CN103018432A

CN103018432A - 血细胞分析仪用鞘液及其制备方法

Info

Publication number: CN103018432A
Application number: CN2012105452951A
Authority: CN
Inventors: 华学山; 伍春宝
Original assignee: JIANGSU MEICHENG BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: JIANGSU MEICHENG BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2012-12-17
Filing date: 2012-12-17
Publication date: 2013-04-03

Abstract

本发明公开了一种血细胞分析仪用鞘液及其制备方法，鞘液包括以下组分：tris缓冲剂、乙二胺四乙酸二钠、曲拉通、1-羟基吡啶-2-硫，各组分用纯水溶解后溶液的pH值为7.0-9.2；优选的，鞘液中各组分的含量为：乙二胺四乙酸二钠0.3g/L、曲拉通0.1g/L、1-羟基吡啶-2-硫0.1ml/L。本发明的有益之处在于：组分的种类相对较少，采用一般物理混合即可，制备十分方便；在本发明的配方中，用1-羟基吡啶-2-硫替代了常用的抗菌防腐剂叠氮钠，无毒、使用安全，避免了对试剂生产人员和环境的损害；采用本发明的鞘液可以达到与原厂鞘液相当的测试效果，但是成本得到了更好的控制。

Description

血细胞分析仪用鞘液及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种鞘液及其制备方法，具体涉及一种血细胞分析仪用鞘液及其制备方法。

背景技术

流式细胞术的引进及电子计算机技术的发展大大地促进了流式细胞分析仪、血细胞分析仪和尿沉渣分析仪的飞速发展，使得分析仪器的准确度和自动化程度不断提高，并不断向检测参数增多、速度加快、操作简单的趋势发展着。

鞘液是各种采用流式细胞术原理进行各种检验的分析仪正常运行的必备试剂。由于鞘液需要包裹着被检测样本经过检测部接受激光照射或者电阻抗法计数，因此鞘液的洁净度、吸光度、pH值、渗透压都要满足仪器的设计要求，否则都将会对仪器的检测结果产生影响。

目前，提供而且大多是进口的。国内专门生产鞘液的公司不多,因而存在试剂价格昂贵、运输不便等问题。诸多问题促使鞘液开发成为我国检验界的重要课题。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种性质稳定、在保证测试效果的同时可降低试剂使用成本的血细胞分析仪用鞘液。

为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：

一种血细胞分析仪用鞘液，其特征在于，包括以下组分：tris缓冲剂、乙二胺四乙酸二钠、曲拉通、1-羟基吡啶-2-硫，前述各组分用纯水溶解，溶解后溶液的pH值为7.0-9.2。

前述的血细胞分析仪用鞘液，其特征在于，前述各组分的含量为：乙二胺四乙酸二钠0.1-0.5g/L、曲拉通0.05-1.0g/L、1-羟基吡啶-2-硫0.05-1ml/L。

优选的，前述各组分的含量为：乙二胺四乙酸二钠0.3g/L、曲拉通0.1g/L、1-羟基吡啶-2-硫0.1ml/L。

前述的血细胞分析仪用鞘液，其特征在于，前述溶解后的溶液的pH值为7.5。

制备前述的血细胞分析仪用鞘液的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将tris缓冲剂和乙二胺四乙酸二钠用纯水充分溶解；

（2）用热水将曲拉通溶解，然后倒入（1）中溶液中；

（3）向（1）中继续加入1-羟基吡啶-2-硫，然后搅拌均匀、定容，静置15min；

（4）将配好的溶液用过滤器过滤，得到鞘液。

前述的制备血细胞分析仪用鞘液的方法，其特征在于，步骤（2）中溶解曲拉通的热水的温度≤80℃。

前述的制备血细胞分析仪用鞘液的方法，其特征在于，步骤（4）中所用的过滤器的滤芯直径为0.3μm。

本发明的有益之处在于：组分的种类相对较少，采用一般物理混合即可，制备十分方便；在本发明的配方中，用1-羟基吡啶-2-硫替代了常用的抗菌防腐剂叠氮钠,无毒、使用安全，避免了对试剂生产人员和环境的损害；采用本发明的鞘液可以达到与原厂鞘液相当的测试效果，但是成本得到了更好的控制。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明作具体的介绍。

首先，按照表1所示的配方制备鞘液。

表1鞘液配比

	tris	EDTA-2Na	曲拉通	1-羟基吡啶-2-硫	终pH值
						实施例1	0.12g	0.30g	0.10g	0.10ml	7.00
实施例2	0.22g	0.30g	0.10g	0.10ml	8.45
						实施例3	0.38g	0.30g	0.10g	0.10ml	9.20
实施例4	0.19g	0.50g	0.80g	0.80ml	8.40
						实施例5	0.24g	0.30g	0.90g	0.10ml	8.49
实施例6	0.13g	0.10g	0.90g	0.05ml	8.42
						实施例7	0.35g	0.50g	0.10g	0.01ml	8.53
实施例8	0.22g	0.30g	0.10g	0.05ml	8.47
						实施例9	0.12g	0.10g	0.10g	0.80ml	8.42
实施例10	0.36g	0.50g	0.05g	0.05ml	8.53
						实施例11	0.21g	0.30g	0.05g	0.80ml	8.50
实施例12	0.13g	0.10g	0.05g	0.10ml	8.44

