CN104062163A - 一种血浆内毒素检测试剂盒质控品及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种血浆内毒素检测试剂盒质控品，包括高值质控品和低值质控品；所述高值质控品的成分为内毒素含量为1.8-2.2EU/ml的成品人血浆；所述低值质控品的成分为内毒素含量为0.3-0.7EU/ml的成品人血浆；同时本发明也公开了一种血浆内毒素检测试剂盒质控品的制备方法，选用低内毒素的成品人血浆为基质材料，可以减小基质效应，且通过合理设定质控品中的内毒素效价，可以增强质控品的可控性。通过本制备方法制得的质控品具有稳定性好，瓶间差异小及有效期长的特点。
Description
技术领域
本发明涉及生物制品的技术领域，尤其涉及一种血浆内毒素检测试剂盒质控品及其制备方法。
背景技术
革兰氏阴性菌感染引起的脓毒症是危重患者死亡的重要原因。研究证明，无论是人和动物，革兰氏阴性菌脓毒症许多症状和体征是由内毒素血症造成的。因此，患者血浆内毒素水平是严重细菌性炎症的一个重要的特异性指标，也是脓毒症和炎症活动有关的多脏器衰竭的可靠指标，是监控炎症活动的重要参数。目前，基于鲎试验C因子旁路反应原理的定量法细菌内毒素检测试剂盒，可以在几小时之内定量检测人血浆细菌内毒素，用于脓毒症等革兰氏阴性菌感染疾病的辅助诊断及感染疾病的病情监控。
血浆内毒素检测试剂盒的质量控制关系到诊断的准确性。目前市面上用于细菌内毒素检测用的校准物质只有细菌内毒素国家参考品、细菌内毒素国家工作标准品及各鲎试剂生产厂家提供的细菌内毒素工作标准品。基质成分为细菌内毒素检查用水，和检测样本血浆差异很大，市面上未见用于血浆内毒素定量检测用的质控品。由于血浆样本中的内毒素不稳定，在2-8℃只能保存一周，在-20℃只能保存一个月，故不推荐采用医学检验日常工作中剩余样本作为质控品。因此，亟待开发出稳定有效的用于血浆内毒素检测试剂盒质量控制的质控品。
有鉴于此，本发明人研究和设计了一种血浆内毒素检测试剂盒质控品及其制备方法，本案由此产生。
发明内容
本发明的目的在于提供一种血浆内毒素检测试剂盒质控品及其制备方法，选用低内毒素的成品人血浆为材料，以减小基质效应，且通过合理设定质控品中的内毒素效价，以增强质控品的可控性。
为实现上述目的，本发明解决其技术问题的技术方案是：
一种血浆内毒素检测试剂盒质控品，包括高值质控品和低值质控品；所述高值质控品的成分为内毒素含量为1.8-2.2EU/ml的成品人血浆；所述低值质控品的成分为内毒素含量为0.3-0.7EU/ml的成品人血浆。
作为实施例的优选方式，所述高值质控品和所述低值质控品所采用的基质为内毒素含量小于0.01EU/ml的成品人血浆。
作为实施例的优选方式，所述高值质控品和所述低值质控品经冷冻干燥后呈干粉状。
作为实施例的优选方式，使用时加入内毒素检测试剂盒中的样本处理液或者细菌内毒素检查用水复溶成为液体。
一种血浆内毒素检测试剂盒质控品的制备方法，包括以下步骤：
步骤一、采用成品人血浆，按血浆内毒素检测试剂盒说明书的要求进行内毒素定量检测，若内毒素含量小于0.01EU/ml即可作为质控品基质；
步骤二、配制高浓度内毒素标准溶液，取内毒素国家工作标准品或者内毒素工作标准品，按说明书要求加入适量细菌内毒素检查用水，旋涡混匀15分钟以上，得100EU/ml内毒素标准溶液；
步骤三、取步骤二所制得的内毒素标准溶液，按每100ml质控品基质加入0.3-0.7ml内毒素标准溶液的比例加入到所述步骤一质控品基质中，在2-8℃用磁力搅拌器搅拌混匀30-60分钟，制得低值质控品溶液；
