CN1265195A - 用于高效细胞分类的流动细胞光度计管嘴 - Google Patents

用于高效细胞分类的流动细胞光度计管嘴 Download PDF

Info

Publication number
CN1265195A
CN1265195A CN98807567A CN98807567A CN1265195A CN 1265195 A CN1265195 A CN 1265195A CN 98807567 A CN98807567 A CN 98807567A CN 98807567 A CN98807567 A CN 98807567A CN 1265195 A CN1265195 A CN 1265195A
Authority
CN
China
Prior art keywords
ozzle
sperm
ratio
transitional region
major axis
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN98807567A
Other languages
English (en)
Inventor
W·伦斯
G·R·维尔希
L·A·约翰逊
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
US Government
US Department of Agriculture USDA
Original Assignee
US Government
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by US Government filed Critical US Government
Publication of CN1265195A publication Critical patent/CN1265195A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume, or surface-area of porous materials
    • G01N15/10—Investigating individual particles
    • G01N15/14—Electro-optical investigation, e.g. flow cytometers
    • G01N15/1425—Electro-optical investigation, e.g. flow cytometers using an analyser being characterised by its control arrangement
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume, or surface-area of porous materials
    • G01N15/10—Investigating individual particles
    • G01N15/14—Electro-optical investigation, e.g. flow cytometers
    • G01N15/1404—Fluid conditioning in flow cytometers, e.g. flow cells; Supply; Control of flow
    • G01N15/149—
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume, or surface-area of porous materials
    • G01N15/10—Investigating individual particles
    • G01N15/14—Electro-optical investigation, e.g. flow cytometers
    • G01N2015/1497—Particle shape

Abstract

一种分类管嘴(1),其具有两个横截面为椭圆的锥形区域(8、9),这种管嘴能够定向并分类不对称或大部分扁平的细胞。这种管嘴(1)特别适用于在细胞分类器中分类可存活的阳(Y)和阴(X)精子群。

