JP2003310299A - 乳試料中に含まれる体細胞を測定するための乳試料処理方法及び試薬ならびに方法 - Google Patents
乳試料中に含まれる体細胞を測定するための乳試料処理方法及び試薬ならびに方法Info
- Publication number
- JP2003310299A JP2003310299A JP2002124815A JP2002124815A JP2003310299A JP 2003310299 A JP2003310299 A JP 2003310299A JP 2002124815 A JP2002124815 A JP 2002124815A JP 2002124815 A JP2002124815 A JP 2002124815A JP 2003310299 A JP2003310299 A JP 2003310299A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- milk sample
- reagent
- surfactant
- treating
- milk
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 試料を高温で処理する必要がなく、且つ短時
間に乳中の体細胞を測定することができる乳試料処理方
法を提供する。 【解決手段】 pH緩衝剤、イオン性界面活性剤、非イオ
ン性界面活性剤および蛍光色素を含む試薬で、乳試料を
処理する。また、本発明の方法で処理された乳試料は、
フローサイトメータで散乱光と蛍光を測定することによ
って体細胞を測定することができる。
間に乳中の体細胞を測定することができる乳試料処理方
法を提供する。 【解決手段】 pH緩衝剤、イオン性界面活性剤、非イオ
ン性界面活性剤および蛍光色素を含む試薬で、乳試料を
処理する。また、本発明の方法で処理された乳試料は、
フローサイトメータで散乱光と蛍光を測定することによ
って体細胞を測定することができる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、乳中の体細胞を測
定するための乳試料処理方法に関する。
定するための乳試料処理方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】通常、乳中には表皮細胞と白血球などの
体細胞が含まれている。乳牛などが乳房炎を発症した場
合、原因となる細菌を駆逐するための免疫機構が働き、
乳中へ白血球が動員され、結果として体細胞数が増加す
る。
体細胞が含まれている。乳牛などが乳房炎を発症した場
合、原因となる細菌を駆逐するための免疫機構が働き、
乳中へ白血球が動員され、結果として体細胞数が増加す
る。
【０００３】体細胞数を監視することにより乳房炎を早
期に発見することが可能であり、その治療を容易にする
とともに、牛乳生産などの経済活動においてはその損失
を低く抑えることができる。
期に発見することが可能であり、その治療を容易にする
とともに、牛乳生産などの経済活動においてはその損失
を低く抑えることができる。
【０００４】一方、乳中には体細胞の他に、脂肪、たん
ぱく質、カルシウムなど多様な成分が含まれている。乳
房炎を発症した場合には、細菌も含まれる。これらの成
分は体細胞測定にとって障害となり得るものである。特
に、脂肪球は含有量も多く、大きさが体細胞と近似して
いることから測定上大きな障害となる。これらの成分と
体細胞との弁別が体細胞測定にとって重要な技術課題と
なっている。
ぱく質、カルシウムなど多様な成分が含まれている。乳
房炎を発症した場合には、細菌も含まれる。これらの成
分は体細胞測定にとって障害となり得るものである。特
に、脂肪球は含有量も多く、大きさが体細胞と近似して
いることから測定上大きな障害となる。これらの成分と
体細胞との弁別が体細胞測定にとって重要な技術課題と
なっている。
【０００５】体細胞の測定方法として、蛍光顕微鏡を用
いた方法など、既にいくつかの方法が知られている。例
えば、特公平7-95035は、クエン酸などの金属錯体形成
剤からなる緩衝溶液と、蛍光色素（エチジウムブロマイ
ド）を含む染色液を用いて体細胞を蛍光染色し、検出す
る技術を開示する。緩衝溶液には金属錯体形成剤が不可
欠である。また、イオン性界面活性剤、好ましくは非イ
オン性界面活性剤を含有しても良いと記載されている
が、その効果については開示されておらず、添加量も染
色液1リットルあたり1mlと少量である。金属錯体形成剤
は乳中のカルシウムイオンに作用し、カルシウムイオン
が染色過程を妨害することを妨げる働きがあるものと考
えられている。この作用によって体細胞からの信号強度
が強まるものと記載されている。さらに、この方法で
は、染色を実施する際に63±1.5℃といった、高温で処
理する必要があり、測定装置が高価で複雑となる問題が
