JP6512593B2 - 培養液の培養状態解析システム及び培養状態解析方法、並びに、プログラム - Google Patents
培養液の培養状態解析システム及び培養状態解析方法、並びに、プログラム Download PDFInfo
- Publication number
- JP6512593B2 JP6512593B2 JP2015032572A JP2015032572A JP6512593B2 JP 6512593 B2 JP6512593 B2 JP 6512593B2 JP 2015032572 A JP2015032572 A JP 2015032572A JP 2015032572 A JP2015032572 A JP 2015032572A JP 6512593 B2 JP6512593 B2 JP 6512593B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cell mass
- target
- information
- feature amount
- culture
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 title claims description 94
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 225
- 238000009826 distribution Methods 0.000 claims description 189
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 80
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 claims description 51
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 40
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 19
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 claims description 15
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 claims description 14
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims description 10
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 claims description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 120
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 107
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 77
- 238000004088 simulation Methods 0.000 description 39
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 20
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 7
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 5
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 238000012935 Averaging Methods 0.000 description 2
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 238000005401 electroluminescence Methods 0.000 description 2
- 210000002242 embryoid body Anatomy 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 239000004973 liquid crystal related substance Substances 0.000 description 2
- 210000001778 pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 230000005283 ground state Effects 0.000 description 1
- 230000000729 hypotrophic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001146 hypoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 1
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000001454 recorded image Methods 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Image Analysis (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Description
