CN1238455A - 一种血液分析计数仪用稀释液和清洗液 - Google Patents
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Abstract
一种血液分析计数仪用稀释液，其每升溶液中含有硫酸钠：9～12g；氯化钠；3～6g；EDTA钠盐：0.1～2g；Na2HPO4：0.05～2g；KH2PO4：0.05～2g；NaN3：0.1～1g；其余为水，其pH为6.9±0.1。其pH值为6.9±0.1。在该稀释液中加入吐温可得到清洗液，每升清洗液的原料易得，价廉，配制过程简便，保持血样效果好，用这种稀释液和清洗液进行血液分析可大幅度降低分析成本。
Description
本发明涉及一种试剂及其配制方法。具体地说，是提供一种自动的血细胞计数分类仪(CELL-DYN)在分析血液中使用的稀释液和清洗液。
人的血液中包含三种主要成分的血细胞，即白血球、红血球及血小板。对健康人体循环的血液中这三种细胞所占的细胞的比例(浓度)是有一定范围的，但是对于患者疾病的人来说，由于很多疾病首先影响血液系统，引起血液变化，因此，通过对人体血液成分的分析所提供有关血液成分的变化情况为传统的诊断技术提供了一种十分有价值的信息。这样，血液分析计数仪也就作为一种重要的医学设备被广泛应用。
CELL-DYN系统血球计数仪是美国雅培(ABBDTT)公司生产的一种专用于分析血液中血球成分的医疗仪器。利用该仪器能分析计数人体血液中包括白血球、红血球及血小板在内的16个参数的血液学结果，对正确诊断疾病提供了重要的依据。使用这种仪器进行血液分析时，为了得到正确的血液分析结果，非常重要的是必须维持所采集血液样品的稳定性。然而要维持血液中的细胞总数不变需要控制各种因素，主要是渗透压、pH、电导率、离子总数、离子类型、表面张力及温度等条件。为此，CELL-DYN系列血球计数分类仪使用一种稀释液，将采集到的血液样品按比例加入到稀释液中配制成测试试样。美国专利US4,745,071号中公开了一种用作上述血液分析的稀释液，该稀释液为含硫酸钠、氯化钠、1,3-二甲脲、1-羟基吡啶-2-硫酮、N-(2-乙酰氨基-2-亚氨基二乙酸)(ADA缓冲剂)及氢氧化钠的水溶液。其中用氢氧化钠调整稀释液的pH值为6.9±0.1。
另外，利用CELL-DYN系列血球计数仪进行血液分析除需要稀释剂外、为保证不同血液样品分析的准确性，在每分析一样品后需用清洗剂对仪器有关部分进行清洗，以除去残留的原样品试剂，保证分析结果的准确可靠。上述美国专利US,4,745,071中也报导了这种清洗剂是由在上述的稀释液中添加一定量的洗涤剂而配制成。所谓的洗涤剂可选用偶氮染料Diazopon，或多聚乙基酚或酯，如Fergitol,Zougl,Fluorad等酯。
但是配制上述稀释液和清洗液中的作为稳定剂和抗菌剂成分的有机物不但价昂，而且又不易得到，因此提高了进行血液分析的成本。
本发明的目的是提供一种用于血细胞计数分类仪(CELL-DYN)使用的稀释液及清洗液。这种稀释液和清洗液所需化学试剂易得具价廉，因此可大幅度降低配制稀释液和清洗液的成本。同时，这种稀释液也可达到有效保持血液成分的效果。
本发明的用于血细胞分析用的稀释液是含有抗凝剂、抗菌剂、缓冲溶剂及无机盐(硫酸钠和氯化钠)的水溶液，其特征是稀释液的组成为每1升稀释液中含有：
硫酸钠： 9～12g；
氯化钠： 3～6g；
EDTA钠盐： 0.1～2g；
Na2HPO4: 0.05～2g；
KH2PO4: 0.05～2g；
NaN3: 0.1～1g；
其余为水，其pH为6.9±0.1。
本发明稀释液中EDTA钠盐(乙二胺四乙酸钠)是作为抗凝剂而加入的，EDTA钠盐也可用其钾盐代替，但配制中要不影响稀释液的对血液的渗透压、离子强度和pH值。NaN3是作为抗菌剂可有效保持血液中有机物变腐。Na2HPO4与HK2PO4是作为稀释液的缓冲液加入，维持溶液在一定的pH范围。缓冲液也可选用K2HPO4与NaH2PO4或者K2HPO4·CaHPO4与KH2PO4·Ca(H2PO4)2，但同样应使稀释液中的渗透压、离子强度和pH值保持在适当的范围。
本发明稀释液的配制方法十分简单，先用少量水(去离子水或蒸馏水)溶解各盐组分后，加水到1升，即得到本发明的稀释液。本发明的稀释液中加入作为缓冲液的偏磷酸、亚磷酸盐后即可保持稀释液的pH值维持在6.9±0.1的范围内，因此不需要加氢氧化钠调整溶液的pH值。这使稀释液中的Na+、K+离子含量更易控制，使稀释液更利于血液的保存。
本发明的清洗液是在稀释液中加入一定量洗涤剂，其特征是洗涤剂选用吐温型(聚氧乙稀山梨醇酐脂肪酸酯)产品，其加入量为每1升清洗液中含吐温为2～5ml。
在本发明的稀释液中加入一定量的洗涤剂或皂化剂都可得到清洗性能较好的清洗液。但是加入普通的洗涤剂或肥皂易向仪器内引入微量杂质化合物可能干扰对血液的分析，同时洗涤剂、皂化剂易产生泡沫，也将对分析有不利影响(影响溶液正确的容积)。本发明的清洗液选用商品吐温60、80可有效避免上述不利因素。同时，也可将清洗液的pH值调整为10±0.5，能增加清洗效果。调整pH值可用稀氢氧化钠进行。
上述清洗液的配制方法与稀释液配制过程相同。可将作为清洗液各组分的化合物用少量水(去离子水或蒸馏水)溶解，再加入水到规定值。也可用配制好的稀释液少许溶解洗涤剂，然后加稀释液到规定值。
本发明稀释液和清洗液的使用方法与现有CELL-DYN系列血球计数分类仪所用稀释液和清洗液的方法相同，可按其相同的操作方法进行。
下面通过实例对本发明的技术给予进一步详细地说明。
实例1稀释液的配制
取硫酸钠10.8g、氯化钠3.6g、EDTANa2 1g、Na2HPO4 1g、KH2PO40.6g、NaN3 0.5g用蒸馏水200g溶解后加入计量瓶中，继续加蒸馏水使体积达到1升即可得到本发明的稀释液。
实例2稀释液的配制
取吐温80(北京化学试剂公司产)1.7ml。加入20ml实例1配制的稀释液溶解后，再加用氢氧化钠(10％)将pH值调整为10的稀释液到500ml制得本发明的清洗液。
实例3本发明稀释液和清洗液的性能
利用实例1和2所述方法配制的稀释液和清洗液作CELL-DYN1700型血球计数分类仪的稀释液和清洗液，测定血液中下列参数：1．WBC白细胞总数目；2．LYM#淋巴细胞数目；3．LYM％淋巴细胞百分比；4．MID#中等大小细胞数目；5．MID％中等大小细胞百分比；6．GRAN#粒细胞数目；7．GRAN％粒细胞百分比；8．RBC红细胞总数；9．HGB血红蛋白；10．HCT红细胞压积容量；11．MCV红细胞平均容量；12．MCH平均血红蛋白；13、MCHC平均血红蛋白的浓度；14．RDW红细胞分布宽度；15．PLT血小板总数；16．MPV血小板平均体积；17．PDW血小板分布浓度；18．血小板压积容量。其血液分析过程按CELL-DYN仪器的常规方法操作，共分析12个血液样品。其中试样1-5及11-12分析后用上述清洗液进行清洗后再进行下一试样分析，而试样6-10用按美国专利US4,745,071号所报导方法配制的清洗液进行清洗，其分析的结果列于表1
比较例稀释液和清洗液的性能
按美国专利US4,745,071号报导的配制稀释液和清洗液，并用于血液分析。采用实例3相同采集的血液样1-12，在与实例3相同条件下进行稀释液和清洗液性能比较实验。每次试样分析后的清洗过程也同实例3相同，其分析结果同列于表1。
由表1的结果可以看到本发明所提供的稀释液和清洗液具有与现有技术相同的性能，但本发明稀释液和清洗液的配制方法比现有技术的方法更简单，原料易得，且价廉。因此，使用本发明的稀释液和清洗液可降低分析血液样品的成本。
表1 血液样品分析结果
| 试样1 | 试样2 | 试样3 | 试样4 | 试样5 | 试样6 | |
| 项目 | 本发明 比较例 | 本发明 比较例 | 本发明 比较例 | 本发明 比较例 | 本发明 比较例 | 本发明 比较例 |
| 1．WBC(G/L)2．LYM3．LYM(％L)4．MLD5．MLD(％M)6．GRAN7．GRAN(％G)8．RBC(T/L)9．HGB(G/L)10．HCT(L/L)11．MCV(F/L)12．MCH(PG)13．MCHC(G/L)14．RDW(％)15．PLT(G/L)16．MPV(FL)17．PCT(ML/L)18．PDW10(GSD) | 2.4 2.40.6 0.526.6 22.40.1 0.13.1 2.71.7 1.870.3 74.92.68 2.6166 67236 22788 8724.6 25.7280 29517.6 16.680 749.1 8.90.7 0.719.0 17.3 | 5.8 5.82.4 2.440.6 40.60.6 0.611.0 11.02.8 2.848.4 48.43.72 3.7189 89264 26471 7223.9 23.9337 33722.6 22.6324 3249.5 9.50.31 0.3116.4 16.4 | 6.0 6.02.4 2.439.9 39.90.6 0.610.8 10.83.0 3.049.3 49.33.74 3.7491 90266 26671 7124.1 24.1338 33821.8 21.9321 3219.4 9.40.30 0.3016.8 16.8 | 6.7 6.71.9 1.927.7 27.70.7 0.711.0 11.04.1 4.161.3 61.33.64 3.64100 101353 35396 9727.7 27.7286 28615.8 15.8214 2149.3 9.32.0 2.017.4 17.4 | 9.6 9.62.3 2.324.0 24.00.8 0.88.8 8.86.6 6.667.2 67.25.23 5.24145 144498 49895 9527.5 27.5289 28915.5 15.5225 22710.7 10.72.4 2.418.2 18.4 | 16.1 16.10.9 0.95.6 5.60.2 0.21.3 1.315.0 15.093.1 93.14.41 4.41123 122388 38888 8827.7 27.7314 31415.1 15.1149 1498.5 8.51.3 1.317.0 17.0 |
表1续
| 试样7 | 试样8 | 试样9 | 试样10 | 试样11 | 试样12 | |
| 项目 | 本发明 比较例 | 本发明 比较例 | 本发明 比较例 | 本发明 比较例 | 本发明 比较例 | 本发明 比较例 |
| 1．WBC(G/L)2．LYM3．LYM(％L)4．MLD5．MLD(％M)6．GRAN7．GRAN(％G)8．RBC(T/L)9．HGB(G/L)10．HCT(L/L)11．MCV(F/L)12．MCH(PG)13．MCHC(G/L)14．RDW(％)15．PLT(G/L)16．MPV(FL)17．PCT(ML/L)18．PDW10(GSD) | 9.6 9.62.5 2.526.1 26.11.3 1.313.7 13.75.8 5.860.2 60.25.23 5.23143 143518 51898 9927.3 27.3276 27616.7 16.7255 2579.6 9.72.6 2.621.5 21.5 | 6.3 6.32.1 2.133.7 33.70.4 0.46.9 6.93.7 3.759.4 59.45.32 5.33144 143469 46981 8826.8 26.8305 30513.5 13.5177 1786.6 6.61.2 1.218.1 18.1 | 22.6 22.62.4 2.410.5 10.50.9 0.93.8 3.819.4 19.485.7 85.73.48 3.4896 95341 34197 9827.3 27.3279 27916.4 16.4234 2346.2 6.21.5 1.518.2 18.2 | 6.2 6.23.0 3.048.9 48.90.6 0.68.9 8.92.6 2.642.2 42.24.74 4.75109 109394 39484 8322.9 229277 27718.1 18.1296 2969.0 9.02.7 2.719.4 19.4 | 6.0 6.02.2 2.337.4 38.30.7 0.611.0 10.23.1 3.151.6 51.53.82 3.7890 89267 26570 7023.8 23.5341 33620.9 22.3305 3048.9 8.90.27 0.2715.6 15.6 | 16.7 16.71.1 1.16.6 6.60.8 0.84.5 4.514.8 14.888.9 88.93.82 3.8295 96359 35994 9425.1 25.126.7 26.722.2 22.2110 11112.3 12.31.4 1.418.8 18.8 |
Claims (4)
1、一种血液分析计数仪用稀释液，是含有抗凝剂、抗菌剂、缓冲溶剂、及无机盐硫酸钠和氯化钠的水溶液，其特征是稀释液的组成为每1升稀释液中含有：硫酸钠：9～12g；氯化钠：3～6g；EDTA钠盐：0.1～2g；Na2HPO4:0.05～2g；KH2PO4:0.05～2g；NaN3:0.1～1g；其余为水，其pH为6.9±0.1。
2、按权利要求1所述的血液分析计数仪用稀释剂，其特征是EDTA钠盐用其钾盐代替。
3、按权利要求1所述的血液分析计数仪用稀释剂，其特征是缓冲液可选用K2HPO4与NaH2PO4或者K2HPO4·CaHPO4与KH2PO4·Ca(H2PO4)2。
4、一种血液分析计数仪用清洗液，其特征是洗涤剂用聚氧乙稀山梨醇酐脂肪酸酯，其加入量为每1升清洗液中含洗涤剂为2～5ml。
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