BRPI0418309B1

BRPI0418309B1 - "géis coesos de hialuronado e/ou hilano reticulados, processo para a preparação dos mesmos, bem como composições e dispositivos compreendendo os referidos géis".

Info

Publication number: BRPI0418309B1
Application number: BRPI0418309A
Authority: BR
Inventors: Adelya K Leshchiner; Paul A Konowicz; Valentina Vasilyeva
Original assignee: Genzyme Corp
Priority date: 2003-12-30
Filing date: 2004-12-30
Publication date: 2016-08-02
Also published as: BRPI0418309A; MXPA06007556A; EP1701981A1; JP2007519779A; EP1701981B1; CN100537606C; CN1902232A; US20050142152A1; IL176465A; WO2005066215A1; JP5016926B2; JP5680501B2; AU2004312532B2; CA2550718C; JP2012025955A; BRPI0418309B8; AU2004312532A1; CA2550718A1; IL176465A0

Abstract

géis coesos a partir de hialuronano e/ou hilano reticulados, sua preparação e uso. a presente invenção refere-se a feis altamente resilientes e coesos, formados pela reticulação de hialuronano ou hilano, seus sais ou derivados, usando divinil-sulfona (dvs) como agente reticulante. a invenção refere-se também a fluidos viscoeláticos que contêm grupos alquil-sulfona ligados de forma covalente à cadeia principal do polímero, formados pela monofuncionalização do monômero reticulante dvs com hialuronano e/ou hilano. as propriedades mecânicas, tais como dureza e coesão, são especificadas pelas propriedades reológicas dos géis. a invenção refere-se também a métodos para a preparação de tais produtos. eles têm uso em muitas aplicações como dispositivos injetáveis e/ou implantáveis e como sistemas de distribuição de fármacos.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "GÉIS COESOS DE HIALURONANO E/OU HILANO RETICULADOS, PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DOS MESMOS, BEM COMO COMPOSIÇÕES E DISPOSITIVOS COMPREENDENDO OS REFERIDOS GÉIS".

Este pedido de patente reivindica a anterioridade ao pedido de patente np US 60/533.429, depositado em 30 de dezembro de 2003, que é aqui incorporado como referência em sua totalidade, Campo Técnico A presente invenção refere-se â produção de materiais tais como géis, fluidos e sólidos, preparados modificando polímeros naturais e sintéticos com divinil-sulfona (DVS), e às propriedades químicas, físico-químicas e mecânicas, singulares, que estes materiais possuem. A invenção refere-se também ao uso destes materiais em muitas aplicações, como por exemplo, nos campos médicos e cirúrgicos, como dispositivos injetáveis e/ou implantáveis; sistemas de distribuição de fármacos para moléculas de fármacos grandes e pequenas e outros agentes terapêuticos; e para aplicações cosméticas e tópicas. Antecedentes da Invenção Foram desenvolvidos hidrogéis que têm biocompatibilidade excepcionalmente boa. Estes géis baseiam-se em hialuronano, que é um ácido hialu-rônico e seus sais, e/ou hilano e seus sais. Eles se baseiam também em hialuronano ou hilano reticulado com DVS (Figuras 1 e 2, e vide também patentes n“ US 4.605.691 e US 6.521.223) e/ou misturas reticuladas de hialuronano com outros polímeros ou substâncias de baixo peso molecular (patente n- US 4.582.865). O hilano A é uma preparação de hialuronano solúvel em água, quimicamente modificada por reticulação covalente com quantidades pequenas de um aldeído, tipicamente formaldeído, enquanto que o hilano B é uma hilano A reticulado adicionalmente por DVS (vide patente ne US 4,713.448), Foram descritas também suspensões de géis preparadas a partir de hialuronano, e hialuronano e hilano quimica mente modificados (patente ng US 5.143.724). Tais hidrogéis podem ser usados para distribuição de fármacos (patente n° US 4,636.524) e outros propósitos no campo médico. Entretanto, estes géis e suspensões de géis são não-elãsticos, não-coesos e inaderentes.

Sumário da Invenção A presente invenção fornece, em um seu aspecto, géis altamente coesos, adesivos e elásticos, de hialuronano e/ou hilano reticulado, ou géis mistos de hialuronano ou hilano com outros polímeros hidrofílicos capazes de formar ligações cruzadas com DVS, tais como, porém sem limitações, glicosaminoglicanos, como por exemplo, 4-sulfato de condroitina e 6-sulfato de condroitina, quitosano; polissacarídeos polianiônicos, como por exemplo, derivados alquil-carbóxi-éteres de celulose e seus sais, ácido aigí-nico e seus sais, e poii(ácidos hexurônicos), como por exemplo, pectina, po-li(ácido giicurônico), e poli(ácido manurônico); outros polissacarídeos sem carga, como por exemplo, amidos, glicomananas, galactomananas pululano, curdlano, inulina e celulose e seus derivados hidróxi-alquil-éteres; gomas de polissacarídeos, como por exemplo, goma xantana, goma-arábica, goma acácia e goma guar, e seus derivados alquil-carbóxi-éteres e hidróxi-alquil-éteres; e polímeros sintéticos, como por exemplo, poli(álcool vinílico) e po-li(etileno-imina). Estes géis são preparados a partir de seletas concentrações iniciais de polímero (IPC), com concentrações específicas de DVS ou razões de DVS para hialuronano e/ou hilano, e/ou um procedimento de lavagem efetuado em meio ácido aquoso. Em várias modalidades da invenção, o termo "Concentração Inicial de Polímero11, aqui doravante simplesmente "IPC", refere-se à concentração em peso do reagente, sob as condições de partida da reação. Quando se utiliza mais do que um polímero de partida na reação, a Concentração Inicial do Polímero refere-se à concentração total em peso dos polímeros de partida, sob as condições iniciais da reação. O termo "Concentração Final de Polímero", aqui doravante simplesmente "FPC", refere-se à concentração em peso do polímero modificado depois de completado o processamento inteiro. Quando mais do que um polímero de partida é utilizado, a Concentração Final de Polímero refere-se à concentração total em peso dos polímeros modificados, depois de completado o processamento inteiro.

Em outro aspecto, a invenção fornece géis altamente coesos e elásticos, formados modificando hialuronano e/ou hilano com DVS, e um processo para lavar estes materiais em meio ácido aquoso (pH < 4,0). Tal processo de lavagem é importante para melhorar as propriedades mecânicas, a coesão e a elasticidade dos materiais resultantes.

Em ainda outro aspecto, a invenção fornece géis altamente coesos e elásticos, formados modificando hialuronano e/ou hilano com DVS em IPCs baixas. Estes géis têm caráter e fluidez mais semelhantes a líquidos, e eles se adaptam ao formato do recipiente no qual eles são estocados.

Em ainda outro aspecto, a invenção fornece géis altamente coesos e elásticos, que têm uma resistência mecânica relativamente alta em IPC baixa, e apresentam características de baixa fluidez. Estes materiais retêm o formato original do seu recipiente anterior depois da lavagem em tubos de diálise. Nas patentes n55 US 4.582.865, 4.605.691, 4.636.524, 4.713.448 e 5.143,724, mencionadas acima, a preparação, as propriedades e o uso de diferentes tipos de géis formados a partir de hialuronano e/ou hilano e outros polissacarídeos por reticulação com DVS, foram descritos. Entretanto, as propriedades dos materiais descritos nessas patentes são significativamente diferentes daquelas da presente invenção. Isto é, os géis das técnicas anteriores são géis duros, não-elásticos e não-coesos. Estes géis podem ser desintegrados facilmente em partículas pequenas e uniformes durante ou depois de lavagem. Em comparação, os géis da presente invenção são elásticos e coesos, e têm uma forte tendência se recomporem e se comportam como uma estrutura inteiriça, mesmo depois da transformação em partículas. A invenção fornece métodos para produzir os géis supramencio-nados. A invenção fornece também um método para lavar os géis em meio aquoso ácido, incluindo soluções de sal em pH < 4,0, de preferência pH 2,0 a 3,0, porém mais preferivelmente, 2,3 a 2,8, e em seguida, lavagem com uma solução aquosa de sal e um ajuste lento do pH para 4,5 a 6,5 com apenas soluções aquosas de sal ou com o uso de bases inorgânicas ou orgânicas. Uma etapa final de lavagem com uma solução tamponada de sal pode ser realizada, para levar o material até um pH fisiológico (6,9-7,4), caso desejado. A invenção fornece métodos para usar os géis isoladamente ou com um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável, como sistemas de distribuição de fármacos injetáveis ou implantáveis, tais como materiais antiaderentes para pré-cirurgia e também pós-cirurgia em muitos tipos de cirurgias abertas, laparoscópicas, artroscópicas ou outras cirurgias endoscó-picas, incluindo, porém sem limitações, cirurgias abdominais, ginecológicas, cardíacas, espinhais, neurocirúrgicas, ortopédicas, cranianas, cavitárias e torácicas; em procedimentos oftálmicos, tais como, por exemplo, facoemulsi-fícação; reposição do humor vítreo; como enchimentos para corrigir defeitos estruturais de tecidos moles, aumento tecidual, e cicatrização de feridas; para o tratamento de cicatrizes e rugas em cirurgia cosmética; para a criação de uma embolia, a fim de tratar aneurismas arteriais ou venosos, e para impedir o fluxo sangüíneo para tumores sólidos. Os veículos ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis podem ser escolhidos, porém sem limitações, entre solução salina, sulfóxido de dimetila, polietiíenoglicol, hialuronano, glicerina, e soluções e emulsões de fosfolipídeos. Adicionalmente, a invenção tem utilidade para usar os géis como sistemas de distribuição para materiais biologicamente ativos, incluindo fármacos, células, proteínas, DNA e vitaminas, e como materiais para indicações oftálmicas e de cicatrização de feridas. As moléculas ou fármacos farmaceuticamente ativos podem ser escolhidos, porém sem limitações, entre antiinflamatórios não-esteróides, tais como ibuprofeno, diclofenaco e piroxicam; anestésicos tais como lidocaína e bupivacaína; analgésicos opiáceos tais como codeína e morfina; antiarrítmi-cos tais como amiodarona, propanoiol e sotalol; corticosteróides tais como dexametasona e prednisona; e agentes antineoplásicos tais como metotre-xato, 5-fluorouracila e paclitaxel; e agentes antivirais tais como aciclovir e vidarabina.

Finalmente, a invenção descreve composições farmacêuticas que compreendem os géis, como dispositivos para o tratamento de artrite reumatóide, para viscossuplementação nas articulações, para indicações oftálmicas, para o tratamento de osteoartrite, e para cicatrização de feridas. A invenção fornece também métodos para controlar as propriedades quími- cas, físico-químicas e mecânicas dos materiais poliméricos da invenção, controlando a razão ponderai de polímero para DVS, durante a modificação do polímero inicial, e as condições de lavagem.

Em uma modalidade preferida, a invenção fornece um dispositivo para viscussuplementação articular, pretendido para uso no tratamento de dor causada por osíeoartrite, tipicamente, porém não necessariamente, no joelho. O dispositivo é uma seringa pré-carregada, que tem uma única dosagem unitária de uma composição não-pirogênica estéril que compreende um hidrogel intumescido e um fluido não-modificado, ambos derivados, de preferência, porém não necessariamente, de hialuronato de sódio fermentado de forma bacteriana, tendo um peso molecular maior do que 1 MDa, e tendo um pH e osmolaridade compatíveis com o humor sinovial normal. O componente hidrogel é, de preferência, fabricado a partir de hialuronato de sódio fermentado de forma bacteriana, reagindo-o com divinil-sulfona (DVS), sob condições alcalinas, para modificar o hialuronato de sódio. O hialuronato de sódio modificado é então lavado com solução salina ácida e solução salina tamponada com fosfato (PBS), para remover as impurezas. O componente fluido é uma solução, de preferência de hialuronato de sódio fermentado de forma bacteriana, em solução salina tamponada com fosfato. Os dois componentes são combinados em uma razão de gebfluido de cerca de 80:20 em peso. O componente hidrogel tem um teor de polímero de 8,25 + 1,5 mg/mL, de preferência 8,25 ± 0,75 mg/mL. O componente fluido tem um teor de polímero de 2,25 ± 1,0 mg/mL, de preferência 2,25 ± 0,25 mg/mL. O produto tem, assim, um teor total de polímero (modificado e não-modificado) de 10,5 + 2,5 mg/mL, de preferência 10,5 ± 1,0 mg/mL. As propriedades reológicas do produto são: viscosidade sob cisalhamento de 30-100 Pa (a 200 Hz); módulo de estocagem (Gr a 5 Hz) de 20-150 Pa; e um ângulo de fase (5 a 5 Hz) menor do que 35°.

Em outra modalidade preferida, a invenção fornece um dispositivo para viscossuplementação de articulações, pretendido para uso no tratamento de dor causada por osteoartrite, tipicamente, porém sem limitações, no joelho. O dispositivo é uma seringa pré-carregada, tendo uma seringa pré-carregada, que tem uma única dosagem unitária de uma composição não-pirogênica estéril que compreende um hidrogel intumescido, derivado, de preferência, porém não necessariamente, de hialuronato de sódio fermentado de forma bacteriana, tendo um peso molecular maior do que 1 MDa, e tendo um pH e osmolalidade compatíveis com o humor sinovial normal. O hidrogel é, de preferência, fabricado a partir de hialuronato de sódio fermentado de forma bacteriana, reagindo-o com divinil-sulfona (DVS), sob condições alcalinas, para modificar o hialuronato de sódio. O hidrogel no produto final tem um teor de polímero de 8,25 ± 1,75 mg/mL. As propriedades reológicas do produto são: viscosidade sob cisalhamento de 30-100 Pa (a 200 Hz); módulo de estocagem (G1 a 5 Hz) de 20-150 Pa; e um ângulo de fase (5 a 5 Hz) menor do que 35°.

Breve Descrição dos Desenhos A Figura 1 indica a estrutura do hialuronato de sódio {ácido hia-lurônico; hialuronano). A Figura 2 ilustra o esquema de reações de hialuronato de sódio com DVS, sob condições básicas. A Figura 3 é um gráfico que ilustra a relação inversamente proporcional entre a proporção de DVS e a Concentração Inicial de Polímero (IPC). A Figura 4 é um gráfico que ilustra a relação diretamente proporcional entre o Peso Molecular (PM) e 1/IPC para um valor fixo da viscosidade.

