BRPI0917573B1

BRPI0917573B1 - Método de preparação de uma composição de enchimento de tecido mole; e método de preparação de uma composição de enchimento com base em HA coesiva

Info

Publication number: BRPI0917573B1
Application number: BRPI0917573-3A
Authority: BR
Inventors: Lebreton Pierre
Original assignee: Allergan Industrie Sas
Priority date: 2008-08-04
Filing date: 2009-03-02
Publication date: 2018-03-13
Also published as: EP2674147B1; PT2326302T; US9089519B2; SG10202104803SA; US10391202B2; JP2016000350A; RU2496473C2; JP2011529763A; DK2326302T3; CN103285423A; US20100028437A1; US20160279296A1; DK2674147T3; HK1156883A1; CA2732928A1; JP2011529762A; US20140148406A1; US20140213547A1; KR20110040966A; US10485896B2

Description

(54) Título: MÉTODO DE PREPARAÇÃO DE UMA COMPOSIÇÃO DE ENCHIMENTO DE TECIDO MOLE; E MÉTODO DE PREPARAÇÃO DE UMA COMPOSIÇÃO DE ENCHIMENTO COM BASE EM HA COESIVA (51) Int.CI.: A61K 8/73; A61K 8/49; A61Q 19/08; A61K 31/167; A61K 31/728; A61K 9/00; A61K 9/06; A61L 27/52 (52) CPC: A61K 8/735,A61K 8/4973,A61Q 19/08,A61K 2800/91,A61K 31/167,A61K 31/728,A61K 9/0021,A61K 9/06,A61L 27/52,A61L 2300/402 (30) Prioridade Unionista: 04/08/2008 US 61/085,956, 11/08/2008 US 61/087,934, 11/09/2008 US 61/096,278, 26/02/2009 US 12/393,768, 26/02/2009 US 12/393,884 (73) Titular(es): ALLERGAN INDUSTRIE SAS (72) Inventor(es): PIERRE LEBRETON

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Relatório Descritivo da Patente de Invenção para MÉTODO DE PREPARAÇÃO DE UMA COMPOSIÇÃO DE ENCHIMENTO DE TECIDO MOLE; E MÉTODO DE PREPARAÇÃO DE UMA COMPOSIÇÃO DE ENCHIMENTO COM BASE EM HA COESIVA.

Referência cruzada aos pedidos relacionados [001] Este pedido reivindica o benefício de Pedido de patente provisória dos Estados Unidos número 61/085.956, depositado em 04 de agosto de 2008, Pedido de patente provisória dos Estados Unidos número 61/087,934, depositado em 11 de agosto de 2008, Pedido de patente provisória dos Estados Unidos número 61/096,278, depositado em 11 de setembro de 2008, Pedido não provisório dos Estados Unidos número 12/393,768, depositado em 26 de fevereiro de 2009 e Pedido não provisório dos Estados Unidos número 12/393,884, depositado em 26 de fevereiro de 2009, as descrições na íntegra de todos os quais são incorporadas aqui por referência.

Campo da invenção [002] A presente invenção de um modo geral refere-se a enchimentos de tecido mole injetáveis e mais especificamente refere-se a enchimentos dérmicos e subdérmicos com base em ácido hialurônico incluindo um agente anestésico.

Antecedente [003] É de um modo geral aceito que quando uma pessoa envelhece, o rosto começa a mostrar efeitos de gravidade, exposição ao sol, e anos de movimento muscular facial, tais como sorriso, franzimento das sobrancelhas, mastigação e olhar com os olhos apertados. Os tecidos subjacentes que mantêm a aparência da pele jovem começam a sofrer esgotamento, frequentemente resultando em linhas de gargalhadas, linhas de sorriso, rugas no canto do olho e rugas faciais frequentemente referidas como os efeitos de envelhecimento.

[004] Em um esforço para tratar ou corrigir os efeitos de envelhecimento, enchimentos de tecido mole têm sido desenvolvidos para ajudar a preencher linhas e depressões faciais e para restaurar perda de volume de tecido relacionada com a perda de gordura. Os enchimentos de tecido mole

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2/34 desse modo temporariamente restauram uma aparência mais jovem, mais lisa.

[005] Idealmente, enchimentos de tecido mole são de aparência macia, lisa e natural, de longa duração, quando implantadas na pele ou debaixo da pele. Além disso, enchimentos de tecido mole são fáceis de implantar em um paciente usando uma agulha de calibre fino e requerem baixa força de extrusão para injeção. Os enchimentos ideais também não causariam nenhum efeito colateral adverso, e seriam injetáveis com mínimo ou nenhum desconforto para o paciente.

[006] Enchimentos de tecido mole com base em colágeno foram desenvolvidos mais de 20 anos atrás, e durante algum tempo, enchimentos com base em colágeno bovino foram os únicos enchimentos dérmicos aprovados pelo U.S. Food and Drug Administration (FDA). Porque estes enchimentos dérmicos são com base bovina, uma das principais desvantagens tem sido o potencial para reação alérgica em pacientes. Acredita-se que aproximadamente 3 a 5% de indivíduos humanos mostram sérias reações alérgicas a colágeno bovino, desse modo requerendo teste cuidadoso antes de usar estes enchimentos em qualquer pessoa particular. Além das reações alérgicas, enchimentos com base em colágeno degradam-se rapidamente em injeção e requerem frequentes tratamentos para manter uma aparência mais jovem, mais lisa.

[007] Em fevereiro 2003, composições de enchimento de colágeno derivado de humano receberam aprovação do FDA. Estes colágenos fornecem a vantagem de um risco significantemente reduzido de reações alérgicas. Entretanto, a despeito da incidência reduzida de reações alérgicas, os enchimentos de colágeno derivado de ser humano, todavia, sofreram da rápida degradação do produto injetado.

[008] A pesquisa de enchimentos que não provocam reações alérgicas e mantêm uma aparência mais jovem, mais lisa têm realizado o desenvolvimento de produtos com base em ácido hialurônico (HA). Em dezembro de 2003, o primeiro enchimento com base em HA foi aprovado pelo FDA. Isto foi rapidamente seguido pelo desenvolvimento de outros enchimentos

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3/34 com base em HA.

[009] HA, também conhecido como hialuronano, é um polissacarídeo solúvel em água, de ocorrência natural, especificamente um glicosaminoglicano, que o principal componente da matriz extracelular e é amplamente distribuído em tecidos animais. HA tem excelente biocompatibilidade e não causa reações alérgicas quando implantado em um paciente. Além disso, HA tem a capacidade de se ligar a grandes quantidades de água, tornando-o um excelente volumizante de tecidos moles.

[0010] O desenvolvimento de enchimentos com base em HA que exibem ideais atividades in vivo, bem como ideal usabilidade cirúrgica tem se provado difícil. Por exemplo, enchimentos com base em HA que exibem propriedades de estabilidade desejável in vivo, podem ser tão altamente viscosos que a injeção por meio de agulhas de calibre fino seja difícil. Ao contrário, enchimentos com base em HA que são relativamente facilmente injetados por meio de agulhas de calibre fino frequentemente têm propriedades de estabilidade relativamente inferiores in vivo.

[0011 ] Um método para superar este problema é usar enchimentos com base em HA reticulado. O HA reticulado é formado reagindo HA livre com um agente de reticulação sob condições de reação adequadas. Métodos de preparação de enchimentos de tecido mole com base em HA incluindo tanto HA reticulado quanto livre são bem conhecidos.

[0012] Tem sido proposto incorporar certos agentes terapêuticos, por exemplo, agentes anestésicos tais como lidocaína, em composições com base em HA injetáveis. Infelizmente, Composições injetáveis com base em HA que incorporam lidocaína durante o processo de fabricação são propensos à degradação parcial ou quase completa antes da injeção, particulamente durante as etapas de esterilização em alta temperatura e/ou quando colocadas em armazenagem durante qualquer período de tempo significante. [0013] É um objetivo das composições de enchimento mole com base em HA e métodos de preparação e uso das mesmas como descrito aqui, fornecer enchimentos de tecido mole que não causem reações alérgicas em pacientes, sejam biocompatíveis e sejam estáveis e utilizáveis in vivo e inPetição 870170083271, de 30/10/2017, pág. 11/49

4/34 cluam um ou mais locais de agente anestésicos.

Resumo [0014] A presente descrição refere-se a enchimentos de tecido mole, por exemplo, enchimentos dérmicos e subdérmicos, com base em ácido hialurônico (HA) e sais farmaceuticamente aceitáveis de HA, por exemplo, hialuronato de sódio (NaHA). Composições com base em HA descritas aqui incluem uma quantidade terapeuticamente eficaz de pelo menos um agente anestésico. Em uma modalidade, por exemplo, o agente anestésico é lidocaína. As presentes composições com base em HA incluindo pelo menos um agente anestésico têm uma estabilidade realçada, com relação às composições convencionais com base em HA incluindo, por exemplo, lidocaína, quando submetidas a técnicas de esterilização tais como autoclave, e/ou quando armazenadas durante longos períodos em temperatura ambiente. Métodos para a preparação de tais composições com base em HA são também fornecidos bem como produtos preparados por tais métodos.

[0015] São descritas aqui composições de enchimento de tecido mole, as composições geralmente compreendendo: um componente de ácido hialurônico reticulado com um agente de reticulação selecionado do grupo que consiste em éter de diglicidila de 1,4-butanodiol (BDDE), 1,4-bis(2,3epoxipropóxi)butano, 1,4-bisglicidiloxibutano, 1,2-bis(2,3-epoxipropóxi)etileno e 1-(2,3-epoxipropil)-2,3-epoxiciclo-hexano, e éter de diglicidila de 1,4butanodiol; e pelo menos um agente anestésico combinado com o componente de HA reticulado.