步骤四、取步骤二所制得的内毒素标准溶液，按每100ml质控品基质加入1.8-2.2ml内毒素标准溶液的比例加入到所述步骤一质控品基质中，在2-8℃用磁力搅拌器搅拌混匀30-60分钟，制得高值质控品溶液；
步骤五、将上述低值质控品溶液和高值质控品溶液在无菌条件下分别灌装于无热原安瓿瓶或者西林瓶中，每瓶装0.2ml；
步骤六、将上述灌装好后的的低值质控品溶液及高值质控品溶液分别进行冻干，制得干粉状质控品，最后压塞或取出冷冻干燥机后再熔封封口；
步骤七、将冻干后的低值质控品和高值质控品加入内毒素检测试剂盒中的样本处理液或者细菌内毒素检查用水，复溶为液体进行内毒素效价测定。
本发明所制得的质控品，由于选用低内毒素的成品人血浆为基质，该基质和检测样本一致，减小了基质效应，且低值质控品和高值质控品中的内毒素效价合理，可控性强。本制备方法简单方便，质控品稳定性好，瓶间差异小，有效期长。同时，本发明采用冷冻干燥技术制成冻干粉末状，解决了内毒素不稳定的问题，方便贮存和运输。
具体实施方式
实施例1
一种血浆内毒素检测试剂盒质控品，包括高值质控品和低值质控品；所述高值质控品的成分为内毒素含量为1.8-2.2EU/ml的成品人血浆；所述低值质控品的成分为内毒素含量为0.3-0.7EU/ml的成品人血浆。
作为实施例的优选方式，所述高值质控品和所述低值质控品所采用的基质为内毒素含量小于0.01EU/ml的成品人血浆。
作为实施例的优选方式，所述高值质控品和所述低值质控品经冷冻干燥后呈干粉状。
作为实施例的优选方式，使用时加入内毒素检测试剂盒中的样本处理液或者细菌内毒素检查用水复溶成为液体。
实施例2
一种血浆内毒素检测试剂盒质控品的制备方法，包括以下步骤：
步骤一、采用成品人血浆200ml，按血浆内毒素检测试剂盒说明书的要求进行内毒素定量检测，若内毒素含量小于0.01EU/ml即可作为质控品基质；
步骤二、配制100EU的内毒素标准溶液2支，取内毒素国家工作标准品或者内毒素工作标准品，按说明书要求加入1ml细菌内毒素检查用水，旋涡混匀15分钟以上，得100EU/ml内毒素标准溶液；
步骤三、取步骤二所制得的内毒素标准溶液，按每100ml质控品基质加入0.3ml内毒素标准溶液的比例加入到所述步骤一质控品基质中，在4℃用磁力搅拌器搅拌混匀40分钟，制得低值质控品溶液；
步骤四、取步骤二所制得的内毒素标准溶液，按每100ml质控品基质加入1.8ml内毒素标准溶液的比例加入到所述步骤一质控品基质中，在4℃用磁力搅拌器搅拌混匀40分钟，制得高值质控品溶液；
步骤五、将上述低值质控品溶液和高值质控品溶液在无菌条件下分别灌装于无热原安瓿瓶或者西林瓶中，每瓶装0.2ml；
步骤六、将上述灌装好后的的低值质控品溶液及高值质控品溶液分别进行冻干，制得干粉状质控品，最后压塞或取出冷冻干燥机后再熔封封口；
步骤七、将冻干后的低值质控品和高值质控品加入内毒素检测试剂盒中的样本处理液或者细菌内毒素检查用水，复溶为液体进行内毒素效价测定。
随机抽取30支低值质控品和30支高值质控品，用0.2ml的细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混匀仪上剧烈混匀3分钟。取溶解后的质控品0.1ml，用厦门市鲎试剂实验厂有限公司内毒素检测鲎试剂盒(动态浊度法)检测，结果如表一及表二：
表一 随机抽取30支低值质控品检测结果：
表二 随机抽取30支高值质控品的检测结果：
实施例3
一种血浆内毒素检测试剂盒质控品的制备方法，包括以下步骤：