Descrição Detalhada da Invenção A presente invenção baseia-se na descoberta de que podem ser formados materiais que têm propriedades singulares e úteis, modificando hialuronano e/ou hilano, isoladamente, e/ou com misturas de outros polímeros, naturais e sintéticos, usando DVS como um reagente modificador, e ao mesmo tempo, controlando os parâmetros do processo, tal como a IPC, a razão dos reagentes iniciais, e lavando adicionalmente os materiais processados. A presente invenção fornece géis que têm uma estrutura uniforme, inteiriça e resiliente, formada pela reação de reticulação com DVS. Estes géis não são facilmente desintegrados em partículas pequenas, tal como é o caso com um gel quebradiço ou frágil. Estes produtos dão materiais semelhantes a "mástiques" ou elásticos, e depois de serem cortados em seções, as partículas tendem a coalescer devido às suas propriedades altamente coesivas. Observou-se que estes tipos de géis coesos e não-frágeis podem ser obtidos usando combinações específicas de condições de reações de reticulação, lavagem, IPC e a quantidade de DVS. As propriedades mecânicas destes géis são dependentes de todas estas condições, porém o mais importante, da razão de DVS para polímero (DVS:Pol) usada na lavagem ácida. A razão DVS:Po! é inversamente proporcional à IPC, como indicado na Figura 3. Embora não se pretendendo estar limitado por qualquer mecanismo específico, acredita-se que, quanto mais baixa a concentração do polímero, mais alta será a quantidade de DVS necessária para a formação do gel. Isto contrasta com os géis descritos anteriormente, nos quais a concentração de DVS era diretamente proporcional à IPC.

Em soluções diluídas, as cadeias poliméricas são separadas por distâncias longas e a interação entre as moléculas do polímero é mínima. Neste estado, as soluções escoarão livremente, como conseqüência de forças externas (como por exemplo, gravidade ou impulso por um agitador). À medida que a concentração do polímero aumenta, o número de moléculas em solução aumenta, as cadeias do polímero são forçadas a ficarem mais perto umas das outras, aumentando desta forma a interação intermolecular. No caso de soluções extremamente concentradas, as cadeias ficam emaranhadas entre si, sua interação aumenta, a viscosidade aumenta drasticamente, e a solução começa a apresentar uma transição de uma solução concentrada para um gel. Um gel não se deformará facilmente ou mudará seu formato, como resultado de forças externas. A reticulação covalente é uma maneira para aumentar significativamente a interação das cadeias dos polímeros para formar géis. O móduio de estocagem (módulo de elasticidade) (Θ’) e o módulo de amortecimento (viscosidade) (G”) representam, respectivamente, os graus relativos em que um material consegue se recuperar (resposta elásti- ca) ou fluxo (resposta viscosa), à medida que a taxa de deformação (frequência do teste) muda. Ambos módulos são funções lineares da freqüência. Eles demonstraram ser provas sensíveis da estrutura de soluções e géis poliméricos. G' e também G" aumentam com a freqüência crescente, mas um aumenta mais rapidamente que o outro. No ponto onde G' = G", esta freqüência é denominada freqüência cruzada (fQ). A freqüência cruzada diminui com o peso molecular ou concentração crescente do polímero. Para uma solução polimérica em baixa freqüência, as tensões elásticas relaxam e as tensões viscosas dominam, e como resultado, G" é maior do que G' em fre-qüências abaixo de f0. Em contraste, para um gel, não há cruzamento entre G' e G", e G' é maior do que G” na faixa de freqüências inteira. A menos que diferentemente especificado, a freqüência do teste é 0,04 a 7 Hz. O módulo complexo, G*, reflete o componente elástico (G') e também o componente viscoso (G"). Ele é calculado como a razão da amplitude de tensão para a amplitude de deformação de um teste de oscilação, usando um reômetro. Existem as seguintes relações: G' = G* cos δ e G" = G* sen δ, onde δ é o ângulo de fase. Para obter uma revisão detalhada de propriedades de materiais viscoelásticos e de métodos que medem estas propriedades, vide, por exemplo, "Polymers as Rehology Modifiers”, editado por Schulz e Glass, ACS Symposium Series 462, 1991; "An Introduction to Rehology", H.A. Bar-nes, J.F. Hutton e K. Walters, Elsevier, 1989; e "Bohlin Rheometer Application Notes" MRK544-01, MRK556-01 e MRK573-01.

Acredita-se que as características dos géis desta invenção, preparados a partir de baixas IPCs sejam resultado de reações que ocorrem em solução diluída. Em soluções diluídas, as moléculas do polímero estão bem próximas entre si e há uma tendência de que apenas um dos grupamentos vinílicos do agente modificador, DVS, reaja com o polímero e forme grupos pendentes, ou que a DVS seja completamente hidrolisada e não reticule com outra molécula do polímero próxima. Portanto, o uso de grandes quantidades de reagente modificador com soluções de baixa IPC é desejável, para individualizar os materiais de modo a terem propriedades específicas. As propriedades dos géis são dependentes também do peso molecular (PM) do polímero de partida (determinado por viscosidade intrínseca; H. Bothner, T. Waaler e O. Wik; International Journal ofBiological Macromolecules 10:287-91 (1998); ou por dispersão da luz laser multiangular em PM < 4 MDa), com polímeros de baixo peso molecular que requerem razões mais altas de DVS:Pol para atingir propriedades similares aos géis fabricados a partir de polímeros de alto peso molecular.

Em uma modalidade preferida da invenção é um exemplo de uma classe de géis poliméricos elásticos, produzidos por um processo que usa ácido hialurônico não modificado quimicamente ou seus sais como material de partida. Este material de partida pode ser preparado a partir de tecido animal ou bactérias, desde que ele são seja modificado quimicamente durante a sua preparação. O material de partida é então submetido a uma reação com divinil-sulfona para formar um gel. O gel resultante é então submetido a uma etapa de lavagem aquosa ácida (pH < 4). Um gel produzido por este processo genérico tem as propriedades mecânicas desejáveis de serem macios, elásticos e não frágeis. O termo "hilastano" refere-se geralmente a esta classe de géis fabricados por este processo.

Os polímeros apropriados podem ter um peso molecular de cerca de 500 kDa a cerca de 10 MDa, mas preferivelmente, cerca de 1,3 MDa a cerca de 8 MDa. O baixo peso molecular é preferivelmente cerca de 0,5 MDa a cerca de 1,3 MDa, o peso molecular médio é, de preferência, cerca de 1,3 MDa a cerca de 2,7 MDa, e o alto peso molecular é, de preferência, cerca de 2,7 MDa a cerca de 10 MDa. O peso molecular do hialuronato de sódio é, de preferência, entre cerca de 0,5 MDa e cerca de 4 MDa, e dependendo da origem, entre cerca de 0,5 MDa e cerca de 1,3 MDa, ou cerca de 1,3 MDa a cerca de 2,7 MDa. O peso molecular do hilano é, de preferência, selecionado entre cerca de 3 MDa e cerca de 10 MDa, e mais preferivelmente, cerca de 3 a 6 MDa, ou cerca de 4 a 8 MDa. As IPCs do polímero de partida podem variar entre 0,25% e 8% p/p. A razão de DVS para polímero (DVS:Pot) pode variar entre 0,0025 a 0,05 (p/p), de preferência entre 0,0025 e 0,025 (p/p), ou mais preferivelmente, entre 0,0025 e 0,01 (p/p), quando a IPC fica na faixa entre 3 e 10% (p/p), ou mais preferivelmente, na faixa de 3 a 6% (p/p). A razão de DVS para polímero (DVS:Poi) pode variar entre 1,4 e 17,7 (p/p) quando a IPC fica na faixa entre 0,25 e 0,9% (p/p). O tempo de reação para modificação também pode ser variado, mas é de preferência < 24 horas, e mais preferivelmente, entre 4 e 24 horas, dependendo da IPC. Em uma IPC < 0,15% (p/p), para um polímero de alto peso molecular (tal como Hilano A), a geleificação parece não ocorrer, independentemente de qual concentração de DVS for usada, por causa da tendência de a DVS au-topolimerizar, hidrolisar ou formar grupos pendentes no polímero, como descrito acima. Em uma IPC de 0,25 a 0,9% (p/p), a formação do gel ocorreu e razões mínimas específicas de DVS:hialuronano são necessárias para formar géis e dotá-los das propriedades de coesão e resiliência, como descrito acima. Aumentar a razão de DVS:Pol ligeiramente, faz com que os géis sejam mais resistentes, menos elásticos e menos coesos; enquanto que diminuir a dita razão ligeiramente, faz com que eles sejam mais semelhantes a líquidos e mais elásticos. Assim sendo, variar a razão de DVS:Pol, permite que os géis sejam individualizados para se adaptarem a um propósito específico. O procedimento de lavagem após a modificação tem um efeito sobre as propriedades mecânicas dos géis com lavagem ácida, contribuindo para as propriedades elásticas e coesivas. Os géis lavados com ácido resultantes são mais macios (valores mais baixos do módulo complexo, G*), mais elásticos (deformação mais alta) e menos frágeis do que um gel (como por exemplo, hilano B) preparado em concentrações similares de polímero e DVS, porém não lavados com ácido. Os géis com uma alta IPC têm uma tendência a se tornarem mais elásticos após tratamento térmico (durante a esterilização necessária para produzir produtos médicos esterilizados), em comparação com os géis de hilano B (por exemplo) que têm IPC similar e que mantêm sua rigidez. Os géis com baixa IPC são mais macios e elásticos, e o tratamento térmico reduz a elasticidade e a viscosidade.

Outros polímeros apropriados podem ter um peso molecular médio < 500 kDa. Os polímeros com peso molecular ultrabaixo podem ter um peso molecular entre 30 kDa e 500 kDa, como por exemplo, 30 a 100 kDa, 100 a 200 kDa, 200 a 500 kDa, 200 a 400 kDa, 200 a 300 kDa, 300 a 500 kDa, e 300 a 400 kDa.

Para conseguir as propriedades viscoelásticas desejáveis, os polímero com peso molecular ultrabaixo podem requerer uma IPC mais alta, bem como razões de DVS:pol mais altas. Por exemplo, a IPC para polímeros com peso molecular ultrabaixo pode variar entre 3 e 50% (p/p) ou mais alta, dependendo do peso molecular do polímero, sendo que os polímeros com peso molecular mais baixo requerem uma IPC mais alta. Geralmente, o peso molecular de um polímero deve ser diretamente proporcional a 1/IPC em um dado valor de viscosidade, como indicado na Figura 4.

Os exemplos de faixas de IPCs para polímeros com peso molecular médio, baixo, e ultrabaixo, incluem, porém sem limitações: 3%-8%, 3%-12%, 3%-15%, 3%-30%, 3%-50%, 8%-12%, 8%-15%, 8%-30%, 8%-50%, 10%-12%, cerca de 12%, 12%-30%, 12%-50% e 20%-50%. As razões de DVS:Pol para polímeros com peso molecular ultrabaixo podem variar entre 1:400 e 1:20 (p/p), ou menos, dependendo da IPC. Geralmente, a razão DVS:Poi é inversamente proporcional à IPC, como indicado na Figura 3. Os exemplos de faixas de razões de DVS:Pol para polímeros de peso molecular médio, baixo e ultrabaixo, incluem porém sem limitações, cerca de 0,0025 a cerca de 20, cerca de 0,005 a cerca de 20, cerca de 0,01 a cerca de 20, 0,0025 a 17,7, 0,005 a cerca de 0,17, 0,01 a cerca de 0,17, cerca de 0,0025 a cerca de 10, cerca de 0,005 a cerca de 10, cerca de 0,01 a cerca de 10, cerca de 0,1 a cerca de 20, cerca de 0,1 a cerca de 10, cerca de 1 a cerca de 20, cerca de 1 a cerca de 10.

Em algumas modalidades preferidas, os géis da invenção têm uma ou mais das seguintes características: (a) IPC 8-12%, de preferência 10-12%; (b) Peso Molecular do Ácido Hialurônico 500-2,500 kDa, de preferência 500-600 kDa; (c) Razão DVS:pol entre 1:200 e 1:15, de preferência entre 1:100 e 1:15, como por exemplo, entre 1:50 e 1:60; (d) FPC cerca de 1% a 2,5%. Os géis podem ser lavados até o equilíbrio ou de outra forma. Os géis podem ser lavados com ácido, ou alternativamente, podem ser lavados em solução salina neutra.

Em uma modalidade da invenção, os géis podem ser lavados em soluções aquosas ácidas, de preferência com soluções de cloreto de sódio, potássio, cálcio, magnésio ou amônio, ou misturas delas, e ainda mais preferivelmente, em uma concentração de cloreto de sódio 0,15 M (solução salina fisiológica). O pH da solução aquosa de lavagem pode ser menor ou igual a 4,0, de preferência pH 1,5 a 3, 2,0 a 3,0, porém mais preferivelmente, 2,3 a 2,8. Os géis podem ser então lavados em tubos de diálise (lavagem restrita) ou sem tubos de diálise (lavagem livre). Quando o pH dos géis atingem um pH menor ou igual a 4,0, de preferência pH 2,0-3,0, porém mais preferivelmente, 2,3 a 2,8. Eles podem ser então lavados em soluções aquosas de um sal, de preferência com soluções aquosas de cloreto de sódio, e mais preferivelmente, com solução aquosa 0,15 IVt de cloreto de sódio, até que o pH do gel seja de 4,5 a 6,5. Observou-se para os géis preparados nas mesmas IPCs e concentrações de DVS e lavados em condições de lavagem livre, que para os géis lavados em solução aquosa ácida, e em seguida, lavagem em solução aquosa neutra 0,15 M de cloreto de sódio, como descrito acima, a taxa de intumescência foi reduzida, em comparação com os géis lavados em apenas solução salina neutra. Em contraste, o uso de tubos de diálise impediu completamente o intumescimento dos géis, independentemente de como eles foram lavados. Observou-se também que os géis baseados em hialuronano, obtidos a partir de lavagem em ácido aquoso tinham um módulo de elasticidade menor e uma deformação maior do que os géis de hilano B preparados em concentrações similares e eram, portanto, mais macios e mais elásticos. Estes materiais são também altamente coesos e/ou adesivos. Eles resistem ao procedimento de formação de partículas e fragmentação durante o procedimento de lavagem, diferentemente dos géis de hilano B que podem ser claramente observados como sendo fragmentados e particulados durante a etapa de lavagem. Isto sugere que o pH baixo atingido por ácidos aquosos, ácidos orgânicos e inorgânicos, e particufarmente, ácidos minerais, de preferência ácido clorídrico, alterou e fixou a estrutura do gel em um material mais macio, mais elástico, coeso e adesivo. A estoca-gem do gel por < 24 horas em solução salina normal, depois da lavagem em ácido, e em seguida, ajuste controlado lento do gel até pH 4,5 a 6,5, mantém a estrutura conferida aos géis pelo processo de lavagem ácida. O pH do gel pode ser ajustado lentamente até 4,5 a 6,5 usando bases orgânicas ou inorgânicas e/ou tampões, particularmente no caso de géis que não estão em estado de equilíbrio; ou no caso de géis que estão em estado de equilíbrio, o pH pode ser ajustado lentamente até 4,5 a 6,5 lavando em solução salina neutra sem o uso de bases orgânicas ou inorgânicas e/ou tampões. Os géis podem ter uma lavagem final com um tampão aquoso para levar o pH até condições fisiológicas, caso necessário. Como esperado, esses materiais preparados a partir de IPCs baixas têm uma capacidade de intumescimento substancialmente mais baixa do que os materiais preparados com IPCs mais altas. A preparação dos primeiros materiais requer o uso de quantidades maiores de DVS, e consequentemente, mais grupos alquil-sulfona pendentes seriam esperados. No caso de materiais com uma IPC de 0,25% (p/p) e menor, o intumescimento dentro da tubulação de diálise foi mínimo. Portanto, a combinação de lavagem ácida, ajuste lento do pH e um alto grau de monofuncionalização da cadeia principal do polímero com grupos alquil-sulfona, contribuem conjuntamente para as propriedades de baixo intumescimento dos géis.

