CN108426762B - 一种浓缩液磷酸盐缓冲液的配置方法 - Google Patents
一种浓缩液磷酸盐缓冲液的配置方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种浓缩液磷酸盐缓冲液的配置方法,包括如下步骤:(1)装3L水于5L量杯中,把量杯置于磁力搅拌器上,设定搅拌频率为40‑50HZ,搅拌速度为100转/分钟,让搅拌转子匀速转动起来;(2)然后依次往所述5L量杯中加入经过200℃,2小时干燥处理过的磷酸二氢钾,二水合磷酸氢二钠,氯化钾,硝酸钠,EDTA‑2Na,TritongX‑100,K40,每次加入一种化学品都必须待所述缓冲液完全溶解后再次加入下一个化学品;(3)等上述化学品都完全溶解后,然后再往5L量杯中加水至刻度线处;(4)溶解均匀后,即得灌装前溶液,在过滤器中放入三蒸水中浸泡过的0.22um的醋酸纤维滤膜,过滤三次,即为需要的系统液。本发明配置过程不会产生大量泡沫。
Description
技术领域
本发明涉及一种浓缩液磷酸盐缓冲液的配置方法。
背景技术
浓缩液主要成分是磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffer saline)一般作 为溶剂,起溶解保护试剂的作用。它是生物化学研究中使用最为广泛的一种 缓冲液,主要成分为Na2HPO4.2H2O、KH2PO4、NaNO3、KCL等,作为体外诊 断试剂所用的10倍浓缩液,所以研究其技术指标主要涉及的是PH值和电导 率,再根据相关技术,发现PH值在6.8-7.3,电导率在42-44ms/cm范围的 10倍浓缩液按照1:9加水稀释成系统液对于测试血糖和乳酸得出的测试结 果更加符合标准,并且CV≤2.0%。其中PH值,由于二水合磷酸氢二钠和磷 酸二氢钾它们有二级解离,缓冲的pH值范围很广,针对浓缩液的PH值原理 分析如下:根据现有的各原材料的含量,进行溶解配置,原理及作用:用于 葡萄糖/乳酸分析仪、分子克隆及细胞培养,pH=7.4,与人体血液等渗,磷 酸盐缓冲液是由磷酸二氢钾和二水合磷酸氢二钠组成的溶液,用于样品的稀 释,其中磷酸二氢钾酸性较强,二水合磷酸氢二钠碱性较强。如果血液中的 ph值过高的话,多余的碱就会与酸磷酸二氢钾结合生成磷酸氢二钠,反之, 过酸时就会与磷酸氢二钠反应产生磷酸二氢钾,这样PH值就会稳定在一定 的范围内:
H2PO4 -=H++HPO4 2-
(足量共轭酸 (足量共轭碱
主要来自 主要来自
KH2PO4) Na2HPO4.H2O)
HPO4 2-是抗酸成分,通过平衡移动能对抗加酸的影响。H2PO4 -是抗碱成分, 通过平衡右移对抗外加碱的影响;而对于试剂溶液的电导率,市场上磷酸盐 缓冲溶液一般采用溶剂为注射用水、0.004%的磷酸二氢钠、0.028%的磷酸氢 二钠、0.09%的氯化钠的配方,该方法生产的缓冲溶液渗透压达到 280-320smol/L,符合国家标准规定的250smol/L-350smol/L,但是偏上限, 在临床上不良反应较多,同时细胞内液和外液之间保持着一个平衡状态,以 防出现问题,打破内在环境的稳定,对机体产生不利影响。电导率和渗透压 是调节细胞内外体液环境稳定的重要因素之一,其高低变化直接影响机体的 生理功能和代谢活动,高渗透压改变了药物的浓度和酸碱度,通过临床注射, 因此在配液过程中及时考虑具体考虑试剂对渗透压的影响,在符合国家标准 的过程中,向临床提供等渗和等张浓度的溶液,已尽可能的避免不良结果产 生,所以电导率是10倍浓缩液一个不可忽视的技术因素,它直接影响测试 用血细胞的渗透压,即影响在血糖分析仪等仪器上对结果测试的判断,成 分中NaNO3、KCL、EDTA-2Na.2H2O主要作用为增加盐离子浓度,电导率大小 的因素主要也是物质在水中电离出的部分,不电离的部分是不需要计算得, 所以采用电极常数为0.1-1.0的电极棒,测试多组配置出的浓缩液的电导率 数据,可以得到浓缩液的电导率指标约为42-45ms/cm,符合国外行业内浓缩 液的使用标准。
浓缩液稀释后与细胞生长状态下的pH值、渗透压等环境状态一致,具 有维持渗透压、控制酸碱平衡、供给细胞生存代谢所必需的能量和无机盐成 分等作用,可满足体外实验中,细胞生存并维持一定的代谢的基本需要,所 以对于浓缩液中各化学原材料的添加量经过大量的实验数据,得出适用于市 面上一些全自动血糖/乳酸分析仪测试所需要的系统液。
