CN113776903A - 一种前处理试剂的制备方法、前处理试剂及前处理方法 - Google Patents
一种前处理试剂的制备方法、前处理试剂及前处理方法 Download PDFInfo
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Abstract
本申请实施例涉及医学检测技术领域,公开了一种前处理试剂的制备方法、前处理试剂及前处理方法,该方法包括配置混合液,并调整混合液的pH值至预设pH范围;取第一预设定量的混合液作为裂解液,分装至离心管中,该离心管具有避光功能,对装有该裂解液的离心管进行冷冻干燥,以使裂解液形成冻干粉,并密封保存,制得该前处理试剂。该混合液包括以下组分:缓冲液0.2‑1mol/L,抗坏血酸5‑75mg/mL,谷氨酰胺转肽酶5‑50μg/mL和蛋白质变性剂5‑30mol/L,从而,由包括上述组分的裂解液冷冻干燥后得到的冻干粉,具有良好的溶血处理能力,并且溶血处理时间较短,即需要的前处理时间较短。此外,裂解液以冻干粉形式保存在具有避光功能的离心管中,能尽可能避免全血样本中叶酸暴露在光线中。
Description
技术领域
本申请实施例涉及医学检测技术领域,尤其涉及一种前处理试剂的制备方法、前处理试剂及前处理方法。
背景技术
叶酸是一种重要的B族水溶性维生素,其在蛋白质合成及细胞分裂与生长过程中具有重要作用,对正常红细胞的形成有促进作用。叶酸缺乏与多种疾病的发生有关,准确检测人体内叶酸水平是评价叶酸营养状态的基础。人体叶酸水平常用血浆叶酸、血清叶酸和红细胞叶酸来衡量。血浆或血清叶酸代表体内循环状态的叶酸水平,但易受到膳食等因素影响。血浆或血清叶酸测量可提供叶酸状态的早期指标。红细胞叶酸与红细胞更新过程有关,反映人体内叶酸的长期变化状态和叶酸储备情况。但红细胞中的叶酸浓度要比血浆或血清中的叶酸浓度高,因此红细胞叶酸测量可以更加准确地反映组织贮存情况。红细胞叶酸浓度被视为能够最可靠地反映叶酸状态的指标。
目前,红细胞叶酸检测主要采用化学发光法,检测前需测定并记录全血样本的红细胞比容,然后采用裂解剂(前处理试剂)对全血样本进行溶血处理,将红细胞中贮存的多谷氨酸叶酸形式转换成单谷氨酸叶酸形式,方可进行检测。通常,全血样本加入前处理试剂进行溶血处理需要90分钟以上的时间,使得前处理过程耗时长且操作步骤繁琐;另外,叶酸属于光敏物质,长时间暴露在光线下,影响测试准确性。
发明内容
本申请实施例主要解决的技术问题是提供一种前处理试剂的制备方法、前处理试剂及前处理方法,由该制备方法制备得到的前处理试剂需要的前处理时间较短,能尽可能避免全血样本中叶酸暴露在光线中,从而,有利于提高后续检测的准确性,并且操作简单。
为解决上述技术问题,第一方面,本申请实施例中提供给了一种前处理试剂的制备方法,所述前处理试剂用于红细胞中叶酸检测,包括:
将缓冲液、抗坏血酸、谷氨酰胺转肽酶和蛋白质变性剂混合形成混合液,并调整所述混合液的pH值至预设pH范围内;
取第一预设定量的所述混合液作为裂解液,并将所述裂解液分装至离心管中,所述离心管具有避光功能;
对装有所述裂解液的离心管进行冷冻干燥,以使所述裂解液形成冻干粉,并密封保存,制得所述前处理试剂;
其中,所述混合液包括以下组分:缓冲液0.2-1mol/L,抗坏血酸5-75mg/mL,谷氨酰胺转肽酶5-50μg/mL和蛋白质变性剂5-30mol/L。
在一些实施例中,所述缓冲液包括柠檬酸钠缓冲液或醋酸钠缓冲液。
在一些实施例中,所述蛋白质变性剂包括盐酸胍或尿素。
在一些实施例中,所述预设pH范围为4-5。
在一些实施例中,所述离心管的颜色为棕色或黑色。
在一些实施例中,所述第一预设定量为0.2mL。
为解决上述技术问题,第二方面,本申请实施例中提供给了一种前处理试剂,所述前处理试剂用于红细胞中叶酸检测,采用如上第一方面所述的前处理试剂的制备方法制备得到。