ある。
いた方法など、既にいくつかの方法が知られている。例
えば、特公平7-95035は、クエン酸などの金属錯体形成
剤からなる緩衝溶液と、蛍光色素（エチジウムブロマイ
ド）を含む染色液を用いて体細胞を蛍光染色し、検出す
る技術を開示する。緩衝溶液には金属錯体形成剤が不可
欠である。また、イオン性界面活性剤、好ましくは非イ
オン性界面活性剤を含有しても良いと記載されている
が、その効果については開示されておらず、添加量も染
色液1リットルあたり1mlと少量である。金属錯体形成剤
は乳中のカルシウムイオンに作用し、カルシウムイオン
が染色過程を妨害することを妨げる働きがあるものと考
えられている。この作用によって体細胞からの信号強度
が強まるものと記載されている。さらに、この方法で
は、染色を実施する際に63±1.5℃といった、高温で処
理する必要があり、測定装置が高価で複雑となる問題が
ある。
【０００６】特公平4-7833もエチジウムブロマイドを添
加した被験乳を75℃といった高温で処理することにより
染色する方法を開示している。
加した被験乳を75℃といった高温で処理することにより
染色する方法を開示している。
【０００７】欧州特許出願公開第397583号は、プロピジ
ウムアイオダイドなどのDNA特異的蛍光染料と核膜の浸
透を目的とした０．１％の表面活性剤と細胞膜の溶解を
目的とした低張媒質を被験生乳に加え、染色する方法を
開示する。しかしながらこの方法では大気温度中で20分
間をかけて染色する必要がある。
ウムアイオダイドなどのDNA特異的蛍光染料と核膜の浸
透を目的とした０．１％の表面活性剤と細胞膜の溶解を
目的とした低張媒質を被験生乳に加え、染色する方法を
開示する。しかしながらこの方法では大気温度中で20分
間をかけて染色する必要がある。
【０００８】さらに、特表平9-510105は、ミルク試料
を、イオンキレート剤，蛋白分解酵素，界面活性剤，及
び細菌学的に特異な蛍光色素で処理することからなる、
細菌を計数するための液体コンディショニングのための
方法を開示するが、この方法では体細胞はデグラデーシ
ョンされるために検出することはできない。
を、イオンキレート剤，蛋白分解酵素，界面活性剤，及
び細菌学的に特異な蛍光色素で処理することからなる、
細菌を計数するための液体コンディショニングのための
方法を開示するが、この方法では体細胞はデグラデーシ
ョンされるために検出することはできない。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記事情に
鑑み、試料を高温で処理する必要がなく、且つ短時間に
乳中の体細胞を測定することができる乳試料処理方法を
提供することを目的とする。
鑑み、試料を高温で処理する必要がなく、且つ短時間に
乳中の体細胞を測定することができる乳試料処理方法を
提供することを目的とする。
【００１０】
【課題を解決するための手段】本発明の乳試料処理方法
は、pH緩衝剤、イオン性界面活性剤、非イオン性界面活
性剤および蛍光色素を含む試薬で、乳試料を処理するこ
とを特徴とする。
は、pH緩衝剤、イオン性界面活性剤、非イオン性界面活
性剤および蛍光色素を含む試薬で、乳試料を処理するこ
とを特徴とする。
【００１１】
【発明の実施の形態】本発明のイオン性界面活性剤は、
蛍光色素を速やかに体細胞内に透過させるために使用さ
れる。イオン性界面活性剤の種類は特に限定されない
が、好ましくは、炭素数8から18の主鎖アルキル基をも
つ四級アンモニウム塩型カチオン性界面活性剤あるい
は、アニオン性界面活性剤（好ましくは、ラウリルベン
ゼンスルホン酸ナトリウム、ラウリン酸ナトリウム）、
主鎖炭素数12から18の主鎖アルキル基をもつアルキルベ
タイン型両性界面活性剤から選ばれた少なくとも一つを
含む。アルキル基としては、オクチル、ノニル、デシ
ル、ラウリル、ミリスチル、セチル、ステアリル基等が
挙げられる。また、四級アンモニウム塩としては、トリ
メチルアンモニウム塩、ジメチルエチルアンモニウム塩
等が挙げられる。イオン性界面活性剤の濃度は、使用す
るイオン性界面活性剤の種類によって異なるが、ラウリ
ルトリメチルアンモニウムクロライドの場合は、100mg/
lから5000mg/lの濃度が好ましい。
蛍光色素を速やかに体細胞内に透過させるために使用さ
れる。イオン性界面活性剤の種類は特に限定されない
が、好ましくは、炭素数8から18の主鎖アルキル基をも
つ四級アンモニウム塩型カチオン性界面活性剤あるい
は、アニオン性界面活性剤（好ましくは、ラウリルベン
ゼンスルホン酸ナトリウム、ラウリン酸ナトリウム）、
主鎖炭素数12から18の主鎖アルキル基をもつアルキルベ
タイン型両性界面活性剤から選ばれた少なくとも一つを
含む。アルキル基としては、オクチル、ノニル、デシ
ル、ラウリル、ミリスチル、セチル、ステアリル基等が
挙げられる。また、四級アンモニウム塩としては、トリ