まず、図1及び図2を用いて本実施形態における状態解析システム1の構成及び概要について説明する。なお、図1は、本実施形態における状態解析システム1の構成を示すシステム構成図であり、図2は、本実施形態の状態解析システムにおいて撮像された特定領域を示す対象画像の一例である。
(1)撮像装置20から、懸濁培養液51に推定対象の複数種類の細胞塊(具体的には粒径サイズの異なる細胞塊)が混在する懸濁培養容器50内の特定領域52が画像化された対象画像データを取得し、
(2)取得した対象画像データの対象画像に対して所定の画像解析を実行し、当該対象画像内における細胞塊の特徴量を検出し、
(3)登録されている各基底情報における細胞塊の特徴量と(2)で検出した細胞塊の特徴量とに基づいて所定の演算を実行し、推定対象に含まれる各基底情報の基底混合比を推定し、
(4)推定した基底混合比と、予め登録されている各基底情報の目標項目の値と、に基づいて、所定の演算を実行し、推定対象における前記目標項目を算出する、
構成を有している。
次に、図3を用いて本実施形態の画像処理装置30の構成について説明する。なお、図3は、本実施形態の画像処理装置30のブロックを示すブロック図である。
(1)予め規定された量の基底検体としての懸濁培養液51を有する懸濁培養容器50内の特定領域52内が画像化された対象画像において、当該対象画像の画像上における細胞塊の粒子像のサイズのヒストグラムである分布特徴量情報(以下、「分布特徴量情報(基底)」という。)、
(2)予め規定された量の基底検体としての懸濁培養液51における対象画像の画像上における細胞塊の粒子像数である特徴量情報(以下、「粒子像数情報(基底)」という。)、
(3)予め規定された量の基底検体としての懸濁培養液51の全体(すなわち、懸濁培養容器50全体)に含まれる細胞塊の粒径分布の情報(以下、「実粒径分布情報」という。)、
(4)予め規定された量の基底検体としての懸濁培養液51の全体(すなわち、懸濁培養容器50全体)に含まれる細胞塊が存在する数の情報(以下、「実粒子数情報」という。)、
が基底情報としてそれぞれ複数の異なる実粒径分布毎に登録される。
(1)分布特徴量情報(基底)、粒子像数情報(基底)、実粒径分布情報及び実粒子数情報を含む基底情報を異なる粒径(すなわち基底)のそれぞれについて基底情報として予め複数登録する登録処理、
(2)撮像装置20から取得した対象画像データの対象画像に対して所定の画像解析を実行し、当該対象画像における細胞塊の分布特徴量(以下、「分布特徴量(検出)」という。)及び粒子像数を検出するとともに、検出した細胞塊の分布特徴量(検出)と登録されている基底情報における分布特徴量(基底)とに基づいて、推定対象の懸濁培養液51における各基底情報の基底混合比を推定する混合比推定処理、及び、
(3)推定した基底混合比及び検出した粒子像数と、登録されている基底情報の実粒径分布情報及び実粒子数情報に基づいて、推定対象の懸濁培養液51を有する懸濁培養容器50全体における細胞塊の粒径分布及び総粒子数を算出する状態解析処理、
を実現する。
次に、図4〜図8を用いて本実施形態の画像処理装置30におけるデータ処理部320の詳細について説明する。
(1)特定領域52における細胞塊の分布特徴量情報、
(2)特定領域52における細胞塊の粒子像数情報
(3)実粒径分布情報、
(4)実粒子数情報、
を、参照データ記録部303にそれぞれを登録する。
次に、図9を用いて本実施形態の状態解析システム1の画像処理装置30において実行される品質判定処理の動作について説明する。なお、図9は、本実施形態の状態解析システム1の画像処理装置30において実行される状態解析処理の動作を示すフローチャートである。
次に、図10〜図15を用いて本実施形態において上記の基底混合比が有効に算出されることを確認するため実施したシミュレーション結果について説明する。
(左)真の混合割合から得られる理想のヒストグラムであって、基底の内訳を示しているヒストグラム、
(中)シミュレーションされたノイズ入りのヒストグラム(ノイズが入っているため、正確に内訳を示すことはできず)、及び、
(右)本実施形態によって上記のノイズ入りヒストグラムから推定された混合比のヒストグラムであって、色分けによりその基底の内訳を示す最適な近似のヒストグラム
である。
まず、図10を用いて本実施形態のノイズ耐性に関するシミュレーション結果について説明する。なお、図10は、本実施形態におけるノイズ耐性に関するシミュレーション結果を説明するための図である。
次に、図11を用いて本実施形態の異なる基底混合比に基づくシミュレーション結果について説明する。なお、図11は、本実施形態における異なる基底混合比に基づくシミュレーション結果を説明するための図である。
次に、図12〜図15を用いて本実施形態の混合分布における平均を用いた場合のシミュレーション結果について説明する。なお、図12〜15は、本実施形態の混合分布における平均を用いた場合のシミュレーション結果を説明するための図である。
[6.1]変形例1
上記実施形態の状態解析システム1は、撮像装置20、照明装置10及び画像処理装置30を有するスタンドアロン型によって実現されているが、撮像装置20及び照明装置10と、画像処理装置30と、が独立的に設置されてネットワークを介して接続されることによって実現されてもよい。
上記実施形態においては、基底混合比を推定する際に、制限条件付き最小二乗法を用いているが、分布特徴量の選び方とその特性に応じてEMアルゴリズムなどの適切なアルゴリズムを用いて基底混合比を算出してもよい。
上記実施形態においては、照明装置10としてシートレーザを用いて撮像装置20に特定領域52を撮像させているが、培養液の色や培養容器の形状に合わせて照明色や配置を変えたり、ハロゲンランプ又はLED照明などを用いて特定領域52を照射して当該特定領域52を撮像装置20に撮像してもよい。