步骤一、采用成品人血浆200ml，按血浆内毒素检测试剂盒说明书的要求进行内毒素定量检测，若内毒素含量小于0.01EU/ml即可作为质控品基质；
步骤二、配制100EU的内毒素标准溶液2支，取内毒素国家工作标准品或者内毒素工作标准品，按说明书要求加入1ml细菌内毒素检查用水，旋涡混匀15分钟以上，得100EU/ml内毒素标准溶液；
步骤三、取步骤二所制得的内毒素标准溶液，按每100ml质控品基质加入0.5ml内毒素标准溶液的比例加入到所述步骤一质控品基质中，在4℃用磁力搅拌器搅拌混匀40分钟，制得低值质控品溶液；
步骤四、取步骤二所制得的内毒素标准溶液，按每100ml质控品基质加入2.0ml内毒素标准溶液的比例加入到所述步骤一质控品基质中，在4℃用磁力搅拌器搅拌混匀40分钟，制得高值质控品溶液；
步骤五、将上述低值质控品溶液和高值质控品溶液在无菌条件下分别灌装于无热原安瓿瓶或者西林瓶中，每瓶装0.2ml；
步骤六、将上述灌装好后的的低值质控品溶液及高值质控品溶液分别进行冻干，制得干粉状质控品，最后压塞或取出冷冻干燥机后再熔封封口；
步骤七、将冻干后的低值质控品和高值质控品加入内毒素检测试剂盒中的样本处理液或者细菌内毒素检查用水，复溶为液体进行内毒素效价测定。
随机抽取30支低值质控品和30支高值质控品，用0.2ml的细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混匀仪上剧烈混匀3分钟。取溶解后的质控品0.1ml，用厦门市鲎试剂实验厂有限公司内毒素检测鲎试剂盒(动态浊度法)检测，结果如表三及表四：
表三 随机抽取30支低值质控品的检测结果：
表四 随机抽取30值高值质控品的检测结果：
实施例4
一种血浆内毒素检测试剂盒质控品的制备方法，包括以下步骤：
步骤一、采用成品人血浆200ml，按血浆内毒素检测试剂盒说明书的要求进行内毒素定量检测，若内毒素含量小于0.01EU/ml即可作为质控品基质；
步骤二、配制100EU的内毒素标准溶液2支，取内毒素国家工作标准品或者内毒素工作标准品，按说明书要求加入1ml细菌内毒素检查用水，旋涡混匀15分钟以上，得100EU/ml内毒素标准溶液；
步骤三、取步骤二所制得的内毒素标准溶液，按每100ml质控品基质加入0.7ml内毒素标准溶液的比例加入到所述步骤一质控品基质中，在4℃用磁力搅拌器搅拌混匀40分钟，制得低值质控品溶液；
步骤四、取步骤二所制得的内毒素标准溶液，按每100ml质控品基质加入2.2ml内毒素标准溶液的比例加入到所述步骤一质控品基质中，在4℃用磁力搅拌器搅拌混匀40分钟，制得高值质控品溶液；
步骤五、将上述低值质控品溶液和高值质控品溶液在无菌条件下分别灌装于无热原安瓿瓶或者西林瓶中，每瓶装0.2ml；
步骤六、将上述灌装好后的的低值质控品溶液及高值质控品溶液分别进行冻干，制得干粉状质控品，最后压塞或取出冷冻干燥机后再熔封封口；
步骤七、将冻干后的低值质控品和高值质控品加入内毒素检测试剂盒中的样本处理液或者细菌内毒素检查用水，复溶为液体进行内毒素效价测定。
随机抽取30支低值质控品和30支高值质控品，用0.2ml的细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混匀仪上剧烈混匀3分钟。取溶解后的质控品0.1ml，用厦门市鲎试剂实验厂有限公司内毒素检测鲎试剂盒(动态浊度法)检测，结果如表五及表六：
表五 随机抽取30支低值质控品的检测结果：
表六 随机抽取30支高值质控品的检测结果：
稳定性试验：