为解决上述技术问题,第三方面,本申请实施例中提供给了一种前处理方法,所述前处理方法用于红细胞中叶酸检测,包括:
向如权利要求7所述前处理试剂中加入第二预设定量的水和第三预设定量的全血样本,并混合;
在预设环境条件下静置预设时长后,完成叶酸检测的前处理,其中,所述预设时长小于或等于30分钟。
在一些实施例中,所述预设环境条件包括温度范围为20-25℃,或,温度为37℃恒温。
在一些实施例中,所述第二预设定量为1mL,和/或,所述第三预设定量为50μL。
本申请实施例的有益效果:区别于现有技术的情况,本申请实施例提供的前处理试剂的制备方法、前处理试剂及前处理方法,该前处理试剂用于红细胞中叶酸检测时对全血样本中红细胞进行溶解,使红细胞破裂,该制备方法包括:将缓冲液、抗坏血酸、谷氨酰胺转肽酶和蛋白质变性剂混合形成混合液,并调整混合液的pH值至预设pH范围;取第一预设定量的混合液作为裂解液,分装至离心管中,该离心管具有避光功能,对装有该裂解液的离心管进行冷冻干燥,以使裂解液形成冻干粉,并密封保存,制得该前处理试剂。
由于该混合液包括以下组分:缓冲液0.2-1mol/L,抗坏血酸5-75mg/mL,谷氨酰胺转肽酶5-50μg/mL和蛋白质变性剂5-30mol/L,其中,该剂量的蛋白质变性剂可以溶解红细胞的细胞膜,加快红细胞破裂溶解,该剂量的谷氨酰胺转肽酶能够加快使得全血样本红细胞中的多谷氨酸叶酸转化成单谷氨酸叶酸,实现有效缩短前处理时间,该剂量的抗坏血酸能够防止叶酸氧化分解,同时,促进红细胞中的多谷氨酸叶酸转化成单谷氨酸叶酸,从而,由包括上述组分的裂解液冷冻干燥后得到的冻干粉,具有良好的溶血处理能力,并且溶血处理时间较短,即需要的前处理时间较短。此外,裂解液以冻干粉形式保存在具有避光功能的离心管中,在进行前处理时,将全血样本和水(相当于溶剂剂)直接加入离心管中即可,能尽可能避免全血样本中叶酸暴露在光线中,从而,有利于提高后续测试的准确性,并且操作简单。
附图说明
一个或多个实施例通过与之对应的附图中的图片进行示例性说明,这些示例性说明并不构成对实施例的限定,附图中具有相同参考数字标号的元件表示为类似的元件,除非有特别申明,附图中的图不构成比例限制。
图1为本申请一实施例提供的一种前处理试剂的制备方法的流程示意图;
图2为本申请一实施例提供的关于对照试剂1#和考核试剂1#的散点图;
图3为本申请一实施例提供的关于对照试剂1#和考核试剂1#的配对检测Bland-Altman图;
图4为本申请一实施例提供的关于对照试剂2#和考核试剂2#的散点图;
图5为本申请一实施例提供的关于对照试剂2#和考核试剂2#的配对检测Bland-Altman图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本申请进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本申请,但不以任何形式限制本申请。应当指出的是,对本领域的普通技术人员来说,在不脱离本申请构思的前提下,还可以做出若干变形和改进。这些都属于本申请的保护范围。
为了使本申请的目的、技术方案及优点更加清楚明白,以下结合附图及实施例,对本申请进行进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅用以解释本申请,并不用于限定本申请。
需要说明的是,如果不冲突,本申请实施例中的各个特征可以相互结合,均在本申请的保护范围之内。另外,虽然在装置示意图中进行了功能模块划分,在流程图中示出了逻辑顺序,但是在某些情况下,可以以不同于装置中的模块划分,或流程图中的顺序执行所示出或描述的步骤。此外,本文所采用的“第一”、“第二”、“第三”等字样并不对数据和执行次序进行限定,仅是对功能和作用基本相同的相同项或相似项进行区分。