上記実施形態においては、基底情報における実粒径分布情報及び実粒子数情報を、懸濁培養液51全体(すなわち、容器全体)を測定することによって取得しているが、当該懸濁培養液51の一部を測定し、当該一部の容積と懸濁培養液全体の容積との容積比率に基づいて、懸濁培養液51全体としての基底情報における実粒径分布情報及び実粒子数情報を取得してもよい。
上記実施形態においては、所定の条件の下に登録された基底情報を用いて基底混合比及び実粒径分布及び実粒子数を含む各種の目標項目を算出しているが、実際に登録された情報に代えて当該実際に登録された値から算出される値(補正値)を用いてもよい。
上記実施形態においては、複数の画像の個々から得られる特徴量を平均したものを平均分布特徴量として利用しているが、平均以外の方法によって分布特徴量を算出してもよい。
10 … 照明装置
20 … 撮像装置
30 … 画像処理装置
300 … データ記録部
301 … アプリケーション記録部
302 … 画像データ記録部
303 … 参照データ記録部
320 … データ処理部
321 … 登録処理部
322 … システム制御部
323 … 検出処理部
324 … 推定解析処理部
340 … 表示部
350 … 表示制御部
370 … 操作部
380 … 管理制御部
Claims (10)
- 細胞塊を含む培養液である検体であって培養に関する目標項目が既知で、かつ、当該目標項目が異なる複数の検体のそれぞれについて、当該目標項目の値と、当該目標項目に紐付けられた特徴量であって前記培養液を有する容器内の一部の領域である画像化された特定領域における前記細胞塊の特徴量と、を含む情報を、基底情報として、予め記録手段に登録する登録手段と、
撮像装置から、推定対象の培養液を有する前記容器内の前記特定領域が画像化された対象画像を対象画像データとして取得する取得手段と、
前記取得された対象画像データの対象画像に対して所定の画像解析を実行し、当該対象画像内における前記細胞塊の特徴量を検出する検出手段と、
前記登録されている各基底情報における前記細胞塊の特徴量と前記検出された細胞塊の特徴量とに基づいて、所定の演算を実行し、前記推定対象に含まれる各基底情報の混合比を推定する推定手段と、
前記推定された各基底情報の混合比と、前記予め登録されている当該各基底情報の目標項目の値と、に基づいて、所定の演算を実行し、前記推定対象における前記目標項目を算出する算出手段と、
を備えることを特徴とする、培養液の培養状態解析システム。 - 請求項1に記載の培養液の培養状態解析システムにおいて、
前記細胞塊の特徴量には、前記特定領域における前記細胞塊の分布特徴量が含まれる、培養液の培養状態解析システム。 - 請求項2に記載の培養液の培養状態解析システムにおいて、
前記目標項目が、前記細胞塊の粒径分布を示す実粒径分布情報である場合には、
前記算出手段が、前記推定対象の前記容器全体における細胞塊の実粒径分布を前記目標項目として算出する、培養液の培養状態解析システム。 - 請求項2又は3に記載の培養液の培養状態解析システムにおいて、
前記分布特徴量としては、前記細胞塊の前記対象画像上におけるピクセル数に基づくサイズのヒストグラムを用いる、培養液の培養状態解析システム。 - 請求項2〜4のいずれか1に記載の培養液の培養状態解析システムにおいて、
前記細胞塊の特徴量には、前記特定領域における前記細胞塊の分布特徴量とともに、当該分布特徴量とは異なる特徴量である従属特徴量を含み、
前記推定手段が、前記登録されている各基底情報における前記細胞塊の分布特徴量と前記検出された細胞塊の分布特徴量とに基づいて、所定の演算を実行し、前記推定対象に含まれる各基底情報の混合比を推定し、
前記算出手段が、前記検出された従属特徴量と、前記推定された各基底情報の混合比と、前記予め登録されている各基底情報であって前記従属特徴量に関する目標項目の値と、に基づいて、前記推定対象における前記目標項目を算出する、培養液の培養状態解析システム。 - 請求項5に記載の培養液の培養状態解析システムにおいて、
前記細胞塊の従属特徴量が、前記特定領域における細胞塊の粒子像数であり、前記目標項目が、前記容器全体における細胞塊が存在する数を示す実粒子数である場合には、
前記算出手段が、前記推定対象の前記容器全体における細胞塊の実粒子数を前記目標項目として算出する、培養液の培養状態解析システム。 - 請求項1〜6のいずれか1項に記載の培養液の培養状態解析システムにおいて、
前記取得手段が、複数の前記対象画像データを取得し、
前記検出手段が、前記取得された複数の前記対象画像データのそれぞれに対する対象画像内における前記細胞塊の特徴量を検出し、かつ、当該検出した各対象画像データの特徴量を平均化し、
前記推定手段が、前記平均化された特徴量と、前記登録されている各基底情報における前記細胞塊の特徴量と、に基づいて所定の演算を実行し、前記推定対象に含まれる各基底情報の混合比を推定する、培養液の培養状態解析システム。 - 請求項1〜7のいずれか1項に記載の培養液の培養状態解析システムにおいて、
前記特定領域を撮像して画像化する撮像装置を更に備え、
前記取得手段が、前記撮像装置から対象画像データを取得する、培養液の培養状態解析システム。 - コンピュータを、
細胞塊を含む培養液である検体であって培養に関する目標項目が既知で、かつ、当該目標項目が異なる複数の検体のそれぞれについて、当該目標項目の値と、当該目標項目に紐付けられた特徴量であって前記培養液を有する容器内の一部の領域である画像化された特定領域における前記細胞塊の特徴量と、を含む情報を、基底情報として、予め記録手段に登録する登録手段、