Description

用于高效细胞分类的流动细胞光度计管嘴
                    发明背景
                    发明领域
实践已经证明，利用流动细胞计量和分类法将精液物理分离成带有精子群的纯化的X-和Y-染色体对于人、牛、猪、羊和兔的性别预选是行之有效的。
分类过程的成功取决于分析精子中的DNA含量的精度和效率。精子的高度溶解流动细胞计量法DNA分析受到其荧光的不均匀辐射的妨碍。由于精子头的平的形状、染色质的密实和高折射率，来自精子边缘的荧光比来自精子的平面侧的荧光亮得到多(Gledhill等，J.CellPhysiol 87期367-376页(1976)；Johnson等，细胞光度计7期，268-273页(1986)；Pinkel等，细胞光度计3期1-9页(1982))。这一事实与无规则定向一起导致了在一样品内的荧光的广泛分布，这种分布中隐藏着具有不同的DNA含量的特定的子群。对于这个问题的一种解决方案是采用一种落射显微照射流动细胞光度计，这种细胞光度计采用了共轴流动的特性。然而，这种系统一般不适用于细胞分类。结合DNA分析和分类的唯一的方案是使用一种正交流动细胞光度计/细胞分类器来收集仅来自适合定向的细胞的荧光(如上述Johnson等和Pinkel等文件)。在这种正交系统中，采用一种90°荧光检测仪用来检测适合定向的精子。一个明亮的信号表示精子的明亮的边缘相对于该90°检测仪有效地定向，因此，平面侧朝向激光束。在该细胞分类器上附加一前荧光检测器(0°)，以便从与激光束相对的平面收集荧光。从适合定向的精子的平面侧收集的向前的荧光信号是DNA含量的精确的测量(如上述Johnson等和Pinkel等文件)。
只有在满足如下的三个准则时改进的高效分类对精子才能是有价值的，这三个准则是：
1)不降低DNA测量的精度(保持90％的纯度)。
2)分类的稳定性不降低(调节细胞分类器时不浪费时间)。
3)可以重新获得足够的精子，使得它们能在玻璃试管中繁殖和人工授精。
本发明涉及一种新颖的管嘴，其设计成可以独立于外层流速度和样品流量来对大部分精子定向并分类。
                    现有技术的描述
在一般的细胞分类器中，精子(细胞)无规则定向。为了将精子分性，人们已经对细胞分离器进行了改进，用斜面针代替了样品注射针(Dean等，Biophys.J.23期7-13页(1978)；Fulwyer，J.Histochem.Cytochem 25期：781-783页(1977)；如上述Johnson等；如上述Pinkel等；Stovel等，Biophys.J.23期1-5页(1978)；Welch等，Cytometry17(辅7)：74期(1994))。这种斜面针迫使更大比例的精子在适合的方向上穿过激光束，因为它将圆柱形样品流重新成形为一薄带。这种斜面针有助于使精子定向，特别是使精子头定向，例如无尾精子。离开斜面针的样品核成为一带状，该带对精子施加定向力。然而，只有当样品流较窄时这种带才存在；这就是说，在低样品压力并伴随低样品流量的情况下才存在。这些条件对于高效的精子分类是不利的。而且，由于使用斜面针而带来的定向的改进对于存活的并且能动的精子来说并不那么明显。采用这种系统时，只有20-40％完整的可存活的精子被正确定向(Johnson，Reprod.Fertil.Dev.7：893-903页(1995))。这意味着60％至80％的检测到的精子经过分析后发现不适合于DNA分析。对完整并可存活的细胞进行分类的能力与改进的定向效率的结合导致了更高的分类效率。
Kachel等(J.Histochem.Cytochem.25：774-780(1997))公开了一种用于将扁平颗粒(固定的鸡红血球)在一显微镜上定向的非对称Plexiglas室。Kachel等建议，施加流体动力聚焦力所必需的最简单的流动通路包括一管，该管具有一椭圆形横截面，并终止于一椭圆形出口，该椭圆出口的长轴与构成椭圆管的横截面的长轴成直角。并没有建议将这种装置与一细胞分类器一同使用。
                    本发明的概述
我们现在发现一种特别适用于在一细胞分类器中将非对称或“扁平”细胞进行高效流动分类的管嘴。这种管嘴的独特的设计将两个椭圆形的内部区域与一个椭圆形的出口孔结合起来，能够稳定地形成滴落并分类细胞。本发明的管嘴的一种独特的特性在于，当用于完整的可存活精子时，定向精子的比例基本上与精子的可动性、样品的流速和层流速度无关。
按照这种发现，本发明的一个目的是提供一种细胞分类器管嘴，其将改善一分离流中的非径向对称细胞的正确定向的效率。
本发明的一个特定的目的是提供一种用于在一流动细胞仪中改善精子细胞分类的精度和效率的装置。
本发明的再一个目的是能够使用高速细胞分类器，使每单元时间分类出的精子的数量最大化。
从下面的描述中很容易看出本发明的其它目的和优点。
附图的简要描述
图1是本发明的管嘴的一个实施例的透视图；
图2A是本发明的管嘴的内部轮廓的前视图；
图2B是图2A所示的管嘴的内部轮廓的俯视图；
图3A是本发明的管嘴的内部轮廓的侧视图；
图3B是图3A所示的管嘴的内部轮廓的俯视图
图4A是用现有技术的斜面针/锥形管嘴系统测出的公猪的完整精子的定向直方图；以及
图4B是用通常的圆柱形针/按照本发明的椭圆形管嘴测出的公猪的完整精子的定向的直方图。
                    本发明的详细描述
本发明的这种新颖的管嘴设计的最典型的实施例是一种空气中射流的管嘴，在下面的讨论中对这种管嘴进行描述。然而，熟悉本领域的一般人员应该理解，这种设计也可以与其它类型的管嘴结合，例如一种石英通道管嘴。
参见图1，这种管嘴基本上包括一具有内部螺纹2的本体1或其它适合于与流动细胞本体或管嘴夹(未示出)连接的装置。在一种替换实施例中，可以用一种压力装配来代替配合螺纹，将管嘴与管嘴夹连接。管嘴的内部适合于接收样品注射针3，调节该注射针，使其伸入管嘴内的深度足以保持一层流。注射针可以是一种标准的圆柱形针，也可以是一种斜面针。在管嘴的与连接装置相对的尖端是一个圆柱形孔5，其用作流动管嘴的最终出口。孔5一般钻入一定位在管嘴本体1的端部的宝石4上。
参见图2A、2B、3A和3B，管嘴的内部包括一第一椭圆区域8和一第二椭圆区域9，一过渡区域12将该两椭圆区域分开。实际上，第一和第二区域以及过渡区域12的所有横截面各为一椭圆的形状，各椭圆具有一长轴和一短轴。第一区域8从嘴部到过渡区域12为锥形，使得所述过渡区域的横截面小于该嘴部的横截面。第二区域从过渡区域到一出口孔15为锥形，使得出口孔15的横截面小于过渡区域的横截面。椭圆出口孔的长轴大致与嘴部和过渡区域的长轴成90°。孔5紧接地位于椭圆形出口孔15的下游。孔5与出口孔15同心地对正，并且其横截面面积也小于出口孔。管嘴1的内部形状可以用一个标准的挠性漏斗想象，将该挠性漏斗的钵体的相对侧挤压，以在嘴部形成一椭圆形，然后再用与施加于钵体的力成90°的力挤压漏斗的主干部，以便在主干部出口处形成一个椭圆形的槽。