Observou-se também ainda que os géis preparados a partir de polímeros que têm uma IPC entre 0,25% e 0,9% (p/p) possuem características de fluxo específicas. Eles são mais semelhantes a líquidos (baixa viscosidade) e se adaptam ao formato dos recipientes nos quais eles são estocados. Embora estes materiais sejam relativamente resistentes, eles podem ser deformados facilmente, passados através de uma agulha de calibre fino como um líquido, e podem escoar para dentro de espaços entre tecidos. Assim sendo, eles são apropriados para uso como produtos injetáveis.

Geralmente, os géis preparados a partir de polímeros que têm IPCs > 1,0% (p/p) podem ser sintetizados para serem mais resistentes, elásticos e adesivos. Estes materiais, quando lavados em tubos de diálise, conservam seu formato após remoção da tubulação, independentemente do tempo de estocagem nos recipientes. Estes géis tendem a intumescer por causa da IPC mais alta usada e porque eles podem conter mais reticulantes.

Entretanto, a taxa de intumescimento pode ser controlada pelas condições de lavagem, isto é, pH baixo, como descrito acima. O intumescimento pode ser controlado também por meios físicos, usando, por exemplo, tubulação de diálise e não lavando o gel até o estado de equilíbrio. Alguns destes géis podem ser úteis para implantes nos quais um ligeiro intumescimento seria desejável. Estes géis possuem também propriedades adesivas e alguns podem grudar facilmente sobre muitas superfícies diferentes tais como a pele, vidro, plástico, cartilagem, etc. Espera-se que estes géis permaneçam nas posições nas quais eles foram colocados por um tempo mais longo do que seria o caso com géis mais rígidos. Acredita-se que as moléculas do polímero na superfície do gel têm um maior grau de liberdade do que em um gel rígido, e portanto, são mais capazes de interagirem com outras partículas do gel e com as superfícies com as quais elas entram em contato.

No caso de géis fabricados a partir de polímeros que têm uma IPC de 0,9% e abaixo, o teor mais alto de grupos alquil-sulfonila pendentes nos géis pode ter também um papel em permitir que os géis adiram a diferentes superfícies. No caso de soluções de partida com IPC baixa, a quantidade de DVS pode ser controlada de uma maneira tal que os géis resultantes sejam mais coesos ou adesivos.

Em uma modalidade, a invenção fornece um processo para preparar um gel coeso, compreendendo as etapas de: (a) disponibilizar uma solução de pelo menos um polímero de partida (Pol) que compreende um hialuronano, um hilano, ou uma mistura deles, em uma concentração inicial do polímero (IPC) de 0,25% em peso a 50% em peso; (b) submeter o pelo menos um polímero de partida a uma reação com divinil-sulfona (DVS); e (c) lavar o gel formado na etapa (b) com uma solução aquosa que tem um pH < 4.

Em modalidades afins, a IPC é selecionada entre as seguintes faixas: 0,25% em peso a 50% em peso, 0,25% em peso a 8% em peso, 3% em peso a 6% em peso, 3% em peso a 10% em peso, 3% em peso a 15% em peso, 8% em peso a 15% em peso, 10% em peso a 20% em peso, e 9% em peso a 20% em peso.

Em modalidades afins, a razão de divinil-sulfona para polímero (DVS:Pol) (p:p) é selecionada entre cerca de 0,0025 a cerca de 17,7. Em uma outra modalidade, a razão de divinil-sulfona para polímero (DVS:Po!) (p:p) é selecionada entre cerca de 0,005 a cerca de 17,7. Em ainda outra modalidade, a razão de divinil-sulfona para polímero (DVS:Pol) (p:p) é selecionada entre cerca de 0,01 a cerca de 17,7 Em outras modalidades, a invenção fornece um processo para preparar um gel coeso, compreendendo as etapas de: (a) disponibilizar uma solução de pelo menos um polímero de partida (Pol) que compreende um hialuronano, um hilano, ou uma mistura deles, em uma concentração inicial do polímero (IPC) > 8% em peso (como por exemplo, 8,1, 8,5,9, 9,5,10, 11, 12,13,15 e20% em peso) a 25, 30, 40 ou 50% em peso; (b) submeter o polímero de partida a uma reação com divinil-sulfona (DVS) para formar um gel, onde a razão de DVS:Pol (p:p) pode ser selecionada entre cerca de 0,0025 e cerca de 0,033, entre cerca de 0,05 e cerca de 0,033, ou entre cerca de 0,01 e cerca de 0,033. Opcionalmente, o processo pode compreender ainda a etapa de lavar o gel formado na etapa (b) com uma solução aquosa que tem um pH < 4.

No caso de géis com uma IPC mais alta do que 8% em peso, o peso molecular médio do polímero de partida é selecionado para ser entre 30 kDa e 5 MDa, de preferência entre 30 kDa e 4 MDa, entre 500 kDa e 3 MDa, ou entre 500 kDa e 2,5 MDa. Em tais modalidades, a IPC pode ser selecionada, por exemplo, entre as seguintes faixas: 8%-15%, 8%-30%, 10-12%, cerca de 12%, 12%-30%, 12%-50%, e 20-50%.

Em outras modalidades, a invenção fornece um processo para preparar um gel coeso, compreendendo as etapas de: (a) disponibilizar uma solução de pelo menos um polímero de partida (Pol) que compreende um hialuronano, um hilano, ou uma mistura deles, em uma concentração inicial do polímero (IPC) de 0,25% em peso a 50% em peso (como por exemplo, 3% em peso a 8% em peso, 0,25% em peso a 8% em peso, 3% em peso a 6% em peso, 3% em peso a 10% em peso, 3% em peso a 15% em peso, 8% em peso a 15% em peso, 10% em peso a 20% em peso, 9% em peso a 20% em peso, 8% em peso a 30% em peso, 10% em peso a 12% em peso, cerca de 12% em peso, 12% em peso a 30% em peso, 12% em peso a 50% em peso, e 20% em peso a 50% em peso); (b) submeter o polímero de partida a uma reação com divinif-sulfona (DVS) para formar um gel, em uma razão de divinil-sulfona para polímero (DVS:Pol) (p:p) selecionada para ser entre 0,025 e 0,05, entre cerca de 0,0025 e cerca de 0,033, entre cerca de 0,05 e cerca de 0,033, ou entre cerca de 0,01 e cerca de 0,033. Opcionalmente, o processo pode compreender ainda a etapa de lavar o gel formado na etapa (b) com uma solução aquosa que tem um pH < 4.

Em outras modalidades, a invenção fornece também um processo para preparar um gel coeso, compreendendo as etapas de: (a) disponibilizar uma solução de pelo menos um polímero de partida (Pol) que compreende um hialuronano, um hilano, ou uma mistura deles, em uma concentração inicial do polímero (IPC) de 0,25% em peso a 0,9% em peso {como por exempto, 0,25% em peso a 0,5% em peso, 0,3% em peso a 0,8% em peso, 0,5% em peso a 0,8% em peso, cerca de 0,5% em peso); e (b) submeter o polímero de partida a uma reação com divinil-sulfona (DVS). Em certas modalidades, a razão de divinil-sulfona para polímero (DVS:Pol) (p;p) selecionada para ser entre cerca de 1,4 e cerca de 17,7, entre cerca de 2 e 15, entre cerca de 5 e cerca de 15, entre cerca de 2 e cerca de 10. Opcionalmente, o processo pode compreender ainda a etapa de lavar o gel formado na etapa (b) com uma solução aquosa que tem um pH < 4.

Em modalidades afins preferidas, o peso molecular médio do polímero de partida é selecionado para ser entre 500 kDa e 6 MDa. Opcio- nalmente, tais géis podem ser lavados com ácido. Em várias modalidades, o peso molecular médio de um do pelo menos um polímero de partida é selecionado para ser entre 30 kDa e cerca de 500 kDa, como por exemplo, 30-100 kDa, 100-200 kDa, 200-500 kDa, 200-400 kDa, 200-300 kDa, 300-500 kDa, e 300-400 kDa. Nestas ou em outras modalidades, a razão de divinil-sulfona para polímero (DVS:Pol) (p:p) é selecionada para ser entre cerca de 0,0025 e cerca de 20, como por exemplo, cerca de 0,05 a cerca de 20, 0,01 a cerca de 20, cerca de 0,0025 a cerca de 0,033, 0,05 a cerca de 0,033, e 0,01 a cerca de 0,033. O processo para fabricar géis, que inclui lavar os géis com uma solução aquosa que tem um pH < 4, pode compreender a etapa de ajustar o pH do gel de < 4 para pH fisiológico com uma solução salina tamponada. Alternativamente, o processo compreende ainda a etapa de ajustar o pH do gel de < 4 para cerca de 4,5 a 6,5 com uma solução salina tamponada. Em outra modalidade, a invenção fornece um processo como descrito, onde na etapa de lavagem ácida (etapa (c)), o gel é lavado até um pH de cerca de 2,0 a 3,0. A invenção fornece também um processo no qual a etapa de reti-culação (etapa (b)) é conduzida em pH > 9. A invenção fornece ainda um processo no qual a etapa (b) é deixada prosseguir por < 4 horas.

Em algumas modalidades, o gel é lavado até um estado de não equilíbrio no tubo de diálise.

Geralmente, a invenção fornece também um processo no qual o peso molecular médio de pelo menos um polímero de partida é cerca de < 10 MDa. Em uma outra modalidade, o peso molecular médio de pelo menos um polímero de partida é selecionado entre cerca de 0,5 MDa e cerca de 4 MDa. Em uma modalidade preferida, o pelo menos um polímero de partida é um hialuronano. Em ainda outra modalidade, o peso molecular médio de um do pelo menos um polímero de partida é selecionado para ser entre cerca de 3 MDa e cerca de 10 MDa. Em ainda outra modalidade, o peso molecular médio do polímero é < 500 kDa. Em uma modalidade preferida, o pelo menos um polímero de partida é um hilano. Em algumas modalidades, o peso molecular médio do polímero de partida é entre cerca de 30 kDa e cerca de 500 kDa.

Em outras modalidades, a invenção fornece um gel com um teor de polímero (como por exemplo, hialuronano, de preferência ácido hialurôni-co (HA) fermentado de forma bacteriana) de 8,25 ± 1,75 mg/mL, e as propriedades reológicas do produto são as seguintes: viscosidade sob cisalha-mento de 30-100 Pa (a 200 Hz); módulo de estocagem (G1 a 5 Hz) de 20-150 Pa, como por exemplo, cerca de 80 Pa; e um ângulo de fase (6 a 5 Hz) menor do que 35°, como por exemplo, cerca de 20°.

Em algumas modalidades, a invenção fornece uma composição que compreende uma mistura do gel ("componente gel") com uma solução de polímero ("componente fluido"). Em modalidades específicas, os componentes gel e fluido são misturados em uma razão de 80:20 em peso. Em tais modalidades, o teor de polímero (ácido hialurônico, HA) no gel é de 8,25 ± 1,5 mg/mL, de preferência 8,25 ± 0,75 mg/mL, enquanto que o componente fluido tem um teor de polímero de 2,25 ± 1,0 mg/mL, de preferência 2,25 ± 0,25 mg/mL (a composição tem assim um teor total de polímero (modificado e não-modificado) de 10,5 ± 2,5 mg/mL, de preferência 10,5 ± 1,0 mg/mL). Alternativamente, os componentes podem ser misturados em uma razão entre 60:40 e 90:10, como por exemplo, 70:30, 75:25 e 85:15. As propriedades reológicas da composição são as seguintes: viscosidade sob cisalha-mento de 30-100 Pa (a 200 Hz); módulo de estocagem (G' a 5 Hz) de 20-150 Pa; e um ângulo de fase (5 a 5 Hz) menor do que 35°. A invenção fornece ainda um dispositivo que é seringa pré-carregada com uma única dosagem unitária de uma composição não-pirogênica estéril, que compreende o componente gel com ou sem o componente fluido, preparada de acordo com qualquer um dos métodos aqui descritos. A invenção fornece também um processo no qual a etapa de reticulação (etapa (b)) é conduzida na presença de um material biologicamente ativo. O material biologicamente ativo pode compreender um fármaco, uma proteína, um DNA, uma vitamina ou outro material biologicamente ativo desejável. A invenção fornece ainda um processo que compreende a etapa de misturar o gel em pH fisiológico com um material biologicamente ativo. O material biologicamente ativo pode compreender um fármaco, uma proteína, um DNA, uma vitamina, células ou outro material biologicamente ativo. O material biologicamente ativo pode ser misturado com um gel que foi produzido pelos métodos da invenção e/ou pode estar presente com o material de partida. A invenção fornece ainda um processo no qual a solução do polímero de partida compreende uma hialuronano, um hilano, ou uma mistura deles, e outro polímero selecionado entre glicosaminoglicanos, polissacarí-deos polianiônicos, polissacarídeos sem carga, gomas de polissacarídeos, poliálcoois e poliaminas. A invenção fornece também um gel preparado de acordo com qualquer um dos processos da invenção descritos acima. Em uma outra modalidade, a invenção fornece uma composição farmacêutica que compreende o gel e um excipiente farmacêutico.

Em ainda outra modalidade, a invenção fornece um método para tratar uma condição médica em um paciente, administrando a um paciente, que dela necessita, a composição farmacêutica que compreende o gel.

Em uma modalidade preferida, a condição médica é osteoartrite (OA), e a composição é administrada em um espaço articular, tal como, por exemplo, um joelho, ombro, articulações temporomandibulares carpometa-cárpicas, cotovelo, quadril, punho, tornozelo, e articulações zigapofisárias lombares (facetas) na espinha. A viscossuplementação pode ser realizada por intermédio de uma única injeção intra-articular ou múltiplas injeções ín-tra-articulares, administradas durante um período de semanas, para dentro do joelho ou outras articulações afligidas. Por exemplo, um indivíduo humano com osteoartrite no joelho pode receber uma, duas ou três injeções de cerca de 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,10 mL ou mais por joelho. Para outras articulações, o volume administrado pode ser ajustado, baseado no tamanho da articulação.

Em outra modalidade, a composição é usada para criar uma embolia.

Em uma modalidade adicional, a condição médica é a prevenção de adesão pós-cirúrgica, e a composição é administrada no local de uma incisão cirúrgica. Alternativamente, a condição médica é a prevenção de a-desão pós-cirúrgica, e a composição é administrada a um tecido distante do local de uma incisão cirúrgica. Em uma modalidade preferida, a composição é administrada através de um endoscópio.

Em modalidades adicionais, as composições da invenção podem ser usadas como um enchimento dérmico, como por exemplo, para tratar rugas e defeitos de volume da pele e de outros tecidos, ou para expansão das cordas vocais.