发明内容
本发明提供了一种浓缩液磷酸盐缓冲液的配置方法,包括如下步骤:
(1)装3L水于5L量杯中,把量杯置于磁力搅拌器上,设定搅拌频率 为40-50HZ,搅拌速度为100转/分钟,让搅拌转子匀速转动起来;
(2)然后依次往所述5L量杯中加入经过200℃,2小时干燥处理过的 磷酸二氢钾,二水合磷酸氢二钠,氯化钾,硝酸钠,EDTA-2Na,TritongX-100, K40,每次加入一种化学品都必须待所述缓冲液完全溶解后再次加入下一个 化学品;
(3)等上述化学品都完全溶解后,然后再往5L量杯中加水至刻度线 处;
(4)溶解均匀后,即得灌装前溶液,在过滤器中放入三蒸水中浸泡过 的0.22um的醋酸纤维滤膜,过滤三次,即为需要的系统液。
优选地,还包括:
(5)理化性质合格后,再用所述的系统液将采集的血样进行稀释,用 葡萄糖/乳酸分析仪及血糖分析仪对血样进行测试并与标准试剂测试的血样 浓度做对比测试。
本发明相较现有技术,具备如下优点:
1、配置过程不会产生大量泡沫;
2、浓缩液配置工艺简单操作,效率提高很多,易于控制其PH值和电导率;
3、重复性在±0.5%之内;
4、该系统液还对血细胞分析仪的管道具有清洗作用,以保持仪器测量的准 确性;
5、可以作为鞘液使用,节省总体试剂的使用成本
具体实施方式
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实 施例或现有技术描述作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的仅仅是本发 明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前 提下,还可以根据这些实施例获得其他的实施方式。
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所 描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发 明中的实施例,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的 所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
阶段目标:
第一阶段设计浓缩液的技术配方;
第二阶段依据配方建立成熟的工艺流程;
第三阶段利用血糖仪等仪器进行校准对比并正式投入生产。
最终目的:制备一种全血样本检测前10倍浓缩液磷酸盐缓冲液的方法。
浓缩液磷酸盐缓冲液的制备实验仪器如下:
(1)搅拌器;
(2)数字温控器;
(3)PH计;
(4)电导率仪;
(5)5L大量杯;
(6)测试样品放置于一个100ml的小烧杯中;
(7)PH计和电导率仪校准后把它们的电极插入溶液中;
(8)分别按下PH计和电导率仪的“读数”按钮;
(9)等待1min-2min,记录下PH计上的读数和电导率上的读数;
(10)再稀释浓缩液,稀释10倍,稀释后的稀释液上机测试,与一些原本
就有的技术指标作对比分析
引证:YYT 0456.1-2014血液分析仪用试剂第1部分:清洗液;YYT 0456.3-2014血液分析仪用试剂第3部分:稀释剂;ISO18113-2第2部分: 专业用体外诊断试剂;GBT 26124-2011临床化学体外诊断试剂盒标准(GB)
本发明的缓冲液,包括:
(1)5L浓缩液中各化学品的添加量浓度及添加量,磷酸二氢钾添加量 0.55%,二水合磷酸氢二钠添加量浓度2.37%—2.38%,氯化钾添加量1.50%, 硝酸钠添加量浓度为0.19%—0.20%,二水合依地酸二钠添加量浓度为0.38% —0.40%,TritonX-100的添加量为0.05%—0.055%,Parmetol K40的添加量 为0.10%—0.12%,并且用超纯水做溶剂;
(2)溶解上述的所有无机盐应该预先准备溶剂体积的60%预先溶解, 方可避免泡沫的产生;
(3)对于有机物K40和TritonX-100,一个是起杀菌、灭菌的作用,一 个是离散血样中的细胞使之分散,便于仪器检测,同时降低稀释液的表面张 力从而减少气泡的产生,消除气泡给对测量带来的干扰,该物质同时还具有 鞘液的作用;添加顺序是先添加TritonX-100后添加K40;