除非另有定义,本说明书所使用的所有的技术和科学术语与属于本申请的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本说明书中在本申请的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施方式的目的,不是用于限制本申请。本说明书所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
此外,下面所描述的本申请各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
图1为本申请实施例提供的一种前处理试剂的制备方法的流程示意图,请参阅图1,该前处理试剂用于红细胞中叶酸检测,该方法包括如下步骤:
S10:将缓冲液、抗坏血酸、谷氨酰胺转肽酶和蛋白质变性剂混合形成混合液,并调整混合液的pH值至预设pH范围内。
在此实施例中,分别量取缓冲液、抗坏血酸、谷氨酰胺转肽酶和蛋白质变性剂(各组分),将各组分混合,得到混合液。可以采用pH计等方法测试该混合液的pH值,并调节该混合液的pH值至预设pH范围内。其中,该预设pH范围为在对全血样本中红细胞进行前处理时所需的pH值范围内。在一些实施例中,该预设pH范围为4-5,为前处理提供所需的酸性环境。可以理解的是,全血样本可以为人体的血液。
其中,混合液包括以下组分:缓冲液0.2-1mol/L,抗坏血酸5-75mg/mL,谷氨酰胺转肽酶5-50μg/mL和蛋白质变性剂5-30mol/L。
在一些实施例中,缓冲液包括柠檬酸钠缓冲液或醋酸钠缓冲液。可以理解的是,缓冲液为试剂提供酸性环境,以使其它组分能发挥有效作用。
具体地,在酸性环境下,该剂量的蛋白质变性剂可以溶解红细胞的细胞膜,加快红细胞破裂溶解,该剂量的谷氨酰胺转肽酶能够加快使得全血样本红细胞中的多谷氨酸叶酸转化成单谷氨酸叶酸,实现有效缩短前处理时间,该剂量的抗坏血酸能够防止叶酸氧化分解,同时,促进红细胞中的多谷氨酸叶酸转化成单谷氨酸叶酸。从而,实现对全血样本进行前处理,便于采用化学发光法对经前处理后的全血样本进行叶酸检测。
在一些实施例中,蛋白质变性剂包括盐酸胍或尿素,使得红细胞的细胞膜(主要成分是蛋白质)变性,被溶解,加快红细胞破裂。
S20:取第一预设定量的混合液作为裂解液,并将裂解液分装至离心管中,该离心管具有避光功能。
取第一预设定量的混合液作为裂解液,将该裂解液分装至离心管中,使得离心管中存放有了裂解液,并且,离心管中裂解液的量为第一预设定量。该第一预设定量为对一定量的全血样本进行前处理时所需的裂解液的量。可以理解的是,该第一预设定量受混合液中各组分浓度、全血样本量影响,具体可根据混合液中各组分浓度、全血样本量确定对应的第一预设定量。在一些实施例中,第一预设定量可以为0.2mL。
由于离心管具有避光功能,能尽可能避免裂解全血样本时释放的叶酸暴露在光线中,从而,有利于提高后续测试的准确性。在一些实施例中,离心管的颜色为棕色或黑色,能很好地遮挡光线,避光效果好。
S30:对装有裂解液的离心管进行冷冻干燥,以使裂解液形成冻干粉,制得该前处理试剂。
对装有该裂解液的离心管进行冷冻干扰,使得离心管中的裂解液形成冻干粉,制得前处理试剂。基于裂解液的量为第一预设定量,从而,该离心管中冻干粉的量为一个可知的定量,可供每次红细胞叶酸检测时的全血样本进行前处理。
在一些实施例中,为了使得离心管能够作为前处理的容器,选择容量为2mL的离心管,或大于2mL的离心管。在前处理准备工作中,只需在离心管中加入一定量水溶解冻干粉后,在加入全血样本即可实现前处理,操作简单。例如,将1mL水加入离心管中以溶解冻干粉,然后加入50μL的全血样本。可以理解的是,该全血样本可以采用含有乙二胺四乙酸(EDTA)的抗凝管采集,使得全血样本不会凝固,不会干扰叶酸检测的前处理和叶酸检测结果。