メチルアンモニウム塩、ジメチルエチルアンモニウム塩
等が挙げられる。イオン性界面活性剤の濃度は、使用す
るイオン性界面活性剤の種類によって異なるが、ラウリ
ルトリメチルアンモニウムクロライドの場合は、100mg/
lから5000mg/lの濃度が好ましい。
【００１２】イオン性界面活性剤は体細胞に作用し色素
の透過性を向上させ、色素透過性の悪い体細胞への蛍光
色素透過性を亢進する。
の透過性を向上させ、色素透過性の悪い体細胞への蛍光
色素透過性を亢進する。
【００１３】なお、乳中には脂肪球が含まれ、また乳牛
が乳房炎を発症している場合には細菌も含まれるため、
測定の障害となるこれらの成分を含む乳中から体細胞を
特異的に検出するためには、散乱光強度から微小な粒子
からの信号や電気的ノイズ信号を弁別し、蛍光強度から
脂肪球を弁別しなければならない。
が乳房炎を発症している場合には細菌も含まれるため、
測定の障害となるこれらの成分を含む乳中から体細胞を
特異的に検出するためには、散乱光強度から微小な粒子
からの信号や電気的ノイズ信号を弁別し、蛍光強度から
脂肪球を弁別しなければならない。
【００１４】本発明の非イオン性界面活性剤は、体細胞
と脂肪球の弁別を改善するために使用される。イオン性
界面活性剤のみを用いた場合、体細胞と脂肪球との弁別
が悪く、計数値も低値となる。一方、イオン性界面活性
剤と非イオン性界面活性剤を組み合わせると、体細胞と
脂肪球との弁別が良くなり、計数値も改善される。非イ
オン性界面活性剤の種類は特に限定されないが、例え
ば、ポリオキシエチレンアルキルエーテル（主鎖炭素数
12から18のアルキル基またはアルケニル基，ポリオキシ
エチレン付加重合モル数9〜30）、ポリオキシエチレン
アルキルフェニルエーテル（主鎖炭素数8あるいは９の
アルキル基，ポリオキシエチレン付加重合モル数10〜4
0）から選ばれた少なくとも１つであることが望まし
い。アルキル基としては、オクチル、ノニル、ラウリ
ル、ミリスチル、セチル、ステアリル基等が挙げられ、
アルケニル基としては、オレイル基等が挙げられる。非
イオン性界面活性剤の濃度は使用する非イオン性界面活
性剤の種類によって異なるが、ポリオキシエチレン(9)
ラウリルエーテルの場合は1〜20g/lの濃度が好ましい。
と脂肪球の弁別を改善するために使用される。イオン性
界面活性剤のみを用いた場合、体細胞と脂肪球との弁別
が悪く、計数値も低値となる。一方、イオン性界面活性
剤と非イオン性界面活性剤を組み合わせると、体細胞と
脂肪球との弁別が良くなり、計数値も改善される。非イ
オン性界面活性剤の種類は特に限定されないが、例え
ば、ポリオキシエチレンアルキルエーテル（主鎖炭素数
12から18のアルキル基またはアルケニル基，ポリオキシ
エチレン付加重合モル数9〜30）、ポリオキシエチレン
アルキルフェニルエーテル（主鎖炭素数8あるいは９の
アルキル基，ポリオキシエチレン付加重合モル数10〜4
0）から選ばれた少なくとも１つであることが望まし
い。アルキル基としては、オクチル、ノニル、ラウリ
ル、ミリスチル、セチル、ステアリル基等が挙げられ、
アルケニル基としては、オレイル基等が挙げられる。非
イオン性界面活性剤の濃度は使用する非イオン性界面活
性剤の種類によって異なるが、ポリオキシエチレン(9)
ラウリルエーテルの場合は1〜20g/lの濃度が好ましい。
【００１５】本発明の蛍光色素は、体細胞中に含まれる
ＤＮＡあるいはＲＮＡを蛍光染色できるものであれば良
く、アルゴンイオンレーザをフローサイトメータの光源
として使用する場合は、アクリジンオレンジ，エチジウ
ムブロマイド，プロピジウムアイドダイド，チアゾール
オレンジなどが、赤色半導体レーザを光源とする場合
は、チアゾールブルーなどが使用できる。使用される蛍
光色素は特に限定されないが、エチジウムブロマイドが
最も好適である。
ＤＮＡあるいはＲＮＡを蛍光染色できるものであれば良
く、アルゴンイオンレーザをフローサイトメータの光源
として使用する場合は、アクリジンオレンジ，エチジウ
ムブロマイド，プロピジウムアイドダイド，チアゾール
オレンジなどが、赤色半導体レーザを光源とする場合
は、チアゾールブルーなどが使用できる。使用される蛍
光色素は特に限定されないが、エチジウムブロマイドが
最も好適である。
【００１６】色素濃度は使用する蛍光色素によって異な
り、特に限定されない。例えば、エチジウムブロマイド
を使用する場合は、乳試料と混合した際の最終濃度が、
1〜100mg/lの範囲にあることが望ましい。
り、特に限定されない。例えば、エチジウムブロマイド
を使用する場合は、乳試料と混合した際の最終濃度が、
1〜100mg/lの範囲にあることが望ましい。
【００１７】本発明の分析用試薬における緩衝剤は、安
定した蛍光強度が得られるように測定試料のpHを一定の
範囲に保つために用いられる。pHは、pH6.0〜10.0の範
