CN114459982A - 一种基于流式细胞术原理的尿液有形成分分析方法 - Google Patents
一种基于流式细胞术原理的尿液有形成分分析方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114459982A CN114459982A CN202210049474.XA CN202210049474A CN114459982A CN 114459982 A CN114459982 A CN 114459982A CN 202210049474 A CN202210049474 A CN 202210049474A CN 114459982 A CN114459982 A CN 114459982A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- flow cytometry
- total volume
- agent
- accounting
- incubation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 title claims abstract description 33
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 title claims abstract description 24
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 29
- 239000003086 colorant Substances 0.000 claims abstract description 24
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims abstract description 23
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 16
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 15
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 22
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 15
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 10
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 claims description 10
- 239000000022 bacteriostatic agent Substances 0.000 claims description 8
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 8
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 claims description 6
- PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 2'-(4-ethoxyphenyl)-5-(4-methylpiperazin-1-yl)-2,5'-bibenzimidazole Chemical compound C1=CC(OCC)=CC=C1C1=NC2=CC=C(C=3NC4=CC(=CC=C4N=3)N3CCN(C)CC3)C=C2N1 PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 5
- 239000008139 complexing agent Substances 0.000 claims description 5
- DBLXOVFQHHSKRC-UHFFFAOYSA-N ethanesulfonic acid;2-piperazin-1-ylethanol Chemical compound CCS(O)(=O)=O.OCCN1CCNCC1 DBLXOVFQHHSKRC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 5
- FGBAVQUHSKYMTC-UHFFFAOYSA-M LDS 751 dye Chemical compound [O-]Cl(=O)(=O)=O.C1=CC2=CC(N(C)C)=CC=C2[N+](CC)=C1C=CC=CC1=CC=C(N(C)C)C=C1 FGBAVQUHSKYMTC-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 4
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 4
- IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 2,2'-piperazine-1,4-diylbisethanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCN1CCN(CCS(O)(=O)=O)CC1 IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- DWKJNNWQZHJJSH-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(2-hydroxyethyl)butane-1,1,1,4-tetrol Chemical compound OCCC(C(O)(O)O)(N)CCO DWKJNNWQZHJJSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- MCHZKGNHFPNZDP-UHFFFAOYSA-N 2-aminoethane-1,1,1-triol;hydrochloride Chemical compound Cl.NCC(O)(O)O MCHZKGNHFPNZDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- HNXGGWNCFXZSAI-UHFFFAOYSA-N 