JPS6073356A - 血液分析用試薬 - Google Patents

血液分析用試薬

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JPS6073356A
JPS6073356A JP58183995A JP18399583A JPS6073356A JP S6073356 A JPS6073356 A JP S6073356A JP 58183995 A JP58183995 A JP 58183995A JP 18399583 A JP18399583 A JP 18399583A JP S6073356 A JPS6073356 A JP S6073356A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 この発明は、自動血液分析装置を用いて血液中の白血球
数を計測する際に試料調製用として使用する血液分析用
試薬に関するものである。
従来例の構成とその問題点 血液中の成分は生体の全組織、臓器と密接な関係を有し
、その分析結果は診断、治療の指針として重要視されて
いる。とくに、血液中の白血球は生体の容変に対する反
応も早く１診断や治療上の情報も多い。
白血球の検査は、従来白血球を５〜８種類に分けて計数
するいわゆる白血球分類による検査が行なわれていた。
この検査は顕微鏡による視界に基づくものであり、その
ため前処理も含めて検査に比較的長時間を要し、また検
視判別も高度な熟練を要するという欠点があった。
また、電子計算機のパターン認識技術による一部自動化
が行なわれているが、最終判断は熟練者に委ねる場合が
多く、検査に長時間を要するという問題があり、また装
置も大型で高価になり、取扱いも複雑であった。
このため、近時、白血球、赤血球、血小板等の血球計数
機構を備えた自動血液分析装置が開発され、血液分析の
迅速化、簡便化が図られるようになった。すなわち、前
記自球計数機構は、第１図に示すよう力電気抵抗方式で
行なわれ、この方式では血液は希釈液１で希釈され、血
球２はこの希釈液中に浮遊しており、検出器３内部に除
圧をかけると、浮遊している血球２は検出器３の細孔４
に吸引される。このとき、検出器３の内側と外側とには
それぞノ１内部電極５および外部電極６が設けられ、一
定の電流が内部電極５から外部電極６へと流れる。血球
２の電気抵抗は電解液（希釈液１）の電気抵抗に比べて
非常に大きいため、血球２が前記細孔４を通過するとき
、１ｉ５ｊ極間の抵抗が変化する。この抵抗の変化を信
号としてとり出し白血球等の血球を言１数する。
かかる電気抵抗方式で白血球を計数する場合には、血液
を希釈液で所定の希釈倍率に希釈し、白血球ｄ１数用溶
血剤（以下、単に白血球溶血胴上いう）の一定量を添加
し、赤血球と白血球細胞質を溶血し、白血球核をｄｔ数
できる大きさ忙残し、仁の白血球核を検出器３の細孔４
を通過させ計数する。
ところが、従来の白血球計数では、溶血剤として溶血力
の強い界面活性剤（たとえば、ヘキサデシルトリメチル
アンモニウムクロライドなど）が高濃度に含有されたも
のを用いていた念めに、白血球はすべて収縮の限界付近
に至り、そのため全数計数のみ、すなわち−峰分画分類
がイテなわれていた。＃Ｉ２図は一峰分画分類を示すグ
ラフである。
一方、この−峰分画分類を改善し、白血球本来の粒度差
を強調するために、全白血球を収縮の限界付近に到達さ
せることなく、大きい粒子は収縮速度を遅くシ、リンパ
球等の小さい粒子は速やかに縮小させる白血球溶血剤が
開発されている。この溶ｍ　剤１ｄドデシルトリメチル
アンモニウムクロライド、テトラデシルトリメチルアン
モニウムブロマイドを主成分とし、これによってＩＲ球
計測器で三峰分画分＠が可能となった。これは白血球の
リンパ骨髄母集団の鑑別ヒストグラムあるいけ容量白血
球ヒストグラムとも呼ばノ１ている。第３図１ｃｔ二蜂
分ｊｈ１分類のパターン例を示すグラフである。
このような自動血液分析装置による血液分析では、白血