在下面的表I中给出了一本发明优选实施例中的实际的相对尺寸。在图2A、2B、3A和3B中标出了这些尺寸的标记。尺寸A和B分别表示嘴部10的短轴和长轴。尺寸a和b分别表示过渡区域12的短轴和长轴。尺寸a还表示出口孔15的长轴。尺寸c表示出口的短轴。尺寸X是第一区域8的高度，尺寸Y表示第二区域9的高度。在表I中给出的尺寸被认为是对于完整的可存活精子的定向的目的来说大致是最佳的。然而，熟悉本领域的人员应该理解，这些尺寸在合理的限度内是可以变化的，这种变化不会显著地改变在对可存活的精子和其它非对称细胞和物品进行定向时管嘴的分类起作用的能力。这些尺寸的公差至少为表I中给定的值的10％。
表II表示各种有意义的管嘴尺寸基于表I中所给出的关系的比率。这些比率可以在±20％的限度内变化，其条件是，B/A的比率保持大于1，这样才可以使嘴部10为椭圆。典型的是，B/A应该至少为1.1.将B/A与b/a比较，显然第一区域的横截面的长轴相对于短轴的相对尺寸从该区域的嘴部到过渡区域逐渐增大。在接下来的过渡区域下游的横截面中，即，在第二区域中，长轴/短轴之比率开始下降。在位于过渡区域12与出口孔15之间的“转换”点20处，两轴相等且第二区域的内部横截面为圆。从该转换点至出口孔，第二区域的横截面重新成为椭圆；但此椭圆的横截面的长轴与上述转换点之上的横截面的长轴成90°角。对于由接近出口孔的各相继的横截面所内接的椭圆，长轴与短轴的比率逐渐增大。应该理解，在从管嘴的嘴部到出口孔的各逐渐下游的横截面上，长轴与短轴的尺寸与第一和第二区域的连续的锥度同步下降。
本发明的椭圆形管嘴能够使超过60％的精子定向以进行分类。与普通的采用一标准的圆柱形管嘴结合一标准的圆锥样品注射针并且精子垂直于激光束无规则定向的系统相比，这种椭圆形管嘴使为分类而定向的精子的比例增加约三倍。与一标准的并结合了一斜面注射针的标准的锥形管嘴相比，效率大约增加了两倍。当使用一斜面针来定向精子时，定向的精子的那部分随着增加的样品速率而下降。我们已经发现，由于椭圆管嘴，在高达每秒至少15000精子的样品速率下保持着一种适合的定向比例。这种高量级的性能对于有效的精子分类是有益的。在利用牛精子进行的测试(例5)中，显然，一台装备有这种新的管嘴的细胞分类器有效地分离出纯度为90％的带有精子的X-和Y-染色体。
可预见本发明的管嘴可用于分类各种哺乳类的存活的精子，也可以用于分类血细胞、卵细胞和其它非对称单元。用牛精子所作的测试(例2)表明，管嘴的性能没有受到精子游动性的影响。
装有本发明管嘴的一种高速分类器将分类的带有精子的X-和Y染色体的产量提高了10倍，并且使得用有性别的精子的人工授精代替玻璃试管中繁殖更加可行，也使得牲畜或其它动物在性别预选时的胚胎移植和外科授精更加可行。
下面的例子用于进一步描述本发明。
例子
精子制备和染色
在本次研究中采用了按照常规采集计划从几头成年公牛和几只育龄公猪排出的精液，还采集了成年的新西兰白牡兔(兔子)的精液。此外，还分别对鼠和人的精液样品做了演示目的的评价，因为它们的精子的头的形状不同。由Johnson等(Biol.Repro.41：199-203(1989))和Johnson等(Gamete Research17：203-212(1987)描述的方法进行的精液制备和染色。简而言之，纯精液部分扩散为浓度为15X106/ml至100×106/ml的纯精液部分：对于公牛精子，由Hepes缓冲的介质中含有0.1％BSA(pH＝7.4)，对于公猪精子，BeltsvilleThawing溶液(BTS，pH＝7.2)，对于兔子精子，Tris缓冲剂(0.21 MTris，58mM葡萄糖和67mM柠檬酸；pH＝6.9)。鼠和人的精液在BTS中扩散。接着以每15X106精子7.1μM Hoechst33342(Calbiochem-Behring Corp.，La Jolla，CA)对精子进行染色，并在32℃的条件下孵化40分钟。对于公牛精子研究，在分析之前，将propidiumiodide(PI)(1.5μm，Calbiochem-Behring Corp.，La Jolla，CA)加入Hoechst33342染色的精子上。这使得死的精子与活的精子区分开，正如Johnson等人所描述的(1994)。
细胞分类
对于例1-5，采用两种带有本发明的管嘴的标准细胞分类系统来对可存活的完整精子进行分类：EPICSV系列流动细胞光度计/细胞分类器(Coulter Corporation，Miami FL)和EPICS750(一种EPICSV的改进型)。对于例6和7，采用一种新的系统，MoFlo高速细胞分类器(Cytomation Inc.，Fort Collins，CO)。对各细胞分类器进行了改进，使其用于对精子进行分类，如Johnson等所述(1986)。基本的改变是将向前光散射二级管探侧器改为一向前的荧光探侧器，这对于完整和可存活的精子的定向和分类是必要的。这种改进使得能够从较亮的精子边缘收集荧光(存在90°荧光探侧器，其选择适合定向的精子的比例)，也能够从精子的较暗的一面收集荧光，后者的荧光只由向前探侧器从定向的精子中收集。标准的EPICS使用一种76μm的锥形液流管嘴，这种管嘴被本发明的具有表I中所示的尺寸的椭圆形管嘴所代替。对MoFlo高速系统做了改进，使其具有与EPICS系统共同的完整的流动细胞系统，这样，MoFli高速系统就能够接收椭圆形管嘴。精子在穿过射流进入空气的管嘴后即与激光束交会。只有管嘴对精子的定向负责，其既可以与标准的圆柱形针配合实现精液的定向，也可以与斜面针配合实现精子的定向。用紫外线光刺激染色的精子的荧光。
为了充分演示本发明的效率，进行了若干试验。下面描述的前5个试验用于对改进进行定量(学生的小样品t-试验)，以便由本发明的管嘴获得定向和分类。后两个试验(例6和7)将本发明的管嘴用于高效的X和Y精子分类，以便进行否则无法实现的繁殖。
在报告所分类的样品的纯度时，百分比通过对分类的样品的流动细胞再分析确定。用脉冲声波刺激精子的部分(100000至250000精子)，以使其尾部移动(以便能够在分析时更精确)。将这些精子抑制并重新放置在流动细胞光度计上。所形成的统计直方图带有具有一种双Gausian曲线配合的程序。
例1
在本实例中，将本发明的管嘴的性能与一标准的精液分类系统和一采用了出口处带有12°包角的斜面针的系统进行了比较。在不同的两天用标准的锥形管嘴和标准的圆柱形注射针对8头不同的公牛的精液进行了分析。在不同的三天，用：1)标准的锥形针和斜面针，2)椭圆形针和标准的圆柱形针对15头不同的公牛的精液进行了分析和计量。