囲に調整される。pHが低すぎる場合、乳タンパクが凝集
し、測定の障害となるので好ましくない。緩衝剤として
は、従来公知のものを使用することができる。例えば、
Tris及びMES, Bis-Tris, ADA, PIPES, ACES, MOPSO, BE
S, MOPS, TES, HEPES,DIPSO, TAPSO, POPSO, HEPPSO, E
PPS, Tricine, Bicine, TAPSのようなグッド緩衝剤等を
挙げることができる。通常、20〜500mM、好ましくは50
〜200mMである。
定した蛍光強度が得られるように測定試料のpHを一定の
範囲に保つために用いられる。pHは、pH6.0〜10.0の範
囲に調整される。pHが低すぎる場合、乳タンパクが凝集
し、測定の障害となるので好ましくない。緩衝剤として
は、従来公知のものを使用することができる。例えば、
Tris及びMES, Bis-Tris, ADA, PIPES, ACES, MOPSO, BE
S, MOPS, TES, HEPES,DIPSO, TAPSO, POPSO, HEPPSO, E
PPS, Tricine, Bicine, TAPSのようなグッド緩衝剤等を
挙げることができる。通常、20〜500mM、好ましくは50
〜200mMである。
【００１８】本発明の試薬は、緩衝剤、イオン性界面活
性剤、非イオン性界面活性剤及び蛍光色素の１液構成と
してもよいが、蛍光色素を含有する染色液と、緩衝剤、
イオン性界面活性剤及び非イオン性界面活性剤を含有す
る希釈液との２液の形態であってもよい。染色液と希釈
液との２液構成とする場合には、蛍光色素は水溶液中で
不安定なものが多いため、染色液として蛍光色素と水溶
性有機溶媒に溶解させることで保存安定性を高めること
ができる。さらに、染色液には、これら蛍光色素の安定
化剤を加えてもよい。この場合の使用可能な水溶性有機
溶媒としては、低級アルカノール、低級アルキレングリ
コールまたは低級アルキレングリコールモノ低級アルキ
ルエーテルが好ましい。例えば、メタノール、エタノー
ル、ｎ−プロパノール、エチレングリコール、ジエチレ
ングリコール、トリエチレングリコール、エチレングリ
コールモノメチルエーテル、エチレングリコールモノエ
チルエーテルなどを使用することができる。また、希釈
液には、長期保存中の細菌の繁殖を防止するために抗菌
剤を添加してもよい。用いる抗菌剤の種類は特に制限さ
れず、トリアジン系抗菌剤、ＢＩＴ（ベンツイソチアゾ
ロン）のようなチアゾール系抗菌剤、ＰＴＯ（ピリチオ
ン）のようなピリジン系抗菌剤などが使用可能である
が、測定系に悪影響を与えない濃度で添加するのがよ
い。上記安定化剤や抗菌剤は、１液構成の試薬に添加し
てもよい。
性剤、非イオン性界面活性剤及び蛍光色素の１液構成と
してもよいが、蛍光色素を含有する染色液と、緩衝剤、
イオン性界面活性剤及び非イオン性界面活性剤を含有す
る希釈液との２液の形態であってもよい。染色液と希釈
液との２液構成とする場合には、蛍光色素は水溶液中で
不安定なものが多いため、染色液として蛍光色素と水溶
性有機溶媒に溶解させることで保存安定性を高めること
ができる。さらに、染色液には、これら蛍光色素の安定
化剤を加えてもよい。この場合の使用可能な水溶性有機
溶媒としては、低級アルカノール、低級アルキレングリ
コールまたは低級アルキレングリコールモノ低級アルキ
ルエーテルが好ましい。例えば、メタノール、エタノー
ル、ｎ−プロパノール、エチレングリコール、ジエチレ
ングリコール、トリエチレングリコール、エチレングリ
コールモノメチルエーテル、エチレングリコールモノエ
チルエーテルなどを使用することができる。また、希釈
液には、長期保存中の細菌の繁殖を防止するために抗菌
剤を添加してもよい。用いる抗菌剤の種類は特に制限さ
れず、トリアジン系抗菌剤、ＢＩＴ（ベンツイソチアゾ
ロン）のようなチアゾール系抗菌剤、ＰＴＯ（ピリチオ
ン）のようなピリジン系抗菌剤などが使用可能である
が、測定系に悪影響を与えない濃度で添加するのがよ
い。上記安定化剤や抗菌剤は、１液構成の試薬に添加し
てもよい。
【００１９】本発明の方法で処理された乳試料は、一般
的に市販されているフローサイトメーターを用いて測定
することにより、散乱光強度と蛍光強度の情報から体細
胞のみを計数することが可能である。
的に市販されているフローサイトメーターを用いて測定
することにより、散乱光強度と蛍光強度の情報から体細
胞のみを計数することが可能である。
【００２０】本発明の試薬を用いて、乳中の体細胞を分
析するにあたっては、乳試料を本発明の試薬に混合す
る。一液構成の試薬においては、乳試料と混合すること
によって、乳中に含まれる体細胞が染色されることとな
る。また、本発明の試薬が、染色液と希釈液とからなる
２液構成の試薬の場合には、特に混合の順序は制限され
ないが、染色液と希釈液と予め混合したのち乳試料を加
