CN108426761A - 一种磷酸盐缓冲液及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种磷酸盐缓冲液的配制方法，在所述5L浓缩液磷酸盐缓冲液中，包括：磷酸二氢钾，其添加浓度为0.55wt％；二水合磷酸氢二钠，其添加浓度为2.37—2.38wt％；氯化钾，其添加浓度为1.50wt％；硝酸钠，其添加浓度为0.19％—0.20wt％；二水合依地酸二钠，其添加浓度为0.38—0.40wt％；TritonX‑100，其添加浓度为0.05—0.055wt％，所述溶剂为水。本发明的缓冲液在配置过程不会产生大量泡沫；且工艺简单操作，效率提高很多，易于控制其PH值和电导率。

Description

一种磷酸盐缓冲液及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种磷酸盐缓冲液及其制备方法。

背景技术

浓缩液主要成分是磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffer saline)一般作为 溶剂，起溶解保护试剂的作用。它是生物化学研究中使用最为广泛的一种缓 冲液，主要成分为Na2HPO4.2H2O、KH2PO4、NaNO3、KCl，TritonX-100 等，作为体外诊断试剂所用的10倍浓缩液，所以研究其技术指标主要涉及 的是PH值和电导率(电导率间接反映溶液的渗透压，因为渗透压取决于溶 质的分子数)，再根据相关技术，发现PH值在6.8-7.3，电导率在42-44ms/cm 范围的10倍浓缩液稀释成稀释液测试血糖和乳酸得出的测试结果更加符合 标准，并且CV≤2.0％。市场上磷酸盐缓冲溶液配置工艺，生产的缓冲溶液 渗透压可以达到280-320smolL，PH值可以达到7.1-7.2，一般用于葡萄糖/ 乳酸分析仪、分子克隆及细胞培养，pH＝7.4，与人体血液等渗细胞内外液 之间保持着一个平衡等渗状态，而一方出现异常，将会打破内环境的稳态， 对测试结果就会产生不利影响。渗透压是调节细胞内外体液环境稳定的重要 因素，其高低变化可以直接影响机体的生理功能和代谢活动，因此对于试剂 研究员来说，配液过程中及时考虑每个试剂本身对渗透压的影响，在符合国 家标准的过程中，向临床提供等渗的溶液，以尽可能的避免用药异常现象发 生。

再者配置浓缩液中需要用到的tritonX-100和Parmetol K40，也是溶液 中必须的两种有机化合物，对于这两中化学试剂的添加工艺，结果实验室多 次研发确认，再结合国外给出的一些技术支持，确定在完全溶解磷酸二氢钾， 二水合磷酸氢二钠，氯化钾，硝酸钠，二水合EDTA-2Na后，搅拌转速设定 120-150转/分钟，搅拌频率设定为40-50HZ，匀速搅拌下，先缓慢滴加 0.05％-0.055％的TritonX-100，待其完全溶解后，再缓慢逐滴加入5.00mL-6.00ml左右的K40，最后加超纯水至5L刻度线处，继续搅拌30min， 得到灌装前的浓缩液，进而稀释成稀释液与血细胞正常状态下的pH值、渗 透压一致，维持渗透压、酸碱平衡，进而测试得到的数据更加具有说服力。

发明内容

本发明包含一种磷酸盐缓冲液，在5L浓缩液磷酸盐缓冲液中，包括： 磷酸二氢钾，其添加浓度为0.55wt％；二水合磷酸氢二钠，其添加浓度为 2.37—2.38wt％；氯化钾，其添加浓度为1.50wt％；硝酸钠，其添加浓度 为0.19％—0.20wt％；二水合依地酸二钠，其添加浓度为0.38—0.40wt％； TritonX-100，其添加浓度为0.05—0.055wt％，所述溶剂为水。

优选地，所述缓冲液还包含ParmetolK40。

优选地，所述溶剂为超纯水。

本发明还公开了一种制备上述缓冲液的工艺方法，包含以下技术特征：

(1)装3L水于5L量杯中，将量杯置于磁力搅拌器上，让所述磁力搅 拌器内的搅拌转子匀速转动；

(2)依次向5L量杯中加入磷酸二氢钾，二水合磷酸氢二钠，氯化钾， 硝酸钠，二水合依地酸二钠，直至上述原材料完全溶解后搅拌下加入 TritonX-100；溶解上述的所有无机盐应该预先准备溶剂体积的60％预先溶 解，方可避免泡沫的产生；二水合依地酸二钠，其添加浓度为0.38—0.40 wt％，根据发明人的大量实验得出，加入上述百分含量抗凝效果最优，该范 围以外将会使溶液凝聚；