本申请实施例提供的前处理试剂的制备方法,该前处理试剂用于红细胞中叶酸检测时对全血样本中红细胞进行溶解,使红细胞破裂,该制备方法包括:将缓冲液、抗坏血酸、谷氨酰胺转肽酶和蛋白质变性剂混合形成混合液,并调整混合液的pH值至预设pH范围;取第一预设定量的混合液作为裂解液,分装至离心管中,该离心管具有避光功能,对装有该裂解液的离心管进行冷冻干燥,以使裂解液形成冻干粉,制得该前处理试剂。
由于该混合液包括以下组分:缓冲液0.2-1mol/L,抗坏血酸5-75mg/mL,谷氨酰胺转肽酶5-50μg/mL和蛋白质变性剂5-30mol/L,其中,该剂量的蛋白质变性剂可以溶解红细胞的细胞膜,加快红细胞破裂溶解,该剂量的谷氨酰胺转肽酶能够加快使得全血样本红细胞中的多谷氨酸叶酸转化成单谷氨酸叶酸,实现有效缩短前处理时间,该剂量的抗坏血酸能够防止叶酸氧化分解,同时,促进红细胞中的多谷氨酸叶酸转化成单谷氨酸叶酸,从而,由包括上述组分的裂解液冷冻干燥后得到的冻干粉,具有良好的溶血处理能力,并且溶血处理时间较短,即需要的前处理时间较短。此外,裂解液以冻干粉形式保存在具有避光功能的离心管中,在进行前处理时,将全血样本和水(相当于溶剂剂)直接加入离心管中即可,能尽可能避免全血样本中叶酸暴露在光线中,从而,有利于提高后续测试的准确性,并且操作简单。
本申请另一实施例还提供了一种前处理试剂,该前处理试剂采用如上实施例中前处理试剂的制备方法制备得到,与由上述实施例中前处理试剂的制备方法制备得到的前处理试剂具有相同的结构和功能,在此不再一一赘述。
本申请另一实施例还提供了一种前处理方法,该前处理方法用于红细胞中叶酸检测,即对红细胞中叶酸检测所用的全血样本进行前处理,具体包括如下步骤:
A、向上述实施例所述的前处理试剂中加入第二预设定量的水和第三预设定量的全血样本,并混合;
B、在预设环境条件下静置预设时长后,完成叶酸检测的前处理,其中,所述预设时长小于或等于30分钟。
可以理解的是,第二预设定量的水用于溶解前处理试剂中的冻干粉。可以理解的是,第二预设定量(水的量)可以由冻干粉的量决定,即由制备过程中裂解液的量(第一预设定量)决定。例如,当在离心管中分装0.2mL的混合液作为裂解液时,可加入1mL水(即第二预设定量为1mL)对冻干粉进行溶解。同理,全血样本的量(第三预设定量)也可以由冻干粉的量决定,即由制备过程中裂解液的量(第一预设定量)决定。延续上述举例,在此实施例中,全血样本的量可以为50μL,即第三预设定量为50μL。
再加入水和全血样本后,混合均匀,然后,再预设环境条件下,静置预设时长后,即可实现完成叶酸检测的前处理。其中,预设时长小于或等于30分钟。在一些实施例中,预设环境条件包括温度范围为20-25℃,或,温度为37℃恒温。
可以理解的是,在静置的过程中,试剂中的蛋白质变性剂溶解全血样本中红细胞的细胞膜,加快红细胞破裂溶解,谷氨酰胺转肽酶使得红细胞中的多谷氨酸叶酸转化成单谷氨酸叶酸,并且转化速度快,实现有效缩短前处理时间,抗坏血酸能够防止叶酸氧化分解,同时,促进红细胞中的多谷氨酸叶酸转化成单谷氨酸叶酸,从而,能够快速裂解红细胞,并实现将多谷氨酸叶酸转化成单谷氨酸叶酸。
在此实施例中,静置时间(即预设时长)小于或等于30分钟,而其它前处理试剂需要静置大约90分钟,因此,相比于其它前处理试剂,本实施例中的前处理试剂所需的前处理时间较短。
前处理过程中,将水和全血样本直接加入盛装有冻干粉的离心管即可,操作简单,并且,基于离心管具有避光功能,能尽可能避免全血样本中叶酸暴露在光线中,从而,有利于提高后续检测的准确性。
为进一步阐述本申请的技术方案,以下提供本申请的前处理试剂的制备方法的若干实施例。
实施例1:
按以下各组分,配制100mL混合液,采用2mL棕色的离心管,取0.2mL的混合液作为裂解液,每管分装0.2mL裂解液进行冷冻干燥,冻干完成后密封2-8℃保存。