えるか、または乳試料と希釈液で混合した後染色液を加
えることが好ましい。
析するにあたっては、乳試料を本発明の試薬に混合す
る。一液構成の試薬においては、乳試料と混合すること
によって、乳中に含まれる体細胞が染色されることとな
る。また、本発明の試薬が、染色液と希釈液とからなる
２液構成の試薬の場合には、特に混合の順序は制限され
ないが、染色液と希釈液と予め混合したのち乳試料を加
えるか、または乳試料と希釈液で混合した後染色液を加
えることが好ましい。
【００２１】なお、乳試料と染色液＋希釈液の混合比率
は特に限定されないが、１：２〜１：１００の範囲が好
ましい。
は特に限定されないが、１：２〜１：１００の範囲が好
ましい。
【００２２】本発明の乳試料処理温度・反応時間は特に
限定されないが、50℃以下の室温好ましくは30-40℃
で、少なくとも約10秒以上処理することにより、フロー
サイトメータで測定可能な測定用試料を調製することが
できる。
限定されないが、50℃以下の室温好ましくは30-40℃
で、少なくとも約10秒以上処理することにより、フロー
サイトメータで測定可能な測定用試料を調製することが
できる。
【００２３】
【実施例】
実施例１
染色液：
エチジウムブロマイド 1500mg/l（エチレングリコール溶液）
希釈液：
ラウリルトリメチルアンモニウムクロリド 680mg/l
ポリオキシエチレン(9)ラウリルエーテル 2g/l
HEPES 2.38g/l
NaOHによりpH7.0に調整
乳試料250μlを希釈液1730μlで希釈し、染色液20μlを
混合後、35℃で25秒間反応させた。次いで、アルゴンイ
オンレーザを光源とするフローサイトメータで前方散乱
光強度（FSC）と蛍光強度（FL）を測定した。結果を図
１及び図２に示す。図に示すように体細胞と体細胞以外
の粒子を明瞭に弁別することが可能であった。
混合後、35℃で25秒間反応させた。次いで、アルゴンイ
オンレーザを光源とするフローサイトメータで前方散乱
光強度（FSC）と蛍光強度（FL）を測定した。結果を図
１及び図２に示す。図に示すように体細胞と体細胞以外
の粒子を明瞭に弁別することが可能であった。
【００２４】実施例２
市販装置(Fossomatic 400)との相関
実施例１の方法で、30例の乳試料を測定し、従来法(Fos
somatic 400、Foss Electric社)との比較検討を実施し
た。結果を図3に示す。回帰直線ｙ＝0.9354X＋1.1618、
相関係数ｒ２＝0.9887と、良好な結果を示した。
somatic 400、Foss Electric社)との比較検討を実施し
た。結果を図3に示す。回帰直線ｙ＝0.9354X＋1.1618、
相関係数ｒ２＝0.9887と、良好な結果を示した。
【００２５】
実施例3
非イオン性界面活性剤の効果
染色液：
エチジウムブロマイド 1500mg/l（エチレングリコール溶液）
希釈液：
ラウリルトリメチルアンモニウムクロリド 680mg/l
グリシン 2g/l
NaOHによりpH9.0に調整
非イオン性界面活性剤の効果を調べるために上記の試薬
を用いて乳試料を測定した。結果を図４及び図５に示
す。次に、上記の希釈液にポリオキシエチレン(30)セチ
ルエーテル2g/lを添加し、同じ乳試料について測定を行
った。結果を図６及び図7に示す。図４〜図７を比較す
ると、非イオン性界面活性剤の添加によって、体細胞が
体細胞以外の粒子と明瞭に弁別できることが確認され
た。
を用いて乳試料を測定した。結果を図４及び図５に示
す。次に、上記の希釈液にポリオキシエチレン(30)セチ
ルエーテル2g/lを添加し、同じ乳試料について測定を行
った。結果を図６及び図7に示す。図４〜図７を比較す
ると、非イオン性界面活性剤の添加によって、体細胞が
体細胞以外の粒子と明瞭に弁別できることが確認され
た。
【００２６】
【発明の効果】本発明によれば、試料を高温で処理する
ことなく短時間で乳試料中の体細胞を測定することが可
能である。
ことなく短時間で乳試料中の体細胞を測定することが可
能である。
【図１】実施例１において、乳試料を測定したときの蛍
光強度のヒストグラムである。
光強度のヒストグラムである。
【図２】実施例１において、乳試料を測定したときの前
方散乱光強度−蛍光強度のスキャッタグラムである。
方散乱光強度−蛍光強度のスキャッタグラムである。
【図３】実施例２において、本発明と従来法との相関図
である。
である。
【図４】実施例３において、非イオン性界面活性剤を含
まない希釈液を用いて測定したときの前方散乱光強度−
蛍光強度のスキャッタグラムである。
まない希釈液を用いて測定したときの前方散乱光強度−
蛍光強度のスキャッタグラムである。
【図５】実施例３において、非イオン性界面活性剤を含
まない希釈液を用いて測定したときの蛍光強度のヒスト
グラムである。