球数のみならず他の測定項目（赤血球数。
ヘモクロビン量、ヘマトクリット値、血小板数等）をも
同時に短詩１ｍで測定できるとｂう長所を有する反面、
白血球測定についていえば実際の６項目分類に比べて２
分画分類では不充分であり、より分画数を高めることが
要望さｆｔでいた。
発明の目的 この発明Ｕ、自動血液分析装置を用いて三峰分１Φ１分
類を可能にしたＭｌｌｌｌ液分試用試薬供することイ１
：目的とする。
ボ明の（を成 この発明の血液分析用試薬は、白血球溶血剤としで、テ
トラデシルトリメチルアンモニウムブロマイドおよび／
またはヘキサデシルトリメチルアンモニウムクロライド
とドデシルトリメチルアンモニウムクロライドとクエン
酸とを含有したことを第１の要旨とするものである・ さらに、この発明の血液分析用試薬は、テトラデシルト
リメチルアンモニウムブロマイドおよび／またはヘキサ
デシルトリメチルアンモニウムクロライドとドデシルト
リメチルアンモニウムクロライドとクエン酸とを含有し
た白血球計数用溶崩剤と、ホウ酸系緩衝液、エチレンジ
アミン四酢酸寂よび（２−ピリジルチオ−１−オキシド
）ナトリウムを含有した希釈液との組合せからなること
を第２の要旨とするものである。
前記各第４級アンモニウム塩はリンパ骨髄母集団のうち
好酸性顆粒球および単球をリンパ球よりやや大きい程度
に収縮させ、第４図に示すような白血球の５峰分画分類
を形成する。第４図において、ビークＡＶｉノーマルリ
ンパ球ヲ、ヒークＢｔヨ好酸性単球を、ビークＣはその
他の顆粒球をそれぞれ示している。ちなみに、第３図に
示す三峰分画分類ではビークＤが主としてノーマルリン
パ球で、ビークＥがその他の白血球スある。前記テトラ
デシルトリメチルアンモニウムブロマイド（以下、　Ｍ
ＴＡＢと略称する）およびヘキサデシルトリメチルアン
モニウムクロライド（以下、ＣＴＡＣ，１！：略称する
）は単独せたけ混合して使用する。その際、これらを溶
解した水溶液にクエン酸およびドデンルトリメチルアン
モニウムクａライド（以下。
ＬＴＡＣと略称１゛る）を添加して５峰分画分類用溶血
剤とする。
次に、これらの各成分の作用を説明すると、　ＬＴＡＣ
釦遍当な濃度にすると白血球に対する収縮作用が弱いた
め１粒子径によって収縮速度に差が生しリンパ球糸と顆
粒球系とのピークの隔りが大きい状態で２分割できる反
面、その状態では赤血球のゴースト（血影）が収縮せず
リン・５球の小さいものと混合するという欠点がある。
このため、クエン酸を添加して溶血液の膜質（赤血球の
ゴースト）の収縮を助長し凝集を阻止する。
捷た。　？、４］’ＡＪ３はＬＴＡＣに比べて白血球収
縮作用が比較的強い反面、ある程度の範囲で経時変化が
小さくなりリンパ球系と顆粒球系の２分画に分類できる
が、両ピークが接近しすぎるので単独では１分画用とし
てしか使用できない、　ＣＴＡＣはＭＴＡＢよりも収縮
作用が強いが、顆粒球系白血球のうち好酸性顆粒球およ
び単球をより強く収縮させる傾向があるため５峰分画の
中央ピークを現出させやすくする。
これらの各成分を用いた白血球溶血剤の組成を以下に示
す。なお、％はいずれも重量％である。
（イ）　ＬＴＡＣとＣＴＡＣとの組合せ（成分）　（割
合） ＬＴＡＣ２６〜３１．５％ ＣＴＡＣ２，５〜　３５％ クエン酸　００１〜００２％ 水　６１〜７５％ 計　１００チ （Ｂ）　ＬＴＡＣとＭＴＡＢと・Ｃ’ＴＡＣとの組合せ
（成分）　（割合） ＬＴＡＣ２６〜３１，５チ ＭＴＡＢ　１．６〜２　％ ＣＴＡＣ１，６〜　２　％ クエン酸　０．０１〜０．０２％ 水　６１〜７５％ 割　１００チ （Ｃ）　Ｌ　Ｔ　ＡＣとＭＴＡＢとの組合せ（成分）　
（割合） ＬＴＡＣ２６〜３１．５チ Ｍ′ｒＡＲ３〜　４％ クエン酸　０．０１〜０．０２チ 水　６１〜７５％ 計　１００％ ごｉｌらいン〜（Ｑの組合せにおいて、　ＬＴＡＣの配
合割合が前記範囲より大なるときはリンパ系白血球とそ
の他の白血球のピークが接近しすきて分画が不充分とな
り、また前記範囲より小なるときはリンパ系白血球と赤
血球ゴーストとの分画が不充分となり、いずｔｌも好ｊ
