红细胞活性造成影响，造成溶血现象，因此浓度选取范围0.5g～3g/L。
本发明提供一种尿液有形成分分析用稀释液，适用于所述的一种尿液有形成分分析用稀释液的制备方法，所述尿液有形成分分析用稀释液包括抗凝剂0.5g～3g/L、缓冲液10～30g/L、碱性试剂1～3g/L、表面活性剂0.1～3％、渗透压调节剂0～5g/L和抑菌剂1-5g/L。
在本实施方式中，所述尿液有形成分分析用稀释液包括抗凝剂、缓冲液、碱性试剂、表面活性剂、渗透压调节剂、抑菌剂，所述抗凝剂为EDTA.2K(乙二胺四乙酸二钾)、EDTA.2Na(乙二胺四乙酸二钠)、EDTA.3K(乙二胺四乙酸三钾)中的任一种；所述表面活性剂为吐温20、吐温40、吐温60、吐温80中的任一种；所述碱性试剂为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸氢钠、磷酸氢二钾中的任一种。
根据此配制方法可得到以下效果：
一、增强尿液样本中有形成分的荧光信号
测试方式：设置对照组，测试组进行试验，
对照组：样本+生理盐水+染剂
测试组：样本+稀释液+染剂
每组测试三次，求平均值。
表1荧光强度
组别 荧光强度(FL1-H)均值
纯样本+生理盐水+染剂 2616
纯样本+稀释液+染剂 3633
表一可看出，对比测试组与对照组，同时添加染剂之后，荧光强度会增强。添加稀释液后荧光强度要高于对照组。
二、单通道下可同时对细菌的核酸和红细胞膜进行染色
测试方式：选取包含红细胞与细菌的临床样本进行测试，比较各个通道间以及散点图的差异。
表二 红细胞与细菌各通道差异
Figure BDA0002939281880000051
在表二中可看出，红细胞与细菌在对应的通道均可被荧光染色检测出荧光，同时各组分所在区域区分度较大，各通道间不存在交叉重叠现象。并且图2中可以看到红细胞与细菌都可以被检测出。
三、使血尿样本中血凝块分散开，并保持红细胞活性
测试方式：选取肉眼可见临床血尿样本进行测试，观察红细胞是否被检出。
根据图3可看出，高浓度下红细胞样本仍可以被检测出来，说明尿液有形成分分析用稀释液中含有的EDTA2K并不影响红细胞活性。
本发明的一种尿液有形成分分析用稀释液及制备方法，所述尿液有形成分分析用稀释液包括抗凝剂、缓冲液、碱性试剂、表面活性剂、渗透压调节剂、抑菌剂，称量抗凝剂和纯化水在对应的容器中进行溶解，并称量除所述抗凝剂外的多种原料与纯化水进行溶解，得到两种混合溶液；将两种所述混合溶液进行混合，并将清洗所述容器得到的洗涤液加入基础稀释液中，利用碱性试剂进行pH调节，得到稀释液，提供一种适宜的稀释液进行稀释过渡，保证有形成分的完整性。
以上所揭露的仅为本发明一种较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，本领域普通技术人员可以理解实现上述实施例的全部或部分流程，并依本发明权利要求所作的等同变化，仍属于发明所涵盖的范围。

Claims (6)

1.一种尿液有形成分分析用稀释液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
称量抗凝剂和纯化水在对应的容器中进行溶解，并称量除所述抗凝剂外的多种原料与纯化水进行溶解，得到两种混合溶液；
将两种所述混合溶液进行混合，并将清洗所述容器得到的洗涤液加入基础稀释液中，利用碱性试剂进行pH调节，得到稀释液。
2.如权利要求1所述的尿液有形成分分析用稀释液的制备方法，其特征在于，称量抗凝剂和纯化水在对应的容器中进行溶解，并称量除所述抗凝剂外的多种原料与纯化水进行溶解，得到两种混合溶液，包括：
称量0.5g～3g/L的抗凝剂和占总质量约1％-2％的纯化水，并加入对应的容器中进行搅拌溶解，得到第一混合溶液；
称量除所述抗凝剂外的缓冲液、表面活性剂、抑菌剂和渗透压调节剂，并加入占总质量约60％的纯化水，在另一个容器中进行搅拌混匀，得到第二混合溶液。
3.如权利要求2所述的尿液有形成分分析用稀释液的制备方法，其特征在于，将两种所述混合溶液进行混合，并将清洗所述容器得到的洗涤液加入基础稀释液中，利用碱性试剂进行pH调节，得到稀释液，包括：
将所述第一混合溶液和所述第二混合溶液进行搅拌混匀，得到基础稀释液；
利用纯化水将所述第一混合溶液和所述第二混合溶液对应的所述容器清洗三遍，并将得到的洗涤液加入所述基础稀释液中；
加入碱性试剂将所述基础稀释液的pH调节至6.5-8.5，得到稀释液。
4.一种尿液有形成分分析用稀释液，适用于如权利要求1至权利要求3任一项所述的一种尿液有形成分分析用稀释液的制备方法，其特征在于，
所述尿液有形成分分析用稀释液包括抗凝剂0.5g～3g/L、缓冲液10～30g/L、碱性试剂1～3g/L、表面活性剂0.1～3％、渗透压调节剂0～5g/L和抑菌剂1-5g/L。
5.如权利要求4所述的尿液有形成分分析用稀释液，其特征在于，
所述抗凝剂为乙二胺四乙酸二钾、乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸三钾中的任一种。
6.如权利要求4所述的尿液有形成分分析用稀释液，其特征在于，
所述表面活性剂为吐温20、吐温40、吐温60、吐温80中的任一种。
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