样品的流速为大约每秒2000精子。在各例中为选择定向的精子的信号而设定的窗口都相同。用两个不同的细胞分类器(EPICSV和EPICS750)以标准的及椭圆形的管嘴对精子进行了计量。通过这种方式，避免了由于向前和向后改变针而使定向的精子的比例降低。
使用椭圆形管嘴与配装有圆柱形针或斜面针的标准管嘴相比，公牛精子的定向有了很大的改进(成对差别的t-试验，p＜0.05，单独数据未示出)。用椭圆形管嘴(52.5±4.7％，n＝15)与结合了标准的圆柱形针的标准的锥形管嘴(17.3±0.7％，n＝8)相比，定向的精子的比例平均提高了3.0倍，与结合了斜面针的标准管嘴(22.7±3.5％，n＝15)相比，定向的精子的比例平均提高了2.3倍。
例2
设计本实例是为了分析采用了本发明的椭圆形管嘴定向后对精子的活动性的影响。活动性是可存活精子的一项重要的特征，因为只有活动的精子样品才被认为是适合于区分性别和繁殖。将定向的完整的可存活精子的比例与定向的但无尾部的精子的比例和定向但死去的完整的精子的比例做了比较。在不同的四天对不同的公牛的精液进行计量。样品流速大约为每秒2000个精子。通过其Hoechst荧光的不同，可以从死去的精子中单独分析出可存活的精子，因为只对死去的精子染色PI使Hoechst荧光熄灭。
定向的可存活的公牛精子的比例(56.8±6.7％)与无尾的公牛精子(59.8±4.2％)或死去的公牛精子(53.3±4.3％，在p＝0.05，n＝4时无显著差别)的比例相同，这表明采用新颖的椭圆形管嘴时活动性对公牛精子的定向的影响可以忽略。
例3
设计本实例是为了估计在定向时样品流速的影响。样品流速是很重要的，因为它有利于在尽可能短的时间内对精子分类。在两天内用500精子/秒和2000精子/秒的样品流速对8头公牛的精液进行了计量。对于500精子/秒的样品流速，获得了52.1±6.4％的定向，而对于2 000/秒，获得52.3％±6.5的定向。(n＝8，成对差别t-试验)，这表明，定向没有受到样品流速的影响。
例4
在例4中，对收集的兔子、鼠和人的精子进行了评价，以便研究这种椭圆形管嘴对这些精子形态完全不同的物种的定向的影响。用椭圆形管嘴对3只不同的兔子的精液进行分析，并测定正确定向的精子的比例。此外，对鼠精子和冷冻后解冻的人精液进行了分析，以演示这种管嘴对这些物种的应用。
用椭圆形管嘴进行计量时，很高比例的兔子精子被正确地定向(48±2.4％，n＝3)。用鼠精子和冷冻后解冻的人精子获得的定向精子的比例分别为44％和45％。
例5
设计本实例是为了试验这种新颖的管嘴系统对于从两种物种中分类出足够数量的总体的精子的能力，然后可以将这两种精子空运到国家的不同的地区，并用于在同一天在该特定的位置进行母卵细胞的试管繁殖。在每天的试验(表III)中都得到了高纯度的分类出的样品。所获得的纯度平均为，X精子分类纯度：87.6％±3.1％和Y精子分类纯度：89.3±2.5％。
获得的公猪精子定向的平均特征为，X精子分类纯度：85.3±2.1％，Y精子分类纯度：89.4±2.4％(表IV)。定向精子的比例平均为60.5±0.9％。用锥形管嘴/斜面针系统和椭圆形管嘴/斜面针所获得的定向统计直方图分别表示在图4A和4B中，以示出定向的显著的改进。图中成对的彼此垂直的线表示有效地分类带有精子的X和Y染色体所需的定向窗口。
例6
例6表示在很短的时间内可以分类出足够的精子，而且其数量足以用于进行常规的牛的人工授精。两百万使用公猪和公牛精子分类出的X和Y精子需要分别在上午9点至中午之间以及上午8点至10点之间以大约90％(85-95％)的纯度分类和回收。附加这些限制条件是因为需要抵消空运的时间，这样就可以在其它国家中由研究合作者在同一天进行玻璃试管繁殖(IVF)。
上述分类对于公猪IVF成功地进行了4次，对公牛IVF成功地进行了6次。用以前的每小时只能回收几十万精子的分类技术不能进行这种试验。
例7
分类出的X和Y(首先是X)精子被用于奶牛的人工授精。对于每个接收对象需要大约四至五百万个纯度为大约90％(85-90％)的精子。每天用分类出的精子对多达5个接受对象进行人工授精。因此，在上午9点与下午4点之间需要分离出两千五百万X精子(X和Y总数五千万)。如果不使用本发明的管嘴，这一直是不可能的。这些试验(1至5)成功地进行了5次。
表I
优选实施例的参数
        A      B      a     b      c     X      Y实际(mm)    6      7      0.9   2     0.2   5.5    2.5相对于c     30c    35c    4.5c  10c    -    27.5c  12.5c
表II
优选实施例的有意义的尺寸比率
    关系     比率     负20％     正20％
    B/A     1.2     ＞1.0     1.4
    b/a     2.2     1.8     2.6
    a/c     4.5     3.6     5.4
    X/A     0.9     0.7     1.1
    Y/a     2.8     2.2     3.4
    A/a     6.7     5.4     8
    B/b     3.5     2.8     4.2
表III
用椭圆形管嘴计量的牛(公牛)的X精子和Y精子的分类纯度日           定向(％)        X类(％)    Y类(％)1             50              88.0        90.52             57              91.5        90.53             59              84.0        85.54             52              87.0        90.5平均±公差    54.5±4.2       87.6±3.1   89.3±2.5表IV用椭圆形管嘴计量的猪(公猪)X精子和Y精子的分类纯度日            定向       X类(％)          Y类(％)1             61.5       84.0              89.02             60.0       84.3              87.33             60.0       87.7              92.0平均±公差    60.5±0.9  85.3±2.1         89.4±2.4

