CN109613237A - 一种胱抑素c检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种胱抑素C检测试剂盒,包括R1试剂和R2试剂,其特征在于,所述R1试剂由缓冲液、稳定剂、表面活性剂、防腐剂、反应加速剂组成,所述R2试剂由缓冲液a、稳定剂a、表面活性剂a、防腐剂a、反应加速剂a组成,本发明提供一种灵敏且稳定的胱抑素C检测试剂盒,本发明使用方便,操作简单;参与偶联反应的成分都很稳定,不会引起内外源物质的干扰,稳定性好,可以长时间使用。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域,具体是一种胱抑素C检测试剂盒。
背景技术
肾脏疾病是临床上一种常见的疾病,迄今为止,早诊断、早治疗以及逆转损伤的肾功能是唯一能阻止肾脏疾病恶化的途径。临床评价肾脏疾病进展和严重程度一般以肾功能为参考,以肾小球滤过率(GFR)作为反映肾功能最重要的指标。
胱抑素C,是一种半胱氨酸蛋白酶抑制剂,且是一种低分子量、碱性非糖化蛋白质,其分子量为13.3KD,由122个氨基酸残基组成,可由机体所有有核细胞产生,产生率恒定。循环中的胱抑素C仅经肾小球滤过而被清除,为反映肾小球滤过率变化的内源性标志物,并在近曲小管重吸收,但重吸收后被完全代谢分解,不返回血液。因此,可以通过血液中胱抑素C的浓度来反映肾小球的过滤速率,而且,胱抑素C血清浓度不受敏症过程、性别、年龄和肌肉重量影响,是反映肾小球滤过率变化的理想同源性标志物,并逐步发展为评估肾功能的一项敏感性好、特异性高的指标。
但是由于血清胱抑素C的含量很低,其测定方法需要较高的灵敏度和特异性,由最初免疫电泳的定性检测,到放射免疫、荧光免疫和酶免疫的定量检测,以及到免疫比浊的自动化检测,发展十分迅速。单向免疫扩散(SRID)、放射免疫测定法(RIA)、荧光免疫测定发(FIA)、时间分辨荧光免疫测定法(TRFIA)、酶联免疫测定法(ELISA)、胶乳颗粒法、颗粒增强透射免疫比浊法(PETIA)、颗粒增强散射免疫比浊法(PENIA)。目前,胶乳颗粒增强比浊法是最为普遍通用的方法,但是胶乳颗粒增强比浊法存在灵敏度较低,精密度、准确性、线性范围等方面的问题,在临床应用上存在着局限性。因此,本领域技术人员提供了一种胱抑素C检测试剂盒,以解决上述背景技术中提出的问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种胱抑素C检测试剂盒,以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的,本发明提供如下技术方案:
一种胱抑素C检测试剂盒,包括R1试剂和R2试剂,其特征在于,所述R1试剂由缓冲液、稳定剂、表面活性剂、防腐剂、反应加速剂组成,所述R2试剂由缓冲液a、稳定剂a、表面活性剂a、防腐剂a、反应加速剂a组成。
作为本发明进一步的方案:所述R1试剂包括以下浓度的物质:三氨基甲烷3g/L、氯化钠9g/L、一零一1g/L、一零八1g/L、一一七55g/L、一一八1ml/L;
所述R2试剂包括以下浓度的物质:三氨基甲烷3g/L、氯化钠9g/L、一零一1g/L、一零八1g/L、一一七55g/L、抗胱抑素C血清1ml/L。
作为本发明再进一步的方案:胱抑素C检测试剂盒的制备方法,包括以下步骤,以配置1L R1试剂为例:
步骤一:按照R1试剂的原料通过工具称取三氨基甲烷3g/L、氯化钠9g/L、一零一1g/L、一零八1g/L、一一七55g/和一一八1ml/L;
步骤二:对步骤一中称取的原料进行人工复核;
步骤三:对步骤二中复核的原料进行溶解操作,制得混合溶液;
步骤四:对步骤三中的混合溶液调PH值至7.5±0.2(室温),加去离子水补足至1L,离子水搅拌加入,得到1L的混合溶液;
步骤五:对步骤四中称取1L的混合溶液用工艺用水稀释至1.0公斤,用磁力搅拌器2-3档搅拌60±15分钟,制得溶液,并且通过PH剂确认溶液PH值在7.5±0.2之间;
