CN111643730A - 注射用交联透明质酸凝胶的制备方法及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种注射用交联透明质酸凝胶的制备方法及应用。本发明注射用交联透明质酸凝胶的制备方法包括下述步骤：将透明质酸或其盐加入碱性或者酸性溶液中，得到第一溶液；将第一溶液与交联剂混合，得到第二溶液；将第二溶液置于微波反应器中进行交联反应，得到注射用交联透明质酸凝胶，采用微波交联替代传统反应条件，加快交联反应速度，缩短生产周期，并且所制备的注射用交联透明质酸凝胶产品具有更高的交联效率及交联均匀性，明显延长凝胶体内的维持时间。

Description

注射用交联透明质酸凝胶的制备方法及应用
技术领域
本发明涉及医学美容和生物医疗技术领域，尤其涉及一种注射用交联透明质酸凝胶的制备方法及应用。
背景技术
透明质酸(Hyaluronic acid，HA)又名玻尿酸，是由D-葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基葡萄糖交替排列构成的长链高分子黏多糖，广泛分布于人体各部位，具有良好的亲水性、黏弹性、润滑性和生物相容性，并且已经在医学领域得到广泛的应用。
人体皮肤中含有大量的HA，但随着年龄的增长，皮肤中的HA含量会逐渐降低，导致皮肤褶皱、萎缩，注射HA可以起到美容填充的作用。
天然HA存在稳定性差、对透明质酸酶及自由基敏感、体内保留时间短、在水体系中缺乏力学强度等缺点，限制了其在生物医学领域中的发展应用。对HA结构进行化学修饰，可以提高其力学强度和抗酶解性能、获得新的生物活性和功能性的HA交联衍生物，进一步开发新型医用生物材料，如新型软组织填充材料、关节腔注射液、组织工程支架材料及新型药物靶向材料。
常用的交联方法是将透明质酸钠和交联剂，如1,4-丁二醇二缩水甘油醚(BDDE)、1,2,7,8-二环氧辛烷(DEO)和二乙烯基砜(DVS)等，在碱性条件下交联，区别主要在于HA与交联剂的比例及交联反应条件，通过这些条件一定程度上控制交联度。
目前，见诸报道的文献中，交联过程均采用传统保温方式，通过热传递的方式使得反应体系达到目标温度。此方法无法精准控制反应体系的热分布，必然无法保证交联均匀性。目前还没有使用微波反应实现HA与交联剂发生交联的报道。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种注射用交联透明质酸凝胶的制备方法及应用。
本发明基于以下构思：目前行业内制备交联透明质酸凝胶均采用传统保温方式，即通过热传递的方式使得反应体系达到目标温度。本发明利用微波的致热与非致热两重效应来克服传统加热方式升温慢、热分布不均匀、交联反应效率低下、交联均匀性差等一系列缺点，所得产品交联效率高，均匀性好，体内维持时间长。
微波具有非常好的穿透性，微波透入介质时，由于微波能与介质发生一定的相互作用，使得介质的分子每秒产生数以亿计次的震动，介质的分子间互相产生摩擦，引起的介质温度的升高，使介质材料内部、外部几乎同时加热升温，形成体热源状态，大大缩短了常规加热中的热传导时间，且物料内外加热均匀一致。同时分子本身的热运动和相邻分子之间的相互作用，使分子随电场变化而摆动的规则受到了阻碍，因此分子间产生摩擦作用，一部分能量转化为分子热能，造成分子运动的加剧，分子的高速旋转和振动使分子处于亚稳态，这有利于分子进一步电离或处于反应的准备状态。微波对介质材料是瞬时加热升温，升温速度快。另一方面，微波的输出功率随时可调，介质温升可无惰性的随之改变，不存在“余热”现象，极有利于自动控制和连续化生产的需要。
本发明具体技术方案如下：
1.一种注射用交联透明质酸凝胶的制备方法，其包括下述步骤：
将透明质酸或其盐加入碱性或者酸性溶液中，得到第一溶液；
将第一溶液与交联剂混合，得到第二溶液；
将第二溶液置于微波反应器中进行交联反应，得到注射用交联透明质酸凝胶。
2.根据项1所述的制备方法，其中，当为碱性溶液时，所述第一溶液的pH值为9-13，优选为11-13。
3.根据项1所述的制备方法，其中，当为酸性溶液时，所述第一溶液的pH值为2-5，优选为2-4。
4.根据项1-3任一项所述的制备方法，其中，所述交联剂选自二缩水甘油醚、二乙烯基砜、1,2,7,8-二环氧辛烷、1,3-二环氧丁烷和三偏磷酸钠中的一种或两种以上。