撮像装置から、推定対象の培養液を有する前記容器内の前記特定領域が画像化された対象画像を対象画像データとして取得する取得手段、
前記取得された対象画像データの対象画像に対して所定の画像解析を実行し、当該対象画像内における前記細胞塊の特徴量を検出する検出手段、
前記登録されている各基底情報における前記細胞塊の特徴量と前記検出された細胞塊の特徴量とに基づいて、所定の演算を実行し、前記推定対象に含まれる各基底情報の混合比を推定する推定手段、及び、
前記推定された各基底情報の混合比と、前記予め登録されている当該各基底情報の目標項目の値と、に基づいて、所定の演算を実行し、前記推定対象における前記目標項目を算出する算出手段、
として機能させることを特徴とする、プログラム。 - 細胞塊を含む培養液である検体であって培養に関する目標項目が既知で、かつ、当該目標項目が異なる複数の検体のそれぞれについて、当該目標項目の値と、当該目標項目に紐付けられた特徴量であって前記培養液を有する容器内の一部の領域である画像化された特定領域における前記細胞塊の特徴量と、を含む情報を、基底情報として、予め記録手段に登録し、
撮像装置から、推定対象の培養液を有する前記容器内の前記特定領域が画像化された対象画像を対象画像データとして取得し、
前記取得された対象画像データの対象画像に対して所定の画像解析を実行し、当該対象画像内における前記細胞塊の特徴量を検出し、
前記登録されている各基底情報における前記細胞塊の特徴量と前記検出された細胞塊の特徴量とに基づいて、所定の演算を実行し、前記推定対象に含まれる各基底情報の混合比を推定し、
前記推定された各基底情報の混合比と、前記予め登録されている当該各基底情報の目標項目の値と、に基づいて、所定の演算を実行し、前記推定対象における前記目標項目を算出する、
ことを特徴とする、培養液の培養状態解析方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2015032572A JP6512593B2 (ja) | 2015-02-23 | 2015-02-23 | 培養液の培養状態解析システム及び培養状態解析方法、並びに、プログラム |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2015032572A JP6512593B2 (ja) | 2015-02-23 | 2015-02-23 | 培養液の培養状態解析システム及び培養状態解析方法、並びに、プログラム |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2016154450A JP2016154450A (ja) | 2016-09-01 |
JP6512593B2 true JP6512593B2 (ja) | 2019-05-15 |
Family
ID=56824096
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2015032572A Active JP6512593B2 (ja) | 2015-02-23 | 2015-02-23 | 培養液の培養状態解析システム及び培養状態解析方法、並びに、プログラム |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP6512593B2 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2017140006A (ja) * | 2016-02-12 | 2017-08-17 | 大日本印刷株式会社 | 培養状態解析システム及び培養状態解析方法、並びに、プログラム |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2020054234A (ja) | 2017-01-31 | 2020-04-09 | 富士フイルム株式会社 | 細胞培養装置、撮像ユニット及び培養監視方法 |
JP7018078B2 (ja) * | 2018-01-31 | 2022-02-09 | ヤマハ発動機株式会社 | 撮像システム |
JP7432319B2 (ja) * | 2019-08-05 | 2024-02-19 | 大日本印刷株式会社 | 浮遊懸濁培養状態監視装置、浮遊懸濁培養状態監視システム、コンピュータプログラム及び浮遊懸濁培養状態監視方法 |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH07121220B2 (ja) * | 1988-07-18 | 1995-12-25 | 株式会社日立製作所 | 動物細胞の培養装置、培養方法及び活性診断装置 |
JP2826448B2 (ja) * | 1993-09-17 | 1998-11-18 | 株式会社日立製作所 | フロー式粒子画像解析方法およびフロー式粒子画像解析装置 |
US5576827A (en) * | 1994-04-15 | 1996-11-19 | Micromeritics Instrument Corporation | Apparatus and method for determining the size distribution of particles by light scattering |
JP3411112B2 (ja) * | 1994-11-04 | 2003-05-26 | シスメックス株式会社 | 粒子画像分析装置 |
JP5447546B2 (ja) * | 2012-01-31 | 2014-03-19 | 東洋製罐グループホールディングス株式会社 | 細胞計数方法、細胞計数装置、及び細胞計数プログラム |