Na descrição precedente, nos exemplos e nas reivindicações, que se seguem, as razões de divinil-sulfona para polímero <DVS:Pol) estão relatadas em uma base ponderai (p/p), a menos que diferentemente indicado. Os pesos de hialuronato de sódio ou fibras de hilano solúveis (sal sódi-co) foram ajustados para descontar seu teor de água. O hialuronato de sódio de médio e alto peso molecular, fermentado de forma bacteriana, tinha um peso molecular de 1,7 MDa e cerca de 2,7 MDa, respectivamente. O hialuronato de sódio de médio peso molecular foi obtido na Shiseido Corporation, Japão. Os hialuronatos de sódio de alto e baixo peso molecular foram na Genzyme Corporation, Cambridge, Massachusetts, EUA. Os polímeros de peso molecular baixo e uitrabaixo foram produzidos usando um método de irradiação gama, como descrito na patente n- US 6.383.344. As fibras de hilano solúveis (sal sódico) tinham um peso molecular de cerca de 6 MDa e foram obtidas na Genzyme Biosurgery, Ridgefield, New Jersey, EUA, e foram preparadas de acordo com a patente n9 US 4.713.448. O termo "solução salina neutra" refere-se a uma solução de cloreto de sódio 0,15 M em um pH de cerca de 6 a 7. Para uma lavagem livre, a quantidade de ácido clorídrico (HCI) usada para lavar foi calculada como aquela necessária para levar a solução de lavagem (solução salina) neutra até pH < 4,0, de preferência pH 2,0 a 3,0 ou 1,5 a 3,0, porém mais preferivelmente, pH 2,3 a 2,8, e depois, corrigido quanto aos moles de ácido necessários para neutralizar o hidróxido de sódio usado na mistura reativa, e depois convertido da forma de sal do polissacarídeo na forma de ácido, como por exemplo, hialu-ronato de sódio em ácido hialurônico. Para a lavagem restrita, o gel foi lavado com solução salina aquosa ácida, que é a solução salina neutra à qual se adicionou HCI até que o pH estivesse menor ou igual a 4, de preferência pH 2,0 a 3,0. A lavagem restrita foi continuada, de preferência, até que o gel tivesse um pH de 2,3 a 2,8. A solução salina tamponada com fosfato tinha um pH de 7,3 a 7,4, a menos que diferentemente indicado. Os géis foram lavados em temperatura ambiente, a menos que indicado ao contrário. O termo "pH fisiológico" pretende significar uma faixa de pH entre cerca de 6,9 e 7,5. A resistência das amostras dos géis, macio ou rígido, foi determinada baseado nos seus ângulos de fase, δ, e o módulo complexo G*, sendo que os ângulos de fase baixos e os altos valores do módulo complexo indicam géis resistentes. As propriedades elásticas e coesivas dos géis foram determinadas por sua resistência à deformação, sendo que os altos valores de resistência à deformação indicam géis elásticos e coesos. As observações visuais e as manipulações manuais dos géis também deram uma indicação das suas propriedades adesivas e coesivas. As concentrações de hialurona-no e hilano foram determinadas pelo ensaio de ácido hexurônico, usando um método com carbazol automatizado (Anal. Biochem. 12:547-558 (1965)). Todas amostras dialisadas usaram tubo de diálíse com um corte de peso molecular de 12 a 14 kDa.

Neste relatório descritivo inteiro, várias publicações estão referenciadas. Os ensinamentos destas publicações são aqui incorporados como referência em sua totalidade. A presente invenção será descrita mais detalhadamente nos exemplos que se seguem, que são fornecidos meramente a título ilustrativo e não pretendem limitar o âmbito da invenção, como enunciada nas reivindicações.

As tabelas referidas nos exemplos estão localizadas no final. Nos exemplos que se seguem, quando o sal foi adicionado, a IPC é calculada como a concentração do polímero em solução de hidróxido de sódio, antes da adição de um modificador de viscosidade, tal como, por exemplo, NaCI, ou outros sais, de preferência sais biocompatíveis. A menos que dife- rentemente especificado, o termo "porcentagem (%)" refere-se a porcentagem em peso.

Exemplo 1 IPC de 0.75% com Hialuronato de Sódio Fermentado de Forma Bacteriana -Peso Molecular Médio Este Exemplo ilustra a preparação de um gel com uma IPC de 0,75% e uma rezão de DVS;Pol de 2:1.

Adicionou-se 525,7 g de água esterilizada a um hialuronato de sódio em pó com peso molecular médio (cerca de 1,7 MDA, 5,30 g), fermentado de forma bacteriana, em um reator, e misturou-se em uma batedeira orbital por 18 horas a 4°C. A esta solução, à temperatura ambiente, adicionou-se uma solução 1 M de NaOH filtrada e esterilizada (60,00 mL), produzindo uma solução de polímero que tem NaOh em uma concentração 0,1 M. Adicionou-se DVS (7,60 mL) à solução do polímero, sob agitação mecânica (300-500 rpm), e a mistura foi agitada por 25 min à temperatura ambiente. A mistura reativa foi colocada dentro de um tubo de diálise e depois estocada à temperatura ambiente por 4 horas, produzindo um gel. O gel foi então lavado em solução salina neutra estéril (10,0 L), contendo a solução de HCI (7,70 mL) até que o pH estivesse entre 2,3 e 2,8. O gel foi então lavado extensivamente com solução salina neutra até que o pH estivesse cerca de 5,1. O gel foi então lavado exaustivamente com porções de 12 L de solução salina neutra à qual tinham sido adicionados 13,5 mL de solução salina neutra contendo NaHCOs 0,5 M, até que o pH estivesse entre 7,0 e 7,4. O gel foi então removido. O rendimento final do gel foi de 607,1 g e tinha uma IPF de 0,72%. Uma parte do gel foi colocada em autoclave a 131°C por 10 minutos. Os dados reológicos estão indicados na Tabela 1, e a observação indicou que o gel era elástico e coesivo.

Exemplo 2 IPC de 0,5% com Fibras de Hilano Este Exemplo ilustra a preparação de um gel com uma IPC de 0,5% e uma razão de DVS:Pol de 4:1 Adicionou-se água esterilizada (133,1 g) a uma solução de sal sódico de hilano a 0,75% (cerca de 6 MDa, 265,5 g), e depois misturou-se em um aparelho rotativo por cerca de 18 horas à temperatura ambiente. Adicionou-se uma solução 1 M de NaOH filtrada e esterilizada (45,00 mL), e o fluido foi misturado em uma batedeira Turbula T2F basculante por 10 minutos. Depois, adicionou-se DVS (2,50 mL) e a misturação foi continuada por mais 30 minutos. A mistura reativa foi então transferida para dentro de um tubo de diálise e estocada à temperatura ambiente por 4 horas. O gel resultante foi lavado com solução salina neutra contendo solução 12 M de HCI (6,50 mL) até que o pH estivesse entre cerca de 2,3 e 2,8, e depois lavado intensamente com poções de 3,0 L de solução salina neutra até que o pH estivesse entre cerca de 6,0 e 6,5. O gel foi então lavado intensamente com parcelas de 3,0 L de solução salina neutra à qual tinham sido adicionados 4,0 mL de solução salina neutra contendo NaHC03 0,5 M até que o pH atingisse cerca de 7. O gel era adesivo e coesivo, mas um tanto macio, com uma FPC de 0,45%. Baseado nos dados da análise elementar, o teor de enxofre era de 3,56%. Uma parte do gel foi submetida a uma autoclave a 131°C por 10 minutos. Os dados reológicos indicados na Tabela 1 e as observações indicaram que o gel era semelhante a um líquido, e era elástico, macio e coesivo.

Exemplo 3 IPC de 0,38% com Fibras de Hilano Este Exemplo ilustra a preparação de um gel com uma IPC de 0,38% e uma razão de DVSiPol de 6:1.

Adicionou-se água esterilizada (261,9 g) a fibras de hilano (sal sódico) (1,34 g), e a mistura foi agitada mecanicamente à temperatura ambiente por 18 horas. Adicionou-se uma solução 1 M de NaOH (30,00 mL) à solução do polímero, produzindo uma solução do polímero que tem NaOH em uma concentração 0,1 Μ. A solução do polímero foi agitada mecanicamente a 300-500 rpm por 10 minutos. Adicionou-se DVS (1,940 mL) em suspensão em água desmineralizada (0,880 mL) a esta solução do polímero. A mistura reativa foi agitada por aproximadamente 30 min à temperatura ambiente, e depois adicionou-se mais DVS (3,800 mL), e em seguida, mistu- rou-se por outros 30 min. A mistura reativa foi vertida para dentro de um tubo de diálise, usando um funil para efetuar uma lavagem restrita, e guardou-se à temperatura ambiente por 3 horas em um recipiente fechado, com uma pequena quantidade de solução salina para proporcionar alguma umidade e impedir que o tubo secasse. O gel resultante foi então dialisado contra solução salina 0,15 M que tinha sido acidificada até um pH de cerca de 2,5, u-sando uma solução de HCI, até que o pH atingisse 2,7. O gel foi então dialisado contra solução salina neutra até que o pH atingisse cerca de 6,5. O gel tinha uma FPC de 0,35%. Uma parte do gel foi submetida a uma autoclave a 131°C por 10 minutos. Os dados reológicos indicados na Tabela 1 e a observação indicaram que o gel era macio, coeso e bem elástico, porém com um caráter mais semelhante a um líquido do que semelhante a um gel.

Exemplo 4 [PC de 0.25% com Fibras de Hilano Este Exemplo ilustra a preparação de um gel com uma IPC de 0,25% e uma razão de DVS:Pol de 8:1.

Fibras de hilano (sal sódico) (0,144 g) foram dissolvidas batendo em água desmineralizada (42,00 mL) em uma batedeira orbital por cerca de 24 horas. Adicionou-se uma solução 1 M de NaOH (5,00 mL) à solução do polímero, e a solução do polímero foi agitada em um misturador suspenso. Adicionou-se uma suspensão de DVS (0,880 mL) em água desmineralizada (1,875 mL) à solução do polímero e ela foi misturada por duas horas à temperatura ambiente. A cor do produto mudou de cinza-claro para cinza-escuro durante o curso de duas horas. A mistura reativa foi estocada de um dia para o outro a -4°C, resultando em um gel. O gel foi então transferido para dentro de um tubo de diálise para lavagem restrita e lavado com solução salina 0,15 M acidificada até um pH de cerca de 2,5 com solução de HCI durante o curso de dois dias. Ele foi então lavado intensamente com solução salina neutra por 5 a 7 dias. A análise reológica (Tabela 1) e a observação indicaram que o produto era um gel elástico e relatívamente macio.

Exemplo 5 IPC de 0,15% com Fibras de Hilano Este Exemplo ilustra a preparação de um material com uma IPC de 0,15% e uma razão de DVS:Pol de 17,7:1.

Adicionou-se uma solução 0,1 M de NaOH (97,52 g) às fibras de hilano (sal sódico) (0,231 g), e a mistura foi agitada a -500 rpm por -80 min. Depois, adicionou-se DVS (2,250 mL) à solução do polímero, sob agitação intensa por 5 min. A mistura reativa mudou (igeiramente de cor de pêssego para branco leitoso durante o curso de -4 horas. A mistura reativa foi estocada durante a noite inteira à temperatura ambiente. A mistura reativa ainda parecia ser um líquido depois da estocagem noturna, e ela foi então transferida para dentro de um tubo de diálise para lavagem restrita. A mistura foi lavada em uma batedeira orbital a -120 rpm contra 4,0 L de solução salina neutra à qual tinham sido adicionados 12,0 mL de HCI 2 M, para conseguir uma lavagem com solução salina ácida, tendo um pH de 2,5. Depois de ~8 h, a solução de lavagem com solução salina ácida foi trocada por 4,0 L de solução salina ácida fresca para lavagem preparada como descrito, e a mistura reativa foi estocada a 4°C por cerca de 72 h. Depois de aproximadamente 72 horas de estocagem, o produto não parecia ter geleificado e separou-se em duas fases, uma fase superior incolor e uma fase inferior branco-leitosa.

Exemplo 6 Hialuronato de Sódio a 4,0% Fermentado de Forma Bacteriana - Peso Molecular Médio Este Exemplo ilustra a preparação de um gel com uma IPC de 4% e uma razão de DVS:Pol de 1:17.

Hilauronato de sódio com peso molecular médio (8,42 g), fermentado de forma bacteriana, foi adicionado a um béquer que contém uma solução 0,2 M de NaOH (190,60 g) e agitado mecanicamente (500-750 rpm) à temperatura ambiente por cerca de 90 minutos. Adicionou-se lentamente DVS (0,400 mL) dissolvida em álcool isopropílico (EPA) (0,600 mL) à solução do polímero, e a mistura foi agitada por mais 15 minutos (o álcool isopropíli- co foi usado para ajudar a dispersar o volume pequeno de DVS no volume maior da solução do polímero - qualquer diluente miscível em água, apropriado, pode ser escolhido). A mistura reativa foi vertida para dentro de uma travessa de vidro Pyrex® de 23 x 18 cm, coberta e guardada por quatro horas, produzindo um gel. O gel foi então transferido para um recipiente de vidro, contendo solução salina neutra (4,8 L) à qual tinham sido adicionados 36,00 mL de HCI 2 M, e batido em uma batedeira orbital à temperatura ambiente por cerca de 24 horas. O pH do gel foi medido (2,7-2,8) e depois o gel foi lavado em solução salina neutra (10,0 L) por cerca de 24 horas. O pH do gel foi medido (3,3) e ele foi então lavado em uma solução salina 0,025 M tamponada com fosfato (3,0 L) por 24 horas. O rendimento final do gel foi de 953,8 g com uma FPC de 0,81%. Uma parte do gel foi submetidas a uma autoclave a 126°C por 10 minutos. Os dados reológicos indicados na Tabela 1 e a observação indicaram que o gel era algo elástico e coeso, porém relativamente rígido. Baseado nos dados de análise elementar, o teor de enxofre era de 0,95%.

Exemplo 7 Hialuronato de Sódio com IPC de 4,8% Fermentado de Forma Bacteriana -Peso Molecular Médio Este Exemplo ilustra a preparação de um gel com uma IPC de 4,8% e uma razão de DVS.Pol de 1:48.

Hialuronato de sódio de peso molecular médio (10,52 g), fermentado de forma bacteriana, foi adicionado lentamente a uma solução 0,2 M de NaOH (200 mL), sob agitação mecânica rápida, dando uma solução do polímero com uma IPC de 4,8%. Depois de 90 min, adícionou-se lentamente uma solução de DVS (0,170 mL) dissolvida em álcool isopropíEico (0,830 mL), usando uma pipeta (5 x -0,2 mL), durante um minuto, à solução do polímero. A mistura reativa foi agitada por 15 min e depois vertida para dentro de uma travessa de vidro Pyrex® (23 x 18 x 6,6 cm) vedada com uma cobertura de plástico. A mistura reativa foi estocada à temperatura ambiente por mais 3,75 horas. O gel resultante foi então transferido para um recipiente de vidro e lavado livremente com solução salina neutra (3,0 L) à qual tinham sido adicionados 16,50 mL de uma solução 2 M de HCI, e sob agitação em uma batedeira orbital à temperatura ambiente por cerca de 24 horas. O gel foi removido, o pH foi registrado (2,8), e ele foi então lavado com solução salina neutra (10,0 L) em uma batedeira orbital. Depois de aproximadamente 24 horas, a solução salina foi drenada usando uma peneira e o gel foi lavado com solução salina 0,025 M tamponada com fosfato (3,5 L) em um pH de 7,6 por cerca de 24 horas. O gel (1,19 kg e pH 7,2) foi então removido da lavagem. A FPC era de 0,53%. Uma amostra do produto foi submetida a uma autodave a 121°C por 15 min. Os dados reológicos indicados na Tabela 1 e a observação indicaram que o gel era elástico, coeso e macio.