[0016] Todavia, em outras modalidades, o pelo menos um agente anestésico é lidocaína. Em uma outra modalidade, a quantidade do agente anestésico está presente em uma concentração entre cerca de 0,1% e cerca de 5,0% por peso da composição. Em ainda outra modalidade, o agente anestésico está presente em uma concentração entre cerca de 0,2% e cerca de 1,0% por peso da composição. Em uma modalidade, o agente anestésico é lidocaína e está presente em uma concentração de cerca de 0,3% por peso da composição.

[0017] Em ainda outra modalidade, a composição de enchimento de

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5/34 tecido mole tem uma força de extrusão entre cerca de 10 N e cerca de 13 N, por exemplo, em uma taxa de cerca de 12,5 mm/minuto. Em outra modalidade, todavia, a composição tem uma viscosidade entre cerca de 5 Pa*s e cerca de 450 Pa*s, por exemplo, quando medida em cerca de 5 Hz.

[0018] Em uma modalidade, o componente de HA é um gel, por exemplo, um gel hidratado, coesivo. Em uma modalidade, o componente de HA é um gel de HA reticulado tendo não mais do que cerca de 1% a cerca de 10% de HA livre. Para os propósitos desta descrição, HA livre inclui verdadeiramente HA livre bem como cadeias e fragmentos de HA ligeiramente reticulado, todos em forma solúvel em água.

[0019] Todavia, em outra modalidade, o componente de HA compreende mais do que cerca de 10%, por exemplo, mais do que cerca de 15%, por exemplo, até ou mais do que cerca de 20% de HA livre.

[0020] Todavia, em outra modalidade, o componente de HA é um gel compreendendo partículas de HA reticulado em um meio relativamente fluídico de HA livre. Em algumas modalidades, o componente de HA tem um tamanho de partícula médio maior do que cerca de 200 pm, por exemplo, mais do que cerca de 250 pm.

[0021] É também descrita aqui a composição de enchimento de tecido mole compreendendo: um componente de HA reticulado com éter de diglicidila de 1,4-butanodiol (BDDE), o referido componente de HA tendo um grau de reticulação menor do que cerca de 5%, por exemplo, cerca de 2%, e um componente anestésico tendo uma concentração entre cerca de 0,1% e cerca de 5,0% por peso da composição de enchimento de tecido mole, em que o anestésico é lidocaína.

[0022] São também descritos aqui métodos de preparação de composições de enchimento de tecido mole, os métodos compreendendo as etapas de: fornecimento de um componente de HA reticulado com pelo menos um agente de reticulação selecionado do grupo que consiste em éter de diglicidila de 1,4-butanodiol (BDDE), 1,4-bis(2,3-epoxipropóxi)butano, 1,4bisglicidiloxibutano, 1,2-bis(2,3-epoxipropóxi)etileno e 1-(2,3-epoxipropil)-2,3epoxiciclo-hexano, e éter de diglicidila de 1,4-butanodiol ou combinações

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6/34 dos mesmos; ajuste do pH do referido componente de HA para um pH ajustado acima de cerca de 7,2; e adição de uma solução contendo pelo menos um agente anestésico ao componente de HA tendo o pH ajustado para obter a composição de enchimento com base em HA.

[0023] Em outra modalidade, a composição é esterilizada, por exemplo, por autoclave, para formar a composição esterilizada e, em que a composição esterilizada é estável em temperatura ambiente durante pelo menos cerca de meses, por exemplo, pelo menos 9 meses, pelo menos cerca de 12 meses, por exemplo, pelo menos cerca de 36 meses, ou mais.

[0024] Em ainda outra modalidade, o pH ajustado é acima de cerca de 7,5. Em outra modalidade, o método também compreende a etapa de homogeneização do componente de HA durante ou após a etapa de adição da solução contendo o pelo menos um agente anestésico. Em uma outra modalidade, a etapa de homogeneização compreende submeter a composição à mistura com um cisalhamento controlado.

[0025] Em outra modalidade, a etapa de fornecimento de um componente de HA compreende o fornecimento de material de NaHA livre e hidratação do material de NaHA livre seco em uma solução alcalina para obter um gel de NaHA livre, alcalino. Todavia, em outra modalidade, o gel de NaHA livre, alcalino tem um pH maior do que cerca de 8,0. Em ainda outra modalidade o pH é maior do que cerca de 10.

[0026] Em uma outra modalidade, o componente de HA compreende mais do que cerca de 20% de HA livre e a porção reticulada do componente de HA tem um grau de reticulação menor do que cerca de 6% ou menos do que cerca de 5%.

[0027] Em ainda uma outra modalidade, a composição de enchimento de tecido mole tem uma natureza particulada pelo fato de que ela compreende partículas de HA reticulado dispersas em um meio de HA solúvel fluido. Em algumas modalidades, o tamanho médio de tais partículas é pelo menos de cerca de 200 pm, e em outras modalidades o tamanho médio de tais partículas é pelo menos de cerca de 250 pm.

[0028] É também descrita aqui a composição de enchimento de tecido

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7/34 mole compreendendo: um componente de ácido hialurônico (HA) reticulado com éter de diglicidila de 1,4-butanodiol (BDDE), o referido componente de HA tendo um grau de reticulação menor do que cerca de 5%, e um componente anestésico tendo uma concentração entre cerca de 0,1% e cerca de 5,0% por peso da composição de enchimento de tecido mole, em que o anestésico é lidocaína.

[0029] Em uma modalidade específica da invenção, um método de preparação de uma composição de enchimento de tecido mole é também descrito, o método compreendendo as etapas de: fornecimento de material de NaHA livre seco e hidratação do material de NaHA livre seco em uma solução alcalina para obter um gel de NaHA livre, alcalino; reticulação do gel de NaHA livre com BDDE para formar uma composição de HA alcalina reticulada com um grau de reticulação menor do que cerca de 5% e um pH acima de cerca de 7,2; adição de uma solução contendo HCl de lidocaína ao componente de HA tendo o pH ajustado para obter a referida composição de enchimento com base em HA; homogeneização da composição de enchimento com base em HA desse modo formando uma composição de enchimento com base em HA homogeneizado; e esterilização da composição de enchimento com base em HA homogeneizado desse modo formando a composição de enchimento com base em HA esterilizada, em que a composição de enchimento de tecido mole tem um tamanho de partícula maior do que cerca de 200 pm, por exemplo, um tamanho de partícula maior do que cerca de 250 pm.

Breve descrição dos desenhos [0030] A figura 1 ilustra graficamente a viscosidade da amostra 1 preparada sem lidocaína, com lidocaína e ajuste de pH durante a formação, e com lidocaína, porém sem ajuste de pH durante a formação, versus a frequência de cisalhamento.

[0031 ] A figura 2 ilustra graficamente a viscosidade da amostra 2 preparada sem lidocaína, com lidocaína e ajuste de pH durante a formação, e com lidocaína, porém sem ajuste de pH durante a formação, versus a frequência de cisalhamento.

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8/34 [0032] A figura 3 ilustra graficamente a viscosidade da amostra 3 preparada sem lidocaína, com lidocaína e ajuste de pH durante a formação, e com lidocaína, porém sem ajuste de pH durante a formação, versus a frequência de cisalhamento.

[0033] A figura 4 ilustra graficamente a viscosidade da amostra 4 preparada sem lidocaína, com lidocaína e ajuste de pH durante a formação, e com lidocaína, porém sem ajuste de pH durante a formação, versus a frequência de cisalhamento.

[0034] A figura 5 ilustra graficamente a viscosidade da amostra 5 preparada sem lidocaína, com lidocaína e ajuste de pH durante a formação, e com lidocaína, porém sem ajuste de pH durante a formação, versus a frequência de cisalhamento.

[0035] A figura 6 ilustra graficamente as características de viscosidade/elasticidade relativas da amostra 5 preparada sem lidocaína, com lidocaína e ajuste de pH durante a formação, e com lidocaína, porém sem ajuste de pH durante a formação, versus a frequência de cisalhamento.

[0036] A figura 7 ilustra graficamente a viscosidade da amostra 6 preparada sem lidocaína, com lidocaína e ajuste de pH durante a formação, e com lidocaína, porém sem ajuste de pH durante a formação, versus a frequência de cisalhamento.

[0037] A figura 8 ilustra graficamente as características de viscosidade/elasticidade relativas da amostra 6 preparada sem lidocaína, com lidocaína e ajuste de pH durante a formação, e com lidocaína, porém sem ajuste de pH durante a formação, versus a frequência de cisalhamento.

[0038] A figura 9 ilustra graficamente a concentração de lidocaína no gel de amostra 5 no exemplo 4, preparada pelo procedimento de teste 2 versus o tempo.

Definições [0039] Certos termos como usados na especificação destinam-se a referir-se às seguintes definições, como detalhado abaixo. Onde a definição de termos diverge do significado do termo comumente usado, o requerente pretende utilizar as definições fornecidas abaixo, a menos que especificamente

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9/34 indicado.

