JPH03137566A - 血液中の白血球およびヘモグロビンの測定用試薬 - Google Patents
血液中の白血球およびヘモグロビンの測定用試薬Info
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- JPH03137566A JPH03137566A JP1275280A JP27528089A JPH03137566A JP H03137566 A JPH03137566 A JP H03137566A JP 1275280 A JP1275280 A JP 1275280A JP 27528089 A JP27528089 A JP 27528089A JP H03137566 A JPH03137566 A JP H03137566A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
[産業上の利用分野コ
本発明は、血液試料中の白血球およびヘモグロビンを測
定する為の試薬に関するものである。
定する為の試薬に関するものである。
[従来の技術および発明が解決しようとする課題]血液
試料中の白血球数およびヘモグロビンを測定することは
、白血病や貧血症等の臨床診断にとって極めて重要であ
る。
試料中の白血球数およびヘモグロビンを測定することは
、白血病や貧血症等の臨床診断にとって極めて重要であ
る。
白血球数の測定においては、顕微鏡観察による視算法が
基本の方法となっている。
基本の方法となっている。
しかし、視算法においては、Ti1rk液等で赤血球を
溶血させ、白血球を染色した後、計算板上の白血球を一
個一個数える必要がある。そのため、非常に手間と時間
が必要である。
溶血させ、白血球を染色した後、計算板上の白血球を一
個一個数える必要がある。そのため、非常に手間と時間
が必要である。
ところで、血液試料中の白血球数の測定においては、自
動血液分析装置による方法も広く行われている。自動血
液分析装置による白血球数の測定は、赤血球溶解剤を添
加することにより血液試料中の赤血球を溶解させ、主と
して白血球のみが残った白血球測定用試料を作製するこ
とによって行われる。白血球測定用試料は、自動血液分
析装置内の検出部に設けられた細い通路または細孔を通
過させられる。このとき、−個一個の白血球に対応して
検出部で発生される電気的または光学的信号を検出する
ことにより白血球数がカウント(計数)される。
動血液分析装置による方法も広く行われている。自動血
液分析装置による白血球数の測定は、赤血球溶解剤を添
加することにより血液試料中の赤血球を溶解させ、主と
して白血球のみが残った白血球測定用試料を作製するこ
とによって行われる。白血球測定用試料は、自動血液分
析装置内の検出部に設けられた細い通路または細孔を通
過させられる。このとき、−個一個の白血球に対応して
検出部で発生される電気的または光学的信号を検出する
ことにより白血球数がカウント(計数)される。
また、近年では、得られる信号の強度の差によって白血
球をさらに顆粒球、単球、リンパ球などのクラスに分類
し、カウントする装置も実現されている。この装置を用
いれば、上記の視算法よりも遥かに簡便に白血球を分類
・計数することができる。
球をさらに顆粒球、単球、リンパ球などのクラスに分類
し、カウントする装置も実現されている。この装置を用
いれば、上記の視算法よりも遥かに簡便に白血球を分類
・計数することができる。
一方、ヘモグロビンの測定においては、血液中のヘモグ
ロビンを、フェリシアン化カリウムおよびシアンを含有
する溶解試薬の作用によりシアンメトヘモグロビン(H
iCN)に転化させ、特定波長の吸光度を測定する方法
(シアンメトヘモグロビン法)が−船釣に行われている
。自動血液分析装置においても、そのまま利用できるこ
とによりシアンメトヘモグロビン法または、それに準じ
た方法が採用されている。
ロビンを、フェリシアン化カリウムおよびシアンを含有
する溶解試薬の作用によりシアンメトヘモグロビン(H
iCN)に転化させ、特定波長の吸光度を測定する方法
(シアンメトヘモグロビン法)が−船釣に行われている
。自動血液分析装置においても、そのまま利用できるこ
とによりシアンメトヘモグロビン法または、それに準じ
た方法が採用されている。
ところが、シアンメトヘモグロビン法においては毒物で
あるシアンを用いているため、試薬の取扱に危険が伴う
、また、測定後の廃液は、次亜塩素酸ナトリウムなどを
用いてシアンを分解した後に廃棄する必要があり、廃液
処理に煩わしさがある。
あるシアンを用いているため、試薬の取扱に危険が伴う
、また、測定後の廃液は、次亜塩素酸ナトリウムなどを