Claims (11)

1.一种管嘴，其包括一具有第一内部区域和第二内部区域的本体，一过渡区域将所述第一区域与所述第二区域分开，其中，所述第一区域、第二区域和所述过渡区域的各横截面基本上都为一具有一长轴和一短轴的椭圆形，所述第一区域包括一嘴部，并且从所述嘴部到所述过渡区域为锥形，所述过渡区域的横截面小于所述嘴部的横截面，其中，所述第二区域从所述过渡区域到一出口孔为向下的锥形，所述出口孔的横截面小于所述过渡区域的横截面，其中，所述出口孔的长轴与所述嘴部和所述过渡区域的长轴之间的夹角大约为90°。
2.如权利要求1所述的管嘴，其中，所述过渡区域的长轴与短轴的比率大于所述嘴部的相应的比率。
3.如权利要求1所述的管嘴，其中，所述出口孔的长轴与短轴的比率大于所述过渡区域的相应的比率。
4.如权利要求1所述的管嘴，其中，随着所述第一区域的横截面面积从所述嘴部到所述过渡区域的减小，所述长轴与短轴的比率增加。
5.如权利要求1所述的管嘴，其中，所述长轴与短轴的比率从所述过渡区域到所述第二区域内的一点下降，在该点上，所述长轴与短轴相等，然后，长轴与短轴的比率增加，且该长轴与所述嘴部和所述过渡区域的长轴的夹角大致为90°。
6.如权利要求1所述的管嘴，其中，所述管嘴还包括用于连接流动容器的装置。
7.如权利要求6所述的管嘴，其中，所述连接装置为与所述第一区域相邻的内螺纹，并且适合于被所述流动容器的外螺纹所接受。
8.如权利要求6所述的管嘴，其中，所述连接装置为一种压力配合结构。
9.如权利要求1所述的管嘴，其中，所述本体还包括一位于所述出口孔下游的圆柱形孔口，该孔口的横截面小于所述出口孔的横截面。
10.如权利要求1所述的管嘴，其中，在图2A、2B、3A和3B中的B/A的比率在大约1.1-1.4的范围内，b/a的比率在大约1.8-2.6的范围内，a/c的比率在大约3.6-5.4的范围内，X/A的比率在大约0.7-1.1的范围内，Y/a的比率在大约2.2-3.4的范围内，A/a的比率在大约5.4-8.0的范围内，而B/b的比率在大约2.8-4.2的范围内。
11.如权利要求1所述的管嘴，其中，在图2A、2B、3A和3B中，A值大约为6mm，B值大约为7mm，a值大约为0.9mm，b值大约为2mm，c值大约为0.2mm，X值大约为5.5mm，Y值大约为2.5mm。
CN98807567A 1997-07-24 1998-07-24 用于高效细胞分类的流动细胞光度计管嘴 Pending CN1265195A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/898,999 1997-07-24
US08/898,999 US5985216A (en) 1997-07-24 1997-07-24 Flow cytometry nozzle for high efficiency cell sorting

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN1265195A true CN1265195A (zh) 2000-08-30

Family

ID=25410367

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN98807567A Pending CN1265195A (zh) 1997-07-24 1998-07-24 用于高效细胞分类的流动细胞光度计管嘴

Country Status (10)

Country Link
US (1) US5985216A (zh)
EP (1) EP0998672A4 (zh)
JP (1) JP2001511518A (zh)
CN (1) CN1265195A (zh)
AU (1) AU743790B2 (zh)
BR (1) BR9810803A (zh)
CA (1) CA2296324A1 (zh)
EA (1) EA001788B1 (zh)
NZ (1) NZ502431A (zh)
WO (1) WO1999005504A2 (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103540520A (zh) * 2013-09-29 2014-01-29 大连金弘基种畜有限公司 椭锥螺纹喷嘴
CN105102959B (zh) * 2013-03-15 2017-06-09 艾瑞思国际股份有限公司 用于血样中的颗粒分析的流通池系统和方法
CN111521549A (zh) * 2020-05-13 2020-08-11 洹仪科技(上海)有限公司 一种颗粒分选装置及方法