しくない、ｌまた、ＣＴＡＣまたｔｅｌ、Ｍ′ＩΔＢの
配合割合が前記範囲より大なるとき附好酸１′４−助゛
Ｉ粒球、岸球とその他の顆粒球との分画が不充分となる
ｅＣＴＡＣ、Ｍ’ｌ’ＡＢ　ｔたはクエン酸か前Ｍ［Ｊ
範囲より小なるときけリンパ球と赤血球ゴーストとの分
画が不充分となる。
次Ｋ、血液中の白血球測定を自動血液分析装置を用いて
行なう場合の操作を説明する。採血した血液は希釈液に
よって所定倍率（通常２５０倍）に希釈後、白血球溶血
剤を滴下し３０〜４５秒後に前述の電気抵抗検出方式に
よってその粒度分布を検出する。白血球溶血剤の滴下量
は、通常試料血液（検体）　０．００８ｃｃＫ希釈液２
ｃｃを加えて希釈する場合１　ｃｃの溶血剤を添加する
。第５図はこのようにして測定した実際の白血球の粒度
分布を検出器より増幅弁別回路およびインターフェース
回路’ｃ　ｉ＋　−ｃ　マイクロコンピュータによりレ
コーダニ記録したものである。前記自動血液分析装置と
してｔよ１本出願人の製造に係る［多項目自動血球計数
装置ＣＣ−８００１等が使用できる。かかる血液分析装
置においては、試料調製段階である高倍率血液希釈およ
び白血球、ヘモグロビン測定のための溶血等の前処理が
自動化さね、約８０検体、／時間の速度で検体を処理・
分析できる。
試料の希釈操作は溶血操作とともに試料調製に重要な役
割を果たし、希釈液のｐＨや浸透圧が血球の形態や経時
変化に大きな影響を及ぼすために希釈液をＰＪｒ定のｐ
　Ｈや浸透圧に調整する。浸透圧はイｈ釈液中の食塩濃
度を等張浸透圧にし、測定項目に応Ｕて血液を２００〜
５００倍程度に希釈する。
また、ｐＨｉ嘲整のためにホウ酸およびその塩からなる
ｐ　Ｈ緩衝液を添加する。従来の希釈液においては、緩
衝液として主としてリン酸系のものが使用さノ１．てい
たが、このものは廃液のＢＯＤ値を高め富栄養化を招く
ために好ましくない。
希釈液はヘモグロビン、白血球および赤血球の各測定に
おいて同一希釈液を使用し、それぞれの測定対象に応じ
た希釈倍率とする。ヘモグロビン測定では血液の５００
倍希釈液に溶血剤を滴下して赤血球を溶解後、ヘモグロ
ビン量を光電比色法により測定する。
従来のヘモグロビン測定は、白血球測定で使用する溶血
剤および希釈剤を共用し、溶崩剤にシアン化合物を加え
、ヘモグロビンをメト化（ヘモグ２＋　３＋ ロビン中のＦｅ　をＦｅ　に酸化）させる測定方法が採
用されていたが、シアン化物の廃液処理が問題となり、
これに代ってオキシヘモグロビン測定法′が用いられる
ようになった。しかしながら、オキシヘモグロビン測定
法ではヘモグロビンのメト化を逆に防止することが必吸
であって、メト化によつ１測定誤差を生ずるおそれがあ
った。
このため、この発明における希釈液では、前記ホウ酸系
緩衝液妬加えて、メト化防止用の防腐剤↓ を有する（２−ピリジルチオ−１−オキシド）ナトリウ
ムを用い、さらにキレート剤としてＥＤＴＡ−２Ｋを加
え、これらを逆浸透および活性炭を利用して精製した高
品質水に溶解する。
このようにして調製した希釈液は、ｐ　Ｈ６〜８゜浸透
圧２４０〜３］　０ｍ０５ｍ／Ｋｐ　ｅＨ２０である。
この希釈液を用いた各測定項目での希釈倍率は。
白血球測定で２５０倍、ヘモグロビン１ｌｌ１１　定で
５００　倍。
赤血球測定で約３万倍である。
この発明に係る希釈液および白血球溶血剤を使用して検
体の前処理を行なうことにょシ、三峰分画分類された白
血球の計数を行なうことができ。
さらに希釈操ｆｆでの脱シアン、無リン化にょ力公害の
発生をも防止することができ、しかも自動血液分析装置
の迅速性、２便性と相まって有用で正確な血液情報を得
ることが可能となる。
実施例の説明 実施９１Ｊ］：　検体ｊよシ採血した血液中の白血球Ｈ
１数を前６【シ［多項目自動血球計数装置ＣＣ−８００
ＪＫより測定した。測定は電気抵抗検出方式により行な
い、血液０．０８ｍ１！を前処理として２ｍｌの希釈液
で２５０倍に希釈し、ついで白血球溶血剤を３ｍｌ加λ
、３０秒後横出器の細孔を通過させた。
