CN102706861A - 酸性磷酸酶活性测定试剂 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种酸性磷酸酶活性测定试剂，其特征在于：该试剂盒包括如下浓度范围的各组分：缓冲液（pH4.0-5.0）0.05~0.5M，磷酸萘酚1~100mm，固红TR 1~100mm，去干扰剂1~100mm，稳定剂0.1~10g/L，激活剂0.1~10g/L，防腐剂0.1~10g/L。本发明的试剂盒具有准确度、精密度较好，稳定性好，抗胆红素干扰能力强，能满足临床检验要求的优点。

Description

酸性磷酸酶活性测定试剂

技术领域

本发明涉及酸性磷酸酶活性测定试剂盒技术领域。

背景技术

前列腺癌是主要危及老年男性的恶性肿瘤，在欧美国家其发病率居男性恶性肿瘤第一位，死亡率仅次于肺癌，占第二位。我国居民前列腺癌的患病率低于国外，但随着我国人口的老龄化及居民生活水平的提高，发病率也呈增长趋势。在美国，平均每六个老年人中就有一个人患前列腺癌。

前列腺酸性磷酸酶是男性血清酸性磷酸酶（ACP）的主要来源，是只由前列腺上皮细胞溶酶体产生的一种同工酶，是一种糖蛋白，有两个亚基构成，相对分子量约为1,000,000，主要分布在精液和尿中，血清中含量较低，具有组织特异性，一度被认为是前列腺癌特异性最敏感的肿瘤标志物，广泛用于前列腺诊断和治疗监控。近来的研究表明，它并不是绝对的组织特异性标志物。在临床上，前列腺炎在恶性和良性病变之间重叠较大，不宜单独作为前列腺癌早期诊断的有效筛选指标。但将其用以联检，结合前列腺特异抗原密度测量、直肠指诊和直肠超等手段，能明显提高前列腺癌筛查的灵敏度。

目前实验室多采用以磷酸萘酚为底物，经ACP（酸性磷酸酶）水解后释放萘酚，再与固红TR盐发生偶氮化反应，通过在405nm处监测偶氮化合物生成的速率进行ACP动力学法测定，由于胆红素等在400nm处有吸收，因此对检测会产生严重干扰。

发明内容

本发明针对现有技术不足，提供一种准确度、精密度较好，稳定性好，抗胆红素干扰能力强，能满足临床检验要求的酸性磷酸酶活性测定试剂盒。

为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案为：酸性磷酸酶活性测定试剂，该试剂盒包括如下浓度范围的各组分：

本发明试剂盒可以是单试剂试剂盒，做成单试剂，该试剂盒包括如下浓度范围的各组分：

上述单试剂的试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以制成液体试剂，直接使用。

发明试剂盒还可以配成双试剂试剂盒，更有利于消除胆红素干扰，该试剂盒包括如下浓度范围的各组分：

试剂1：

试剂2：

双试剂的配方不仅限于上述配方，其中试剂2的成分：磷酸萘酚，固红TR，激活剂中的一种或者两种可以放在试剂1；试剂1中的成分：去干扰剂，稳定剂中的一种也可以放在试剂2，如此可形成多种配方，不在此一一详述。试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以制成液体试剂，直接使用。

发明试剂盒还可以配成如下三试剂的试剂盒，不但更有利于消除胆红素干扰，还更利于试剂的稳定，该试剂盒包括如下浓度范围的各组分：

试剂1：

试剂2：

磷酸萘酚            1-100mM

防腐剂              0.1～10g/L；

试剂3：

固红TR             1-100mM

激活剂             0.1～10g/L

防腐剂             0.1～10g/L。

上述三试剂的配方不仅限于上述配方，其中试剂1的成分：去干扰剂、稳定剂可以放在试剂2或试剂3中；试剂2的成分：磷酸萘酚可以放在试剂1或试剂3中；试剂3的成分：固红TR、激活剂可以放在试剂1或试剂2中；如此可形成多种配方，不在此一一详述。试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以制成液体试剂，直接使用。