(4)本发明采用低转速搅拌溶解法,配置后搅拌30min,磷酸二氢钾、 磷酸氢二钠、氯化钾属于亲水物质,易于溶解,不影响溶液的均一性,避免 高转速导致产生泡沫,低转速节能,适合工业生产要求;
(5)磷酸二氢钾、二水合磷酸氢二钠、氯化钾配液前经过200℃、2小 时的干热处理,降低试剂内毒素负荷,大大减少了临床发热反应的发生,提 高了产品的质量;
(6)氯化钾的加入量:1.50%,硝酸钠的加入量:0.19%,EDTA-2Na 的加入量:0.38%—0.40%,制成适宜的渗透压溶液,有效保证了细胞内外 水分的平衡,维持试剂原浓度和酸碱度,测试出的结果更加准确;
(7)余量为水,最好是三蒸水
具体实施方式一:
1、装3000ml超纯水于5000ml量杯中(体积要校准,已校准),把量杯置于 搅拌器下,让搅拌棒伸入到液面1/2处,设定搅拌频率为50HZ,开启搅拌, 搅拌速度为100转/分钟,然后依次往5000ml量杯中加入磷酸二氢钾0.55%, 二水合磷酸氢二钠2.37%,氯化钾1.50%,硝酸钠0.195%,EDTA-2Na(二 水合物)0.38%,TritonX-100 0.052%,K40 0.1%,每次加入一种化学品都 必须等其完全溶解后再次加入下一个化学品,等上述化学品都完全溶解后, 然后再往5L量杯中加满至刻度线处(已校准过的刻度线),继续搅拌,搅拌 结束后溶液经除菌过滤,即可得到所需要的浓缩液,
2、静置1h,即得灌装前溶液,所得浓缩液澄清透明无沉淀浑浊现象,则测 试其PH值和电导率,合格后,稀释成系统液做上机测试,取样检测,连做 三批,,批号分别是20160613、20160614、20160615;
3、结论:
具体实施方式二:
1、装3000ml超纯水于5000ml量杯中(体积要校准,已校准),把量杯置于 搅拌器下,让搅拌棒伸入到液面1/2处,设定搅拌频率为55HZ,开启搅拌, 搅拌速度为120转/分钟,然后依次往5000ml量杯中加入磷酸二氢钾0.56%, 二水合磷酸氢二钠2.38%,氯化钾1.40%,硝酸钠0.197%,EDTA-2Na(二 水合物)0.39%,TritonX-100 0.053%,K400.12%,每次加入一种化学品都 必须等其完全溶解后再次加入下一个化学品,等上述化学品都完全溶解后, 然后再往5L量杯中加满至刻度线处(已校准过的刻度线),继续搅拌,搅拌 结束后溶液经除菌过滤,即可得到所需要的浓缩液,
2、静置1h,即得灌装前溶液,所得浓缩液澄清透明无沉淀浑浊现象,则测 试其PH值和电导率,合格后,稀释成系统液做上机测试,取样检测,连做 三批,,批号分别是20160620、20160621、20160622;
3、结论:
具体实施方式三:
1、装3000ml超纯水于5000ml量杯中(体积要校准,已校准),把量杯置于 搅拌器下,让搅拌棒伸入到液面1/2处,设定搅拌频率为60HZ,开启搅拌, 搅拌速度为160转/分钟,然后依次往5000ml量杯中加入磷酸二氢钾0.57%, 二水合磷酸氢二钠2.39%,氯化钾1.55%,硝酸钠0.197%,EDTA-2Na(二 水合物)0.36%,TritonX-100 0.055%,K400.13%,每次加入一种化学品都 必须等其完全溶解后再次加入下一个化学品,等上述化学品都完全溶解后, 然后再往5L量杯中加满至刻度线处(已校准过的刻度线),继续搅拌,搅拌 结束后溶液经除菌过滤,即可得到所需要的浓缩液,
2、静置1h,即得灌装前溶液,所得浓缩液澄清透明无沉淀浑浊现象,则测 试其PH值和电导率,合格后,稀释成系统液做上机测试,取样检测,连做 三批,,批号分别是20160701、20160702、20160703;
3、结论:
综上所述,本发明具备如下优点:
1、更加精确的实现稀释液对血糖仪等仪器的测试所需;
2、便于生产中简单,直观的配置;
3、控制氯化钾的添加量,间接稳定的调节了制剂的渗透压,浓缩液的 渗透压可以控制在270-300smol/L之间,即电导率在42-44ms/cm之间;
4、加入0.55%左右的磷酸二氢钾、2.37%—2.38%的二水合磷酸氢二钠 制成的缓冲体系,PH值稳定的控制在6.8-7.3之间;
5、本发明采用低转速搅拌溶解法,配置后搅拌30min,磷酸二氢钾, 二水合磷酸氢二钠,氯化钾属于亲水物质,易于溶解,不影响溶液的均一性, 避免高转速导致产生泡沫和气泡,低转速节能,适合工业生产要求;