Families Citing this family (95)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU752985B2 (en) 1997-01-31 2002-10-03 Xy, Llc. Optical apparatus
US6071689A (en) * 1997-12-31 2000-06-06 Xy, Inc. System for improving yield of sexed embryos in mammals
US6149867A (en) 1997-12-31 2000-11-21 Xy, Inc. Sheath fluids and collection systems for sex-specific cytometer sorting of sperm
NZ509434A (en) * 1998-07-30 2004-03-26 Univ Colorado State Res Found Equine system for non-surgical artificial insemination
US6511301B1 (en) 1999-11-08 2003-01-28 Jeffrey Fugere Fluid pump and cartridge
US6957783B1 (en) 1999-01-26 2005-10-25 Dl Technology Llc Dispense tip with vented outlets
US7207498B1 (en) 2000-01-26 2007-04-24 Dl Technology, Llc Fluid dispense tips
US6547167B1 (en) * 1999-01-26 2003-04-15 Jeffrey Fugere Fluid dispense tips
US7208265B1 (en) 1999-11-24 2007-04-24 Xy, Inc. Method of cryopreserving selected sperm cells
US6263745B1 (en) * 1999-12-03 2001-07-24 Xy, Inc. Flow cytometer nozzle and flow cytometer sample handling methods
US6892959B1 (en) 2000-01-26 2005-05-17 Dl Technology Llc System and method for control of fluid dispense pump
US6981664B1 (en) 2000-01-26 2006-01-03 Dl Technology Llc Fluid dispense tips
AU2011265548B8 (en) * 2000-05-09 2013-05-02 Xy, Llc High purity X-chromosome bearing and Y-chromosome bearing populations of spermatozoa
AU2001263039B2 (en) * 2000-05-09 2006-07-13 Xy, Llc. High purity x-chromosome bearing and y-chromosome bearing populations of spermatozoa
BRPI0115791B1 (pt) 2000-11-29 2020-05-05 Colorado State Univ sistema para fertilização in vitro com espematozóides separados em populações portadoras de cromossoma x e cromossoma y
US7713687B2 (en) 2000-11-29 2010-05-11 Xy, Inc. System to separate frozen-thawed spermatozoa into x-chromosome bearing and y-chromosome bearing populations
CN1313061C (zh) * 2002-03-11 2007-05-02 刘凤鸣 一种动物精子的性别分选方法
US6983867B1 (en) 2002-04-29 2006-01-10 Dl Technology Llc Fluid dispense pump with drip prevention mechanism and method for controlling same
US11243494B2 (en) 2002-07-31 2022-02-08 Abs Global, Inc. Multiple laminar flow-based particle and cellular separation with laser steering
US8486618B2 (en) 2002-08-01 2013-07-16 Xy, Llc Heterogeneous inseminate system
DK2283724T3 (en) 2002-08-01 2016-04-04 Xy Llc Heterospermic insemination to assess sperm function
WO2004017041A2 (en) 2002-08-15 2004-02-26 Xy, Inc. High resolution flow cytometer
US7169548B2 (en) 2002-09-13 2007-01-30 Xy, Inc. Sperm cell processing and preservation systems
DK2305172T3 (en) 2003-03-28 2016-08-22 Inguran Llc DEVICE AND PROCEDURES TO PROVIDE SEXUAL ANIMAL SEED
DE602004008241T2 (de) * 2003-03-28 2008-05-08 Monsanto Technology Llc. Verfahren zum anfärben von sperma
AU2012200711B2 (en) * 2003-03-28 2012-09-20 Inguran, Llc "Method and apparatus for orientating sperm in a fluid stream"
US7331482B1 (en) 2003-03-28 2008-02-19 Dl Technology, Llc Dispense pump with heated pump housing and heated material reservoir
ES2541121T3 (es) 2003-05-15 2015-07-16 Xy, Llc Clasificación eficiente de células haploides por sistemas de citometría de flujo
JP4057539B2 (ja) * 2004-01-09 2008-03-05 浜松ホトニクス株式会社 シースフローセルキュベット及びその製造方法
NZ530972A (en) * 2004-02-05 2005-04-29 Embrionics Ltd A method and apparatus for orientating and selecting cells
US7468789B2 (en) * 2004-02-05 2008-12-23 Advanced Analytical Technologies, Inc. Flow cytometer for rapid bacteria detection
EP1730266A2 (en) * 2004-03-29 2006-12-13 Monsanto Technology, LLC Sperm suspensions for sorting into x or y chromosome-bearing enriched populations
AU2005228046B2 (en) * 2004-03-29 2011-01-20 Inguran, Llc Use of a composition which regulates regulates oxidation/reduction reactions intracellularly and/or extracellularly in a staining or sorting process of spermatozoa
CA2574499C (en) 2004-07-22 2016-11-29 Monsanto Technology Llc Process for enriching a population of sperm cells
DK1771729T3 (en) 2004-07-27 2015-11-23 Beckman Coulter Inc Improving flowcytometridiskrimination using geometric transformation
US7355696B2 (en) * 2005-02-01 2008-04-08 Arryx, Inc Method and apparatus for sorting cells
US7569789B2 (en) * 2006-03-16 2009-08-04 Visiongate, Inc. Cantilevered coaxial flow injector apparatus and method for sorting particles
US7713728B2 (en) * 2007-01-08 2010-05-11 The Invention Sciencefund I, Llc Systems for genome selection
US7709244B2 (en) * 2007-01-08 2010-05-04 The Invention Science Fund I, Llc Systems for genome selection
US7947457B2 (en) * 2007-01-08 2011-05-24 The Invention Science Fund I, Llc Systems for genome selection
US7947455B2 (en) * 2007-01-08 2011-05-24 The Invention Science Fund I, Llc System for genome selection
US7709245B2 (en) * 2007-01-08 2010-05-04 The Invention Science Fund I, Llc Systems for genome selection
US8012740B2 (en) * 2007-01-08 2011-09-06 The Invention Science Fund I, Llc Systems for genome selection
US7648823B2 (en) * 2007-01-08 2010-01-19 Searete Llc Systems for genome selection
US7985578B2 (en) 2007-01-08 2011-07-26 The Invention Science Fund I, Llc Systems for genome selection
US7718418B2 (en) 2007-01-08 2010-05-18 The Invention Science Fund I, Llc Systems for genome selection
US8521440B2 (en) * 2007-01-08 2013-08-27 The Invention Science Fund I, Llc Systems for genome selection
US8003371B2 (en) * 2007-01-08 2011-08-23 The Invention Science Fund I, Llc Systems for genome selection
US20080167851A1 (en) * 2007-01-08 2008-07-10 Searete Llc, A Limited Liability Corporation Of The State Of Delaware Systems for genome selection
US8707559B1 (en) 2007-02-20 2014-04-29 Dl Technology, Llc Material dispense tips and methods for manufacturing the same
CN101821623A (zh) * 2007-07-23 2010-09-01 安德罗珍尼克斯有限公司 用于精子性别选择的材料和方法
US20090111184A1 (en) * 2007-10-24 2009-04-30 Searete Llc, A Limited Liability Corporation Of The State Of Delaware Chromosome selection
US20090111764A1 (en) * 2007-10-25 2009-04-30 Searete Llc, A Limited Liability Corporation Of The State Of Delaware Mitochondrial selection
US20090111185A1 (en) * 2007-10-26 2009-04-30 Searete Llc, A Limited Liability Corporation Of The State Of Delaware Female genome selection
US9879222B2 (en) 2007-12-14 2018-01-30 Mofa Group Llc Gender-specific separation of sperm cells and embryos
NZ590166A (en) 2008-06-30 2013-09-27 Microbix Biosystems Inc Method and apparatus for sorting cells
US8864055B2 (en) 2009-05-01 2014-10-21 Dl Technology, Llc Material dispense tips and methods for forming the same
US8665439B2 (en) 2009-06-30 2014-03-04 Microbix Biosystems, Inc. Method and apparatus for limiting effects of refraction in cytometry
US20110223587A1 (en) * 2010-03-11 2011-09-15 Schulman Joseph D Optical particle characterization system
US20110223586A1 (en) * 2010-03-11 2011-09-15 David Karabinus Optical particle characterization system
US20110236923A1 (en) * 2010-03-23 2011-09-29 Genetics & Ivf Institute Method for staining and sorting of a small volume of sperm
US10908066B2 (en) 2010-11-16 2021-02-02 1087 Systems, Inc. Use of vibrational spectroscopy for microfluidic liquid measurement
EP2676121A1 (en) 2011-02-15 2013-12-25 Microbix Biosystems Inc. Methods, systems, and apparatus for performing flow cytometry
DE102011006081A1 (de) 2011-03-24 2012-09-27 Masterrind Gmbh Düse zur Ausrichtung eines Flüssigkeitsteilstroms
DE102011006080B4 (de) 2011-03-24 2015-06-18 Masterrind Gmbh Vorrichtung und Verfahren zur Fraktionierung von Säugerspermatozoen
DE102011075711A1 (de) 2011-05-12 2012-11-15 Masterrind Gmbh Düse zur Partikelausrichtung im Flüssigkeitsstrom
JP2013024629A (ja) * 2011-07-19 2013-02-04 Sysmex Corp フローサイトメータ
US9725225B1 (en) 2012-02-24 2017-08-08 Dl Technology, Llc Micro-volume dispense pump systems and methods
EP4230996A3 (en) 2012-09-19 2023-10-11 Inguran, LLC A method of sorting cells and a flow cytometer system
US11668640B2 (en) 2015-03-06 2023-06-06 Inguran, Llc Nozzle assembly for a flow cytometry system and methods of manufacture
AU2013318001B2 (en) 2012-09-19 2016-06-16 Inguran, Llc Flow cytometer nozzle tip
ES2733531T3 (es) 2012-10-05 2019-11-29 Inguran Llc Procedimientos de tratamiento del esperma para la clasificación del sexo
US10620213B2 (en) 2012-10-05 2020-04-14 Inguran, Llc High pressure sperm sorting and flow cytometer methods
US9506911B2 (en) 2012-12-21 2016-11-29 Laser Zentrum Hannover E.V. Device having an internal and an external functional element and method for the production thereof
JP2014174139A (ja) * 2013-03-13 2014-09-22 Sony Corp 流路デバイス、粒子分取装置、粒子流出方法、及び粒子分取方法
US10662408B2 (en) 2013-03-14 2020-05-26 Inguran, Llc Methods for high throughput sperm sorting
US9757726B2 (en) 2013-03-14 2017-09-12 Inguran, Llc System for high throughput sperm sorting
US10371622B2 (en) 2013-03-14 2019-08-06 Inguran, Llc Device for high throughput sperm sorting
BR112015021902B1 (pt) * 2013-03-15 2021-06-15 Iris International, Inc Líquido para alinhamento de partícula e organela intracelular
DE102013208584A1 (de) 2013-05-08 2014-11-13 Masterrind Gmbh Düse und Verfahren für die Durchflusszytometrie
US8961904B2 (en) 2013-07-16 2015-02-24 Premium Genetics (Uk) Ltd. Microfluidic chip
US10870175B2 (en) 2013-09-18 2020-12-22 Cytonome/St, Llc Microfluidic flow-through elements and methods of manufacture of same
US11796449B2 (en) 2013-10-30 2023-10-24 Abs Global, Inc. Microfluidic system and method with focused energy apparatus
WO2016090310A1 (en) 2014-12-05 2016-06-09 Inguran, Llc Cell processing using magnetic particles
JP2018509615A (ja) 2015-02-19 2018-04-05 プレミアム ジェネティクス （ユーケー） リミテッド 走査型赤外線測定システム
US20190310243A1 (en) 2018-04-09 2019-10-10 Inguran, Llc Methods and compositions for determining the presence or absence of dna aberrations
EP3796998A1 (en) 2018-05-23 2021-03-31 ABS Global, Inc. Systems and methods for particle focusing in microchannels
CA3133622A1 (en) 2019-03-19 2020-09-24 Inguran, Llc Method for improved sperm cell populations
CN117413819A (zh) 2019-04-18 2024-01-19 艾步思国际有限责任公司 用于连续添加冷冻保护剂的系统和工艺
US11746656B1 (en) 2019-05-13 2023-09-05 DL Technology, LLC. Micro-volume dispense pump systems and methods
EP3771899A1 (en) 2019-07-30 2021-02-03 Diatron MI PLC Flow cytometer
US11628439B2 (en) 2020-01-13 2023-04-18 Abs Global, Inc. Single-sheath microfluidic chip
WO2021259903A1 (en) 2020-06-22 2021-12-30 Westfälische Wilhelms-Universität Münster Sperm stratification
JP2024512029A (ja) 2021-03-25 2024-03-18 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド Ｔ細胞共培養効力アッセイのための方法及び組成物、ならびに細胞療法製品との使用
WO2024015215A1 (en) * 2022-07-12 2024-01-18 Becton, Dickinson And Company Flow cytometers including sample injection needles, and methods of use thereof