本发明上述的各种试剂盒配置，即采用常规的将各组分与水混合均匀，形成上述试剂配方的试剂盒。

本发明上述各种试剂盒中的缓冲液的pH值可以是4.0~5.0，可以是甘氨酸–盐酸缓冲液、邻苯二甲酸–盐酸缓冲液、磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液，柠檬酸–柠檬酸钠缓冲液、乙酸–乙酸钠缓冲液、2-(N-吗啡啉）乙磺酸缓冲液等中的一种，优选2-(N-吗啡啉）乙磺酸缓冲液。

本发明中的激活剂为曲拉通100（曲拉通X-100）、1，5-戊二醇、1,10-癸二醇等中的一种或几种。

本发明中的稳定剂为吐温20、吐温80、布里杰-35（Brij-35）（非离子表面活性剂）、甘油、乙二醇、BSA等中的一种或几种。

本发明中的去干扰剂为钒酸盐（钒酸钠、钒酸钾等）、亚硝酸盐（如钾、钠盐）、亚铁氰化钾、高铁氰化钾等中的一种或几种。

本发明中的磷酸萘酚包括萘酚AS-BI磷酸二钠、萘酚AS-MX磷酸二钠、磷酸萘酚AS-E、磷酸萘酚AS-BS、萘酚AS-TR磷酸盐等中的一种或几种。

本发明的防腐剂为叠氮钠或proclin系列防腐剂（如Proclin300）等。

本发明的优点和有益效果：

本发明的试剂盒采用在酸性条件下，通过去干扰剂的氧化作用将样本中存在的胆红素氧化成胆绿素，从而消除了其在405nm检测波长处的干扰。

具体实施方式

以下是本发明的具体实施例，对本发明的技术方案作进一步描述，但本发明并不限于这些实施例。本发明试剂盒均采用行业常规方法配置，具体过程不再详述。

本发明的检测原理如下：ɑ-磷酸萘酚经ACP水解后释放出ɑ-萘酚和磷酸，ɑ-萘酚再与固红TR盐发生偶氮化反应生成重氮化合物，重氮化合物在405nm处有特异吸收，通过测定在405nm处吸光度的变化速率来计算ACP的活性。

实施例1（单试剂）

试剂的配制方法为常规方法，即所述组分加入蒸馏水后混合搅匀即可。

本发明试剂盒测定样本中的酸性磷酸酶的测试条件如下：温度：30-37℃；比色杯光径为1.0cm；检测主波长405nm，副波长700nm。

应用本发明酸性磷酸酶测定试剂盒测定样本中酸性磷酸酶的方法如下：样品（校准管以校准品做样品）加R混匀，30-37℃孵育5min后，测量4min内吸光度的变化。其中样本用量20μl，试剂用量200μl。

本发明试剂盒测定样本中酸性磷酸酶活性按以下公式进行计算：

实施例2（双试剂）

试剂1：

试剂2：

实施例2试剂盒的制备方法同实施例1。

本发明试剂盒测定样本中的酸性磷酸酶的测试条件如下：温度：30-37℃；比色杯光径为1.0cm；检测主波长405nm，副波长700nm。

应用本发明酸性磷酸酶测定试剂盒测定样本中酸性磷酸酶的方法如下：样品（校准管以校准品做样品）加R1混匀，30-37℃孵育3-5min后，立即加入R2混匀，30-37℃反应2min后，连续监测1-3min内吸光度的变化。其中样本用量30μl，试剂1用量200μl，试剂2用量100ul。

本发明试剂盒测定样本中酸性磷酸酶活性按以下公式进行计算：

实施例3（三试剂）

    试剂1：

试剂2：

磷酸萘酚AS-BS      10mM

Proclin300         0.1g/L；

试剂3：

固红TR             10mM

1,10-癸二醇        7g/L

叠氮钠             1g/L；

实施例3试剂盒的制备方法同实施例1。

本发明试剂盒测定样本中的酸性磷酸酶的测试条件如下：温度：30-37℃；比色杯光径为1.0cm；检测主波长405nm，副波长700nm。

应用本发明酸性磷酸酶测定试剂盒测定样本中酸性磷酸酶的方法如下：样品（校准管以校准品做样品）加R1混匀，30-37℃孵育3-5min后，立即加入R2，30-37℃孵育60s后，再加入R3，30-37℃孵育90s后，连续监测1-2min内吸光度的变化。其中样本用量30μl，试剂1用量180μl，试剂2用量20ul，试剂3用量100ul。