CN109142195B (zh) * | 2013-03-15 | 2021-10-01 | 艾瑞思国际股份有限公司 | 用于体液样品中的粒子分析的自聚焦系统和方法 |
-
2015
- 2015-02-23 JP JP2015032572A patent/JP6512593B2/ja active Active
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2017140006A (ja) * | 2016-02-12 | 2017-08-17 | 大日本印刷株式会社 | 培養状態解析システム及び培養状態解析方法、並びに、プログラム |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2016154450A (ja) | 2016-09-01 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6512593B2 (ja) | 培養液の培養状態解析システム及び培養状態解析方法、並びに、プログラム | |
KR101884108B1 (ko) | 산란광(pta)을 이용한 입자 추적 분석 방법 및 모든 유형의 액체 내에서 나노미터 크기 오더의 입자를 검출 및 식별하기 위한 장치 | |
JP6730040B2 (ja) | 培養状態解析システム及び培養状態解析方法、並びに、プログラム | |
CN108107197B (zh) | 用于检测和/或分类细胞样品中的癌细胞的方法和系统 | |
Charwat et al. | Potential and limitations of microscopy and Raman spectroscopy for live-cell analysis of 3D cell cultures | |
US8064661B2 (en) | Cell culture device, image processing device and cell detecting system | |
Williams et al. | Computerised measurement of contact angles | |
JP5508792B2 (ja) | 画像処理方法、画像処理装置および画像処理プログラム | |
JPWO2016103501A1 (ja) | 解析装置、解析方法、解析プログラム、細胞の製造方法、および細胞 | |
CN109196112B (zh) | 球状体内部细胞状态的分析方法 | |
Zhang et al. | Automated image analysis for tracking cargo transport in axons | |
JP2015146747A (ja) | 細胞判定方法 | |
CN103649717A (zh) | 细胞分析装置 | |
KR102431217B1 (ko) | 화상 해석 장치, 방법 및 프로그램 | |
JP2017522568A (ja) | 赤血球凝集抑制アッセイ(hai)の自動イメージング及び分析 | |
Bae et al. | Portable bacterial identification system based on elastic light scatter patterns | |
US11169079B2 (en) | Captured image evaluation apparatus, captured image evaluation method, and captured image evaluation program | |
JPWO2020188813A1 (ja) | 細胞解析装置 | |
US20190370973A1 (en) | Cell image evaluation device, method, and program | |
CN109478230A (zh) | 通过分割概览图像来检查分布式对象的方法 | |
JP2007078590A (ja) | 粒子性状分析表示装置 | |
US20150285785A1 (en) | Monitoring and/or characterising biological or chemical material | |
JP2017063652A (ja) | 細胞評価装置および方法並びにプログラム | |
JP6897665B2 (ja) | 画像処理装置、観察装置、及びプログラム | |
JP4046446B2 (ja) | 粒子分析装置 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20171215 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20171215 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20181024 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20181204 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190204 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20190305 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20190403 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6512593 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |