CN104698193A - 一种鉴定恒河猴血型的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种恒河猴血型鉴定方法，是一种恒河猴鉴定的实验方法，属生物医药技术领域。具体涉及一种用于恒河猴类人ABO血型的鉴定方法。本发明的主要特点在于通过使用正常人标准红细胞与处理过的恒河猴血清，观察红细胞凝集的现象，用于判断恒河猴的血型。该方法测定结果准确，实验操作简单，主要用于科研及交叉配血的预防并可为临床个体化治疗提供帮助。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，涉及一种鉴定恒河猴血型的方法。
技术背景
近似于人类，恒河猴也有ABO血型系统。但和人类及少部分灵长类动物(如类人猿)不同，恒河猴的ABO血型抗原都表达在组织器官内，其外周血红细胞上不表达AB抗原，或是非常弱。这些血型抗体与移植器官上表达的AB抗原结合同样可以造成类似于人类ABO血型不合的同种异体器官移植排斥反应。
由于恒河猴的ABO血型抗原并不表达在外周血红细胞上，且血浆中的纤维蛋白原和人-猴种属间非特异性抗体都会对部分检测结果产生干扰，容易产生假阳性或者假阴性结果。所以恒河猴血型鉴定一直较难。
目前，检测恒河猴血型最可靠的方法是组织切片免疫组织化学染色法，但是由于其有创性，标本不易获得，故一般只用于回顾验证性研究。其他传统的一些方法如传统试管法抗球蛋白试验和毛果云香碱用药后唾液的AB抗原鉴定，这些方法存在不易标准化，人为因素大，影响因素多的缺点，容易出现假阳性或者假阴性，造成血型判断不能明确或者判断错误。
寻找更准确便捷恒河猴类人ABO血型的方法，对于某些相关科研领域极为重要，对更加全面的了解恒河猴的血型系统特点也有重要的意义。
发明内容
针对上述问题，本发明提供了一种鉴定恒河猴血型的新方法，利用正常人的ABO抗原鉴定恒河猴血清中的抗体。
本发明通过以下技术方案来实现：
一种鉴定恒河猴血型的方法，其特征在于，先去除恒河猴血清标本中存在的抗人非特异性抗体，再分别利用正常人的A型血红细胞与B型血红细胞与处理后的血清中的抗体进行抗原-抗体凝血测试，根据是否产生凝集现象来判断待测恒河猴的血型。
作为可选方式，上述鉴定恒河猴血型的方法，包括以下步骤:
(1) 去除恒河猴血清标本中存在的抗人非特异性抗体；
(2) 将经步骤（1）处理后的血清分别与正常人的A型血全血和B型血全血混合；
(3) 根据步骤（2）中混合后的凝集情况判断待测恒河猴的血型：若只在与B型血抗原混合后出现凝集现象则为A型血，若只在与A型血抗原混合后出现凝集现象则为B型血，若两种混合条件下均出现凝集现象则为O型血，若两种混合条件下均不出现凝集现象则为AB型血。
作为可选方式，上述鉴定恒河猴血型的方法，包括以下步骤:
(1) 去除恒河猴血清标本中存在的抗人非特异性抗体；
(2) 将经步骤（1）处理后的血清分别与正常人的A型血红细胞和B型血红细胞混合；
(3) 根据步骤（2）中混合后的血细胞凝集情况判断待测恒河猴的血型：若只在与B型血抗原混合后出现凝集现象则为A型血，若只在与A型血抗原混合后出现凝集现象则为B型血，若两种混合条件下均出现凝集现象则为O型血，若两种混合条件下均不出现凝集现象则为AB型血。
作为可选方式，上述鉴定恒河猴血型的方法中，在凝血测试时还可以向所述去除抗人非特异性抗体后的血清中加入正常人的A型血红细胞作为阴性对照试验，以排除假阳性结果。
作为可选方式，上述鉴定恒河猴血型的方法中，在凝血测试之前还包括去除恒河猴血液标本中存在的纤维蛋白原的步骤。
作为可选方式，上述鉴定恒河猴血型的方法中，在所述步骤（1）中将恒河猴的血清与正常人O型血红细胞吸附处理后取清液。通过吸附处理可同时消除血浆内的纤维蛋白原和人-猴种属间非特异性抗体。
作为可选方式，上述鉴定恒河猴血型的方法中，所述吸附处理中，血清与正常人O型红细胞的体积是1:1。
作为可选方式，上述鉴定恒河猴血型的方法中，所述吸附处理具体为：取恒河猴血清，与正常人O型红细胞混匀后，室温孵育60min，8000r/min离心5min后取上清，得吸附后血清。
作为可选方式，上述鉴定恒河猴血型的方法中，所述步骤（2）中待测血清与红细胞的混合体积比为1:1。
作为可选方式，上述鉴定恒河猴血型的方法中，通过显微镜观察凝集现象是否产生。
作为可选方式，上述鉴定恒河猴血型的方法中，通过玻片凝集法进行抗原-抗体凝血测试。进一步，所述玻片凝集法具体为：玻片上先加标准AB红细胞，再加吸附后血清，3min后通过显微镜观察是否出现凝集现象来判断血型。
本说明书中公开的所有特征，或公开的所有方法或过程中的步骤，除了互相排斥的特征和/或步骤以外，均可以以任何方式组合。
本发明的有益效果：
本发明的通过使正常人红细胞与处理过的恒河猴血清混合，观察红细胞凝集的现象，用于判断恒河猴的血型。该方法测定结果准确，实验操作简单，可用于科研及交叉配血的预防并可为临床个体化治疗提供帮助。
具体实施方式：
以下通过实施例的具体实施方式再对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应当将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。在不脱离本发明的精神和原则之内做的任何修改，以及根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的等同替换或者改进，均应包括在本发明的保护范围内。