Exemplo 8 Hialuronato de Sódio com IPC de 4.8% Fermentado de Forma Bacteriana -Alto Peso Molecular Este Exemplo ilustra a preparação de um gel com uma IPC de 4,8% e uma razão de DVS:Pol de 1:96.

Hialuronato de sódio de alto peso molecular (10,27 g), fermentado de forma bacteriana, foi adicionado lentamente a uma solução 0,2 M de NaOH (189,63 g), sob agitação mecânica rápida, dando uma solução do polímero com uma IPC de 4,8%. Depois de 90 min, adicionou-se lentamente uma solução de DVS (0,080 mL) dissolvida em álcool isopropílico (0,920 mL), usando uma pipeta (5 x —0,2 mL), durante um minuto, à solução do polímero. A mistura reativa foi agitada por 15 min e depois vertida para dentro de uma travessa de vidro Pyrex® (23 x 18 x 6,5 cm) vedada com uma cobertura de plástico. A mistura reativa foi estocada à temperatura ambiente por 4 horas, produzindo um gel, que foi depois transferido para um recipiente de vidro, contendo solução salina neutra (3,0 L) à qual tinham sido adicionados 36,00 mL de uma solução 2 M de HCI. Ele foi então agitado em uma batedeira orbital à temperatura ambiente por cerca de 24 horas. A solução de lavagem foi drenada usando uma peneira e o gel foi removido. O pH do gel foi registrado (2,4), e ele foi então lavado com solução salina neutra (7,5 L) em uma batedeira orbital por 4 horas. O pH do gel foi ajustado lentamente até 5,0-6,5 pela adição de solução 1 M de NaOH (21,50 mL), durante o curso de 24 horas, à lavagem. A solução salina foi então drenada e o gel foi lavado com solução PBS 0,01 M (3,0 L) em pH 7,4 por 7,5 h. Uma parte do material foi submetida a uma autoclave a 126°C por 10 minutos. Os dados reológicos indicados na Tabela 1 e a observação indicaram que o gel era elástico, coeso e macio.

Exemplo 9 Hialuronato de Sódio com ÍPC de 5.6% Fermentado de Forma Bacteriana -Alto Peso Molecular Este Exemplo ilustra a preparação de um gel com uma IPC de 5,6% e uma razão de DVS:Pol de 1:48.

Adicionou-se NaCI (11,70 g) a uma solução 0,2 M de NaOH (187,60 g), sob agitação, até dissolver. Hialuronato de sódio de alto peso molecular (12,30 g), fermentado de forma bacteriana, foi adicionado sob agitação mecânica rápida, que foi continuada por 120 minutos, dando uma solução do polímero com uma IPC de 5,6%. Adicionou-se lentamente uma solução de DVS (0,200 mL) dissolvida em álcool isopropílico (0,900 mL), usando uma pipeta (5 x ~0,2 mL), durante um minuto, à solução do polímero. Depois de 2-3 min de agitação, a mistura foi vertida para dentro de uma travessa de vidro Pyrex® (23 x 18 x 6,5 cm) vedada com uma cobertura de plástico. A mistura reativa foi estocada à temperatura ambiente por 4 horas, produzindo um gel, Ele foi depois transferido para um recipiente de vidro, contendo solução salina 0,15 M (3,0 L) à qual tinha sido adicionada uma solução 2 M de HCI (36,00 mL), e agitou-se em uma batedeira orbital à temperatura ambiente por cerca de 24 horas. A solução de lavagem foi drenada u-sando uma peneira e o gel foi removido. O pH do gel foi registrado (2,2), e ele foi então lavado com solução salina neutra (7,5 L) em uma batedeira orbital por 4 horas. O pH do gel foi ajustado lentamente até 5,0-6,5 pela adição de solução 1 M de NaOH (21,50 mL), durante o curso de 24 horas, à lavagem, A solução salina foi drenada e o gel foi lavado com solução PBS 0,01 M (3,0 L) em pH 7,4 por 8-24 horas. O rendimento final foi de 1.008,5 g em uma FPC de 1,0%. A concentração de uma parte do material foi ajustada para 0,75% adicionando solução PBS 0,01 M, e submetida a uma autoclave a 126°C por 10 minutos. Os dados reológicos indicados na Tabela 1 e a observação indicaram que o gel era elástico, coeso e macio.

Exemplo 10 Hialuronato de Sódio a 5.6% Fermentado de Forma Bacteriana - Alto Peso Molecular Este Exemplo ilustra a preparação de um gel com uma iPC de 5,6% e uma razão de DVS:Pol de 1:96.

Adicionou-se NaCI (11,70 g) a uma solução 0,2 M de NaOH (186,90 g), sob agitação, até dissolver. Hialuronato de sódio de alto peso molecular (12,30 g), fermentado de forma bacteriana, foi adicionado sob agitação mecânica rápida, que foi continuada por 120 min, dando uma solução do polímero com uma IPC de 5,6%. Adicionou-se lentamente uma solução de DVS (0,100 mL) dissolvida em álcool isopropílico (0,900 mL), usando uma pipeta (5 x ~0,2 mL), durante um minuto, à solução do polímero. Depois de 2-3 min de agitação, a mistura foi vertida para dentro de uma travessa de vidro Pyrex® (23 x 18 x 6,5 cm) vedada com uma cobertura de plástico. A mistura reativa foi estocada à temperatura ambiente por 4 horas, produzindo um gel, e depois transferida para um recipiente de vidro com uma solução que contém NaCI (13,80 g) e solução 2 M de HCI (39,50 mL) em água des-mineralizada (3,0 L), e agitou-se em uma batedeira orbital à temperatura ambiente por cerca de 24 horas. A solução de lavagem foi drenada usando uma peneira e o gel foi removido. O pH do gel foi registrado (2,1), e ele foi então lavado com solução salina neutra (7,0 L) em uma batedeira orbital por 4 horas. O pH do gel foi ajustado íentamente até 5,0-6,5 pela adição de solução 1 M de NaOH (22,50 mL), durante o curso de 24 horas, à lavagem. A solução de lavagem foi drenada e o gel foi lavado com solução PBS 0,01 M (3,0 L) em pH 7,4 por 8-24 horas. O rendimento final foi de 883,5 g em uma FPC de 0,88%. A concentração de uma parte do matéria! foi ajustada para 0,74% adicionando solução PBS 0,01 M. Este material foi submetido a uma autoclave a 126°C por 10 minutos. Os dados reológicos indicados na Tabela 1 e a observação indicaram que o gel era elástico, coeso e macio.

Exemplo 11 IPC de 6.0% com Hialuronato de Sódio Fermentado de Forma Bacteriana -Alto Peso Molecular Este Exemplo ilustra a preparação de um gel com uma IPC de 6% e uma razão de DVS:Pol de 1:48.

Adicionou-se NaCI (11,70 g) a uma solução 0,2 M de NaOH (186,75 g), sob agitação, até dissolver. Hialuronato de sódio de alto peso molecular (13,00 g), fermentado de forma bacteriana, foi adicionado sob agitação mecânica rápida, que foi continuada por 120 min, dando uma solução do polímero com uma IPC de 6,0%. Adicionou-se uma solução de DVS (0,210 mL) dissolvida em álcool isopropílico (0,790 mL), usando uma pipeta (5 x ~0,2 mL), durante um minuto, à solução do polímero. Depois de 2-3 min de agitação, a mistura foi vertida para dentro de uma travessa de vidro P-yrex® (23 x 18 x 6,5 cm) vedada com uma cobertura de plástico. A mistura reativa foi estocada à temperatura ambiente por 4 horas, produzindo um gel, e depois transferida para um recipiente de vidro contendo solução salina neutra (3,0 L) à qual tinham sido adicionados 37,90 mL de uma solução 2 M de HCI, e agitou-se em uma batedeira orbital à temperatura ambiente por cerca de 24 horas. A solução de lavagem foi drenada usando uma peneira e o pH do gel foi registrado (2,4). O gel foi então lavado com solução salina neutra (7,0 L) por 4 h, e depois seu pH foi ajustado lentamente até 5,0-6,5 pela adição de solução 1 M de NaOH (21,50 mL), durante o curso de 24 horas, à lavagem. A solução de lavagem foi então drenada através de uma peneira e o gel foi lavado com solução salina 0,01 M (3,0 L) tamponada com fosfato em pH 7,6 por 8-24 horas. O rendimento final foi de 1.008,2 g em uma FPC de 0,97%. A concentração de uma parte deste material foi ajustada para 0,68% adicionando solução PBS 0,01 M. Este material foi submetido a uma autoclave a 126°C por 10 minutos. Os dados reológicos indicados na Tabela 1 e a observação indicaram que o gel era elástico, coeso e macio.

Exemplo 12 IPC de 6.0% com Hialuronato de Sódio Fermentado de Forma Bacteriana -Alto Peso Molecular Este Exemplo ilustra a preparação de um gel com uma IPC de 6% e uma razão de DVS:Pol de 1:96.

Adicionou-se NaCI (11,79 g) a uma solução 0,2 M de NaOH (186,71 g), sob agitação, até dissolver. Hialuronato de sódio de alto peso molecular (13,17 g), fermentado de forma bacteriana, foi adicionado sob agitação mecânica rápida, que foi continuada por 120 min, dando uma solução do polímero com uma IPC de 6,0%. Adicionou-se à solução do polímero uma solução de DVS (0,105 mL) dissolvida em álcool isoprcpílico (0,900 mL), usando uma pipeta (5 x -0,2 mL), durante um minuto. Depois de outros 2-3 min de agitação, a mistura foi vertida para dentro de uma travessa de vidro Pyrex® (23 x 18 x 6,5 cm) vedada com uma cobertura de plástico. A mistura reativa foi estocada à temperatura ambiente por 4 horas, produzindo um gel, e depois transferida para um recipiente de vidro contendo solução salina neutra (3,0 L) à qual tinham sido adicionados 36,00 mL de uma solução 2 M de HCI, e agitou-se em uma batedeira orbital à temperatura ambiente por cerca de 24 horas. O gel foi removido, o pH foi registrado (2,2), e depois lavado com solução salina neutra (7,0 L) em uma batedeira orbital por 4 h. O pH do gel foi ajustado lentamente para 5,0-6,5 pela adição de solução 1 M de NaOH durante o curso de 24 horas, à lavagem. A solução salina foi então drenada através de uma peneira e o gel foi lavado com solução PBS 0,01 M (3,0 L) em pH 7,6 por 4 h. O rendimento final foi de 1.040,4 g com uma FPC de 1,12%. A concentração de uma parte do gel foi ajustada para 0,74% adicionando solução PBS 0,01 M. Este material foi submetido a uma autoclave a 126°C por 10 minutos. Os dados reológicos indicados na Tabela 1 e a observação indicaram que o gel era elástico, coeso e macio.

Exemplo 13 IPC de 8.0% com Hialuronato de Sódio Fermentado de Forma Bacteriana -Peso Molecular Médio Este Exemplo ilustra a preparação de um gel com uma IPC de 8% e uma razão de DVS.Pol de 1:100.

Adicionou-se NaCI (5,85 g) a uma solução 0,2 M de NaOH (91,58 g), sob agitação, até dissolver. Hialuronato de sódio de peso molecular médio (8,35 g), fermentado de forma bacteriana, foi adicionado sob agitação mecânica rápida, que foi continuada por 120 min, dando uma solução do polímero com uma IPC de 8,0%. Adicionou-se lentamente à solução do polímero uma solução de DVS (0,068 mL) dissolvida em álcool isopropílico (0,932 mL), usando uma pipeta (5 x -0,2 mL), durante um minuto e a agitação foi continuada por outros 2-3 min. A mistura da reação foi estocada à temperatura ambiente por 4 horas, produzindo um gel, e depois transferida para um recipiente de vidro contendo solução salina neutra (5,96 g de NaCI em 1,8 L) à qual tinha sido adicionada uma solução (23,80 mL) 2 M de HCI, e agitou-se em uma batedeira orbital à temperatura ambiente por cerca de 24 horas. A solução de lavagem foi drenada usando uma peneira e o pH do gel foi registrado (2,4). Ele foi então lavado com solução salina neutra (4,5 L) em uma batedeira orbital por 4 horas, e depois a solução de lavagem foi drenada. O pH do gel foi ajustado lentamente para 5,0-6,5, primeiramente lavando o gel em solução salina neutra por 8 horas, drenando a solução de lavagem, e depois usando solução salina neutra (4,5 L), contendo solução 1 M de NaOH (15,00 mL). Uma etapa final de lavagem foi realizada com solução PBS 0,01 M (3,0 L). O rendimento final do gel foi de 882,7 g em uma FPC de 0,81%. Este material foi submetido a uma autoclave a 126°C por 10 minutos. Os dados reológicos indicados na Tabela 1 e a observação indicaram que o gel era elástico, coeso e macio.

Exemplo 14 IPC de 3% com Fibras de Hilano Este Exemplo ilustra a preparação de um gel com uma IPC de 3% e uma razão de DVS:Pol de 4:17.

Fibras de hilano (sal sódico) (6,60 g) foram adicionadas a uma solução 0,1 M de NaOH (192,00 g), sob agitação mecânica rápida, e a agitação foi continuada por duas horas até dissolver. Adicionou-se DVS (1,200 mL) à solução do polímero, sob agitação mecânica rápida. A mistura reativa foi agitada por aproximadamente 2 minutos em aita velocidade, e depois vertida para dentro de uma travessa de vidro Pyrex® (23 x 18 x 6,5 cm) vedada com uma cobertura de plástico. A mistura reativa foi estocada à temperatura ambiente por duas horas, produzindo um gel, e depois transferida para um recipiente de vidro contendo solução salina neutra (3,0 L). O gel foi então agitado em uma batedeira orbital à temperatura ambiente por cerca de 24 horas. A solução de lavagem foi então drenada usando uma peneira e realizou-se uma outra lavagem usando solução salina neutra (3,0 L). A solução de lavagem foi trocada 5 vezes durante 3 dias. Uma lavagem final em solução PBS 0,01 M (3,0 L) por 24 horas foi realizada para assegurar que o pH do gel fosse de 6,9 a 7,4 antes de colocar em autoclave. O rendimento final do gel foi de 821,0 g com uma FPC de 0,57%. A concentração de uma parte do gel foi ajustada para 0,49% pela adição de PBS e esta amostra foi colocada em uma autoclave a 126°C por 10 minutos. Os dados reológicos indicados na Tabela 1 e a observação indicaram que o gel era típico de um gel de hilano B e era não-elástico, não-coeso e rígido. Exemplo 15 IRC de 3% com Fibras de Hilano Este Exemplo ilustra a preparação de um gel com uma IPC de 3% e uma razão de DVS:Pol de 4:17.