(3)等上述原材料都完全溶解后，然后再向5L量杯中加满水至刻度线 处；

(4)开始测试其PH值和电导率。

优选地，加入所述TritonX-100，还加入ParmetolK40，对于有机物 ParmetolK40和TritonX-100，一个是起杀菌剂的作用，一个是起增溶剂的 作用；添加顺序是先添加TritonX-100后添加ParmetolK40。TritonX-100， (聚乙二醇辛基苯基醚)是一种非离子型表面活性剂(或称去污剂)，化学结构 式为：

本发明公开的全血样本检测前10倍浓缩液磷酸盐缓冲液，相较现有技术 具备如下优点：

1、配置过程不会产生大量泡沫；

2、浓缩液配置工艺简单操作，效率提高很多，易于控制其PH值和电导 率；

3、重复性在±0.5％之内，数据更加具有说服力；

4、更加精确的实现稀释液对血糖仪等仪器的测试所需；

5、便于生产中简单，直观的配置；

6、控制氯化钾的添加量，间接稳定的调节了制剂的渗透压，浓缩液的 渗透压可以控制在270-300smol/L之间，即电导率在42-44ms/cm之间，

7、加入0.55％左右的磷酸二氢钾、2.37％—2.38％的二水合磷酸氢二钠 制成的缓冲体系，PH值稳定的控制在6.8-7.3之间；

8、磷酸二氢钾，二水合磷酸氢二钠，氯化钾配料之前经过200℃、2小 时的干热处理，降低试剂内毒素负荷，大大减少临床发热反应的发生，提高 了产品质量；

9、硝酸钠，其添加浓度为0.19％—0.20wt％，此浓度调节溶液离子强 度和稀释液的电导率效果最佳。

具体实施方式

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实 施例或现有技术描述作简单地介绍，显而易见地，下面描述仅仅是本发明的 一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下， 还可以根据这些实施例获得其他的实施方式。

下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完 整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部 的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性 劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

阶段目标：

第一阶段设计浓缩液的整体配置工艺流程；

第二阶段验证并且建立最终的工艺流程；

第三阶段稀释浓缩液配置成稀释液，利用血糖仪等仪器进行校准对比实 验并正式投入生产。

最终目的：一种全血样本检测前10倍浓缩液磷酸盐缓冲液的最新配置 工艺

浓缩液磷酸盐缓冲液的制备实验仪器如下：

(1)搅拌器；

(2)数字温控器；

(3)PH计；

(4)电导率仪；

(5)5L大量杯；

(6)测试样品放置于一个100ml的小烧杯中；

(7)PH计和电导率仪校准后把它们的电极插入溶液中；

(8)分别按下PH计和电导率仪的“读数”按钮；

(9)等待1min-2min，记录下PH计上的读数和电导率上的读数；

(10)再稀释浓缩液，稀释10倍，稀释后的稀释液上机测试，与一些 原本就有的技术指标作对比分析。

引证：YYT 0456.1-2014血液分析仪用试剂第1部分：清洗液；YYT 0456.3-2014血液分析仪用试剂第3部分：稀释剂；ISO18113-2第2部分： 专业用体外诊断试剂；GBT 26124-2011临床化学体外诊断试剂盒标准(GB) 实施例一

1、装3000ml超纯水于5000ml量杯中(体积要校准，已校准)，把量杯 置于搅拌器下，让搅拌棒伸入到液面1/2处，设定搅拌频率为50HZ，开启 搅拌，然后依次往5000ml量杯中加入磷酸二氢钾0.55％，二水合磷酸氢二 钠2.37％，氯化钾1.50％，硝酸钠0.195％，EDTA-2Na(二水合物)0.38％， TritonX-100 0.052％，K40 0.1％，每次加入一种化学品都必须等其完全溶解 后再次加入下一个化学品，等上述化学品都完全溶解后，然后再往5L量杯 中加满至刻度线处(已校准过的刻度线)，继续搅拌，搅拌结束后溶液经除 菌过滤，即可得到所需要的浓缩液，

2、静置1h，即得灌装前溶液，所得浓缩液澄清透明无沉淀浑浊现象， 则测试其PH值和电导率，合格后，稀释成系统液做上机测试，取样检测， 连做三批；

3、结论：

实施例二

1、装3000ml超纯水于5000ml量杯中(体积要校准，已校准)，把量杯 置于搅拌器下，让搅拌棒伸入到液面1/2处，设定搅拌频率为55HZ，开启 搅拌，然后依次往5000ml量杯中加入磷酸二氢钾0.56％，二水合磷酸氢二 钠2.38％，氯化钾1.40％，硝酸钠0.197％，EDTA-2Na(二水合物)0.39％， TritonX-100 0.053％，K40 0.12％，每次加入一种化学品都必须等其完全溶 解后再次加入下一个化学品，等上述化学品都完全溶解后，然后再往5L量杯中加满至刻度线处(已校准过的刻度线)，继续搅拌，搅拌结束后溶液经 除菌过滤，即可得到所需要的浓缩液，