2-morpholin-2-ylethanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCC1CNCCO1 HNXGGWNCFXZSAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- NUFBIAUZAMHTSP-UHFFFAOYSA-N 3-(n-morpholino)-2-hydroxypropanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CC(O)CN1CCOCC1 NUFBIAUZAMHTSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- QYYMDNHUJFIDDQ-UHFFFAOYSA-N 5-chloro-2-methyl-1,2-thiazol-3-one;2-methyl-1,2-thiazol-3-one Chemical compound CN1SC=CC1=O.CN1SC(Cl)=CC1=O QYYMDNHUJFIDDQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- YXHLJMWYDTXDHS-IRFLANFNSA-N 7-aminoactinomycin D Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=C(N)C=C3C(=O)N[C@@H]4C(=O)N[C@@H](C(N5CCC[C@H]5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 YXHLJMWYDTXDHS-IRFLANFNSA-N 0.000 claims description 3
- 108700012813 7-aminoactinomycin D Proteins 0.000 claims description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 3
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N acridine orange free base Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3C=C21 DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N benzoquinolinylidene Natural products C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 claims description 3
- INAAIJLSXJJHOZ-UHFFFAOYSA-N pibenzimol Chemical compound C1CN(C)CCN1C1=CC=C(N=C(N2)C=3C=C4NC(=NC4=CC=3)C=3C=CC(O)=CC=3)C2=C1 INAAIJLSXJJHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims description 3
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 claims description 3
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 claims description 3
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000013049 sediment Substances 0.000 claims 6
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 abstract description 9
- 239000002245 particle Substances 0.000 abstract description 5
- 230000005284 excitation Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 21
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 description 7
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 2
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- GFZPJHFJZGRWMQ-UHFFFAOYSA-M diOC18(3) dye Chemical group [O-]Cl(=O)(=O)=O.O1C2=CC=CC=C2[N+](CCCCCCCCCCCCCCCCCC)=C1C=CC=C1N(CCCCCCCCCCCCCCCCCC)C2=CC=CC=C2O1 GFZPJHFJZGRWMQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 2
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L EDTA disodium salt (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 150000001335 aliphatic alkanes Chemical group 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-M perchlorate Inorganic materials [O-]Cl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M thionine Chemical compound [Cl-].C1=CC(N)=CC2=[S+]C3=CC(N)=CC=C3N=C21 ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 208000014001 urinary system disease Diseases 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N15/14—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