Fibras de hilano (sal sódico) (6,60 g) foram adicionadas a uma solução 0,2 M de NaOH (192,00 g), sob agitação mecânica rápida, e a agitação foi continuada por duas horas até dissolver. Adicionou-se DVS (1,200 mL) à solução do polímero, sob agitação mecânica. A mistura reativa foi agitada por cerca de 2 min, e depois vertida para dentro de uma travessa de vidro Pyrex® (23 x 18 x 6,5 cm) vedada com uma cobertura de plástico. A mistura reativa foi então estocada à temperatura ambiente por 4 horas, produzindo um gei, e depois transferida para um recipiente de vidro contendo solução salina neutra (3,0 L) à qual tinham sido adicionados 23,10 mL de solução 2 M de HCI. O gel foi então agitado em uma batedeira orbital à temperatura ambiente. Depois de cerca de 19 horas, a solução salina foi drenada usando uma peneira e o peso do gel (286,7 g) e o pH (2,8) foram anota- dos. O gel foi lavado novamente com solução salina neutra (3,0 L) e agitado por 4 horas em uma batedeira orbital. Depois, adicionou-se lentamente uma solução 1 M de NaOH à solução de lavagem durante o curso de várias horas, a fim de aumentar o pH do gel para 4,5-6,5. Depois de aproximadamente 21 horas, a solução de lavagem foi drenada e o peso (626,2 g) e o pH (6,8-7,5) do gel foram anotados. O gel foi então transferido para dentro de uma solução 0,01 M de PBS (3 L), e lavado por cerca de 17 horas. O rendimento final do gel foi de 761,7 g com uma FPC de 0,64%. A concentração de uma parte do material foi ajustada para 0,52% pela adição de solução PBS 0,01 M. Este material foi colocado em uma autoclave a 126°C por 10 minutos. Os dados reológicos indicados na Tabela 2 e a observação indicaram que o gel era mais macio e mais elástico e mais coeso do que o gel do Exemplo 14.

Exemplo 16 IPC de 1% com Fibras de Hilano Este Exemplo ilustra a preparação de um gel com uma IPC de 1% e uma razão de DVS:Pol de 5:1.

Fibras de hilano (sal sódico) (1,10 g) foram adicionadas a uma solução 0,1 M de NaOH (93,90 g), sob agitação mecânica rápida, e a agitação foi continuada por uma hora até dissolver. Adicionou-se DVS (5 porções de 0,850 ml_ cada uma) à solução do polímero, sob agitação mecânica rápida. A mistura reativa foi agitada por 10 minutos em alta velocidade. O béquer foi coberto e estocado à temperatura ambiente por duas horas, produzindo um gel. O gel foi então transferido para um recipiente de vidro com solução salina neutra (1,8 L). O gel foi então agitado em uma batedeira orbital à temperatura ambiente, por cerca de 24 horas. A solução de lavagem foi então drenada usando uma peneira e adicionou-se mais solução salina neutra (4,5 L). A solução de lavagem foi trocada 10 vezes (4,5 L cada uma) durante 7 dias. Uma lavagem final em solução PBS 0,01 M foi realizada para assegurar que o pH do gel fosse de 6,9 a 7,4 antes de colocar em uma autoclave. O rendimento final do gel foi de 166,1 g com uma FPC de 0,42%. Uma parte do gel foi colocada em uma autoclave a 126°C por 10 mi- nutos. Os dados reológicos indicados na Tabela 2 e a observação indicaram que o gel não era muito elástico ou coeso e era relativamente rígido.

Exemplo 17 IPC de 0.9% com Fibras de Hilano Este Exemplo ilustra a preparação de um gel com uma IPC de 0,9% e uma razão de DVS:Pol de 5:1.

Fibras de hilano (sal sódico) (1,00 g) foram adicionadas a uma solução 0,2 M de NaOH (94,00 g), sob agitação mecânica rápida, e a agitação foi continuada por uma hora até dissolver. Adicionou-se DVS (5 porções de 0,765 mL cada uma) à solução do polímero, sob agitação mecânica rápida. A mistura reativa foi agitada por 10 minutos em alta velocidade. O béquer foi coberto e estocado à temperatura ambiente por 4 horas, produzindo um gel. O gel foi então transferido para um recipiente de vidro, contendo solução salina neutra (1,8 L) à qual tinham sido adicionados 15,10 mL de solução 2 M de HCI. O gel foi então agitado em uma batedeira orbital à temperatura ambiente, por cerca de 24 horas. A solução de lavagem foi então drenada usando uma peneira, o pH foi registrado (2,3), e adicionou-se mais solução salina neutra (4,5 L) ao gel. O gel foi deixado lavando por cerca de 4,5 h e depois a solução de lavagem foi drenada. A lavagem foi continuada com solução salina neutra (4,5 L) à qual tinham sido adicionados 2,00 mL de solução 1 M de NaOH. Depois de 16 a 18 horas, a solução de lavagem foi drenada e o gel foi lavado em solução PBS 0,01 M (2 lavagens de 20,0 L cada uma) por cerca de 48 horas, para assegurar que o pH do gel de 6,9 a 7,4 antes de colocar em uma autoclave. O rendimento final do gel foi de 155,9 g com uma FPC de 0,49%. Uma parte do gel foi colocada em uma autoclave a 126°C por 10 minutos. Os dados reológicos indicados na Tabela 2 e a observação indicaram que o gel era mais macio e mais elástico do que o gel do Exemplo 16.

Exemplo 18 IPC de 19% com Fibras de Hilano Este Exemplo ilustra a preparação de um gel com uma IPC de 1% e uma razão de DVS:Po! de 1,4:1.

Fibras de hilano (sal sódico) (1,10 g) foram adicionadas a uma solução 0,1 M de NaOH (97,55 g), sob agitação mecânica rápida, e a agitação foi continuada por 1 hora até dissolver. Adicionou-se DVS (1,200 ml_) à solução do polímero, sob agitação mecânica rápida. A mistura reativa foi agitada por 10 minutos em alta velocidade, e a mistura foi transferida para um tubo de diálise. A mistura reativa foi estocada à temperatura ambiente em um recipiente fechado por duas horas, produzindo um gel. O gel foi então transferido para um recipiente de vidro, contendo solução salina neutra (3,0 L). Um vão ou espaço vazio equivalente a cerca de 10% do volume foi deixado no tubo para permitir a expansão. O gel foi então agitado em uma batedeira orbital à temperatura ambiente por 24 horas. Depois de 24 horas, o gel tinha expandido para preencher o tubo e estava exercendo uma alta pressão hidrostática sobre o tubo. O tubo foi encompridado para fornecer mais espaço vazio para o gel expandir. O gel foi lavado intensamente com solução salina neutra até que o pH atingisse 6,5-7,0. O rendimento final do gel foi de 98,9 g com uma FPC de 0,73%. A concentração de uma parte do gel foi ajustada para 0,50% com solução PBS 0,01 M, e foi colocada em uma autoclave a 126°C por 10 minutos. Os dados reológicos indicados na Tabela 2 e a observação indicaram que o gel era menos elástico, menos coeso e mais rígido do que o gel do Exemplo 19 abaixo.

Exemplo 19 IPC de 0.9% com Fibras de Hilano Este Exemplo ilustra a preparação de um gel com uma IPC de 0,9% e uma razão de DVS:Pol de 1,4:1.

Fibras de hilano (sal sódico) (1,00 g) foram adicionadas a uma solução 0,2 M de NaOH (97,74 g), sob agitação mecânica rápida, e a agitação foi continuada por duas horas até dissolver. Adicionou-se DVS (1,070 mL) à solução do polímero, sob agitação mecânica rápida. A mistura reativa foi agitada por 3 minutos em alta velocidade, e a mistura foi transferida para um tubo de diálise e estocada em um recipiente fechado à temperatura ambiente por 4 horas, produzindo um gel. O gel foi então transferido para um recipiente de vidro, contendo solução salina neutra (3,0 L) à qual tinha sido adicionada solução (15,10 mL) 2 M de HCI. Um pequeno vão ou espaço vazio de cerca de 10% do volume do tubo foi deixado para permitir a expansão. O recipiente de vidro com o gel foi então agitado em uma batedeira orbital à temperatura ambiente por 24 horas. Foi observada apenas uma expansão mínima, em contraste com o Exemplo 18. A solução de lavagem foi drenada, o pH do gel foi registrado (2,3) e realizou-se uma lavagem com solução salina neutra (4,0 L). O gel foi deixado lavando por cerca de 3 horas. Depois disso, adicionou-se uma solução 1 M de NaOH (2,60 mL) à iavagem. O gel foi lavado por mais 26,5 h e depois a solução de lavagem foi drenada. A solução de lavagem foi então trocada por uma solução PBS 0,01 M (4,0 L), para assegurar que o pH deste gel fosse de 6,9 a 7,4, antes de ser colado em uma autoclave a 126°C por 10 minutos. Observou-se apenas uma ligeira expansão, em contraste acentuado com o Exemplo 18. O rendimento final do gel foi de 89,0 g com uma FPC de 0,78%, A concentração de uma parte do material foi ajustada para 0,49% com PBS e colocada em autoclave a 126°C por 10 minutos. Os dados reológicos apresentados na Tabela 2 indicaram que o gel era mais macio, mais elástico e mais coeso do que o do Exemplo 18.

Exemplo 20 IPC de 4,0% com Hialuronato de Sódio Fermentado de Forma Bacteriana -Peso Molecular Médio Este Exemplo ilustra a preparação de um gel com uma IPC de 4% e uma razão de DVS:Pol de 1:15.

Hialuronato de sódio de peso molecular médio (4,21 g), fermentado de forma bacteriana, foi adicionado a uma solução 0,1 M de NaOH (95,54 g) sob agitação mecânica rápida que foi continuada por 120 min até a dissolução, dando uma solução do polímero com uma IPC de 4,0%. Adicionou-se lentamente à solução do polímero uma solução de DVS (0,225 mL) dissolvida em álcool isopropílico (0,750 mL), sob agitação rápida, por 2-3 minutos. A mistura da reação foi estocada à temperatura ambiente por uma hora, produzindo um gel, e depois transferida para um recipiente de vidro contendo solução salina neutra (1,8 L), e agitou-se em uma batedeira orbital à temperatura ambiente por 24 horas. A solução de lavagem foi drenada u-sando uma peneira e o gel foi então lavado com solução salina neutra (4,0 L) em uma batedeira orbital por 24 horas. O gel foi lavado intensamente com solução salina neutra até que o pH atingisse cerca de 6,5-7,0. A taxa de expansão do gel na solução salina era baixa. A solução salina foi então decantada. O rendimento final do gel foi de 562,5 g em uma FPC de 0,63%. Uma parte do material foi submetida a uma autoclave a 126°C por 10 minutos. Os dados reológicos indicados na Tabela 2 e a observação indicaram que o gel era mais rígido, menos elástico, e menos coeso do que o gel do Exemplo 6, Exemplo 21 IPC de 8,0% com Hialuronato de Sódio Fermentado de Forma Bacteriana -Peso Molecular Médio Este Exemplo ilustra a preparação de um gel com uma IPC de 8% e uma razão de DVS:Pol de 2:35.

Adicionou-se NaCI (5,85 g) a uma solução 0,2 M de NaOH (90,63 g) sob agitação, até dissolver. Hialuronato de sódio de peso molecular médio (8,40 g), fermentado de forma bacteriana, foi adicionado sob agitação mecânica rápida que foi continuada por 120 minutos até a dissolução, dando uma solução do polímero com uma IPC de 8,0%. Adicionou-se à solução do polímero uma solução de DVS (0,390 mL) dissolvida em álcool iso-propílico (0,610 mL), usando uma pipeta (5 x -0,2 mL), durante um minuto. A mistura da reação foi misturada por 2-3 min e estocada à temperatura ambiente por 4 horas, produzindo um gel. Ela foi então transferida para um recipiente de vidro contendo solução salina neutra (3,0 L) à qual tinha sido adicionada solução (21,00 mL) 2 M de HCi, e agitou-se em uma batedeira orbital à temperatura ambiente por cerca de 25 horas. A solução de lavagem foi drenada usando uma peneira e o pH do gel foi registrado (2,2), e o gel foi lavado com mais solução salina neutra (4,0 L) em uma batedeira orbital por 17 horas. O pH do gel foi ajustado lentamente para 5,0-6,5 pela adição de solução 1 M de NaOH (15,00 mL) à lavagem durante o curso de 7 dias. O gel foi então lavado com solução PBS 0,01 M (2,0 L) por cerca de 24 horas, e depois com mais solução PBS 0,01 M (4,0 L) por 7 dias, quando o pH do gel era de 7,4. O rendimento final do gel foi de 416,3 g com uma FPC de 1,73%. A concentração de uma parte do material foi ajustada para 1,5% com solução PBS 0,01 M. Uma parte de ambos materiais foi submetida a uma autoclave a 126°C por 10 minutos. Os dados reológicos indicados na Tabela 2 e a observação indicaram que o gel era muito rígido e não-elástico e não-coeso, mas podia ser (igeiramente diluído sem separação de fases.

Exemplo 22 ÍPC de 8.0% com Hialuronato de Sódio Fermentado de Forma Bacteriana -Peso Molecular Médio Este Exemplo ilustra a preparação de um gel com uma IPC de 8% e uma razão de DVS.Pol de 1:15.

Adicionou-se hialuronato de sódio de peso molecular médio (8,56 g), fermentado de forma bacteriana, a uma solução 0,1 M de NaOH (90,91 g) sob agitação mecânica rápida, que foi continuada por 120 min até a dissolução, dando uma solução do polímero com uma IPC de 8,0%. Adicionou-se DVS (0,450 mL) à solução do polímero, sob agitação rápida. A mistura da reação foi misturada em alta velocidade por 2-3 min e estocada à temperatura ambiente por duas horas, produzindo um gei. Eía foi então transferida para um recipiente de vidro contendo solução salina neutra (1,8 L), e agitada em uma batedeira orbital à temperatura ambiente por 24 horas. O gel foi lavado intensamente com porções de 4,5 L de solução salina neutra durante o curso de 9 dias, e durante este tempo observou-se que o gel estava sendo fraturado e particulado facilmente durante a etapa de lavagem. A taxa de expansão do gel em solução salina era baixa. O rendimento final do gel foi de 400,1 g com uma FPC de 1,76%. Uma parte do material foi submetida a uma autoclave a 126°C por 10 minutos. Os dados reológicos indicados na Tabela 2 e a observação indicaram que o gel era muito rígido, não-elástico e não-coeso. A concentração do material não pôde ser ajustada para baixo sem separação de fases, em comparação com o gel do Exemplo 21.

Exemplo 23 IPC de 0.75% com Hialuronato de Sódio de Alto Peso Molecular e 0,75% de 6-Sulfato de Condroitina Este Exemplo ilustra como pode ser preparado um gel no qual a IPC do hialuronato de sódio e do 6-sulfato de condroitina é de 0,75% para cada um, e a razão de DVS:hia!uronato de sódio é de 2:1.