将实施例3的低值质控品和高值质控品保存于2-8℃，分别于第0个月，3个月，6个月，12个月和18个月随机抽取30支低值质控品和30支高值质控品，用0.2ml的细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混匀仪上剧烈混匀3分钟。取溶解后的质控品0.1ml，用厦门市鲎试剂实验厂有限公司内毒素检测鲎试剂盒(动态浊度法)检测，结果如表七及表八所示：
表七 随机抽取30支低值质控品的检测结果：
表八 随机抽取30支高值质控品的检测结果：
低值质控品和高值质控品在2-8℃保存18个月，在第3个月，第6个月，第12个月和第18个月的检测结果和第0个月相比统计学上无显著差异(t＜显著性水平α＝0.05，统计方法使用t检验法)，因此有效期可定为一年。
本发明所制得的质控品，由于选用低内毒素的成品人血浆为基质，该基质和检测样本一致，减小了基质效应，且低值质控品和高值质控品中的内毒素效价合理，可控性强。本制备方法简单方便，质控品稳定性好，瓶间差异小，有效期长。同时，本发明采用冷冻干燥技术制成冻干粉末状，解决了内毒素不稳定的问题，方便贮存和运输。
以上所述，仅为本发明较佳实施例而已，故不能依次限定本发明实施的范围，即依本发明权利要求范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖的范围内。
Claims (5)
1.一种血浆内毒素检测试剂盒质控品，其特征在于：包括高值质控品和低值质控品；所述高值质控品的成分为内毒素含量为1.8-2.2EU/ml的成品人血浆；所述低值质控品的成分为内毒素含量为0.3-0.7EU/ml的成品人血浆。
2.如权利要求1所述的一种血浆内毒素检测试剂盒质控品，其特征在于：所述高值质控品和所述低值质控品所采用的基质为内毒素含量小于0.01EU/ml的成品人血浆。
3.如权利要求1所述的一种血浆内毒素检测试剂盒质控品，其特征在于：所述高值质控品和所述低值质控品经冷冻干燥后呈干粉状。
4.如权利要求1所述的一种血浆内毒素检测试剂盒质控品，其特征在于：使用时加入内毒素检测试剂盒中的样本处理液或者细菌内毒素检查用水复溶成为液体。
5.一种如权利要求1所述的血浆内毒素检测试剂盒质控品的制备方法，包括以下步骤：
步骤一.采用成品人血浆，按血浆内毒素检测试剂盒说明书的要求进行内毒素定量检测，若内毒素含量小于0.01EU/ml即可作为质控品基质；
步骤二.配制高浓度内毒素标准溶液，取内毒素国家工作标准品或者内毒素工作标准品，按说明书要求加入适量细菌内毒素检查用水，旋涡混匀15分钟以上，得100EU/ml内毒素标准溶液；
步骤三.取步骤二所制得的内毒素标准溶液，按每100ml质控品基质加入0.3-0.7ml 内毒素标准溶液的比例加入到所述步骤一质控品基质中，在2-8°C用磁力搅拌器搅拌混匀30-60分钟，制得低值质控品溶液；
步骤四.取步骤二所制得的内毒素标准溶液，按每100ml质控品基质加入1.8-2.2ml 内毒素标准溶液的比例加入到所述步骤一质控品基质中，在2-8°C用磁力搅拌器搅拌混匀30-60分钟，制得高值质控品溶液；
步骤五.将上述低值质控品溶液和高值质控品溶液在无菌条件下分别灌装于无热原安瓿瓶或者西林瓶中，每瓶装0.2ml；
步骤六.将上述灌装好后的的低值质控品溶液及高值质控品溶液分别进行冻干，制得干粉状质控品，最后压塞或取出冷冻干燥机后再熔封封口；
步骤七.将冻干后的低值质控品和高值质控品加入内毒素检测试剂盒中的样本处理液或者细菌内毒素检查用水，复溶为液体进行内毒素效价测定。
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