CN103674640A - 甲醛分子膜化缓冲液及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种甲醛分子膜化缓冲液及其制备方法，包括下列重量份的原料：多聚甲醛3.00-5.00、磷酸钠4.00-6.00、磷酸氢二钠?十二分子水21.80-21.90、磷酸二氢钠?二分子水6.10-6.20、聚乙烯醇缩乙醛1.10-1.20、山梨醇3.00-3.50、乙二醇1.00-2.00、丙三醇1.80-2.00、脂肪醇聚氧乙烯醚1.00-1.20、硬脂酸聚醚脂1.00-1.50、吐温-801.00-1.50、水51.70-51.80。本发明既能有效抑制单分子甲醛的挥发，又能为组织细胞染色提供衡定的pH值环境。
Description
技术领域
本发明涉及一种医学病理检验中，组织标本和体液细胞标本进行组织化学染色、免疫细胞染色前，组织和细胞固定用的膜化缓冲液。
背景技术
现在医学病理学组织检验中，不论组织标本或体液细胞标本在进行苏木素染色或巴氏染色前都要将标本固定，目前临床上使用的固定液无论是由医院病理科部门自制或是由生产商提供的，都是采用市场上采购的36%甲醛水溶液（俗称福尔马林）稀释后直接使用的。这种在市场采购的福尔马林中含8—14%甲醇作为甲醛单体聚集的抑制剂，当组织标本浸入这种直接稀释的福尔马林溶液中时，内含甲醇首先与标本中的表层组织细胞蛋白结合固化，因此降低了甲醛对组织的穿透力，进而影响组织内部的细胞固定，使固定后的标本组织松弛，不利于切片和染色；而且单分子甲醛的分子小，极易挥发，造成如手术室、胃镜室、病理室、解剖室的重度污染，严重损害医护人员的身体健康。最新研究显示，甲醛已成为一类致癌物质，极易引发鼻咽癌、鼻窦癌、血液病等。目前市场上也出现了一些环保型组织标本固定液，即以甲醇、乙醇等多元醇配制而成，是较好的不含甲醛固定液，但是这种固定液临床医学病理界并不认可，因为以甲醇为主的组织标本固定液，对标本组织的穿透力差，且固定的标本组织松弛，特别是大组织标本的内层非常松弛，影响切片和组织染色镜检。本发明提供的甲醛分子膜化缓冲液，较好的解决了上述产品的不足，并且为组织细胞染色提供了衡定的pH值环境。
发明内容
本发明的目的在于：为了解决临床病理学检验中，标本组织固定使用甲醛保存液存在的缺陷，提供一种既能有效抑制单分子甲醛的挥发，又能避免甲醛保存液在贮存运输过程中因温度变化易聚集沉淀，并为组织细胞染色提供衡定的pH值环境的甲醛分子膜化缓冲液。
本发明的目的可以通过以下技术方案实现：
甲醛分子膜化缓冲液，包括下列重量份的原料：
多聚甲醛
3.00-5.00
磷酸钠
4.00-6.00
磷酸氢二钠•十二分子水
21.80-21.90
磷酸二氢钠•二分子水
6.10-6.20
聚乙烯醇缩乙醛
1.10-1.20
山梨醇
3.00-3.50
乙二醇
1.00-2.00
丙三醇
1.80-2.00
脂肪醇聚氧乙烯醚
1.00-1.20
硬脂酸聚醚脂
1.00-1.50
吐温-80
1.00-1.50
水
51.70-51.80。
作为本发明的进一步优化，所述甲醛分子膜化缓冲液，包括下列重量份的原料：
多聚甲醛
4.00
磷酸钠
5.00
磷酸氢二钠•十二分子水
21.85
磷酸二氢钠•二分子水
6.08
聚乙烯醇缩乙醛
1.05
山梨醇
3.40
乙二醇
1.50
丙三醇