Pode-se adicionar água desmineralizada (87,00 g) ao hialuronato de sódio de alto peso molecular (0,75 g) e 6-sulfato de condroitina (0,75 g), e a mistura é agitada mecanicamente à temperatura ambiente por cerca de 24 horas. Adiciona-se solução 1 M de NaOH (10,00 ml_) à solução misturada do polímero, à temperatura ambiente, produzindo uma solução misturada do polímero, que tem NaOH em uma concentração 0,1 Μ. A solução do polímero é agitada mecanicamente em alta velocidade por 10 minutos. Adiciona-se DVS (1,275 mL) a esta solução do polímero. A mistura reativa é agitada por aproximadamente 30 min em alta velocidade. A mistura reativa é vertida para dentro de um tubo de diálise, estocada à temperatura ambiente por 3 h, e resulta um gel. O gel é então díalisado contra solução salina 0,15 M (3,0 L), que é acidificada até um pH de cerca de 2,5, usando solução de HCI. Ele é lavado até que o pH do gel seja de cerca de 2,3 a 2,8. A solução de lavagem é então drenada e o gel é díalisado intensamente contra porções de 3,0 L de solução salina neutra até que o pH seja de cerca de 6,5. Uma lavagem final em solução PBS 0,01 M (3,0 L) é realizada para assegurar que o pH do gel seja de 7,4 antes de ser levado para uma autoclave.

Exemplo 24 IPC de 0,75% com Hialuronato de Sódio de Alto Peso Molecular e 0,75% de álcool polivinílico Este Exemplo ilustra como pode ser preparado um gel no qual a IPC do hialuronato de sódio e de álcool polivinílico é de 0,75% para cada um, e a razão de DVS:hialuronato de sódio é de 2:1.

Adiciona-se álcool polivinílico (PM -100 kDa, 0,75 g) à água desmineralizada (87,00 g) quente (60°C), e a mistura é agitada mecanicamente por cerca de duas horas. A solução polimérica é deixada resfriar até a temperatura ambiente, e depois adiciona-se hialuronato de sódio de médio peso molecular (0,75 g), sob agitação mecânica por cerca de 24 horas. Adiciona-se solução 1 M de NaOH (10,00 mL) à solução misturada do polímero, produzindo uma solução misturada do polímero, que tem NaOH em uma concentração 0,1 Μ. A solução misturada do polímero é agitada mecanicamente em alta velocidade por 10 minutos. Adiciona-se DVS (1,275 mL) a esta solução do polímero. A mistura reativa é agitada por aproximadamente 30 min em alta velocidade. A mistura reativa é vertida para dentro de um tubo de diálíse, estocada à temperatura ambiente por 3 h, e resulta um gel. O gel é então dialisado contra solução salina 0,15 M (3,0 L), que é acidificada até um pH de cerca de 2,5, usando solução de HCI. Ele é lavado até que o pH do gel seja de cerca de 2,3 a 2,8. A solução de lavagem é então drenada e o gel é dialisado intensamente contra porções de 3,0 L de solução salina neutra até que o pH seja de cerca de 6,5. Uma lavagem final em solução PBS 0,01 M (3,0 L) é realizada para assegurar que o pH do gel seja de 7,4 antes de ser levado para uma autoclave.

Exemplo 25 IRC de 0,9% com Hialuronato de Sódio de Alto Peso Molecular e 0,9% de Carbóxi-metil-ceíulose Este Exemplo ilustra como pode ser preparado um gel no qual a IPC do hialuronato de sódio e de carbóxi-metil-celulose é de 0,9% para cada um, e a razão de DVS:hialuronato de sódio é de 1,4:1.

Adiciona-se água desmineralizada (86,90 g) ao hialuronato de sódio de alto peso molecular (0,90 g) e carbóxi-metil-celulose (0,90 g), e a mistura é agitada mecanicamente à temperatura ambiente por cerca de 24 horas. Adiciona-se solução 1 M de NaOH (10,00 mL) à solução misturada do polímero, produzindo uma solução misturada do polímero, que tem NaOH em uma concentração 0,1 Μ. A solução misturada do polímero é agitada mecanicamente em alta velocidade por 10 minutos. Adiciona-se DVS (1,105 mL) a esta solução do polímero. A mistura reativa é agitada por aproximadamente 30 min em alta velocidade. A mistura reativa é vertida para dentro de um tubo de diálise, estocada à temperatura ambiente por 3 horas, e resul- ta um gel. 0 gel é então diaiisado contra solução salina 0,15 M (3,0 L), que é acidificada até um pH de cerca de 2,5, usando solução de HCI. Ele é lavado até que o pH do gel seja de cerca de 2,3 a 2,8. A solução de lavagem é então drenada e o gel é diaiisado intensamente contra porções de 3,0 L de solução salina neutra até que o pH seja de cerca de 6,5. Uma lavagem final em solução PBS 0,01 M (3,0 L) é realizada para assegurar que o pH do gel seja de 7,4 antes de ser levado para uma autoclave.

Exemplo 26 IPC de 3.0% de Hialuronato de Sódio de Médio Peso Molecular. Fermentado de Forma Bacteriana. e 1,0% de Alainato de Sódio Este Exemplo ilustra como pode ser preparado um gel com uma IPC de 4,0%, e a razão de DVS:Pol é de 1:24.

Adiciona-se lentamente hialuronato de sódio de médio peso molecular (6,0 g), fermentado de forma bacteriana, e alginato de sódio (2,00 g), a uma solução 0,2 M de NaOH (191,70 g), sob agitação mecânica rápida por cerca de 90 a 120 min, para dar uma solução do polímero com uma IPC de 3,0% de hialuronato de sódio e 1,0% de alginato de sódio. Uma solução de DVS (0,210 mL) dissolvida em álcool isopropílico (0,790 mL) é adicionada lentamente, usando uma pipeta (5 x -0,2 mL) durante um minuto, à solução do polímero. A mistura reativa é agitada por 15 min e é depois vertida para dentro de uma travessa de Pyrex® (23 x 18 x 6,6 cm) vedada com uma cobertura de plástico. A mistura reativa é estocada à temperatura ambiente por mais 225 min. O gel resultante é então transferido para um recipiente de vidro com solução salina neutra (3,0 L), contendo solução 2 M de HCI (27,80 mL), e é agitado em uma batedeira orbital à temperatura ambiente por cerca de 24 horas. A solução de lavagem é então drenada usando uma peneira, o pH é registrado (2,8) e o gel é então lavado intensamente com porções de 3,0 L de solução salina neutra em uma batedeira orbital até que o pH seja de cerca de 5,0-6,5. O gel é então lavado com PBS 0,01 M (3,0 L) por cerca de 24 horas.

Exemplo 27 Misturas de Gel Lavado em Ácido com Fármacos Solúveis em Água para Distribuição de Fármacos Podem ser adicionados a um gel do Exemplo 9 (50,00 g, FPC de 0,75%), sob condições assépticas de manuseio (capela com fluxo laminar): uma solução em PBS 0,01 M de um fármaco antiinflamatório não-esteróide, tal como diclofenaco (16,80 mL, 9 mg/mL); um anestésico local, tal como cloridrato de bupicacaína (35,00 mL, 5 mg/mL); um antineoplásico, tal como metotrexato (5,00 mL, 25 mg/mL); ou um antiarrítmico, tal como cloridrato de propanolol (5,00 mL, 25 mg/mL). O gel com fármaco é misturado em um misturador Turbular T2F em uma velocidade de 23 min"1 e à temperatura ambiente por cerca de 24 horas. A mistura é então congelada e liofilizada para dar um material semelhante a uma espuma. O gel é reconstituído até uma FPC de 0,75%, adicionando PBS 0,01 M estéril ou solução salina 0,15 M estéril (49,63 g) e misturando em um misturador Turbular T2F por cerca de 24 horas. O material pode ser esterilizado terminaimente em autoclave, caso desejado.

Exemplo 28 Misturas de Gel Lavado em Ácido com Fármacos Insolúveis em Água oara Distribuição de Fármacos Podem ser adicionados a um gel do Exemplo 9 (50,00 g, FPC de 0,75%), sob condições assépticas de manuseio (capela com fluxo laminar): uma solução de um fármaco antiinflamatório esteróide, tal como dexameta-sona (5,00 mL, 25 g/mL); um antineoplásico, tal como paclitaxel (25,00 mL, 5 mg/mL); ou um antiarrítmico, tal como amiodarona (5,00 mL, 5 mg/mL), em um solvente aprótico bipolar, tal como sulfóxido de dimetila. O gel e a solução de fármacos podem ser misturados em um misturador Turbula T2F em uma velocidade de 23 min'1 e à temperatura ambiente por cerca de 24 horas. A mistura é então colocada em um tubo de díálise e dialisada intensa-mente contra porções de 2,0 L de solução salina neutra sob condições assépticas, ou precipitada a partir de um excesso de etanol ou outro solvente miscível em água no qual o fármaco não é solúvel, e seca sob vácuo. O gel é reconstituído até uma FPC de 0,75%, adicionando PBS 0,01 M estéril ou solução salina 0,15 M estéril (49,63 g) e misturando em um misturador Tur-bular T2F por cerca de 24 horas. O material pode ser esterilizado terminal-mente em autoclave, caso desejado.

Exemplo 29 Uso de Géis Lavados com Ácido na Redução de Adesão Conduziu-se uma avaliação do potencial de redução da adesão dos Exemplos 6 e 7, usando um modelo de abrasão cecal no rato. O estudo foi realizado de acordo com as orientações descritas em "Guide for the Care and Use of Laboratory Animais", National Academic Press, 1996. O ceco foi raspado quatro vezes sobre as superfícies ventral e dorsal com um dispositivo de abrasão mecânica, que possibilita uma abrasão controlada independente do operador, sobre uma área definida, e depois devolvido para sua posição anatômica dentro da cavidade abdominal. Os animais foram designados a três grupos, um controle cirúrgico e dois grupos de tratamento, que consistem em 10 animais cada um. Cada lado do ceco nos dois grupos de tratamento recebeu 1,5 cm3 de géis preparados de acordo com os Exemplos 6 e 7, distribuído uniformemente sobre a superfície cecal, para um total de 3 cm3. O grupo de controle cirúrgico não recebeu qualquer tratamento adicional após a abrasão. No sétimo dia pós-operatório os animais foram avaliados quanto à formação de adesão por grau.

Grupo Incidência Média ± % de Animais com Média do Erro-Padrão Nenhuma Adesão Controle Cirúrgico 1,9 + 0,3 11 Exemplo 6 0,3 ± 0,2 70’ Exemplo 7 0,1 ±0,1 89 p< 0,05 versus grupo de controle - Análise da Soma de Ordens de Wilcoxon *p< 0,05 versus grupo de controle - Análise de Qui Quadrado Exemplo 30 Uso de Géis Lavados em Ácido como Viscossuplementos Conduziu-se uma avaliação da segurança da injeção intra-articular de artigos em teste que incluem os géis preparados de acordo com o Exemplo 31 nos joelhos de porquinhos-da-índia Hartley. Este é um modelo apropriado para a avaliação da segurança dentro da articulação. O estudo foi realizado de acordo com as orientações descritas em "Guide for the Care and Use of Laboratory Animais", National Academic Press, 1996. Os porqui-nhos-da-índia foram divididos em grupos de seis animais cada um, incluindo um grupo de controle. Os grupos receberam três injeções em intervalos semanais na articulação femoropatelar da esquerda posterior. Ambas patas traseiras foram avaliadas quanto à largura da articulação, usando paquíme-tros no nível da articulação (platô tibial) antes das injeções, e no primeiro dia após as injeções para cada injeção. Os animais foram avaliados também grosseiramente quanto a anormalidades da marcha. Uma análise histológica também foi conduzida para determinar qualquer inflamação dos tecidos moles da articulação. Não houve qualquer diferença entre o controle e o artigo em teste quanto às variáveis avaliadas (alcance de movimento, largura do joelho no dia da autópsia). A análise histológica não apresentou quaisquer mudanças inflamatórias ou degenerativas significativas associadas à injeção de géis dentro dos joelhos dos porquinhos-da-índia.

Exemplo 31 Hialuronato de Sódio a 5,25%, Fermentado de Forma Bacteriana - Alto Peso Molecular Este Exemplo ilustra a preparação de um gel com uma IPC de 5,25% e uma razão de DVS:Pol de 1:96. 175,4 g de NaCI foram adicionados a 2.829,6 g de uma solução 0,2 M de NaOH, e agitou-se até dissolver. Adicionou-se hialuronato de sódio de alto peso molecular (163,8 g, 5% de LOD), fermentado de forma bacteriana, à mistura, sob rápida agitação mecânica, em quatro parcelas (41,0, 41,1, 40,8 e 40,9 g) em intervalos de 20 min. A misturação continuou durante um total de 120 min. A solução do polímero resultante tinha uma IPC de 5,25%. Adicionou-se lentamente uma solução de DVS (1,38 mL de DVS e 6,52 mL de álcool isopropílico), usando uma pipeta, à solução do polímero, em quatro parcelas iguais de 2 mL, em intervalos de aproximadamente 10 segundos. Depois de aproximadamente 1 min de agitação, a mistura reativa foi vertida para dentro de uma travessa grande de polipropileno, e coberta com uma cobertura de plástico. A mistura reativa foi estocada à temperatura ambiente por 4 horas, resultando em um gel. O gel foi cortado em oito pedaços grosseiramente iguais, e depois transferido para um recipiente grande de polipropileno, contendo 44 kg de solução de cloreto de sódio 0,15 Me 850 mL de HC11 M. Os pedaços do gel foram agitados borbulhando nitrogênio filtrado através da solução, em uma vazão de aproximadamente 0,5 a 3 L/min. Depois de aproximadamente 18 horas, o pH da solução era 2,6. Depois que a lavagem ácida foi removida, o ge! pesava 5.973,0 g. Depois disso, 75 kg de solução salina neutra foram adicionados ao gel, e o gel foi agitado adicionalmente com nitrogênio por 4 horas. 94,2 g de solução 1 M de hidróxido de sódio foram então adicionados três vezes à solução em 4, 6 e 8 horas depois do início da lavagem. O gel foi lavado por um total de 24 horas. Depois disso, a solução de lavagem foi drenada, e o gel pesou 11.247,6 g, A solução de lavagem foi então trocada por solução PBS 10 mM (41 kg), e o gel foi agitado ainda mais por 16 horas. A solução de lavagem foi então drenada e o gel foi pesado (13.783,6 g). A FPC do gel no final de todas etapas de lavagem era de 1,07%. Este material foi homogeneizado usando uma peneira 20 mesh. Os dados reológicos estão indicados na Tabela 3.

Exemplo 32 Solução de Hialuronato de Sódio a 1,0-1,25% Este Exemplo ilustra a preparação de uma solução de hialuronato de sódio a 1,0-1,25%. 40,5 g de hialuronato de sódio de alto peso molecular (HA) em pó foram colocados dentro de uma bolsa Biopak® de 5 L esterilizada. 3.420,0 g de soiução salina tamponada com fosfato 10 mM foram adicionados ao hialuronato de sódio usando um filtro esterilizante no ponto de uso de 0,22 pm, colocado entre a bomba e a bolsa Biopak®. A bolsa foi selada e o conteúdo foi agitado à temperatura ambiente sobre uma mesa de ondulação em uma velocidade de 25 a 35 rpm por 6 dias. Os dados reológicos para esta solução estão indicados na Tabela 3.