混合液组分:柠檬酸钠缓冲液0.5mol/L,pH=4.5,抗坏血酸10mg/mL,氨酰胺转肽酶20μg/mL,盐酸胍20mol/L。
实施例2:
按以下各组分,配制100mL混合液,采用2mL黑色的离心管,取0.2mL的混合液作为裂解液,每管分装0.2mL裂解液进行冷冻干燥,冻干完成后密封2-8℃保存。
混合液组分:柠檬酸钠缓冲液0.5mol/L,pH=4,抗坏血酸50mg/mL,氨酰胺转肽酶10μg/mL,盐酸胍10mol/L。
下面结合具体的测试对比实验,对本申请实施例1中制备得到的前处理试剂的性能进行说明。
以实施例1中制备得到的前处理试剂作为考核试剂1#,以贝克曼库尔特(美国)股份有限公司生产的红细胞叶酸溶解剂作为对照试剂1#,进行对比实验,即采用这两种试剂分别对两份全血样本进行前处理,处理后采用贝克曼库尔特(美国)股份有限公司生产的叶酸测定试剂盒(化学发光法)对两份前处理后的全血样本进行检测并比对。
具体地,按照贝克曼试剂盒说明书操作步骤,将红细胞叶酸溶解剂以100mL去离子水回溶,静置至少40分钟直到其完全溶解,使用前轻轻摇晃以混合。取50μL的全血样本1#加入到1mL的溶解剂中,轻轻摇晃使其充分混合。然后让混合物在室温下静置至少90分钟。90分钟后,将溶血产物采用贝克曼叶酸测定试剂盒(化学发光法)进行检测,计算红细胞叶酸浓度并记录结果。
取一管实施例1中的前处理试剂,加入1mL水,同时加入50μL的全血样本2#,轻轻摇晃使全血样本充分混匀,然后将全血样本放置在室温下静置30分钟,30分钟后溶血产物采用贝克曼叶酸测定试剂盒(化学发光法)进行检测,计算红细胞叶酸浓度并记录结果。可以理解的是,全血样本1#和全血样本2#相同,仅标签不同。
(1)回归分析和散点图
以对照试剂1#为自变量X,考核试剂1#为应变量Y,计算简单线性回归方程,并计算回归系数b和截距a的标准误和置信区间,并进行检验,建立假设:
回归模型F检验和回归系数b的t检验(检验意义相同):
H0:两种试剂无直线关系,H1:两种试剂直线关系成立,α=0.05。
截距a的t检验:
H0:截距与0值无显著性差异,H1:截距与0值有显著性差异,α=0.05。
计算结果如下表1所示:
表1数据直线回归分析结果
图2为以对照试剂1#为自变量(X)、考核试剂1#为应变量(Y)作出的散点图,结合表1和图2可知:
回归方程为Y=0.9883X+5.1386,斜率b=0.9883(95%置信区间0.9746~1.0019),P<0.05,拒绝H0,接受H1,即两种试剂直线关系成立,检测结果不存在比例差异。截距a=5.1386(95%置信区间-2.4345~12.7117),P>=0.05,拒绝H1,接受H0,即截距与0值无显著性差异,检测结果不存在系统差异。
(2)Bland-Altam分析
以对照试剂1#和考核试剂1#配对检测均值为横度坐标,检测差值为纵坐标,进行分析,结果如表2所示:
表2 Bland-Altam分析基本数据
编号 | 计算值 |
差值均值 | 0.813 |
差值标准差 | 16.946 |
95%界值 | -32.400~34.026 |
界外点数(比率) | 6(5.00%) |
根据表2中的检测结果,制作如图3所示的两种试剂配对检测Bland-Altam,如图3所示,经Bland-Altman图解分析,95%的点落在均值±1.96SD范围内,说明采用考核试剂1#处理过的全血样本检测结果与对照试剂1#的检测结果具有一致性
也即,在此实施例中,考核试剂1#与对照试剂1#的检测结果偏差极小,考核试剂1#(实施例1中的前处理试剂)准确性高,并且,考核试剂1#的静置时间仅有30分钟,使得其前处理时间仅为对照试剂1#所需的前处理时间的三分之一,因此,能够提高检测效率。此外,考核试剂1#直接加入水和全血样本即可,无需额外配取溶解剂,操作简单。