1.90
脂肪醇聚氧乙烯醚
1.10
硬脂酸聚醚脂
1.20
吐温-80
1.20
水
51.72。
一种制备权利所述甲醛分子膜化缓冲液的方法，包括以下步骤：
（1）将聚乙烯醇缩乙醛溶于山梨醇、乙二醇和丙三醇混合液中，再将混合液加入到多聚甲醛中抑制甲醛再多聚，得到多聚甲醛溶液；
（2）加入磷酸钠调节上述步骤中多聚甲醛溶液pH值为7.0；
（3）加入缓冲液磷酸盐；
（4）加入非离子表面活性剂；
（5）加入水，溶解后定容，低温超声，促进胶束浓度平衡，在空气-溶液界面铺展成单分子膜，得到的溶液密闭保存。
所述中缓冲液磷酸盐是由磷酸氢二钠•十二分子水、磷酸二氢钠•二分子水配制而成。
所述非离子表面活性剂是由脂肪醇聚氧乙烯醚、硬脂酸聚醚脂、吐温-80配制而成。
本发明的有益效果：
（1）本发明将聚乙烯醇缩乙醛溶解于山梨醇、乙二醇和丙三醇，作为二聚或三聚等十聚以下的多聚甲醛溶液的阻聚剂，既用于甲醛阻聚剂，同时增加了溶液中极性分子的浓度，由于极性分子的电性分布不均匀，一端带正电，一端带负电，形成偶极的静电和氢键作用等范德华力的协同效应，增加甲醛分子间摩擦力以阻止甲醛的挥发；
（2）非离子表面活性剂：脂肪醇聚乙氧烯醚、硬脂酸聚醚脂和吐温-80，在超声波的作用下，多种表面活性剂的疏水基和亲水基的双亲分子在水溶液中形成缔合体，即胶束，其浓度大于临界胶束浓度时，多种表面活性剂浓度在气-液表面形成一种动态平衡，这种脂-水介质的胶束在液体表面快速形成透明的球状胶束的分子膜，从而有效阻止甲醛挥发。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步详细描述。
实施例
甲醛分子膜化缓冲液，按下列重量份的准备原料：
多聚甲醛
4.00
磷酸钠
5.00
磷酸氢二钠•十二分子水
21.85
磷酸二氢钠•二分子水
6.08
聚乙烯醇缩乙醛
1.05
山梨醇
3.40
乙二醇
1.50
丙三醇
1.90
脂肪醇聚氧乙烯醚
1.10
硬脂酸聚醚脂
1.20
吐温-80
1.20
水
51.72。
将聚乙烯醇缩乙醛溶于山梨醇、乙二醇和丙三醇混合液中，搅拌均匀，加入多聚甲醛中抑制甲醛再多聚（大于十分子以上的甲醛聚集）；用磷酸钠调节上述甲醛溶液pH值为7.0；加入缓冲液（由磷酸氢二钠•十二分子水、磷酸二氢钠•二分子水配制的）磷酸盐，搅拌均匀；加入非离子表面活性剂（由脂肪醇聚氧乙烯醚、硬脂酸聚醚脂、吐温-80配制而成），加入水，溶解后定容，低温超声，促进胶束浓度平衡，在空气-溶液界面铺展成单分子膜，得到的溶液密闭保存备用。
本发明将聚乙烯醇缩乙醛溶解于多元醇中（山梨醇、乙二醇、丙三醇），作为二聚或三聚等十聚以下的多聚甲醛溶液的阻聚剂，不采用市售福尔马林（36—40%甲醛溶液，含有8—14%甲醇作为甲醛阻聚剂），因含有甲醇的福尔马林配制甲醛固定剂在固定组织时，甲醇首先与组织蛋白结合，阻止甲醛浸入，造成固定的组织标本外紧内松，影响后续的切片和染色。而本发明首先采用的低浓度大分子多元醇既用于甲醛阻聚剂聚乙烯醇缩乙醛溶剂，同时增加溶液中极性分子的浓度，由于极性分子的电性分布不均匀，一端带正电，一端带负电，形成偶极的静电和氢键作用等范德华力的协同效应，增加甲醛分子间摩擦力以阻止甲醛的挥发。
本发明甲醛挥发性测定：酚试剂法。
原理：甲醛与酚试剂反应生成嗪，嗪在酸性溶液中被高铁离子氧化生成蓝绿色化合物。在660nm波长比色吸光度与甲醛浓度正相关。