[0040] Estável em autoclave ou estável à autoclave como aqui usado descreve um produto ou composição que é resistente à degradação, tal que o produto ou composição mantenha pelo menos um, e preferivelmente todos os seguintes aspectos após esterilização por autoclave efetiva: aparência transparente, pH, força de extrusão e/ou características reológicas, concentração de ácido hialurônico (HA), esterilidade, osmolaridade, e concentração de lidocaína.

[0041] Centrifugação como aqui usado refere-se ao processo de uso de forças centrífugas para uniformemente distribuir substâncias de maior e menor densidade. Centrifugação é comumente usada para separar uma fase líquida de uma fase de sólido ou gel. Separações de fase substanciais que resultam de centrifugação seriam pelo menos aquelas visíveis a olho nu, por exemplo, uma fase líquida e uma fase sólida, distintamente separadas quando observadas a olho nu.

[0042] HA de alto peso molecular como aqui usado descreve um material de HA tendo um peso molecular de pelo menos cerca de 1,0 milhão de Daltons (mw > 106 Da ou 1 MDa) a cerca de 4,0 MDa. Por exemplo, o HA de alto peso molecular nas presentes composições podem ter um peso molecular de cerca de 2,0 MDa. Em outro exemplo, o HA de alto peso molecular pode ter um peso molecular de cerca de 2,8 MDa.

[0043] HA de baixo peso molecular como aqui usado descreve um material de HA tendo um peso molecular menor do que cerca de 1,0 MDa. HA de baixo peso molecular pode ter um peso molecular entre cerca de 200,000 Da (0,2 MDa) a menor do que cerca de 1,0 MDa, por exemplo, entre cerca de 300,000 Da (0,3 M Da) a cerca de 750,000 Da. (0,75 MDa).

[0044] Grau de reticulação como aqui usado refere-se às junções intermoleculares que unem as moléculas polímeras de HA individuais, ou cadeias monômeras, em uma estrutura permanente, ou como descrito aqui a composição de enchimento de tecido mole. Além disso, grau de reticulação para os propósitos da presente descrição é também definido como a relação de peso percentual do agente de reticulação para as unidades monoméricas

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10/34 de HA dentro da porção reticulada da composição com base em HA. É medido pela relação de peso de monômeros de HA para reticulador (monômeros de HA:reticulador).

[0045] HA livre como aqui usado refere-se a moléculas polímeras de HA individual que não são reticuladas a, ou muito ligeiramente reticuladas a (grau muito baixo de reticulação) a estrutura macromolecular altamente reticulada (grau mais elevado de reticulação) que compõem a composição de enchimento de tecido mole. HA livre geralmente permanece solúvel em água. HA livre pode alternativamente ser definido como o componente não reticulado, ou ligeiramente reticulado da estrutura macromolecular que compõem a composição de enchimento de tecido mole descrita aqui.

[0046] Coesiva como aqui usado é a capacidade de uma composição com base em HA reter sua forma e ser resistente à deformação. A coesividade é afetada, entre outros fatores, pela relação de peso molecular do HA livre inicial, o grau de reticulação, a quantidade de HA livre residual seguindo a reticulação, e pH da composição com base em HA. Além disso, uma composição com base em HA coesiva resiste à separação de fase quando testada de acordo com o método descrito no exemplo 1 aqui.

Descrição detalhada [0047] A presente descrição de um modo geral refere-se a enchimentos de tecido mole, por exemplo, enchimentos dérmicos e subdérmicos, com base em ácidos hialurônicos (HA) e sais farmaceuticamente aceitáveis de HA, por exemplo, hialuronato de sódio (NaHA). Em um aspecto, composições com base em HA descritas aqui incluem uma quantidade terapeuticamente eficaz de pelo menos um agente anestésico, por exemplo, lidocaína. As presentes composições com base em HA incluindo pelo menos um agente anestésico têm uma estabilidade realçada, com relação às composições convencionais com base em HA incluindo, por exemplo, lidocaína, quando submetidas a temperaturas e pressões elevadas, por exemplo, aquelas experimentadas durante técnicas de esterilização por aquecimento e/ou pressão, por exemplo, autoclave, e/ou por exemplo, quando armazenadas em temperatura ambiente durante um período de tempo prolongado.

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11/34 [0048] As composições estáveis mantêm pelo menos um de, ou todos os seguintes aspectos após esterilização por autoclave efetiva e/ou armazenagem prolongada: aparência transparente, pH para uso em um paciente, força de extrusão e/ou características reológicas, concentração de HA, esterilidade, osmolaridade, e concentração de lidocaína. Métodos ou processos de preparação de tais composições com base em HA são também fornecidos, bem como produtos preparados por tais métodos ou processos.

[0049] Como aqui usado, ácido hialurônico (HA) pode referir-se a qualquer de seus sais de hialuronato, e inclui, porém não está limitado a, hialuronato de sódio (NaHA), hialuronato de potássio, hialuronato de magnésio, hialuronato de cálcio, e combinações dos mesmos.

[0050] Geralmente, a concentração de HA nas composições descritas aqui é preferivelmente de pelo menos 10 mg/mL e até cerca de 40 mg/mL. Por exemplo, a concentração de HA em algumas das composições é em uma faixa entre cerca de 20 mg/mL e cerca de 30 mg/mL. Além disso, por exemplo, em algumas modalidades, as composições têm uma concentração de HA de cerca de 22 mg/mL, cerca de 24 mg/mL, cerca de 26 mg/mL, ou cerca de 28 mg/mL.

[0051] Além disso, a concentração de um ou mais anestésicos é em uma quantidade eficaz para mitigar a dor experimentada em injeção da composição. O pelo menos um anestésico local pode ser selecionado do grupo de ambucaína, amolanona, amilocaína, benoxinato, benzocaína, betoxicaína, bifenamina, bupivacaína, butacaína, butambeno, butanilicaína, butetamina, butoxicaína, carticaína, cloroprocaína, cocaetileno, cocaína, ciclometicaína, dibucaína, dimetisoquina, dimetocaína, diperodon, diciclonina, ecgonidina, ecgonina, cloreto de etila, etidocaína, beta-eucaína, euprocina, fenalcomina, formocaína, hexilcaína, hidroxitetracaína, p-aminobenzoato de isobutila, mesilato de leucinocaína, levoxadrol, lidocaína, mepivacaína, meprilcaína, metabutoxicaína, cloreto de metila, mirtecaína, naepaína, octacaína, ortocaína, oxetazaína, paretoxicaína, fenacaína, fenol, piperocaína, piridocaína, polidocanol, pramoxina, prilocaína, procaína, propanocaína, proparacaína, propipocaína, propoxicaína, pseudococaína, pirrocaína, ropivacaíPetição 870170083271, de 30/10/2017, pág. 19/49

12/34 na, álcool salicílico, tetracaína, tolicaína, trimecaína, zolamina, e sais dos mesmos. Em uma modalidade, o pelo menos um agente anestésico é lidocaína, tal como na forma de HCl de lidocaína. As composições descritas aqui podem ter a concentração de lidocaína entre cerca de 0,1% e cerca de 5% por peso da composição, por exemplo, cerca de 0,2% a cerca de 1,0% por peso da composição. Em uma modalidade, a composição tem a concentração de lidocaína de cerca de 0,3% da composição. A concentração de lidocaína nas composições descritas aqui podem ser terapeuticamente eficazes significando que a concentração é adequada para fornecer um benefício terapêutico sem infligir dano ao paciente.

[0052] Em um aspecto da invenção, é fornecido um método para a preparação de uma composição com base em HA incluindo uma quantidade eficaz de lidocaína, em que o método compreendendo o fornecimento de uma composição precursora compreendendo um gel com base em HA reticurado coesivo, adicionando uma solução contendo lidocaína, por exemplo, na forma de HCl de lidocaína, a ela e homogeneizando a mistura para obter uma composição coesiva, pelo menos parcialmente reticulada com base em HA incluindo lidocaína que é estável à autoclave. O gel com base em HA reticulado, coesivo inclui não mais do que cerca de 1% a cerca de 10% de material de HA livre por volume, por exemplo, não mais do que cerca de 5% de material de HA livre.

[0053] Em algumas modalidades da presente invenção, o componente de HA das presentes composições, a seguir algumas vezes, composição precursora é um gel coesivo, hidratado. Um gel coesivo, relativo a um gel não coesivo, é mais capaz de reter sua forma e ser resistente à deformação, por exemplo, após ser submetido a cisalhamento ou outros estresses. Foi descoberto pelo presente inventor que tais géis coesivos são menos prováveis de substancialmente degradarem-se ou tornarem-se instáveis em tempo prolongado ou quando submetidos a estímulos externos tais como esterilização, relativos a géis não coesivos.

[0054] Sem pretender ser ligado por qualquer teoria particular de operabilidade, acredita-se que a coesividade da composição precursora em alPetição 870170083271, de 30/10/2017, pág. 20/49

13/34 gumas modalidades da invenção age para substancialmente ou totalmente prevenir ou impedir qualquer esgotamento ou degradação do HA reticulado em uma composição com a adição de lidocaína.

[0055] Acredita-se que tal degradação pode primariamente ocorrer por que muitos, talvez a maioria dos géis com base em HA reticulado são convencionalmente fabricados de uma maneira que produz géis que não são suficientemente coesivos para prevenir tal degradação quando a lidocaína é adicionada. Foi atualmente descoberto que a adição de lidocaína a composições reticuladas suficientemente coesivas com base em HA não causa substancial ou significante degradação das composições, e as composições mantêm sua integridade em termos de reologia, viscosidade, aparência e outras características mesmo quando armazenadas durante um período de tempo longo, por exemplo, durante um período de tempo de pelo menos cerca de 6 meses, cerca de 9 meses, cerca de 12 meses, ou cerca de 36 meses ou maior, por exemplo, em temperaturas ambientes, e mesmo após serem submetidas a procedimentos de esterilização, por exemplo, autoclave.