5.根据项1-4任一项所述的制备方法，其中，所述透明质酸的分子量为500k-3000kDa，优选为500k-2500kDa，进一步优选为800k-2000kDa。
6.根据项1-5任一项所述的制备方法，其中，所述交联剂与所述透明质酸或其盐的质量比为0.2-2:100，优选为0.2-1:100，进一步优选为0.5-1:100。
7.根据项1-6任一项所述的制备方法，其中，微波反应的反应温度为20-60℃，优选为25-60℃，进一步优选为25-40℃；优选的，微波反应的反应时间为0.5-24h，优选为6-24h，进一步优选为6-10h。
8.一种注射用交联透明质酸凝胶，其通过项1-7任一项所述的制备方法制备得到。
9.一种注射用交联透明质酸凝胶，其中，所述注射用交联透明质酸凝胶通过包括下述步骤的方法制备得到：
将透明质酸或其盐加入碱性或者酸性溶液中，得到第一溶液；
将第一溶液与交联剂混合，得到第二溶液；
将第二溶液置于微波反应器中进行交联反应，得到注射用交联透明质酸凝胶。
10.根据项9所述的注射用交联透明质酸凝胶，其中，当为碱性溶液时，所述第一溶液的pH值为9-13，优选为11-13。
11.根据项9所述的注射用交联透明质酸凝胶，其中，当为酸性溶液时，所述第一溶液的pH值为2-5，优选为2-4。
12.根据项9-11任一项所述的注射用交联透明质酸凝胶，其中，所述交联剂选自二缩水甘油醚、二乙烯基砜、1,2,7,8-二环氧辛烷、1,3-二环氧丁烷和三偏磷酸钠中的一种或两种以上。
13.根据项9-12任一项所述的注射用交联透明质酸凝胶，其中，所述透明质酸的分子量为500k-3000kDa，优选为500k-2500kDa，进一步优选为800k-2000kDa。
14.根据项9-13任一项所述的注射用交联透明质酸凝胶，其中，所述交联剂与所述透明质酸或其盐的质量比为0.2-2:100，优选为0.2-1:100，进一步优选为0.5-1:100。
15.根据项9-14任一项所述的注射用交联透明质酸凝胶，其中，微波反应的反应温度为20-60℃，优选为25-60℃，进一步优选为25-40℃；优选的，微波反应的时间为0.5-24h，优选为6-24h，进一步优选为6-10h。
16.一种组织填充剂，其包括项1-7任一项所述的制备方法制备得到的注射用交联透明质酸凝胶或者项8-15任一项所述的注射用交联透明质酸凝胶。
17.一种关节腔注射液，其包括项1-7任一项所述的制备方法制备得到的注射用交联透明质酸凝胶或者项8-15任一项所述的注射用交联透明质酸凝胶。
18.项1-7任一项所述的制备方法制备得到的注射用交联透明质酸凝胶或者项8-15任一项所述的注射用交联透明质酸凝胶在生物医学领域中的应用，优选在生物医用材料中的应用，进一步优选在组织填充剂或者关节腔注射液中的应用。
发明的效果
本发明采用微波交联替代传统反应条件，可以降低交联剂用量，加快交联反应速度，缩短生产周期，与传统制备方法相比，所制备的注射用交联透明质酸凝胶产品具有更高的交联效率及交联均匀性，明显延长凝胶体内的维持时间。
附图说明
图1是实验例1中测试所得到的样品在不同位置的修饰度示意图。
具体实施方式
下面结合附图所描述的实施方式对本发明做以详细说明，其中所有附图中相同的数字表示相同的特征。虽然附图中显示了本发明的具体实施例，然而应当理解，可以以各种形式实现本发明而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本发明，并且能够将本发明的范围完整的传达给本领域的技术人员。
需要说明的是，在说明书及权利要求当中使用了某些词汇来指称特定组件。本领域技术人员应可以理解，技术人员可能会用不同名词来称呼同一个组件。本说明书及权利要求并不以名词的差异作为区分组件的方式，而是以组件在功能上的差异作为区分的准则。如在通篇说明书及权利要求当中所提及的“包含”或“包括”为开放式用语，故应解释成“包含但不限定于”。说明书后续描述为实施本发明的较佳实施方式，然而所述描述乃以说明书的一般原则为目的，并非用以限定本发明的范围。本发明的保护范围当视所附权利要求所界定者为准。
术语“kDa”指的是1000Da。
术语“Da”指的是透明质酸的重均分子量的单位。
本发明提供了一种注射用交联透明质酸凝胶的制备方法，其包括下述步骤：
将透明质酸或其盐加入碱性或者酸性溶液中，得到第一溶液；
将第一溶液与交联剂混合，得到第二溶液；
将第二溶液置于微波反应器中进行交联反应，得到注射用交联透明质酸凝胶。
所述碱性溶液可以是本领域技术人员公知的碱性溶液，例如氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠溶液等。
所述酸性溶液可以是本领域技术人员公知的酸性溶液，例如醋酸、乳酸、盐酸溶液等。
所述“交联剂”又称为架桥剂，其在聚合物分子链之间形成桥键，变成三维结构的不溶性物质。
所述透明质酸的盐是本领域技术人员公知的盐，例如透明质酸钠、透明质酸钾等。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，所述第一溶液中透明质酸的浓度为80-250mg/g，优选为110-200mg/g，例如，所述第一溶液中透明质酸的浓度为80mg/g、90mg/g、100mg/g、110mg/g、120mg/g、130mg/g、140mg/g、150mg/g、160mg/g、170mg/g、180mg/g、190mg/g、200mg/g、210mg/g、220mg/g、230mg/g、240mg/g、250mg/g或其之间的任意范围。
所述第一溶液中透明质酸的浓度为透明质酸的用量与溶液的用量和透明质酸的用量之和的比。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，当为碱性溶液时，所述第一溶液的pH值为9-13，例如pH值可以为9、10、11、12、13或其之间的任意范围。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，当为酸性溶液时，所述第一溶液的pH值为2-5，例如pH值可以为2、3、4、5或其之间的任意范围。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，所述交联剂可以使用本领域技术人员公知的交联剂，例如可以为二缩水甘油醚、二乙烯基砜、1,2,7,8-二环氧辛烷、1,3-二环氧丁烷或三偏磷酸钠。
所述二缩水甘油醚例如可以为1,4-丁二醇二缩水甘油醚或者聚乙二醇二缩水甘油醚。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，所述透明质酸的分子量为500k-3000kDa，优选为500k-2500kDa，进一步优选为800k-2000kDa，例如，所述透明质酸的分子量可以为500kDa、600kDa、700kDa、800kDa、900kDa、1000kDa、1100kDa、1200kDa、1300kDa、1400kDa、1500kDa、1600kDa、1700kDa、1800kDa、1900kDa、2000kDa、2100kDa、2200kDa、2300kDa、2400kDa、2500kDa、2600kDa、2700kDa、2800kDa、2900kDa、3000kDa或其之间的任意范围。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，所述交联剂与所述透明质酸或其盐的质量比为0.2-2:100，优选为0.2-1:100，进一步优选为0.5-1:100。
例如，所述交联剂与所述透明质酸或其盐的质量比例可以为0.2:100、0.3:100、0.4:100、0.5:100、0.6:100、0.7:100、0.8:100、0.9:100、1:100、1.1:100、1.2:100、1.3:100、1.4:100、1.5:100、1.6:100、1.7:100、1.8:100、1.9:100、2:100或其之间的任意范围。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，微波反应的反应温度为20-60℃，优选为25-60℃，进一步优选为25-40℃；优选的，微波反应的反应时间为0.5-24h，优选为6-24h，进一步优选为6-10h，例如，微波反应的反应温度为20℃、25℃、30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃或其之间的任意范围；微波反应的反应时间为0.5h、1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h、9h、10h、11h、12h、13h、14h、15h、16h、17h、18h、19h、20h、21h、22h、23h、24h或其之间的任意范围。
所述微波反应的温度指的是在进行交联反应时反应体系的温度，即在进行交联反应时反应体系所需要的温度。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，在得到注射用交联透明质酸凝胶之前以及交联反应之后，还包括下述步骤：
将经过交联反应之后所得到的交联透明质酸凝胶进行纯化、制粒、灌封以及灭菌，得到注射用交联透明质酸凝胶，优选的，所述纯化采用磷酸盐氯化钠缓冲液进行纯化。
本发明提供了一种注射用交联透明质酸凝胶，其是通过上述所述的制备方法制备得到。
由于采用微波的致热与非致热两重效应来克服传统加热方式升温慢、热分布不均匀、交联反应效率低下、交联均匀性差等一系列缺点，本发明所得到的注射用交联透明质酸凝胶的交联效率高，均匀性好，在体内的维持时间长。
本发明提供了一种注射用交联透明质酸凝胶，其是通过包括下述步骤的方法制备得到：
将透明质酸或其盐加入碱性或者酸性溶液中，得到第一溶液；
将第一溶液与交联剂混合，得到第二溶液；
将第二溶液置于微波反应器中进行交联反应，得到注射用交联透明质酸凝胶。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，在得到注射用交联透明质酸凝胶之前以及交联反应之后，还包括下述步骤：
将经过交联反应之后所得到的交联透明质酸凝胶进行纯化、制粒、灌封以及灭菌，得到注射用交联透明质酸凝胶，优选的，所述纯化采用磷酸盐氯化钠缓冲液进行纯化。
本发明通过用微波的致热与非致热两重效应来克服传统加热方式升温慢、热分布不均匀、交联反应效率低下、交联均匀性差等一系列缺点，所得产品交联效率高，均匀性好，体内维持时间长。
微波具有非常好的穿透性，微波透入介质时，由于微波能与介质发生一定的相互作用，使得介质的分子每秒产生数以亿计次的震动，介质的分子间互相产生摩擦，引起的介质温度的升高，使介质材料内部、外部几乎同时加热升温，形成体热源状态，大大缩短了常规加热中的热传导时间，且物料内外加热均匀一致。同时分子本身的热运动和相邻分子之间的相互作用，使分子随电场变化而摆动的规则受到了阻碍，因此分子间产生摩擦作用，一部分能量转化为分子热能，造成分子运动的加剧，分子的高速旋转和振动使分子处于亚稳态，这有利于分子进一步电离或处于反应的准备状态。微波对介质材料是瞬时加热升温，升温速度快。另一方面，微波的输出功率随时可调，介质温升可无惰性的随之改变，不存在“余热”现象，极有利于自动控制和连续化生产的需要。
本发明提供了一种组织填充剂，其包括上述所述的制备方法制备得到的注射用交联透明质酸凝胶或者上述所述的注射用交联透明质酸凝胶。
所述组织填充剂为注射到皮肤内使皮肤凹陷、缺损得以填充，达到纠正缺陷，恢复完美皮肤所用的材料，可应用于塑造脸部轮廓、填充面颊、填充下巴、祛除皱纹、祛鼻唇褶、改善人中褶、唇部改造、改善颈阔肌纹、修复痤疮瘢痕等。通过上述所述的制备方法制备得到的组织填充剂交联效率高，均匀性好，在体内的维持时间长，更适合作为组织填充剂。
本发明提供了一种关节腔注射液，其包括上述所述的制备方法制备得到的注射用交联透明质酸凝胶或者上述所述的注射用交联透明质酸凝胶。
所述关节腔注射液为骨关节内润滑剂，适用于防治外伤性或退变性骨关节炎，通过补充外源性润滑剂，恢复滑液的润滑功能，可促进软骨的修复，改善关节功能。然而，外源性润滑剂在关节内的存留时间较短，通过上述所述的制备方法制备得到的关节腔注射液抗降解，在体内的维持时间长，更适合作为关节腔注射液。
本发明提供了上述所述的制备方法制备得到的注射用交联透明质酸凝胶或者上述所述的注射用交联透明质酸凝胶在生物医学领域中的应用，优选在生物医用材料中的应用，进一步优选在组织填充剂或者关节腔注射液中的应用。
本发明对试验中所用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述，在下面的实施例中，如果无其他特别的说明，％表示wt％，即重量百分数。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品，其中，表1为实施例中所用到的原料的来源。
表1实施例中所用到的原料来源
Figure BDA0002583556780000081
Figure BDA0002583556780000091
实施例1
将2g分子量为500kDa的透明质酸钠溶于10g氢氧化钠溶液中混合均匀得pH值为13的第一溶液，然后向第一溶液中加入0.012g 1,4-丁二醇二缩水甘油醚，混合均匀后置微波反应器(型号为FC MCR-3S-T，生产厂家为巩义市科瑞仪器有限公司)中，设定反应温度35℃，反应时间6h进行交联反应得交联透明质酸凝胶，然后将所述交联透明质酸凝胶切块，经磷酸盐氯化钠缓冲液(PBS)纯化、制粒、灌封、灭菌，得注射用交联透明质酸凝胶。
实施例2
将2g分子量为2000kDa的HA溶于10g氢氧化钠溶液中混合均匀得pH值为13的第一溶液，然后向第一溶液中加入0.005g 1,4-丁二醇二缩水甘油醚，混合均匀后置微波反应器中，设定反应温度60℃，反应时间12h进行交联反应得交联透明质酸凝胶，然后将所述交联透明质酸凝胶切块，经磷酸盐氯化钠缓冲液(PBS)纯化、制粒、灌封、灭菌，得注射用交联透明质酸凝胶。
实施例3
将2g分子量为1500kDa的透明质酸钠溶于8g醋酸溶液中混合均匀得pH值为2的第一溶液，然后向第一溶液中加入0.02g 1,4-丁二醇二缩水甘油醚，混合均匀后置微波反应器中，设定反应温度25℃，反应时间10h进行交联反应得交联透明质酸凝胶，然后将所述交联透明质酸凝胶切块，经磷酸盐氯化钠缓冲液(PBS)纯化、制粒、灌封、灭菌，得注射用交联透明质酸凝胶。
实施例4
将2g分子量为1500kDa的透明质酸钠溶于12g氢氧化钠溶液中混合均匀得pH值为12的第一溶液，然后向第一溶液中加入0.01g 1,2,7,8-二环氧辛烷，混合均匀后置微波反应器中，设定反应温度40℃，反应时间6h进行交联反应得交联透明质酸凝胶，然后将所述交联透明质酸凝胶切块，经磷酸盐氯化钠缓冲液(PBS)纯化、制粒、灌封、灭菌，得注射用交联透明质酸凝胶。
实施例5
将2g分子量为1500kDa的透明质酸钠溶于10g氢氧化钠溶液中混合均匀得pH值为12的第一溶液，然后向第一溶液中加入0.015g三偏磷酸钠，混合均匀后置微波反应器中，设定反应温度40℃，反应时间6h进行交联反应得交联透明质酸凝胶，然后将所述交联透明质酸凝胶切块，经磷酸盐氯化钠缓冲液(PBS)纯化、制粒、灌封、灭菌，得注射用交联透明质酸凝胶。
实施例6
将2g分子量为1000kDa的透明质酸钠溶于10g氢氧化钠溶液中混合均匀得pH值为11的第一溶液，然后向第一溶液中加入0.01g二乙烯基砜，混合均匀后置微波反应器中，设定反应温度30℃，反应时间7h进行交联反应得交联透明质酸凝胶，然后将所述交联透明质酸凝胶切块，经磷酸盐氯化钠缓冲液(PBS)纯化、制粒、灌封、灭菌，得注射用交联透明质酸凝胶。
实施例7
将2g分子量为800kDa的透明质酸钠溶于9g醋酸溶液中混合均匀得pH值为4的第一溶液，然后向第一溶液中加入0.018g 1,3-二环氧丁烷，混合均匀后置微波反应器中，设定反应温度38℃，反应时间8h进行交联反应得交联透明质酸凝胶，然后将所述交联透明质酸凝胶切块，经磷酸盐氯化钠缓冲液(PBS)纯化、制粒、灌封、灭菌，得注射用交联透明质酸凝胶。
实施例8
将2g分子量为1800kDa的透明质酸钠溶于12g氢氧化钠溶液中混合均匀得pH值为13的第一溶液，然后向第一溶液中加入0.008g三偏磷酸钠，混合均匀后置微波反应器中，设定反应温度50℃，反应时间15h进行交联反应得交联透明质酸凝胶，然后将所述交联透明质酸凝胶切块，经磷酸盐氯化钠缓冲液(PBS)纯化、制粒、灌封、灭菌，得注射用交联透明质酸凝胶。
实施例9
将2g分子量为2000kDa的透明质酸钠溶于10g醋酸溶液中混合均匀得pH值为2的第一溶液，然后向第一溶液中加入0.004g 1,4-丁二醇二缩水甘油醚，混合均匀后置微波反应器中，设定反应温度60℃，反应时间18h进行交联反应得交联透明质酸凝胶，然后将所述交联透明质酸凝胶切块，经磷酸盐氯化钠缓冲液(PBS)纯化、制粒、灌封、灭菌，得注射用交联透明质酸凝胶。
实施例10
将2g分子量为1600kDa的透明质酸钠溶于9g醋酸溶液中混合均匀得pH值为4的第一溶液，然后向第一溶液中加入0.006g 1,4-丁二醇二缩水甘油醚，混合均匀后置微波反应器中，设定反应温度55℃，反应时间24h进行交联反应得交联透明质酸凝胶，然后将所述交联透明质酸凝胶切块，经磷酸盐氯化钠缓冲液(PBS)纯化、制粒、灌封、灭菌，得注射用交联透明质酸凝胶。
实施例11
将2g分子量为3000kDa的透明质酸钠溶于15g氢氧化钠溶液中混合均匀得pH值为10的第一溶液，然后向第一溶液中加入0.025g三偏磷酸钠，混合均匀后置微波反应器中，设定反应温度20℃，反应时间0.5h进行交联反应得交联透明质酸凝胶，然后将所述交联透明质酸凝胶切块，经磷酸盐氯化钠缓冲液(PBS)纯化、制粒、灌封、灭菌，得注射用交联透明质酸凝胶。
实施例12
将2g分子量为2500kDa的透明质酸钠溶于12g氢氧化钠溶液中混合均匀得pH值为9的第一溶液，然后向第一溶液中加入0.04g 1,4-丁二醇二缩水甘油醚，混合均匀后置微波反应器中，设定反应温度22℃，反应时间3h进行交联反应得交联透明质酸凝胶，然后将所述交联透明质酸凝胶切块，经磷酸盐氯化钠缓冲液(PBS)纯化、制粒、灌封、灭菌，得注射用交联透明质酸凝胶。
实施例13
将2g分子量为2800kDa的透明质酸钠溶于12g醋酸溶液中混合均匀得pH值为5的第一溶液，然后向第一溶液中加入0.03g 1,2,7,8-二环氧辛烷，混合均匀后置微波反应器中，设定反应温度20℃，反应时间5h进行交联反应得交联透明质酸凝胶，然后将所述交联透明质酸凝胶切块，经磷酸盐氯化钠缓冲液(PBS)纯化、制粒、灌封、灭菌，得注射用交联透明质酸凝胶。
实施例14
将2g分子量为2500kDa的透明质酸钠溶于15g氢氧化钠溶液中混合均匀得pH值为9的第一溶液，然后向第一溶液中加入0.044g 1,4-丁二醇二缩水甘油醚，混合均匀后置微波反应器中，设定反应温度22℃，反应时间3h进行交联反应得交联透明质酸凝胶，然后将所述交联透明质酸凝胶切块，经磷酸盐氯化钠缓冲液(PBS)纯化、制粒、灌封、灭菌，得注射用交联透明质酸凝胶。
实施例15
将2g分子量为1600kDa的透明质酸钠溶于12g醋酸溶液中混合均匀得pH值为4的第一溶液，然后向第一溶液中加入0.006g 1,4-丁二醇二缩水甘油醚，混合均匀后置微波反应器中，设定反应温度55℃，反应时间0.3h进行交联反应得交联透明质酸凝胶，然后将所述交联透明质酸凝胶切块，经磷酸盐氯化钠缓冲液(PBS)纯化、制粒、灌封、灭菌，得注射用交联透明质酸凝胶。
实施例16
将2g分子量为3000kDa的透明质酸钠溶于10g氢氧化钠溶液中混合均匀得pH值为10的第一溶液，然后向第一溶液中加入0.025g三偏磷酸钠，混合均匀后置微波反应器中，设定反应温度20℃，反应时间28h进行交联反应得交联透明质酸凝胶，然后将所述交联透明质酸凝胶切块，经磷酸盐氯化钠缓冲液(PBS)纯化、制粒、灌封、灭菌，得注射用交联透明质酸凝胶。
对比例1
按照实施例4的方法制备注射用交联透明质酸凝胶，不同之处在于，将混合均匀的反应体系置40℃水浴环境中。
对比例2
按照实施例4的方法制备注射用交联透明质酸凝胶，不同之处在于，将混合均匀的反应体系置40℃水浴环境中，保温反应30h。
表2实施例1-16和对比例1-2所用到的原料用量表
Figure BDA0002583556780000131
实验例1修饰度测试
按照图1所示的位置分别在微波反应器(反应容器的示意形状为圆柱体)中取实施例1-16以及对比例1-2所得到的交联透明质酸凝胶上的6处位置的样品，每个样品0.5g左右，加磷酸盐氯化钠缓冲液纯化至较重约3g，测定6个样品修饰度，并计算RSD值。修饰度测试条件：称取0.25g纯化后的实施例1-16的样品(交联透明质酸凝胶)及对比例1-2的样品(交联透明质酸凝胶)于5mL容量瓶中，用酶解液定容至5mL，42℃静置2h，灭活后静置备用。使用高效液相色谱测其修饰度，色谱柱：SuperdexTM 75；进样量：20μL；流速：0.5mL/min；柱温：35℃；流动相：20Mmol/L；波长：232nm。
在其他实验条件均一致的情况下，修饰度越高，说明交联效率越高；六个取样点的修饰度越接近，说明交联均匀性越高，实施例1-16以及对比例1-2中的六个点样品修饰度测试结果见表3。
表3实施例1-16以及对比例1-2中的六个点样品修饰度测试结果
Figure BDA0002583556780000141
Figure BDA0002583556780000151
Figure BDA0002583556780000161
Figure BDA0002583556780000171
通过表3测试结果可以看出，使用本发明方法，实施例1-16所得到的交联透明质酸凝胶上的6个取样的修饰度几乎完全一致，而对比例中修饰度差异则比较大，说明该本发明方法使得交联均匀性得到有效保证。
并且将实施例4和对比例1所得产品的修饰度进行对比可以看出，实施例4所述样品的修饰度远远高于对比例1，说明本发明采用微波反应方法使交联效率得到显著的提高。
实验例2黏弹性测试
使用Haake RS6000(赛默飞世尔科技(中国)公司)仪器测定实施例1-16及对比例1-2的弹性模量。黏弹性测试条件：转子：P20TiL；Gap值：1.00mm；温度：25℃；测定模式：振荡频率扫描CD；应力：1％；频率范围：0.01～1Hz。记录0.1Hz时的弹性模量(G’)。实施例1-16及对比例1-2黏弹性测试结果见表4。
表4实施例1-16及对比例1-2黏弹性测试结果
Figure BDA0002583556780000172
Figure BDA0002583556780000181
从表4可以看出，实施例所得到的注射用交联透明质酸凝胶的弹性模量较好，而对比例1-2所得到的注射用交联透明质酸凝胶的弹性模量相对较差，说明采用本发明所述的方法制备得到的注射用交联透明质酸凝胶具有优异的黏弹性。
实验例3体外降解测试
取适量实施例1-16及对比例1-2的注射用交联透明质酸凝胶(约含HA8mg)，置于西林瓶中，加入自制HA酶(酶活600IU/mL)4mL，涡旋混匀。42℃水浴振摇，每10min取样50μL并适当稀释，在232nm下测吸光度，直至吸光度不再变化，认为降解完全，记录完全降解所用时间。测试结果见表5。
表5实施例1-16及对比例1-2的体外降解时间结果
Figure BDA0002583556780000182
Figure BDA0002583556780000191
由表5可以看出，实施例制备得到的注射用交联透明质酸凝胶在体外降解的时间相对较长，而对比例所制备得到的注射用交联透明质酸凝胶在体外降解的时间相对较短，说明采用本发明所述的方法制备得到的注射用交联透明质酸凝胶具有优异的抗酶解性能，从而说明了所得到的注射用交联透明质酸凝胶交联效率高。
实验例4志愿者注射填充实验
选取年龄25～45岁，身体健康，无过敏史，有注射填充需求的志愿者30人，对其面颊部实施注射填充手术。其中左侧面颊使用实施例4产品，右侧面颊部使用对比例1产品，跟踪记录受试者一周、两周、一个月、三个月、六个月效果，实验结果见表6。
表6志愿者注射填充实验结果
一周红肿 两周红肿 一月红肿 三月有效 六月有效
实施例4(左脸颊) 1 0 0 30 29
对比例1(右脸颊) 2 1 0 24 13
通过表6结果可以看出，本发明方法制备的注射用交联透明质酸凝胶的安全性与传统交联方法均能满足注射美容填充手术的需求，而长期有效性结果显示，本发明方法制备的注射用交联透明质酸凝胶在体内的维持时间远远高于传统交联方式制备的产品。
综上所述，本发明方法有效提高了交联反应效率，保证了交联均匀性，制得的注射用交联透明质酸凝胶具有优异的抗酶解性能和黏弹性。本发明所得产品满足组织填充所要求的理化性能和生物相容性，更保证了凝胶在体内的存留时间，该凝胶采用医药级透明质酸或其盐，各项指标均满足国家及行业相关标准，是一种非常理想的组织填充剂。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。

Claims (10)

1.一种注射用交联透明质酸凝胶的制备方法，其包括下述步骤：
将透明质酸或其盐加入碱性或者酸性溶液中，得到第一溶液；
将第一溶液与交联剂混合，得到第二溶液；
将第二溶液置于微波反应器中进行交联反应，得到注射用交联透明质酸凝胶。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其中，当为碱性溶液时，所述第一溶液的pH值为9-13，优选为11-13。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其中，当为酸性溶液时，所述第一溶液的pH值为2-5，优选为2-4。
4.根据权利要求1-3任一项所述的制备方法，其中，所述交联剂选自二缩水甘油醚、二乙烯基砜、1,2,7,8-二环氧辛烷、1,3-二环氧丁烷和三偏磷酸钠中的一种或两种以上。
5.根据权利要求1-4任一项所述的制备方法，其中，所述透明质酸的分子量为500k-3000kDa，优选为500k-2500kDa，进一步优选为800k-2000kDa。
6.根据权利要求1-5任一项所述的制备方法，其中，所述交联剂与所述透明质酸或其盐的质量比为0.2-2:100，优选为0.2-1:100，进一步优选为0.5-1:100。
7.根据权利要求1-6任一项所述的制备方法，其中，微波反应的反应温度为20-60℃，优选为25-60℃，进一步优选为25-40℃；优选的，微波反应的反应时间为0.5-24h，优选为6-24h，进一步优选为6-10h。
8.一种注射用交联透明质酸凝胶，其通过权利要求1-7任一项所述的制备方法制备得到。
9.一种注射用交联透明质酸凝胶，其中，所述注射用交联透明质酸凝胶通过包括下述步骤的方法制备得到：
将透明质酸或其盐加入碱性或者酸性溶液中，得到第一溶液；
将第一溶液与交联剂混合，得到第二溶液；
将第二溶液置于微波反应器中进行交联反应，得到注射用交联透明质酸凝胶。
10.根据权利要求9所述的注射用交联透明质酸凝胶，其中，当为碱性溶液时，所述第一溶液的pH值为9-13，优选为11-13。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113045779A (zh) * 2021-03-22 2021-06-29 华熙生物科技股份有限公司 一种交联透明质酸凝胶粗品及其制备方法
CN113278170A (zh) * 2021-06-15 2021-08-20 苏州大学 一种化学交联透明质酸水凝胶及其制备方法与应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101036808A (zh) * 2006-03-13 2007-09-19 上海其胜生物制剂有限公司 一种交联透明质酸凝胶制剂及其制备工艺
US20100028437A1 (en) * 2008-08-04 2010-02-04 Lebreton Pierre F Hyaluronic Acid-Based Gels Including Lidocaine
US20110229574A1 (en) * 2010-03-22 2011-09-22 Allergan, Inc. Polysaccharide and protein-polysaccharide cross-linked hydrogels for soft tissue augmentation
CN107663241A (zh) * 2017-11-16 2018-02-06 广西科技大学鹿山学院 一种高抗性淀粉含量的交联淀粉及其制备方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101036808A (zh) * 2006-03-13 2007-09-19 上海其胜生物制剂有限公司 一种交联透明质酸凝胶制剂及其制备工艺
US20100028437A1 (en) * 2008-08-04 2010-02-04 Lebreton Pierre F Hyaluronic Acid-Based Gels Including Lidocaine
US20110229574A1 (en) * 2010-03-22 2011-09-22 Allergan, Inc. Polysaccharide and protein-polysaccharide cross-linked hydrogels for soft tissue augmentation
CN107663241A (zh) * 2017-11-16 2018-02-06 广西科技大学鹿山学院 一种高抗性淀粉含量的交联淀粉及其制备方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
孙波等: "微波法合成聚天冬氨酸水凝胶及其对Pb~(2+)的吸附性能", 《石油化工》 *
宋林等: "微波辐射下以离子交联法制备壳聚糖微粒", 《沈阳化工大学学报》 *
顾其胜等: "《透明质酸与临床医学》", 30 November 2013, 第二军医大学出社 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113045779A (zh) * 2021-03-22 2021-06-29 华熙生物科技股份有限公司 一种交联透明质酸凝胶粗品及其制备方法
CN113278170A (zh) * 2021-06-15 2021-08-20 苏州大学 一种化学交联透明质酸水凝胶及其制备方法与应用
CN113278170B (zh) * 2021-06-15 2021-11-16 苏州大学 一种化学交联透明质酸水凝胶及其制备方法与应用

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