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SE364445B (zh) * 1968-07-15 1974-02-25 Montedison Spa
US3893766A (en) * 1973-06-14 1975-07-08 Coulter Electronics Apparatus for orienting generally flat particles for slit-scan photometry
US4097000A (en) * 1975-07-07 1978-06-27 Derr Bernard A Spray nozzle
US4361400A (en) * 1980-11-26 1982-11-30 The United States Of America As Represented By The United States Department Of Energy Fluidic assembly for an ultra-high-speed chromosome flow sorter
DE3851458T2 (de) * 1987-04-08 1995-02-09 Hitachi Ltd Vorrichtung mit einer scheideförmigen Durchflusszelle.
JPS63262565A (ja) * 1987-04-20 1988-10-28 Hitachi Ltd フロ−セル
US4988619A (en) * 1987-11-30 1991-01-29 United States Department Of Energy Flow cytometry apparatus
US5199040A (en) * 1991-05-30 1993-03-30 The United States Of America As Represented By The United States Department Of Energy Monolithic dye laser amplifier
US5412466A (en) * 1991-07-26 1995-05-02 Toa Medical Electronics Co., Ltd. Apparatus for forming flattened sample flow for analyzing particles
US5311290A (en) * 1992-09-30 1994-05-10 Pulp And Paper Research Institute Of Canada Imaging apparatus and method of fiber analysis
JP3052665B2 (ja) * 1993-01-26 2000-06-19 株式会社日立製作所 フローセル装置