[0056] É uma surpreendente descoberta que formulações de composições reticuladas com base em HA incluindo lidocaína podem ser fabricadas de uma maneira para produzir composições de HA/lidocaína injetáveis, estáveis em esterilização.

[0057] É também descrito aqui um método para a preparação de composições estáveis com base em HA contendo uma quantidade eficaz de lidocaína preparando a composição precursora, por exemplo, um gel com base em HA reticulado, coesivo, adicionando cloridrato de lidocaína ao gel para formar uma mistura de gel de HA/lidocaína, e homogeneizando a mistura, para obter uma composição reticulada com base em HA que é estável à autoclave.

[0058] Em certas modalidades, a composição precursora é um gel com base em HA hidratado, coesivo. Um tal gel coesivo geralmente incluirá não mais do que entre cerca de 1% a cerca de 10% forma líquida-solúvel ou HA livre por volume. Tais géis coesivos são considerados por alguns na indústria serem composições monofásicas, ou substancialmente de fase única,

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14/34 em que menos do que cerca de 1% a cerca de 10% da composição compreende HA livre.

[0059] Todavia, em outras modalidades, a composição precursora é um gel com base em HA hidratado, relativamente não coesivo. Um tal gel não coesivo Geralmente, inclui mais do que 10%, por exemplo, mais do que cerca de 15%, por exemplo, mais do que 20% ou mais de HA livre.

[0060] Em algumas modalidades, a composição precursora pode compreender um primeiro componente preparado de HA relativamente e altamente reticulado em uma fase substancialmente sólida, e um segundo componente compreendendo HA livre ou relativamente menos reticulado em uma fase substancialmente fluídica em que o HA relativamente altamente reticulado é disperso.

[0061] Em algumas modalidades, as presentes composições têm uma natureza um tanto particulada e compreendem partículas de HA relativamente altamente reticulado dispersas em um meio de HA livre. Em algumas modalidades, o tamanho médio de tais partículas de HA reticulado é pelo menos de cerca de 200 pm ou pelo menos cerca de 250 pm. Tais composições particuladas são geralmene menos coesivas do que as composições de outro modo similares que não têm nenhuma partícula distinguível, ou têm partículas tendo um tamanho médio menor do que 200 pm.

[0062] Por exemplo, em algumas modalidades, a composição precursora pode ser fabricada prensando-se uma massa de gel com base em HA relativamente altamente reticulado através de uma peneira ou uma malha para criar partículas de HA relativamente altamente reticulado de tamanho e forma geralmente uniformes. Estas partículas são então misturadas com um material portador, por exemplo, uma quantidade de HA livre para produzir um gel.

[0063] Em outras modalidades, um método de preparação de uma composição com base em HA incluindo uma quantidade eficaz de lidocaína é fornecido, em que o método compreendendo o fornecimento de uma composição precursora incluindo um gel com base em HA pelo menos parcialmente reticulado, de pH substancialmente neutro, e o ajuste do pH do gel

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15/34 para um pH maior do que cerca de 7,2, por exemplo, cerca de 7,5 a cerca de 8,0. O método também compreende a etapa de combinação de uma solução contendo lidocaína, por exemplo, na forma de HCl de lidocaína, com o gel ligeiramente alcalino após o pH ter sido desse modo ajustado e a obtenção de uma composição com base em HA incluindo lidocaína que é estável à autoclave.

[0064] Outro método de preparação de uma composição estável com base em HA contendo uma quantidade eficaz de lidocaína, como descrito em outro lugar aqui, geralmente compreende as etapas de: fornecimento de material de NaHA purificado, por exemplo, na forma de fibras; hidratação do material; e reticulação do material hidratado com a agente adequado de reticulação para formar um gel com base em HA reticulado. O método também compreende as etapas de neutralização e dilatação do gel, e adição ao gel de uma solução contendo lidocaína, preferivelmente um sal acídico de cloridrato de lidocaína, para formar um gel de HA/lidocaína. Além disso, todavia, o método também compreende a homogeneização do gel de HA/lidocaína e empacotamento do gel de HA/lidocaína homogeneizado, por exemplo, em seringas para aplicação. As seringas são então esterilizadas por autoclave em uma temperatura e pressão efetivas. De acordo com a presente descrição, os géis de NaHA/lidocaína coesivos empacotados e esterilizados exibem estabilidade realçada com relação a composições com base em HA incluindo lidocaína que são preparadas usando métodos convencionais. [0065] Os presentes produtos e composições são considerados serem estéreis quando expostos a temperaturas de pelo menos cerca de 120°C a cerca de 130°C e/ou pressões de pelo menos cerca de 0,84 kg/cm2 a cerca de 1,40 kg/cm2 durante a autoclave durante um período de pelo menos cerca de 1 minuto a cerca de 15 minutos.

[0066] Os presentes produtos e composições também permanecem estáveis quando armazenados durante longos períodos de tempo em temperatura ambiente. Preferivelmente, as presentes composições permanecem estáveis durante um período de pelo menos cerca de dois meses, ou pelo menos cerca de seis meses, ou pelo menos cerca de 9 meses, ou pelo mePetição 870170083271, de 30/10/2017, pág. 23/49

16/34 nos cerca de 12 meses, ou pelo menos cerca de 36 meses, em temperaturas de pelo menos cerca de 25°C. Em uma modalidade específica, as composições são estáveis em uma temperatura até cerca de 45°C durante um período de pelo menos dois meses.

[0067] O processo de fabricação inclui, em uma modalidade, a etapa inicial de fornecimento de material de HA cru na forma de fibras ou pó de HA secos. O material de HA cru pode ser HA, seus sais e/ou misturas dos mesmos. Em uma modalidade preferida, o material de HA compreende fibras ou pó de NaHA, e ainda mais preferivelmente, NaHA de fonte bacteriana. Em alguns aspectos da presente descrição, o material de HA pode ser derivado de animal. o material de HA pode ser uma combinação de materiais crus incluindo HA e pelo menos um outro polissacarídeo, por exemplo, glicosaminoglicano (GAG).

[0068] Em algumas modalidades, o material de HA nas composições quase totalmente compreende ou consiste em hA de alto peso molecular. Isto é, quase 100% do material de HA nas presentes composições pode ser HA de alto peso molecular como acima definido. Em outras modalidades, o material de HA nas composições compreende uma combinação de HA de peso molecular relativamente elevado e HA de peso molecular relativamente baixo, como acima definido.

[0069] O material de HA das composições pode compreender entre cerca de 5% a cerca de 95% de HA de alto peso molecular com o equilíbrio do material de HA incluindo HA de baixo peso molecular. Em uma modalidade da invenção, a relação de HA de alto peso molecular para baixo peso molecular é pelo menos cerca de, e preferivelmente mais do que 2 (peso/peso > 2) com o HA de alto peso molecular tendo um peso molecular de acima de 1,0 MDa.

[0070] Será apreciado por aqueles versados na técnica que a seleção de material de HA de alto e baixo peso molecular e suas percentagens ou relações relativas é dependente das características desejadas, por exemplo, força de extrusão, módulo elástico, módulo viscoso e ângulo da fase expresso como a relação de módulo viscoso para módulo elástico, coesividade, etc.

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17/34 do produto com base em HA final. Para informação adicional que pode ser útil no entendimento deste e outros aspectos da presente descrição, veja Lebreton, Publicação de Pedido de Patente dos Estados Unidos No 2006/0194758, a descrição na íntegra do qual é incorporada aqui por esta referência.

[0071] Os géis com base em HA podem ser preparados de acordo com a presente descrição primeiro limpando e purificando material de HA seco ou bruto tendo uma relação de peso molecular elevado/baixo desejada. Estas etapas geralmente envolvem a hidratação das fibras ou pó de HA secos na relação de peso molecular elevado/baixo desejada, por exemplo, usando água pura, e filtrando o material para remover matérias estranhas grandes e/ou outras impurezas. O material hidratado, filtrado é então secado e purificado. O HA de peso molecular elevado e baixo pode ser podem ser limpos e purificados separadamente, ou podem ser misturados entre si, por exemplo, na relação desejada, exatamente antes da reticulação.

[0072] Em um aspecto da presente descrição, fibras de NaHA secas, puras são hidratadas em uma solução alcalina para produzir um gel alcalino de NaHA livre. Qualquer solução alcalina adequada pode ser usada para hidratar o NaHA nesta etapa, por exemplo, porém não limitada a soluções aquosas contendo hidróxido de sódio (NaOH), hidróxido de potássio (KOH), bicarbonato de sódio (NaHCO3), hidróxido de lítio (LiOH), e similares. Em outra modalidade, a solução alcalina adequada é solução aquosa contendo NaOH. O gel alcalino resultante terá um pH acima de 7,5. O pH do gel alcalino resultante pode ser um pH maior do que 9, ou um pH maior do que 10, ou um pH maior do que 12, ou um pH maior do que 13.