方法：按国家标准GB/T6324.2-2004测定挥发性有机化工液体产品在水浴上蒸发后干残渣测定的通用方法。取20只大口的5ml反应管，分成两排，每排10只。第1排加10%甲醛10ml；第2排加本发明甲醛分子膜化缓冲液10ml。37℃水浴24小时。测定各管挥发后的减少的百分含量。结论：两组产品的挥发性有显著性差异。见表1
表1
本发明非离子表面活性剂脂肪醇聚乙氧烯醚（AES）、硬脂酸聚醚脂（SG-100）和吐温-80，在超声波的作用下，多种表面活性剂的疏水基和亲水基的双亲分子在水溶液中形成缔合体，即胶束。其浓度大于临界胶束浓度（cmc）时，多种表面活性剂浓度在气-液表面形成一种动态平衡，这种脂-水介质的胶束在液体表面快速形成透明的球状胶束的分子膜，从而有效阻止甲醛挥发。
本发明甲醛分子膜化缓冲液临界胶束浓度的测定（cmc）。
方法：光散射法：将本发明的甲醛分子膜化液进行吸收波长自动扫描，确定最大吸收峰为500nm。利用500nm下散射光强度与溶液浓度中的突变点测定（cmc）。为：2.4×10-5mol/L。
结论：多种非离表面活性剂的协同作用临界胶束浓度小，达到平衡（分子膜化胶束）速度快的特点。
Claims (5)
1.甲醛分子膜化缓冲液，其特征在于，包括下列重量份的原料：
多聚甲醛
3.00-5.00
磷酸钠
4.00-6.00
磷酸氢二钠•十二分子水
21.80-21.90
磷酸二氢钠•二分子水
6.10-6.20
聚乙烯醇缩乙醛 1.10-1.20
山梨醇
3.00-3.50
乙二醇
1.00-2.00
丙三醇
1.80-2.00
脂肪醇聚氧乙烯醚
1.00-1.20
硬脂酸聚醚脂
1.00-1.50
吐温-80
1.00-1.50
水
51.70-51.80。
2.根据权利要求1所述的甲醛分子膜化缓冲液，其特征在于，包括下列重量份的原料：
多聚甲醛
4.00
磷酸钠
5.00
磷酸氢二钠•十二分子水
21.85
磷酸二氢钠•二分子水
6.08
聚乙烯醇缩乙醛
1.05
山梨醇
3.40
乙二醇
1.50
丙三醇
1.90
脂肪醇聚氧乙烯醚
1.10
硬脂酸聚醚脂
1.20
吐温-80
1.20
水
51.72。
3.一种制备权利要求1或2所述甲醛分子膜化缓冲液的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将聚乙烯醇缩乙醛溶于山梨醇、乙二醇和丙三醇混合液中，再将混合液加入到多聚甲醛中抑制甲醛再多聚，得到多聚甲醛溶液；
（2）加入磷酸钠调节上述步骤（1）中多聚甲醛溶液pH值为7.0；
（3）加入缓冲液磷酸盐；
（4）加入非离子表面活性剂；
（5）加入水，溶解后定容，低温超声，促进胶束浓度平衡，在空气-溶液界面铺展成单分子膜，得到的溶液密闭保存。
4.根据权利要求3所述的甲醛分子膜化缓冲液制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中缓冲液磷酸盐是由磷酸氢二钠•十二分子水、磷酸二氢钠•二分子水配制而成。
5.根据权利要求3所述的甲醛分子膜化缓冲液制备方法，其特征在于，所述步骤（4）中非离子表面活性剂是由脂肪醇聚氧乙烯醚、硬脂酸聚醚脂、吐温-80配制而成。
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