鞘液的配制流程为：

（1）准确称取tris、EDTA-2Na,用0.8L纯水充分溶解；

（2）准确称取曲拉通，用不高于60℃的热水溶解，然后倒入（1）中溶液中；

（3）向（1）中继续加入1-羟基吡啶-2-硫，然后搅拌均匀，定容至1.0L，静置15min；

（4）最后将配好的鞘液用0.2μm滤芯过滤器加以过滤即可。

在本发明的配方中，tris用来调整鞘液的pH值，保证不同pH值的样品加入到其中时，仍能保持体系pH值的稳定；EDTA-2Na作为抗凝稳定剂，用来保持细胞形态相对稳定；曲拉通是非离子型表面活性剂，起到乳化作用；1-羟基吡啶-2-硫替代了常用的抗菌防腐剂叠氮钠,无毒、使用安全，避免了对试剂生产人员和环境的损害。

接下来，将本发明的鞘液与目前较为广泛使用的CD原厂鞘液的主要理化参数进行比较。所采用的仪器如下：

全自动冰点渗透压计（上海医大仪器厂）；

DDS-307W电导率仪（上海理达仪器厂）；

PHS-3C型数显酸度计（雷磁分析仪器厂）；

101系列数显鼓风干燥箱（上海叶拓仪器仪表有限公司）。

比较结果见表2。

表2两种鞘液的主要理化参数比较

	电导率us	pH值	干重g/L
				CD原厂鞘液	70.2	8.51	0.580
实施例1	69.5	7.00	0.546
				实施例2	70.5	8.45	0.615
实施例3	71.2	9.20	0.774
				实施例4	71.8	8.40	1.376
实施例5	71.9	8.49	1.431
				实施例6	71.1	8.42	1.123

实施例7	70.9	8.53	0.987
				实施例8	70.4	8.47	0.611
实施例9	69.1	8.42	0.315
				实施例10	71.3	8.53	0.759
实施例11	69.9	8.50	0.505
				实施例12	68.8	8.44	0.228

由表2可以看出：本发明的鞘液与CD原厂鞘液的电导率、pH值数值相近，误差均不超过10%，说明二者浓度相当，配方效果接近。

由于血细胞分析仪只有在开机确认空白背景计数符合设计要求时,才能准确及时地对血液进行全面的分析，所以，接下来对本发明的鞘液与CD原厂鞘液的空白背景计数进行比对分析。

分析方法为：

第一步：按CD3700血细胞分析仪操作说明书进行操作，首先采用CD原厂鞘液，并执行灌注程序，灌注完毕做空白背景计数5次并计算平均值，然后把新鲜血液上下颠倒摇匀后进行测试，重复10次，计算平均值（x）和偏差值（CV%）；

第二步：将上述CD原厂鞘液排空，接上本发明的鞘液，然后执行灌注程序，灌注完毕做空白背景计数5次并计算平均值，然后把新鲜血液上下颠倒摇匀后进行测试，重复10次，计算平均值（x）和偏差值（CV%）。

经空白背景计数试验后发现：本发明的鞘液(包括实施例1-12)和原厂鞘液各项指标（包括WBC、RBC、HGB、PLT）的空白背景计数均为0，也就是说本发明的鞘液和原厂鞘液均达到了仪器正常工作的要求。

最后，分别用上述原厂鞘液、本发明鞘液对新鲜的血液标本进行测试，测试采用的仪器为CD3700血细胞分析仪，测试方法按照CD3700血细胞分析仪操作说明书进行操作即可，测试的结果见表3。

表3两种鞘液对照试验新鲜血液标本数据结果

由表3可以看出：原厂鞘液、本发明鞘液分别对新鲜的血液标本进行测试，其白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板数据均较接近，CV值均小于10%。

将本发明鞘液在国内相关医院进行试验，并与进口原装CD3700血细胞分析仪试剂进行对比，结果显示：本发明的血细胞分析仪鞘液在标本测试结果的准确性和稳定性方面均与进口试剂相近，其可以替代进口的同类型试剂。

另外，进口原装鞘液价格昂贵,对我国环境有无危害还未知,本发明的鞘液成本只是进口原装鞘液的几十分之一,而且成分对人体、环境无害,实验结果准确可靠,精密度良好,具有良好的可比性和溯原性,是符合当今可持续性发展、节约型社会要求的体外诊断试剂。

需要说明的是，上述实施例不以任何形式限制本发明，凡采用等同替换或等效变换的方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围内。

Claims

1.血细胞分析仪用鞘液，其特征在于，包括以下组分：tris缓冲剂、乙二胺四乙酸二钠、曲拉通、1-羟基吡啶-2-硫，上述各组分用纯水溶解，溶解后溶液的pH值为7.0-9.2。

2.根据权利要求1所述的血细胞分析仪用鞘液，其特征在于，上述各组分的含量为：乙二胺四乙酸二钠0.1-0.5g/L、曲拉通0.05-1.0g/L、1-羟基吡啶-2-硫0.05-1ml/L。

3.根据权利要求2所述的血细胞分析仪用鞘液，其特征在于，上述各组分的含量为：乙二胺四乙酸二钠0.3g/L、曲拉通0.1g/L、1-羟基吡啶-2-硫0.1ml/L。

4.根据权利要求1至3任意一项所述的血细胞分析仪用鞘液，其特征在于，上述溶解后的溶液的pH值为7.5。

5.制备权利要求1至4任意一项所述的血细胞分析仪用鞘液的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将tris缓冲剂和乙二胺四乙酸二钠用纯水充分溶解；

（2）用热水将曲拉通溶解，然后倒入（1）中溶液中；

（4）将配好的溶液用过滤器过滤，得到鞘液。

6.根据权利要求5所述的制备血细胞分析仪用鞘液的方法，其特征在于，步骤（2）中溶解曲拉通的热水的温度≤80℃。

7.根据权利要求5所述的制备血细胞分析仪用鞘液的方法，其特征在于，步骤（4）中所用的过滤器的滤芯直径为0.3μm。