使用し７ｈ溶血剤けっき゛の組成を存する。
ＬＴＡＣ２８，５５Ｉ ＣＴＡＣ３，１ｙ クエン酸　０．Ｏ］５Ｊ／ 水　６８．３８５ｙ 得１）れ７ｊ白皿球の粒度分布を第６図（Ｎに示す。
比較例１　＠　ｒ；％施例」と同じ検体１について。
従来の溶血剤を用いたほかは実施例１と同様にして白血
球測定を行なった。その結果を第６図（均に示す。
実施例２：　検体２より採血した血液を用いて下記白血
球溶血剤を用いたほかは実施例１々同様にして白血球ｄ
１１］定を行なった。その結果を第７図（八に示す。
ＬＴＡＣ２８，５ｙ ＭＴＡＩ（１，８９ ＣＴＡＣ１，８ｙ クエン酸　０．０１５ｙ 水　６７．８８５に’ 比較例２：　検体２について比較例１と回じ溶加剤を用
いて、実柿例２と同様にして測定した。
その結果を第７図＜１３）Ｋ示す。
実施例３：　検体３より採血した血液を用いて。
下記白血球溶血剤を用いた１１かは実施例１と同様にし
て白血球測定を行なっ／ζ。その結果を第８図（５）に
示す。
ＬＴＡＣ２８，５、ｐ ＭＴＡ８　３．５　ｙ クエン酸　０．０１５　、Ｐ 水　６７．９８５．ｆ 比較例３：検体３において比較例１と同じ溶血剤７用い
て、実施例と同様にして測定した。その結果をＭ８図（
Ｂ）に示す。
これらの実施例および比較例の試験結果から明らかなよ
うに、各実施例の溶血剤は白血球の５峰分画分類を明瞭
に示しているのに対し、比較例ではいずノ１も二峰分両
分類しか示していない。
発明の効果 この発明によｌ］、ば１通常の試験操作によって、従来
では得ることができなかった白血球内の好酸球、単球、
リンパ球、その他の５峰分画分類にな０、自動血液分析
装置の迅速性、簡便性に加えてより正確７．ｒ血球分類
情報をコストを上げずに得ることかできるという効果が
ある。
【図面の簡単な説明】
第１図は通常の目動血液分析装置における血球引数機構
を示１説明図、第２図および第３図は従来の白血球粒度
分布の測だ結果を示すグラフ、第４図はこの発明におけ
る白血球粒度分布を示すグラフ、第５図は実際の測定例
を示すグラフ、第６図（Ａ）および（Ｂ）は実施例１お
よび比較例１の試験結果を示すグラフ、第７図（イ）お
よび（Ｂ）　ｆｌ実施例２および比較例２の試験結果を
示すグラフ、第８図囚および（Ｂ）は実施例３および比
較例３の試験結果を示すグラフである。

Claims (2)

    【特許請求の範囲】
  1. （１）　白血球計数用溶血剤として、テトラデシルトリ
    メチルアンモニウムブロマイドおよび／またはヘキサデ
    シルトリメチルアンモニウムクロライドとドデシルトリ
    メチルアンモニウムクロライドとクエン酸とを含有した
    血液分析用試薬。
  2. （２）　テトラデシルトリメチルアンモニウムブロマイ
    ドおよび、１首りはヘキサデシルトリメチルアンモニウ
    ムクロライドとドデシルトリメチルアンモニウムクロラ
    イドとクエン酸とを含有した白血球庁１数用溶血剤と、
    ホウ酸系緩衝液、エチレンジアミン四酢酸ま・・よび（
    ２−ピリジルチオ−Ｊ−オキシド）ナトリウムを含有し
    た希釈液との紹介せかしなる葡液分析用試薬。
JP58183995A 1983-09-29 1983-09-29 血液分析用試薬 Granted JPS6073356A (ja)

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JP58183995A JPS6073356A (ja) 1983-09-29 1983-09-29 血液分析用試薬
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US06/880,049 US4656139A (en) 1983-09-29 1986-06-30 Method for preparing cells for blood analysis

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