まない希釈液を用いて測定したときの蛍光強度のヒスト
グラムである。
【図６】実施例３において、非イオン性界面活性剤を含
む希釈液を用いて測定したときの前方散乱光強度−蛍光
強度のスキャッタグラムである。
む希釈液を用いて測定したときの前方散乱光強度−蛍光
強度のスキャッタグラムである。
【図７】実施例３において、非イオン性界面活性剤を含
む希釈液を用いて測定したときの蛍光強度のヒストグラ
ムである。
む希釈液を用いて測定したときの蛍光強度のヒストグラ
ムである。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ｇ０１Ｎ 33/483 Ｇ０１Ｎ 33/483 Ｃ
33/58 33/58 Ａ
Ｆターム(参考） 2G045 BB24 BB29 BB41 CB01 FA12
FB12 GC11 GC15
2G054 AA08 BA10 CA30 CE02 EA03
EA05 GA04 GA05
4B063 QA01 QA19 QQ03 QQ08 QQ42
QQ52 QR66 QX02
Claims (13)
- 【請求項１】 pH緩衝剤、イオン性界面活性剤、非イオ
ン性界面活性剤および蛍光色素を含む試薬で、乳試料を
処理することからなる、乳中に含有される体細胞を計数
するための乳試料処理方法。 - 【請求項２】 イオン性界面活性剤が、以下の群から選
ばれた少なくとも一つである請求項１記載の乳試料処理
方法。 （１）カチオン界面活性剤 （２）アニオン性界面活性剤 （３）両性界面活性剤 - 【請求項３】 非イオン性界面活性剤が、以下の群から
選ばれた少なくとも１つである請求項１記載の乳試料処
理方法。 （１）ポリオキシエチレンアルキルエーテル （２）ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル - 【請求項４】 蛍光色素が、DNAあるいはRNA結合色素か
ら選ばれた少なくとも1つである請求項１記載の乳試料
処理方法。 - 【請求項５】 蛍光色素が、エチジウムブロマイド，ア
クリジンオレンジ，プロピジウムアイオダイドあるいは
チアゾールオレンジから選ばれた少なくとも１つである
請求項4記載の乳試料処理方法。 - 【請求項６】 試薬のpHが６〜10である請求項１記載の
乳試料処理方法。 - 【請求項７】 pH緩衝剤、イオン性界面活性剤、非イオ
ン性界面活性剤および蛍光色素を含むことを特徴とす
る、乳試料中に含有される体細胞を計数するための試
薬。 - 【請求項８】 イオン性界面活性剤が、以下の群から選
ばれた少なくとも一つである請求項７記載の試薬。 （１）カチオン界面活性剤 （２）アニオン性界面活性剤 （３）両性界面活性剤 - 【請求項９】 非イオン性界面活性剤が、以下の群から
選ばれた少なくとも１つである請求項７記載の試薬。 （１）ポリオキシエチレンアルキルエーテル （２）ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル - 【請求項１０】 蛍光色素が、DNAあるいはRNA結合色素
から選ばれた少なくとも1つである請求項７記載の試
薬。 - 【請求項１１】 蛍光色素が、エチジウムブロマイド，
アクリジンオレンジ，プロピジウムアイオダイドあるい
はチアゾールオレンジから選ばれた少なくとも１つであ
る請求項７記載の試薬。 - 【請求項１２】 試薬のpHが６〜10である請求項７記載
の試薬。 - 【請求項１３】 pH緩衝剤、イオン性界面活性剤、非イ
オン性界面活性剤および蛍光色素を含む試薬で処理され
た乳試料をフローサイトメータに供し、蛍光強度を測定
することを特徴とする、乳試料中に含まれる体細胞を測
定するための方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002124815A JP2003310299A (ja) | 2002-04-25 | 2002-04-25 | 乳試料中に含まれる体細胞を測定するための乳試料処理方法及び試薬ならびに方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002124815A JP2003310299A (ja) | 2002-04-25 | 2002-04-25 | 乳試料中に含まれる体細胞を測定するための乳試料処理方法及び試薬ならびに方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003310299A true JP2003310299A (ja) | 2003-11-05 |
Family
ID=29539764