[0073] A etapa seguinte no processo de fabricação envolve a etapa de reticulação do gel de NaHA alcalino, hidratado com um agente de reticulação adequado. O agente de reticulação pode ser qualquer agente conhecido ser adequado para a reticulação de polissacarídeos e seus derivados por meio de seus grupos hidroxila. Agentes de reticulação adequados incluem, porém não estão limitados a, éter de diglicidila de 1,4-butanodiol (ou 1,4-bis(2,3epoxipropóxi)butano ou 1,4-bisglicidiloxibutano, todos os quais são comuPetição 870170083271, de 30/10/2017, pág. 25/49

18/34 mente conhecidos como BDDE), 1,2-bis(2,3-epoxipropóxi)etileno e 1-(2,3epoxipropil)-2,3-epoxiciclo-hexano. O uso de mais do que um agente de reticulação ou um agente de reticulação diferente não é excluído do escopo da presente descrição. Em um aspecto da presente descrição, os géis de HA descritos aqui são reticuldos usando BDDE.

[0074] A etapa de reticulação pode ser realizada usando quaisquer métodos conhecidos por aqueles versados na técnica. Aqueles versados na técnica apreciam como otimizar as condições de reticulação de acordo com a natureza do HA, e como realizar a reticulação em um grau otimizado.

[0075] O grau de reticulação para os propósitos da presente descrição é definido como a relação de peso percentual do agente de reticulação para as unidades monoméricas de HA dentro da porção reticulada da composição com base em HA. É medido pela relação de peso de monômeros de HA para reticulador (Monômeros de HA:reticulador).

[0076] O grau de reticulação no componente de HA das presentes composições é pelo menos de cerca de 2% e é até cerca de 20%.

[0077] Em outras modalidades, o grau de reticulação é maior do que 5%, por exemplo, é cerca de 6% a cerca de 8%.

[0078] Em algumas modalidades, o grau de reticulação é entre cerca de 4% a cerca de 12%. Em algumas modalidades, o grau de reticulação é menor do que cerca de 6%, por exemplo, é menor do que cerca de 5%.

[0079] Em algumas modalidades, o componente de HA é capaz de absorver pelo menos cerca de uma vez seu peso em água. Quando neutralizado e dilatado, o componente de HA reticulado e a água absorvida pelo componente de HA reticulado é em uma relação de peso de cerca de 1:1. Os géis com base em HA hidratados resultantes têm uma característica de ser altamente coesivos.

[0080] Os géis com base em HA de acordo com algumas modalidades da invenção podem ter coesividade suficiente tal que os géis não sofram substancial separação de fase após a centrifugação do gel a 2000 rd/min durante 5 minutos. Em outra modalidade, os géis têm a característica de ser capazes de absorver pelo menos uma vez seu peso de água e ter coesiviPetição 870170083271, de 30/10/2017, pág. 26/49

19/34 dade suficiente tal que quando dilatados com água em uma relação de peso de gel/água de cerca de 1:1, os géis mantêm sua integridade, por exemplo, quando submetidos à centrifugação.

[0081] Os géis de HA, reticulados hidratados podem ser dilatados para obter a coesividade desejada. Esta etapa pode ser realizada por neutralização do gel de HA hidratado, reticulado, por exemplo, adicionando-se uma solução aquosa contendo um ácido, tal como HCl. Os géis são então dilatados em uma solução de salina tamponada por fosfato (PBS) durante um tempo suficiente e em uma baixa temperatura.

[0082] Em uma modalidade, os géis dilatados resultantes são altamente coesivos sem nenhuma partícula distinta visível, por exemplo, nenhuma partícula visivelmente distinta quando observados a olho nu. Em uma modalidade, os géis não têm nenhuma partícula visivelmente distinta sob uma magnificação menor do que 35X.

[0083] Os géis substancialmente de fase única, coesivos são atualmente purificados por métodos convencionais tais como, diálise ou precipitação de álcool, para recuperar o material reticulado, para estabilizar o pH do material e para remover qualquer agente de reticulação não reagido. Mais água ou uma solução aquosa ligeiramente alcalina pode ser adicionada para trazer a concentração do NaHA para uma concentração desejada.

[0084] O pH dos géis de HA reticulados, de pH substancialmente neutro, purificados é preferivelmente ajustado para fazer com que os géis tornem-se ligeiramente alcalinos tal que os géis tenham um pH maior do que cerca de 7,2, por exemplo, cerca de 7,5 a cerca de 8,0. Esta etapa pode ser realizada por quaisquer métodos adequados, por exemplo, adicionando-se uma quantidade adequada de NaOH, KOH, NaHCO3 ou LiOH diluída, aos géis ou qualquer outra molécula alcalina, solução e/ou composição de tamponamento conhecidas por alguém versado na técnica.

[0085] Uma quantidade eficaz de lidocaína, tal como HCl de lidocaína, é então adicionada aos géis de NaHA coesivos purificados. Por exemplo, em algumas modalidades, o HCl de lidocaína é fornecido em uma forma de pó que é solubilizada usando água para injeção (WFI). Os géis são mantidos

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20/34 neutros com um tampão ou por ajuste com NaOH diluído a fim de que a composição final de HA/lidocaína tenha um pH substancialmente neutro, desejado. As composições finais de enchimento com base em HA incluindo lidocaína têm uma concentração de lidocaína entre pelo menos cerca de 0,1% e cerca de 5%, por exemplo, cerca de 2% peso/peso da composição, ou em outro exemplo cerca de 0,3%.

[0086] Após a adição do HCl de lidocaína, ou alternativamente, durante a adição do HCl de lidocaína, os géis de HA/lidocaína, ou composições, são homogeneizados para criar géis de HA/lidocaína coesivos altamente homogêneos tendo uma consistência e estabilidade desejadas. A etapa de homogeneização pode compreender misturar, agitar, ou pulsar os géis com uma força de cisalhamento controlada para obter uma mistura substancialmente homogênea.

[0087] As composições de HA/lidocaína descritas aqui exibem uma viscosidade que é dependente das propriedades da composição e a presença de pelo menos um agente anestésico. A viscosidade das composições de HA/lidocaína pode ser de cerca de 50 Pa*s a cerca de 450 Pa*s. Em outras modalidades, a viscosidade pode ser de cerca de 50 Pa*s a cerca de 300 Pa*s, de cerca de 100 Pa*s a cerca de 400 Pa*s, ou cerca de 250 Pa*s a cerca de 400 Pa*s, ou cerca de 50 Pa*s a cerca de 250 Pa*s.

[0088] Após a homogeneização, as composições de HA/lidocaína são introduzidas em seringas e esterilizadas. As seringas úteis de acordo com a presente descrição incluem qualquer seringa conhecida na técnica capaz de liberar composições de enchimento dérmico viscosas. As seringas geralmente têm um volume interno de cerca de 0,4 mL a cerca de 3 mL, mais preferivelmente entre cerca de 0,5 mL e cerca de 1,5 mL ou entre cerca de 0,8 mL e cerca de 2,5 mL. Este volume interno está associado com um diâmetro interno da seringa que desempenha um papel essencial na força de extrusão necessária para injetar composições de enchimento dérmico de alta viscosidade. Os diâmetros internos são geralmente de cerca de de 4 mm a cerca de 9 mm, mais preferivelmente de cerca de 4,5 mm a cerca de 6,5 mm ou de cerca de 4,5 mm a cerca de 8,8 mm. Além disso, a força de extrusão necesPetição 870170083271, de 30/10/2017, pág. 28/49

21/34 sária para liberar as composições de HA/lidocaína da seringa é dependente do calibre da agulha. Os calibres das agulhas usadas geralmente incluem calibres entre cerca de 18G e cerca de 40G, mais preferivelmente cerca de 25G a cerca de 33G ou de cerca de 16G a cerca de 25G. Uma pessoa versada natécnica pode determinar as corretas dimensões da seringa e o calibre da agulha requerido para atingir um requisito de força de extrusão particular.

[0089] A forças de extrusão mostradas pelas composições de HA/lidocaína descritas aqui usando as dimensões de agulha descritas acima estão em velocidades de injeção que são confortáveis a um paciente. Confortável a um paciente é usado para definir uma taxa de injeção que não magoa ou causa dor excessiva a um paciente em injeção ao tecido mole. Alguém versado na técnica apreciará que confortável como aqui usado inclui não apenas o conforto do paciente, porém também o conforto e habilidade do médico ou técnico médico injetar as composições de HA/lidocaína. Embora certas forças de extrusão possam ser obtidas com as composições de HA/lidocaína da presente descrição, alguém versado na técnica entende que forças de extrusão elevadas podem induzir a falta de controle durante a injeção e que tal falta de controle pode resultar em dor adicional ao paciente. As forças de extrusão das presentes composições de HA/lidocaína podem ser de cerca de 8 N a cerca de 15 N, ou mais preferivelmente de cerca de 10 N a cerca de 13 N, ou cerca de 11 N a cerca de 12 N, por exemplo, em uma taxa de extrusão de cerca de 12,5 mm/min.

[0090] Esterilização, como aqui usado, compreende qualquer método conhecido na técnica para efetivamente matar ou eliminar agentes transmissíveis, preferivelmente sem substancialmente alterar a degradação das composições de HA/lidocaína.

[0091] Um método preferível de esterilização das seringas carregadas é por autoclave. A autoclave pode ser realizada aplicando-se uma mistura de calor, pressão e umidade a uma amostra em necessidade de esterilização. Muitas diferentes temperaturas, pressões e tempos de ciclo de esterilização podem ser usados para esta etapa. Por exemplo, as seringas carregadas

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22/34 podem ser esterilizadas em uma temperatura de pelo menos cerca de 120°C a cerca de 130°C ou maior . A umidade pode ou não ser utilizada. A pressão aplicada é em algumas modalidades, dependente da temperatura usada no processo de esterilização. O ciclo de esterilização pode ser pelo menos cerca de 1 minuto a cerca de 20 minutos ou mais.