用いてシアンを分解した後に廃棄する必要があり、廃液
処理に煩わしさがある。
そのため、血液中のヘモグロビンをオキシヘモグロビン
(HbO□)に転化させ、特定波長の吸光度を測定する
方法(オキシヘモグロビン法)も行われるようになって
きている。オキシヘモグロビン法においては、シアンを
使用しないため、試薬の取板に危険もなく、廃液処理に
煩わしさもない。
(HbO□)に転化させ、特定波長の吸光度を測定する
方法(オキシヘモグロビン法)も行われるようになって
きている。オキシヘモグロビン法においては、シアンを
使用しないため、試薬の取板に危険もなく、廃液処理に
煩わしさもない。
しかし、オキシヘモグロビン法においては、メトヘモグ
ロビン含量の高い血液試料は正しく測定できないという
問題を有する。これは、メトヘモグロビンがオキシヘモ
グロビンに転化しないためである0例としてコントロー
ル血液を使ってメトヘモグロビン含量を変化させた場合
の、オキシヘモグロビン法と本発明の実施例1との測定
結果の比較データ〈表1)を示す。コントロール血液は
自動血液分析装置の精度管理用物質として使用されるも
のであるが、一般に、低温で保存する場合には問題ない
が、常温以上で保存すると、血中ヘモグロビンがしだい
にメトヘモグロビンへ転化してしまう、したがって表1
に見られるように、22℃で保存したコントロール血液
をオキシヘモグロビン法で測定した場きには、ヘモグロ
ビン総量のうちメトヘモグロビンへ転化した分が測定で
きなくなり、数日後の測定値は初期値よりもしだいに低
値を示すようになる。
ロビン含量の高い血液試料は正しく測定できないという
問題を有する。これは、メトヘモグロビンがオキシヘモ
グロビンに転化しないためである0例としてコントロー
ル血液を使ってメトヘモグロビン含量を変化させた場合
の、オキシヘモグロビン法と本発明の実施例1との測定
結果の比較データ〈表1)を示す。コントロール血液は
自動血液分析装置の精度管理用物質として使用されるも
のであるが、一般に、低温で保存する場合には問題ない
が、常温以上で保存すると、血中ヘモグロビンがしだい
にメトヘモグロビンへ転化してしまう、したがって表1
に見られるように、22℃で保存したコントロール血液
をオキシヘモグロビン法で測定した場きには、ヘモグロ
ビン総量のうちメトヘモグロビンへ転化した分が測定で
きなくなり、数日後の測定値は初期値よりもしだいに低
値を示すようになる。
この問題を解決する方法として、大域らによって、中性
緩衝液(pH7,2)中にドデシル硫酸ナトリウムまた
は、等量でラウリル硫酸ナトリウム(SLS)(アニオ
ン性界面活性剤)およびトリトンX−100(ノニオン
性界面活性剤)を含有してなるヘモグロビン測定用試薬
が、クリニカル・バイオケミストリー(CIin、 B
iochem、 > 15巻83(1982)に教示
されている。
緩衝液(pH7,2)中にドデシル硫酸ナトリウムまた
は、等量でラウリル硫酸ナトリウム(SLS)(アニオ
ン性界面活性剤)およびトリトンX−100(ノニオン
性界面活性剤)を含有してなるヘモグロビン測定用試薬
が、クリニカル・バイオケミストリー(CIin、 B
iochem、 > 15巻83(1982)に教示
されている。
この方法では、メトヘモグロビンの影響を受けることな
く、血液中のヘモグロビン濃度を測定でき、しかも、シ
アンを含まないので廃液処理の煩わしさもない。
く、血液中のヘモグロビン濃度を測定でき、しかも、シ
アンを含まないので廃液処理の煩わしさもない。
しかし、この方法では、ヘモグロビン測定と同時に白血
球を測定することができない。
球を測定することができない。
また、特開昭61−148369公報「シアニドを含ま
ないヘモグロビン試薬」において、イオン性界面活性剤
を使ってヘモグロビンを測定する試薬が公開されている
が、この試薬でもヘモグロビン測定と同時に白血球を測
定することができない。
ないヘモグロビン試薬」において、イオン性界面活性剤
を使ってヘモグロビンを測定する試薬が公開されている
が、この試薬でもヘモグロビン測定と同時に白血球を測
定することができない。
以上のように、従来の技術では、シアンを含まない試薬
で、ヘモグロビン測定と同時に白血球を測定し、さらに
、メトヘモグロビン含量の高い血液試料のヘモグロビン
を正しく測定することはできなかった。
で、ヘモグロビン測定と同時に白血球を測定し、さらに
、メトヘモグロビン含量の高い血液試料のヘモグロビン
を正しく測定することはできなかった。
[課題を解決するための手段]
上述の従来技術における問題点を解決するために本発明
者等は鋭意研究の結果、以下のような試薬を創製するに
至った。