步骤六:对步骤五制得的溶液进行包装,制得所述胱抑素C检测试剂盒。
作为本发明再进一步的方案:步骤二中的溶解操作包括以下步骤:
步骤a:在1升容器内加水0.8公斤,加入三氨基甲烷,用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解,制得溶液;
步骤b:在步骤a制得的溶液中加入一零一,用磁力搅拌器2-3档搅拌均匀,制得溶液;
步骤c:在步骤b制得的溶液中加入一零八,用磁力搅拌器2-3档搅拌溶解,制得溶液;
步骤d:在步骤c制得溶液中加入氯化钠,用磁力搅拌器2-3档搅拌使其溶解,制得缓冲液;
步骤e:将步骤d制得的缓冲液1倒入一个烧杯内,加入一一七,用磁力搅拌器2-3档搅拌制得混合溶液。
作为本发明再进一步的方案:溶解过程中各个步骤中磁力搅拌器搅拌的时间均为30±3分钟。
作为本发明再进一步的方案:所述R2试剂的制备步骤与R1试剂的制备步骤相同。
作为本发明再进一步的方案:步骤一中的称取工具为:灵敏度0.1mg的AL104精密电子天平、灵敏度10mg的TC30K型精密电子天平和灵敏度10mg为T1000Y型电子天平。
作为本发明再进一步的方案:步骤五中1.0公斤的水通过电子秤进行称量
与现有技术相比,本发明的有益效果是:
本发明提供一种灵敏且稳定的胱抑素C检测试剂盒,本发明使用方便,操作简单;参与偶联反应的成分都很稳定,不会引起内外源物质的干扰,稳定性好,可以长时间使用,为了实现上述的试剂改良目的,对试剂生产流程和试剂进行改进,使试剂的灵敏度,重复性,线性,稳定性都有了很大的提高。
附图说明
图1为一种胱抑素C检测试剂盒的生产工艺流程示意图。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明的技术方案作进一步详细地说明。
实施例1:
一种胱抑素C检测试剂盒,包括R1试剂和R2试剂,其特征在于,所述R1试剂由缓冲液、稳定剂、表面活性剂、防腐剂、反应加速剂组成,所述R2试剂由缓冲液a、稳定剂a、表面活性剂a、防腐剂a、反应加速剂a组成。
所述R1试剂包括以下浓度的物质:三氨基甲烷3g/L、氯化钠9g/L、一零一1g/L、一零八1g/L、一一七55g/L、一一八1ml/L;
所述R2试剂包括以下浓度的物质:三氨基甲烷3g/L、氯化钠9g/L、一零一1g/L、一零八1g/L、一一七55g/L、抗胱抑素C血清1ml/L。
一种胱抑素C检测试剂盒的制备方法,包括以下步骤,以配置1L R1试剂为例:
步骤一:按照R1试剂的原料通过工具称取三氨基甲烷3g/L、氯化钠9g/L、一零一1g/L、一零八1g/L、一一七55g/和一一八1ml/L;
步骤二:对步骤一中称取的原料进行人工复核;
步骤三:对步骤二中复核的原料进行溶解操作,制得混合溶液;
步骤四:对步骤三中的混合溶液调PH值至7.5±0.2(室温),加去离子水补足至1L,离子水搅拌加入,得到1L的混合溶液;
步骤五:对步骤四中称取1L的混合溶液用工艺用水稀释至1.0公斤,用磁力搅拌器2-3档搅拌60±15分钟,制得溶液,并且通过PH剂确认溶液PH值在7.5±0.2之间;
步骤六:对步骤五制得的溶液进行包装,制得所述胱抑素C检测试剂盒。
实施例2:
一种胱抑素C检测试剂盒中R1试剂和R2试剂中成分及相应含量更换为:
所述R1试剂包括以下浓度的物质:三氨基甲烷5g/L、氯化钠9g/L、一零一1g/L、一零八1g/L、一一七55g/L、一一八4ml/L;
所述R2试剂包括以下浓度的物质:三氨基甲烷3g/L、氯化钠9g/L、一零一1g/L、一零八1g/L、一一七32g/L、抗胱抑素C血清3ml/L。
本发明通过西门子1200型全自动生化分析仪进行试剂盒性能研究,
实验一
实验方法
用纯水测试试剂(盒),在测试主波长546nm下,记录测试启动时的吸光度(A1)和约5分钟(T)后的吸光度(A2),A2测试结果即为试剂空白吸光度测定值。
实验结果
