CN100537606C - 源自交联的透明质酸和/或hylan的粘性凝胶、其制备和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种高度弹性的和粘性的凝胶，它是使用二乙烯基砜(DVS)作为交联剂由透明质酸或hylan、它们的盐或其衍生物形成的。此外，本发明公开了包含与聚合物主链共价连接的烷基砜基的粘弹性流体，它是由单体DVS与透明质酸和/或hylan交联的单官能化作用形成的。机械性能如硬度和粘性值用该凝胶的流变性质说明。此外，本发明公开了制备上述产品的方法。它们具有在许多应用中作为注射和/或植入装置和作为药物施药系统的用途。

Description

源自交联的透明质酸和/或HYLAN的粘性凝胶、其制备和用途
本申请要求于2003年12月30日提交的美国专利申请No.60/533,429的优先权，在此引入它们的全部内容作为参考。
技术领域
本发明涉及通过用二乙烯基砜(DVS)改性天然和合成聚合物来生产如凝胶、流体和固形物的材料以及这些材料具有的独特的化学、物理化学、和机械性能。本发明还涉及这些材料在很多应用中的用途，例如，在医疗和手术领域中用作注射和/或植入装置，大和小药分子和其它治疗剂的施药系统；以及美容和局部应用。
背景技术
已经开发了具有非常良好的生物相容性的水凝胶。这些凝胶是基于透明质酸(hyaluronan)，它是透明质酸和它的盐、和/或hylan和它的盐。它们也是基于用DVS交联的透明质酸或hylan(图1和2，此外参见美国专利4,605,691和6 521,223)、和/或透明质酸与其它聚合物或低分子量物质的交联混合物(美国专利4,582,865)的。Hylan A是通过使用少量的醛、一般使用甲醛进行共价交联化学改性制备的水溶性透明质酸，而hylan B是hylan A进一步用DVS交联的(参见美国专利4,713,448)。此外已经描述了由透明质酸、化学改性的透明质酸和hylan制备的凝胶浆液(美国专利5,143,724)。上述水凝胶可以用于医疗领域中的施药(美国专利4,636,524)和其它目的。然而，这些凝胶和凝胶浆液是非弹性的、非粘性的、和非胶粘的。
发明概述
本发明在一方面提供了交联透明质酸和/或hylan的高度粘性、胶粘和弹性的凝胶、或者透明质酸或hylan与其它能够与DVS形成交联的亲水聚合物的混合凝胶，所述DVS诸如而不是限于：氨基多糖，例如软骨素4-硫酸盐和软骨素6-硫酸盐、壳聚糖；多阴离子多糖，例如纤维素的烷基羧基醚衍生物和它们的盐、藻酸和它的盐、和多己糖醛酸例如果胶、多葡糖醛酸、和多聚甘露糖醛酸；其它的不带电荷的多糖如淀粉、葡甘露聚糖、半乳甘露聚糖、茁霉多糖、凝胶多糖、innulin和纤维素及它们的羟烷基醚衍生物；多糖树胶例如黄原胶、阿拉伯的、阿拉伯橡胶树和瓜尔胶及它们的烷基羧基醚和羟烷基醚衍生物；和合成聚合物，例如聚乙烯醇和聚乙烯亚胺。这些凝胶是根据选择起始聚合物浓度(IPC)和DVS特定浓度或者DVS与透明质酸和/或hylan的比值和/或在含水酸性介质中进行的洗涤过程制备的。在本发明不同的实施方案中术语起始聚合物浓度，以下称为“IPC”，是指在起始反应条件下反应物的重量浓度。在该反应中使用超过一个起始聚合物的情况下，起始聚合物浓度指在起始反应条件下起始聚合物的总重量浓度。术语最终聚合物浓度，以下称为“FPC”是指在所有处理完成后改性的聚合物的重量浓度。在反应中使用超过一个起始聚合物的情况下，最终聚合物浓度指在所有处理完成后改性聚合物的总重量浓度。
在另一个方面，本发明提供了用DVS改性透明质酸和/或hylan形成的高度粘性和弹性的凝胶以及一种在含水的酸性介质(pH≤4.0)中洗涤这些材料的方法。上述洗涤法对提高生成物质的机械性能、粘性和弹性是重要的。
在又一个方面，本发明提供了高度粘性和弹性的凝胶，它是用DVS在低IPCS下改性透明质酸和/或hylan形成的。这些凝胶在特性和流动方面更相似于流体，并且它们适合于存储它们的容器的形状。
在又另一个方面，本发明提供高度粘性和弹性的凝胶，它在相对低的IPC下具有比较高的机械强度并且显示了低流动特性。这些材料在透析管中洗涤后保持了它们前者容器原来的形状。在上述提到的美国专利4,582,865、4,605,691、4,636,524、4,713,448和5,143,724中，描述了由透明质酸和/或hylan及其它多糖通过用DVS交联形成的不同种类凝胶的制备、性质和用途。然而，在那些专利中所述的材料的性质显著不同于本发明。也就是说，现有的凝胶是坚硬的、非弹性的和非粘性的凝胶。在洗涤期间或之后这些凝胶可以容易地分解成小的和均匀的颗粒。比较起来，本发明的凝胶是弹性的和粘性的，并具有再成形的强烈倾向并且即使在成为微粒之后仍然表现为单一结构。
本发明提供生产上述凝胶的方法。此外本发明提供一种方法，在该方法中在包括盐溶液的pH≤4.0、优选2.0-3.0、但是更优选2.3-2.8的含水酸性介质中洗涤该凝胶，随后用含水盐溶液洗涤，接着单独用含水的盐溶液或借助于无机或有机碱慢速调节pH到4.5-6.5。如果要求，可以用缓冲盐溶液进行最后的洗涤步骤以使该材料达到生理学的pH(6.9-7.4)。
本发明提供单独或与制药上可以接受的载体或赋形剂一起使用这些凝胶的方法，它可以作为注射或植入的施药体系如抗粘连材料，用于许多种敞口的、腹腔镜、关节镜或其它的内窥镜的外科中的手术前和手术后，包括而不是限于腹部的、妇科学的、心脏的、脊椎的、神经、整形外科的、头盖的、瘘和胸的手术；用于眼科的操作如，例如晶状体乳化；用于玻璃体液替换物；作为填料，用于校正软组织结构缺陷、组织增大、和伤口愈合；用于整容外科中的伤痕和皱褶；用于为处理动脉或静脉瘤和为防止血流到固体瘤的栓塞的形成。制药上可以接受的载体或赋形剂可以选自，但是不局限于盐水、二甲亚砜、聚乙二醇、透明质酸、甘油、和磷脂溶液和乳液。另外，本发明具有实用性，使用凝胶作为生物学有效材料的施药系统，包括药、细胞、蛋白质、DNA和维生素；以及作为眼科和伤口愈合指示的材料。制药上的活性分子或药可以选自，但不局限于：非甾族的抗炎性渗出物如异丁苯丙酸、双氯芬酸和吡罗昔康；麻醉剂如利多卡因和丁哌卡因；阿片样物质镇痛药如甲基吗啡和咖啡；抗心律不整(anti-arrythmics)如乙胺碘呋酮、心得安和甲磺胺心定；皮质甾类如地塞米松和强的松；和抗肿瘤剂如甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶和紫杉醇；和抗病毒剂如无环鸟苷和阿糖腺苷。
最后，本发明描述了包括凝胶的药物组合物，它作为用于处理类风湿性关节炎、用于在关节中的黏弹性补充、用于眼科指示、用于处理骨关节炎、和用于伤口愈合的装置。
此外本发明提供了控制本发明的聚合材料的化学、物理化学和机械性能的方法，所述方法通过在起始聚合物的改性和洗涤条件期间控制聚合物与DVS的重量比来控制上述性能。
在优选的方案中，本发明提供一种关节黏弹性补充装置(jointviscosupplemementation)，它是为用于处理由于一般而不是必然的膝的骨关节炎引起的疼痛而设计的。该装置是由具有单一单元剂量的无菌、非致热的组合物预填充的注射器，所述组合物包括溶胀的水凝胶和未改性的流体，优选而不是必然，二者都是源自细菌发酵的透明质酸钠，该透明质酸钠具有大于1MDa的分子量和与标准骨膜液相容的pH和渗透压度。优选该水凝胶组分由细菌发酵的透明质酸钠制备，通过将该透明质酸钠与二乙烯基砜(DVS)在碱性条件下反应以使其改性。然后用酸性盐水和磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤改性的透明质酸钠以除去杂质。流体组分优选是细菌发酵的透明质酸钠在磷酸盐缓冲盐水中的溶液。将这两个组分以约80:20(以重量计)的凝胶：流体比值混合。水凝胶组分具有8.25±1.5mg/ml、优选8.25±0.75mg/ml的聚合物含量。流体组分具有2.25±1.0mg/ml、优选2.25±0.25mg/ml的聚合物含量。由此该产品具有10.5±2.5mg/ml、优选10.5±1.0mg/ml的总聚合物含量(改性的和未改性的)。该产品的流变性质是：30-100Pas的剪切粘度(在200Hz)；20-150Pa的贮能模量(在5Hz的G′)；和小于35°的相角(在5Hz的δ)。
在另一个优选的方案，本发明提供一种关节黏弹性补充装置，它是为用于在处理由于一般而不是必然的膝的骨关节炎引起的疼痛而设计的。该装置是由具有单一单元剂量的无菌、非致热的组合物预填充的注射器，所述组合物包括溶胀的水凝胶，所述水凝胶优选但不是必然源自细菌发酵的透明质酸钠，该透明质酸钠具有大于1MDa的分子量和与标准骨膜液相容的pH和渗透压度。优选该水凝胶组分由细菌发酵的透明质酸钠制备，通过将该透明质酸钠与二乙烯基砜(DVS)在碱性条件下反应以使其改性。然后用酸性盐水和磷酸盐缓冲盐水洗涤改性的透明质酸钠以除去杂质。在最终产品中水凝胶组分具有8.25±1.75mg/ml的聚合物含量。该产品的流变性质是：30-100Pas的剪切粘度(在200Hz)；20-150Pa的贮能模量(在5Hz的G′)；和小于35°的相角(在5Hz的δ)。
附图简介
图1显示了透明质酸钠(透明质酸；透明质酸(hyaluronan))的结构。
图2显示了透明质酸钠与DVS在碱性条件下的反应流程。
图3是显示了DVS比值与IPC成反比关系的图表。
图4是显示了在固定粘度值的MW和1/IPC的近似成正比的图表。
发明详述
本发明是以下列发现为基础的：具有独特和有效性质的材料可以通过使用DVS作为改性剂对透明质酸和/或hylan单独和/或与其它天然和合成的聚合物一起进行改性形成，同时控制工艺参数如IPC、起始试剂的比值和进一步对已加工材料的洗涤。本发明提供了具有均匀的、单一的和弹性结构的凝胶，它是与DVS交联反应形成的。这些凝胶不容易分解为小颗粒，如易碎或易脆的凝胶的情况。这些产品产生像“油灰”的或弹性的材料并且将它们切成部分后由于它们高度粘性的性质该颗粒易于接合。已经观察到这类粘性的、非脆的凝胶可以通过使用交联反应条件、洗涤、IPC和DVS数量的特定结合来获得。这些凝胶的机械性能依赖于所有这些条件，但是最重要地取决于使用的DVS与聚合物的比值(DVS:Pol)和酸性洗涤。如图3所示DVS:Pol的比值与IPC成反比。尽管不想用任何具体的机理限制，但人们相信，低的聚合物浓度、较高数值的DVS是凝胶形成所需要的。这与早先描述的凝胶相反，其中DVS浓度与IPC成正比。
在稀释溶液中，聚合体链被长的距离分隔并且在聚合物分子之间的交互作用是最小的。在这个状态中，由于外力(例如，重力或搅拌的脉冲)溶液会自由地流动。当聚合物浓度增加溶液中分子的数目增加时，聚合物链被迫互相靠拢由此增加分子间的交互作用。在极其浓的溶液的情况下，该链彼此缠住，它们的交互作用增加，粘性急速增加，该溶液开始显示出从浓溶液到凝胶的转变。通过外力凝胶不会轻易地变形或改变它的形状。共价交联是显著提高聚合物链交互作用以形成凝胶的一个方法。
贮存(弹性)模量(G′)和损失(粘性)模量(G＂)分别表示当形变速率(测试频率)改变时材料可以复原(弹性响应)或流动(粘性的响应)的相对程度。这两个模量都是频率的线性函数。已经证明它们是聚合物溶液和凝胶结构的灵敏探测器。G′和G＂均随频率的增加而增加，但是一个比另一个增加地快。在G′＝G＂的这个点，这个频率称为分隔频率(fc)。随着聚合物分子量或浓度的增加该分隔频率减少。对于在低频区的聚合物溶液，弹性应力松驰并且粘应力占优势，因而在低于fc的频率处G＂大于G′。相反，对于凝胶而言，在G′和G＂之间没有分隔，在频率范围内G′大于G＂。除非另作说明，测试频率是0.04-7Hz。复数模量，G*，反映弹性组分(G′)和粘性组分(G＂)二者。它是以使用流变仪测试的振荡试验的应力幅与应变幅的比值来计算的。存在下列关系：G′＝G*cosδ和G＂＝G*sinδ，其中δ是相角。对于粘弹性物质的物理性能和测量这些性质方法的详细评估，参见，例如，由Schulz和Glass所编的“Polymers as Rheology Modifiers”、ACS Symposium Series 462，1991；“An Introduction to Rheology”，H.A.Bannes，J.F.Hutton和K.Walters，Elsevier，1989；和Bohlin Rheometer Application Notes MRK544-01，MRK556-01，和MRK573-01。
认为由低IPC制造的本发明的凝胶特性是稀释溶液中所发生的反应结果。在稀释溶液中聚合物分子不是紧靠着彼此，存在仅仅改性剂DVS的一个乙烯基部分与聚合物起反应并形成侧基的趋向、或DVS完全地水解而没有与另一个附近的聚合物分子交联的趋向。因此，为了处理材料以使它具有特殊的性质，使用大量改性剂和低IPC溶液是所希望的。凝胶的性质也取决于起始聚合物的分子量(MW)(由特性粘度测量的，H.Bothner，T.Waaler和.O.Wik；Interriational Jourrzal ofBiological Macromolecules[1988]10，287-91；或由在MW<4MDa下的多角激光散射测量的)，低MW的聚合物需要更高的DVS:Pol的比值以实现与由高MW聚合物制造的凝胶相似的性质。
本发明的一个优选方案是一类弹性的、聚合的凝胶的实例，其是通过使用净化的、非化学改性的透明质酸或它的盐作为原料的方法制备的。这个原料可以从动物组织或细菌制备，条件是在制备期间它没有化学改性。然后将原料与二乙烯基砜进行反应以形成凝胶。然后将所产生的凝胶进行含水酸性(pH<4)洗涤步骤。由这个一般方法制造的凝胶具有所希望的软的、弹性的和非易碎的机械性能。术语“hylastan”泛指由这个方法制造的这类凝胶。
适合的聚合物可以具有约500KDa到约10MDa的平均MW，但是优选约1.3MDa到约8MDa。低MW优选是约0.5MDa到约1.3MDa，中等MW优选是约1.3MDa到约2.7Mda，高MW优选是约2.7MDa到约10MDa。透明质酸钠的MW优选是约0.5MDa到约4MDa，和取决于来源，约0.5Mda至约1.3MDa或约1.3MDa到约2.7MDa。hylan的MW优选选自约3MDa到约10MDa并且最优选约3-6或约4-8Mda。起始聚合物的IPCs可以从0.25％到8％w/w变化。当IPC的范围从3到10％w/w、或更优选3-6％w/w时，DVS与聚合物的比值(DVS:Pol)可以从0.0025到0.05w/w、优选从0.0025到0.025w/w、或更优选0.0025到0.01w/w。当IPC的范围从0.25-0.9％w/w时，DVS与聚合物的比值(DVS:Pol)可以从1.4到17.7w/w变化。也可以改变改性的反应时间，但是优选≦24小时、并且更优选4到24小时，这取决于IPC。在高MW聚合物(如HylanA)的IPC≦0.15％w/w的情况下，因为DVS趋向于如上所述的自-聚合、水解或在聚合物上形成侧基，所以无论使用任何浓度的DVS，凝胶化作用看来似乎不会发生。在IPC为0.25-0.9％w/w的情况下，凝胶形成并且特定的最小的DVS:透明质酸的比值对形成凝胶和赋予它们如上所述的粘性和弹性性质是必须的。轻微地增加DVS:Pol比值使凝胶变得更坚固、较小弹性和较小粘性；而微微减少所述比值使它们更像流体和更具有弹性。因此，改变DVS:Pol比值使凝胶适合于特定目的。在改性之后洗涤工序对凝胶的机械性能有影响，酸性洗涤有助于弹性和粘性性质。所产生的酸-洗凝胶更软(较低的复数模量值，G*)、更有弹性(更高的屈服应变)并且比在相似聚合物和DVS浓度下而没有进行酸-洗制备的凝胶(例如，hylan B)更不易碎。与具有维持它们刚性的相似IPC的hylan B凝胶相比，具有高IPC的凝胶在热处理过程(在制造无菌的内科产品期间所必需的杀菌期间)具有变得更有弹性的倾向。低IPC凝胶很软和有弹性，而热处理减弱了弹性和粘性。
其它适合的聚合物可以具有<500KDa的平均MW。极低MW的聚合物可以具有30KDa到500KDa的MW，例如30-100KDa、100-200KDa、200-500KDa、200-400KDa、200-300KDa、300-500KDa、和300-400KDa。
为了实现所希望的粘弹性质，极低MW的聚合物可以要求更高的IPC以及更高的DVS:Pol比值。例如，极低MW的聚合物的IPC可以从3到50％(w/w)或更高，这取决于聚合物的MW，较低MW聚合物需要更高的IPC。通常，在如图4中所示的给定的粘性值下聚合物的MW应该与1/IPC成正比。用于中等、低、极低MW聚合物的IPC的实例包括，但是不局限于：3％-8％、3％-12％，3％-15％，3％-30％，3％-50％，8％-12％，8-15％，8％-30％，8％-50％，10％-12％，约12％，12％-30％，12％-50％，和20％-50％。极低MW聚合物的DVS:Pol比值可以从1:400到1:20(w/w)、或更低，这取决于IPC。一般，如图3所示，DVS:Pol比值与IPC成反比。用于中等、低的、极端低的MW聚合物的DVS:Pol比值的实例包括、但是不局限于：约0.0025到约20、约0.005到约20、约0.01到约20、0.0025到17.7、0.005到约17.7、0.01到约17.7、约0.0025到约10、约0.005到约10、约0.01到约10、约0.1到约20、约01到约10、约1到约20、约1到约10。
在一些优选方案中，本发明的凝胶具有一个或多个下列特性：(a)IPC8 12％、优选10-12％；(b)HA MW 500-2500KDa、优选500-600KDa；(c)DVS:Pol比值1:200至1:15、优选1:100至1:15，例如1:50和1:60；(d)FPC约1％到2.5％。可以将凝胶洗涤达到平衡或相反。该凝胶可以进行酸性洗涤、或者在中性盐水中洗涤。
在本发明的一个实施方案中，该凝胶可以在含水的酸性溶液中洗涤、优选用含水的酸式氯化钠、钾、钙、镁或铵溶液、或其混合物，并且更加优选、在0.15M的氯化钠浓度(生理盐水)下。该含水洗液的pH可以低于或等于4.0、优选pH 1.5-3、2.0-3.0、但是更优选2.3-2.8。然后可以将该凝胶在透析管(限制洗涤)中或无透析管(自由洗涤)洗涤。当凝胶的pH达到低于或等于4.0的pH、优选pH 2.0-3.0、但是更优选2.3-2.8。然后将它们在含水的盐溶液中洗涤、优选用含水的氯化钠溶液和更优选用0.15M氯化钠洗涤直到凝胶的pH是4.5-6.5。观察到，在相同的IPC和DVS浓度下并且在自由洗涤条件下制备的凝胶、在含水酸性溶液中洗涤随后如上所述在含水中性0.15M氯化钠溶液中洗涤的凝胶，与单独在中性盐水中洗涤的凝胶相比较它们的溶胀率减小了。相反，通过利用透析管几乎完全防止了凝胶的溶胀而不管它们如何洗涤。此外注意到，从含水酸性洗涤中获得的透明质酸基凝胶具有比在同样的浓度下制备的hylan B凝胶低的模量和高的屈服应变并因此更软和更具有弹性。这些材料同样是高度粘性和/或胶粘的。它们在洗涤工序期间耐微粒化和耐分裂，不同于hylan B凝胶，hylan B凝胶在洗涤步骤期间可以清楚地观察到碎片和微粒。这表明由含水酸、有机和无机酸和尤其是矿物酸、优选盐酸获得的低pH改变和调整了凝胶的结构使其成为更软、更有弹性、粘性和胶粘的材料。在酸性洗涤之后将凝胶贮存在生理盐水中≤24小时，随后慢慢控制将凝胶调节到pH4.5-6.5以保持由酸性洗涤方法赋予该凝胶的结构。用有机的或无机碱和/或缓冲剂可以将凝胶的pH慢慢调节到4.5-6.5，尤其在非平衡的凝胶的情况下，或在平衡凝胶的情况下，可以通过在中性盐水中洗涤而不使用有机的或无机碱和/或缓冲剂将该pH慢慢调节到4.5-6.5。如果需要，凝胶可以用含水缓冲剂进行最终洗涤以使pH达到生理条件。正如所期望的，由低IPCs制备的那些材料比那些用较高IPCs制备的材料具有显著更低的溶胀能力。前者材料的制备需要利用更大量的DVS，因此要求更多的侧烷基砜基团。在具有0.25％w/w和更少IPC的材料的情况下，在透析管内的溶胀是最小的。因此，酸性洗涤、pH的慢速调节和具有烷基砜基的聚合物主链的高度单官能化的结合有助于凝胶的低溶胀性质。
此外更进一步注意到，由具有0.25-0.9％w/w IPC聚合物制备的凝胶具有特殊的流动特性。它们更像流体(低粘度)，适合于贮藏它们的容器的形状。虽然这些材料相对坚固的，但是它们可以容易地变形、像流体一样穿过细针，并且可以流入组织间隔。因此，它们适于用作注射产品。
通常，可以将从具有IPCs≥1.0％w/w的聚合物制备的凝胶合成使它成为机械上更坚固、有弹性和胶粘的。当在透析管中洗涤时，这些材料在从该管除去时保存了它们的形状而不管在容器中的存储时间。因为使用较高的IPC并且因为它们可以包含更多的交联，这些凝胶易于溶胀。然而，可以通过洗涤条件即如上所述的低pH来控制溶胀率。还可以通过物理手段控制溶胀，如用透析管和不将凝胶洗涤到平衡。一些凝胶可以用于植入，其中轻微的溶胀是所希望的。这些凝胶也具有胶粘性质，一些可以容易地粘到许多不同的表面上如：皮肤、玻璃、塑料、软骨、等。预计这些凝胶在放置它们的位置中比更硬质的凝胶的情况保持得更久。认为在凝胶表面上的聚合物分子具有比硬质胶凝更大的自由度，因此，它们能与其它胶粒和它们接触的表面较好地相互作用。
在由具有0.9％ IPC和以下的聚合物制造的凝胶的情况下，在凝胶中较高含量的烷基硫酰侧基也可以对允许凝胶附着于不同表面的方面起作用。在低IPC起始溶液的情况下，用上述方法可以控制DVS的数值以使合成的凝胶更粘性或胶粘。
在一个实施方案中，本发明提供一种制备粘性凝胶的方法，包括下列步骤：
a.以0.25w％至50w％的起始聚合物浓度(IPC)提供至少一种起始聚合物(Pol)的溶液，所述聚合物包括透明质酸、hylan、或其混合物；
b.使至少一种起始聚合物与二乙烯基砜(DVS)进行反应；和
c.用具有pH≤4的含水溶液洗涤在步骤b中形成的凝胶。
在相关的实施方案中，IPC选择下列范围：0.25w％到50w％、0.25w％到8w％、3w％到6w％、3w％到10w％、3w％到15w％、8w％到15w％、10w％到20w％，和9w％到20w％。
在相关的实施方案中，二乙烯基砜与聚合物的比值(DVS:Pol))(w:w)选自从约0.0025到约17.7。在一个更进一步的实施方案中，二乙烯基砜与聚合物的比值(DVS:Pol))(w:w)选自从约0.005到约17.7。在又一个的实施方案中，二乙烯基砜与聚合物的比值(DVS:Pol))(w:w)选自从约0.01到约17.7。
在更进一步的实施方案中，本发明提供一种制备粘性凝胶的方法，包括下列步骤：
a.以IPC>8w％(例如，8.1、8.5、9、9.5、10、11、12、13、15、和20w％)到25、30、40或50w％的起始聚合物浓度(IPC)，提供至少一种起始聚合物(Pol)的溶液，所述聚合物包括透明质酸、hylan、或其混合物；和
b.使起始聚合物与二乙烯基砜(DVS)进行反应以形成凝胶，
其中DVS:Pol(w:w)比值选自约0.0025到约0.033、约0.05到约0.033、或约0.01到约0.033。任选地，该方法可以进一步包括用具有pH≤4的含水溶液洗涤在步骤b中形成的凝胶。
对于IPC高于8w％的凝胶，起始聚合物的平均MW选自下列范围：30KDa到5MDa、优选30KDa到4MDa、500KDa到3MDa、或500KDa到2.5MDa。在上述实施方案中，IPC可以选自下列范围，例如，8％-15％、8％-30％、10％-12％、约12％、12％-30％、12％-50％，和20％-50％。
在更进一步的实施方案中，本发明提供一种制备粘性凝胶的方法，包括下列步骤：
a.以0.25w％至50w％(例如，3w％到8w％、0.25w％到8w％、3w％到6w％、3w％至10、3w％至15w％、8w％到15w％、10w％到20w％、9w％到20w％、8％至30％、10w％到12w％、约12w％、12w％到30％、12w％到50w％，和20w％到50w％)的起始聚合物浓度(IPC)提供至少一种起始聚合物(Pol)的溶液，所述聚合物包括透明质酸、hylan、或其混合物；和
b.使起始聚合物和二乙烯基砜(DVS)以选自下列范围的二乙烯基砜：聚合物(DVS:Pol)比值(w:w)进行反应以形成凝胶：约0.025到0.05、约0.0025到约0.033、约0.05到约0.033，或约001到约0.033。任选地，该方法可以进一步包括用具有pH≤4的含水溶液洗涤在步骤b中形成的凝胶。
在更进一步的实施方案中，本发明还提供一种制备粘性凝胶的方法，包括下列步骤：
a.以0.25w％至0.9w％(例如，0.25w％到0.5w％、0.3w％到0.8w％、0.5w％到0.8％、约0.5w％)的起始聚合物浓度(IPC)提供至少一种起始聚合物(Pol)的溶液，所述聚合物包括透明质酸、hylan、或其混合物；和
b.使起始聚合物与二乙烯基砜(DVS)进行反应。
在某些实施方案中，DVS:Pol比值(w:w)选自：约1.4到约7.7、约2到15、约5到约15、约2到约10。任选地，该方法可以进一步包括用具有pH≤4的含水溶液洗涤在步骤b中形成的凝胶。
在相关的优选方案中，起始聚合物的平均MW选自500KDa到6MDa。任选地，这种凝胶可以用酸洗涤。在不同的实施方案中，至少一种起始聚合物的一种聚合物的平均分子量(MW)选自约30KDa到约500KDa，例如，30-100KDa、100-200KDa、200-500KDa、200-400KDa、200-300KDa、300-500KDa、和300-400KDa。在这些或其它实施方案中，二乙烯基砜与聚合物的比值(DVS:Pol)(w:w)选自约0.0025到约20，例如，约0.05到约20、001到约20、约0.0025到约0.033、0.05到约0.033，和0.01到约0.033。
制造凝胶的方法包括用具有pH≤4的水溶液洗涤该凝胶，可以包括用缓冲盐水溶液将凝胶pH≤4调节到生理pH。替换地，该方法进一步包括用缓冲盐水溶液将凝胶的pH≤4调节到约4.5至6.5。在另一个实施方案中，本发明提供一种所描述的方法，其中在酸性洗涤步骤(步骤c)中将凝胶洗涤到pH约2.0至3.0。本发明还提供一种方法，其中在pH≥9的条件下进行交联步骤(步骤b)。本发明进一步提供一种方法，其中允许步骤b进行≤24小时。
在一些实施方案中，在透析管中洗涤该凝胶到非平衡态。
通常，本发明还提供一种方法，其中至少一种起始聚合物的平均分子量是约≤10MDa。在进一步的实施方案中，至少一种起始聚合物的平均分子量(MW)选自约0.5MDa到约4MDa。在优选的实施方案中，至少一种起始聚合物是透明质酸。在又一个的实施方案中，至少一种起始聚合物的一种聚合物的平均分子量(MW)选自约3MDa到约10MDa。在又一个实施方案中，聚合物的平均MW<500KDa。在优选的实施方案中，至少一种起始聚合物是hylan。在一些实施方案中，起始聚合物的平均MW是约30KDa到约500KDa。
在进一步的实施方案中，本发明提供一种具有8.25±1.75mg/ml的聚合物(例如，透明质酸，优选细菌发酵的HA)含量的凝胶并且该产品的流变性质如下：30-100Pas的剪切粘度(在200Hz)；20-150Pa的贮能模量(在5Hz的G′)，例如，约80Pa；和小于35°的相角(在5Hz的δ°)，例如，约20Pa。
在一些实施方案中，本发明提供一种组合物，包括凝胶(“凝胶组分”)和聚合物溶液(“流体组分”)的混合物。在具体的实施方案中，该凝胶和流体组分以80:20重量比值混合。在上述实施方案中，凝胶中聚合物(HA)的含量是8.25±1.5mg/ml、优选8.25±0.75mg/ml，而该流体组分的聚合物含量为2.25±1.0mg/ml、优选2.25±0.25mg/ml。(因此该组合物的总聚合物含量(改性的和未改性的)为10.5±2.5mg/ml、优选10.5±1.0mg/ml。)替换地，所述组分可以以60:40到90:10的比值混合，例如，70:30、75:25、和85:15。该组合物的流变性质如下：30-100Pas的剪切粘度(在200Hz)；20-150Pa的贮能模量(在5Hz的G′)，；和小于35°的相角(在5Hz的δ)。
该发明进一步地提供一种装置，它是预填充的注射器，该注射器具有单一单位剂量的无菌的、非致热的组合物，该组合物包括凝胶组分和有或者没有流体组分，所述组合物是根据本发明所述的任何方法制备的。
本发明还提供一种方法，其中在生物活性物质的存在下进行交联步骤(步骤b)。生物活性物质可以包括药理学的药、蛋白质、DNA、维生素或其它所希望的生物活性物质。
本发明进一步提供一种方法，包括在生理学pH下将凝胶与生物活性物质混合的步骤。该生物活性物质可以包含药理学的药、蛋白质、DNA、维生素、细胞或其它生物活性物质。可以将该生物活性物质与凝胶混合，所述凝胶是用本发明的方法和/或现有的原材料制造的。
本发明还提供一种方法，其中起始聚合物溶液包括透明质酸、hylan、或其混合物和另一个选自氨基多糖、多阴离子多醣、不带电荷的多糖、多醣树胶、多元醇或多胺的聚合物。
本发明还提供一种根据本发明上述任一方法制备的凝胶。在进一步的实施方案中，本发明提供一种包括凝胶和药物赋形剂的药物组合物。
在又另一个实施方案中，本发明提供一种通过对需要的患者施用包括凝胶的药物组合物以治疗医疗病症的方法。
在优选的实施方案中，医学病症是骨关节炎(OA)，该组合物是在关节间隙给药，如，例如，膝、肩、颞下颌和腕掌关节、肘、臀部、腕、踝、和在脊骨中的腰椎骨之关节突(小关节面)节。通过一次或多次关节内注射到膝或其它疼痛的关节可以在几星期的时期内给药完成黏弹性补充。例如，受到膝OA的人可以接受每膝盖约2、3、4、5、6、7、8、9、10毫升或更多的一次、两次、或三次注射。对其它关节，给药体积可以根据关节的大小来调整。
在另一个实施方案中，该组合物用于产生栓子。
在另外的实施方案中，该医疗症状是预防手术后粘连，将该组合物施用到外科切割位置。替换地，该医疗症状是预防手术后粘连并且该组合物施用到远离外科切割的位置的组织中。在优选方案中，该组合物通过内窥镜施用。
在另外的实施方案中，本发明的组合物可以用作皮肤的填料，例如：用于处理皱纹和皮肤或其它组织体积缺陷，或用于声带扩充。
在上述描述内容、随后的实施例和权利要求中，二乙烯基砜与聚合物的比值(DVS:Pol)是以w/w为基础记录的，除非有相反指示。调节透明质酸钠或可溶解的hylan纤维(钠盐)的重量以减少它们的含水率。中等和高MW的细菌发酵的透明质酸钠分别具有约1.7MDa和约2.7MDa的MWs。中等MW透明质酸钠是从日本的Shiseido Corporation获得的。高和低MW透明质酸钠是从Genzyme Corporation，Cambridge，Massachusetts获得的。低和极低MW聚合物是用如美国专利6,383,344中所描写的γ照射方法制造的。可溶解的hylan纤维(钠盐)具有约6MDa的MW，它是从Genzyme Corporation，Ridgefield，New Jersey获得的并根据美国专利4,713,448制备的。中性盐水指pH约6-7的0.15M氯化钠溶液。对于自由洗涤，用以下方式所需的量来计算用于洗涤的盐酸(HCl)的量：使中性盐水洗液的pH≤4.0、优选pH2.0-3.0或1.5到3.0、但更优选pH2.3-2.8、和然后弥补中和在反应混合物中使用的氢氧化钠所需的酸的摩尔数、和然后将多醣盐转换成到多醣酸、例如透明质酸钠到透明质酸。对于限制洗涤，用含水的酸性盐溶液洗涤该凝胶，它是HCl已经添加到其中直到pH低于或等于4.0、优选pH2.0-3.0的中性盐水。继续限制洗涤优选直到该凝胶具有2.3-2.8的pH。磷酸盐缓冲盐水(PBS)具有7.3-7.4的pH，除非另有陈述。在室温下洗涤凝胶，除非有相反指示。术语生理学pH是指约6.9到7.5的pH范围。凝胶样品的强度，软或坚固，是根据它们的相角δ和复数模量G*测定的，低相角和高复数模量值指示坚固的凝胶。凝胶的弹性和粘性性质是由屈服应变确定的，高屈服应变值指示弹性和粘性的凝胶。凝胶的目视观测和手动操作也给出了它们的胶粘和粘性性质的指示。透明质酸和hylan浓度是由己糖醛酸试验使用自动化咔唑方法(AnalyticalBiochem 1965，12，547-558)测定的。使用透析管透析的全部样品具有12-14KDa的截留分子量(molecular weight cut off)。
整个这个申请，参考不同的出版物。因此将那些出版物全部内容的教导引入作为参考。本发明更详细地描述于下列实施例中，给出的这些实施例仅作为说明而不是意欲限制权利要求所阐述的本发明范围。
实施例中提及的表位于结尾。在下列已经添加了盐的实施例中，IPC是以在粘度调节剂如，例如NaCl、或其它碎盐、优选生物相容的盐添加之前在氢氧化钠溶液中聚合物的浓度计算的。除非另作说明，与IPC有关的术语“％”和“w％”可交换地使用。
实施例1—包含细菌发酵的透明质酸钠的0.75％IPC-中等MW
这个实施例说明了具有0.75％的IPC和2:1的DVS:Pol比值的凝胶的制备。
在无菌的反应堆容器中在中等MW细菌发酵的透明质酸钠粉末(约1.7MDa，5.30g)中添加无菌水525.7g并在定轨振荡器上在4℃下混合18小时。在室温下，在这个溶液中添加无菌过滤的1M NaOH溶液(60.00mL)，提供具有0.1M浓度NaOH的聚合物溶液。在机械拌和下(300-500rpm)在聚合物溶液中添加DVS(7.60mL)并将混合物在室温下搅拌25分钟。将反应混合物放入透析管中，然后在室温下存储4小时以提供凝胶。然后用包含HCl溶液(7.70mL)的无菌中性盐水(10.0L)冲洗该凝胶直到pH在2.3-2.8。然后用中性盐水广泛地洗涤该凝胶直到pH是约5.1。然后用12L份的中性盐水广泛地洗涤该凝胶直到pH在7.0和7.4之间，其中在所述中性盐水中已经添加了包含0.5MNaHCO3的13.5mL中性盐水。然后除去该凝胶。凝胶的最终得率是607.1g并具有0.72％的FPC。一部分凝胶在131℃下高压灭菌10分钟。表1中所示的流变数据和观察结果表明该凝胶是弹性的和软的并有粘性。
实施例2—包含Hylan纤维的0.5％IPC
这个实施例说明了具有0.5％的IPC和4:1的DVS:Pol比值的凝胶的制备。
在hylan钠盐(约6MDa，265.6g)的0.75％溶液中添加无菌水(133.1g)，然后在滚筒装置上在室温下混合约18小时。添加无菌过滤的1MNaOH溶液(45.00mL)并在Turbula T2F倾覆振荡器上混合该流体10分钟。然后，添加DVS(2.50mL)并继续再混合30分钟。然后将该反应混合物转入透析管中并在室温下存储4h。所产生的凝胶用包含12M HCl溶液(6.50mL)的中性盐水洗涤直到pH是约2.3-2.8，然后广泛地用3.0L份的中性盐水洗涤直到pH为6.0-6.5。然后用3.0L份的中性盐水广泛地洗涤该凝胶直到pH为约7，其中在所述中性盐水中已经添加了4.0mL的包含0.5M NaHCO3的中性盐水。该凝胶是胶粘并且有粘性的，而且更软，并具有0.45％的FPC。根据元素分析数据，含硫量是3.56％。一部分凝胶在131℃下高压灭菌10分钟。表1中所示的流变数据和观察结果表明该凝胶类似流体、具有弹性并且是软的和有粘性。
实施例3—包含Hylan纤维的0.38％IPC
这个实施例说明了具有0.38％的IPC和6:1的DVS:Pol比值的凝胶的制备。
在hylan纤维(钠盐)(1.34g)中添加无菌水(261.9g)，在室温下机械搅拌该混合物18小时。在室温下，在这个聚合物溶液中添加1MNaOH溶液(30.00mL)，提供具有0.1M浓度NaOH的聚合物溶液。将该聚合物溶液在300-500rpm下机械搅拌10分钟。在这个聚合物溶液中添加悬浮在去离子水(0.880mL)中的DVS(1.940mL)。在室温下将反应混合物搅拌大约30分钟，然后添加另外的DVS(3.800mL)随后再混合30分钟。使用漏斗把反应混合物倒入限制洗涤的透析管内并在室温下在密闭容器中存储3小时，所述密闭容器含有少量的盐水以提供一些湿度并且防止该管干燥。然后用0.15M盐水透析所得到的凝胶直到凝胶的pH达到2.7，其中所述盐水已经使用HCl溶液酸化到pH约2.5。然后用中性盐水透析该凝胶直到pH为约6.5。该凝胶具有0.35％的FPC。一部分凝胶在131℃下高压灭菌10分钟。表1中所示的流变数据和观察结果表明该凝胶是软的、有粘性和弹性，但是在性质上更像流体。
实施例4—包含Hylan纤维的0.25％IPC
这个实施例说明了具有0.25％的IPC和8:1的DVS:Pol比值的凝胶的制备。
在定轨振荡器上通过摇动约24h将Hylan纤维(钠盐)(0.144g)溶解于去离子水(42.00mL)中。在聚合物溶液中添加1M NaOH(5.00mL)并且在高架混合器中搅拌该聚合物溶液。在聚合物溶液中添加DVS在去离子水(1.875mL)中的悬浮液(0.880mL)并将它在室温下混合2小时。该产品的颜色在2小时内从明亮变到暗灰色。在～4℃下存储该反应混合物整夜，产生凝胶。然后将该凝胶转入用于限制洗涤的透析管中并在两天内用0.15M盐溶液洗涤，所述盐溶液用HCl溶液酸化到pH约2.5。然后广泛地用中性盐水冲洗5-7天。流变学分析(表1)和观察结果表明该产品是弹性的和相对软的凝胶。
实施例5—包含Hylan纤维的0.15％IPC
这个实施例说明了具有0.15％的IPC和17.7:1的DVS:Pol比值的材料的制备。
在hylan纤维(钠盐)(0.231g)中添加1M NaOH溶液(97.52g)并将该混合物在～500rpm下搅拌～80分钟。在这个聚合物溶液中添加DVS(2.250mL)，并剧烈机械搅拌5分钟。该反应混合物在～4小时内慢慢地从桃色变为乳白色。该反应混合物在室温下存储整夜。在贮存整夜之后该反应混合物仍然好象是流体，然后将它转入限制洗涤的渗析管中。在定轨振荡器上在～120rpm下用4.0L中性盐水洗涤该混合物，所述盐水中添加了12.0mL的2M HCl以获得具有2.5的pH的酸性盐水洗涤。在～8小时之后，将酸性盐水洗液换为如所述方法制备的4.0L新鲜的酸性盐水洗涤液，并将该反应混合物在4℃下存储约72小时。在大约72小时贮存之后，该产品看起来没有凝胶化并已经分成两个相：无色上相和乳白色下相。
实施例6—4％的细菌发酵的透明质酸钠-中等MW
这个实施例说明了在4％的IPC和1:17的DVS:Pol比值下制备凝胶。
将中等MW细菌发酵的透明质酸钠(8.42g)加入到包含0.2M NaOH溶液(190.60g)的烧杯中并在室温下机械搅拌(500-750rpm)约90分钟。在聚合物溶液中慢慢地添加溶于异丙醇(IPA)(0.600mL)的DVS(0.400mL)并将该混合物再搅拌15分钟。(IPA用来帮助将少量DVS分散在大量的聚合物溶液中—可以选择任何合适的水溶性稀释剂)将反应混合物倒入23 x 18cm的
Figure C200480039183D0024115416QIETU
玻璃皿中，封盖并且存储四小时提供凝胶。然后把该凝胶转入包含已经添加2M HCl(36.00mL)的中性盐水(4.8L)的玻璃容器中并在定轨振荡器上在室温下摇动约24小时。测量凝胶的pH(2.7-2.8)，然后在中性盐水中(10.0L)洗涤该凝胶约24小时。测量该凝胶的pH(3.3)，然后在0.025M磷酸盐缓冲盐水溶液(3.0L)中洗涤24小时。凝胶的最终得率是953.8g并具有0.81％的FPC。一部分凝胶在126℃下高压灭菌10分钟。表1中所示的流变数据和观察结果表明该凝胶是稍微弹性的、和有粘性的，但是相对坚硬。根据元素分析数据含硫量是0.95％。
实施例7—4.8％ IPC细菌发酵的透明质酸钠-中等MW
这个实施例说明了在4.8％的IPC和1:48的DVS:Pol比值下制备凝胶。
在快速机械搅拌下将中等MW细菌发酵的透明质酸钠(10.52g)慢慢加入0.2M NaOH溶液(200ml)中以产生4.8％IPC的聚合物溶液。在90分钟之后，通过滴管(5x～0.2mL)将溶于IPA(0.830mL)中的DVS(0.170mL)溶液在一分钟内慢慢添加到聚合物溶液中。搅拌反应混合物15分钟，然后倒入
Figure C200480039183D0024115438QIETU
托盘(23 x 18 x 6.6cm)并用塑料盖密封。在室温下将反应混合物再存储3.75小时。然后将所得到的凝胶转入玻璃容器并且用中性盐水(3.0L)自由洗涤并在定轨振荡器上在室温下搅拌约24小时，所述盐水中已经添加2M HCl溶液(16.50mL)。除去该凝胶，记录pH(2.8)，然后在定轨振荡器上用中性盐水(10.0L)洗涤。在大约24小时之后，使用滤网排出盐水并且用pH7.6的0.025M磷酸盐缓冲盐水(3.5L)洗涤该凝胶约24小时。然后从洗涤液中去除该凝胶(1.9Kg和pH7.2)。FPC是0.53％。将产品的样品在121℃下高压灭菌15分钟。表1中所示的流变数据和观察结果表明该凝胶是弹性的、有粘性、和柔软的。
实施例8—4.8％IPC细菌发酵的透明质酸钠-高MW
这个实施例说明了在4.8％的IPC和1:96的DVS:Pol比值下制备凝胶。
在快速机械搅拌下将高MW细菌发酵的透明质酸钠(10.27g)慢慢加入0.2M NaOH溶液(189.63g)中以产生4.8％IPC的聚合物溶液。在90分钟之后，通过滴管(5x～0.2mL)将溶于IPA(0.920mL)中的DVS(0.080mL)溶液在一分钟内慢慢添加到聚合物溶液中。搅拌反应混合物15分钟，然后倒入
Figure C200480039183D0025115501QIETU
托盘(23 x 18 x 6.5cm)并用塑料盖密封。在室温下将反应混合物存储4小时以提供凝胶，然后转入包含中性盐水(3.0L)的玻璃容器中，所述盐水中加入了2M HCl溶液(36.00ml)。然后在定轨振荡器上在室温下搅拌24小时。使用滤网排出洗涤液并除去该凝胶。记录凝胶的pH(2.4)，然后在定轨振荡器上用中性盐水(7.5L)洗涤4小时。在24小时内通过将1M NaOH溶液(21.50mL)添加到洗涤液中慢慢将该凝胶的pH调节到5.0-6.5。然后排去盐水，并用pH7.4的0.01M PBS溶液(3.0L)洗涤7.5小时。将一部分材料在126℃下高压灭菌10分钟。表1中所示的流变数据和观察结果表明该凝胶是弹性的、有粘性、和软的。
实施例9—5.6％IPC细菌发酵的透明质酸钠-高MW
这个实施例说明了在5.6％的IPC和1:48的DVS:Pol比值下制备凝胶。
在搅拌下将NaCl(11.70g)添加到0.2M NaOH(187.60g)中直到溶解。在快速机械搅拌下添加高MW细菌发酵的透明质酸钠(12.30g)，然后继续搅拌120分钟，产生5.6％IPC的聚合物溶液。通过滴管(5x～0.2mL)将溶于IPA(0.800mL)中的DVS(0.200mL)溶液在一分钟内慢慢添加到聚合物溶液中。在搅拌2-3分钟之后，将混合物倒入
Figure C200480039183D0025115528QIETU
托盘(23 x 18 x 6.5cm)并用塑料盖密封。在室温下将反应混合物存储4小时以提供凝胶。然后转入包含0.5M盐水(3.0L)的玻璃容器中，所述盐水中加入了2M HCl溶液(36.00ml)，然后在定轨振荡器上在室温下搅拌24小时。使用滤网排出洗涤液并除去该凝胶。记录凝胶的pH(2.2)，然后在定轨振荡器上用中性盐水(7.5L)洗涤4小时。在24小时期间内通过将1M NaOH溶液(21.50mL)添加到洗涤液中慢慢将该凝胶的pH调节到5.0-6.5。排去盐水，并用pH 7.4的0.01M PBS溶液(3.0L)洗涤该凝胶8-24小时。在1.0％FPC下的最终得率是1008.5g。通过添加0.01M PBS溶液将一部分材料的浓度调节到0.75％，然后在126℃下高压灭菌10分钟。表1中所示的流变数据和观察结果表明该凝胶是弹性的、有粘性的、和软的。
实施例10—5.6％细菌发酵的透明质酸钠-高MW
这个实施例说明了在5.6％的IPC和1:96的DVS:Pol比值下制备凝胶。
在搅拌下将NaCl(11.70g)添加到0.2M NaOH(186.90g)中直到溶解。在快速机械搅拌下添加高MW细菌发酵的透明质酸钠(12.30g)，然后继续搅拌120分钟产生5.6％IPC的聚合物溶液。通过滴管(5x～0.2mL)将溶于IPA(0.900mL)中的DVS(0.100mL)溶液在一分钟内慢慢添加到聚合物溶液中。在搅拌2-3分钟之后将混合物倒入
Figure C200480039183D0026115919QIETU
托盘(23 x 18 x 6.5cm)并用塑料盖密封。在室温下将反应混合物存储4小时以提供凝胶，然后转入包含NaCl(13.80g)和2M HCl(39.50mL)在去离子水(3.0L)中的溶液的玻璃容器中，然后在定轨振荡器上在室温下搅拌24小时。使用滤网排出洗涤液并除去该凝胶。记录pH(2.1)，然后在定轨振荡器上用中性盐水(7.0L)洗涤该凝胶4小时。在24小时期间内通过将1M NaOH溶液(22.50mL)添加到洗涤液中慢慢将该凝胶的pH调节到5.0-6.5。排去洗涤液，并用pH 7.4的0.01M PBS溶液(3.0L)洗涤该凝胶8-24小时。凝胶的最终得率是883.5g并具有0.88％FPC。通过添加0.01M PBS溶液将一部分凝胶的浓度调节到0.74％，然后在126℃下高压灭菌该材料10分钟。表1中所示的流变数据和观察结果表明该凝胶是弹性的、有粘性、和软的。
实施例11—6.0％IPC细菌发酵的透明质酸钠-高MW
这个实施例说明了在6.0％的IPC和1:48的DVS:Pol比值下制备凝胶。
在搅拌下将NaCl(11.70g)添加到0.2M NaOH(186.75g)中直到溶解。在快速机械搅拌下添加高MW细菌发酵的透明质酸钠(13.00g)，然后继续搅拌120分钟以产生6.0％IPC的聚合物溶液。通过滴管(5x～0.2mL)将溶于IPA(0.790mL)中的DVS(0.210mL)溶液在一分钟内添加到聚合物溶液中。在搅拌2-3分钟之后将反应混合物倒入
Figure C200480039183D0027120021QIETU
托盘(23 x 18 x 6.5cm)并用塑料盖密封。在室温下将它存储4小时以提供凝胶，然后转入包含中性盐水(3.0L)的玻璃容器中，所述盐水中已经加入了2M HCl溶液(37.90mL)，然后在定轨振荡器上在室温下搅拌24小时。使用滤网排出洗涤液并记录凝胶的pH(2.4)。然后用中性盐水(7.0L)洗涤该凝胶4小时，然后在24小时期间内通过将1MNaOH溶液(21.50mL)添加到洗涤液中慢慢将该凝胶的pH调节到5.0-6.5。然后使用滤网排去盐水，并用pH7.6的0.01M磷酸盐缓冲盐水(3.0L)洗涤该凝胶约8-24小时。凝胶的最终得率是1008.2g并具有0.97％的FPC。通过添加0.01M PBS溶液将一部分材料的浓度调节到0.68％。然后在126℃下高压灭菌该材料10分钟。表1中所示的流变数据和观察结果表明该凝胶是弹性的、有粘性、和软的。
实施例12—6.0％IPC细菌发酵的透明质酸钠-高MW
这个实施例说明了在6％的IPC和1:96的DVS:Pol比值下制备凝胶。
在搅拌下将NaCl(11.79g)添加到0.2M NaOH(186.71g)中直到溶解。在快速机械搅拌下添加高MW细菌发酵的透明质酸钠(13.17g)，然后继续搅拌120分钟以产生6.0％IPC的聚合物溶液。通过滴管(5x～0.2mL)将溶于IPA(0.900mL)中的DVS(0.105mL)溶液在约一分钟内慢慢添加到聚合物溶液中。再搅拌2-3分钟之后将反应混合物倒入
Figure C200480039183D0027120058QIETU
托盘(23 x 18 x 6.5cm)并用塑料盖密封。在室温下将它存储4小时以提供凝胶，然后转入包含中性盐水(3.0L)的玻璃容器中，所述盐水中已经加入了2M HCl溶液(36.00mL)，然后在定轨振荡器上在室温下搅拌约24小时。去除凝胶，记录pH(2.2)，然后用中性盐水(7.0L)在定轨振荡器上洗涤该凝胶大约4小时。在24小时期间内通过将1M NaOH溶液添加到洗涤液中慢慢将该凝胶的pH调节到5.0-6.5。然后使用滤网排去盐水，并用pH7.6的0.01M PBS溶液(3.0L)洗涤该凝胶4小时。凝胶的最终得率是1040.4g并具有1.12％的FPC。通过添加0.01M PBS溶液将一部分凝胶的浓度调节到0.74％，然后在126℃下高压灭菌该材料10分钟。表1中所示的流变数据和观察结果表明该凝胶是弹性的、有粘性、和软的。
实施例13—8.0％ IPC细菌发酵的透明质酸钠-中等MW
这个实施例说明了在8％的IPC和1:100的DVS:Pol比值下制备凝胶。
在搅拌下将NaCl(5.85g)添加到0.2M NaOH(91.58g)中直到溶解。在快速机械搅拌下添加中等MW细菌发酵的透明质酸钠(8.35g)，然后继续搅拌120分钟以产生8.0％IPC的聚合物溶液。通过滴管(5x～0.2mL)将溶于IPA(0.932mL)中的DVS(0.068mL)溶液在一分钟内慢慢添加到聚合物溶液中并继续搅拌另外的2-3分钟。将反应混合物在室温下存储4小时以提供凝胶，然后转入包含中性盐水(在1.8L的5.96gNaCl)的玻璃容器中，所述盐水中已经加入了2M HCl溶液(23.80mL)，然后在定轨振荡器上在室温下搅拌约24小时。使用滤网排去洗涤液，记录凝胶的pH(2.4)。然后用中性盐水(4.5L)在定轨振荡器上洗涤4小时，接着排出洗液。通过以下方式将该凝胶的pH调节到5.0-6.5：通过在中性盐水中对凝胶进行第一次洗涤8小时，排去洗液，然后使用包含1MNaOH溶液(15.00mL)的中性盐水(4.5L)洗涤。用0.01M PBS溶液(3.0L)进行最后的洗涤步骤。在0.81％FPC下凝胶的最终得率是882.7g。在126℃下高压灭菌该材料10分钟。表1中所示的流变数据和观察结果表明该凝胶是弹性的、有粘性、和软的。
实施例14—包含Hylan纤维的3％IPC
这个实施例说明了在3％的IPC和4:17的DVS:Pol比值下制备凝胶。
在快速机械搅拌下将hylan纤维(钠盐)(6.60g)添加到0.1MNaOH溶液(192.00g)中，并继续搅拌2小时直到溶解。在快速机械搅拌下将DVS(1.200mL)添加到聚合物溶液中。将该反应混合物在高速下搅拌大约2分钟，然后倒入托盘(23 x 18 x 6.5cm)并用塑料盖密封。在室温下将反应混合物存储2小时以提供凝胶，然后转入包含中性盐水溶液(3.0L)的玻璃容器中。然后在定轨振荡器上在室温下搅拌约24小时。然后使用滤网排去洗涤液，并用中性盐水(3.0L)进行另外的洗涤。在3天内交换洗涤液5次。为了在高压灭菌之前确保凝胶的pH是6.9-7.4，在0.01M PBS溶液(3.0L)中进行最后的洗涤24小时。凝胶的最终得率是821.0g并具有0.57％的FPC。通过添加PBS将一部分凝胶的浓度调节到0.49％，然后将这个样品在126℃下高压灭菌10分钟。如表2所示的流变数据和观察结果表明该凝胶是典型的hylan B凝胶，并且是非弹性的、非粘性的和坚硬的。
实施例15—包含Hylan纤维的3％IPC
这个实施例说明了在3％的IPC和4:17的DVS:Pol比值下制备凝胶。
在快速机械搅拌下将hylan纤维(钠盐)(6.60g)添加到0.2MNaOH溶液(192.00g)中，并继续搅拌2小时直到溶解。在机械搅拌下将DVS(1.200mL)添加到聚合物溶液中。将该反应混合物搅拌约2分钟，然后倒入
Figure C200480039183D0029134630QIETU
托盘(23 x 18 x 6.5cm)并用塑料盖密封。然后在室温下将反应混合物存储4小时以提供凝胶，然后转入包含中性盐水溶液(3.0L)的玻璃容器中，所述盐水中已经添加了2M HCl溶液(23.10ml)。然后在定轨振荡器上在室温下搅拌该凝胶。在约19小时之后使用滤网排去盐水，记录凝胶的重量(286.7g)和pH(2.8)。再次用中性盐水(3.0L)对该凝胶进行洗涤并在定轨振荡器上振动4小时。然后在几个小时的期间将1M NaOH溶液慢慢地添加到洗液中以将凝胶的pH增加到4.5-6.5。在大约21小时之后，排去洗液并记下凝胶的重量(626.2g)和pH(6.8-7.5)。然后将该凝胶转入0.01M PBS溶液(3L)中并洗涤约17小时。凝胶的最终得率是761.7g并具有0.64％的FPC。通过添加0.01M PBS溶液将一部分材料的浓度调节到0.52％，然后将这个材料在126℃下高压灭菌10分钟。如表2所示的流变数据和观察结果表明该凝胶比实施例14的凝胶更软和更有弹性和更有粘性。
实施例16—包含Hylan纤维的1％ IPC
这个实施例说明了在1％的IPC和5:1的DVS:Pol比值下制备凝胶。
在快速机械搅拌下将hylan纤维(钠盐)(1.10g)添加到0.1MNaOH溶液(93.90g)中，并继续搅拌1小时直到溶解。在快速机械搅拌下将DVS(每个0.850mL的5等分样品)添加到聚合物溶液中。将该反应混合物在高速下搅拌10分钟。然后将烧杯封盖并在室温下存储2小时以提供凝胶。然后将凝胶转入包含中性盐水溶液(1.8L)的玻璃容器中。然后在定轨振荡器上在室温下将该凝胶搅拌约24小时。然后使用滤网排去洗涤液，并再次将中性盐水(4.5L)添加到凝胶中。在7天内交换洗涤液10次(每次4.5L)。为了在高压灭菌之前确保凝胶的pH是6.9-7.4，在0.01M PBS溶液(3.0L)中进行最后的洗涤。凝胶的最终得率是166.1g并具有0.42％的FPC。将一部分凝胶在126℃下高压灭菌10分钟。如表2所示的流变数据和观察结果表明该凝胶不是很有弹性或有粘性并且相对坚硬。
实施例17—包含Hylan纤维的0.9％ IPC
这个实施例说明了在0.9％的IPC和5:1的DVS:Pol比值下制备凝胶。
在快速机械搅拌下将hylan纤维(钠盐)(1.00g)添加到0.2MNaOH溶液(94.00g)中，并继续搅拌1小时直到溶解。在快速机械搅拌下将DVS(每个0.765mL的5等分样品)添加到聚合物溶液中。将该反应混合物在高速下搅拌10分钟。然后将烧杯封盖并在室温下存储4小时以提供凝胶。然后将凝胶转入包含中性盐水溶液(1.8L)的玻璃容器中，所述盐水中已经加入了2M HCl溶液(15.10ml)。然后在定轨振荡器上在室温下将该凝胶搅拌约24小时。然后使用滤网排去洗涤液，记录pH(2.3)并再次将中性盐水(4.5L)添加到凝胶中。凝胶洗涤约4.5小时，然后排去洗涤液。用已经添加1M NaOH溶液(2.00ml)的中性盐水(4.5L)继续洗涤。在16-18小时之后排去洗液，然后在0.01MPBS溶液(每次20.0L的2次洗涤)中洗涤该凝胶约48小时以便在高压灭菌之前保证凝胶的pH是6.9-7.4。凝胶的最终得率是155.9g并具有0.49％的FPC。将一部分凝胶在126℃下高压灭菌10分钟。如表2所示的流变数据和观察结果表明该凝胶比实施例16中的凝胶更软和更有弹性。
实施例18—包含Hylan纤维的1％ IPC
这个实施例说明了在1％的IPC和1.4:1的DVS:Pol比值下制备凝胶。
在快速机械搅拌下将hylan纤维(钠盐)(1.10g)添加到0.1MNaOH溶液(97.55g)中，并继续搅拌1小时直到溶解。在快速机械搅拌下将DVS(1.200mL)添加到聚合物溶液中。将该反应混合物在高速下搅拌10分钟，然后将混合物转入透析管。在封闭的容器中将反应混合物在室温下存储2小时以提供凝胶。然后将凝胶转入包含中性盐水溶液(3.0L)的玻璃容器中。在该管中保留有相当于体积的约10％的间隙或顶隙以允许溶胀。然后在定轨振荡器上在室温下将该凝胶搅拌24小时。在24小时之后该凝胶已经溶胀以填充该管并且在该管上施加高静水压。将该管延长以便为凝胶溶胀提供更多的顶隙。用中性盐水广泛地洗涤该凝胶直到pH是6.5-7.0。凝胶的最终得率是98.9g并具有0.73％的FPC。用0.01M PBS溶液将一部分凝胶的浓度调节到0.50％，然后将它在126℃下高压灭菌10分钟。如表2所示的流变数据和观察结果表明该凝胶的弹性和粘性比下面实施例19的凝胶更小，并且该凝胶比实施例19的凝胶更坚硬。
实施例19—包含Hylan纤维的0.9％ IPC
这个实施例说明了在0.9％的IPC和1.4:1的DVS:Pol比值下制备凝胶。
在快速机械搅拌下将hylan纤维(钠盐)(1.00g)添加到0.2MNaOH溶液(97.74g)中，并继续搅拌2小时直到溶解。在快速机械搅拌下将DVS(1.070mL)添加到聚合物溶液中。将该反应混合物在高速下搅拌3分钟，然后将混合物转入透析管并在封闭的容器中将凝胶在室温下存储4小时以提供凝胶。然后将在管中的凝胶转入包含中性盐水溶液(3.0L)的玻璃容器中，所述盐水中已经加入了2M HCl溶液(15.10ml)。在该管中保留有相当于管体积的约10％的供溶胀的小间隙或顶隙。然后在定轨振荡器上在室温下将包含凝胶的玻璃容器搅拌24小时。与实施例18相反仅仅观察到极小的溶胀。然后排去洗液，记录凝胶的pH(2.3)并进行中性盐水(4.0L)的洗涤。让该凝胶洗涤约3小时。然后添加1M NaOH溶液(2.60mL)洗涤。将该凝胶洗涤另外的26.5小时，然后排去洗液。然后洗液变成0.01M PBS溶液(4.0L)以在126℃下高温灭菌10分钟之前保证凝胶的pH是6.9-7.4。与实施18形成鲜明对照，仅仅观察到凝胶的轻微溶胀。凝胶的最终得率是89.0g并具有0.78％的FPC。用PBS溶液将一部分材料的浓度调节到0.49％并在126℃下高压灭菌10分钟。如表2所示的流变数据和观察结果表明该凝胶比实施例18的凝胶更软、更有弹性和粘性。
实施例20—4.0％IPC细菌发酵的透明质酸钠-中等MW
这个实施例说明了在4％的IPC和1:15的DVS:Pol下制备凝胶。
在快速机械搅拌下将中等MW细菌发酵的透明质酸钠(4.21g)添加到0.1M NaOH(95.54g)中并持续搅拌120分钟直到溶解产生具有4.0％IPC的聚合物溶液。将溶于IPA(0.750mL)中的DVS(0.225mL)溶液添加到聚合物溶液中并搅拌2-3分钟。将反应混合物在室温下存储1小时以提供凝胶，然后转入包含中性盐水(1.8L)的玻璃容器中，并在定轨振荡器上在室温下搅拌24小时。使用滤网排去洗涤液，然后用中性盐水(4.0L)在定轨振荡器上洗涤该凝胶24小时。用中性盐水广泛地洗涤该凝胶直到pH是约6.5-7.0。凝胶在盐水中的溶胀速度是低的。然后轻轻倒出该盐水。凝胶的最终得率是562.5g并且具有0.63％的FPC。在126℃下高压灭菌一部分材料10分钟。表2中所示的流变数据和观察结果表明该凝胶比实施例6的凝胶更坚硬、更小弹性和更小粘性。
实施例21—8.0％IPC细菌发酵的透明质酸钠-中等MW
这个实施例说明了在8％的IPC和2:35的DVS:Pol比值下制备凝胶。在搅拌下将NaCl(5.85g)添加到0.2M NaOH溶液(90.63g)中直到溶解。在快速机械搅拌下添加中等MW细菌发酵的透明质酸钠(8.40g)，继续搅拌120分钟直到溶解产生8.0％ IPC的聚合物溶液。通过滴管(5x～0.2mL)将溶于IPA(0.610mL)中的DVS(0.390mL)溶液在一分钟内添加到聚合物溶液中。在高速下将反应混合物搅拌2-3分钟并在室温下存储4小时以提供凝胶。然后将它转入包含中性盐水(3.0L)的玻璃容器中，所述盐水中已经加入了2M HCl溶液(21.00ml)，并且在定轨振荡器上在室温下搅拌约25小时。使用滤网排去洗涤液，记录凝胶的pH(2.2)并再用中性盐水(4.0L)在定轨振荡器上洗涤该凝胶17小时。在7天时期内通过在洗液中添加1M NaOH溶液(15.00ml)慢慢地将该凝胶的pH调节到5.0-6.5。然后用0.01M PBS溶液(2.0L)洗涤该凝胶约24小时，接着用另外的0.01M PBS溶液4.0L洗涤7天，此时凝胶的pH是7.4。凝胶的最终得率是416.3g并且具有1.73％的FPC。用0.01M PBS溶液将一部分材料的浓度调节到1.5％。一部分两个材料在126℃下高压灭菌10分钟。表2中所示的流变数据和观察结果表明该凝胶非常坚硬、没有弹性并且没有粘性，但是可以稍微稀释而没有相分离。
实施例22—8.0％ IPC细菌发酵的透明质酸钠-中等MW
这个实施例说明了在8％的IPC和1:15的DVS:Pol比值下制备凝胶。
在快速机械搅拌下将中等MW细菌发酵的透明质酸钠(8.56g)添加到0.1M NaOH溶液(90.91g)中，继续搅拌120分钟直到溶解产生8.0％ IPC的聚合物溶液。将DVS(0.450mL)在快速搅拌下添加到聚合物溶液中。然后在高速下将反应混合物搅拌2-3分钟并在在室温下存储2小时以提供凝胶。然后将它转入包含中性盐水(1.8L)的玻璃容器中，并且在定轨振荡器上在室温下搅拌24小时。用4.5L份中性盐水在9天期间内广泛地洗涤该凝胶，在这个时候观察到该凝胶在洗涤步骤期间容易破碎和形成颗粒。该凝胶在盐水中的溶胀速度低。凝胶的最终得率是400.1g并且具有1.76％的FPC。一部分材料在126℃下高压灭菌10分钟。表2中所示的流变数据和观察结果表明该凝胶非常坚硬、没有弹性并且没有粘性。与实施例21的凝胶相比，不能将该材料的浓度在没有相分离的情况下调的更低。
实施例23—0.75％ IPC高MW透明质酸钠和0.75％的软骨素6硫酸盐
这个实施例说明凝胶可以在透明质酸钠和软骨素6硫酸盐的IPC各自是0.75％并且DVS:透明质酸钠比值是2:1的条件下制备。
可以将去离子水(87.00g)添加到高MW透明质酸钠(0.75g)和软骨素6-硫酸盐(0.75g)中并在室温下机械搅拌混合物约24h。在室温下将1M NaOH溶液(10.00mL)添加到混合聚合物溶液中提供具有0.1M浓度NaOH的混合聚合物溶液。在高速下机械搅拌该聚合物溶液10分钟。将DVS(1.275mL)添加到这个聚合物溶液中。在高速下搅拌反应混合物大约30分钟。将反应混合物倒入透析管中并在室温下存储3小时，产生凝胶。然后用0.15M盐水(3.0L)透析该凝胶，所述盐水使用HCl溶液酸化到pH约2.5。洗涤该凝胶直到凝胶的pH是约2.3-2.8。然后排去洗液，接着用3.0L份的中性盐水广泛地透析该凝胶直到pH为约6.5，在0.01M PBS溶液(3.0L)中进行最后的洗涤以在高压灭菌之前确保凝胶的pH为约7.4。
实施例24—0.75％ IPC高MW透明质酸钠和0.75％聚乙烯醇
这个实施例说明凝胶可以在透明质酸钠和聚乙烯醇的IPC各自是0.75％并且DVS:透明质酸钠比值是2:1的条件下制备。
在热(60℃)的去离子水(87.00g)中添加聚乙烯醇(MW～100KDa，0.75g)并且机械搅拌该混合物约2h。让聚合物溶液接近室温，然后在约24h机械搅拌下添加中等MW透明质酸钠(0.75g)。在混合聚合物溶液中添加1M NaOH溶液(10.00mL)以提供具有0.1M浓度NaOH的混合聚合物溶液。在高速下机械搅拌该混合聚合物溶液10分钟。将DVS(1.275mL)添加到这个聚合物溶液中。在高速下搅拌反应混合物大约30分钟。将反应混合物倒入透析管中并在室温下存储3小时，产生凝胶。然后用0.15M盐水(3.0L)透析该凝胶，所述盐水使用HCl溶液酸化到pH约2.5。洗涤该凝胶直到凝胶的pH是约2.3-2.8。然后排去洗液，接着用3.0L份的中性盐水广泛地透析该凝胶直到pH为约6.5，在0.01M PBS溶液(3.0L)中进行最后的洗涤以在高压灭菌之前确保凝胶的pH为约7.4。
实施例25—0.9％ IPC高MW透明质酸钠和0.9％羧甲基纤维素
这个实施例说明凝胶可以在透明质酸钠和聚乙烯醇的IPC各自是0.75％并且DVS:透明质酸钠比值是1.4:1的条件下制备。
可以将去离子水(86.90g)添加到高MW透明质酸钠(0.90g)和羧甲基纤维素(0.90g)中并在室温下机械搅拌混合物约24h。在室温下将1MNaOH溶液(10.00mL)添加到混合聚合物溶液中提供具有0.1M浓度NaOH的混合聚合物溶液。在高速下机械搅拌该聚合物溶液10分钟。将DVS(1.105mL)添加到这个聚合物溶液中。在高速下搅拌反应混合物大约30分钟。将反应混合物倒入透析管中并在室温下存储3小时，产生凝胶。然后用0.15M盐水(3.0L)透析该凝胶，所述盐水使用HCl溶液酸化到pH约2.5。洗涤该凝胶直到凝胶的pH是约2.3-2.8。然后排去洗液，接着用3.0L份的中性盐水广泛地透析该凝胶直到pH为约6.5，在0.01M PBS溶液(3.0L)中进行最后的洗涤以在高压灭菌之前确保凝胶的pH为约7.4。
实施例26—3.0％ IPC细菌发酵的透明质酸钠-中等MW和1.0％IPC海藻酸钠
这个实施例说明凝胶可以在4.0％ IPC和DVS:Pol比值是1:24的条件下制备。
在0.2M NaOH溶液(191.70g)中慢慢添加中等MW细菌发酵的透明质酸钠(6.00g)和海藻酸钠(2.00g)中并快速机械搅拌混合物90-120分钟以提供具有3.0％透明质酸钠和1.0％海藻酸钠的IPC的聚合物溶液。通过滴管(5x～0.2mL)将溶于IPA(0.709mL)中的DVS(0.210mL)溶液在一分钟内慢慢添加到聚合物溶液中。将反应混合物搅拌15分钟，然后将反应混合物倒入
Figure C200480039183D0035134902QIETU
托盘(23 x 18 x 6.6cm)并用塑料盖密封。在室温下将反应混合物存储另外的225分钟。然后将所产生的凝胶转入包含中性盐水溶液(3.0L)的玻璃容器中，所述盐水中含有2M HCl溶液(27.80ml)，然后在定轨振荡器上在室温下搅拌约24小时。然后使用滤网排去洗液，记录pH(2.8)，并用3.0L份中性盐水在定轨振荡器上进行广泛地洗涤直到pH是5.0-6.5。接着用0.01M磷酸盐缓冲盐水(3.0L)洗涤该凝胶约24小时。
实施例27—用于施药的酸洗涤的凝胶与水溶性药的混合物
在灭菌的处理条件(层流净化罩)下在实施例9的凝胶(50.00g，0.75％ FPC)中可以添加：0.01M非甾族的抗炎药如双氯芬酸的PBS溶液(16.80mL，9mg/mL)；局部麻醉剂如丁哌卡因氢氯化物(35.00mL，5mg/mL)；抗肿瘤药如氨甲喋呤(5.00mL，25mg/mL)或抗心律不整药(anti-arrythmic)如心得安氢氯化物(5.00毫升，25毫克/毫升)。将含有药的凝胶在Turbula T2F混合器上以23min-1速度和室温下混合约24h。然后冷冻该混合物并冻干成干泡沫样的材料。通过添加无菌的0.01MPBS或无菌的0.15M盐水(49.63g)并在Turbular T2F混合器上混合约24h将该凝胶的FPC重新设置到0.75％。如果希望，该材料可以通过高压灭菌器最后杀菌。
实施例28—用于施药的酸性洗涤凝胶与水溶性药的混合物
在灭菌的处理条件(层流净化罩)下在实施例9的凝胶(50.00g，0.75％FPC)中可以添加：甾族的抗炎药溶液如地塞米松(5.00mL，25mg/mL)；抗肿瘤药如紫杉醇(25.00mL，5mg/mL)；或在偶极非质子溶剂如二甲亚砜中的抗心律不整药如乙胺碘呋酮(5.00mL，5mg/mL)。将凝胶和药溶液在Turbula T2F混合器上以23min-1速度和室温下混合约24h。该混合物然后投入无菌的透析管中和在无菌条件下广泛地用2.0L份的中性盐水透析，或自该药不溶解的过量乙醇或其它水溶性溶剂中沉淀出并真空干燥。通过添加无菌的0.01M PBS或无菌的0.15M盐水(49.63g)并在Turbular T2F混合器上混合约24h将该凝胶的FPC重新设置到0.75％。如果希望，该材料可以通过高压灭菌器最后杀菌。
实施例29-酸性洗涤凝胶在粘连还原中的应用
用鼠盲肠-擦破模型进行实施例6和7的粘连还原潜力的评估。根据NIH准则进行该研究，如描写于：Guide for the Care and Use ofLaboralory Animals，National Academy Press，1996。在腹部和背面用机械磨耗装置擦伤该盲肠四次，它允许操作者在定义的面积独立的控制擦伤，然后放回到在腹腔内它的解剖位置。把动物分成3组，每组由10个动物组成的一个手术对照组和两个治疗组。在两个治疗组中盲肠的每个侧面施用根据实施例6和7制备的5cm3的凝胶，该凝胶均匀分布在总共3cm3的盲肠表面。手术对照组在擦伤后没有接受更进一步治疗。在手术后7天，通过等级评估该动物的粘连形成。
组           平均发生率±SEM      ％没有粘连的动物
手术对照     1.9±0.3             11
实施例       60.3±0.2§          70*
实施例       70.1±0.1§          89*
§p<0.05对对照组Wilcoxon Rank Sum分析
*p<0.05对对照组Chi Square分析
实施例30—酸性洗涤凝胶作为关节黏弹性补充的应用
在Hartley豚鼠膝上进行包括根据实施例31制备的凝胶的试验物品的关节内注射安全的评估。这对于在关节内的安全评估是适当的模型。根据N1H准则进行该研究，如描写于Guide for the Care and Use ofLaboratoy Animals，National Academy Press，1996。将该豚鼠分成每组六个动物的组，包括一个对照组。这些组每隔一星期在左侧后方的髌股关节中受到3次注射。在关节(胫骨坪)水平面使用测径尺确定两个后腿注射前和第一天每次注射的注射后的关节宽度。此外大体上评估动物的步伐异常性。此外进行组织分析以确定任何关节软组织炎症。在评估的对照物和试验关节的变量(移动范围、尸检当天的膝宽度)之间没有差异。组织分析显示没有与注射到豚鼠膝的凝胶有联系的显著的炎症性或退行性病变。
实施例31-5.25％细菌发酵的透明质酸钠-高MW
这个实施例说明凝胶可以在5.25％ IPC和DVS:Pol比值是1:96的条件下制备。
将175.4g NaCl添加到2829.6g的0.2M NaOH溶液中，搅拌直到溶解。以20分钟的间隔在快速机械搅拌下将高MW细菌发酵的透明质酸钠(163.8g，5％LOD)分四部分(41.0、41.1、40.8和40.9g)添加到混合物中。继续混合总共120分钟。所产生的聚合物溶液具有5.25％ IPC。通过滴管将DVS溶液(1.38m LDVS和6.52ml IPA)在约10秒的间隔内以2mL的四等份方式慢慢添加到聚合物溶液中。在搅拌大约1分钟之后，将混合物倒入大的聚丙烯托盘并用塑料盖密封。在室温下将反应混合物存储4小时，产生凝胶。将该凝胶切成八个大致相等断片然后转入包含44Kg 0.15M氯化钠溶液和850mL 1 MHCl的大聚丙烯容器中。使用气泡过滤的氮以大约0.5—3.5Lpm的速度穿过该溶液而搅拌该凝胶断片。在大约18小时之后，溶液的pH是2.6。在去除酸性洗涤物之后，称重该凝胶5973.0g。然后将75Kg的中性盐水添加到凝胶中，用氮更进一步搅动该凝胶4小时。然后在洗涤开始之后的4、6和8小时在该溶液中添加94.2g的1M氢氧化钠三次。洗涤该凝胶总共24小时。在排去洗液之后，称重该凝胶11247.6g。然后将洗液换成10mMPBS溶液(41Kg)并进一步搅拌该凝胶16小时。然后排去该洗液，称重该凝胶(13783.6g)。在所有洗涤步骤结束后凝胶的FPC是1.07％。使用20网筛均匀化这材料。表3显示了凝胶的流变数据。
实施例32—1.0-1.25％透明质酸钠溶液
这个实施例说明了无菌1.0-1.25％透明质酸钠溶液的制备。
将40.5g的高MW透明质酸钠(HA)粉末放入无菌的5L 
Figure C200480039183D0038135141QIETU
包。使用置于泵和包之间的0.22um使用杀菌有效点(point-of-use)的过滤器将3420.0g的10mM的磷酸盐缓冲盐水添加到HA中。密封该包并将内含物在起伏摇床上以25-35rpm的速度在室温下搅动6天。表3显示了这个溶液的流变数据。
实施例33—凝胶-流体80:20(w/w)的混合物(Hylastan SGL-80)
这个实施例说明了hylastan SGL-80的制备。
将如实施例31所述制备的11200g的凝胶和如实施例32所述制备的2800g透明质酸钠溶液(“流体”)放入无菌的18L玻璃容器中。将该容器封盖并在
Figure C200480039183D0038135207QIETU
混合器上以25-35rpm下在室温下摇动。然后将该凝胶-流体混合物填充入5cm3的玻璃注射器中，然后在131℃下高压灭菌2.5分钟。合成混合物的流变数据如表3所示。
实施例34-10％IPC细菌发酵的透明质酸钠—低MW
实施例34和35说明了适合作为皮肤填料的凝胶的制备。通常，这种凝胶是如上述实施例所描写的用透明质酸(例如，细菌发酵的HA)与DVS交联制备。一般，皮肤填料凝胶具有下列特性：(a)IPC8-12％、优选10-12％；(b)HA MW500-2500KDa、优选500-600KDa；(c)DVS:Pol比值1:200到1:15、优选1:100到1:15、例如1:50、1:60；(d)FPC约1％到2.5％。该凝胶可以洗涤到平衡或者相反。优选，该凝胶可以酸性-洗涤，但是可以替换地在中性盐水中洗涤。
这个实施例说明在约10％ IPC和DVS:Pol比值是1:60的条件下凝胶的制备。
将117.1g NaCl添加到891.4g的0.2M NaOH溶液中，搅拌直到溶解。在快速机械搅拌下将107.0g低MW(500—600KDa)细菌发酵的透明质酸钠添加到混合物中并继续搅拌120分钟。所产生的聚合物溶液具有约10％的IPC。通过滴管(5×～1cm)将DVS溶液(1.42mL DVS和3.6ml IPA)在约1分钟内慢慢添加到聚合物溶液中。再搅拌2分钟之后，将混合物倒入4托盘(23×28×6.5cm)中并用塑料盖密封。在室温下将反应混合物存储4小时，产生凝胶。然后将该凝胶转入包含30Kg的中性盐水和50mL1M HCl的塑料容器中。通过气泡氮慢慢地穿过该洗涤物在室温下搅拌该凝胶18小时，在那时洗液的pH是2.36。在去除酸性洗涤物之后，称重该凝胶1897.3g。然后将30Kg的中性盐水添加到容器中，用气泡氮更进一步在室温下搅动该凝胶另外的5小时，在那时洗液的pH是3.34，然后添加150ml的0.2M氢氧化钠。17小时之后，洗涤物的pH是3.34并另外添加200ml的0.2M氢氧化钠。在7小时后再次添加200ml的0.2M氢氧化钠。在凝胶搅动17个多小时之后，测量洗涤物pH是4.30，添加另外的130mL的0.2M氢氧化钠。搅动该凝胶25小时，在那时测量pH是10.35。在排除洗涤物之后，称重该凝胶6690.8g。将30Kg的0.01M PBS溶液添加到凝胶中，洗涤该凝胶24小时。在PBS洗涤之后，测量凝胶的pH是7.31，该凝胶的重量是6916.5g。然后排除洗涤物，再次用30g的0.01M PBS溶液洗涤该凝胶。在排除最后的洗涤物之后，该凝胶称重6956.6g并具有1.17％的平均FPC。使用20、40、60和60网筛均匀化这个材料并在126℃下高压灭菌10分钟。表3显示了这个凝胶的流变数据。
实施例35—12％的细菌发酵的透明质酸钠—皮肤填料
这个实施例说明在12％ IPC和DVS:Pol比值是1:50的条件下凝胶的制备。
将23.4g NaCl添加到168.9g的0.2M NaOH溶液中，搅拌直到溶解。在快速机械搅拌下将低MW(500—600KDa)细菌发酵的透明质酸钠(29.4g)添加到溶液中并继续搅拌总共120分钟。所产生的聚合物溶液具有约12％的IPC。通过滴管(5×～0.4cm)在约30秒内慢慢添加2ml DVS溶液(溶于1.6ml IPA的0.41mL DVS)。再搅拌2分钟之后，将混合物倒入
Figure C200480039183D0040135315QIETU
托盘(23×28×6.5cm)中并用塑料盖密封，在室温下存储4小时，产生凝胶。然后将该凝胶转入包含3Kg的中性盐水和100.1g的1M HCl的塑料容器中。然后在定轨振荡器上在室温下搅拌该凝胶24小时。溶液的pH是2.28。在去除洗涤物之后，该凝胶称重416.2g。将6L中性盐水添加到凝胶中，并搅动该凝胶18小时。在0、2、4、6和8小时将9.7毫升等分量的1M氢氧化钠添加到溶液中。搅动该凝胶24小时。在洗涤之后测量pH是6.65。去除洗涤物，在2-8℃下贮藏该凝胶120小时。然后将洗液换成0.01M PBS溶液(2L)并将凝胶再搅动21小时，接着排去洗液。这时，称重该凝胶为1036.2g。这个凝胶的FPC是2.4％。使用20、40、60、40、60、100和200网筛均匀化这个材料并在126℃下高压灭菌10分钟。表3显示了这个凝胶的流变数据。
实施例36—极低MW的聚合物基凝胶
如在上述实施例中所描写的在0.2N NaOH中制备不同的极低MWHA(<500KDa)溶液。用Bohlin C-VOR流变仪在1sec-1的切变速率下测量粘度。如图4所示在固定粘度值的HAMW和1/1PC之间的关系是成正比例的函数。因此，预计，为了实现所希望的粘性、弹性和柔软性，由极低MW制备凝胶的DVS:Pol比值在约0.0025到约20、例如约0.05到约20、0.01到约20的范围，这取决于该聚合物的IPC和MW。
表1—酸性洗涤的凝胶的流变学
表2—酸性和中性洗涤的凝胶流变学的比较
Figure C200480039183D00422
Figure C200480039183D00431
表3—凝胶和凝胶浆液的流变学性质
 
实施例 G’Pa(5Hz) δ(°) η Pas(1 sec<sup>-1</sup>)
31 84 20 -
32 - - 47
33 102 17 98
34 967 8 -
35 3079<sup>*</sup>(<sup>*</sup>1Hz) 12 185
表4—不同IPC和MW的极低MW HA溶液的粘度
 
MW(KDa) IPC(w％) η Pas(1 sec<sup>-1</sup>)
15 50 20
60 35 54
130 29 74
500 11 730

Claims (42)

1.一种制备粘性凝胶的方法，包括下列步骤：
a.以0.025w％至50w％的起始聚合物浓度提供至少一种起始聚合物的溶液，所述聚合物由透明质酸、hylan、或其混合物组成；
b.使起始聚合物与二乙烯基砜进行反应以形成凝胶，其中二乙烯基砜与聚合物的重量比为0.0025至17.7；和
c.用具有pH≤4的含水溶液洗涤在步骤b中形成的凝胶。
2.根据权利要求1所述的方法，其中起始聚合物浓度是0.25w％至8w％。
3.根据权利要求1所述的方法，其中起始聚合物浓度是3w％至10w％。
4.根据权利要求1所述的方法，其中起始聚合物浓度是3w％至15w％。
5.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤c中洗涤凝胶直到pH为2.0至3.0。
6.根据权利要求1所述的方法，进一步包括将凝胶的pH从≤4调节到pH为6.9到7.5的步骤。
7.根据权利要求1所述的方法，进一步包括将凝胶的pH从≤4调节到pH为4.5至6.5的步骤。
8.根据权利要求1所述的方法，其中步骤b进行小于24小时。
9.根据权利要求1所述的方法，其中起始聚合物的平均分子量为0.5MDa至4MDa。
10.根据权利要求1所述的方法，其中一种起始聚合物是透明质酸。
11.根据权利要求1所述的方法，其中起始聚合物的平均分子量为30KDa至500KDa。
12.根据权利要求1所述的方法，其中二乙烯基砜与聚合物的重量比值为0.01至17.7。
13.根据权利要求1所述的方法，其中起始聚合物的平均分子量为0.5MDa至4MDa，二乙烯基砜与聚合物的重量比值为0.01至17.7。
14.根据权利要求1所述的方法，其中：
a.起始聚合物浓度为大于8w％至小于等于50w％；和
b.使起始聚合物与二乙烯基砜进行反应以形成凝胶，其中二乙烯基砜与聚合物的重量比值为0.0025至0.033。
15.根据权利要求14所述的方法，其中在步骤c中洗涤凝胶直到pH为2.0至3.0。
16.根据权利要求14所述的方法，进一步包括将凝胶的pH从≤4调节到pH为6.9到7.5的步骤。
17.根据权利要求14所述的方法，进一步包括将凝胶的pH从≤4调节到pH为4.5至6.5的步骤。
18.根据权利要求14所述的方法，其中步骤b进行≤24小时。
19.根据权利要求14所述的方法，其中起始聚合物的平均分子量为0.5MDa至4MDa。
20.根据权利要求14所述的方法，其中起始聚合物的平均分子量为30KDa至500KDa。
21.根据权利要求14所述的方法，其中二乙烯基砜与聚合物的重量比值为0.01至0.033。
22.根据权利要求1所述的方法，其中：
a.起始聚合物浓度为0.25w％至50w％；
b.二乙烯基砜与聚合物的重量比值为0.0025到0.05。
23.根据权利要求22所述的方法，其中二乙烯基砜与聚合物的重量比值为0.0025到0.033。
24.根据权利要求1所述的方法，其中：
a.起始聚合物浓度为0.025w％至0.9w％；和
b.二乙烯基砜与聚合物的重量比值为1.4到17.7。
25.根据权利要求24所述的方法，其中起始聚合物的平均分子量为3MDa至10MDa。
26.一种根据权利要求1、14、22或24所述的方法制备的粘性凝胶，其具有8.25±1.75mg/ml的透明质酸含量、在200Hz为30-100Pa的剪切粘度、在5Hz为20-150Pa的贮能模量、和在5Hz为小于35°的相角。
27.一种组合物，包括两种组分：a)根据权利要求1、14、22或24所述的方法制备的粘性凝胶组分和b)流体组分，每个组分包括细菌发酵的透明质酸，其中所述组分以80:20的凝胶：流体重量比值混合，并且透明质酸的总含量是10.5±2.5mg/ml。
28.根据权利要求27所述的组合物，其中该组合物具有在200Hz为30-100Pa的剪切粘度、在5Hz为20-150Pa的贮能模量、和在5Hz为小于35°的相角。
29.一种组合物，包括根据权利要求1、14、22和24任一所述的方法制备的粘性凝胶。
30.一种装置，包括由权利要求1、14、22和24任一所述的方法生产的粘性凝胶。
31.根据权利要求30所述的装置，其进一步包括生物活性物质，所述生物活性物质选自药理学的药、蛋白质、DNA、维生素或细胞。
32.权利要求26所述的粘性凝胶在制造用于治疗骨关节炎的药剂或装置中的应用。
33.权利要求26所述的粘性凝胶在制造用于产生栓子或防止术后粘连的药剂或装置中的应用。
34.权利要求26所述的粘性凝胶在制造用于软组织增大的药剂或装置中的应用。
35.一种药物组合物，包括由权利要求1、14、22和24任一所述的方法生产的粘性凝胶。
36.根据权利要求35所述的药物组合物，其进一步包括生物活性物质，所述生物活性物质选自药理学的药、蛋白质、DNA、维生素或细胞。
37.权利要求27所述的组合物在制造用于治疗骨关节炎的药剂或装置中的应用。
38.权利要求27所述的组合物在制造用于产生栓子或防止术后粘连的药剂或装置中的应用。
39.权利要求27所述的组合物在制造用于软组织增大的药剂或装置中的应用。
40.权利要求29所述的组合物在制造用于治疗骨关节炎的药剂或装置中的应用。
41.权利要求29所述的组合物在制造用于产生栓子或防止术后粘连的药剂或装置中的应用。
42.权利要求29所述的组合物在制造用于软组织增大的药剂或装置中的应用。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7338433B2 (en) 2002-08-13 2008-03-04 Allergan, Inc. Remotely adjustable gastric banding method
ES2339009T3 (es) 2002-08-28 2010-05-14 Allergan, Inc. Dispositivo de banda gastrica resistente a la fatiga.
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ATE526887T1 (de) 2004-01-23 2011-10-15 Allergan Inc Lösbar befestigbares, einteiliges, verstellbares magenband
ATE444045T1 (de) 2004-03-08 2009-10-15 Allergan Medical S A Verschlusssystem für röhrenförmige organe
ATE517652T1 (de) 2004-03-18 2011-08-15 Allergan Inc Vorrichtung zur volumeneinstellung intragastraler ballons
DK1817347T3 (en) 2004-11-24 2017-08-14 Albumedix As Process for Crosslinking Hyaluronic Acid with Divinyl Sulfone
BRPI0518542A2 (pt) * 2004-12-30 2008-11-25 Genzyme Corp regimes para viscossuplementaÇço intra-articular
US8251888B2 (en) 2005-04-13 2012-08-28 Mitchell Steven Roslin Artificial gastric valve
US20070067045A1 (en) * 2005-09-19 2007-03-22 Ar2 Partners, Inc. Systems and methods for skin wrinkle removal
US8043206B2 (en) 2006-01-04 2011-10-25 Allergan, Inc. Self-regulating gastric band with pressure data processing
US7798954B2 (en) * 2006-01-04 2010-09-21 Allergan, Inc. Hydraulic gastric band with collapsible reservoir
BRPI0708128A2 (pt) * 2006-03-02 2011-05-17 Novozymes Biopolymer As derivado de ácido hialurÈnico, processo para produção de um derivado de ácido hialurÈnico, composição, artigo cosmético, artigo sanitário, médico ou cirúrgico, cápsula ou microcápsula de medicamento, métodos para realizar procedimentos em oftalmologia, no tratamento de osteoartrite, e no tratamento de cáncer, para realizar administração transdérmica e dérmica de um agente farmacologicamente ativo, e administração dérmica de um cosmético, e para realizar procedimentos no tratamento de perda de cabelo ou calvìcie, métodos oftalmológico, de tratamento de osteoartrite, de uma ferida, e de perda de cabelo ou calvìcie, e, uso de um derivado de ácido hialurÈnico
FR2909560B1 (fr) 2006-12-06 2012-12-28 Fabre Pierre Dermo Cosmetique Gel d'acide hyaluronique pour injection intradermique
US20080293637A1 (en) * 2007-05-23 2008-11-27 Allergan, Inc. Cross-linked collagen and uses thereof
US8658148B2 (en) 2007-06-22 2014-02-25 Genzyme Corporation Chemically modified dendrimers
US8318695B2 (en) * 2007-07-30 2012-11-27 Allergan, Inc. Tunably crosslinked polysaccharide compositions
US8697044B2 (en) 2007-10-09 2014-04-15 Allergan, Inc. Crossed-linked hyaluronic acid and collagen and uses thereof
MX2010005331A (es) 2007-11-16 2010-08-11 Vicept Therapeutics Inc Composiciones y metodos para tratamiento de purpura.
US8394782B2 (en) * 2007-11-30 2013-03-12 Allergan, Inc. Polysaccharide gel formulation having increased longevity
US8394784B2 (en) * 2007-11-30 2013-03-12 Allergan, Inc. Polysaccharide gel formulation having multi-stage bioactive agent delivery
US20090143348A1 (en) * 2007-11-30 2009-06-04 Ahmet Tezel Polysaccharide gel compositions and methods for sustained delivery of drugs
US8450475B2 (en) * 2008-08-04 2013-05-28 Allergan, Inc. Hyaluronic acid-based gels including lidocaine
AU2015252122A1 (en) * 2008-08-04 2015-11-26 Allergan Industrie Sas Hyaluronic acid-based gels including anesthetic agents
ES2658609T3 (es) 2008-09-02 2018-03-12 Tautona Group Lp Hilos de ácido hialurónico y/o derivados de los mismos, métodos para fabricar los mismos, y usos de los mismos
EP2341953B1 (en) 2008-09-04 2018-11-21 The General Hospital Corporation Hydrogels for vocal cord and soft tissue augmentation and repair
EP2362762A1 (en) 2008-10-06 2011-09-07 Allergan Medical Sàrl Mechanical gastric band with cushions
US20100305397A1 (en) * 2008-10-06 2010-12-02 Allergan Medical Sarl Hydraulic-mechanical gastric band
US20100185049A1 (en) 2008-10-22 2010-07-22 Allergan, Inc. Dome and screw valves for remotely adjustable gastric banding systems
FR2938187B1 (fr) * 2008-11-07 2012-08-17 Anteis Sa Composition injectable a base d'acide hyaluronique ou l'un de ses sels, de polyols et de lidocaine, sterilisee a la chaleur
US8390326B2 (en) * 2009-05-05 2013-03-05 William Marsh Rice University Method for fabrication of a semiconductor element and structure thereof
FR2945293B1 (fr) 2009-05-11 2011-06-17 Teoxane Procede de preparation d'un gel reticule.
WO2011014432A1 (en) * 2009-07-30 2011-02-03 Carbylan Biosurgery, Inc. Modified hyaluronic acid polymer compositions and related methods
US8273725B2 (en) * 2009-09-10 2012-09-25 Genzyme Corporation Stable hyaluronan/steroid formulation
US20110172180A1 (en) 2010-01-13 2011-07-14 Allergan Industrie. Sas Heat stable hyaluronic acid compositions for dermatological use
US20110171311A1 (en) * 2010-01-13 2011-07-14 Allergan Industrie, Sas Stable hydrogel compositions including additives
US9114188B2 (en) 2010-01-13 2015-08-25 Allergan, Industrie, S.A.S. Stable hydrogel compositions including additives
US20110171286A1 (en) * 2010-01-13 2011-07-14 Allergan, Inc. Hyaluronic acid compositions for dermatological use
US8758221B2 (en) 2010-02-24 2014-06-24 Apollo Endosurgery, Inc. Source reservoir with potential energy for remotely adjustable gastric banding system
US8840541B2 (en) * 2010-02-25 2014-09-23 Apollo Endosurgery, Inc. Pressure sensing gastric banding system
WO2011109730A2 (en) 2010-03-04 2011-09-09 The General Hospital Corporation Methods and systems of matching voice deficits with a tunable mucosal implant to restore and enhance individualized human sound and voice production
NZ602405A (en) * 2010-03-12 2014-12-24 Allergan Ind Sas A fluid composition comprising a hyaluronan polymer and mannitol for improving skin conditions
WO2011119468A1 (en) 2010-03-22 2011-09-29 Allergan, Inc. Polysaccharide and protein-polysaccharide cross-linked hydrogels for soft tissue augmentation
US20110270024A1 (en) 2010-04-29 2011-11-03 Allergan, Inc. Self-adjusting gastric band having various compliant components
US9028394B2 (en) 2010-04-29 2015-05-12 Apollo Endosurgery, Inc. Self-adjusting mechanical gastric band
US9044298B2 (en) 2010-04-29 2015-06-02 Apollo Endosurgery, Inc. Self-adjusting gastric band
US20110270025A1 (en) 2010-04-30 2011-11-03 Allergan, Inc. Remotely powered remotely adjustable gastric band system
EP2575909B1 (en) * 2010-06-03 2020-01-15 Technology Innovation Momentum Fund (Israel) Limited Partnership Malleable hydrogel hybrids made of self-assembled peptides and biocompatible polymers and uses thereof
US8517915B2 (en) 2010-06-10 2013-08-27 Allergan, Inc. Remotely adjustable gastric banding system
US8716204B2 (en) 2010-07-27 2014-05-06 Zimmer, Inc. Synthetic synovial fluid compositions and methods for making the same
US8889123B2 (en) 2010-08-19 2014-11-18 Allergan, Inc. Compositions and soft tissue replacement methods
US9005605B2 (en) 2010-08-19 2015-04-14 Allergan, Inc. Compositions and soft tissue replacement methods
US8697057B2 (en) 2010-08-19 2014-04-15 Allergan, Inc. Compositions and soft tissue replacement methods
US8883139B2 (en) 2010-08-19 2014-11-11 Allergan Inc. Compositions and soft tissue replacement methods
US20120059216A1 (en) 2010-09-07 2012-03-08 Allergan, Inc. Remotely adjustable gastric banding system
DK3138586T3 (da) 2010-11-08 2021-04-12 Allergan Ind Sas Blødvævsfyldstof
US8961393B2 (en) 2010-11-15 2015-02-24 Apollo Endosurgery, Inc. Gastric band devices and drive systems
US9393263B2 (en) 2011-06-03 2016-07-19 Allergan, Inc. Dermal filler compositions including antioxidants
WO2012167079A2 (en) 2011-06-03 2012-12-06 Allergan, Inc. Dermal filler compositions including antioxidants
US20130096081A1 (en) 2011-06-03 2013-04-18 Allergan, Inc. Dermal filler compositions
US9408797B2 (en) 2011-06-03 2016-08-09 Allergan, Inc. Dermal filler compositions for fine line treatment
EP2742070B1 (en) 2011-08-10 2021-09-15 Glycores 2000 srl Degradation-resistant cross-linked, low-molecular-weight hyaluronate
US20130244943A1 (en) 2011-09-06 2013-09-19 Allergan, Inc. Hyaluronic acid-collagen matrices for dermal filling and volumizing applications
US9662422B2 (en) 2011-09-06 2017-05-30 Allergan, Inc. Crosslinked hyaluronic acid-collagen gels for improving tissue graft viability and soft tissue augmentation
KR20220013588A (ko) * 2011-09-14 2022-02-04 알러간, 인코포레이티드 잔주름 치료를 위한 진피 필러 조성물
CN102558600A (zh) * 2011-12-01 2012-07-11 上海白衣缘生物工程有限公司 交联透明质酸海绵及其制备方法
US8876694B2 (en) 2011-12-07 2014-11-04 Apollo Endosurgery, Inc. Tube connector with a guiding tip
US8961394B2 (en) 2011-12-20 2015-02-24 Apollo Endosurgery, Inc. Self-sealing fluid joint for use with a gastric band
KR20180122758A (ko) * 2012-06-15 2018-11-13 메르츠 파마 게엠베하 운트 코. 카가아 히알루론산을 기본으로 하는 조성물의 제조 방법
US9579388B2 (en) 2012-11-29 2017-02-28 Rene Gauthier System and method for alleviating the appearance of scars and/or scar tissue
US9421198B2 (en) 2013-07-30 2016-08-23 Teoxane Composition comprising hyaluronic acid and mepivacaine
EP3142718A4 (en) * 2014-05-16 2017-11-29 Ultrast, Inc. Phase-shifting formulations
ES2761558T3 (es) 2014-09-30 2020-05-20 Allergan Ind Sas Composiciones de hidrogel estables que incluyen aditivos
WO2016128783A1 (en) 2015-02-09 2016-08-18 Allergan Industrie Sas Compositions and methods for improving skin appearance
AR105319A1 (es) 2015-06-05 2017-09-27 Sanofi Sa Profármacos que comprenden un conjugado agonista dual de glp-1 / glucagón conector ácido hialurónico
WO2017119198A1 (ja) * 2016-01-05 2017-07-13 デンカ株式会社 半月板変性治療用組成物
AR110299A1 (es) 2016-12-02 2019-03-13 Sanofi Sa Conjugados que comprenden un agonista dual de glp-1 / glucagón, un conector y ácido hialurónico
CN108250457A (zh) * 2017-05-08 2018-07-06 上海利康瑞生物工程有限公司 一种剪切粘度可控的双相交联透明质酸钠凝胶及其制备方法和制剂
US20190240335A1 (en) * 2018-02-07 2019-08-08 Promedon S.A. Biocompatible Hydrogel Compositions
US20210299335A1 (en) * 2018-08-07 2021-09-30 Merz Pharma Gmbh & Co. Kgaa Method for dynamic filtration of a cross-linked hydrogel
WO2022051060A1 (en) * 2020-09-01 2022-03-10 Orthogenrx, Inc. Crosslinking of non-animal-derived hyaluronic acid with divinyl sulfone
WO2023135135A1 (en) 2022-01-11 2023-07-20 Gpq S.R.L. New hyaluronic acid derivatives as innovative fillers

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SE442820B (sv) * 1984-06-08 1986-02-03 Pharmacia Ab Gel av tverbunden hyaluronsyra for anvendning som glaskroppssubstitut
US4582865A (en) * 1984-12-06 1986-04-15 Biomatrix, Inc. Cross-linked gels of hyaluronic acid and products containing such gels
US4713448A (en) * 1985-03-12 1987-12-15 Biomatrix, Inc. Chemically modified hyaluronic acid preparation and method of recovery thereof from animal tissues
DE3684887D1 (de) * 1985-11-29 1992-05-21 Biomatrix Inc Arzneistoffabgabesysteme auf basis von hyaluronan, dessen derivaten und salzen sowie verfahren zu deren herstellung.
US4795741A (en) * 1987-05-06 1989-01-03 Biomatrix, Inc. Compositions for therapeutic percutaneous embolization and the use thereof
AU619760B2 (en) * 1987-12-10 1992-02-06 Genzyme Biosurgery Corporation Hylan preparation and method of recovery thereof from animal tissues
SE8900422D0 (sv) * 1989-02-08 1989-02-08 Pharmacia Ab Tvaerbundna hyaluronatgeler samt foerfarande foer framstaellning av dessa
US5246698A (en) * 1990-07-09 1993-09-21 Biomatrix, Inc. Biocompatible viscoelastic gel slurries, their preparation and use
US5143724A (en) * 1990-07-09 1992-09-01 Biomatrix, Inc. Biocompatible viscoelastic gel slurries, their preparation and use
CN1157191C (zh) * 1998-11-10 2004-07-14 电气化学工业株式会社 透明质酸凝胶、其制造方法及含透明质酸凝胶的医用材料
US6521223B1 (en) * 2000-02-14 2003-02-18 Genzyme Corporation Single phase gels for the prevention of adhesions
CA2402191C (en) * 2000-03-24 2012-03-13 Genentech, Inc. Use of insulin for the treatment of cartilagenous disorders

Also Published As

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