2、静置1h，即得灌装前溶液，所得浓缩液澄清透明无沉淀浑浊现象， 则测试其PH值和电导率，合格后，稀释成系统液做上机测试，取样检测， 连做三批，批号分别是20160620、20160621、20160622；

3、结论：

实施例三

1、装3000ml超纯水于5000ml量杯中(体积要校准，已校准)，把量杯 置于搅拌器下，让搅拌棒伸入到液面1/2处，设定搅拌频率为60HZ，开启 搅拌，然后依次往5000ml量杯中加入磷酸二氢钾0.57％，二水合磷酸氢二 钠2.39％，氯化钾1.55％，硝酸钠0.197％，EDTA-2Na(二水合物)0.36％， TritonX-100 0.055％，K40 0.13％，每次加入一种化学品都必须等其完全溶 解后再次加入下一个化学品，等上述化学品都完全溶解后，然后再往5L量杯中加满至刻度线处(已校准过的刻度线)，继续搅拌，搅拌结束后溶液经 除菌过滤，即可得到所需要的浓缩液，

2、静置1h，即得灌装前溶液，所得浓缩液澄清透明无沉淀浑浊现象， 则测试其PH值和电导率，合格后，稀释成系统液做上机测试，取样检测， 连做三批，，批号分别是20160701、20160702、20160703；

3、结论：

综上所述，本发明具备如下优点：

1、配置过程不会产生大量泡沫；

2、浓缩液配置工艺简单操作，效率提高很多，易于控制其PH值和电导 率；

3、重复性在±0.5％之内，数据更加具有说服力；

4、更加精确的实现稀释液对血糖仪等仪器的测试所需；

5、便于生产中简单，直观的配置；

6、控制氯化钾的添加量，间接稳定的调节了制剂的渗透压，浓缩液的 渗透压可以控制在270-300smol/L之间，即电导率在42-44ms/cm之间，

7、加入0.55％左右的磷酸二氢钾、2.37％—2.38％的二水合磷酸氢二钠 制成的缓冲体系，PH值稳定的控制在6.8-7.3之间；

8、磷酸二氢钾，二水合磷酸氢二钠，氯化钾配料之前经过200℃、2小 时的干热处理，降低试剂内毒素负荷，大大减少临床发热反应的发生，提高 了产品质量。

综上，虽然本发明公开了以上优选实施例，但上述优选实施例并不限制 本发明的范围，本领域的技术人员在不脱离本发明的精神和范围内，所做的 变动都属于本发明的保护范围。

Claims (5)

1.一种磷酸盐缓冲液，其特征在于，在5L所述磷酸盐缓冲液中，包括：

磷酸二氢钾，其添加浓度为0.55wt％；

二水合磷酸氢二钠，其添加浓度为2.37—2.38wt％；其中，所述缓冲液的PH值在6.8-7.3之间；

氯化钾，其添加浓度为1.50wt％，调节浓缩液稀释后的渗透压，使测试使用的血细胞处于渗透浓度在280～320mOsm的等渗环境中；

硝酸钠，其添加浓度为0.19％—0.20wt％；

二水合依地酸二钠，其添加浓度为0.38—0.40wt％；

TritonX-100，其添加浓度为0.05—0.055wt％，化学结构式为：

所述缓冲液的溶剂为水。

2.如权利要求1所述的磷酸盐缓冲液，其特征在于，所述缓冲液还包含ParmetolK40，为5-氯-2-甲基-1-异噻唑啉-3-酮和2-甲基-1-异噻唑啉-3-酮的混合物。

3.如权利要求1所述的磷酸盐缓冲液，其特征在于，所述溶剂为超纯水。

4.一种制备如权利要求1所述缓冲液的工艺方法，其特征在于，包含以下技术特征：

(1)装3L水于5L量杯中，将量杯置于磁力搅拌器上，让所述磁力搅拌器内的搅拌转子匀速转动；

(2)依次向5L量杯中加入磷酸二氢钾，二水合磷酸氢二钠，氯化钾，硝酸钠，二水合依地酸二钠，直至上述原材料完全溶解后搅拌下加入TritonX-100；

(3)等上述原材料都完全溶解后，然后再向5L量杯中加满水至刻度线处；

(4)开始测试其PH值和电导率，并将PH值稳定在6.8-7.3。

5.如权利要求4所述的工艺方法，其特征在于，加入所述TritonX-100，还加入ParmetolK40。