本发明试剂盒测定样本中酸性磷酸酶活性按以下公式进行计算：

对照例4（双试剂，不使用去干扰剂）

试剂1：

柠檬酸–柠檬酸钠缓冲液缓冲液（pH4.0）       0.05M

甘油             10g/L

叠氮钠           1g/L；

试剂2：

实施例2试剂盒的制备方法同实施例1。

本发明试剂盒测定样本中的酸性磷酸酶的测试条件如下：温度：30-37℃；比色杯光径为1.0cm；检测主波长405nm，副波长700nm。

应用本发明酸性磷酸酶测定试剂盒测定样本中酸性磷酸酶的方法如下：样品（校准管以校准品做样品）加R1混匀，30-37℃孵育3-5min后，立即加入R2混匀，30-37℃反应2min后，连续监测1-3min内吸光度的变化。其中样本用量30μl，试剂1用量200μl，试剂2用量100ul。

本发明试剂盒测定样本中酸性磷酸酶活性按以下公式进行计算：

上述实施例和对比例所用的原料，除另有说明外，均为市售工业品。

选择高低2个浓度的新鲜血清（无溶血、黄疸和脂血）作为基础样本。

（1）对照血清

用0.1N的NaOH和蒸馏水分别以1∶20稀释至基础样本中。

（2）干扰血清

在弱光下用0.1N的NaOH配制4g/L非结合胆红素储存液，用蒸馏水配制5.76g/L结合胆红素储存液，分别以1∶20稀释至基础样本中。

将实施例1-3及对照例4按各自相应的参数对配制的样本进行检测，结果如表1所示：

表1

以上数据明显显示，本发明实施例1-3配制的试剂能较好的去除胆红素对检测的干扰。

Claims (10)

1.一种酸性磷酸酶活性测定试剂，其特征在于：该试剂盒包括如下浓度范围的各组分：

2.一种权利要求1所述的酸性磷酸酶活性测定试剂，其特征在于：该试剂盒为单试剂试剂盒，该单试剂试剂盒包括如下浓度范围的各组分：

3.一种权利要求1所述的酸性磷酸酶活性测定试剂，其特征在于：该试剂盒为双试剂试剂盒，该双试剂试剂盒包括如下浓度范围的各组分：

试剂1：

试剂2：

4.一种权利要求1所述的酸性磷酸酶活性测定试剂，其特征在于：该试剂盒为三试剂试剂盒，该三试剂试剂盒包括如下浓度范围的各组分：

试剂1：

试剂2：

磷酸萘酚         1-100mM

防腐剂           0.1～10g/L；

试剂3：

固红TR          1-100mM

激活剂          0.1～10g/L

防腐剂          0.1～10g/L。

5.根据权利要求1-4任一权利要求所述的酸性磷酸酶活性测定试剂，其特征在于：所述的缓冲液为甘氨酸–盐酸缓冲液、邻苯二甲酸–盐酸缓冲液、磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液，柠檬酸–柠檬酸钠缓冲液、乙酸–乙酸钠缓冲液、2-(N-吗啡啉）乙磺酸缓冲液中的一种。

6.根据权利要求1-4任一权利要求所述的酸性磷酸酶活性测定试剂，其特征在于：所述的激活剂为曲拉通100、1，5-戊二醇、1,10-癸二醇中的一种或几种。

7.根据权利要求1-4任一权利要求所述的酸性磷酸酶活性测定试剂，其特征在于：所述的稳定剂为吐温20、吐温80、布里杰-35、甘油、乙二醇、BSA中的一种或几种。

8.根据权利要求1-4任一权利要求所述的酸性磷酸酶活性测定试剂，其特征在于：所述的去干扰剂为钒酸盐、亚硝酸盐、亚铁氰化钾、高铁氰化钾中的一种或几种。

9.根据权利要求1-4任一权利要求所述的酸性磷酸酶活性测定试剂，其特征在于：所述的磷酸萘酚包括萘酚AS-BI磷酸二钠、萘酚AS-MX磷酸二钠、磷酸萘酚AS-E、磷酸萘酚AS-BS、萘酚AS-TR磷酸盐中的一种或几种。

10.根据权利要求1-4任一权利要求所述的酸性磷酸酶活性测定试剂，其特征在于：所述的防腐剂为叠氮钠或proclin系列防腐剂。