下面结合具体的测试对比实验,对本申请实施例2中制备得到的前处理试剂的性能进行说明。
以实施例2中制备得到的前处理试剂作为考核试剂2#,美国西门子医学诊断股份有限公司生产的Atellica IM RBC Fol(抗坏血酸/稀释液)作为对照试剂2#,进行对比实验,即采用这两种试剂分别对两份全血样本进行前处理,处理后采用美国西门子医学诊断股份有限公司生产的叶酸测定试剂盒(直接化学发光法)对两份前处理后的全血样本进行检测并比对。
具体地,按照西门子试剂盒说明书操作步骤,将1小瓶(30mL)的RBC叶酸抗坏血酸稀释液内容物添加到冻干RBC叶酸抗坏血酸中,使RBC叶酸抗坏血酸复溶。复溶的混合液在室温下静置15分钟,不时倒置试剂瓶,使混合液充分混合。将50μL全血样本加入到装有1mL复溶的RBC叶酸抗坏血酸试管中,轻轻摇晃进行混匀。在室温下避光静置90分钟以上,90分钟后溶血产物采用西门子叶酸测定试剂盒(直接化学发光法)进行检测,计算红细胞叶酸浓度并记录结果。
取一管实施例2中的前处理试剂,加入1mL水,同时加入50μL的全血样本2#,轻轻摇晃使全血样本充分混匀,然后将全血样本放置在37℃恒温箱中静置20分钟,20分钟后溶血产物采用西门子叶酸测定试剂盒(直接化学发光法)进行检测,计算红细胞叶酸浓度并记录结果。可以理解的是,全血样本3#和全血样本4#相同,仅标签不同。
(1)回归分析和散点图
以对照试剂2#为自变量X,考核试剂2#为应变量Y,计算简单线性回归方程,并计算回归系数b和截距a的标准误和置信区间,并进行检验,建立假设:
回归模型F检验和回归系数b的t检验(检验意义相同):
H0:两种试剂无直线关系,H1:两种试剂直线关系成立,α=0.05。
截距a的t检验:
H0:截距与0值无显著性差异,H1:截距与0值有显著性差异,α=0.05。
计算结果如下表3所示
表3数据直线回归分析结果
图4为以对照试剂2#为自变量(X)、考核试剂2#为应变量(Y)作出的散点图,结合表3和图4可知:
归方程为Y=0.9968X+2.3512,斜率b=0.9968(95%置信区间0.9809~1.0127),P<0.05,拒绝H0,接受H1,即两种试剂直线关系成立,检测结果不存在比例差异。截距a=2.3512(95%置信区间-6.5725~11.2750),P>=0.05,拒绝H1,接受H0,即截距与0值无显著性差异,检测结果不存在系统差异。
(2)Bland-Altam分析
以对照试剂2#和考核试剂2#配对检测均值为横度坐标,检测差值为纵坐标,进行分析,结果如表4所示:
表4 Bland-Altam分析基本数据
根据表4中的检测结果,制作如图5所示的两种试剂配对检测Bland-Altam,如图5所示,经Bland-Altman图解分析,95%的点落在均值±1.96SD范围内,说明采用考核试剂处理过的全血样本检测结果与对照试剂的检测结果具有一致性。
也即,在此实施例中,考核试剂2#与对照试剂2#的检测结果偏差极小,考核试剂2#(实施例2中的前处理试剂)准确性高,并且,考核试剂2#的静置时间仅有20分钟,使得其前处理时间不到对照试剂2#所需的前处理时间的四分之一,因此,能够提高检测效率。此外,考核试剂2#直接加入水和全血样本即可,无需额外配取溶解剂,操作简单。
综上所述,本申请实施例提供的前处理试剂的制备方法、前处理试剂及前处理方法,该前处理试剂用于红细胞中叶酸检测时对全血样本中红细胞进行溶解,使红细胞破裂,该制备方法包括:将缓冲液、抗坏血酸、谷氨酰胺转肽酶和蛋白质变性剂混合形成混合液,并调整混合液的pH值至预设pH范围;取第一预设定量的混合液作为裂解液,分装至离心管中,该离心管具有避光功能,对装有该裂解液的离心管进行冷冻干燥,以使裂解液形成冻干粉,并密封保存,制得该前处理试剂。