[0092] Outro método de esterilização incorpora o uso de uma espécie gasosa que é conhecida matar ou eliminar agentes transmissíveis. Preferivelmente, óxido de etileno é usado como o gás de esterilização e é conhecido na técnica ser útil em esterilização de dispositivos e produtos médicos. [0093] Um outro método de esterilização incorpora o uso de uma fonte de irradiação que é conhecida na técnica matar ou eliminar agentes transmissíveis. Um raio de irradiação é alvejado na seringa contendo a solução de HA/lidocaína, e o comprimento de onda de energia mata ou elimina os agentes transmissíveis indesejados. A energia preferível útil inclui, porém não está limitada a luz ultravioleta (UV), irradiação gama, luz visível, microondas, ou qualquer outro comprimento de onda ou faixa de comprimentos de onda que mate ou elimine os agentes transmissíveis indesejados, preferivelmente sem alterar substancialmente a degradação da composição de HA/lidocaína.

[0094] São também descritos em outra modalidade, métodos de fabricação de composições coesivas com base em HA geralmente compreendendo as etapas de fornecimento de um gel com base em HA reticulado sem um anestésico, (a seguir, algumas vezes, um gel precursor) ajustando o pH do gel precursor para obter a gel tendo um pH entre cerca de 7,2 e 8,0, e adicionando uma quantidade adequada de lidocaína, ou outro agente anestésico, aos géis ajustados ao pH para obter coesiva composições com base em HA que incluem um agente anestésico. Em uma modalidade, o gel precursor é um gel substancialmente de fase única, altamente coesivo compreendendo não mais do que cerca de 1% a cerca de 10% de HA livre por volume, por exemplo, não mais do que cerca de 10% de HA livre por volume. Em outra modalidade, o gel precursor é um gel relativamente menos coesivo compreendendo pelo menos 10% a cerca de 20% ou mais HA livre por voPetição 870170083271, de 30/10/2017, pág. 30/49

23/34 lume.

[0095] Exemplo 1 [0096] Método para testar quanto à coesividade do gel [0097] Para propósitos de exemplo apenas e não serem considerados como limitantes da presente invenção de qualquer maneira, os seguintes testes podem ser realizados a fim de evidência ou quantificar a coesividade de uma composição em gel baseada em HA.

[0098] Primeiro, 0,2 g ou 0,4 g de uma composição em gel a ser testada é colocado em uma seringa de vidro. Depois, 0,2 g ou mais de tampão de fosfato é adicionado à seringa e a mistura é cuidadosamente misturada durante cerca de 1 hora para obter uma mistura homogênea. Em seguida, a mistura homogeneizada é centrifugada durante 5 min a 2000 tr/min para remover as bolhas de ar e para permitir a decantação de quaisquer partículas. A seringa é em seguida mantida em uma posição vertical e uma gota de colorante de eosina é depositada na superfície do gel por meio de uma seringa e uma agulha de 18G. Após 10 min, a tintura lentamente difundiu-se através do gel.

[0099] Após diluição do gel, homogeneização e decantação, um gel de coesividade relativamente baixa mostra uma separação de fase (uma fase menos viscosa diluída superior sem partículas e uma inferior composta de partículas decantadas que são visíveis a olho nu ou sob microscópio). Sob as mesmas condições, um gel altamente coesivo não mostra substancialmente nenhuma separação de fase, e a tintura é prevenida de difundir-se na formulação coesiva. Um gel relativamente menos coesivo, por outro lado, mostra uma separação de fase clara.

[00100] Exemplo 2 [00101] Síntese de um enchimento de tecido mole com Lidocaína [00102] Fibras ou pó de NaHA são hidratados em uma solução alcalina, por exemplo, uma solução aquosa contendo NaOH. A mistura é misturada em temperatura ambiente, cerca de 23°C, para formar um gel de HA alcalino, substancialmente homogêneo.

[00103] Um agente de reticulação, BDDE, é diluído em uma solução

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24/34 aquosa e adicionado ao gel de HA alcalino. A mistura é homogeneizada durante diversos minutos.

[00104] Alternativamente, BDDE pode ser adicionado diretamente às fibras de HA (estado seco) no começo do processo, antes da hidratação. A reação de reticulação em seguida iniciará relativamente lentamente em temperatura ambiente, garantindo ainda melhor homogeneidade e eficácia da reticulação. Métodos de reticulação de polímeros no estado seco usando um agente de reticulação polifuncional tal como BDDE são descritos em, por exemplo, Piron et al., Patente dos Estados Unidos no 6.921.819 que é incorporada aqui por referência em sua totalidade como se fosse parte da presente especificação.

[00105] A mistura de gel de HA reticulada resultante é em seguida aquecida a cerca de 50°C durante cerca de 2,5 horas. O material é agora um gel de HA/BDDE altamente reticulado (aspecto = gel sólido). Este gel reticulado é em seguida neutralizado com uma solução acídica adequada. O gel de HA neutralizado é em seguida dilatado em um tampão de fosfato em uma temperatura fria, por exemplo, uma temperatura de cerca de 5°C, para obter um gel de HA altamente coesivo. Neste exemplo específico, a solução salina tamponada por fosfato contém água para injeção (WFI), fosfato de hidrogênio de dissódio, e fosfato de di-hidrogênio de sódio. Quando neutralizado e dilatado, o componente de HA reticulado e água absorvida pelo componente de HA reticulado estão em uma relação de peso de cerca de 1:1.

[00106] O gel de HA dilatado coesivo é em seguida mecanicamente agitado e carregado em membranas de diálise e dialisado contra um tampão de fosfato. O gel de HA é em seguida carregado em membranas de diálise e dialisado contra um tampão de fosfato durante até diversos dias com mudanças regulares do banho, a fim de remover o reticulador não reagido, para estabilizar o pH próximo à neutralidade (pH=7,2) e para garantir osmolaridade apropriada do gel de HA. A osmolaridade do gel de HA coesivo resultante é entre cerca de 200 mOsmol e cerca de 400 mOsmol, mais preferivelmente cerca de 300 mOsmol.

[00107] Após diálise, o gel de HA coesivo resultante tem um pH subsPetição 870170083271, de 30/10/2017, pág. 32/49

25/34 tancialmente neutro, preferivelmente cerca de 7,2, e nenhuma partícula visivelmente distinta em um meio fluídico quando observada em uma magnificação menor do que cerca de 35X.

[00108] Cloridrato de lidocaína (HCl de lidocaína) em forma de pó é primeiro solubilizado em WFI e filtrado através de um filtro de 0,2 pm. Solução de NaOH diluída é adicionada ao gel de HA coesivo a fim de alcançar um pH levemente básico (por exemplo, um pH entre cerca de 7,5 e cerca de 8). A solução de HCl de lidocaína é em seguida adicionada ao gel levemente básico para alcançar uma concentração desejada final, por exemplo, uma concentração de cerca de 0,3% (peso/peso). O pH resultante da mistura de HA/lidocaína é em seguida cerca de 7 e a concentração de HA é cerca de 24 mg/mL. Mistura mecânica é realizada a fim de obter uma homogeneidade apropriada em um reator padrão equipado com um mecanismo misturador apropriado. A composição resultante é coesiva.

[00109] Se desejado, uma quantidade adequada de gel livre de HA pode ser adicionada à mistura de gel de HA/lidocaína com a vantagem de aumentar as cinéticas de distribuição de lidocaína. Por exemplo, fibras livres de HA são dilatadas em uma solução de tampão de fosfato, a fim de obter um gel viscoelástico homogêneo. Este gel livre de HA é em seguida adicionado ao gel de HA/lidocaína reticulado (por exemplo, em cerca de 5%, peso/peso). O gel resultante é em seguida carregado em seringas estéreis e tratado com autoclave em temperaturas e pressões suficientes para esterilização durante pelo menos cerca de 1 minuto.

[00110] Após autoclave, o produto de HA/lidocaína final é empacotado e distribuído a médicos. O produto fabricado de acordo com este método exibe uma ou mais características de estabilidade como definido em outro lugar aqui. Por exemplo, o produto de HA/lidocaína tratado com autoclave tem uma viscosidade, coesividade, e força de extrusão que são aceitáveis. Nenhuma degradação do produto de gel de HA/lidocaína é encontrada durante o teste do produto após o produto ter passado diversos meses em armazenagem.

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26/34 [00111] Exemplo 3 [00112] Propriedades de enchimentos de tecido mole [00113] Propriedades de composições de HA/lidocaína fabricadas de acordo com métodos descritos aqui são mostradas na tabela 1 abaixo. Força de extrusão por exemplo, foi medida usando um Sistema de Testagem de Materiais Avançado INSTRON® Modelo 5564 (Instron, Norwood, MA) utilizando o software BLUEHILL® versão 2.11 (Instron, Norwood, MA). Outros dados reológicos foram coletados usando uma coluna de teste Versa com um dinamômetro MECMESIN® AGF 100 N (Mecmesin Limited, West Sussex, United Kingdom) utilizando o software Emperor e um Reômetro TERMO FISHER SCIENTIFIC® RS600 (Thermo Fisher Scientific, Inc. Corp., Waltham, MA).