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2002124815A Pending JP2003310299A (ja) | 2002-04-25 | 2002-04-25 | 乳試料中に含まれる体細胞を測定するための乳試料処理方法及び試薬ならびに方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2003310299A (ja) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2012026887A (ja) * | 2010-07-23 | 2012-02-09 | Rei Sho | 細胞または物質の定量用試薬 |
| US20130157306A1 (en) * | 2010-10-18 | 2013-06-20 | Foss Analytical A/S | Method for determining a degree of infection |
| JP2014145750A (ja) * | 2013-01-30 | 2014-08-14 | Shino-Test Corp | 乳試料中の測定対象物質の比色測定方法、乳試料の前処理の方法及び試薬、並びに乳試料に由来する比色測定への影響の抑制方法 |
| JP2014520253A (ja) * | 2011-05-04 | 2014-08-21 | アボット・ラボラトリーズ | 好塩基球分析システムおよび方法 |
| US9778163B2 (en) | 2011-05-04 | 2017-10-03 | Abbott Laboratories | Nucleated red blood cell analysis system and method |
| US9778162B2 (en) | 2011-05-04 | 2017-10-03 | Abbott Laboratories | White blood cell analysis system and method |
| CN112746055A (zh) * | 2020-12-30 | 2021-05-04 | 华南农业大学 | 一种牛奶体细胞分离过程优化工艺 |
-
2002
- 2002-04-25 JP JP2002124815A patent/JP2003310299A/ja active Pending
Cited By (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2012026887A (ja) * | 2010-07-23 | 2012-02-09 | Rei Sho | 細胞または物質の定量用試薬 |
| EP2630487B1 (en) | 2010-10-18 | 2016-08-17 | FOSS Analytical A/S | Method for determining a degree of mastitis infection |
| US20130157306A1 (en) * | 2010-10-18 | 2013-06-20 | Foss Analytical A/S | Method for determining a degree of infection |
| JP2013543118A (ja) * | 2010-10-18 | 2013-11-28 | フォス アナリティカル アグシャセルスガーッブ | 感染の程度を判定するための方法 |
| KR101770447B1 (ko) * | 2010-10-18 | 2017-08-22 | 포스 애널리터컬 에이/에스 | 감염도 결정 방법 |
| US9810618B2 (en) | 2011-05-04 | 2017-11-07 | Abbott Laboratories | Basophil analysis system and method |
| JP2014520253A (ja) * | 2011-05-04 | 2014-08-21 | アボット・ラボラトリーズ | 好塩基球分析システムおよび方法 |
| US9778163B2 (en) | 2011-05-04 | 2017-10-03 | Abbott Laboratories | Nucleated red blood cell analysis system and method |
| US9778162B2 (en) | 2011-05-04 | 2017-10-03 | Abbott Laboratories | White blood cell analysis system and method |
| US10481072B2 (en) | 2011-05-04 | 2019-11-19 | Abbott Laboratories | Nucleated red blood cell analysis system and method |
| US10481073B2 (en) | 2011-05-04 | 2019-11-19 | Abbott Laboratories | Basophil analysis system and method |