由于该混合液包括以下组分:缓冲液0.2-1mol/L,抗坏血酸5-75mg/mL,谷氨酰胺转肽酶5-50μg/mL和蛋白质变性剂5-30mol/L,其中,该剂量的蛋白质变性剂可以溶解红细胞的细胞膜,加快红细胞破裂溶解,该剂量的谷氨酰胺转肽酶能够加快使得全血样本红细胞中的多谷氨酸叶酸转化成单谷氨酸叶酸,实现有效缩短前处理时间,该剂量的抗坏血酸能够防止叶酸氧化分解,同时,促进红细胞中的多谷氨酸叶酸转化成单谷氨酸叶酸,从而,由包括上述组分的裂解液冷冻干燥后得到的冻干粉,具有良好的溶血处理能力,并且溶血处理时间较短,即需要的前处理时间较短。此外,裂解液以冻干粉形式保存在具有避光功能的离心管中,在进行前处理时,将全血样本和水(相当于溶剂剂)直接加入离心管中即可,能尽可能避免全血样本中叶酸暴露在光线中,从而,有利于提高后续测试的准确性,并且操作简单。
最后应说明的是:以上实施例仅用以说明本申请的技术方案,而非对其限制;在本申请的思路下,以上实施例或者不同实施例中的技术特征之间也可以进行组合,步骤可以以任意顺序实现,并存在如上所述的本申请的不同方面的许多其它变化,为了简明,它们没有在细节中提供;尽管参照前述实施例对本申请进行了详细的说明,本领域的普通技术人员应当理解:其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换;而这些修改或者替换,并不使相应技术方案的本质脱离本申请各实施例技术方案的范围。
Claims (10)
1.一种前处理试剂的制备方法,所述前处理试剂用于红细胞中叶酸检测,其特征在于,包括:
将缓冲液、抗坏血酸、谷氨酰胺转肽酶和蛋白质变性剂混合形成混合液,并调整所述混合液的pH值至预设pH范围内;
取第一预设定量的所述混合液作为裂解液,并将所述裂解液分装至离心管中,所述离心管具有避光功能;
对装有所述裂解液的离心管进行冷冻干燥,以使所述裂解液形成冻干粉,并密封保存,制得所述前处理试剂;
其中,所述混合液包括以下组分:缓冲液0.2-1mol/L,抗坏血酸5-75mg/mL,谷氨酰胺转肽酶5-50μg/mL和蛋白质变性剂5-30mol/L。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述缓冲液包括柠檬酸钠缓冲液或醋酸钠缓冲液。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述蛋白质变性剂包括盐酸胍或尿素。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的方法,其特征在于,所述预设pH范围为4-5。
5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述离心管的颜色为棕色或黑色。
6.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述第一预设定量为0.2mL。
7.一种前处理试剂,所述前处理试剂用于红细胞中叶酸检测,其特征在于,采用如权利要求1-6任一项所述的前处理试剂的制备方法制备得到。
8.一种前处理方法,所述前处理方法用于红细胞中叶酸检测,其特征在于,包括:
向如权利要求7所述前处理试剂中加入第二预设定量的水和第三预设定量的全血样本,并混合;
在预设环境条件下静置预设时长后,完成叶酸检测的前处理,其中,所述预设时长小于或等于30分钟。
9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述预设环境条件包括温度范围为20-25℃,或,温度为37℃恒温。
10.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述第二预设定量为1mL,和/或,所述第三预设定量为50μL。
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