- G01N15/1434—Optical arrangements
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/38—Diluting, dispersing or mixing samples
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/01—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials specially adapted for biological cells, e.g. blood cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
- G01N2001/302—Stain compositions
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/38—Diluting, dispersing or mixing samples
- G01N2001/386—Other diluting or mixing processes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N2015/1006—Investigating individual particles for cytology
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明涉及化学分析技术领域,具体涉及一种基于流式细胞术原理的尿液有形成分分析方法,向反应杯中加入占总体积60%‑80%的稀释液和占总体积1.5%‑2.5%的第一荧光染色剂和占总体积1.5%‑2.5%第二荧光染色剂,搅拌均匀得到检测液;将占总体积10%‑25%的样本加入检测液中进行孵育,得到孵育液;基于流式细胞术原理,使用流式细胞仪对孵育液进行测试,得到测试数据,通过第一荧光染色剂和第二荧光染色剂对对细胞的不同组分进行荧光染色,经过流式细胞仪的激光激发后同时产生两种荧光,解决了现有的分析方法对细胞的同种组分进行染色,使得荧光信号较少,不利于对细胞粒子的形态和结果进行分析的问题。
Description
技术领域
本发明涉及化学分析技术领域,尤其涉及一种基于流式细胞术原理的尿液有形成分分析方法。
背景技术
当人体的泌尿系统受到感染、功能衰退、癌变或者结石等疾病时,尿液中就会出现一些有形成分,如红细胞、白细胞、结晶、管型、细菌、真菌等,通过分析这些有形成分的种类、数量和形态,对于早期发现泌尿系统的疾病以及推断发生异常的部位有非常重要的作用
目前,现有的美国专利(US9329133)公开了一种基于流式细胞学原理的方法,主要是通过使用两种稀释液,在两个反应池中,分别对尿液中的有行成分进行处理,然后分别进行荧光染色,染色后的粒子在通过鞘流器时被激光照射,产生不同的光信号,相关的检验设备对信号进行采集分析和统计计算,对检测结果进行分析。
采用上述方式,仅能对细胞的同种组分进行染色,使得荧光信号较少,不利于对细胞粒子的形态和结果进行分析。
发明内容
本发明的目的在于提供一种基于流式细胞术原理的尿液有形成分分析方法,旨在解决现有的分析方法对细胞的同种组分进行染色,使得荧光信号较少,不利于对细胞粒子的形态和结果进行分析的问题。
为实现上述目的,本发明提供了一种基于流式细胞术原理的尿液有形成分分析方法,包括以下步骤:
向反应杯中加入占总体积60%-80%的稀释液和占总体积1.5%-2.5%的第一荧光染色剂和占总体积1.5%-2.5%第二荧光染色剂,搅拌均匀得到检测液;
将占总体积10%-25%的尿液样本加入所述检测液中进行孵育,得到孵育液;
基于流式细胞术原理,使用流式细胞仪对所述孵育液进行测试,得到测试数据。
其中,所述稀释液包括缓冲剂、渗透压维持剂、络合剂、表面活性剂和抑菌剂;
所述缓冲剂为三羟甲基氨基甲烷-盐酸、2-吗啉乙磺酸、氢氧化钠、双(2-羟乙基)氨基(三羟甲基)甲烷、哌嗪-N,N'-二(2-乙磺酸)、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸、3-吗啉丙磺酸、4-羟乙基哌嗪乙磺酸和3-(羟乙基哌嗪)-2-羟基丙磺酸中的一种或多种;
所述渗透压维持剂为氯化钠、氯化钾和硫酸钠中的任意一种或者两种组合;
所述表面活性剂为吐温20和吐温80中的任意一种;
所述抑菌剂为叠氮钠和ProClin300中的任意一种。
其中,所述流式细胞仪选用单激光器激发的流式细胞仪。
其中,所述第一染色剂为DiI、DiD、DiR和DiOCn(n)中的任意一种;
所述第二染色剂为PI、DAPI、7-氨基放线菌素D和LDS751中的任意一种。
其中,所述流式细胞仪选用双激光器激发的流式细胞仪。
其中,所述第一染色剂为SYBR GreenI、吖啶橙、Hoechst 33342、Hoechst33258、EB和HI中的任意一种;
所述第二染色剂为DIL和DIR中的任意一种。
其中,所述将占总体积10%-25%的尿液样本加入所述检测液中进行孵育,得到孵育液的具体方式为:
所述将占总体积10%-25%的尿液样本加入所述检测液中,在常温下孵育30-40秒,或温度环境为在37℃下孵育20秒,得到孵育液。
本发明的一种基于流式细胞术原理的尿液有形成分分析方法,通过向反应杯中加入占总体积60%-80%的稀释液和占总体积3%-5%的第一荧光染色剂和第二荧光染色剂,搅拌均匀得到检测液;将占总体积10%-25%的尿液样本加入所述检测液中进行孵育,得到孵育液;基于流式细胞术原理,使用流式细胞仪对所述孵育液进行测试,得到测试数据;对所述测试数据进行分析,得到分析结果,通过第一荧光染色剂和第二荧光染色剂对对细胞的不同组分进行荧光染色,经过流式细胞仪的激光激发后同时产生两种荧光,解决了现有的分析方法对细胞的同种组分进行染色,使得荧光信号较少,不利于对细胞粒子的形态和结果进行分析的问题。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明提供的一种基于流式细胞术原理的尿液有形成分分析方法的第一实施例图。
图2是DiOCn(n)系列化合物的结构通式图。
图3是细胞检测示例中的试验1通过第二实施例的得出的测试结果的散点示意图。
图4是细胞检测示例中的试验1通过第三实施例的得出的测试结果的散点示意图。
图5是细胞检测示例中的试验2通过第二实施例的得出的测试结果的散点示意图。