| US10481071B2 (en) | 2011-05-04 | 2019-11-19 | Abbott Laboratories | White blood cell analysis system and method |
| JP2014145750A (ja) * | 2013-01-30 | 2014-08-14 | Shino-Test Corp | 乳試料中の測定対象物質の比色測定方法、乳試料の前処理の方法及び試薬、並びに乳試料に由来する比色測定への影響の抑制方法 |
| CN112746055A (zh) * | 2020-12-30 | 2021-05-04 | 华南农业大学 | 一种牛奶体细胞分离过程优化工艺 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP1203825B1 (en) | Method of staining, detecting and counting bacteria, and a diluent for bacterial stain | |
| EP1136563B1 (en) | Method of staining, and detecting and counting bacteria | |
| US8367358B2 (en) | Reagent, kit and method for differentiating and counting leukocytes | |
| JP3886271B2 (ja) | 赤芽球の分類計数用試薬及び分類計数方法 | |
| AU701948B2 (en) | Reagent for analyzing solid components in urine and method for analyzing solid components by employing the same | |
| US5817518A (en) | Reagent and method for differential determination of leukocytes in blood | |
| JP4042925B2 (ja) | 幼若白血球の分類計数法 | |
| JPH03137566A (ja) | 血液中の白血球およびヘモグロビンの測定用試薬 | |
| EP0598663A2 (en) | A pretreatment method for blood analysis | |
| JP4236893B2 (ja) | 菌計数方法および菌計数装置 | |
| JPH0358067B2 (ja) | ||
| JPH08308593A (ja) | 白血球の内因性ペルオキシダーゼ活性に基く、新鮮並びに時間を置いた全血試料についての白血球分画計数を実施するための改良された方法と試薬組成物 | |
| JPH07181177A (ja) | 白血球分析用試薬 | |
| US6632676B1 (en) | Multi-purpose reagent system and method for enumeration of red blood cells, white blood cells and thrombocytes and differential determination of white blood cells | |
| JP4794334B2 (ja) | 尿試料分析用試薬及び尿試料の分析方法 | |
| JP2003310299A (ja) | 乳試料中に含まれる体細胞を測定するための乳試料処理方法及び試薬ならびに方法 | |
| EP1406088A2 (en) | Reagent kits and methods for detecting malaria parasites by two-steps surfactant-mediated hemolysis | |
| CN106062557B (zh) | 尿样品分析方法及尿样品分析用试剂盒 | |
| JPH10307135A (ja) | 赤血球形態異常の検出方法 | |
| JP2000338104A (ja) | 血中の好塩基球及び好酸球の区別のための組成物及び方法 | |
| KR101993965B1 (ko) | 소변 시료 분석 방법, 소변 시료 분석용 시약 및 소변 시료 분석용 시약 키트 | |
| JPH08170960A (ja) | 尿中有形成分分析用試薬及びその試薬を用いた有形成分分析方法 | |
| JP2000258420A (ja) | 溶液中のヒトヘモグロビンの安定化方法および安定化溶液 | |
| JP2001242168A (ja) | 精子計数方法及び試薬 | |
| JP3888876B2 (ja) | 細菌の染色方法、細菌の分類・計数方法及び細菌染色用希釈液 |