结论:三个批号的胱抑素试剂盒分别在西门子1200生化仪测定,实验结果符合试剂空白吸光度:A546nm(1cm)≤1.5。
实验二
测定理论浓度约1.0mg/L样本,
实验结果
结论:三个批号的胱抑素试剂盒分别在西门子1200生化仪测定,实验结果表明测定理论值在1.0mg/L样品,吸光度变化要求>0.03A。
实验三
在重现性条件下,用质控品测试试剂盒。测试10次,分别计算测量值的平均值和标准差,按公式(2)计算变异系数(CV),应符合产品技术要求
实验结果
结论:在高低两个不同浓度水平的质控血清测试下,使用西门子1200生化分析仪测得的批内不精密度均小于8%,属于可接受范畴。
上面对本发明的较佳实施方式作了详细说明,但是本发明并不限于上述实施方式,在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内,还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。
Claims (8)
1.一种胱抑素C检测试剂盒,包括R1试剂和R2试剂,其特征在于,所述R1试剂由缓冲液、稳定剂、表面活性剂、防腐剂、反应加速剂组成,所述R2试剂由缓冲液a、稳定剂a、表面活性剂a、防腐剂a、反应加速剂a组成。
2.根据权利要求1所述的一种胱抑素C检测试剂盒,其特征在于,所述R1试剂包括以下浓度的物质:三氨基甲烷3g/L、氯化钠9g/L、一零一1g/L、一零八1g/L、一一七55g/L、一一八1ml/L;
所述R2试剂包括以下浓度的物质:三氨基甲烷3g/L、氯化钠9g/L、一零一1g/L、一零八1g/L、一一七55g/L、抗胱抑素C血清1ml/L。
3.根据权利要求1所述的一种胱抑素C检测试剂盒的制备方法,其特征在于,包括以下步骤,以配置1L R1试剂为例:
步骤一:按照R1试剂的原料通过工具称取三氨基甲烷3g/L、氯化钠9g/L、一零一1g/L、一零八1g/L、一一七55g/和一一八1ml/L;
步骤二:对步骤一中称取的原料进行人工复核;
步骤三:对步骤二中复核的原料进行溶解操作,制得混合溶液;
步骤四:对步骤三中的混合溶液调PH值至7.5±0.2(室温),加去离子水补足至1L,离子水搅拌加入,得到1L的混合溶液;
步骤五:对步骤四中称取1L的混合溶液用工艺用水稀释至1.0公斤,用磁力搅拌器2-3档搅拌60±15分钟,制得溶液,并且通过PH剂确认溶液PH值在7.5±0.2之间;
步骤六:对步骤五制得的溶液进行包装,制得所述胱抑素C检测试剂盒。
4.根据权利要求3所述的一种胱抑素C检测试剂盒的制备方法,其特征在于,步骤二中的溶解操作包括以下步骤:
步骤a:在1升容器内加水0.8公斤,加入三氨基甲烷,用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解,制得溶液;
步骤b:在步骤a制得的溶液中加入一零一,用磁力搅拌器2-3档搅拌均匀,制得溶液;
步骤c:在步骤b制得的溶液中加入一零八,用磁力搅拌器2-3档搅拌溶解,制得溶液;
步骤d:在步骤c制得溶液中加入氯化钠,用磁力搅拌器2-3档搅拌使其溶解,制得缓冲液;
步骤e:将步骤d制得的缓冲液1倒入一个烧杯内,加入一一七,用磁力搅拌器2-3档搅拌制得混合溶液。
5.根据权利要求4所述的一种胱抑素C检测试剂盒的制备方法,其特征在于,溶解过程中各个步骤中磁力搅拌器搅拌的时间均为30±3分钟。
6.根据权利要求1所述的一种胱抑素C检测试剂盒,其特征在于,所述R2试剂的制备步骤与R1试剂的制备步骤相同。
7.根据权利要求3所述的一种胱抑素C检测试剂盒的制备方法,其特征在于,步骤一中的称取工具为:灵敏度0.1mg的AL104精密电子天平、灵敏度10mg的TC30K型精密电子天平和灵敏度10mg为T1000Y型电子天平。
8.根据权利要求3所述的一种胱抑素C检测试剂盒的制备方法,其特征在于,步骤五中1.0公斤的水通过电子秤进行称量。
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