Tabela 1

	Composição de HA/lidocaína
Aparência	Gel transparente homogêneo
pH	7,2
Força de extrusão (N)	10,8N
Conteúdo de NaHA	23,7 mg/g
Esterilidade	Estéril (SAL<10^-6)
Osmolaridade	321 mOsml/kg
Conteúdo de Lidocaína (%)	0,29%
Conteúdo de 2,6-dimetilanilina	Adapta-se

[00114] A fim de garantir que as especificações do produto foram mantidas durante toda a vida de prateleira da composição, múltiplos estudos foram realizados. Além disso, conteúdo de 2,6-dimetilanilina foi medido a fim de confirmar a ausência de degradação de lidocaína.

[00115] A tabela 2 fornece um sumário de resultados de teste de estabilidade sobre a composição fabricada como descrito aqui.

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Tabela 2

Teste	Composição de HA/lidocaína resultados de resultados	resultados de 9 meses
3 meses	de 6 meses
Aspecto transparente e homogêneo	Adapta-se	Adapta-se	Adapta-se
pH	7,2	7,2	7,2
Força de extrusão (N)	11,9	11,1	11,9
Concentração de NaHA (mg/g)	23,8	23,1	24,2
Esterilidade	Adapta-se	Adapta-se	Adapta-se
Osmolaridade (mOsm/kg)	349	329	342
Conteúdo de Lidocaína (%)	0,29	0,29	0,29
Conteúdo de 2,6- dimetilanilina	Adapta-se	Adapta-se	Adapta-se

[00116] Foi descoberto que no tempo de 9 meses (a partir da data de fabricação), a composição continua a alcançar as especificações do produto. [00117] Exemplo 4 [00118] Estabilidade de enchimentos de tecido mole [00119] As seguintes formulações de HA esterilizadas (Amostras 1-6) foram obtidas para teste.

[00120] Amostra 1 é uma mistura de HA livre 13,5mg/g, com hidroxil propil metil celulose (HPMC) 5,5 mg/g.

[00121] Amostra 2 contém 5,5-6,5 mg/mL de HA de alto peso molecular (cerca de 4-6 MDa) e um grau de elasticidade (G') de cerca de 200.

[00122] Amostra 3 é um gel não comercial preparado de partículas distintas de gel misturadas com HA livre (80/20, peso/peso). As partículas de HA (80%) são obtidas por desintegração de um gel de HA pesadamente reticulado sólido. As partículas têm diferentes formas e dimensões (diversos mícrons a diversos mm).

[00123] Amostra 4 é uma formulação de HA reticulado coesivo. A amostra 4 tem uma concentração de HA de cerca de 18 mg/mL, menos do que 6% de reticulação, um G' de cerca de 60 e uma relação de HA de alto peso molecular para baixo peso molecular de cerca de 95% a cerca de 5%, a cerPetição 870170083271, de 30/10/2017, pág. 35/49

28/34 ca de 100% de HA de alto peso molecular.

[00124] Amostra 5 é uma formulação de HA reticulado coesivo. A amostra 5 tem uma concentração de HA de cerca de 24 mg/mL, cerca de 6% de reticulação, um G' de cerca de 170 e uma relação de HA de alto peso molecular para baixo peso molecular de cerca de 95% para 5% a cerca de 100% de HA de alto peso molecular.

[00125] Amostra 6 é uma formulação de HA reticulado coesivo. A amostra 6 tem uma concentração de HA de cerca de 20 mg/mL, cerca de 5% de reticulação, um G' de cerca de 450 e um uma relação de HA de alto peso molecular para baixo peso molecular de cerca de 10% para 90%.

[00126] Cada das amostras 1 a 6 foi preparada como segue:

[00127] Teste 1: cerca de 20 g de cada das amostras 1 a 6 foram individualmente misturados com uma solução de cloridrato de lidocaína e homogeneizados. Neste teste, durante a adição do cloridrato de lidocaína, o pH do gel de amostra é substancialmente neutro e não é ajustado, por exemplo, com a adição de solução de hidróxido de sódio. Cada das amostras foi então carregada em seringas e tratada com autoclave.

[00128] Teste 2: cerca de 20 g de cada das amostras 1 a 6 foram individualmente misturados com uma solução de cloridrato de lidocaína, e o pH foi ajustado para 7,2 usando solução de NaOH como descrito no exemplo 2 acima. Cada das amostras foi então carregada em seringas e tratada com autoclave.

[00129] Teste 3: cerca de 20 g de cada das amostras 1 a 6 foram misturados com uma quantidade equivalente de WFI com o objetivo de executar a diluição. Nenhuma lidocaína foi adicionada. Cada das amostras foi então carregada em seringas e tratada com autoclave.

[00130] Resultados: Para cada das amostras nos testes 1 a 3, medições reológicas foram realizadas usando o equipamento de medição reológica descrito no exemplo 3. Os resultados são geralmente mostrados graficamente nas figuras de acompanhamento 1 a 8. Definições de símbolos e unidades na tabela 3 De um modo geral aplicam-se às figuras 1 a 8.

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Tabela 3

Símbolo	Nome	Unidades	Descrição
G’	Módulo Elástico	Pa	Quantifica o comportamento como sólido ou resistência à deformação permanente.
G	Módulo Viscoso	Pa	Quantifica o comportamento como líquido ou resistência ao fluxo.
(G/G’)	Tan Delta		(G''/G') a relação do Módulo Viscoso paa o Módulo Elástico e útil para quantificar a extensão da elasticidade. Um valor é abaixo de 1 significa que o fluido é mais elástico, ao contrário, um valor acima de 1 significa que o fluido é mais viscoso.

[00131] Como uma norma geral, uma amostra estável incluindo lidocaína preparada de acordo com o teste 1 ou 2 exibiria viscosidade similar, quando submetida a cisalhamento em uma faixa de frequências, como as amostras preparadas de acordo com o teste 3 que não contêm nenhuma lidocaína. [00132] Foi descoberto que nenhuma das amostras 1 e 2 com lidocaína foi estável à autoclave e como um resultado, degradam-se e tornam-se substancialmente menos viscosas em ambos Teste 1 e Teste 2. As figuras 1 e 2 em particular ilustram que as amostras 1 e 2 têm uma viscosidade reduzida e, portanto, foram menos estáveis ao cisalhamento quando o produto foi preparado com lidocaína quando comparado ao produto sem lidocaína, mesmo quando a amostra foi preparada de acordo com o teste 2, em que um ajuste de pH foi realizado.

[00133] A amostra 3 foi descoberta ser estável à autoclave no teste 2, porém não foi estável no teste 1 e as amostras 4 e 5 foram descobertas serem estáveis à autoclave apenas no teste 2. As figuras 3, 4 e 5 ilustam que as amostras 3, 4 e 5 foram estáveis quando preparadas com lidocaína e nenhum ajuste de pH, porém não foram estáveis quando a lidocaína foi adicionada e o pH ajustado consequentemente. A figura 6 ilustra que a amostra 5 preparada com lidocaína e controle de pH teve similares propriedades viscosa e elástica (G/G’) para a amostra 5 preparada sem lidocaína. Quando a amostra 5 foi preparada com lidocaína e nenhum ajuste de pH, as propriedades viscosa e elástica alteraram.

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30/34 [00134] A amostra 6 foi descoberta ser estável à autoclave em ambos Teste 1 e Teste 2. A figura 7 ilustra que a amostra 6, nenhuma matéria como é produzida, teve similar viscosidade e, portanto, pouco cisalhamento em comparação entre os protocolos de preparação. A figura 8 também ilustra que a amostra 6 reteve similares propriedades viscosa e elástica e nenhuma matéria como ela foi produzida.

[00135] Exemplo 5 [00136] Liberação Cinética [00137] O seguinte exemplo ilustra a cinética de liberação de lidocaína do gel de HA coesivo de acordo com a presente descrição. O objetivo do exemplo é mostrar que a lidocaína contida nos géis de HA coesivo, de acordo com a presente descrição, é liberada livremente dos géis quando colocada na pele.

[00138] A diálise foi realizada durante diferentes períodos de tempo (cerca de 10 g de gel foram colocados em uma pequena bolsa de diálise e em seguida colocados em 30 g de água). Após cada diálise ser interrompida em um determinado tempo, o gel foi homogeneizado com uma espátula e a quantidade de lidocaína foi determinada pelo método UV. A concentração final do banho de diálise atende à concentração teórica de lidocaína que indica a liberação livre de lidocaína do gel.

[00139] A tabela 3 ilustra a concentração de lidocaína em % (peso/peso), correção do valor e determinação do % de lidocaína liberada. Adicionalmente, a figura 9 ilustra graficamente os resultados tabulados na tabela 3 abaixo. Na figura 9 é indicada a concentração de equilíbrio teórico de lidocaína que existiria se a lidocaína fosse retida no gel ou e se ela fosse livremente liberada. Como está graficamente ilustrado aqui, os dados sugerem que a lidocaína é livremente liberada do gel.

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Tabela 3

	MMA3056	MMA4031-EC6	MMA4031-EC2	MMA4031-EC3	MMA4031-EC4	MMA4031-EC5	MMA4029-EC7
Tempo de diálise (h)	0 h	1 h 30 min	5 h	7 h	23 h	48 h	72 h
[lidocaína] (%)	0,29	0,20	0,16	0,15	0,08	0,07	0,07

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32/34 [00140] O perfil de concentração de lidocaína na amostra 5 de exemplo 4 (figura 9) mostra que em tempo prolongado ela atinge um equilíbrio que corresponde à liberação livre de lidocaína. Este estudo in vitro mostra que a lidocaína é livremente liberada do gel e não se manteve no gel uma vez que implantado.