者等は鋭意研究の結果、以下のような試薬を創製するに
至った。
すなわち、以下の条件を満たす、血液中の白血球の算定
およびヘモグロビン濃度を測定するための試薬であって
、シアンを含まないことを特徴とする試薬である: i) 血液中の赤血球を溶血し、ヘモグロビンを変性さ
せうる濃度の四級アンモニウム塩(式a)あるいは、ピ
リジニウム塩(式b)の組成物よりなる群の中から選ば
れたカチオン系界面活性剤の少なくとも1種類を含むこ
と。
およびヘモグロビン濃度を測定するための試薬であって
、シアンを含まないことを特徴とする試薬である: i) 血液中の赤血球を溶血し、ヘモグロビンを変性さ
せうる濃度の四級アンモニウム塩(式a)あるいは、ピ
リジニウム塩(式b)の組成物よりなる群の中から選ば
れたカチオン系界面活性剤の少なくとも1種類を含むこ
と。
式a
(式中R1: Cm−C2゜アルキル基アルケニ
ル基 又はアルキニル基 R2、RzおよびR4:C1〜C6アルキル基アルゲニ
ル基 又はアルキニル基 X−: 陰イオン基) 式b (式中1=7〜19の整数 X−; 陰イオン基) ii)式C〜eのカチオン、ノニオン、両性界面活性剤
あるいはfに示すようなヘモグロビン中のヘムを酸化さ
せうる酸化剤よりなる群の中から選ばれた少なくとも1
種類を含むこと。
ル基 又はアルキニル基 R2、RzおよびR4:C1〜C6アルキル基アルゲニ
ル基 又はアルキニル基 X−: 陰イオン基) 式b (式中1=7〜19の整数 X−; 陰イオン基) ii)式C〜eのカチオン、ノニオン、両性界面活性剤
あるいはfに示すようなヘモグロビン中のヘムを酸化さ
せうる酸化剤よりなる群の中から選ばれた少なくとも1
種類を含むこと。
式C
(式中R1: C,〜c2゜アルキル基アルケニル
基 又はアルキニル基 R2およびR3: c、〜C,アルキル基アルケニ
ル基 又はアルキニル基 X−: 陰イオン基) 式d R,−R2−(CH,CH20)。−H(式中R,:
C,〜c2゜アルキル基アルケニル基 又はアルキニル基 n : 10〜50の整数) 式e 2 ! R,−N” −CH2CO0 3 (式中R+ : Ca 〜C20アルキル基
R2およびR3: c、〜C,アルアルキル基アルケ
ニ ル基アルキニル基) f−−一亜硝酸イオン、キノン体、アロキサン、メチレ
ン青、アニリン、アセトアニリド、ニトロベンゼン、ア
セトフェネチジン、ニトロトルエン、スルフォンアミド
、フェニルヒドラジン、アスコルビン酸、アミンフェノ
ール 1ii) pHの範囲が3.0〜9.0の溶液である
こと。
基 又はアルキニル基 R2およびR3: c、〜C,アルキル基アルケニ
ル基 又はアルキニル基 X−: 陰イオン基) 式d R,−R2−(CH,CH20)。−H(式中R,:
C,〜c2゜アルキル基アルケニル基 又はアルキニル基 n : 10〜50の整数) 式e 2 ! R,−N” −CH2CO0 3 (式中R+ : Ca 〜C20アルキル基
R2およびR3: c、〜C,アルアルキル基アルケ
ニ ル基アルキニル基) f−−一亜硝酸イオン、キノン体、アロキサン、メチレ
ン青、アニリン、アセトアニリド、ニトロベンゼン、ア
セトフェネチジン、ニトロトルエン、スルフォンアミド
、フェニルヒドラジン、アスコルビン酸、アミンフェノ
ール 1ii) pHの範囲が3.0〜9.0の溶液である
こと。
iv) 前記四級アンモニウム塩総濃度が、0.1〜
15.0./lの範囲にあること。
15.0./lの範囲にあること。
V) 前記ピリジニウム塩総濃度が、0.1〜15.0
g/i’の範囲にあること。
g/i’の範囲にあること。
vi) 前記酸化剤総濃度が、0.5〜10.0g/
4の範囲にあること。
4の範囲にあること。
vii ) 前記ノニオン性界面活性剤総濃度が、0
゜1〜15.0./i’の範囲にあること。
゜1〜15.0./i’の範囲にあること。
vii)’ 前記両性界面活性剤総濃度が、0.1〜1
5.0゜/1の範囲にあること。
5.0゜/1の範囲にあること。
ix) 前記カチオン性界面活性剤総濃度が、0.1
〜15.09#の範囲にあること。
〜15.09#の範囲にあること。
上記試薬中の成分aないしfを適宜組合せることにより
、白血球を例えばリンパ球;単球、好酸球、好塩基球;
好中球など2つあるいは3つに分画することもできる。
、白血球を例えばリンパ球;単球、好酸球、好塩基球;
好中球など2つあるいは3つに分画することもできる。
本発明の試薬の組成例は次のようなものがある。
組成例1
亜硝酸ナトリウム
リン酸緩衝剤
塩化ナトリウム
精製水
組成例2
亜硝酸ナトリウム
リン酸緩衝剤
塩化ナトリウム
精製水
組成例3
濃度範囲
0.5〜10.0!?
1715〜17608
1.0〜10.0.。
1
濃度範囲
0.5〜10.0゜
1/15〜1/608
1、O〜io、o。
1
濃度範囲
クロライド(四級アンモニウム塩)
亜硝酸ナトリウム 0.5〜10.0
.。
.。
!J ン酸viWr 剤1/15〜1760M塩化ナト
リウム 1.0〜io、og精製
氷 11組成例1
〜3は、四級アンモニウム塩で赤血球を溶血し、かつヘ
モグロビンを変性させ、さらに、ヘムの酸化剤として亜
硝酸ナトリウムを加えておくことによってヘモグロビン
の変性を早め、安定化させたものである。
リウム 1.0〜io、og精製
氷 11組成例1
〜3は、四級アンモニウム塩で赤血球を溶血し、かつヘ
モグロビンを変性させ、さらに、ヘムの酸化剤として亜
硝酸ナトリウムを加えておくことによってヘモグロビン
の変性を早め、安定化させたものである。
また、組成例2では、ノニオン性界面活性剤を加えるこ
とにより、白血球を2つに分画できるようにしたもので
あり、組成例3では、四級アンモニウム塩を2種類組み
合わせることにより、白血球を2つ以上に分画できるよ
うにしたものである。
とにより、白血球を2つに分画できるようにしたもので
あり、組成例3では、四級アンモニウム塩を2種類組み
合わせることにより、白血球を2つ以上に分画できるよ
うにしたものである。
特許請求の範囲で記載している四級アンモニウム塩の総
濃度とは、組成例3の場合には、ラウリルトリメチルア
ンモニウムクロライドの濃度とセチルトリメチルアンモ
ニウムクロライドの濃度を加えた0、31〜12.0.
の濃度範囲のことを意味する。
濃度とは、組成例3の場合には、ラウリルトリメチルア
ンモニウムクロライドの濃度とセチルトリメチルアンモ
ニウムクロライドの濃度を加えた0、31〜12.0.
の濃度範囲のことを意味する。
組成例4
濃度範囲
ラウリルトリメチルアンモニウム
クロライド
0.5〜io、o。
リン酸緩衝剤
塩化ナトリウム
精製水
組成例5
1/15〜1760M
1.0〜10.0.。
1
濃度範囲
リン酸緩衝剤
塩化ナトリウム
精製水
組成例6
1715〜1760M
1.0〜10.0g
1
濃度範囲
リン酸緩衝剤
塩化ナトリウム
精製水
組成例7
1715〜1/5ON
1.0〜to、oy
1
濃度範囲
ラウリルピリジニウムクロ 0,5〜10.0゜
ライト(ピリジニウム塩) ラウリルジメチルアミノ 0.5〜10.0゜
酢酸ベタイン リン酸緩衝剤 1715〜1/2O
N塩化ナトリウム 1.0〜10.O
f精製水 11組成例
4においては、四級アンモニウム塩と両性界面活性剤と
の組合せ、組成例5においては、四級アンモニウム塩と
ノニオン性界面活性剤との組合せ、組成例6においては
、四級アンモニウム塩とカチオン性界面活性剤との組合
せ、組成例7においては、ピリジニウム塩と両性界面活
性剤との組合せによって、ヘモグロビンを変性し、安定
化させたものである。
ライト(ピリジニウム塩) ラウリルジメチルアミノ 0.5〜10.0゜
酢酸ベタイン リン酸緩衝剤 1715〜1/2O
N塩化ナトリウム 1.0〜10.O
f精製水 11組成例
4においては、四級アンモニウム塩と両性界面活性剤と
の組合せ、組成例5においては、四級アンモニウム塩と
ノニオン性界面活性剤との組合せ、組成例6においては
、四級アンモニウム塩とカチオン性界面活性剤との組合
せ、組成例7においては、ピリジニウム塩と両性界面活
性剤との組合せによって、ヘモグロビンを変性し、安定
化させたものである。
なお、各成分の濃度を調整することにより、白血球を2
つ以上の集団に分けることも可能である。
つ以上の集団に分けることも可能である。
組成例1〜7において、リン酸緩衝剤は液のpHを3.
0〜9.0に調整するためのものであり、好ましいpH
範囲は5.0〜8.0である。pHが3.0以下になる
と、白血球へのダメージが大きくなり白血球測定が困難
となる。また、pHが9.0以上になるとヘモグロビン
の経時安定性が悪くなる。塩化ナトリウムは電気伝導度
を自動血液分析装置にて測定できるレベルに調整するた
めのものである。
0〜9.0に調整するためのものであり、好ましいpH
範囲は5.0〜8.0である。pHが3.0以下になる
と、白血球へのダメージが大きくなり白血球測定が困難
となる。また、pHが9.0以上になるとヘモグロビン
の経時安定性が悪くなる。塩化ナトリウムは電気伝導度
を自動血液分析装置にて測定できるレベルに調整するた
めのものである。
特許請求の範囲に示されている各成分の濃度は、他の希
釈液等を必要とせず、試薬の中に血液を加えるだけで測
定できるような状態の時の濃度を示しているが、希釈液
と溶解試薬を一定の比率で混合してヘモグロビンや白血
球を測定するような従来からある装置に使用する場合に
は、装置の混合比率にあわせて、各界面活性剤等の成分
濃度を変えることも可能である。その場合には、特許請
求の範囲に示されている各成分の濃度は、希釈液と溶解
試薬を混合した液における濃度を表す。
釈液等を必要とせず、試薬の中に血液を加えるだけで測
定できるような状態の時の濃度を示しているが、希釈液
と溶解試薬を一定の比率で混合してヘモグロビンや白血
球を測定するような従来からある装置に使用する場合に
は、装置の混合比率にあわせて、各界面活性剤等の成分
濃度を変えることも可能である。その場合には、特許請
求の範囲に示されている各成分の濃度は、希釈液と溶解
試薬を混合した液における濃度を表す。
[作用]
本発明によると、
i)ヘモグロビンと白血球の測定が1つの試料で可能で
あり、 ii)メトヘモグロビン含量の高い血液試料も正しく測
定でき、 1ii) Lかも、シアンを含まないので、廃液処理
の煩h Lさのない試薬が提供できる。
あり、 ii)メトヘモグロビン含量の高い血液試料も正しく測
定でき、 1ii) Lかも、シアンを含まないので、廃液処理
の煩h Lさのない試薬が提供できる。
さらに、この試薬を自動血液分析装置に用いた場合、ヘ
モグロビン測定用検出部と白血球測定用検出部を別々に
持つ必要はなく、また、流体系も二系列にする必要がな
くなる為、装置が簡単でコストも安くなる。
モグロビン測定用検出部と白血球測定用検出部を別々に
持つ必要はなく、また、流体系も二系列にする必要がな
くなる為、装置が簡単でコストも安くなる。
[実施例]
本発明は、以下の実施例によってより詳しく説明される
が、それらに限定されるものではない。
が、それらに限定されるものではない。
実施例1
下記組成の試薬を調製した。
濃度
ミリスチルトリメチルアンモニウム 0.7gブロマ
イド 亜硝酸ナトリウム 1.4g (電気伝導度を13付近に調整) 精製水 11第1図に、
従来法[E−4000(東亜医用電子株式会社製)にて
測定コによる白血球数測定結果と実施例1の試薬による
白血球数測定結果との相関図を示す、相関係数r=0.
996、回帰直線y・1.013に−0,673と非常
に高い相関を示している。
イド 亜硝酸ナトリウム 1.4g (電気伝導度を13付近に調整) 精製水 11第1図に、
従来法[E−4000(東亜医用電子株式会社製)にて
測定コによる白血球数測定結果と実施例1の試薬による
白血球数測定結果との相関図を示す、相関係数r=0.
996、回帰直線y・1.013に−0,673と非常
に高い相関を示している。
第2図に、従来法[オキシヘモグロビン法]によるヘモ
グロビン値測定結果と実施例1の試薬によるヘモグロビ
ン値測定結果との相関図を示す、相関係数r=0.99
9、回帰直線y□1.o04x−0,027と非常に高
い相関を示している。
グロビン値測定結果と実施例1の試薬によるヘモグロビ
ン値測定結果との相関図を示す、相関係数r=0.99
9、回帰直線y□1.o04x−0,027と非常に高
い相関を示している。
表1に示すようにメトヘモグロビン量が増えたために、
オキシヘモグロビン法によるヘモグロビン測定値が低下
した場合でも、実施例1の試薬によるヘモグロビン測定
値は変化が見られず一定の値を示す。
オキシヘモグロビン法によるヘモグロビン測定値が低下
した場合でも、実施例1の試薬によるヘモグロビン測定
値は変化が見られず一定の値を示す。
なお、表1のオキシヘモグロビン法による初期値と実施
例1の試薬による初期値とに差が見られえるのは、最初
から血中ヘモグロビンの一定量がメトヘモグロビンに転
化しているコントロール血液を使用したためである。
例1の試薬による初期値とに差が見られえるのは、最初
から血中ヘモグロビンの一定量がメトヘモグロビンに転
化しているコントロール血液を使用したためである。
表1 コントロール血液測定結果(オキシヘモグロビン
法v3実施例1) オキシヘモ 実施例1の試薬 グロビン法 による測定 初期値 17゜Oy/l 18.1g#2
2℃、3日保存 16.5g# 18.hp#2
2℃、7日保存 16.Oy/1’ 18.h
/4実施例2 下記組成の試薬を調製した。
法v3実施例1) オキシヘモ 実施例1の試薬 グロビン法 による測定 初期値 17゜Oy/l 18.1g#2
2℃、3日保存 16.5g# 18.hp#2
2℃、7日保存 16.Oy/1’ 18.h
/4実施例2 下記組成の試薬を調製した。
精製水 11実施例3
下記組成の試薬を調製した。
ラウリルトリメチルアンモニウム 3.2゜クロライ
ド セチルトリメチルアンモニウム 0.29クロライ
ド 亜硝酸ナトリウム 1.4gリン酸M
tll剤 1725M(pH6) 塩化ナトリウム 適量(電気伝導度
を13付近に調整) 精製水 11第3〜5図に
それぞれ実施例1〜3の試薬を使った時の白血球粒度分
布を示す。第3〜5図において、縦軸は血球の相対度数
を表し、横軸は自動血液分析装置によって血球を測定し
たときに得られる血球信号の相対強度(すなわち血球の
大きさ)を表す、実施例1の試薬を用いた場合には、第
3図に示すように白血球は単峰の粒度分布を示す。実施
例2の試薬を用いた場きには、第4図に示すように白血
球は領域Aと領域Bの2つに分かれた粒度分布を示す、
領域Aはリンパ球の集団であり、領域Bはリンパ球以外
の白血球の集団である。実施例3の試薬を用いた場合に
は、第5図に示すように白血球は領域A、領領域と領域
りの3つに分かれた粒度分布を示す、領域Aはリンパ球
の集団、領域Cは単球、好酸球、好塩基球の集団、領域
りは好中球の集団である。
ド セチルトリメチルアンモニウム 0.29クロライ
ド 亜硝酸ナトリウム 1.4gリン酸M
tll剤 1725M(pH6) 塩化ナトリウム 適量(電気伝導度
を13付近に調整) 精製水 11第3〜5図に
それぞれ実施例1〜3の試薬を使った時の白血球粒度分
布を示す。第3〜5図において、縦軸は血球の相対度数
を表し、横軸は自動血液分析装置によって血球を測定し
たときに得られる血球信号の相対強度(すなわち血球の
大きさ)を表す、実施例1の試薬を用いた場合には、第
3図に示すように白血球は単峰の粒度分布を示す。実施
例2の試薬を用いた場きには、第4図に示すように白血
球は領域Aと領域Bの2つに分かれた粒度分布を示す、
領域Aはリンパ球の集団であり、領域Bはリンパ球以外
の白血球の集団である。実施例3の試薬を用いた場合に
は、第5図に示すように白血球は領域A、領領域と領域
りの3つに分かれた粒度分布を示す、領域Aはリンパ球
の集団、領域Cは単球、好酸球、好塩基球の集団、領域
りは好中球の集団である。
[発明の効果]
以上より、本発明の試薬によれば、従来と同じ測定値が
得られる上に i)ヘモグロビンと白血球が同時に測定でき、しかも白