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105102959B (zh) * 2013-03-15 2017-06-09 艾瑞思国际股份有限公司 用于血样中的颗粒分析的流通池系统和方法
US9909973B2 (en) 2013-03-15 2018-03-06 Iris International, Inc. Flowcell systems and methods for particle analysis in blood samples
US10345217B2 (en) 2013-03-15 2019-07-09 Iris International, Inc. Flowcell systems and methods for particle analysis in blood samples
US11525766B2 (en) 2013-03-15 2022-12-13 Iris International, Inc. Dynamic range extension systems and methods for particle analysis in blood samples
US11543340B2 (en) 2013-03-15 2023-01-03 Iris International, Inc. Autofocus systems and methods for particle analysis in blood samples
CN103540520A (zh) * 2013-09-29 2014-01-29 大连金弘基种畜有限公司 椭锥螺纹喷嘴
CN111521549A (zh) * 2020-05-13 2020-08-11 洹仪科技(上海)有限公司 一种颗粒分选装置及方法
CN111521549B (zh) * 2020-05-13 2021-01-01 洹仪科技(上海)有限公司 一种颗粒分选装置及方法

Also Published As

Publication number Publication date
EA001788B1 (ru) 2001-08-27
CA2296324A1 (en) 1999-02-04
WO1999005504A3 (en) 1999-04-08
JP2001511518A (ja) 2001-08-14
AU743790B2 (en) 2002-02-07
NZ502431A (en) 2001-06-29
AU8662998A (en) 1999-02-16
EP0998672A2 (en) 2000-05-10
BR9810803A (pt) 2000-09-12
WO1999005504A2 (en) 1999-02-04
EA200000157A1 (ru) 2000-10-30
US5985216A (en) 1999-11-16
EP0998672A4 (en) 2004-06-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN1265195A (zh) 用于高效细胞分类的流动细胞光度计管嘴
ES2918578T3 (es) Aparato y métodos para proporcionar esperma animal clasificado por sexo
CN105960463A (zh) 用于精子分选的系统和方法
US8004661B2 (en) Method and apparatus for sorting cells
Ellsaesser et al. Analysis of channel catfish peripheral blood leucocytes by bright-field microscopy and flow cytometry
ZA200209139B (en) High purity x-chromosome bearing and Y-chromosome bearing populations of spermatozoa.
US8715572B2 (en) Method and apparatus for detection, analysis, and collection of rare cellular events
CN107686859B (zh) 一种适用于鱼类血细胞快速分类计数的方法及应用
US20190310243A1 (en) Methods and compositions for determining the presence or absence of dna aberrations
US20110223587A1 (en) Optical particle characterization system
BR112021012000A2 (pt) Sistema e métodos para identificação sub-populacional
US20200326331A1 (en) Methods and compositions for determining the presence or absence of dna aberrations
Johnson Flow cytometry: analysis and sorting of X and Y chromosome-bearing spermatozoa
US20120308998A1 (en) Methods and systems for reducing dna fragmentation in a population of sperm cells
US20110223586A1 (en) Optical particle characterization system
William et al. Studies on the hematological differences of pond and river African catfish (Clarias gariepinus) in Maiduguri, Borno State, Nigeria
Kachel Rens et al.[45] Date of Patent: Nov. 16, 1999
Dresser et al. Analyses of DNA content of living spermatozoa using flow cytometry techniques
MXPA00000841A (en) Flow cytometry nozzle for high efficiency cell sorting
Mir et al. Sperm sexing by flow cytometry–past improvements and future prospects: A review
Álvarez García et al. Effects of cryopreservation on head morphometry and its relation with chromatin status in brown bear (Ursus arctos) spermatozoa
Moe et al. Comparison between microscopic and automated differential leukocyte counts in the silver fox (Vulpes vulpes) and the blue fox (Alopex lagopus)
Sharpe A new optical configuration for flow cytometric sorting of bovine spermatozoa by sex
Subel An Evaluation of Reticulocyte Counting by Flow Cytometry
Álvarez et al. Effects of cryopreservation on head morphometry and its relation with 2 chromatin status in brown bear (Ursus arctos) spermatozoa 3 Running title: Head morphometry and chromatin status in brown bear spermatozoa 4 5

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
AD01 Patent right deemed abandoned
C20 Patent right or utility model deemed to be abandoned or is abandoned
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: WD

Ref document number: 1030054

Country of ref document: HK