6、磷酸二氢钾,二水合磷酸氢二钠,氯化钾配料之前经过200℃、2小时 的干热处理,降低试剂内毒素负荷,大大减少临床发热反应的发生,提高了 产品质量,7、氯化钾的加入量1.50%左右,制成较适宜的浓缩液,再按照一 定比例制成稀释液,有效保证了细胞内外水分的平衡,维持试剂原浓度和酸 碱度,对于测试结果更加准确精确。
综上,虽然本发明公开了以上优选实施例,但上述优选实施例并不限制 本发明的范围,本领域的技术人员在不脱离本发明的精神和范围内,所做的 变动都属于本发明的保护范围。
Claims (2)
1.一种浓缩液磷酸盐缓冲液的配置方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)装3L水于5L量杯中,把量杯置于磁力搅拌器上,设定搅拌频率为50-60HZ,搅拌速度为100转/分钟—160转/分钟,让搅拌转子匀速转动起来;
(2)然后依次往所述5L量杯中加入经过200℃,2小时干燥处理过的磷酸二氢钾、二水合磷酸氢二钠和氯化钾,硝酸钠,EDTA-2Na,TritonX-100,K40,每次加入一种化学品都必须待所述缓冲液完全溶解后再次加入下一个化学品;
(3)等上述化学品都完全溶解后,然后再往5L量杯中加水至刻度线处;
(4)溶解均匀后,即得灌装前溶液,在过滤器中放入三蒸水中浸泡过的0.22um的醋酸纤维滤膜,过滤三次,即为需要的系统液。
2.如权利要求1所述的配置方法,其特征在于,还包括:
(5)理化性质合格后,再用所述的系统液将采集的血样进行稀释,用葡萄糖/乳酸分析仪及血糖分析仪对血样进行测试并与标准试剂测试的血样浓度做对比测试。
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Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5981204A (en) * | 1997-05-06 | 1999-11-09 | Johnson; Ted Donald | Method for forensically screening hair samples for the presence of cannabinoids |
CN1834612A (zh) * | 2006-04-29 | 2006-09-20 | 北京索通医疗技术有限公司 | 一种用于血细胞分析仪的多功能稀释液及其制备方法 |
CN103645087A (zh) * | 2013-11-12 | 2014-03-19 | 王锦忠 | 磷酸盐缓冲液 |
CN103868768A (zh) * | 2014-02-14 | 2014-06-18 | 河南省农业科学院植物保护研究所 | 一种昆虫触角及附肢的扫描电镜样品处理方法 |
CN106370584A (zh) * | 2016-08-17 | 2017-02-01 | 江苏英诺华医疗技术有限公司 | 血细胞和生化检测仪及其检测方法 |
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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US5981204A (en) * | 1997-05-06 | 1999-11-09 | Johnson; Ted Donald | Method for forensically screening hair samples for the presence of cannabinoids |
CN1834612A (zh) * | 2006-04-29 | 2006-09-20 | 北京索通医疗技术有限公司 | 一种用于血细胞分析仪的多功能稀释液及其制备方法 |
CN103645087A (zh) * | 2013-11-12 | 2014-03-19 | 王锦忠 | 磷酸盐缓冲液 |
CN103868768A (zh) * | 2014-02-14 | 2014-06-18 | 河南省农业科学院植物保护研究所 | 一种昆虫触角及附肢的扫描电镜样品处理方法 |
CN106370584A (zh) * | 2016-08-17 | 2017-02-01 | 江苏英诺华医疗技术有限公司 | 血细胞和生化检测仪及其检测方法 |
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