血球を分画することもできる。
得られる上に i)ヘモグロビンと白血球が同時に測定でき、しかも白
血球を分画することもできる。
ii) シアン等の毒物を含まないので、廃液処理の
必要がなくなる。
必要がなくなる。
iii ) メトヘモグロビン含量の高い血液試料も
正しく測定できる。
正しく測定できる。
という効果が奏せられる。
さらに、測定装置が簡単になり、コストが安くなる。
第1図は、従来法[E−4000(東亜医用電子株式会
社製)にて測定]による白血球数測定結果と実施例1の
試薬による白血球数測定結果との相関を示すグラフであ
り;相関係数r=0.996、回帰直線y・1.013
x−0,673と非常に高い相関を示している。 第2図は、従来法[オキシヘモグロビン法コによるヘモ
グロビン値測定結果と実施例1の試薬によるヘモグロビ
ン値測定結果との相関を示すグラフであり;m間係数r
=0.999、回帰直線y・1.004に−0,027
と非常に高い相関を示している。 第3〜5図はそれぞれ実施例1〜3の試薬を使った時の
白血球粒度分布を示すグラフであり、第3〜5図におい
て、縦軸は血球の相対度数を表し、横軸は自動血液分析
装置によって血球を測定したときに得られる血球信号の
相対強度(すなわち血球の大きさ)を表す、第4図に示
す領域Aはリンパ球の集団であり、領域Bはリンパ球以
外の白血球の集団である。第5図に示す領域Aはリンパ
球の集団、領域Cは単球、好酸球、好塩基球の集団、領
域りは好中球の集団である。
社製)にて測定]による白血球数測定結果と実施例1の
試薬による白血球数測定結果との相関を示すグラフであ
り;相関係数r=0.996、回帰直線y・1.013
x−0,673と非常に高い相関を示している。 第2図は、従来法[オキシヘモグロビン法コによるヘモ
グロビン値測定結果と実施例1の試薬によるヘモグロビ
ン値測定結果との相関を示すグラフであり;m間係数r
=0.999、回帰直線y・1.004に−0,027
と非常に高い相関を示している。 第3〜5図はそれぞれ実施例1〜3の試薬を使った時の
白血球粒度分布を示すグラフであり、第3〜5図におい
て、縦軸は血球の相対度数を表し、横軸は自動血液分析
装置によって血球を測定したときに得られる血球信号の
相対強度(すなわち血球の大きさ)を表す、第4図に示
す領域Aはリンパ球の集団であり、領域Bはリンパ球以
外の白血球の集団である。第5図に示す領域Aはリンパ
球の集団、領域Cは単球、好酸球、好塩基球の集団、領
域りは好中球の集団である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1、以下の条件を満たす、血液中の白血球の算定および
ヘモグロビン濃度を測定するための試薬であって、シア
ンを含まないことを特徴とする試薬。 i)血液中の赤血球を溶血し、ヘモグロビンを変性させ
うる濃度の四級アンモニウム塩(式a)あるいは、ピリ
ジニウム塩(式b)の組成物よりなる群の中から選ばれ
たカチオン系界面活性剤の少なくとも1種類を含むこと
。 式a ▲数式、化学式、表等があります▼ (式中R_1:C_8〜C_2_0アルキル基アルケニ
ル基 又はアルキニル基 R_2、R_3およびR_4:C_1〜C_8アルキル
基アルケニル基 又はアルキニル基 X^−:陰イオン基) 式b ▲数式、化学式、表等があります▼ (式中n:7〜19の整数 X^−:陰イオン基) ii)式c〜eのカチオン、ノニオン、両性界面活性剤
あるいはfに示すようなヘモグロビン中のヘムを酸化さ
せうる酸化剤よりなる群の中から選ばれた少なくとも1
種類を含むこと。 式c ▲数式、化学式、表等があります▼ (式中R_1:C_8〜C_2_0アルキル基アルケニ
ル基 又はアルキニル基 R_2およびR_3:C_1〜C_8アルキル基アルケ
ニル基 又はアルキニル基 X^−:陰イオン基) 式d R_1−R_2−(CH_2CH_2O)_n−H(式
中R_1:C_8〜C_2_0アルキル基アルケニル基 又はアルキニル基 R_2:▲数式、化学式、表等があります▼、又はCO
O n:10〜50の整数) 式e ▲数式、化学式、表等があります▼ (式中R_1:C_8〜C_2_0アルキル基R_2お
よびR_3:C_1〜C_8アルキル基アルケニル基 又はアルキニル基) f−−−亜硝酸イオン、キノン体、アロキサン、メチレ