实施例1
选取20只恒河猴，全血采集后，离心出血清标本，用同体积正常人标准的O型红细胞，吸附恒河猴血清中存在的抗人非特异性抗体。在玻片上分别滴定量的正常人标准红细胞，在红细胞上再滴加同体积吸附后的血清，使血清和红细胞混匀，在显微镜的低倍镜下观察红细胞凝集现象。若镜下出现成块，颗粒状或者细油状的凝块，则表明红细胞出现凝集；若镜下红细胞分布均匀，则表明未出现凝集。根据实验现象来判断恒河猴最终血型（如表1所示）。
表1 血型判断规则
| 血 型 | 人A型血细胞 | 人B型血细胞 | 人O型血细胞 |
| A | - | + | - |
| B | + | - | - |
| O | + | + | - |
| AB | - | - | - |
分别在不同的时间取5次血，重复上述步骤，结果显示：20只恒河猴中有6只为A型血，5只为B型血，6只为O型血，3只为AB型血，多次重复测试的结果均一致。
实施例2
恒河猴血型鉴定的方法，包括以下步骤：
1） 血清标本的采集：用促凝管采血1mL，室温静置60min后，4℃冰箱内静置过夜，待清亮血清析出后， 8000r/min离心5min，获得新鲜血清。
2） 血清吸附处理：为去除恒河猴猴血清中存在的抗人非特异性抗体，取100μL新鲜恒河猴血清，与100μL正常人O型红细胞(上海血液生物医药有限责任公司)混匀后，室温孵育60min，8000r/min离心5min后取上清，得吸附后血清。
3） 血型鉴定 ：在玻片上分别滴10μL正常人标准A、B型血红细胞，再分别加入吸附后的恒河猴血清10μL,，轻轻晃荡，使吸附后的血清与红细胞混匀。
4） 3min内在显微镜下观察有无凝集现象。
在该实施例中选取的测试对象与实施例1相同，分别在不同的时间取5次血进行重复检测，血型鉴定结果与实施例1一致，多次重复测试的结果一致。
实施例3
按照与实施例2相同的方法进行恒河猴血型鉴定，唯一的区别是将所述步骤3）中的A、B型血红细胞换成A、B型血全血。结果与实施例2的结果完全一致。
采用本发明所述血型鉴定方法进行血型鉴定后再在同种血型间进行器官移植实验，结果显示：同种血型间进行器官移植后产生排斥反应的几率显著降低。
以上所述仅为本发明的优选实施例，对本发明而言仅是说明性的，而非限制性的；本领域普通技术人员理解，在本发明权利要求所限定的精神和范围内可对其进行许多改变，修改，甚至等效变更，但都将落入本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种鉴定恒河猴血型的方法，其特征在于，先去除恒河猴血清标本中存在的抗人非特异性抗体，再分别利用正常人的A型血红细胞与B型血红细胞与处理后的血清中的抗体进行抗原-抗体凝血测试，根据是否产生凝集现象来判断待测恒河猴的血型。
2.根据权利要求1所述的鉴定恒河猴血型的方法，其特征在于，包括以下步骤:
(1) 去除恒河猴血清标本中存在的抗人非特异性抗体；
(2) 将经步骤（1）处理后的血清分别与正常人的A型血全血和B型血全血混合；
(3) 根据步骤（2）中混合后的凝集情况判断待测恒河猴的血型：若只在与B型血抗原混合后出现凝集现象则为A型血，若只在与A型血抗原混合后出现凝集现象则为B型血，若两种混合条件下均出现凝集现象则为O型血，若两种混合条件下均不出现凝集现象则为AB型血。
3.根据权利要求1所述的鉴定恒河猴血型的方法，其特征在于，包括以下步骤:
(1) 去除恒河猴血清标本中存在的抗人非特异性抗体；
(2) 将经步骤（1）处理后的血清分别与正常人的A型血红细胞和B型血红细胞混合；
(3) 根据步骤（2）中混合后的血细胞凝集情况判断待测恒河猴的血型：若只在与B型血抗原混合后出现凝集现象则为A型血，若只在与A型血抗原混合后出现凝集现象则为B型血，若两种混合条件下均出现凝集现象则为O型血，若两种混合条件下均不出现凝集现象则为AB型血。
4.根据权利要求1所述的鉴定恒河猴血型的方法，其特征在于，在凝血测试之前还包括去除恒河猴血液标本中存在的纤维蛋白原的步骤。
5.根据权利要求3所述的鉴定恒河猴血型的方法，其特征在于，在所述步骤（1）中将恒河猴的血清与正常人O型血红细胞吸附处理后取清液。
6.根据权利要求5所述的鉴定恒河猴血型的方法，其特征在于，所述吸附处理中，血清与正常人O型红细胞的体积是1:1。
7.根据权利要求5所述的鉴定恒河猴血型的方法，其特征在于，所述吸附处理具体为：取恒河猴血清，与正常人O型红细胞混匀后，室温孵育60min，8000r/min离心5min后取上清，得吸附后血清。
8.根据权利要求3所述的鉴定恒河猴血型的方法，其特征在于，所述步骤（2）中待测血清与红细胞的混合体积比为1:1。
9.根据权利要求1所述的鉴定恒河猴血型的方法，其特征在于，通过显微镜观察凝集现象是否产生。
10.根据权利要求1所述的鉴定恒河猴血型的方法，其特征在于，通过玻片凝集法进行抗原-抗体凝血测试。
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