Exemplo 33 Mistura Gel-Fluido 8:20 (o/p) (Hvlastan SGL-80) Este Exemplo ilustra a preparação de Hylastan SGL-80. 11.200 g do gel preparado como descrito no Exemplo 31 e 2.800 g de solução de hialuronato de sódio ("fluido”) preparado como descrito no Exemplo 32 foram colocados dentro de um recipiente de vidro de 18 L esterilizado. O recipiente foi tampado e agitado por 68 horas em um misturador Inversina® a 25-35 rpm à temperatura ambiente. A mistura gel-fluido foi então carregada dentro de seringas de vidro de 5 cm3, que foram então colocadas em uma autoclave a 131 °C por 2,5 min. Os dados reológicos da mistura resultante estão indicados na Tabela 3.

Exemplo 34 IPC de 10% com Hialuronato de Sódio Fermentado de Forma Bacteriana -Baixo Peso Molecular Os Exemplos 34 e 35 ilustram a preparação de um gel apropriado para uso como um enchimento dérmico. Geralmente, tais géis são preparados a partir de hialuronano (como por exemplo, hialuronato de sódio fermentado de forma bacteriana) reticulado com DVS, como descrito nos e-xemplos acima. Tipicamente, os géis para enchimento dérmico têm as seguintes características: (a) IPC 8-12%, de preferência 10-12%; (b) Peso Molecular do Ácido Hialurônico 500-2.500 kDa, de preferência 500-600 kDa; (c) Razão DVS:Pol entre 1:200 e 1:15, de preferência entre 1:100 e 1:15, como por exemplo, 1:50, 1:60; (d) FPC cerca de 1% a 2,5%. Os géis podem ser lavados até o equilíbrio ou de outra forma. De preferência, os géis podem ser lavados em ácido, mas, alternativamente, podem ser lavados em solução salina neutra.

Este Exemplo ilustra a preparação de um gel com uma IPC de cerca de 10% e uma razão DVS:Pol de 1:60. 117,1 g de NaCI foram adicionados a 891,4 g de uma solução 0,2 M de NaOH, e agitou-se até dissolver. 107,0 g de hialuronato de sódio de baixo peso molecular (500-600 kDa), fermentado de forma bacteriana, foram então adicionados à mistura, sob agitação mecânica rápida, continu- ando a agitação por 120 min. A solução do polímero resultante tinha uma IPC de aproximadamente 10%. Depois, adicionou-se lentamente uma solução de DVS (1,42 mL de DVS e 3,6 mL de álcool isopropílico) à solução do polímero, usando uma pipeta (5 x ~1mL) durante cerca de 1 min. Depois de outros 2 min de agitação, a mistura reativa foi vertida para dentro de travessas de Pyrex® (23 x 28 x 6,5 cm) e selada com coberturas de plástico. A mistura reativa foi estocada à temperatura ambiente por 4 horas, resultando em um gel. O gel foi então transferido para um recipiente de plástico, contendo 30 kg de solução salina neutra e 50 mL de HC11 Μ. O gel foi agitado à temperatura ambiente borbulhando lentamente nitrogênio através da lavagem por 18 horas, quando o pH da lavagem era 2,36. Depois de removida a lavagem ácida, o peso do gel era de 1.897,3 g, 30 kg de solução salina neutra foram adicionados ao recipiente, e o gel foi agitado adicíonalmente à temperatura ambiente, borbulhando nitrogênio por mais 5 horas, quando o pH da solução de lavagem era de 3,34, e adicionou-se 150 mL de solução 0,2 M de hidróxido de sódio. 17 horas depois, o pH da lavagem era de 3,34 e foram adicionados mais 200 mL adicionais de solução 0,2 M de hidróxido de sódio. Mais 200 mL de solução 0,2 M de hidróxido de sódio foram adicionados 7 horas depois. Depois de agitar o gel por mais 17 horas, o pH da lavagem media 4,30 e foram adicionados mais 130 mL de solução 0,2 M de hidróxido de sódio. O gel foi agitado por 25 horas, quando o pH media 10,35. Depois de descartada a lavagem, o gel pesava 6.690,8 g. 30 kg de solução PBS 0,01 M foram adicionados ao gel, e o gel foi lavado por 24 horas. Após a lavagem com PBS, o pH do gel media 7,31 e o peso do gel era de 6.916,5 g. A lavagem foi descartada e o gel foi lavado novamente por 24 horas com 30 kg de solução PBS 0,01 M. Depois de descartada a lavagem final, o gel pesava 6.956,6 g e tinha uma FPC média de 1,17%. Este material foi homogeneizado usando peneiras de 20, 40, 60 e 60 mesh e submetendo a uma autoclave a 126°C por 10 minutos. Os dados reológicos deste gel estão indicados na Tabela 3.

Exemplo 35 Hiaturonato de Sódio a 12% Fermentado de Forma Bacteriaria - Enchimento Dérmico 23,4 g de NaCI foram adicionados a 168,9 g de solução 0,2 M de NaOH, e agitou-se até dissolver. Adicionou-se hialuronato de sódio de baixo peso molecular (500-600 kDa) fermentado de forma bacteriana (29,4 g) à solução, sob agitação mecânica rápida, que foi continuada por um total de 120 minutos. A solução do polímero resultante tinha uma IPC de aproximadamente 12%. 2 mL de uma solução de DVS (0,41 mL de DVS dissolvida em 1,6 mL de álcool isoproptlico) foram adicionados ientamente por intermédio de uma pipeta (5 x -0,4 mL) durante cerca de 30 segundos. Depois de mais 2 minutos de agitação, a mistura reativa foi vertida para dentro de uma travessa de Pyrex® (23 x 28 x 6,5 cm), vedada com uma cobertura de plástico, e estocada à temperatura ambiente por 4 horas, resultando em um gel. O gel foi transferido para um recipiente de plástico contendo 3 kg de solução salina neutra misturada com 100,1 g de HCl 1 Μ. O gel foi agitado em uma batedeira orbital à temperatura ambiente por 24 horas. O pH da solução era de 2,28. Depois de descartar a solução de lavagem, o gel pesava 416,2 g. Foram adicionados 6 L de solução salina neutra ao gel, e o gel foi agitado por 18 h. Parcelas de 9,7 mL de solução 1 M de hidróxido de sódio foram adicionadas à solução em 0, 2, 4, 6 e 8 horas. O gel foi agitado por 24 horas. O pH depois da lavagem media 6,65. A solução de lavagem foi descartada, e o gei foi estocado a 2-8°C por 120 horas. A solução de lavagem foi então trocada por solução PBS 0,01 M (2 L) e o gel foi agitado por mais 21 horas, quando a solução de lavagem foi descartada. Nesta hora, o gel pesava 1.036,2 g. A FPC deste gel era 2,4%. Este material foi homogeneizado usando peneiras de 20, 40, 60, 40, 60, 100 e 200 mesh e submetendo a uma autoclave a 126°C por 10 minutos. Os dados reológicos deste material estão indicados na Tabela 3.

Exemplo 36 Géis Baseados em Polímeros de Peso Molecular Ultrabaixo Soluções de HA com peso molecular ultrabaixo (< 500 kDa) fo- ram preparadas em solução 0,2 N de NaOH, como descrito nos exemplos acima, A viscosidade foi medida com um reômetro Bohlin C-VOR em uma velocidade de cisalhamento de 1 s'1. A relação entre o peso molecular de HA e 1/lPC para um valor fixo da viscosidade é função diretamente proporcional, como indicado na Figura 4. Portanto, espera-se que para tingir a viscosidade, a elasticidade e a maciez desejadas, as razões de DVS.Pol para os géis preparados a partir de peso molecular ultrabaixo ficam na faixa entre cerca de 0,0025 e cerca de 20, como por exemplo, cerca de 0,05 a cerca de 20, 0,01 a cerca de 20, dependendo da IPC e do peso molecular do polímero.

Tabela 1 - Reoloaia de Gel lavado com ácido Exemplo IPC% FPC% Fonte de DVS:Pol G* Pa 5o Defor- η Pas (cicloda auto- p/p (1Hz) nação <s’) clave) polímero 1 0,75 0,72 MMWBac 2:1 21,6 28 7,5 40 (131°C 10 min) 4 59 2,9 1,3 2 0,5 0,45 Hilano 4:1 10,6 29,4 16 28 (131°C 10min) 2,8 52,1 2,2 1,1 3 0,38 0,35 Hilano 6:1 5,2 31 14,6 13 (131°C 10min) 2,2 49 2,5 0,7 4 0,25 - Hilano 8:1 G’ 24 (5Hz)9 (5Hz) 5 0,15 - Hilano 17,7:1 - - - 6 4,0 0,81 MMWBac 1:17 52 10 0,74 90 (126°C 10min) 18 23 6,3 56 7 4,8 0,53 MMWBac 1:48 33 22 2,5 68 (121°C 15min) 21 27 9,3 50 8 4,8 0,73 HMWBac 1:96 38 11 1,4 55 126°C 10min 26 15 2 45 9 5,6 0,75 HMWBac 1:48 137 2,5 0,2 70 126®C 10min 107 2,6 0,3 63 10 5,6 0,74 HMWBac 1:96 81 5,4 0,5 76 126°C 10min 54 7,3 0,8 71 11 6,0 0,68 HMWBac 1:48 109 8 0,1 36 126°C 10min 73 9 0,1 21 12 6,0 0,74 HMWBac 1:96 94 3 0,4 58 126°C 10min 66 3,6 0,5 53 13 8,0 0,81 MMWBac 1:100 97,6 19 0,04 11 126°C 10min 111 6 0,06 9 Tabela 2 -Comparação da Reoloqia de Géis após Lavagem Ácida e Neutra Exemplo IPC FPC DVS:PoI G*Pa Defor- η Pas (ciclo da % % Tipo de Gel P/p (1Hz) (1Hz) maçáo (Is'1) autoclave) 14 3,0 0,49 lavagem neutra 1:4,25 141 8 0,04 16 (126°C 10 min) 131 5 0,06 14 15 3,0 0,52 lavagem ácida 1:4,25 115 4,8 0,08 22 (126°C 10 min) 82 4,6 0,1 15 16 1,0 0,42 lavagem neutra 5:1 126 1,7 0,3 68 (126°C 10 min) 65 3,4 0,3 40 17 0,9 0,49 lavagem ácida 5:1 47 2,4 0,3 54,5 (126°C 10 min) 28 5 1,4 43 18 1,0 0,50 lavagem neutra 1,4:1 23 6,5 0,5 48 (126°C 10 min) 47 13 1,4 39 19 0,9 0,49 lavagem ácida 1,4:1 11 25 8 22 (126°C 10 min) 2,4 46 20 3 6 4,0 0,81 lavagem ácida 1:17 52 10 0,74 90 (126°C 10 min) 18 23 6,3 56 20 4,0 0,83 lavagem neutra 1:15 149 4 0,1 26 (126°C 10 min) 195 4 0,1 21 21 (a) 8,0 1,73 lavagem ácida 1:17,5 1894 6 0,01 60 (126°C 10 min) 1892 5 0,02 68 21 (b) 8,0 1,50 lavagem ácida 1:17,5 1233 14 0,02 36 (126°C10min) 902 9 0,01 31 22 8,0 1,76 lavagem neutra 1:15 2030 6 0,02 67 (126°C 10 min) 1870 6 0,04 80 Tabela 3 - Propriedades Reolóqicas de Géis e Suspensões de Géis Exemplo G’ Pa (5 Hz) δ (°) η Pas (1 s‘1) 31 84 20 32 47 33 102 17 98 34 967 8 35 3079* (Ί Hz) 12 185 Tabela 4 - Viscosidade de Soluções de HA de Peso Molecular Ultrabaixo com Várias IPCs e Pesos Moleculares MW (kDa) 1PC (% em peso) η Pas (1 s'1) 15 50 20 60 35 54 130 29 74 500 11 730 REIVINDICAÇÕES

Claims

1. Processo para preparar um gel coeso, caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de: (a) disponibilizar uma solução de pelo menos um polímero de partida (Pol) que compreende um hialuronano, um hilano, ou uma mistura dos mesmos, em uma concentração inicial de polímero (IPC) de 0,25% em peso a 50% em peso; (b) submeter o polímero de partida a uma reação com divinil-sulfona (DVS), para formar um gel reticulado; e (c) lavar o gel reticulado formado na etapa (b) com uma solução aquosa que tem um pH < 4.

2. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a IPC é de 0,25% em peso a 8% em peso.

3. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a IPC é de 3,% em peso a 10% em peso.

4. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a IPC é de 3% em peso a 15% em peso.

5. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que na etapa (c) o gel é lavado até um pH de 2,0 a 3,0.

6. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende ainda a etapa de ajustar o pH do gel de < 4 até pH fisiológico.

7. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende ainda a etapa de ajustar o pH do gel de < 4 até cerca de 4,5 a 6,5.

8. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a etapa b é conduzida em um pH > 9.

9. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a etapa b é deixada prosseguir por < 24 horas.

10. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o peso molecular médio (PM) do polímero de partida é selecionado entre 0,5 MDa e 4 MDa.

11. Processo, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que um dos polímeros de partida é um hialuronano.

12. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o peso molecular médio (PM) do polímero de partida é selecionado de 30 kDa a 500 kDa.

13. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a razão de divinil-sulfona para o polímero (DVS:Pol) (p:p) é selecionada de 0,0025 a 17,7.

14. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a razão de divinil-sulfona para o polímero (DVS:Pol) (p:p) é selecionada de 0,01 a 17,7.

15. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o peso molecular médio do polímero de partida é selecionado de 0,5 MDa a 4 MDa, e a razão de DVS:Pol (p:p) é selecionada de 0,01 a 17,7.

16. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende um gel preparado de acordo com o processo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 15.

17. Gel coeso, caracterizado pelo fato de que tem um teor de hialuronano de 8,25 ± 1,75 mg/mL, uma viscosidade sob cisalhamento (a 200 Hz) de 30-100 Pas, um módulo de estocagem (a 5 Hz) de 20-150 Pa, e um ângulo de fase (a 5 Hz) menor do que 35°.

18. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende um componente gel e um componente fluido, cada componente compreendendo HA fermentado por bactéria, em que os componentes são misturados em uma razão de cerca de 80:20 em peso (gekfluido) e o teor total de HA é de 10,5 ± 2,5 mg/mL.

19. Composição, de acordo com a reivindicação 18, caracterizada pelo fato de que possui uma viscosidade sob cisalhamento (a 200 Hz) de 30-100 Pas, um módulo de estocagem (a 5 Hz) de 20-150 Pa, e um ângulo de fase (a 5 Hz) menor do que 35°.

20. Dispositivo ou composição farmacêutica, caracterizado pelo fato de que é fabricado pelo processo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 15.

21. Dispositivo ou composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que compreende ainda um material biologicamente ativo selecionado no grupo que consiste em um fárma-co, uma proteína, um DNA, uma vitamina, ou células.