ン青、アニリン、アセトアニリド、ニトロベンゼン、ア
セトフェネチジン、ニトロトルエン、スルフォンアミド
、フェニルヒドラジン、アスコルビン酸、アミノフェノ
ール iii)pHの範囲が3.0〜9.0の溶液であること
。 iv)前記四級アンモニウム塩総濃度が、0.1〜15
.0g/lの範囲にあること。 v)前記ピリジニウム塩総濃度が、0.1〜15.0g
/lの範囲にあること。 vi)前記酸化剤総濃度が、0.5〜10.0g/lの
範囲にあること。 vii)前記ノニオン性界面活性剤総濃度が、0.1〜
15.0g/lの範囲にあること。 viii)前記両性界面活性剤総濃度が、0.1〜15
.0g/lの範囲にあること。 ix)前記カチオン性界面活性剤総濃度が、0.1〜1
5.0g/lの範囲にあること。2、四級アンモニウム
塩よりなる群の中から選ばれた少なくとも2種類を含み
、その総濃度が0.1〜12.0g/lの範囲にあり、
f群から選ばれた少なくとも1種類の酸化剤を含み、白
血球を少なくとも2つに分画することができる請求項1
の試薬。 3、四級アンモニウム塩よりなる群の中から選ばれた少
なくとも1種類を含み、その総濃度が0.1〜12.0
g/lの範囲にあり、ノニオン性界面活性剤よりなる群
の中から選ばれた少なくとも1種類を含み、ノニオン性
界面活性剤の総濃度が0.1〜12.0g/lの範囲に
あり、f群の中から選ばれた少なくとも1種類の酸化剤
を含み、酸化剤の総濃度が0.5〜10.0g/lの範
囲にあり、白血球を少なくとも2つに分画できる請求項
1の試薬。 4、四級アンモニウム塩よりなる群の中から選ばれた少
なくとも1種類を含み、総濃度が0.1〜12.0g/
lの範囲にあり、両性界面活性剤よりなる群の中から選
ばれた少なくとも1種類を含み、両性界面活性剤総濃度
が、0.1〜12.0g/lの範囲にあり、白血球を少
なくとも2つに分画することができる請求項1の試薬。 5、四級アンモニウム塩よりなる群の中から選ばれた少
なくとも1種類を含み、総濃度が1.0〜10.0g/
lの範囲にあり、ノニオン性界面活性剤よりなる群の中
から選ばれた少なくとも1種類を含み、ノニオン性界面
活性剤総濃度が、0.1〜12.0g/lの範囲にあり
、白血球を少なくとも2つに分画することができる請求
項1の試薬。 6、四級アンモニウム塩よりなる群の中から選ばれた少
なくとも1種類を含み、四級アンモニウム塩の総濃度が
1.0〜12.0g/lの範囲にあり、カチオン性界面
活性剤よりなる群の中から選ばれた少なくとも1種類を
含み、カチオン性界面活性剤総濃度が0.1〜5.0g
/lの範囲にあり、白血球を少なくとも2つに分画する
ことができる請求項1の試薬。 7、四級アンモニウム塩よりなる群の中から選ばれた少
なくとも2種類を含み、四級アンモニウム塩の総濃度が
2.2〜5.0g/lの範囲にあり、f群の中から選ば
れた少なくとも1種類の酸化剤を含み、酸化剤の総濃度
が0.5〜10.0g/lの範囲にあり、白血球を3つ
に分画することができる請求項1の試薬。 8、四級アンモニウム塩よりなる群の中から選ばれた少
なくとも1種類を含み、四級アンモニウム塩の総濃度が
1.0〜10.0g/lの範囲にあり、ピリジニウム塩
よりなる群の中から選ばれた少なくとも1種類を含み、
ピリジニウム塩の総濃度が1.0〜5.0g/lの範囲
にあり、白血球を3つに分画することができる請求項1
の試薬。 9、四級アンモニウム塩よりなる群の中から選ばれた少
なくとも1種類を含み、四級アンモニウム塩の総濃度が
3.0〜12.0g/lの範囲にあり、ノニオン性界面
活性剤よりなる群の中から選ばれた少なくとも1種類を
含み、ノニオン性界面活性剤総濃度が1.0〜12.0
g/lの範囲にあり、白血球を3つに分画することがで
きる請求項1の試薬。10、四級アンモニウム塩よりな
る群の中から選ばれた少なくとも1種類を含み、四級ア
ンモニウム塩の総濃度が1.0〜10.0g/lの範囲
にあり、両性界面活性剤よりなる群の中から選ばれた少
なくとも1種類を含み、両性界面活性剤総濃度が0.1
〜10.0g/lの範囲にあり、白血球を3つに分画す
ることができる請求項1の試薬。
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