[00141] Embora a invenção tenha sido descrita e ilustrada com um certo grau de particularidade, entende-se que a presente descrição foi feita apenas a título de exemplo, e que numerosas mudanças na combinação e disposição de partes podem ser usadas como recurso por aqueles versados na técnica sem afastar-se do escopo da invenção, como a seguir reivindicado. [00142] A menos que de outro modo indicado, todos os números expressando quantidades de ingredientes, propriedades tais como peso molecular, condições de reação, e assim em diante usados no relatório e reivindicações devem ser entendidos como sendo modificados em todos os casos pelo term cerca de. Consequentemente, a menos que indicado ao contrário, os parâmetros numéricos mencionados na especificação e reivindicações anexas são aproximações que podem variar dependendo das propriedades desejadas que a presente invenção pretende obter. No mínimo, e não como uma tentativa de limitar o pedido da doutrina de equivalentes ao escopo das reivindicações, cada parâmetro numérico deve pelo menos ser construído considerando o número de dígitos significantes reportados e aplicando técnicas de rotina ordinária. Apesar de que as faixas numéricas e parâmetros que mencionam o amplo escopo da invenção são aproximações, os valores numéricos mencionados nos exemplos específicos são reportados tão precisamente quanto possível. Qualquer valor numérico, entretanto, inerentemente contém certos erros necessariamente resultantes do desvio padrão encontrado em suas respectivas medições de teste.

[00143] Os termos um, uma (a), um, uma (an), o, a e referentes similares usados no contexto de descrição da invenção (especialmente no contexto das seguintes reivindicações) devem ser construídos para abranger tanto o singular quanto o plural, a menos que de outro modo indicado aqui ou claramente contradito pelo contexto. A citação de faixas de valores incluPetição 870170083271, de 30/10/2017, pág. 40/49

33/34 sa é meramente destinada a servir como um método resumido de referir-se individualmente a cada valor separado que se inclui na faixa. A menos que de outro modo indicado aqui, cada valor individual é incorporado na especificação como se ele fosse individualmente citado aqui. Todos os métodos descritos aqui podem ser realizados em qualquer ordem adequada, a menos que de outro modo indicado aqui, ou de outro modo claramente contradito pelo contexto. O uso de qualquer e todos os exemplos, ou linguagem exemplar (por exemplo, tal como) fornecidos aqui destina-se meramente a melhor esclarecer a invenção e não apresenta uma limitação sobre o escopo da invenção de outro modo reivindicada. Nenhuma linguagem no relatório deve ser construída como indicando qualquer elemento não reivindicado essencial à prática da invenção.

[00144] Grupos de elementos alternativos ou modalidade da invenção que são descritos aqui não devem ser construídos como limitações. Cada membro do grupo pode ser referido e reivindicado individualmente ou em qualquer combinação com outros membros do grupo ou outros elementos encontrados aqui. É antecipado que um ou mais membros de um grupo podem ser incluídos em, ou deletados de, um grupo de razões de conveniência e/ou patenteabilidade. Quando qualquer tal inclusão ou deleção ocorre, a especificação é julgada conter o grupo como modificado, desse modo atendendo a descrição escrita de todos os grupos Markush usados nas reivindicações anexas.

[00145] Certas modalidades desta invenção são descritas aqui, incluindo o melhor modo conhecido pelos inventores para realizar a invenção. De fato, variações sobre estas modalidades descritas tornar-se-ão evidentes para aqueles versados na técnica na leitura da descrição anterior. O inventor espera que os técnicos versados empreguem tais variações quando apropriado, e os inventores pretendem que a invenção seja praticada de outro modo que não o especificamente descrito aqui. Consequentemente, esta invenção inclui todas as modificações e equivalentes da matéria objeto mencionada nas reivindicações anexas a ela como permitido pela lei aplicável. Além disso, qualquer combinação dos elementos acima descritos em todas as variaPetição 870170083271, de 30/10/2017, pág. 41/49

34/34 ções possíveis dos mesmos é abrangida pela invenção a menos que de outro modo indicado aqui ou de outro modo claramente contradito pelo contexto.

[00146] Além disso, numerosas referências foram feitas a patentes e publicações impressas em toda esta especificação. Cada uma das referências acima citadas e publicações impressas é individualmente incorporada aqui por referência em sua totalidade.

[00147] As modalidades específicas descritas aqui podem ser também limitadas nas reivindicações usando consistindo em ou e consistindo essencialmente em linguagem. Quando usado nas reivindicações, se quando depositado em, ou adicionado por emenda, o termo de transição consistindo em exclui qualquer elemento, etapa, ou ingrediente não especificado nas reivindicações. O termo de transição consistindo essencialmente em limita o escopo de uma reivindicação aos materiais ou etapas especificados e aqueles que não afetam materialmente as características básicas e novas. As modalidades da invenção desse modo reivindicadas são inerentemente ou expressamente descritas e possibilitadas aqui.

[00148] Em síntese, deve-se entender que as modalidades da invenção são descritas aqui ilustrativas dos princípios da presente invenção. Outras modificações que podem ser empregadas incluem-se no escopo da invenção. Desse modo, a título de exemplo, porém não de limitação, configurações alternativas da presente invenção podem ser utilizadas de acordo com os ensinamentos inclusos. Consequentemente, a presente invenção não está limitada àqueles precisamente como mostrado e descrito.

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Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Método de preparação de uma composição de enchimento de tecido mole caracterizado por o método compreender as etapas de:

• fornecimento de um componente de HA reticulado com pelo menos um agente de reticulação selecionado do grupo que consiste em 1,4-butanodiol diglicil éter (BDDE), 1,4-bis(2,3epoxipropóxi) butano, 1,4-bisglicidiloxibutano, 1,2-bis(2,3epoxipropóxi)etileno e 1-(2,3-epoxipropil)-2,3-epoxiciclohexano, ou combinações dos mesmos;

- em que o componente de HA pode compreender de 5% a 95% de HA de alto peso molecular com o equilíbrio do componente de HA incluindo HA de baixo peso molecular, sendo que relação de HA de alto peso molecular para baixo peso molecular é pelo menos 2, sendo que o dito HA de alto peso molecular tem um peso molecular entre 1,0 MDa e 4,0 MDa e o dito HA de baixo peso molecular tem um peso molecular entre 0,2 MDa e 1,0 MDa;

- em que o componente de HA possui de 1% a 20% de HA livre por volume;

- em que o componente HA possui um grau de reticulação de 2% a 20% e concentração entre 10 mg/mL e 40 mg/mL;

• dialisar o dito componente de HA contra um tampão de fosfato de modo que o pH seja 7,2;

• ajuste do pH do referido componente de HA de 7,2 para um pH ajustado entre 7,5 e 8,0; e • adição de uma solução contendo um agente anestésico ao referido componente de HA para obter uma composição de enchimento de tecido mole com base em HA;

- em que o agente anestésico é cloridrato de lidocaína e possui uma concentração de 0,1% a 5% em peso da composição.

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2. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a referida composição de enchimento de tecido mole ser coesiva.
3. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por compreender a etapa de homogeneização do componente de ácido hialurônico durante ou após a etapa de adição da dita solução contendo o dito agente anestésico.
4. Método de acordo com a reivindicação 3, caracterizado por a referida etapa de homogeneização compreender submeter a referida composição à mistura com um cisalhamento controlado.
5. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a referida etapa de fornecimento de um componente de HA compreender fornecer material de NaHA não reticulado seco e a hidratação do referido material de NaHA não reticulado seco em uma solução alcalina para obter um gel de NaHA não reticulado, alcalino.
6. Método de preparação de uma composição de enchimento com base em HA coesiva, caracterizado por o método compreender as etapas de:

• fornecimento de material de NaHA não reticulado seco e hidratação do referido material de NaHA não reticulado seco em uma solução alcalina para obter um gel de NaHA não reticulado, alcalino; sendo a concentração de NaHA entre 10 mg/mL e 40 mg/mL;

• reticulação do referido gel de NaHA não reticulado com BDDE para formar uma composição de HA alcalina reticulada com um pH 7,2;

• adição de 0,1% a 5%, em peso da composição, de cloridrato de lidocaína ao referido componente de HA tendo o referido pH ajustado para obter a referida composição de enchimento com base em HA, em que o dito componente de HA possui um grau de reticulação de 2% a 20%, sendo que o dito componente de HA compreende entre 5% e 95% de HA de alto peso molecular com o equilíbrio do componente de HA incluindo HA de baixo peso molecular, sendo que relação de HA de alto peso molecular para baixo peso

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3/3 molecular é pelo menos 2, sendo que o dito HA de alto peso molecular tem um peso molecular entre 1,0 MDa e 4,0 MDa e o dito HA de baixo peso molecular tem um peso molecular entre 0,2 MDa e 1,0 MDa;

• homogeneização da referida composição de enchimento com base em HA desse modo formando uma composição de enchimento com base em HA homogeneizado; e • esterilização da referida composição de enchimento com base em HA homogeneizado desse modo formando a referida composição de enchimento com base em HA coesiva, em que a referida composição de enchimento com base em HA coesiva tem uma força de extrusão entre 10 N e 13 N em uma taxa de extrusão de 12,5 mm/minuto e tem uma viscosidade entre 5 Pa*s e 450 Pa*s quando medida em 5 Hz.

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Viscosidade Viscosidade