图6是细胞检测示例中的试验3通过第二实施例的得出的测试结果的散点示意图。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例,所述实施例的示例在附图中示出,其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的,旨在用于解释本发明,而不能理解为对本发明的限制。
实施例1
请参阅图1至图6,本发明提供一种基于流式细胞术原理的尿液有形成分分析方法,包括以下步骤:
S101向反应杯中加入占总体积60%-80%的稀释液和占总体积1.5%-2.5%的第一荧光染色剂和占总体积1.5%-2.5%第二荧光染色剂,搅拌均匀得到检测液;
具体的,所述稀释液包括缓冲剂、渗透压维持剂、络合剂、表面活性剂和抑菌剂;
所述缓冲剂为三羟甲基氨基甲烷-盐酸、2-吗啉乙磺酸、氢氧化钠、双(2-羟乙基)氨基(三羟甲基)甲烷、哌嗪-N,N'-二(2-乙磺酸)、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸、3-吗啉丙磺酸、4-羟乙基哌嗪乙磺酸和3-(羟乙基哌嗪)-2-羟基丙磺酸中的一种或多种;其中,4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)是优选的。
所述渗透压维持剂为氯化钠、氯化钾和硫酸钠中的任意一种或两种组合;
所述表面活性剂为吐温20和吐温80中的任意一种;
所述抑菌剂为叠氮钠和ProClin300中的任意一种。
所述缓冲剂浓度为10至400mM,优选60至150mM,用于将尿液的所述尿液样本的pH值调节至pH6.0至7.5的范围内,以防止红细胞溶血,稳定所述尿液样本的荧光强度,所述渗透压维维持剂用于保证细胞的渗透压在合理的范围内,通常为150-500oSMO/kg,所述络合剂用于将尿液中含有的结晶成分中,特别是无定形盐以及一些其他的金属离子溶解,所述表面活性剂用于促进所述第一荧光染色剂和所述第二荧光染色剂与细胞的结构组分进行结合,所述抑菌剂用于抑制细菌的滋生,避免滋生的细菌影响检测结果。
S102将占总体积10%-25%的尿液样本加入所述检测液中进行孵育,得到孵育液;
具体的,所述将占总体积10%-25%的尿液样本加入所述检测液中,在常温下孵育30-40秒,或温度环境为在37℃下孵育20秒,得到孵育液
S103基于流式细胞术原理,使用流式细胞仪对所述孵育液进行测试,得到测试数据。
具体的,在所述流式细胞仪的分析软件上可以通过设门不断的优化细胞的识别和分类,最终根据细胞的特性得到各种类的数量。
实施例2:
实施例2和实施例1的区别仅在于:
在步骤S103中,所述流式细胞仪选用单激光器激发的流式细胞仪。
在步骤S101中,所述第一染色剂为染色细胞膜部分的吲哚菁染料,具体为DiI(1,1'-二十八烷基-3,3,3',3'-四甲基吲哚菁高氯酸盐)、DiD(1,1'-双十八烷基-3,3,3',3'-tetramethylindodicarbocyanine)、DiR(1,1'-二十八烷基四甲基吲哚菁碘化物)和DiOCn(n)系列化合物中的任意一种,优选的所述第一染色剂是DiOC18(3)3,3-二丙基氧杂羰基菁碘化物,DiOCn(n)系列化合物的结构通式请参阅图2,图中R为直链烷烃基团,根据碳原子的数量来确定n值的大小,其中n为2-18;
所述第二染色剂为主染细胞核酸部分的染色剂,要求发射波长大于第一种染色剂,且两者之间尽可能少的重合,具体为PI、DAPI、7-氨基放线菌素D和LDS751中的任意一种。
实施例3:
实施例3和实施例1的区别仅在于:
在步骤S103中,所述流式细胞仪选用双激光器激发的流式细胞仪。
在步骤S101中,所述第一染色剂为染色细胞核酸的荧光染料,具体为SYBRGreenI、吖啶橙、Hoechst 33342、Hoechst 33258、EB和HI中的任意一种,优选Hoechst33342;
所述第二染色剂为染色细胞膜部分的荧光染剂,可以包括花青类染色剂,具体为DIL和DIR中的任意一种,优选DIL,即DiIC18(3)。
以上两种实施例的所述第一染色剂和所述第二染色剂在使用前,需前通过溶剂配置成10-300ppm的溶液后使用,所述溶剂为水、甲醇、乙醇、丙酮、乙二醇、丙二醇和DMSO中的任意一种,优选DMSO。
实验:
(1)所述稀释液:
所述缓冲剂:4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES),浓度为5-100mM/L和氢氧化钠(NaOH),浓度为10-60mM/L;
络合剂:EDTA-2Na,浓度为30-80mM/L;
所述渗透压维持剂:氯化钠(NaCl),浓度为20-80mM/L;
所述表面活性剂:吐温80,浓度为0.01-0.1%;
所述抑菌剂:Proclin 300,浓度为0.005-0.01%;
配置好的所述稀释液的pH值为7.0,渗透压应为150-300mOsm/kg之间。
(2)所述染色液(包括所述第一染色液和所述第二染色液):
实施例1中:
所述第一染色液:DiOC18(3),浓度为0.03%,所述溶剂为DMSO;
所述第二染色液:LDS751,浓度为0.008%,所述溶剂为DMSO;
实施例2中:
所述第一染色液:Hoechst 33342,浓度为0.009%,所述溶剂为DMSO;
所述第二染色液:DIL,浓度为0.01%,所述溶剂为DMSO。
(3)细胞检测示例:
有益效果:
1、基于流式细胞术原理,检测的样本量更大,可以实现5-8ul的标本检测量,比常规的图像法检测量2uL更多,检测结果更稳定可靠;
2、采用单所述反应杯反应,无需为了实现检测更多的项目而进行样品分杯检测;
3、同一个细胞有两种荧光特性,更有利于对于尿液中的细胞分类识别。
4、通过两种荧光的检测,对于同一个细胞来说可以获得更多的参数,在所述流式细胞仪上。
以上所揭露的仅为本发明一种基于流式细胞术原理的尿液有形成分分析方法较佳实施例而已,当然不能以此来限定本发明之权利范围,本领域普通技术人员可以理解实现上述实施例的全部或部分流程,并依本发明权利要求所作的等同变化,仍属于发明所涵盖的范围。
Claims (7)
1.一种基于流式细胞术原理的尿液有形成分分析方法,其特征在于,包括以下步骤:
向反应杯中加入占总体积60%-80%的稀释液和占总体积1.5%-2.5%的第一荧光染色剂和占总体积1.5%-2.5%第二荧光染色剂,搅拌均匀得到检测液;
将占总体积10%-25%的尿液样本加入所述检测液中进行孵育,得到孵育液;
基于流式细胞术原理,使用流式细胞仪对所述孵育液进行测试,得到测试数据。
2.如权利要求2所述的基于流式细胞术原理的尿液有形成分分析方法,其特征在于,
所述稀释液包括缓冲剂、渗透压维持剂、络合剂、表面活性剂和抑菌剂;
所述缓冲剂为三羟甲基氨基甲烷-盐酸、2-吗啉乙磺酸、氢氧化钠、双(2-羟乙基)氨基(三羟甲基)甲烷、哌嗪-N,N'-二(2-乙磺酸)、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸、3-吗啉丙磺酸、4-羟乙基哌嗪乙磺酸和3-(羟乙基哌嗪)-2-羟基丙磺酸中的一种或多种;
所述渗透压维持剂为氯化钠、氯化钾和硫酸钠中的任意一种或者两种组合;
所述表面活性剂为吐温20和吐温80中的任意一种;
所述抑菌剂为叠氮钠和ProClin300中的任意一种。
3.如权利要求1所述的基于流式细胞术原理的尿液有形成分分析方法,其特征在于,
所述流式细胞仪选用单激光器激发的流式细胞仪。
4.如权利要求3所述的基于流式细胞术原理的尿液有形成分分析方法,其特征在于,
所述第一染色剂为DiI、DiD、DiR和DiOCn(n)中的任意一种;
所述第二染色剂为PI、DAPI、7-氨基放线菌素D和LDS751中的任意一种。
5.如权利要求1所述的基于流式细胞术原理的尿液有形成分分析方法,其特征在于,
所述流式细胞仪选用双激光器激发的流式细胞仪。
6.如权利要求5所述的基于流式细胞术原理的尿液有形成分分析方法,其特征在于,
所述第一染色剂为SYBR GreenI、吖啶橙、Hoechst 33342、Hoechst 33258、EB和HI中的任意一种;
所述第二染色剂为DIL和DIR中的任意一种。
7.如权利要求1所述的基于流式细胞术原理的尿液有形成分分析方法,其特征在于,
所述将占总体积10%-25%的尿液样本加入所述检测液中进行孵育,得到孵育液的具体方式为:
所述将占总体积10%-25%的尿液样本加入所述检测液中,在常温下孵育30-40秒,或温度环境为在37℃下孵育20秒,得到孵育液。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210049474.XA CN114459982B (zh) | 2022-01-17 | 2022-01-17 | 一种基于流式细胞术原理的尿液有形成分分析方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210049474.XA CN114459982B (zh) | 2022-01-17 | 2022-01-17 | 一种基于流式细胞术原理的尿液有形成分分析方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN114459982A true CN114459982A (zh) | 2022-05-10 |
CN114459982B CN114459982B (zh) | 2024-05-31 |
Family
ID=81409184
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202210049474.XA Active CN114459982B (zh) | 2022-01-17 | 2022-01-17 | 一种基于流式细胞术原理的尿液有形成分分析方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN114459982B (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN115014908A (zh) * | 2022-05-23 | 2022-09-06 | 江西中医药大学 | 染色剂、心脏切片制备方法及微血管灌注染色评价方法 |
Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH08170960A (ja) * | 1994-10-20 | 1996-07-02 | Toa Medical Electronics Co Ltd | 尿中有形成分分析用試薬及びその試薬を用いた有形成分分析方法 |
US5693484A (en) * | 1991-05-14 | 1997-12-02 | Toa Medical Electronics Co., Ltd. | Method of classifying and counting cells in urine |
JPH09329596A (ja) * | 1996-05-23 | 1997-12-22 | Toa Medical Electronics Co Ltd | 尿中の有形成分分析方法および試薬 |
CN101173888A (zh) * | 2006-05-17 | 2008-05-07 | 希森美康株式会社 | 尿中粒子分析仪及其分析方法 |
CN101324495A (zh) * | 2008-07-30 | 2008-12-17 | 山东兰桥医学科技有限公司 | 一种用于流式细胞原理测定尿液有形成分的染色剂 |
CN107167356A (zh) * | 2017-03-31 | 2017-09-15 | 迪瑞医疗科技股份有限公司 | 一种尿液中细胞染色后快速显色的染色剂及其使用方法 |
CN112362435A (zh) * | 2020-11-05 | 2021-02-12 | 深圳安侣医学科技有限公司 | 细胞染色试剂及细胞染色方法 |
CN112985966A (zh) * | 2021-02-08 | 2021-06-18 | 桂林优利特医疗电子有限公司 | 一种尿液有形成分分析用稀释液及制备方法 |
-
2022
- 2022-01-17 CN CN202210049474.XA patent/CN114459982B/zh active Active
Patent Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5693484A (en) * | 1991-05-14 | 1997-12-02 | Toa Medical Electronics Co., Ltd. | Method of classifying and counting cells in urine |
JPH08170960A (ja) * | 1994-10-20 | 1996-07-02 | Toa Medical Electronics Co Ltd | 尿中有形成分分析用試薬及びその試薬を用いた有形成分分析方法 |
JPH09329596A (ja) * | 1996-05-23 | 1997-12-22 | Toa Medical Electronics Co Ltd | 尿中の有形成分分析方法および試薬 |
CN101173888A (zh) * | 2006-05-17 | 2008-05-07 | 希森美康株式会社 | 尿中粒子分析仪及其分析方法 |
CN101324495A (zh) * | 2008-07-30 | 2008-12-17 | 山东兰桥医学科技有限公司 | 一种用于流式细胞原理测定尿液有形成分的染色剂 |
CN107167356A (zh) * | 2017-03-31 | 2017-09-15 | 迪瑞医疗科技股份有限公司 | 一种尿液中细胞染色后快速显色的染色剂及其使用方法 |
CN112362435A (zh) * | 2020-11-05 | 2021-02-12 | 深圳安侣医学科技有限公司 | 细胞染色试剂及细胞染色方法 |
CN112985966A (zh) * | 2021-02-08 | 2021-06-18 | 桂林优利特医疗电子有限公司 | 一种尿液有形成分分析用稀释液及制备方法 |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN115014908A (zh) * | 2022-05-23 | 2022-09-06 | 江西中医药大学 | 染色剂、心脏切片制备方法及微血管灌注染色评价方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN114459982B (zh) | 2024-05-31 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US8685661B2 (en) | Reagent and kit for classifying and counting leukocytes, the preparation thereof, and process for classifying and counting leukocytes | |
US4859584A (en) | Cell growth rate determination by measurement of changes in cyanine dye levels in plasma membranes | |
EP1813942B1 (en) | Reagent for immature leukocyte analysis and reagent kit | |
JP4212827B2 (ja) | 骨髄液有核細胞自動分析方法 | |
US8940499B2 (en) | Reagent for blood analysis and method of use thereof | |
US8334109B2 (en) | Reagent for blood analysis and method of using the same | |
EP1890143B1 (en) | Reagent for sample analysis, reagent kit for sample analysis and method for sample analysis | |
EP2166353B1 (en) | Reagent and reagent kit for analysis of primitive leukocyte | |
US7592179B2 (en) | Five-part differential white blood cell control and method for preparation of the same | |
JPH0315757A (ja) | 等張性血液希釈剤 | |
JP4236893B2 (ja) | 菌計数方法および菌計数装置 | |
JPH03182562A (ja) | 全血中の網状赤血球の定量測定における化合物、試薬組成物及びその用途 | |
WO2010013678A1 (ja) | 子宮頸部異常細胞検出用試薬及びそれを用いる子宮頸部異常細胞検出方法 | |
CN114459982A (zh) | 一种基于流式细胞术原理的尿液有形成分分析方法 | |
EP0214613A2 (en) | Method for determination of a differential white blood cell count | |
CN107860633B (zh) | 一种白细胞分析用染色剂及其制备方法 | |
US20150050689A1 (en) | Formalin-Free Fixation Agent For Histological Stains of Tissue Samples | |
CN103884562B (zh) | 氯化醋酸as-d萘酚酯酶(as-dnce)染色液 | |
US4801549A (en) | Method for the determination of a differential white blood cell count | |
CN112986164B (zh) | 一种抗肝素稳定的α-L-岩藻糖苷酶检测试剂盒及其应用 | |
Cao et al. | Progressive association of a “soluble” glycolytic enzyme with the detergent‐insoluble cytoskeleton during in vitro morphogenesis of MDCK epithelial cells | |
Engasser et al. | Measurement of intracellular pH during the cultivation of hybridoma cells in batch and continuous cultures | |
CN105648035B (zh) | 一种α-醋酸萘酚酯酶染色试剂盒 | |
Jones | Quantitative histochemical studies on the succinate-neotetrazolium reductase system: Losses of nitrogenous material occurring from unfixed frozen sections of rat liver during incubation | |
NABET et al. | JEAN-MARC ENGASSER, ANNIE MARC, AND MARC CHERLET |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |