KR20220013588A - 잔주름 치료를 위한 진피 필러 조성물 - Google Patents

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가브리엘 엔. 엔지강
시아오지에 유
푸티엔 리우
써밋 팔리왈
니콜라스 제이. 마네시스
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알러간, 인코포레이티드
써밋 팔리왈
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Abstract

본 발명은 얼굴의 잔주름의 보정에 특히 유리한 고도로 주사용이고, 장기간 지속적인 하이알루론산계 하이드로겔 진피 필러 조성물을 제공한다.

Description

잔주름 치료를 위한 진피 필러 조성물{DERMAL FILLER COMPOSITIONS FOR FINE LINE TREATMENT}
관련 출원
본 출원은 2011년 9월 14일 출원된 미국 가특허 출원 제61/534,780호의 우선권 및 이익을 주장하며, 이는 2012년 6월 1일 출원된 미국 특허 출원 제13/486,754호의 부분계속출원이며, 2011년 6월 3일 출원된 미국 가특허출원 제61/493,309호의 우선권 및 이익을 주장하는, 2012년 8월 23일 출원된 미국 특허 출원 제13/593,313호의 부분계속출원이고, 이들 기초출원 각각의 전문의 개시내용은 그것의 전문이 이 구체적 참조로서 본 명세서에 포함된다.
본 발명의 기술분야
본 발명은 일반적으로 진피 필러 조성물, 및 더 구체적으로는 피부 내 잔주름의 치료에 효과적인 주사용 진피 필러 조성물에 관한 것이다.
피부 노화는 진행형인 현상이며, 시간에 걸쳐 일어나고, 알코올 소비, 담배 및 태양광 노출과 같은 생활방식 인자에 의해 영향받을 수 있다. 얼굴 피부의 노화는 위축, 늘어짐 및 비후를 특징으로 할 수 있다. 위축은 피부 조직 두께의 거대한 감소에 대응된다. 피하 조직의 늘어짐은 과량의 피부 및 눈꺼풀 처짐을 야기하며, 볼 및 눈꺼풀의 처짐을 야기한다. 비후는 얼굴 하부 및 목의 팽창에 의한 과도한 체중 증가를 지칭한다. 이들 변화는 전형적으로 건조, 탄력 상실 및 거친 질감과 관련된다.
하이알루로난으로도 알려진 하이알루론산(hyaluronic acid: HA)은 관절, 상피, 및 신경 조직에서 인간 신체 전체적으로 넓게 분포되는 비황산화 글라이코사미노글라이칸이다. 하이알루론산은, 예를 들어 양호한 수화를 보장하고, 세포외 기질의 조직화를 도우며, 필러 물질로서 작용하고; 조직 손상 메커니즘에 참여하는 것과 같은 다양한 작용을 갖는 경우, 상이한 층의 피부 내에서 흔하다. 그러나, 연령에 따라, 피부 내 존재하는 하이알루론산, 콜라겐, 엘라스틴 및 다른 기질 중합체의 양은 감소된다. 예를 들어, 태양광과 같은 자외선에 반복된 노출은 진피 세포가 하이알루로난의 생성을 감소시키게 할 뿐만 아니라 그것의 분해 속도를 증가시키도록 야기한다. 물질의 이런 손실은, 예를 들어 주름, 푹 꺼짐(hollowness), 수분 손실 및 노화의 외관에 기여하는 다른 원치않는 병태와 같은 다양한 피부 병태를 초래한다.
주사용 진피 필러는 노화된 피부를 치료하는데 성공적으로 사용되었다. 이런 피부 병태를 치료하기 위해 필러는 상실된 내인성 기질 중합체를 대체할 수 있거나, 또는 존재하는 기질 중합체의 기능을 향상시키고/촉진시킨다. 하이알루론산-계 진피 필러는 점점 더 인기가 있게 되었는데, 하이알루론산은 인체 전체에서 자연적으로 발견되는 물질이기 때문이다. 이들 필러는 일반적으로 잘 용인되며, 비영구이고, 매우 다양한 피부 병태에 대해 상당히 저위험인 치료이다.
틴들 효과(Tyndall effect)는 하이알루론산(HA)계 진피 필러가 투여된 일부 환자에서 생기는 부작용이다. 틴들 효과는 진피 필러가 주사된 피부 부위에서 푸른 변색의 출현을 특징으로 하는데, 이는 반투명 표피를 통해 보이는 가시적인 하이알루론산을 나타낸다. 임상적 보고는 필러 투여 기법 및 피부 특성이 이 부작용의 징후에 영향을 미칠 수 있다는 것을 시사한다. 높은 경직 및 탄성을 지니는 필러는 얼굴 변색의 어떤 두려움 없이 팔자주름, 볼, 및 턱과 같은 얼굴 상의 정확한 영역에 성공적으로 사용되는데, 이 물질은 중간 및 깊은 진피 영역에 주사되기 때문이다. 그러나, 이들 필러 물질이, 예를 들어 눈물고랑, 미간주름 눈가주름, 웃음 주름 또는 이마에서 깊지 않은 잔주름 주름살(wrinkle)을 고치기 위해 사용되거나, 또는 실수로 진피의 상부 영역에서 너무 깊지 않게 적용될 때, 피부의 푸르스름한 변색이 종종 관찰된다. 틴들 효과의 결과로 생각되는 이 현상은 적용 부위의 반영구적 변색을 남기며, 때때로 필러 물질을 분해시키기 위한 하이알루로니다제의 투여 후에만 사라진다. 결과적으로, 틴들 효과는 깊지 않은 잔주름에 대해 치료되는 환자에서 더 흔하다. 전형적으로 7개월 동안만큼 겔이 피부에서 지속되는 틴들 효과의 장기적인 징후는 환자에서 주된 걱정의 원인이다.
HA-계 진피 필러 겔은 눈물고랑, 이마, 눈가주름, 미간주름 등 주위에서 발견되는 "잔주름" 주름살을 치료하기 위해 특별하게 제형화되었다. 상업적으로 입수가능한 HA "잔주름" 겔은 쥬비덤 리파인(Juvederm Refine)(G' ~67 Pa; G"/G' ~0.59, HA 농도 18㎎/㎖), 벨로테로 소프트(Belotero Soft)(G' ~28 Pa; G"/G' ~1.1, HA 농도 20㎎/㎖), 에머벨 터치(Emervel Touch)(G' ~56 Pa; G"/G' ~0.64, HA 농도 20㎎/㎖), 스타일에이지 에스(Stylage S)(G' ~192 Pa; G"/G' ~0.20, HA 농도 16㎎/㎖), 테오시알 퍼스트 라인(Teosyal First Lines)(G' 59 Pa; G"/G' ~0.53, HA 농도 20㎎/㎖), 레스틸렌 터치(Restylane Touch)(G' ~489 Pa; G"/G' ~0.24, HA 농도 18㎎/㎖)를 포함한다. 이들 겔은, 예를 들어 소량의 가교제와 선형 HA 쇄를 가볍게 가교시킴으로써 및/또는 이들 겔의 최종 HA 농도를 감소시킴으로써 낮은 탄성률을 갖도록 제형화되지만, 대부분의 상업적으로 입수가능한 "잔주름" 겔은, 특히 깊지 않게, 예를 들어 약 1㎜ 미만의 깊이에서 주사될 때 여전히 일부 환자에서 틴들 효과를 나타낸다.
콜라겐계겔은 깊지 않은 주름살의 치료에 사용될 수 있으며, 틴들효과를 야기하는 것으로 나타나지 않았다. 콜라겐계 겔은 그것이 피부에서 상대적으로 불량한 지속기간을 가지며, 개체에서 사전시험을 필요로 하기 때문에 고도로 선호되지 않는다. 래디어스(Radiesse)(등록상표)(칼슘 하이드록시아파타이트)는 피하에 주사가능한 이식물이며, 이것의 원칙적 성분은 하이알루론산이 아닌 합성 칼슘 하이드록시아파타이트이다. 하이알루론산계 진피 필러와 달리, 칼슘 하이드록시아파타이트는 투명하지 않으며, 따라서 틴들효과의 문제를 회피한다. 그러나, 너무 깊지 않게 놓인다면, 이 필러는 피부 바로 밑에서 백색 물질로서 보일 수 있다. 더 나아가, 하이알루론산계 필러에 비해, 래디어스(Radiesse)(등록상표)는 주사를 위해 더 큰 바늘을 필요로 하며, 전형적으로 눈 영역에서 사용에 대해 권고되지 않는다.
깊지 않게 주사될 때조차 틴들 효과에 기인하는 푸르스름한 변색을 나타내지 않는 주사용 하이알루론산계 진피 필러를 제공하는 것이 바람직하다.
미국특허출원공개 제2011/0171286호 (2011.07.14)
미국특허출원공개 제2011/0171311호 (2011.07.14)
Park, D.J. et al. 2010, Orthopaedic Proceedings, Vol. 92-B, No. SUPP I
본 발명은 피부의 어떤 푸르스름한 변색 또는 적어도 유의하거나 또는 주목할 만한 푸르스름한 변색을 생성하는 일 없이 상부 진피에 투여될 수 있는 HA계 진피 필러를 제조하기 위한 조성물 및 제형화 방법을 기재한다. 추가로, 본 발명의 현재 기재된 필러 겔 중 다수는 현재 상업적으로 입수가능한 겔 보다 생체내에서 유의하게 더 오래 지속되는 것으로 발견되었다. 본 발명의 일부 양태에서, 피부의 외관을 향상시키는데 유용한 광학적으로 투명한 진피 필러가 제공되는데, 이는 볼륨과 풍만함을 더하며, "틴들링" 없이 일정한 잔주름 주름살의 외관을 감소시킨다. 본 조성물은 다수의 통상적인 광학적으로 투명한 진피 필러와 관련된 부정적인 푸른 변색을 야기하는 일 없이 피부 내 잔주름에, 심지어 얇은 피부 영역에서도, 오히려 깊지 않게, 도입될 수 있다.
더 구체적으로는, 본 발명의 일 양태에서, 일반적으로 생체에 적합한 중합체, 예를 들어, 가교된 하이알루론산 성분 및 하이알루론산 성분과 조합된 첨가제를 포함하는, 장시간 지속되는 치료적 진피 필러 조성물이 제공된다.
일 실시형태에서, 중합체는 다당류, 예를 들어, 하이알루론산이다. 하이알루론산은 가교 성분을 포함하고, 추가로 비가교 성분을 포함할 수 있다. 첨가제는 비타민, 예를 들어, 비타민 C, 예를 들어, 비타민 C의 안정화된 형태 또는 비타민 C 유도체, 예를 들어, L-아스콜브산 2-글루코사이드(AA2G), 아스코빌 3-아미노프로필 포스페이트(비타겐(Vitagen)) 또는 나트륨 아스코빌 포스페이트(AA2P)를 포함할 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 첨가제는 적합한 반응 과정, 예를 들어 에터화, 아미드화 또는 에스터화에 의해 중합체에 공유적으로 컨쥬게이트된 비타민 유도체이다.
본 발명의 넓은 양태에서, 진피 필러 조성물이 제공되되, 해당 조성물은 가교 성분과 가교된 하이알루론산 성분, 및 가교 성분 이외의 첨가제를 포함한다. 하이알루론산 성분은 첨가제에 화학적으로 컨쥬게이트될 수 있다. 추가로, 조성물은 첨가제가 없는 것을 제외하고 실질적으로 동일한 조성물에 대해, 환자의 진피 영역에 투여될 때 감소된 틴들 효과를 나타낸다. 조성물은 다른 첨가제, 예를 들어 리도카인과 같은 마취제를 추가로 포함할 수 있다. 일 실시형태에서, 첨가제는 비타민 C 유도체, 예를 들어, AA2G이다. 다른 실시형태에서, 첨가제는 비타겐(Vitagen)이다.
일 실시형태에서, 하이알루론산 성분은 약 3㏖% 내지 약 40㏖, 예를 들어, 약 3㏖% 내지 약 10㏖%의 컨쥬게이션 정도를 지니는 첨가제에 화학적으로 컨쥬게이트된다.
조성물을 실질적으로 광학적으로 투명할 수 있다. 조성물을 일반적으로 약 40㎩ 내지 약 100㎩, 예를 들어, 약 100㎩ 이하 및, 예를 들어, 약 40㎩ 이상의 G' 값을 가진다.
본 발명의 다른 양태에서, 환자의 피부에서 잔주름을 치료하는 방법이 제공된다. 일 실시형태에서, 해당 방법은 환자의 피부 내로 하이알루론산 성분, 하이알루론산을 가교시키는 가교 성분 및 가교 성분 이외의 첨가제를 포함하는 조성물을 도입하는 단계를 포함하며, 조성물을 실질적으로 광학적으로 투명하되, 조성물은 첨가제가 없는 것을 제외하고 실질적으로 동일한 조성물에 대해, 환자의 진피 영역에 투여될 때 감소된 틴들 효과를 나타낸다.
본 발명의 다른 양태에서, 얼굴의외관을 개선시키는 방법이 제공되며, 해당 방법은 일반적으로 환자의 진피 영역에 틴들 효과를 나타내지 않거나 또는 유의하지 않게 나타내는 실질적으로 광학적으로 투명한 진피 필러를 투여하는 단계를 포함한다. 조성물은 하이알루론산을 제공하는 단계, 가교제를 비타민 C 유도체와 반응시키는 단계, 반응된 가교제 및 비타민 C 유도체를 하이알루론산에 첨가하여 공유적으로 컨쥬게이트된 비타민 C를 포함하는 가교된 하이알루론산 조성물을 형성하는 단계; 및 가교된 하이알루론산 조성물을 균질화하고, 중화시켜, 주사용 진피 필러 조성물을 얻는 단계로 구성될 수 있다. 일부 실시형태에서, 비타민 C 유도체는 AA2G이다. 다른 실시형태에서, 비타민 C 유도체는 비타겐이다.
본 발명의 또 다른 양태에서, 환자의 얇은 피부 영역에서 잔주름의 외관을 감소시키는 방법이 제공되되, 해당 방법은 일반적으로 진피 필러 조성물, 즉, 비타민 C 또는 비타민 C 유도체를 포함하는 실질적으로 광학적으로 투명한 하이알루론산계 진피 필러 조성물을 약 1㎜ 이하의 깊이에서 환자에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 조성물은 약 0.8㎜ 이하, 약 0.6㎜ 이하 또는 약 0.4㎜ 이하 깊이에서 주사된다.
본 발명의 또 다른 양태에서, 실질적으로 광학적으로 투명하고, 일반적으로 가교 성분과 가교된 하이알루론산 성분 및 하이알루론산 성분과 공유적으로 컨쥬게이트된 비타민 C 유도체를 포함하는 진피 필러 조성물이 제공된다. 예시적인 실시형태에서, 조성물은 약 40㎩ 내지 약 100㎩의 G'값을 가진다. 추가로, 조성물은 약 18㎎/g 내지 약 30㎎/g의 하이알루론산 농도를 가질 수 있다. 이들 조성물은 피부에서, 예를 들어 매우 얇은 피부, 예를 들어 약 1㎜ 이하 두께를 갖는 피부에서조차 잔주름 또는 깊지 않은 주름선(crease)을 치료하는데 특히 유용하고, 효과적일 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 조성물은 피부에 도입된 후 적어도 3개월, 적어도 6개월 또는 1년까지 지속된다.
본 발명의 이들 및 다른 양태는 다음의 도면 및 상세한 설명을 참조로 하여 더 용이하게 이해되고, 인식될 수 있다.
도 1은 L-아스콜브산 2-글루코사이드(AA2G)의 구조를 도시한 도면;
도 2는 아스코빌 3-아미노프로필 포스페이트(비타겐)의 구조를 도시한 도면;
도 3은 나트륨 아스코빌 포스페이트(AA2P)의 구조를 도시한 도면;
도 4는 1,4-뷰탄다이올 다이글라이시딜 에터(BDDE)의 구조를 도시한 도면;
도 5는 펜타에리트리톨 글라이시달 에터(스타-PEG 에폭사이드)의 구조를 도시한 도면;
도 6은 펜타에리트리톨 (3-아미노프로필) 에터(스타-PEG 아민)의 구조를 도시한 도면;
도 7은 본 발명에 따른 다양한 진피 필러 조성물에 대한 컨쥬게이션 정도 및 G' 값을 나타내는 표를 도시한 도면;
도 8은 본 발명에 따른 HA-AA2G(BDDE) 진피 필러 조성물에 대한 컨쥬게이션 정도, HA 농도 및 G' 값을 나타내는 표를 도시한 도면;
도 9는 4가지 상이한 α-글루코시다제 농도에 대해 시간(분)에 대한 PBS 중의 AA2G의 용액으로부터 AsA의 관찰된 방출 백분율의 그래프 표현을 도시한 도면;
도 10은 본 발명에 따른 컨쥬게이트된 진피 필러로부터 유리 AsA의 방출 프로파일(지속방출)의 표현(㏖% 대 반응시간에서 AA2G 전환)을 도시한 도면;
도 11a 및 도 11b는 본 발명에 따른 다양한 진피 필러에 대한 추가적인 방출 데이터를 도시한 도면;
도 12는 잔주름 적용을 위한 본 발명의 HA계 진피 필러 겔 및 일부 상업적으로 입수가능한 겔의 깊지 않은 주사 후 피부의 영상을 도시한 도면;
도 13은 잔주름 적용을 위한 본 발명의 HA계 진피 필러 겔 및 특정 상업적으로 입수가능한 겔의 시각적 틴들 스코어를 도시한 도면;
도 14는 잔주름 적용을 위한 본 발명의 HA계 진피 필러 겔 및 일부 상업적으로 입수가능한 겔의 피부로부터 방출된 청색광의 %를 도시한 도면;
도 15는 잔주름 적용을 위한 본 발명의 HA계 진피 필러 겔 및 일부 상업적으로 입수가능한 겔의 이식 1주 후 남아있는 겔의 전반적인 %를 도시한 도면;
도 16은 잔주름 적용을 위한 본 발명의 이식된 HA계 진피 필러 겔 및 일부 상업적으로 입수가능한 겔의 제0주, 제12주, 제24주 및 제40주에 남아있는 겔의 전반적인 %를 도시한 도면.
본 발명의 일 양태에서, 진피 필러 조성물이 제공되되, 조성물은 일반적으로 생체에 적합한 중합체, 예를 들어, 다당류, 예컨대 가교된 하이알루론산, 및 중합체에 공유적으로 컨쥬게이트된 비타민 C 유도체를 포함한다. 조성물은 피부 자가콜라겐형성(neocollagenesis)뿐만 아니라 다른 치료적 또는 미용적 이점을 위한 비타민 C의 지속 방출을 제공한다. 피부에, 예를 들어 진피 내로 도입되었을 때, 조성물은 신체 내 내인성 효소와 반응하고, 시간에 따라, 생활성 비타민 C가 효소적 절단을 통해 생체내에서 만들어진다. 비타민 C는 몇 주 또는 몇 개월의 기간에 걸쳐 조성물로부터 방출되기 때문에, 그것의 수반되는 이점은 신체에 대해 이용가능하게 만들어진다.
중합체는 단백질, 펩타이드 및 폴리펩타이드, 폴리리신, 콜라겐, 프로-콜라겐, 엘라스틴 및 라미닌으로 이루어진 중합체의 군으로부터 선택될 수 있다.
중합체는 하이드록실, 아민, 및 카복실 작용기를 지니는 합성 중합체: 폴리(비닐 알코올), 폴리에틸렌 글라이콜, 폴리비닐일 아민, 폴리알릴아민, 데아세틸화된 폴리아크릴아마이드, 폴리아크릴산 및 폴리메타크릴산으로 이루어진 중합체의 군으로부터 선택될 수 있다. 중합체는 수지상 폴리올 및 수지상 폴리아민을 포함하는 수지상 또는 분지형 중합체로 이루어진 중합체의 군으로부터 선택될 수 있다. 중합체는 하이드록실, 아민 및 카복실 작용기를 지니는 고체 표면으로 이루어진 중합체의 군으로부터 선택될 수 있다.
중합체는, 예를 들어 전분 및 그것의 유도체; 덱스트란 및 그것의 유도체, 셀룰로스 및 그것의 유도체; 키틴 및 키토산 및 알기네이트 및 그것의 유도체의 군으로부터 선택된 다당류일 수 있다.
본 발명의 예시적인 실시형태에서, 중합체는 글라이코사미노글라이칸이다. 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물은 2 이상의 상이한 글라이코사미노글라이칸 중합체를 추가로 포함할 수 있다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "글라이코사미노글라이칸"은 "GAG" 및 "점액성 다당류"와 동의어이며, 반복적인 이당류 단위로 이루어진 긴 미분지 다당류를 지칭한다. 반복 단위는 헥소사민(질소를 함유하는 6탄당)에 연결된, 헥소스(6탄당) 또는 헥수론산 및 이들의 약제학적으로 허용가능한 염으로 이루어진다. GAG 패밀리의 구성원은 그것들이 함유하는 헥소사민, 헥소스 또는 헥수론산 단위의 유형, 예를 들어 글루쿠론산, 이두론산, 갈락토스, 갈락토사민, 글루코사민)에서 다르며, 또한 글라이코사이드 결합의 기하학에서 다를 수 있다. 임의의 글라이코사미노글라이칸 중합체는 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물에서 유용하며, 단, 글라이코사미노글라이칸 중합체는 피부 병태를 개선시킨다. 글라이코사미노글라이칸의 비제한적 예는 콘드로이틴 황산, 더마탄 황산, 케라탄 황산, 하이알루로난을 포함한다. 글라이코사미노글라이칸의 허용가능한 염의 비제한적 예는 나트륨 염, 칼륨 염, 마그네슘 염, 칼슘 염 및 이들의 조합을 포함한다. 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물 및 방법에 유용한 글라이코사미노글라이칸 및 그것의 얻어진 중합체는, 예를 들어 Piron 및 Tholin의 미국 특허 공개 제2003/0148995호(발명의 명칭: Polysaccharide Crosslinking, Hydrogel Preparation, Resulting Polysaccharides(s) and Hydrogel(s), uses Thereof); Lebreton(발명의 명칭: Cross-Linking of Low and High Molecular Weight Polysaccharides Preparation of Injectable Monophase Hydrogels); Lebreton의 미국 특허 공개 제2008/0089918호(발명의 명칭: Viscoelastic Solutions Containing Sodium Hyaluronate and Hydroxypropyl Methyl Cellulose, Preparation and Uses); Lebreton 등의 미국 특허 공개 제2010/0028438호(발명의 명칭: Hyaluronic Acid-Based Gels Including Lidocaine); 및 미국 특허 공개 제2006/0194758호(발명의 명칭: Polysaccharides and Hydrogels thus Obtained); 및 Di Napoli의 국제 특허 공개 WO 2004/073759호(발명의 명칭: Composition and Method for Intradermal Soft Tissue Augmentation)에 기재되어 있고, 이들 각각은 그것의 전문이 본 명세서에 참조로서 포함된다. 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물 및 방법에서 유용한 GAG는, 예를 들어, 하이알루로난계 진피 필러 쥬비덤(JUVEDERM)(등록상표), 쥬비덤(JUVEDERM)(등록상표) 30, 쥬비덤(JUVEDERM)(등록상표) 울트라, 쥬비덤(JUVEDERM)(등록상표) 울트라 플러스, 쥬비덤(JUVEDERM)(등록상표) 울트라 XC, 및 쥬비덤(JUVEDERM)(등록상표) 울트라 플러스 XC(캘리포니아주 얼바인에 소재한 앨러간 인코포레이티드(Allergan Inc))와 같이 상업적으로 입수가능하다. 표 1은 대표적인 GAG를 열거한다.
Figure pat00001
Figure pat00002
본 발명의 양태는 부분적으로 콘드로이틴 황산 중합체를 포함하는 하이드로겔 조성물을 제공한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "콘드로이틴 황산 중합체"는 D-글루쿠론산(GlcA) 및 N-아세틸-D-갈락토사민(GalNAc)의 두 대안의 단당류의 이당류 및 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는 미분지, 황산화된 중합체를 지칭한다. 콘드로이틴 황산 중합체는 L-이두론산(IdoA)으로 에피머화된 D-글루쿠론산 잔기를 포함할 수 있으며, 이 경우에 얻어진 이당류는 더마탄 황산으로서 지칭된다. 콘드로이틴 황산 중합체는 100개 이상의 개개의 당의 쇄를 가질 수 있는데, 이들 각각은 변할 수 있는 위치 및 양에서 황산화될 수 있다. 콘드로이틴 황산 중합체는 중요한 연골의 구조적 성분이며, 압박에 대한 그것의 큰 저항성을 제공한다. 임의의 콘드로이틴 황산 중합체는 본 명세서에 개시된 조성물에서 유용한데, 단, 콘드로이틴 황산 중합체는 피부 병태를 개선시킨다. 콘드로이틴 황산의 약제학적으로 허용가능한 염의 비제한적 예는 콘드로이틴 황산 나트륨, 콘드로이틴 황산 칼륨, 콘드로이틴 황산 마그네슘, 콘드로이틴 황산 칼슘 및 이들의 조합을 포함한다.
본 명세서의 양태는, 부분적으로 케라탄 황산 중합체를 포함하는 하이드로겔 조성물을 제공한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "케라탄 황산 중합체"는 이당류 단위를 포함하는 가변 길이의 중합체를 지칭하며, 그 자체는 β-D-갈락토스 및 N-아세틸-D-갈락토사민(GalNAc) 및 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함한다. 케라탄 황산의 반복 영역 내에서 이당류는 푸코실화될 수 있으며, N-아세틸뉴라민산은 쇄의 말단을 캡핑한다. 임의의 케라탄 황산 중합체는 본 명세서에 개시된 조성물에서 유용한데, 단, 케라탄 황산 중합체는 피부 병태를 개선시킨다. 케라탄 황산의 약제학적으로 허용가능한 염의 비제한적 예는 케라탄 황산 나트륨, 케라탄 황산 칼륨, 케라탄 황산 마그네슘, 케라탄 황산 칼슘 및 이들의 조합을 포함한다.
본 명세서의 양태는, 부분적으로 하이알루로난 중합체를 포함하는 하이드로겔 조성물을 제공한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "하이알루론산 중합체"는 "HA 중합체", "하이알루론산 중합체"와 동의어이며, "하이알루로네이트 중합체"는 이당류 단위를 포함하는 음이온성 비황산화된 글라이코사미노글라이칸 중합체를 지칭하며, 그 자체는 대안의 β-1,4 및 β-1,3 글라이코사이드 결합을 통해 함께 연결된 D-글루쿠론산 및 D-N-아세틸글루코사민 단량체 및 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함한다. 하이알루로난 중합체는 동물 및 비동물 공급원으로부터 정제될 수 있다. 하이알루로난의 중합체는 약 5,000Da 내지 약 20,000,000Da 크기의 범위에 있을 수 있다. 임의의 하이알루로난 중합체는 본 명세서에 개시된 조성물에서 유용한데, 단, 하이알루로난 중합체는 피부 병태를 개선시킨다. 하이알루로난의 약제학적으로 허용가능한 염의 비제한적 예는 하이알루로난 나트륨, 하이알루로난 칼륨, 하이알루로난 마그네슘, 하이알루로난 칼슘 및 이들의 조합을 포함한다.
본 명세서의 양태는, 부분적으로 가교된 글라이코사미노글라이칸 중합체를 포함하는 하이드로겔 조성물을 제공한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "가교된"은 개개의 중합체 분자 또는 단량체 쇄가 겔과 같은 더 안정한 구조에 결합되는 분자간 결합을 지칭한다. 이와 같이, 가교된 글라이코사미노글라이칸 중합체는 적어도 하나의 개개 중합체 분자가 서로 결합되는 분자간 결합을 가진다. 글라이코사미노글라이칸 중합체의 가교는 전형적으로 하이드로겔의 형성을 초래한다. 이러한 하이드로겔은 높은 점도를 가지며, 미세한 바늘을 통해 압출되기 위해 상당한 힘을 필요로 한다. 본 명세서에 개시된 글라이코사미노글라이칸 중합체는 다작용성 PEG계 가교제, 다이비닐 설폰, 다이글라이시딜 에터 및 비스-에폭사이드, 비스카보다이이미드를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 다이알데하이드 및 다이설파이드 가교제를 사용하여 가교될 수 있다. 하이알루로난 가교제의 비제한적 예는 다작용성 PEG계 가교제 유사 펜타에리트리톨 테트라글라이시딜 에터(PETGE), 다이비닐 설폰(DVS), 1,4-뷰탄다이올 다이글라이시딜 에터(BDDE), 1,2-비스(2,3-에폭시프로폭시)에틸렌 (EGDGE), 1,2,7,8-다이에폭시옥탄(DEO), (페닐렌비스-(에틸)-카보다이이미드 및 1,6 헥사메틸렌비스(에틸카보다이이미드), 아디프 다이하이드라자이드(ADH), 비스(설포숙신이미딜)수베레이트(BS), 헥사메틸렌다이아민(HMDA), 1-(2,3-에폭시프로필)-2,3-에폭시사이클로헥산, 리신, 리신 메틸에스터, 또는 이들의 조합을 포함한다. 다른 유용한 가교제는 Stroumpoulis 및 Tezel의 2010년 10월 22일 출원된 미국특허 출원 제12/910,466호(발명의 명칭: Tunably Crosslinked Polysaccharide Compositions)에 개시되어 있으며, 이는 그것의 전문이 참조로서 포함된다. 임의의 글라이코사미노글라이칸 중합체는 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물에서 유용하며, 단, 글라이코사미노글라이칸 중합체는 피부 병태를 개선시킨다. 글라이코사미노글라이칸의 비제한적 예는 콘드로이틴 황산, 더마탄 황산, 케라탄 황산, 하이알루로난을 포함한다. 글라이코사미노글라이칸의 허용가능한 염의 비제한적 예는 나트륨 염, 칼륨 염, 마그네슘 염, 칼슘 염 및 이들의 조합을 포함한다. 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물 및 방법에 유용한 글라이코사미노글라이칸 및 그것의 얻어진 중합체는, 예를 들어 Piron 및 Tholin의 미국 특허 공개 제2003/0148995호(발명의 명칭: Polysaccharide Crosslinking, Hydrogel Preparation, Resulting Polysaccharides(s) and Hydrogel(s), uses Thereof); Lebreton(발명의 명칭: Cross-Linking of Low and High Molecular Weight Polysaccharides Preparation of Injectable Monophase Hydrogels); Lebreton의 미국 특허 공개 제2008/0089918호(발명의 명칭: Viscoelastic Solutions Containing Sodium Hyaluronate and Hydroxypropyl Methyl Cellulose, Preparation and Uses); Lebreton 등의 미국 특허 공개 제2010/0028438호(발명의 명칭: Hyaluronic Acid-Based Gels Including Lidocaine); 및 미국 특허 공개 제2006/0194758호(발명의 명칭: Polysaccharides and Hydrogels thus Obtained); 및 Di Napoli의 국제 특허 공개 WO 2004/073759호(발명의 명칭: Composition and Method for Intradermal Soft Tissue Augmentation)에 기재되어 있고, 이들 각각은 그것의 전문이 본 명세서에 참조로서 포함된다.
본 명세서의 양태는, 부분적으로 가교 정도를 갖는 글라이코사미노글라이칸 중합체를 포함하는 하이드로겔 조성물을 제공한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "가교 정도"는, 예를 들어 가교제에 결합된 하이알루로난의 이당류 단량체 단위와 같은 글라이코사미노글라이칸 중합체 단량체 단위의 백분율을 지칭한다. 가교 정도는 가교제 대 글라이코사미노글라이칸의 중량 백분율 비로서 표현된다. 본 발명의 특정 유리한 실시형태에서 가교 정도는 약 3% 내지 약 12%, 예를 들어, 약 5% 내지 약 10%이다.
실시형태에서, 하이드로겔 조성물은 가교된 글라이코사미노글라이칸 중합체, 예를 들어, 가교된 하이알루론산을 포함하되, 가교된 글라이코사미노글라이칸 중합체는, 예를 들어, 약 18㎎/g 내지 약 30㎎/g의 농도에서 조성물 중에 존재한다. 일부 실시형태에서, 조성물은 약 24㎎/g 또는 약 25㎎/g의 전체 하이알루론산 농도를 가진다.
본 명세서의 양태는, 부분적으로 저분자량의 하이알루로난 중합체, 고분자량의 하이알루로난 중합체 또는 저분자량과 고분자량 둘 다의 하이알루로난 중합체를 포함하는 하이드로겔 조성물을 제공한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "고분자량"은 "하이알루로난"을 지칭할 때, 1,000,000Da 이상의 평균 분자량을 갖는 하이알루로난 중합체를 지칭한다. 고분자량 하이알루로난 중합체의 비제한적 예는 약 1,500,000Da, 약 2,000,000Da, 약 2,500,000Da, 약 3,000,000Da, 약 3,500,000Da, 약 4,000,000Da, 약 4,500,000Da 내지 약 5,000,000Da의 하이알루로난 중합체를 포함한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "저분자량"은 "하이알루로난"을 지칭할 때, 1,000,000Da 미만의 평균 분자량을 갖는 하이알루로난 중합체를 지칭한다. 저분자량 하이알루로난 중합체 의 비제한적 예는 약 200,000Da, 약 300,000Da, 약 400,000Da, 약 500,000Da, 약 600,000Da, 약 700,000Da, 약 800,000Da, 내지 약 900,000Da의 하이알루로난 중합체를 포함한다.
실시형태에서, 조성물은 저분자량의 가교된 하이알루로난 중합체를 포함한다. 이 실시형태의 양태에서, 조성물은, 예를 들어, 약 100,000Da, 약 200,000Da, 약 300,000Da, 약 400,000Da, 약 500,000Da, 약 600,000Da, 약 700,000Da, 약 800,000Da, 또는 약 900,000Da의 평균 분자량을 갖는 가교된 하이알루로난 중합체를 포함한다. 이 실시형태의 또 다른 양태에서, 조성물은, 예를 들어, 최대 100,000Da, 최대 200,000Da, 최대 300,000Da, 최대 400,000Da, 최대 500,000Da, 최대 600,000Da, 최대 700,000Da, 최대 800,000Da, 최대 900,000Da 또는 최대 950,000Da의 평균 분자량을 갖는 가교된 하이알루로난 중합체를 포함한다. 이 실시형태의 또 다른 양태에서, 조성물은, 예를 들어, 약 100,000Da 내지 약 500,000Da, 약 200,000Da 내지 약 500,000Da, 약 300,000 Da 내지 약 500,000Da, 약 400,000Da 내지 약 500,000Da, 약 500,000Da 내지 약 950,000Da, 약 600,000Da 내지 약 950,000Da, 약 700,000Da 내지 약 950,000Da, 약 800,000Da 내지 약 950,000Da, 약 300,000Da 내지 약 600,000Da, 약 300,000Da 내지 약 700,000Da, 약 300,000 Da 내지 약 800,000Da, 또는 약 400,000Da 내지 약 700,000Da의 평균 분자량을 갖는 가교된 하이알루로난 중합체를 포함한다.
다른 실시형태에서, 조성물은 고분자량의 가교된 하이알루로난 중합체를 포함한다. 이 실시형태의 양태에서, 조성물은, 예를 들어 약 1,000,000Da, 약 1,500,000Da, 약 2,000,000Da, 약 2,500,000Da, 약 3,000,000Da, 약 3,500,000Da, 약 4,000,000Da, 약 4,500,000Da, 또는 약 5,000,000Da의 평균 분자량을 갖는 가교된 하이알루로난 중합체를 포함한다. 이 실시형태의 또 다른 양태에서, 조성물은, 예를 들어, 적어도 1,000,000Da, 적어도 1,500,000Da, 적어도 2,000,000Da, 적어도 2,500,000Da, 적어도 3,000,000Da, 적어도 3,500,000Da, 적어도 4,000,000Da, 적어도 4,500,000Da 또는 적어도 5,000,000Da의 평균 분자량을 갖는 가교된 하이알루로난 중합체를 포함한다. 이 실시형태의 또 다른 양태에서, 조성물은, 예를 들어 약 1,000,000Da 내지 약 5,000,000Da, 약 1,500,000Da 내지 약 5,000,000Da, 약 2,000,000Da 내지 약 5,000,000Da, 약 2,500,000Da 내지 약 5,000,000Da, 약 2,000,000Da 내지 약 3,000,000Da, 약 2,500,000Da 내지 약 3,000,000Da의 평균 분자량을 갖는 가교된 하이알루로난 중합체를 포함한다.
또 다른 실시형태에서, 조성물은 가교된 하이알루로난 중합체를 포함하며, 여기서 가교된 하이알루로난 중합체는 다양한 비에서 고분자량 하이알루로난 중합체와 저분자량 하이알루로난 중합체의 조합을 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 조성물은 가교된 하이알루로난 중합체를 포함하며, 여기서 가교된 하이알루로난 중합체는 약 20:1, 약 15:1, 약 10:1, 약 5:1, 약 1:1, 약 1:5 약 1:10, 약 1:15, 또는 약 1:20의 비에서 고분자량 하이알루로난 중합체 와 저분자량 하이알루로난 중합체의 조합을 포함한다.
본 명세서의 양태는, 부분적으로 미가교된 글라이코사미노글라이칸 중합체를 포함하는 하이드로겔 조성물을 제공한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "미가교된"은 개개의 글라이코사미노글라이칸 중합체 분자 또는 단량체 쇄를 결합하는 분자간 결합의 결여 지칭한다. 이와 같이, 미가교된 글라이코사미노글라이칸 중합체는 분자간 결합에 의해 임의의 다른 글라이코사미노글라이칸 중합체에 연결되지 않는다. 이 실시형태의 양태에서, 조성물은 미가교된 콘드로이틴 황산 중합체, 미가교된 더마탄 황산 중합체, 미가교된 케라탄 황산 중합체, 미가교된 헤파란 중합체, 미가교된 헤파란 황산 중합체, 또는 미가교된 하이알루로난 중합체를 포함한다. 미가교된 글라이코사미노글라이칸 중합체는 수용성이며, 일반적으로 자연에서 유체로 남아있다. 이와 같이, 미가교된 글라이코사미노글라이칸 중합체는 종종 윤활제로서 글라이코사미노글라이칸 중합체계 하이드로겔 조성물과 혼합되어 미세한 바늘을 통한 조성물의 압출 과정을 수월하게 한다.
실시형태에서, 조성물은 미가교된 글라이코사미노글라이칸 중합체를 포함하며, 여기서 미가교된 글라이코사미노글라이칸 중합체는, 예를 들어 약 2㎎/g, 약 3㎎/g, 약 4㎎/g, 약 5㎎/g, 약 6㎎/g, 약 7㎎/g, 약 8㎎/g, 약 9㎎/g, 약 10㎎/g, 약 11㎎/g, 약 12㎎/g, 약 13㎎/g, 약 13.5㎎/g, 약 14㎎/g, 약 15㎎/g, 약 16㎎/g, 약 17㎎/g, 약 18㎎/g, 약 19㎎/g, 약 20㎎/g, 약 40㎎/g, 또는 약 60㎎/g의 농도에서 존재한다. 이 실시형태의 다른 양태에서, 조성물은 미가교된 글라이코사미노글라이칸을 제공하며, 여기서 미가교된 글라이코사미노글라이칸은, 예를 들어, 적어도 1㎎/g, 적어도 2㎎/g, 적어도 3㎎/g, 적어도 4㎎/g, 적어도 5㎎/g, 적어도 10㎎/g, 적어도 15㎎/g, 적어도 20㎎/g, 적어도 25㎎/g 적어도 35㎎/g 또는 적어도 40㎎/g의 농도에서 존재한다. 이 실시형태의 또 다른 양태에서, 조성물은 미가교된 글라이코사미노글라이칸을 포함하며, 여기서 미가교된 글라이코사미노글라이칸은, 예를 들어, 최대 1㎎/g, 최대 2㎎/g, 최대 3㎎/g, 최대 4㎎/g, 최대 5㎎/g, 최대 10㎎/g, 최대 15㎎/g, 최대 20㎎/g, 또는 최대 25㎎/g의 농도에서 존재한다. 이 실시형태의 또 다른 양태에서, 조성물은 미가교된 글라이코사미노글라이칸을 포함하며, 여기서 미가교된 글라이코사미노글라이칸은, 예를 들어, 약 1㎎/g 내지 약 60㎎/g, 약 10㎎/g 내지 약 40㎎/g, 약 7.5㎎/g 내지 약 19.5㎎/g, 약 8.5㎎/g 내지 약 18.5㎎/g, 약 9.5㎎/g 내지 약 17.5㎎/g, 약 10.5㎎/g 내지 약 16.5㎎/g, 약 11.5㎎/g 내지 약 15.5㎎/g, 또는 약 12.5㎎/g 내지 약 14.5㎎/g의 농도에서 존재한다.
본 명세서의 양태는, 부분적으로 가교된 글라이코사미노글라이칸 중합체가 본질적으로 없는 하이드로겔 조성물을 제공한다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "본질적으로 없는"(또는 "본질적으로 이루어진")은 단지 미량의 가교된 기질 중합체가 검출될 수 있는 조성물을 지칭한다. 이 실시형태의 양태에서, 조성물은 가교된 콘드로이틴 황산 중합체가 본질적으로 없는 콘드로이틴 황산, 가교된 더마탄 황산 중합체가 본질적으로 없는 더마탄 황산, 가교된 케라탄 황산 중합체가 본질적으로 없는 케라탄 황산, 가교된 헤파란 중합체가 본질적으로 없는 헤파란, 가교된 헤파란 황산 중합체가 본질적으로 없는 헤파란 황산, 또는 가교된 하이알루로난 중합체가 본질적으로 없는 하이알루로난 황산을 포함한다.
본 명세서의 양태는, 부분적으로 가교된 글라이코사미노글라이칸 중합체가 완전히 없는 하이드로겔 조성물을 제공한다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "완전히 없는"은 사용된 기기 또는 과정의 검출 범위 내의 조성물을 지칭하며, 가교된 글라이코사미노글라이칸 중합체는 검출될 수 없거나 또는 그것의 존재는 확인될 수 없다. 이 실시형태의 양태에서, 조성물은 가교된 콘드로이틴 황산 중합체가 완전히 없는 콘드로이틴 황산, 가교된 더마탄 황산 중합체가 완전히 없는 더마탄 황산, 가교된 케라탄 황산 중합체가 완전히 없는 케라탄 황산, 가교된 헤파란 중합체가 완전히 없는 헤파란, 가교된 헤파란 황산 중합체가 완전히 없는 헤파란 황산, 또는 가교된 하이알루로난 중합체가 완전히 없는 하이알루로난 황산을 포함한다.
본 명세서의 양태는, 부분적으로 가교된 글라이코사미노글라이칸 중합체와 미가교된 글라이코사미노글라이칸 중합체의 비를 포함하는 하이드로겔 조성물을 제공한다. 가교 및 미가교된 글라이코사미노글라이칸 중합체의 이런 비는 겔:유체 비로서 알려져 있다. 임의의 겔:유체 비는 본 명세서에 개시된 조성물의 제조에서 유용하며, 단, 이러한 비는 본 명세서에 개시된 피부 병태를 개선시키는 본 명세서에 개시된 조성물을 생성한다. 본 발명의 조성물 내 겔:유체 비의 비제한적 예는 100:0, 98:2, 90:10, 75:25, 70:30, 60:40, 50:50, 40:60, 30:70, 25:75, 10:90; 2:98, 및 0:100을 포함한다.
이 실시형태의 양태에서, 조성물은 가교된 글라이코사미노글라이칸 중합체 및 미가교된 글라이코사미노글라이칸 중합체를 포함하며, 여기서 겔:유체 비는, 예를 들어, 약 0:100, 약 1:99, 약 2:98, 약 3:97, 약 4:96, 약 5:95, 약 6:94, 약 7:93, 약 8:92, 약 9:91, 또는 약 10:90이다. 이 실시형태의 다른 양태에서, 조성물은 가교된 글라이코사미노글라이칸 중합체 및 미가교된 글라이코사미노글라이칸 중합체를 포함하며, 여기서 겔:유체 비는, 예를 들어, 최대 1:99, 최대 2:98, 최대 3:97, 최대 4:96, 최대 5:95, 최대 6:94, 최대 7:93, 최대 8:92, 최대 9:91 또는 최대 10:90이다. 이 실시형태의 양태에서, 조성물은 가교된 글라이코사미노글라이칸 중합체 및 미가교된 글라이코사미노글라이칸 중합체를 포함하며, 여기서 겔:유체 비는, 예를 들어, 약 0:100 내지 약 3:97, 약 0:100 내지 약 5:95, 또는 약 0:100 내지 약 10:90이다.
이 실시형태의 다른 양태에서, 조성물은 가교된 글라이코사미노글라이칸 중합체 및 미가교된 글라이코사미노글라이칸 중합체를 포함하며, 겔:유체 비는, 예를 들어, 약 15:85, 약 20:80, 약 25:75, 약 30:70, 약 35:65, 약 40:60, 약 45:55, 약 50:50, 약 55:45, 약 60:40, 약 65:35, 약 70:30, 약 75:25, 약 80:20, 약 85:15, 약 90:10, 약 95:5, 약 98:2, 또는 약 100:0이다. 이 실시형태의 또 다른 양태에서, 조성물은 가교된 글라이코사미노글라이칸 중합체 및 미가교된 글라이코사미노글라이칸 중합체를 포함하며, 겔:유체 비는, 예를 들어, 최대 15:85, 최대 20:80, 최대 25:75, 최대 30:70, 최대 35:65, 최대 40:60, 최대 45:55, 최대 50:50, 최대 55:45, 최대 60:40, 최대 65:35, 최대 70:30, 최대 75:25, 최대 80:20, 최대 85:15, 최대 90:10, 최대 95:5, 최대 98:2 또는 최대 100:0이다. 이 실시형태의 또 다른 양태에서, 조성물은 가교된 글라이코사미노글라이칸 중합체 및 미가교된 글라이코사미노글라이칸 중합체를 포함하며, 겔:유체 비는, 예를 들어, 약 10:90 내지 약 70:30, 약 15:85 내지 약 70:30, 약 10:90 내지 약 55:45, 약 80:20 내지 약 95:5, 약 90:10 내지 약 100:0, 약 75:25 내지 약 100:0, 또는 약 60:40 내지 약 100:0이다.
본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물은, 조성물이 개체에 투여될 때 유리한 효과를 제공하는 다른 작용제 또는 작용제의 조합을 추가로 포함할 수 있다. 이러한 유리한 작용제는 항산화제, 가려움 방지제, 셀룰라이트 방지제, 흉터 방지제, 항염증제, 마취제, 자극방지제, 혈관수축제, 혈관확장제, 출혈방지제 유사 지혈제 또는 항섬유소 용해제, 박리제, 팽창제, 여드름 방지제, 색소침착 작용제, 색소침착 방지제 또는 보습제를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
본 명세서의 목적을 위해, 달리 언급되지 않는다면, 제형에서 "%"는 중량/중량(즉,w/w) 백분율로서 정의된다.
본 명세서의 양태는, 부분적으로 마취제를 선택적으로 포함할 수 있는 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물을 제공한다. 마취제는 바람직하게는 국소 마취제, 즉, 가역적 국소 마취 및 침해수용의 상실을 야기하는 마취제, 예를 들어, 아미노아마이드 국소 마취제 및 아미노에스터 국소 마취제이다. 본 명세서에 개시된 조성물에 포함된 마취제의 양은 조성물의 투여 시 개체에 의해 경험되는 통증을 완화시키는데 효과적인 양이다. 이와 같이, 본 명세서에 개시된 조성물에 포함된 마취제의 양은전체 조성물의 중량으로 약 0.1중량% 내지 약 5중량%이다. 마취제의 비제한적 예는 리도카인, 암부카인, 아몰라논, 아밀로카인, 베녹시네이트, 벤조카인, 베톡시카인, 비펜아민, 부피바카인, 부타카인, 부탐벤, 부타닐리카인, 부테타민, 부톡시카인, 카르티카인, 클로로프로카인, 코코에틸렌, 코카인, 사이클로메티카인, 디부카인, 디메티소퀸, 디메소카인, 디페로돈, 다이사이클로나인, 유프로신, 페날코민, 포모카인, 헥실카인, 하이드록시테트라카인, 아이소뷰틸 p-아미노벤조에이트, 류시노카인 메실레이트, 레복사드롤, 리도카인, 메피바카인, 메프릴카인, 메타뷰톡시카인, 염화메틸, 미르테카인, 나에파인, 옥타카인, 오쏘카인, 옥세타자인, 파르에톡시카인, 페나카인, 페놀, 피페로카인, 피리도카인, 폴리도카놀, 프라목신, 프릴로카인, 프로카인, 프로파노카인, 프로파라카인, 프로피포카인, 프로폭시카인, 슈도코카인, 피로카인, 로피바카인, 살리실 알코올, 테트라카인, 톨리카인, 트리메카인, 졸라민, 이들의 조합 및 이들의 염을 포함한다. 아미노에스터 국소 마취제의 비제한적 예는 프로카인, 클로로프로카인, 코카인, 사이클로메티카인, 시메토카인(라로카인), 프로폭시카인, 프로카인(노보카인), 프로파라카인, 테트라카인(아메토카인)을 포함한다. 아미노아마이드 국소 마취제의 비제한적 예는 아르티카인, 부피바카인, 신쵸카인(다이부카인), 에티도카인, 레보부피바카인, 리도카인(리그노카인), 메피바카인, 피페로카인, 프릴로카인, 로피바카인 및 트라이메카인을 포함한다. 본 명세서에 개시된 조성물은 단일 마취제 또는 다수의 마취제를 포함할 수 있다. 국소 마취제의 비제한적 예는 리도카인/프릴로카인(EMLA)이다.
따라서 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 조성물은 마취제 및 이의 염을 포함한다. 이 실시형태의 양태에서, 본 명세서에 개시된 조성물은 아미노아마이드 국소 마취제 및 이의 염 또는 아미노에스터 국소 마취제 및 이의 염을 포함한다. 이 실시형태의 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 조성물은 프로카인, 클로로프로카인, 코카인, 사이클로메티카인, 시메토카인, 프로폭시카인, 프로카인, 프로파라카인, 테트라카인, 또는 이들의 염 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 이 실시형태의 또 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 조성물은 아티카인, 부피바카인, 신쵸카인, 에티도카인, 레보부피바카인, 리도카인, 메피바카인, 피페로카인, 프릴로카인, 로피바카인, 트라이메카인, 또는 이들의 염 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 이 실시형태의 또 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 조성물은 리도카인/프릴로카인 조합을 포함한다.
이 실시형태의 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 조성물은 전체 조성물의, 예를 들어, 약 0.1중량%, 약 0.2중량%, 약 0.3중량%, 약 0.4중량%, 약 0.5중량%, 약 0.6중량%, 약 0.7중량%, 약 0.8중량%, 약 0.9중량%, 약 1.0중량%, 약 2.0중량%, 약 3.0중량%, 약 4.0중량%, 약 5.0중량%, 약 6.0중량%, 약 7.0중량%, 약 8.0중량%, 약 9.0중량%, 또는 약 10중량%의 양으로 마취제를 포함한다. 또 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 조성물은 전체 조성물의, 예를 들어 적어도 0.1중량%, 적어도 0.2중량%, 적어도 0.3중량%, 적어도 0.4중량%, 적어도 0.5중량%, 적어도 0.6중량%, 적어도 0.7중량%, 적어도 0.8중량% 적어도 0.9중량%, 적어도 1.0중량%, 적어도 2.0중량%, 적어도 3.0중량%, 적어도 4.0중량%, 적어도 5.0중량%, 적어도 6.0중량%, 적어도 7.0중량%, 적어도 8.0중량%, 적어도 9.0중량% 또는 적어도 10중량%의 양으로 마취제를 포함한다. 또 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 조성물은 전체 조성물의, 예를 들어 최대 0.1중량%, 최대 0.2중량%, 최대 0.3중량%, 최대 0.4중량%, 최대 0.5중량%, 최대 0.6중량%, 최대 0.7중량%, 최대 0.8중량% 최대 0.9중량%, 최대 1.0중량%, 최대 2.0중량%, 최대 3.0중량%, 최대 4.0중량%, 최대 5.0중량%, 최대 6.0중량%, 최대 7.0중량%, 최대 8.0중량%, 최대 9.0중량%, 또는 최대 10중량%의 양으로 마취제를 포함한다. 추가 양태에서, 본 명세서에 개시된 조성물은 전체 조성물의, 예를 들어, 약 0.1중량% 내지 약 0.5중량%, 약 0.1중량% 내지 약 1.0중량%, 약 0.1중량% 내지 약 2.0중량%, 약 0.1중량% 내지 약 3.0중량%, 약 0.1중량% 내지 약 4.0중량%, 약 0.1중량% 내지 약 5.0중량%, 약 0.2중량% 내지 약 0.9중량%, 약 0.2중량% 내지 약 1.0중량%, 약 0.2중량% 내지 약 2.0중량%, 약 0.5중량% 내지 약 1.0중량%, 또는 약 0.5중량% 내지 약 2.0중량%의 양으로 마취제를 포함한다.
다른 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 조성물은 마취제를 포함하지 않는다.
본 발명의 일 양태에서, 중합체, 예를 들어, 글라이코사미노글라이칸 중합체, 예를 들어 하이알루론산 중합체, 예를 들어, 적어도 일부가 가교된 하이알루론산, 및 중합체와 조합된 첨가제 또는 유리한 작용제를 포함하는 주사용 진피 필러가 제공된다.
중합체와 조합된 유리한 작용제는 비타민, 예를 들어, 비타민 C를 포함할 수 있다. 비타민 C의 적합한 형태의 비제한적 예는 아스콜브산 및 아스콜브산의 나트륨, 칼륨 및 칼슘 염, 아스콜브산과 장쇄 지방산의 지용성 에스터(아스코빌 팔미테이트 또는 아스코빌 스테아레이트), 마그네슘 아스코빌 포스페이트(MAP), 나트륨 아스코빌 포스페이트(SAP), 및 아스콜브산 2-글루코사이드(AA2G(상표명)), 나트륨 아스코빌 포스페이트(AA2P), 2나트륨 아스코빌 설페이트, 및 아스코빌 3-아미노프로필 포스페이트(비타겐)를 포함한다.
특히 유리한 실시형태에서, 유리한 작용제는 중합체에 공유적으로 컨쥬게이트된다. 예를 들어, 유리한 작용제는 비타민 C, 또는 비타민 C 유도체일 수 있는데, 이는 중합체에 공유적으로 컨쥬게이트되고, 전체 조성물의 약 0.04중량% 내지 약 5.0중량%, 예를 들어 전체 조성물의 약 0.1중량% 내지 약 4.0중량%, 예를 들어 전체 조성물의 약 0.2중량% 내지 약 2.0중량%의 양으로 조성물 중에 존재한다. 일 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 조성물 중에 포함된 비타민 C의 양은 전체 조성물의 약 0.3중량% 내지 약 1.2중량%이다.
바람직하게는, 중합체에 공유적으로 컨쥬게이트된 비타민 C는 아스콜브산, L-아스콜브산, L-아스콜브산 2-설페이트(AA-2S) 및 L-아스콜브산 2-포스페이트(AA-2P), 아스콜브산 2-O-글루코사이드 (AA-2G), 6-O-아실-2-O-알파-D-글루코피라노실-L-아스콜브산(6-Acyl-AA-2G), (아스코빌 3-아미노프로필 포스페이트, 아스코빌 팔미테이트), 유도체 및 이들의 유도체 중 적어도 하나를 포함한다. 본 명세서에 개시된 조성물은 단일 비타민 C 작용제 또는 다수의 비타민 C 작용제를 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 실시형태에서, 진피 필러가 제공되되, 하이알루론산은 BDDE와 가교된다. 이 실시형태에서, 컨쥬게이션 정도는 약 3㏖% 내지 약 10㏖, 내지 약 15㏖% 내지 약 40㏖%일 수 있다.
일부 실시형태에서, 진피 필러는 지속된 생체이용가능성을 가진다. 예를 들어, 인간의 피부에 도입될 때, 적어도 약 1개월 내지 약 20개월 이상까지 동안 아스콜브산 또는 다른 비타민이 인간에 방출되는데 효과적인 진피 필러가 제공된다.
본 발명의 양태는, 부분적으로 복소 탄성률(complex modulus), 탄성률(elastic modulus), 점성률(viscous modulus) 및/또는 tan δ를 나타내는 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물을 제공한다. 본 명세서에 개시된 바와 같은 조성물은 점탄성이며, 즉, 조성물은 힘이 적용될 때(응력, 변형) 탄성 성분(고체 유사, 예를 들어 가교된 글라이코사미노글라이칸 중합체) 및 점성 성분(액체 유사, 예를 들어 미가교된 글라이코사미노글라이칸 중합체 또는 담체상)을 가진다. 이 특성을 설명하는 유동학적 속성은 복소 탄성률(G*)인데, 이는 변형에 대한 조성물의 전체 저항을 정의한다. 복소 탄성률은 실제 및 가상적 부분을 지니는 복소수이다: G*=G'+iG". G*의 절대값은 Abs(G*) = Sqrt(G'2+G"2)이다. 복소 탄성률은 탄성률(G')과 점성률(G")의 합으로서 정의될 수 있다. 문헌[Falcone, et al., Temporary Polysaccharide Dermal Fillers: A Model for Persistence Based on Physical Properties, Dermatol Surg. 35(8): 1238-1243 (2009); Tezel, 상기 참조, 2008; Kablik, 상기 참조, 2009; Beasley, 상기 참조, 2009]; 이들 각각은 전문이 본 명세서에 참조로서 포함된다.
탄성률 또는 탄성 계수는 힘이 물체에 적용될 때, 변형 또는 반대로 비영구적으로 변형되는 물체의 경향에 저항하는 하이드로겔 물질의 능력을 지칭한다. 탄성률은 조성물의 굳기를 특징으로 하며, 또한 저장 탄성률(storage modulus)로서 알려져 있는데, 그것이 조성물의 이동으로부터 에너지의 저장을 설명하기 때문이다. 탄성률은 탄성과 강도 사이의 상호작용(G' = 응력/변형)을 설명하며, 이와 같이, 조성물의 경도 또는 연화의 정량적 측정을 제공한다. 물체의 탄성률은 탄성 변형 영역에서 그것의 응력-변형 곡선의 기울기로서 정의된다: λ = 응력/변형, 여기서 λ는 탄성률(파스칼)이며; 응력은 힘이 적용되는 영역으로 나눈 변형을 야기하는 힘이고; 변형은 응력에 의해 야기되는 변화 대 물체의 본래 상태의 비이다. 힘이 적용되는 속도에 의존함에도 불구하고, 더 강성인 조성물은 더 높은 탄성률을 가질 것이며, 예를 들어 주사와 같이 제공된 거리로 물질을 변형시키는데 더 큰 힘을 취할 것이다. 방향을 포함하여 응력이 측정되는 방법을 구체화하는 것은 다수 유형의 탄성률이 정의되게 한다. 3가지의 주된 탄성률은 인장탄성률, 전단탄성률 및 체적탄성률이다.
점성률은 또한 손실률로서 알려져 있는데, 이는 점성 소멸로서 상실된 에너지를 설명하기 때문이다. Tan δ는 점성률과 탄성률의 비이다, tan δ = G"/G'. 문헌[Falcone, 상기 참조, 2009]. 본 명세서에 개시된 tan δ 값에 대해, tan δ는 1Hz의 주파수에서 동적 탄성률에서 얻어진다. 더 낮은 tan δ는 더 강성, 더 경질 또는 더 탄성인 조성물에 대응된다.
다른 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 조성물은 탄성률을 나타내지 않는다. 이 실시형태의 양태에서, 하이드로겔 조성물은, 예를 들어, 약 25㎩, 약 50㎩, 약 75㎩, 약 100㎩, 약 125㎩, 약 150㎩, 약 175㎩, 약 200㎩, 약 250㎩, 약 300㎩, 약 350㎩, 약 400㎩, 약 450㎩, 약 500㎩, 약 550㎩, 약 600㎩, 약 650㎩, 약 700㎩, 약 750㎩, 약 800㎩, 약 850㎩, 약 900㎩, 약 950㎩, 약 1,000㎩, 약 1,200㎩, 약 1,300㎩, 약 1,400㎩, 약 1,500㎩, 약 1,600㎩, 약 1700㎩, 약 1800㎩, 약 1900㎩, 약 2,000㎩, 약 2,100㎩, 약 2,200㎩, 약 2,300㎩, 약 2,400 Pa, 또는 약 2,500㎩의 탄성률을 나타낸다. 이 실시형태의 다른 양태에서, 하이드로겔 조성물은, 예를 들어 적어도 25㎩, 적어도 50㎩, 적어도 75㎩, 적어도 100㎩, 적어도 125㎩, 적어도 150㎩, 적어도 175㎩, 적어도 200㎩, 적어도 250㎩, 적어도 300㎩, 적어도 350㎩, 적어도 400㎩, 적어도 450㎩, 적어도 500㎩, 적어도 550㎩, 적어도 600㎩, 적어도 650㎩, 적어도 700㎩, 적어도 750㎩, 적어도 800㎩, 적어도 850㎩, 적어도 900㎩, 적어도 950㎩, 적어도 1,000㎩, 적어도 1,200㎩, 적어도 1,300㎩, 적어도 1,400㎩, 적어도 1,500㎩, 적어도 1,600㎩, 적어도 1700㎩, 적어도 1800㎩, 적어도 1900㎩, 적어도 2,000㎩, 적어도 2,100㎩, 적어도 2,200㎩, 적어도 2,300㎩, 적어도 2,400㎩ 또는 적어도 2,500㎩의 탄성률을 나타낸다. 이 실시형태의 또 다른 양태에서, 하이드로겔 조성물은, 예를 들어, 최대 25㎩, 최대 50㎩, 최대 75㎩, 최대 100㎩, 최대 125㎩, 최대 150㎩, 최대 175㎩, 최대 200㎩, 최대 250㎩, 최대 300㎩, 최대 350㎩, 최대 400㎩, 최대 450㎩, 최대 500㎩, 최대 550㎩, 최대 600㎩, 최대 650㎩, 최대 700㎩, 최대 750㎩, 최대 800㎩, 최대 850㎩, 최대 900㎩, 최대 950㎩, 최대 1,000㎩, 최대 1,200㎩, 최대 1,300㎩, 최대 1,400㎩, 최대 1,500㎩, 또는 최대 1,600㎩의 탄성률을 나타낸다. 이 실시형태의 또 다른 양태에서, 하이드로겔 조성물은, 예를 들어, 약 25㎩ 내지 약 150㎩, 약 25㎩ 내지 약 300㎩, 약 25㎩ 내지 약 500㎩, 약 25㎩ 내지 약 800㎩, 약 125㎩ 내지 약 300㎩, 약 125㎩ 내지 약 500㎩, 약 125㎩ 내지 약 800㎩, 약 500㎩ 내지 약 1,600㎩, 약 600㎩ 내지 약 1,600㎩, 약 700㎩ 내지 약 1,600㎩, 약 800㎩ 내지 약 1,600㎩, 약 900㎩ 내지 약 1,600㎩, 약 1,000㎩ 내지 약 1,600㎩, 약 1,100㎩ 내지 약 1,600㎩, 약 1,200㎩ 내지 약 1,600㎩, 약 500㎩ 내지 약 2,500㎩, 약 1,000㎩ 내지 약 2,500㎩, 약 1,500㎩ 내지 약 2,500㎩, 약 2,000㎩ 내지 약 2,500㎩, 약 1,300㎩ 내지 약 1,600㎩, 약 1,400㎩ 내지 약 1,700㎩, 약 1,500㎩ 내지 약 1,800㎩, 약 1,600㎩ 내지 약 1,900㎩, 약 1,700㎩ 내지 약 2,000㎩, 약 1,800㎩ 내지 약 2,100㎩, 약 1,900㎩ 내지 약 2,200㎩, 약 2,000㎩ 내지 약 2,300㎩, 약 2,100㎩ 내지 약 2,400㎩, 또는 약 2,200㎩ 내지 약 2,500㎩의 탄성률을 나타낸다.
다른 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 조성물은 점성률을 나타내지 않는다. 이 실시형태의 양태에서, 하이드로겔 조성물은, 예를 들어, 약 10㎩, 약 20㎩, 약 30㎩, 약 40㎩, 약 50㎩, 약 60㎩, 약 70㎩, 약 80㎩, 약 90㎩, 약 100㎩, 약 150㎩, 약 200㎩, 약 250㎩, 약 300㎩, 약 350㎩, 약 400㎩, 약 450㎩, 약 500㎩, 약 550㎩, 약 600㎩, 약 650㎩, 또는 약 700㎩의 점성률을 나타낸다. 이 실시형태의 다른 양태에서, 하이드로겔 조성물은, 예를 들어, 최대 10㎩, 최대 20㎩, 최대 30㎩, 최대 40㎩, 최대 50㎩, 최대 60㎩, 최대 70㎩, 최대 80㎩, 최대 90㎩, 최대 100㎩, 최대 150㎩, 최대 200㎩, 최대 250㎩, 최대 300㎩, 최대 350㎩, 최대 400㎩, 최대 450㎩, 최대 500㎩, 최대 550㎩, 최대 600㎩, 최대 650㎩ 또는 최대 700㎩의 점성률을 나타낸다. 이 실시형태의 또 다른 양태에서, 하이드로겔 조성물은, 예를 들어, 약 10㎩ 내지 약 30㎩, 약 10㎩ 내지 약 50㎩, 약 10㎩ 내지 약 100㎩, 약 10㎩ 내지 약 150㎩, 약 70㎩ 내지 약 100㎩, 약 50㎩ 내지 약 350㎩, 약 150㎩ 내지 약 450㎩, 약 250㎩ 내지 약 550㎩, 약 350㎩ 내지 약 700㎩, 약 50㎩ 내지 약 150㎩, 약 100㎩ 내지 약 200㎩, 약 150㎩ 내지 약 250㎩, 약 200㎩ 내지 약 300㎩, 약 250㎩ 내지 약 350㎩, 약 300㎩ 내지 약 400㎩, 약 350㎩ 내지 약 450㎩, 약 400㎩ 내지 약 500㎩, 약 450㎩ 내지 약 550㎩, 약 500㎩ 내지 약 600㎩, 약 550㎩ 내지 약 650㎩, 또는 약 600㎩ 내지 약 700㎩의 점성률을 나타낸다.
다른 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물은 tan δ를 나타낸다. 이 실시형태의 양태에서, 하이드로겔 조성물은, 예를 들어, 약 0.1, 약 0.2, 약 0.3, 약 0.4, 약 0.5, 약 0.6, 약 0.7, 약 0.8, 약 0.9, 약 1.0, 약 1.1, 약 1.2, 약 1.3, 약 1.4, 약 1.5, 약 1.6, 약 1.7, 약 1.8, 약 1.9, 약 2.0, 약 2.1, 약 2.2, 약 2.3, 약 2.4, 또는 약 2.5의 tan δ를 나타낸다. 이 실시형태의 다른 양태에서, 하이드로겔 조성물은, 예를 들어, 최대 0.1, 최대 0.2, 최대 0.3, 최대 0.4, 최대 0.5, 최대 0.6, 최대 0.7, 최대 0.8, 최대 0.9, 최대 1.0, 최대 1.1, 최대 1.2, 최대 1.3, 최대 1.4, 최대 1.5, 최대 1.6, 최대 1.7, 최대 1.8, 최대 1.9, 최대 2.0, 최대 2.1, 최대 2.2, 최대 2.3, 최대 2.4 또는 최대 2.5의 tan δ를 나타낸다. 이 실시형태의 또 다른 양태에서, 하이드로겔 조성물은, 예를 들어, 약 0.1 내지 약 0.3, 약 0.3 내지 약 0.5, 약 0.5 내지 약 0.8, 약 1.1 내지 약 1.4, 약 1.4 내지 약 1.7, 약 0.3 내지 약 0.6, 약 0.1 내지 약 0.5, 약 0.5 내지 약 0.9, 약 0.1 내지 약 0.6, 약 0.1 내지 약 1.0, 약 0.5 내지 약 1.5, 약 1.0 내지 약 2.0, 또는 약 1.5 내지 약 2.5의 tan δ를 나타낸다.
본 명세서의 양태는, 부분적으로 투명도 및/또는 반투명도를 갖는 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물을 제공한다. 광학적 투명도는 가시광선이 물질을 통과할 수 있게 하는 물리적 특성인 반면, 반투명도(또한 반투명 또는 반투명성으로 불림)는 단지 빛이 분산되어 통과하게 한다. 반대의 특성은 불투명이다. 투명한 재료는 맑은 반면 백색의 반투명한 재료는 깨끗하게 볼 수 없다. 본 명세서에 개시된 하이드로겔은 바람직하게는 광학적으로 투명하거나 또는 적어도 반투명이다.
실시형태에서, 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물은 광학적으로 반투명이다. 이 실시형태의 양태에서, 하이드로겔 조성물은, 예를 들어, 약 75%의 빛, 약 80%의 빛, 약 85%의 빛, 약 90%의 빛, 약 95%의 빛, 또는 약 100%의 빛을 분산되게 전달한다. 이 실시형태의 다른 양태에서, 하이드로겔 조성물은, 예를 들어, 적어도 75%의 빛, 적어도 80%의 빛, 적어도 85%의 빛, 적어도 90%의 빛, 또는 적어도 95%의 빛을 분산되게 전달한다. 이 실시형태의 또 다른 양태에서, 하이드로겔 조성물은, 예를 들어, 약 75% 내지 약 100%의 빛, 약 80% 내지 약 100%의 빛, 약 85% 내지 약 100%의 빛, 약 90% 내지 약 100%의 빛, 또는 약 95% 내지 약 100%의 빛을 분산되게 전달한다. 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물은 광학적으로 투명하고, 100%의 가시광선을 전달한다.
본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물은 추가로 하이드로겔을 입자로 분쇄시킴으로써 처리될 수 있고, 선택적으로, 예를 들어 물 또는 식염수와 같은 담체상과 혼합되어 주사용 또는 국소 물질 유사 용액, 오일, 로션, 겔, 연고, 크림, 슬러리, 고약 또는 페이스트를 형성한다. 이와 같이, 개시된 하이드로겔 조성물은 단상 또는 다상 조성물일 수 있다. 하이드로겔은 직경이 약 10㎛ 내지 약 1000㎛, 예컨대 약 15㎛ 내지 약 30㎛, 약 50㎛ 내지 약 75㎛, 약 100㎛ 내지 약 150㎛, 약 200㎛ 내지 약 300㎛, 약 450㎛ 내지 약 550㎛, 약 600㎛ 내지 약 700㎛, 약 750㎛ 내지 약 850㎛, 또는 약 900㎛ 내지 약 1,000㎛의 입자 크기로 밀링될 수 있다.
본 명세서의 양태는, 부분적으로 본 명세서에 개시된 조성물이 주사용이라는 것을 제공한다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "주사용"은 미세한 바늘을 지니는 주사 장치를 사용하여 개체의 피부 영역에 조성물을 투여한 필요가 있는 특성을 갖는 물질을 지칭한다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "미세한 바늘"은 27 게이지 이하의 바늘을 지칭한다. 본 명세서에 개시된 조성물의 주사 능력은 상기 논의한 바와 같은 하이드로겔 입자를 크기 조절함으로써 수행될 수 있다.
이 실시형태의 양태에서, 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물은 미세한 바늘을 통해 주사될 수 있다. 이 실시형태의 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물은, 예를 들어, 약 27 게이지, 약 30 게이지, 또는 약 32 게이지의 바늘을 통해 주사가능하다. 이 실시형태의 또 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물은, 예를 들어, 22 게이지 이하, 27 게이지 이하, 30 게이지 이하, 또는 32 게이지 이하의 바늘을 통해 주사가능하다. 이 실시형태의 또 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물은, 예를 들어 약 22 게이지 내지 약 35 게이지, 22 게이지 내지 약 34 게이지, 22 게이지 내지 약 33 게이지, 22 게이지 내지 약 32 게이지, 약 22 게이지 내지 약 27 게이지, 또는 약 27 게이지 내지 약 32 게이지의 바늘을 통해 주사가능하다.
이 실시형태의 양태에서, 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물은 100㎜/분의 속도에서 약 60N, 약 55N, 약 50N, 약 45N, 약 40N, 약 35N, 약 30N, 약 25N, 약 20 N, 또는 약 15N의 압출력으로 주사될 수 있다. 이 실시형태의 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물은 약 60N 이하, 약 55N 이하, 약 50N 이하, 약 45N 이하, 약 40N 이하, 약 35N 이하, 약 30N 이하, 약 25N 이하, 약 20N 이하, 약 15N 이하, 약 10N 이하, 또는 약 5N 이하의 압출력을 지니는 27 게이지 바늘을 통해 주사될 수 있다. 이 실시형태의 또 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물은 약 60N 이하, 약 55N 이하, 약 50N 이하, 약 45N 이하, 약 40N 이하, 약 35N 이하, 약 30N 이하, 약 25N 이하, 약 20N 이하, 약 15N 이하, 약 10N 이하, 또는 약 5N 이하의 압출력을 지니는 30 게이지 바늘을 통해 주사될 수 있다. 이 실시형태의 또 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물은 약 60N 이하, 약 55N 이하, 약 50N 이하, 약 45N 이하, 약 40N 이하, 약 35N 이하, 약 30N 이하, 약 25N 이하, 약 20N 이하, 약 15N 이하, 약 10N 이하, 또는 약 5N 이하의 압출력을 지니는 32 게이지 바늘을 통해 주사될 수 있다.
본 명세서의 양태는, 부분적으로 접착성을 나타내는 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물을 제공한다. 결합적 응집 인력, 응집력 또는 압축력으로서도 지칭되는 접착성은 재료의 물리적 특성이며, 분자를 통합시키도록 작용하는 물질 내에서 유사 분자 간의 분자간 인력에 의해 야기된다. 접착성은 그램-힘(gmf)에 대해 표현된다. 응집력은, 특히 초기 유리 글라이코사미노글라이칸 중합체의 분자량비, 글라이코사미노글라이칸 중합체, 글라이코사미노글라이칸 중합체의 가교 정도, 가교 후 잔여 유리 글라이코사미노글라이칸 중합체의 양, 및 하이드로겔 조성물의 pH에 의해 영향받는다. 조성물은 투여 부위에 국소화된 채로 남아 있는 것과 같이 충분하게 응집력이 있어야 한다. 추가적으로, 특정 적용에서, 충분한 응집력은 기계적 부하 주기의 사건에서 조성물에 대해 그것의 형상 및 그에 따른 기능성을 보유하는데 중요하다. 이와 같이, 일 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 조성물은 물과 동등한 응집력을 나타낸다. 또 다른 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물은 투여 부위에 국소화된 채로 남아있는 충분한 접착성을 나타낸다. 또 다른 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물은 그것의 형상을 보유하는데 충분한 접착성을 나타낸다. 추가 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물은 그것의 형상 및 기능성을 보유하는데 충분한 접착성을 나타낸다.
본 명세서의 양태는 부분적으로 생리학적으로 허용가능한 오스몰농도를 나타내는 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물을 제공한다. 본 명세서에 나타내는 바와 같은 용어 "오스몰농도"는 용액 중에서 삼투적으로 활성인 용질의 농도를 지칭한다. 본 명세서에 나타내는 바와 같은 용어 "생리적으로 허용가능한 오스몰농도"는 살아있는 유기체의 정상 기능의 특징 또는 이에 따른 오스몰농도를 지칭한다. 이와 같이, 본 명세서에 개시된 바와 같은 하이드로겔 조성물의 투여는 포유류에 투여될 때 영구적인 유해한 또는 실질적으로 장기간이 아닌 효과를 갖는 오스몰농도를 나타낸다. 오스몰농도는 용매의 리터 당 삼투적으로 활성인 용질의 오스몰에 대해 표현된다(Os㏖/ℓ 또는 Osm/ℓ). 오스몰농도는 몰농도와 별개인데, 그것이 용질의 몰보다 삼투적으로 활성인 용질 입자의 몰을 측정하기 때문이다. 일부 화합물은 용액 중에서 해리될 수 있는 반면, 다른 것들은 그렇지 못할 수 있기 때문에 차이가 생긴다. 용액의 오스몰농도는 다음의 표현으로부터 계산될 수 있다: Os㏖/ℓ = ∑ φi ηi Ci 여기서 φ는 용액의 비이상 정도를 계산하는 삼투계수이며; η는 분자가 해리되는 입자(예를 들어, 이온)의 수이고; C는 용질의 몰 농도이며; i는 특정 용질의 정체를 나타내는 지수이다. 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물의 오스몰농도는 용액을 처리하는 통상적인 방법을 사용하여 측정될 수 있다.
실시형태에서, 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물은 생리적으로 허용가능한 오스몰농도를 나타낸다. 본 명세서에 나타내는 바와 같은 용어 "삼투질 농도"는 신체 내 용매의 킬로 당 삼투적으로 활성인 용질의 농도를 지칭한다. 본 명세서에 나타내는 바와 같은 용어 "생리적으로 허용가능한 삼투질 농도"는 살아있는 유기체의 특징 또는 정상 기능에 따른 삼투질 농도를 지칭한다. 이와 같이, 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물의 투여는 포유류에 대해 투여될 때 영구적인 유해한 또는 실질적으로 장기간이 아닌 효과를 갖는 삼투질 농도를 나타낸다. 삼투질 농도는 용매의 킬르그램 당 삼투적으로 활성인 용질의 오스몰에 대해 표현되며(os㏖/㎏ 또는 Osm/㎏), 해당 용액 내 존재하는 모든 용질의 몰랄농도의 합과 동일하다. 용액의 삼투질 농도는 삼투압계를 사용하여 측정될 수 있다. 현대 실험실에서 가장 흔히 사용되는 기기는 빙점 강하 삼투압측정기이다. 이 기기는 삼투질 농도를 증가시킴에 따라 일어나는 빙점의 변화(빙점 강하 삼투압측정기) 또는 삼투질 농도를 증가시킴에 따라 용액 중에서 생기는 수증기압의 변화(수증기압 강하 삼투압측정기)를 측정한다.
이 실시형태의 양태에서, 하이드로겔 조성물은, 예를 들어, 약 100 mOsm/ℓ, 약 150 mOsm/ℓ, 약 200 mOsm/ℓ, 약 250 mOsm/ℓ, 약 300 mOsm/ℓ, 약 350 mOsm/ℓ, 약 400 mOsm/ℓ, 약 450 mOsm/ℓ, 또는 약 500 mOsm/ℓ의 오스몰농도를 나타낸다. 이 실시형태의 다른 양태에서, 하이드로겔 조성물은, 예를 들어, 적어도 100 mOsm/ℓ, 적어도 150 mOsm/ℓ, 적어도 200 mOsm/ℓ, 적어도 250 mOsm/ℓ, 적어도 300 mOsm/ℓ, 적어도 350 mOsm/ℓ, 적어도 400 mOsm/ℓ, 적어도 450 mOsm/ℓ 또는 적어도 500 mOsm/ℓ의 오스몰농도를 나타낸다. 이 실시형태의 또 다른 양태에서, 하이드로겔 조성물은, 예를 들어 최대 100 mOsm/ℓ, 최대 150 mOsm/ℓ, 최대 200 mOsm/ℓ, 최대 250 mOsm/ℓ, 최대 300 mOsm/ℓ, 최대 350 mOsm/ℓ, 최대 400 mOsm/ℓ, 최대 450 mOsm/ℓ 또는 최대 500 mOsm/ℓ의 오스몰농도를 나타낸다. 이 실시형태의 또 다른 양태에서, 하이드로겔 조성물은, 예를 들어 약 100 mOsm/ℓ 내지 약 500 mOsm/ℓ, 약 200 mOsm/ℓ 내지 약 500 mOsm/ℓ, 약 200 mOsm/ℓ 내지 약 400 mOsm/ℓ, 약 300 mOsm/ℓ 내지 약 400 mOsm/ℓ, 약 270 mOsm/ℓ 내지 약 390 mOsm/ℓ, 약 225 mOsm/ℓ 내지 약 350 mOsm/ℓ, 약 250 mOsm/ℓ 내지 약 325 mOsm/ℓ, 약 275 mOsm/ℓ 내지 약 300 mOsm/ℓ, 또는 약 285 mOsm/ℓ 내지 약 290 mOsm/ℓ의 오스몰농도를 나타낸다.
본 명세서의 양태는, 부분적으로 실질적인 안정성을 나타내는 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물을 제공한다. 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물을 지칭할 때, 본 명세서에 나타내는 바와 같은 용어 "안정성" 또는 "안정한"은 개체에 투여 전 보관되는 동안 임의의 실질적인 또는 유의한 정도가 강등되거나, 분해되거나 또는 파괴되기 쉽지 않은 조성물을 지칭한다. 본 명세서에 나타내는 바와 같은 용어 "실질적인 열 안정성", "실질적으로 열 안정성", "오토클레이브 안정성" 또는 "스팀 멸균 안정성"은 본 명세서에 개시되는 바와 같은 열 처리가 적용될 때, 실질적으로 안정한 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물을 지칭한다.
본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물의 안정성은, 예를 들어 정상 압력에서 또는 감압하에(예를 들어, 오토클레이빙) 스팀 멸균과 같은 열 처리를 하이드로겔 조성물에 실시함으로써 결정될 수 있다. 바람직하게는, 열 처리는 약 1분 내지 약 10분 동안 적어도 약 100℃의 온도에서 수행된다. 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물의 실질적인 안정성은 1) 멸균 후 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물의 압출력(ΔF)의 변화를 결정함으로써(여기서 2N 미만의 압출력에서 변화는 (구체화된 첨가제를 지니는 하이드로겔 조성물의 압출력) - (첨가된 첨가제가 없는 하이드로겔 조성물의 압출력)에 의해 측정되는 바와 같은 실질적으로 안정한 하이드로겔 조성물을 표시함); 및/또는 2) 멸균 후 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물의 유동학적 특성에서 변화를 결정함으로써(여기서, 0.1 미만의 tan δ 1Hz에서 변화는 (첨가제에 의한 겔 제형의 tan δ 1 Hz) - (첨가제가 없는 겔 제형의 tan δ 1 Hz)에 의해 측정되는 바와 같은 실질적으로 안정한 하이드로겔 조성물을 표시함) 평가될 수 있다. 이와 같이, 본 명세서에 개시된 실질적으로 안정한 하이드로겔 조성물은 멸균 후 다음의 특징 중 하나 이상을 보유한다: 동종, 압출력, 응집력, 하이알루로난 농도, 작용제(들) 농도, 오스몰농도, pH, 또는 열 처리 전 하이드로 겔에 의해 요망되는 다른 유동학적 특징.
실시형태에서, 글라이코사미노글라이칸 중합체 및 본 명세서에 개시된 적어도 하나의 작용제를 포함하는 하이드로겔 조성물은 본 명세서에 개시된 요망되는 하이드로겔 특성을 유지하는 열 처리를 사용하여 처리된다. 이 실시형태의 양태에서, 글라이코사미노글라이칸 중합체 및 본 명세서에 개시된 적어도 하나의 작용제를 포함하는 하이드로겔 조성물은, 예를 들어, 약 100℃, 약 105℃, 약 110℃, 약 115℃, 약 120℃, 약 125℃, 또는 약 130℃의 열 처리를 사용하여 처리된다. 이 실시형태의 다른 양태에서, 글라이코사미노글라이칸 중합체 및 본 명세서에 개시된 적어도 하나의 작용제를 포함하는 하이드로겔 조성물은, 예를 들어, 적어도 100℃, 적어도 105℃, 적어도 110℃, 적어도 115℃, 적어도 120℃, 적어도 125℃ 또는 적어도 130℃의 열 처리를 사용하여 처리된다. 이 실시형태의 또 다른 양태에서, 글라이코사미노글라이칸 중합체 및 본 명세서에 개시된 적어도 하나의 작용제를 포함하는 하이드로겔 조성물은, 예를 들어 약 100℃ 내지 약 120℃, 약 100℃ 내지 약 125℃, 약 100℃ 내지 약 130℃, 약 100℃ 내지 약 135℃, 약 110℃ 내지 약 120℃, 약 110℃ 내지 약 125℃, 약 110℃ 내지 약 130℃, 약 110℃ 내지 약 135℃, 약 120℃ 내지 약 125℃, 약 120℃ 내지 약 130℃, 약 120℃ 내지 약 135℃, 약 125℃ 내지 약 130℃, 또는 약 125℃ 내지 약 135℃의 열 처리를 사용하여 처리된다.
본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물의 안정성은, 예를 들어 정상 압력에서 또는 감압하에(예를 들어, 오토클레이빙) 스팀 멸균과 같은 열 처리를 하이드로겔 조성물에 실시함으로써 결정될 수 있다. 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물의 장기간 안정성은, 예를 들어 약 60일 동안 약 45℃ 환경에서 저장과 같은 열처리를 하이드로겔 조성물에 실시함으로써 결정될 수 있다. 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물의 장기간 안정성은 1) 45℃ 열처리 후 하이드로겔 조성물의 선명도 및 색을 평가함으로써(맑고, 무색인 하이드로겔 조성물은 실질적으로 안정한 하이드로겔 조성물을 표시함); 2) 45℃ 열처리 후 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물의 압출력(ΔF)에서 변화를 결정함으로써(2N 미만의 압출력에서 변화는 (45℃ 열처리 전 구체화된 첨가제를 지니는 하이드로겔 조성물의 압출력) - (45℃ 열처리 후 구체화된 첨가제를 지니는 하이드로겔 조성물의 압출력)에 의해 측정되는 바와 같은 실질적으로 안정한 하이드로겔 조성물을 표시함); 및/또는 3) 멸균 후 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물의 유동학적 특성에서 변화를 결정함으로써(여기서, 0.1 미만의 tan δ 1Hz에서 변화는 (45℃ 열처리 전 구체화된 첨가제를 지니는 겔 제형의 tan δ 1 Hz) - (45℃ 열처리 후 구체화된 첨가제를 지니는 겔 제형의 tan δ 1 Hz)에 의해 측정되는 바와 같은 실질적으로 안정한 하이드로겔 조성물을 표시함) 평가될 수 있다. 이와 같이, 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물의 장기간 안정성은 45℃ 열처리 후 다음의 특징 중 하나 이상의 보유에 의해 평가된다: 선명도(투명도 및 반투명도), 균질함 및 응집력.
이 실시형태의 양태에서, 하이드로겔 조성물은, 예를 들어 약 3개월, 약 6개월, 약 9개월, 약 12개월, 약 15개월, 약 18개월, 약 21개월, 약 24개월, 약 27개월, 약 30개월, 약 33개월, 또는 약 36개월에 대해 실온에서 실질적으로 안정하다. 이 실시형태의 다른 양태에서, 하이드로겔 조성물은, 예를 들어, 적어도 3개월, 적어도 6개월, 적어도 9개월, 적어도 12개월, 적어도 15개월, 적어도 18개월, 적어도 21개월, 적어도 24개월, 적어도 27개월, 적어도 30개월, 적어도 33개월 또는 적어도 36개월 동안 실온에서 실질적으로 안정하다. 이 실시형태의 다른 양태에서, 하이드로겔 조성물은, 예를 들어, 약 3개월 내지 약 12개월, 약 3개월 내지 약 18개월, 약 3개월 내지 약 24개월, 약 3개월 내지 약 30개월, 약 3개월 내지 약 36개월, 약 6개월 내지 약 12개월, 약 6개월 내지 약 18개월, 약 6개월 내지 약 24개월, 약 6개월 내지 약 30개월, 약 6개월 내지 약 36개월, 약 9개월 내지 약 12개월, 약 9개월 내지 약 18개월, 약 9개월 내지 약 24개월, 약 9개월 내지 약 30개월, 약 9개월 내지 약 36개월, 약 12개월 내지 약 18개월, 약 12개월 내지 약 24개월, 약 12개월 내지 약 30개월, 약 12개월 내지 약 36개월, 약 18개월 내지 약 24개월, 약 18개월 내지 약 30개월, 또는 약 18개월 내지 약 36개월 동안 실온에서 실질적으로 안정하다.
본 조성물은 선택적으로 완충제, 보존제, 등장 조절제, 염, 항산화제, 삼투질 농도 조절제, 유화제, 습윤제 등을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 다른 약제학적으로 허용가능한 성분을 포함할 수 있지만, 이것으로 제한되지 않는다.
약제학적으로 허용가능한 완충제는 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물을 제조하기 위해 사용될 수 있는 완충제이며, 단, 얻어진 제제는 약제학적으로 허용가능하다. 약제학적으로 허용가능한 완충제의 비제한적 예는 아세테이트 완충제, 보레이트 완충제, 시트레이트 완충제, 중성 완충 식염수, 포스페이트 완충제 및 포스페이트 완충 식염수를 포함한다. 약제학적으로 허용가능한 완충제의 임의의 농도는 본 명세서에 개시된 약제학적 조성물을 제형화하는데 유용할 수 있으며, 단, 활성 성분의 치료적 유효량은 완충제의 이런 유효한 농도를 사용하여 회수된다. 생리적으로 허용가능한 완충제 농도의 비제한적 예는 약 0.1mM 내지 약 900mM의 범위에서 생긴다. 약제학적으로 허용가능한 완충제의 pH는 조절될 수 있으며, 단 얻어진 제제는 약제학적으로 허용가능하다. 필요하다면 산 또는 염기가 약제학적 조성물의 pH를 조절하는데 사용될 수 있다는 것이 이해된다. 임의의 완충된 pH 수준은 약제학적 조성물을 제형화하는데 유용할 수 있으며, 단, 기질 중합체 활성 성분의 치료적 유효량은 이런 효과적인 pH 수준을 사용하여 회복된다. 생리적으로 허용가능한 pH의 비제한적 예는 약 pH 5.0 내지 약 pH 8.5의 범위에서 생긴다. 예를 들어, 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물의 pH는 약 5.0 내지 약 8.0, 또는 약 6.5 내지 약 7.5, 약 7.0 내지 약 7.4, 또는 약 7.1 내지 약 7.3일 수 있다.
약제학적으로 허용가능한 보존제는 나트륨 메타바이설파이트, 나트륨 티오설페이트, 아세틸시스테인, 뷰틸화된 하이드록시아니솔 및 뷰틸화된 하이드록시톨루엔을 포함한다. 약제학적으로 허용가능한 보존제는 벤즈알코늄 클로라이드, 클로로뷰탄올, 티메로살, 페닐수은 아세테이트, 페닐수은 나이트레이트, 안정화된 옥시클로로 조성물, 예를 들어, 퓨라이트(PURITE)(등록상표)(캘리포니아주 얼바인에 소재한 앨러건 인코포레이티드) 및 킬레이트제, 예를 들어, DTPA 또는 DTPA-비스아마이드, 칼슘 DTPA, 및 CaNaDTPA-비스아마이드를 포함한다.
본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물에 유용한 약제학적으로 허용가능한 등장 조절제는, 예를 들어 염화나트륨 및 염화칼륨; 및 글라이세린과 같은 염을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 조성물은 염으로서 제공될 수 있으며, 염산, 황산, 아세트산, 락트산, 타르타르산, 말산, 숙신산 등을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 다수의 산에 의해 형성될 수 있다. 염은 대응되는 유리 염기 형태보다 수성 또는 다른 양성자성 용매 중에서 더 가용성인 경향이 있다. 이들 및 약학계에 공지된 다른 물질은 본 명세서에 개시된 약제학적 조성물에 포함될 수 있는 것으로 이해된다. 약리학적으로 허용가능한 성분의 다른 비제한적 예는, 예를 들어 Ansel, 상기 참조, (1999); Gennaro, 상기 참조, (2000); Hardman, 상기 참조, (2001); 및 Rowe, 상기 참조, (2003)에서 찾을 수 있으며, 이들 각각은 전문이 본 명세서에 참조로서 포함된다.
본 명세서의 양태는, 부분적으로 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물을 투여함으로써 개체의 연조직 병태를 치료하는 방법을 제공한다. 본 명세서에 나타내는 바와 같은 용어 "치료하는"은 연조직 불완전, 결함, 질병 및/또는 장애를 특징으로 하는 연조직 병태의 미용적 또는 임상적 증상을 개체에서 감소시키거나 또는 제거하는 것; 또는 연조직 불완전, 결함, 질병 및/또는 장애를 특징으로 하는 병태의 미용적 또는 임상적 증상의 개시를 개체에서 지연시키거나 또는 방지하는 것을 지칭한다. 예를 들어, 용어 "치료하는"은, 예를 들어, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 적어도 100%에 의해 연조직 결함, 질병 및/또는 장애를 특징으로 하는 병태의 증상을 감소시키는 것을 의미할 수 있다. 연조직 불완전, 결함, 질병 및/또는 장애를 특징으로 하는 병태를 치료하는데 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물의 유효성은 하나 이상의 미용적, 임상적 증상 및/또는 병태와 관련된 생리학적 지표를 관찰함으로써 결정될 수 있다. 연조직 불완전, 결함, 질병 및/또는 장애에서 개선은 또한 병행 치료에 대한 감소된 필요에 의해 표시될 수 있다. 당업자는 구체적 연조직 결함, 질병 및/또는 장애와 관련된 적절한 증상 또는 지표를 알 것이고, 개체가 본 명세서에 개시된 화합물 또는 조성물에 의한 치료를 위한 후보인지 여부를 결정하는 방법을 알 것이다.
본 발명에 따른 하이드로겔 조성물은 개체에게 투여된다. 개체는 전형적으로 어떤 연령, 성별 또는 인종의 인간이다. 전형적으로 연조직 질환을 치료하기 위한 통상적인 절차에 대한 후보인 임의의 개체는 본 명세서에 개시된 방법을 위한 후보이다. 노화된 피부의 징후를 경험한 피험체가 성인이라고 하더라도, 치료에 적합한 조기 노화 또는 다른 피부 병태(예를 들어, 흉터)를 경험한 피험체가 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물로 치료될 수 있다. 추가로, 현재 개시된 하이드로겔 조성물 및 방법은 작은/중간 확대, 신체 부분 또는 영역의 형상 변화 또는 윤곽 변경을 추구하는 개체에게 적용될 수 있는데, 이는 기존의 연조직 이식물 기법에 의해 기술적으로 가능하지 않거나 또는 미적으로 허용가능하지 않을 수도 있다. 시술 전 평가는 전형적으로 절차의 모든 관련있는 위험 및 이점을 개시하는 사전동의에 추가로 일상적인 이력 및 생리적 시험을 포함한다.
본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물 및 방법은 연조직 병태를 치료하는데 유용하다. 연조직 병태는 연조직 불완전, 결함, 질병 및/또는 장애를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 연조직 병태의 비제한적 예는 유방 불완전, 결함, 질병 및/또는 장애, 예를 들어 유방 불완전, 결함, 질병 및/또는 장애, 예를 들어, 유방 확대, 유방 재건, 유방 고정술, 소유방증, 흉광 저형성증, 폴란드 증후군, 캡슐 수축 및/또는 파열과 같은 이식 합병증에 기인하는 결함; 안면 불완전, 결함, 질병 및/또는 장애, 예를 들어, 안면 확대, 안면 재건, 메소세라피, 패리-롬버그 증후군, 심홍반성 루푸스, 진피 디보트(dermal divot), 흉터, 썬큰 체크(sunken check), 얇은 입술, 비강 불완전 또는 결합, 안와 뒤 불완전 또는 결함, 미간주름과 같은 안면 접힘(fold), 주름 및/또는 주름살, 비순선, 윗입술 주름, 및/또는 입꼬리 주름 및/또는 다른 윤곽 기형 또는 안면의 불완전; 목 불완전, 결함, 질병 및/또는 장애; 피부 불완전, 결함, 질병 및/또는 장애; 다른 연조직 불완전, 결함, 질병 및/또는 장애, 예를 들어, 상부 팔, 하부 팔, 손, 어깨, 등, 복부를 포함하는 몸통, 궁둥이, 상부 다리, 종아리를 포함하는 하부 다리, 발바닥을 포함하는 발, 눈, 생식기 또는 다른 신체 부분, 영역 또는 면적의 확대 또는 재구성, 또는 이들 신체 부분, 영역 또는 면적에 영향을 미치는 질병 또는 장애; 요실금, 변실금, 다른 형태의 실금; 및 위식도 역류 질병(gastroesophageal reflux disease: GERD)을 포함한다. 본 명세서에 나타내는 바와 같은 용어 "메소테라피"는 표피, 진피-표피 접합 및/또는 진피 내로 작은 다수의 방울로서 투여되는 작용제의 표피내, 진피내 및/또는 피하 주사를 수반하는 피부의 비수술적 미용적 치료 기법을 지칭한다.
본 명세서에 개시된 방법 중 어떤 것에 의해 사용되는 하이드로겔 조성물의 양은 전형적으로 요망되는 변경 및/또는 개선, 요망되는 연조직 질환 증상의 감소 및/또는 제거, 개체 및/또는 의사에 의해 요망되는 임상적 및/또는 미용적 효과 및 치료되는 신체 부분 또는 영역에 기반하여 결정될 것이다. 조성물 투여의 유효성은 다음의 임상적 및/또는 미용적 측정 중 하나 이상에 의해 나타낼 수 있다: 변경되고/되거나 개선된 연조직 형상, 변경되고/되거나 개선된 연조직 크기, 변경되고/되거나 개선된 연조직 윤곽, 변경되고/되거나 개선된 조직 기능, 조직 내부성장물 및/또는 새로운 콜라겐 침착, 조성물의 지속된 생착, 개선된 환자 만족 및/또는 삶의 질, 및 이식가능한 외래 물질의 감소된 사용.
안면 연조직을 치료하는데 조성물 및 방법의 유효성은 다음의 임상적 및/또는 미용적 측정 중 하나 이상에 의해 나타낼 수 있다: 입술, 볼 또는 눈 영역의 증가된 크기, 형상 및/또는 윤곽과 같은 안면 특징의 증가된 크기, 형상 및/또는 윤곽; 입술, 볼 또는 눈 영역 형상의 변경된 크기, 형상 및/또는 윤곽과 같은 안면 특징의 변경된 크기, 형상 및/또는 윤곽; 피부에서 주름살, 접힘 또는 주름의 감소 또는 제거; 피부에서 주름살, 접힘 또는 주름에 대한 저항; 피부의 재수화; 피부에 대해 증가된 탄성; 피부 거칠기의 감소 또는 제거; 증가되고/되거나 개선된 피부 긴장; 튼살 또는 자국의 감소 또는 제거; 증가되고/되거나 개선된 피부톤, 반짝임, 밝기 및/또는 광채; 증가되고/되거나 개선된 피부색, 피부 창백함의 감소 또는 제거; 조성물의 지속; 감소된 부작용; 개선된 환자 만족도 및/또는 삶의 질.
또 다른 예로서, 요실금 과정에 대해, 괄약근 지지를 위한 조성물 및 방법의 유효성은 다음의 임상적 측정 중 하나 이상에 의해 나타낼 수 있다: 감소된 실금 주기, 지속된 생착, 개선된 환자 만족도 및/또는 삶의 질 및 이식가능한 외래 필러의 감소된 사용.
이 실시형태의 양태에서, 투여된 하이드로겔 조성물의 양은, 예를 들어, 약 0.01g, 약 0.05g, 약 0.1g, 약 0.5g, 약 1g, 약 5g, 약 10g, 약 20g, 약 30g, 약 40g, 약 50g, 약 60g, 약 70g, 약 80g, 약 90g, 약 100g, 약 150g 또는 약 200g이다. 이 실시형태의 다른 양태에서, 투여된 하이드로겔 조성물의 양은, 예를 들어 약 0.01g 내지 약 0.1g, 약 0.1g 내지 약 1g, 약 1g 내지 약 10g, 약 10g 내지 약 100g, 또는 약 50g 내지 약 200g이다. 이 실시형태의 또 다른 양태에서, 투여된 하이드로겔 조성물의 양은, 예를 들어 약 0.01㎖, 약 0.05㎖, 약 0.1㎖, 약 0.5㎖, 약 1㎖, 약 5㎖, 약 10㎖, 약 20㎖, 약 30㎖, 약 40㎖, 약 50㎖, 약 60㎖, 약 70g, 약 80㎖, 약 90㎖, 약 100㎖, 약 150㎖, 또는 약 200㎖이다. 이 실시형태의 다른 양태에서, 투여된 하이드로겔 조성물의 양은, 예를 들어 약 0.01㎖ 내지 약 0.1㎖, 약 0.1㎖ 내지 약 1㎖, 약 1㎖ 내지 약 10㎖, 약 10㎖ 내지 약 100㎖, 또는 약 50㎖ 내지 약 200㎖이다.
치료의 지속기간은 전형적으로 개체 및/또는 의사에 의해 요망되는 미용적 및/또는 임상적 효과 및 치료되는 신체 부분 또는 영역에 기반하여 결정될 것이다. 이 실시형태의 양태에서, 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물의 투여는, 예를 들어, 약 6개월, 약 7개월, 약 8개월, 약 9개월, 약 10개월, 약 11개월, 약 12개월, 약 13개월, 약 14개월, 약 15개월, 약 18개월, 또는 약 24개월 동안 연조직 병태를 치료할 수 있다. 이 실시형태의 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물의 투여는, 예를 들어 적어도 6개월, 적어도 7개월, 적어도 8개월, 적어도 9개월, 적어도 10개월, 적어도 11개월, 적어도 12개월, 적어도 13개월, 적어도 14개월, 적어도 15개월, 적어도 18개월, 또는 적어도 24개월 동안 연조직 병태를 치료할 수 있다. 이 실시형태의 다른 양태에서, 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물의 투여는, 예를 들어, 약 6개월 내지 약 12개월, 약 6개월 내지 약 15개월, 약 6개월 내지 약 18개월, 약 6개월 내지 약 21개월, 약 6개월 내지 약 24개월, 약 9개월 내지 약 12개월, 약 9개월 내지 약 15개월, 약 9개월 내지 약 18개월, 약 9개월 내지 약 21개월, 약 6개월 내지 약 24개월, 약 12개월 내지 약 15개월, 약 12개월 내지 약 18개월, 약 12개월 내지 약 21개월, 약 12개월 내지 약 24개월, 약 15개월 내지 약 18개월, 약 15개월 내지 약 21개월, 약 15개월 내지 약 24개월, 약 18개월 내지 약 21개월, 약 18개월 내지 약 24개월, 또는 약 21개월 내지 약 24개월 동안 연조직 병태를 치료할 수 있다.
본 명세서의 양태는, 부분적으로 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물을 투여하는 단계를 제공한다. 본 명세서에 나타내는 바와 같은 용어 "투여하는"은 임상적으로, 치료적으로 또는 실험적으로 유리한 결과를 잠재적으로 초래하는 개체에 대해 본 명세서에 개시된 조성물을 제공하는 어떤 전달 메커니즘을 의미한다. 개체에 조성물을 투여하기 위해 사용되는 실제 전달 메커니즘은 피부 병태의 유형, 피부 병태의 위치, 피부 병태의 원인, 피부 병태의 중증도, 요망되는 경감 정도, 사용되는 특정 조성물, 사용되는 특정 조성물의 배설 속도, 사용되는 특정 조성물의 약동학, 사용되는 특정 조성물에 포함된 다른 화합물의 특성, 특정 투여 경로, 특정 특징, 개체의 이력 및 위험 인자, 예를 들어 연령, 체중, 일반적 건강상태 등 또는 이들의 임의의 조합을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 인자를 고려함으로써 당업자에 의해 결정될 수 있다. 이 실시형태의 양태에서, 본 명세서에 개시된 조성물은 주사에 의해 개체의 피부 영역에 투여된다.
개개 환자에 대한 하이드로겔 조성물의 투여 경로는 전형적으로 개체 및/또는 의사에 의해 요망되는 미용적 및/또는 임상적 효과 및 치료되는 신체 부분 또는 영역에 기반하여 결정될 것이다. 본 명세서에 개시된 조성물은 국소적으로 또는 직접적 외과적 이식에 의해 바늘이 있는 주사기, 피스톨(예를 들어, 수공-압축 피스톨), 카테터를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 당업자에게 공지된 임의의 수단에 의해 투여될 수 있다. 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물은, 예를 들어, 진피 영역 또는 피하 영역과 같은 피부 영역 내로 투여될 수 있다. 예를 들어 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물은 약 0.26㎜ 내지 약 0.4㎜의 직경 및 약 4㎜ 내지 약 14㎜ 범위의 길이를 지니는 바늘을 이용하여 주사될 수 있다. 대안적으로, 바늘은 21G 내지 32G일 수 있고, 약 4㎜ 내지 약 70㎜의 길이를 가질 수 있다. 바람직하게는, 바늘은 1회용 바늘이다. 바늘은 주사기, 카테터 및/또는 피스톨과 조합될 수 있다.
추가로, 본 명세서에 개시된 조성물은 1회 또는 다회에 걸쳐 투여될 수 있다. 궁극적으로, 사용된 시간은 품질 관리 표준을 따를 것이다. 예를 들어, 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물은 며칠 또는 몇 주 떨어진 작업 시간으로 1회 이상의 몇 회의 작업 시간에 투여될 수 있다. 예를 들어, 개체는 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7일마다 또는 1, 2, 3 또는 4주마다 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물이 투여될 수 있다. 개체에 대한 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물의 투여는 매달 또는 2개월 기준으로 또는 3, 6, 9 또는 12개월마다 투여될 수 있다.
본 명세서의 양태는, 부분적으로 진피 영역을 제공한다. 본 명세서에 나타내는 바와 같은 용어 "진피 영역"은 표피-진피 접합부 및 깊지 않은 진피(유두 영역) 및 깊은 진피(망상 영역)를 포함하는 진피를 포함하는 피부의 영역을 지칭한다. 피부는 3가지의 주된 층으로 구성된다: 방수를 제공하고, 감염에 대한 장벽으로서 작용하는 표피; 피부의 외지에 대한 장소로서 작용하는 진피; 및 하피(피하 지방층). 표피는 혈관을 함유하지 않으며, 진피로부터 확산에 의해 영양분이 공급된다. 표피를 구성하는 세포의 주된 유형은 케라틴세포, 멜라닌 세포, 랑게르한스 세포 및 메르켈 세포이다.
진피는 결합 조직으로 이루어지고, 응력 및 변형으로부터 신체의 충격을 완화하는 표피 밑 피부층이다. 진피는 최하부 막에 의해 표피에 단단하게 결합된다. 또한 접촉 및 열의 감각을 제공하는 다수의 기계적 수용체/신경 말단을 은닉한다. 이는 모공, 땀샘, 피지샘, 아포크린샘, 림프관 및 혈관을 함유한다. 진피 내 혈관은 그 자체의 세포로부터 뿐만 아닐 표피의 기저층으로부터 영양분 및 노폐물 제거를 제공한다. 진피는 구조적으로 2개의 영역으로 나뉜다: 유두 영역으로 불리는 표피에 인접한 초임계 영역 및 망상 영역으로 알려진 더 깊고 두꺼운 영역.
유두 영역은 헐거운 세망(areolar) 조직 결합 조직으로 구성된다. 이는 표피 쪽으로 연장된 유두로 불리는 손가락형 돌출부로 명명된다. 유두는 표피와 서로 맞물리는 "울퉁불퉁한" 표면을 지니고, 피부의 두 층 사이의 결합을 강화하는 진피를 제공한다. 망상 영역은 유두 영역보다 깊은 곳에 놓이며, 보통 훨씬 두껍다. 이는 밀집한 불규칙적 결합 조직으로 구성되며, 그것 전체적으로 엮이는 콜라겐성, 탄성 및 망상 섬유의 밀집한 집중으로부터 그것의 명칭을 얻는다. 이들 단백질 섬유는 그것의 강도, 신장성 및 탄성의 특성을 진피에 제공한다. 또한 망상 영역 내에 모근, 피지선, 땀샘, 수용체, 손발톱 및 혈관이 위치된다. 문신 잉크는 진피에 보유된다. 또한 임신으로부터의 튼살은 진피에 위치된다.
하피는 진피 밑에 놓인다. 그것의 목적은 기저 뼈 및 근육의 진피 영역을 붙일 뿐만 아니라 혈관 및 신경을 그것에 공급하는 것이다. 이는 헐거운 결합 조직 및 엘라스틴으로 이루어진다. 주된 세포 유형은 섬유아세포, 대식세포 및 지방세포이다(하피는 체지방의 50%를 함유한다). 지방은 신체에 대한 패드 및 절연체로서 작용한다.
이 실시형태의 양태에서, 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물은 진피 영역 또는 피하조직 영역 내로 주사에 의해 개체의 피부 영역에 투여된다. 이 실시형태의 양태에서, 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물은, 예를 들어 표피-진피 접합 영역, 유두 영역, 망상 영역, 또는 이들의 임의의 조합 내로 주사에 의해 생체의 진피 영역에 투여된다.
유리하게는, 본 조성물의 일부는, 예를 들어 환자의 얇은 피부 영역에서 잔주름을 감소시키는데 특히 유용하고 효과적이다. 예를 들어, 본 명세서의 다른 곳에서 기재되는 바와 같은 진피 필러 조성물을 약 1㎜ 이하 깊이에서 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 잔주름 치료를 위한 방법이 제공된다.
본 명세서의 다른 양태는 부분적으로 피부 질환을 겪고 있는 개체에 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물을 투여하는 단계를 포함하되, 조성물의 투여는 피부 질환을 개선시키고, 이에 의해 피부 질환을 치료한다. 이 실시형태의 양태에서, 피부 질환은 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물을 피부 탈수를 겪고 있는 개체에 투여하는 단계를 포함하되, 조성물의 투여는 피부를 재수화시키고, 이에 의해 피부 탈수를 치료한다. 이 실시형태의 다른 양태에서, 피부 탄성의 결여를 치료하는 방법은 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물 피부 탄성 결여를 겪고 있는 개체에 투여하는 단계를 포함하되, 조성물의 투여는 피부 탄성을 증가시키고, 이에 의해 피부 탄성의 결여를 치료한다. 이 실시형태의 또 다른 양태에서, 피부 거칠기를 치료하는 방법은 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물을 피부 거칠기를 겪고 있는 개체에 투여하는 단계를 포함하되, 조성물의 투여는 피부 거칠기를 감소시키고, 이에 의해 피부 거칠기를 치료한다. 이 실시형태의 또 다른 양태에서, 피부 거칠기의 결여를 치료하는 방법은 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물을 피부 긴장의 결여를 겪고 있는 개체에 투여하는 단계를 포함하되, 조성물의 투여는 피부 긴장을 만들고, 이에 의해 피부 긴장의 결여를 치료한다.
이 실시형태의 추가 양태에서, 피부 튼살 또는 자국을 치료하는 방법은 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물을 피부 튼살 또는 자국을 겪고 있는 개체에 투여하는 단계를 포함하되, 조성물의 투여는 피부 튼살 또는 자국을 감소시키거나 또는 제거하고, 이에 의해 피부 튼살 또는 자국을 치료한다. 이 실시형태의 다른 양태에서, 피부의 창백함을 치료하는 방법은 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물을 피부의 창백함을 겪고 있는 개체에 투여하는 단계를 포함하되, 조성물의 투여는 피부톤 또는 빛을 증가시키고, 이에 의해 피부의 창백함을 치료한다. 이 실시형태의 다른 양태에서, 피부 주름살을 치료하는 방법은 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물을 피부 주름살을 겪고 있는 개체에게 투여하는 단계를 포함하되, 조성물의 투여는 피부 주름살을 감소시키거나 또는 제거하고, 이에 의해 피부 주름살을 치료한다. 이 실시형태의 또 다른 양태에서, 피부 주름살을 치료하는 방법은 본 명세서에 개시된 하이드로겔 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하되, 조성물의 투여는 피부 주름살에 대한 피부 저항성을 만들고, 이에 의해 피부 주름살을 치료한다.
일부 실시형태에서, 진피 필러는 지속된 생체이용가능성을 가진다. 예를 들어, 인간의 피부내로 도입될 때(예를 들어, 얼굴 공간의 연조직 결함을 고치기 위해 인간에게 진피내로 또는 피하로), 적어도 약 1개월 내지 약 20개월 이상 인간에게 아스콜브산(또는 다른 비타민)을 방출하는 진피 필러가 제공된다.
예를 들어, 필러 지속과 함께 지속된 비타민 C 효능을 예측하기 위해, 컨쥬게이트된 정도에 대한 평가가 만들어진다. 이 평가는 에터화를 통한 HA에 대한 AA2G 컨쥬게이션의 제형화에 기반하였다. 제형은 생리적 조건 하에 안정하지만, 세포막에 부착된 α-글루코시다제에 의해 아스콜브산(AsA)의 방출시키는 것을 시작한다.α-글루코시다제가 세포막에 부착된다는 사실에 기인하여 필러/세포 경계면에서 AsA의 방출이 일어난다. HA-AA2G로부터 AsA의 추가적인 방출은 섬유아세포에 이용가능한 AA2G를 만들기 위해 HA 분해를 수반할 것이다. 따라서 AsA의 방출은 AA2G 컨쥬게이션 정도 및 HA의 지속기간에 의존한다. 대략 5㏖%의 컨쥬게이션 정도를 지니는 겔은 적어도 1개월, 예를 들어 3 내지 5개월의 기간에 활성 비타민 C를 방출할 수 있었고; 10㏖% 컨쥬게이션 정도를 지니는 겔은 6 내지 8개월까지의 기간에 활성 비타민 C를 방출시킬 수 있었으며; 15㏖% 컨쥬게이션 정도를 지니는 겔은 10~ 개월까지의 기간에 활성 비타민 C를 방출시킬 수 있고; 30㏖%는 1년 반까지 방출시킬 수 있다.
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본 발명의 실시형태에서, 스타-PEG 에폭사이드와 가교된 하이알루론산을 포함하고 약 3㏖% 내지 약 40㏖%의 컨쥬게이션 정도로 하이알루론산에 컨쥬게이트된 비타민 C 유도체(예를 들어, AA2G (아스콜브산 2-글루코사이드), 비타겐(3-아미노프로필-L-아스코빌 포스페이트) 및 SAP(나트륨 아스코빌 포스페이트) 중 하나)를 포함하는 진피 필러가 제공된다.
이 진피 필러의 제조방법은 4-암 에폭사이드(AA2G-4 암 에폭사이드), 미반응 4-암 에폭사이드 및 유리 AA2G에 의해 AA2G를 함유하는 조성물을 달성하기에 적합한 반응 온도 및 반응시간의 비에서 펜타에리트리톨 글라이시달 에터(Star-PEG 에폭사이드)를 아스콜브산 2-글루코사이드(AA2G)와 반응시키는 단계를 포함한다. 4 암(arm) 에폭사이드 캡핑된 AA2G(AA2G-4 암 에폭사이드)는 에폭실기를 통해 하이알루론산에 컨쥬게이트된다. 미반응 4 암 에폭사이드는 하이알루론산을 가교하기 위한 가교제로서 그리고 추가로 AA2G를 컨쥬게이트하기 위한 컨쥬게이션 작용제로서 작용한다.
본 발명의 다른 실시형태에서, BDDE와 가교된 하이알루론산을 포함하고, 3㏖% 내지 약 10㏖%의 컨쥬게이션 정도로 하이알루론산에 컨쥬게이트된 비타민 C 유도체(예를 들어, AA2G (아스콜브산 2-글루코사이드), 비타겐(3-아미노프로필-L-아스코빌 포스페이트) 및 SAP(아스코빌 인산나트륨) 중 하나를 갖는 진피 필러가 제공된다.
이 진피 필러의 제조방법은 BDDE(AA2G-BDDE), 미반응 BDDE 및 유리 AA2G에 의해 캡핑된 AA2G를 함유하는 조성물을 달성하기에 적합한 반응 온도 및 반응 시간의 비에서 BDDE를 아스콜브산 2-글루코사이드(AA2G)와 반응시키는 단계를 포함한다. BDDE 캡핑 AA2G(AA2G-BDDE)는 에폭실 기를 통해 하이알루론산에 컨쥬게이트된다. 미반응 BDDE는 하이알루론산을 가교하기 위한 가교제로서, 그리고 AA2G를 추가로 컨쥬게이트하기 위한 컨쥬게이션 작용제로서 작용한다.
도 9는 AA2G-PBS 용액으로부터 AsA 방출에 대한 α-글루코시다제 농도의 효과를 나타내는 표이다. AA2G의 AsA로 전환은 α-글라이코시다제의 농도에 의존한다. α-글라이코시다제 농도가 겔의 그램 당 6.3 단위일 때, 15분 후 거의 완전하게 AA2G는 AsA로 전환된다. α-글라이코시다제 농도가 겔의 그램 당 4.7 단위일 때, AA2G는 AsA로 완전하게 전환되는 데 30분이 걸린다. 추가로 감소된 α-글라이코시다제 농도는 AA2G의 AsA로 느린 전환을 야기하였다.
도 10은 본 발명에 따른 컨쥬게이트된 진피 필러로부터 유리 AsA의 방출 프로파일(지속방출)의 표현(㏖% 대 반응시간에서 AA2G 전환)을 도시한 도면; AA2G는 40분에 AA2G/HA 혼합에서 AsA로 완전히 전환된다. AA2H/HA 컨쥬게이트는 AsA로 AA2G 전환의 시간 의존도를 나타내었다.
도 11a 및 도 11b는 본 발명에 따른 다양한 진피 필러에 대한 추가적인 방출 데이터를 나타낸다. 더 구체적으로는, HA-AA2G 겔에서 AA2G의 AsA로 전환은 α-글라이코시다제 농도에 의존한다. 높은 α-글라이코시다제 농도는 AA2G의 AsA로 빠른 전환을 야기하였다. 주어진 α-글라이코시다제 농도에 대해, 상이한 제형은 AsA에 대한 AA2G의 상이한 프로파일을 나타내었다.
본 발명의 일 양태에서, 잔주름의 외관, 예를 들어 피부에서 상대적으로 깊지 않은 주름선, 예를 들어 이하에 제한되는 것은 아니지만, 눈가 잔주름, 눈물고랑 영역, 이마, 눈주위, 미간주름 등을 치료하고, 제거하는데 특히 유효한 진피 필러가 제공된다.
진피 필러가 주사된 피부 부위에서 청색 변색의 외관인, (틴들 효과)는 일부 진피 필러 환자에 의해 경험되는 중요한 부작용이다. 틴들 효과는 깊지 않은 잔주름 주름살에 대해 치료되는 환자에서 더 흔하다. 틴들효과로부터 어떤 청색 변색을 초래하는 일 없이 상대적으로 얇은 피부의 영역에서조차 잔주름 및 주름살을 치료하기 위해 깊지 않게 주사될 수 있는 장기 지속되는 반투명 필러를 제공하는 본 발명의 실시형태가 개발되었다. 잔주름 또는 깊지 않은 주름살은 일반적으로 피부가 가장 얇은, 즉, 피부가 1㎜ 미만의 진피 두께를 갖는 얼굴 영역에서 전형적으로 발견되는 피부(이마, 측면 안각, 홍순 경계/윗입술 주름)에서 해당 주름살 또는 주름선이 되는 것으로 이해된다. 이마 상에서, 평균 진피 두께는 정상 피부에 대해 약 0.95㎜ 및 주름살 피부에 대해 약 0.81㎜이다. 측면 안각 주위의 진피는 심지어 더 얇다(예를 들어, 정상 피부에 대해 약 0.61㎜, 주름살 피부에 대해 약 0.41㎜). 30 또는 32 게이지 니들의 평균 외부 직경(잔주름 겔 적용을 위해 전형적으로 사용되는 니들)은 약 0.30 내지 약 0.24㎜이다.
본 발명은 틴들 효과를 야기하지 않는 본 명세서의 다른 곳에서 기재된 바와 같은 진피 필러 조성물을 제공한다. 예를 들어, 본 발명의 조성물은 가교 성분과 가교된 하이알루론산 성분, 가교 성분 이외의 첨가제를 포함하되; 상기 조성물은 상기 첨가제가 없는 것을 제외하고 실질적으로 동일한 조성물에 대해 환자의 진피 영역 내로 투여될 때 감소된 틴들 효과를 나타내는 것인, 진피 필러 조성물. 조성물을 실질적으로 광학적으로 투명할 수 있다.
일 실시형태에서, 첨가제는 비타민 C 유도체, 예를 들어 본 명세서의 다른 곳에 기재된 바와 같은 하이알루론산에 화학적으로 컨쥬게이트될 수 있는 AA2G이다.
일부 실시형태에서, 가교 성분은 BDDE이고, 컨쥬게이션 정도는 약 3㏖% 내지 약 10㏖%, 또는 15㏖%까지 또는 초과이다. 일부 실시형태에서, 조성물은 환자에 주사시 편안함을 제공하는데 적합한 양으로 마취제, 예를 들어, 리도카인을 추가로 포함한다.
환자의 피부에서 잔주름을 치료하는 방법이 또한 제공된다. 해당 방법은 일반적으로 환자의 피부에 본 명세서에 기재된 바와 같은 조성물을 도입하는 단계를 포함한다. 예를 들어, 조성물은 하이알루론산 성분, 하이알루론산을 가교하는 가교 성분 및 가교 성분 이외의 첨가제의 혼합물을 포함하며, 조성물은 실질적으로 광학적으로 투명하되; 진피 필러 조성물은 첨가제가 없는 것을 제외하고 실질적으로 동일한 조성물에 대해 감소된 틴들 효과를 나타낸다.
본 발명의 일부 실시형태에서, 조성물은 EDC 화학을 사용하여 다이 또는 멀다아민 가교제와 가교된 하이알루론산 성분을 포함한다. 예를 들어, 가교제는 HMDA일 수 있다.
본 발명의 특정 실시형태에서, 가교제는 HMDA이되, 조성물은 약 70㎩까지의 G', 약 0.65 내지 약 0.75의 G"/G', 약 24N 이하의 압출력 및 약 24㎎/g 내지 약 25㎎/g의 최종 HA 농도를 가진다.
본 발명의 특정 실시형태에서, 첨가제가 HA-AA2G 컨쥬게이트 또는 HA-비타겐 컨쥬게이트이되, 컨쥬게이션 정도는 약 3㏖% 내지 약 10㏖%, 또는 약 15㏖%까지, 또는 약 40㏖%까지이다. 이들 조성물은 적어도 약 30㎩, 더 바람직하게는 적어도 약 40㎩, 내지 약 100㎩의 G', 약 0.30 내지 약 0.50의 G"/G', 약 27N 이하의 압출력 및 약 24㎎/g 내지 약 25㎎/g의 최종 HA 농도를 가질 수 있다.
본 개시내용의 목적을 위해, 본 명세서에 사용되는 바와 같은 "컨쥬게이션 정도"는 하이알루론산의 반복 단위(예를 들어, HA 다이머)에 대한 컨쥬게이트제, 예를 들어 AA2G의 몰 백분율로서 정의된다. 따라서, 10㏖% 컨쥬게이션 정도는 모든 100HA 반복 단위가 10개의 컨쥬게이트된 AA2G를 함유한다는 것을 의미한다. 컨쥬게이션 정도는 이하의 실시예 2에서 예시되는 방법 또는 당업자에게 공지된 다른 방법을 사용하여 계산될 수 있다.
실시예
실시예 1: 가교제로서 BDDE를 사용하는 HA 겔에 가교된 AA2G 컨쥬게이션
400.6㎎의 저분자량 하이알루론산(LMW HA)을 ~30분 동안 주사기에서 1802㎎의 1 wt% NaOH 중에서 수화시켰다. 800.7㎎의 AA2G를 바이알에 넣은 후, 713.7㎎의 BDDE 및 1416.8㎎의 10% NaOH를 넣었다. 상기 용액(pH >12)을 ~20분 동안 50℃ 수욕에서 반응시킨 후, 수화된 HA를 첨가하였다. 첨가 후, 혼합물을 2개의 주사기 사이에 앞뒤로 통과시킴으로써 ~20회 혼합하였다. 혼합한 페이스트를 바이알 및 50℃ 수욕에 ~2.5 시간 동안 넣었다. 223.5㎎의 12M HCl을 9.05g PBS, pH7.4에 첨가하였다. ~2.5 시간 후, HA-AA2G 겔이 형성되었다. 겔을 조각으로 절단하였고, HCl-PBS 용액을 그것에 첨가하였다. 겔을 중화시켰고, 오비탈쉐이커 상에서 밤새 팽창시켰다. 겔을 ~60㎛ 스크린을 통해 크기를 바꾸었고, 2개 주사기 사이에 앞뒤로 통과시킴으로써 ~20회 혼합하였다. 겔을 15,000 MWCO RC 투석 백 내에 넣었고, PBS, pH7.4 완충제 중에서 투석하였다. PBS 완충제의 빈번한 변화와 함께 ~185시간 동안 투석을 진행하였다. 투석 후, 겔을 주사기에 넣었고, 4℃ 냉장고에 저장하였다.
실시예 2: AA2G 컨쥬게이션의 결정
실시예 1에 기재한 바와 같은 겔의 중량을 투석 직전, 및 투석 후 기록하였다. 투석 후 겔은 ~1g/㎖인 것으로 추정하였다. > 8시간 당 1ℓ의 PBS에서 주목할 만한 AA2G가 생성되지 않는 지점에서 투석을 중단하였다. UV/Vis 분광광도계(Nanodrop 2000C, 써모사이언티픽(ThermoScientific))을 사용하여 260㎚에서 AA2G를 측정하였다. 2% HA 중의 AA2G의 상이한 농도를 사용하여 AA2G의 교정 곡선을 계산하였다(A@260㎚ = 1.4838 [AA2G(mM)])
투석 후 HA의 중량: HA의 시작 중량 x (투석 전 실제 중량/이론적 중량)
투석 후 AA2G의 m㏖: 식(A@260㎚ = 1.4838 [AA2G(mM)])에서 투석 후 260㎚에서 흡광도를 놓음.
AA2G에서 컨쥬게이션: (AA2G의 m㏖/HA의 m㏖)x100%
실시예 1에 기재되는 바와 같이 겔에서 AA2G 컨쥬게이션 정도는 14.7㏖%이다.
실시예 3: 겔 유동학적 특성의 결정
진동 평행판 유동계(안톤 파르(Anton Paar), 피시카(Physica) MCR 301)를 사용하여 실시예 1에서 얻은 겔의 특성을 측정하였다. 사용한 플레이트의 직경은 25㎜였다. 플레이트 사이의 갭을 1㎜에서 설정하였다. 각 측정을 위해, 일정 변형률에서 주파수 스윕을 우선 실행한 후 고정된 주파수에서 변형 스윕을 실행하였다. G'(저장 탄성률)를 1% 변형에서 변형 스윕 곡선으로부터 얻었다. 값은 겔에 대해 1450㎩였다.
실시예 4: 가변 컨쥬게이션 정도 및 겔 유동학적 특성을 지니는 가교제로서 BDDE를 사용하는 가교된 HA 겔에 대한 AA2G 컨쥬게이션
절차는 실시예 1에서 기재한 것과 유사하였다. 컨쥬게이션 정도는 가교제 대 HA 및 AA2G ㏖ 비를 조절함으로써 변형시킨다. 겔 특성을 실시예 3에서 기재한 바와 같이 측정하였다. 세부사항은 다음과 같다:
400.8㎎의 LMW HA를 ~30분 동안 주사기 내 1752.1㎎의 1% NaOH 중에서 수화시켰다. 800.3㎎의 AA2G를 바이알 내에 넣은 후 354.1㎎의 BDDE 및 1402.0㎎의 10% NaOH를 넣었다. 상기 용액(pH >12)을 ~20분 동안 50℃ 수욕에서 반응시킨 후, 수화된 HA를 첨가하였다. 첨가 후, 혼합물을 2개의 주사기 사이에 앞뒤로 통과시킴으로써 ~20회 혼합하였다. 혼합한 페이스트를 바이알 및 50℃ 수욕에 ~2.5 시간 동안 넣었다. 140.9㎎의 12M HCl을 9.0053g PBS, pH7.4에 첨가하였다. ~2.5 시간 후, HA-AA2G 겔이 형성되었다. 겔을 조각으로 절단하였고, HCl-PBS 용액을 그것에 첨가하였다. 겔을 중화시켰고, 오비탈쉐이커 상에서 밤새 팽창시켰다. 겔을 ~60㎛ 스크린을 통해 크기를 바꾸었고, 2개 주사기 사이에 앞뒤로 통과시킴으로써 ~20회 혼합하였다. 겔을 15,000 MWCO RC 투석 백 내에 넣었고, PBS, pH7.4 완충제 중에서 투석하였다. PBS 완충제의 빈번한 변화와 함께 ~164.5시간 동안 투석을 진행하였다. 투석 후, 겔을 주사기에 넣었고, 4℃ 냉장고에 저장하였다. 컨쥬게이션 정도는 13%이다. 겔 저장 탄성률(G')은 803㎩이다.
실시예 5: 가교제로서 BDDE를 사용하는 가교된 HA 겔에 AA2G 컨쥬게이션, 컨쥬게이션 정도는 5.3%이고, G'는 ~ 300㎩이다.
400.3㎎의 LMW HA를 ~30분 동안 주사기 내 3002.0㎎의 1% NaOH 중에서 수화시켰다. 800.5㎎의 AA2G를 바이알 내에 넣은 후 264.3㎎의 BDDE 및 1100.0㎎의 10% NaOH를 넣었다. 상기 용액(pH >12)을 ~20분 동안 50℃ 수욕에서 반응시킨 후, 수화된 HA를 첨가하였다. 첨가 후, 혼합물을 2개의 주사기 사이에 앞뒤로 통과시킴으로써 ~20회 혼합하였다. 혼합한 페이스트를 바이알 및 50℃ 수욕에 ~2.5 시간 동안 넣었다. 104.2㎎의 12M HCl을 8.5128g PBS, pH7.4에 첨가하였다. ~2.5시간 후, HA-AA2G 겔이 형성되었고, HCl-PBS 용액을 그것에 첨가하였다. 겔을 중화시키고, 오비탈쉐이커 상에서 주말(~55시간)에 걸쳐 팽창시켰다. 겔을 ~60㎛ 스크린을 통해 크기를 바꾸었고, 2개 주사기 사이에 앞뒤로 통과시킴으로써 ~20회 혼합하였다. 겔을 15,000 MWCO RC 투석 백 내에 넣었고, PBS, pH7.4 완충제 중에서 투석하였다. PBS 완충제의 빈번한 변화와 함께 ~114시간 동안 투석을 진행하였다. 투석 후, 겔을 주사기에 넣었고, 4℃ 냉장고에 저장하였다. 컨쥬게이션 정도 및 겔 유동학적 특성을 실시예 2 및 3에 기재한 바와 같은 절차에서 측정한다. 컨쥬게이션 정도는 5.3%이다. 겔 저장률(G')은 ~300㎩이다.
실시예 6: 가교제로서 스타-PEG 에폭사이드를 사용하는 가교된 HA 겔에 대한 AA2G 컨쥬게이션, 컨쥬게이션 정도는 29.4%이고, G'는 ~ 235㎩이다.
200.4㎎의 LMW HA를 ~30분 동안 주사기 내 2000㎎의 1% NaOH 중에서 수화시켰다. 400㎎의 AA2G를 바이알 내에 넣은 후 312.7㎎의 스타-PEG 에폭사이드 및 1026.5㎎㎎의 10% NaOH를 넣었다. 상기 용액을 ~20분 동안 50℃ 수욕에서 반응시킨 후, 수화된 HA에 첨가하였다. 첨가 후, 혼합물을 2개의 주사기 사이에 앞뒤로 통과시킴으로써 ~20회 혼합하였다. 혼합한 페이스트를 바이알 및 50℃ 수욕에 ~2.5 시간 동안 넣었다. 187.4㎎의 12M HCl을 3.034g PBS, pH7.4에 첨가하였다. ~2.5시간 후, HA-AA2G 겔이 형성되었고, HCl-PBS 용액을 그것에 첨가하였다. 겔을 중화시키고, 오비탈쉐이커 상에서 주말(~68시간)에 걸쳐 팽창시켰다. 겔을 ~60㎛ 스크린을 통해 크기를 바꾸었고, 2개 주사기 사이에 앞뒤로 통과시킴으로써 ~20회 혼합하였다. 겔을 15,000 MWCO RC 투석 백 내에 넣었고, PBS, pH7.4 완충제 중에서 투석하였다. PBS 완충제의 빈번한 변화와 함께 ~95시간 동안 투석을 진행하였다. 투석 후, 겔을 주사기에 넣었고, 4℃ 냉장고에 저장하였다. 컨쥬게이션 정도 및 겔 유동학적 특성을 실시예 2 및 3에 기재한 바와 같은 절차에서 측정한다. 컨쥬게이션 정도는 29.4%이다. 겔 저장 탄성률(G')은 ~235㎩이다.
실시예 7: 가교제로서 스타-PEG 에폭사이드를 사용하는 가교된 HA 겔에 대한 AA2G 컨쥬게이션, 컨쥬게이션 정도는 27.8%이고, G'는 ~ 363㎩이다.
200.3㎎의 LMW HA를 ~30분 동안 주사기 내 2000㎎의 1% NaOH 중에서 수화시켰다. 400.2㎎의 AA2G를 바이알 내에 넣은 후 313.4㎎의 스타-PEG 에폭사이드 및 1022.6㎎㎎의 10% NaOH를 넣었다. 상기 용액을 수화된 HA에 첨가하였다. 첨가 후, 혼합물을 2개의 주사기 사이에 앞뒤로 통과시킴으로써 ~20회 혼합하였다. 혼합한 페이스트를 바이알 및 50℃ 수욕에 ~2.5 시간 동안 넣었다. 196.5㎎의 12M HCl을 3.016g PBS, pH7.4에 첨가하였다. ~2.5시간 후, HA-AA2G 겔이 형성되었고, HCl-PBS 용액을 그것에 첨가하였다. 겔을 중화시켰고, 오비탈쉐이커 상에서 밤새(~24시간) 팽창시켰다. 겔을 ~60㎛ 스크린을 통해 크기를 바꾸었고, 2개 주사기 사이에 앞뒤로 통과시킴으로써 ~20회 혼합하였다. 겔을 15,000 MWCO RC 투석 백 내에 넣었고, PBS, pH7.4 완충제 중에서 투석하였다. PBS 완충제의 빈번한 변화와 함께 ~98.5시간 동안 투석을 진행하였다. 투석 후, 겔을 주사기에 넣었고, 4℃ 냉장고에 저장하였다. 컨쥬게이션 정도 및 겔 유동학적 특성을 실시예 2 및 3에 기재한 바와 같은 절차에서 측정한다. 컨쥬게이션 정도는 27.8%이다. 겔 저장 탄성률(G')은 ~363㎩이다.
실시예 8: 가교제로서 BDDE를 사용하는 가교된 HMW HA 겔에 AA2G 컨쥬게이션, 컨쥬게이션 정도는 10㏖%이고, G'는 ~ 240㎩이다.
400.3㎎의 LMW HA를 ~30분 동안 주사기 내 2501.3㎎의 4% NaOH 중에서 수화시켰다. 1200㎎의 AA2G를 바이알 내에 넣은 후 304.7㎎의 BDDE 및 1178.6㎎의 16% NaOH를 넣었다. 상기 용액(pH >12)을 ~20분 동안 50℃ 수욕에서 반응시키고, 20cc 주사기에 옮긴 후, 수화된 HA를 첨가하였다. 첨가 후, 혼합물을 2개의 주사기 사이에 앞뒤로 통과시킴으로써 ~20회 혼합하였다. 혼합한 페이스트를 20cc 바이알에 및 50℃ 수욕에 ~2.5 시간 동안 넣었다. ~2.5시간 후, HA-AA2G 겔이 형성되었다. 그 다음에, 226.6㎎의 12M HCl을 8492.2㎎ 10X PBS, pH7.4에 첨가하여 HCl-PBS 용액을 얻었고, HCl-PBS 용액을 첨가하여 중화시켰고, 겔을 팽창시켰다. 겔을 중화시켰고, 오비탈쉐이커 상에서 48시간에 걸쳐 팽창시켰다. 겔을 ~60㎛ 스크린을 통해 크기를 바꾸었고, 2개 주사기 사이에 앞뒤로 통과시킴으로써 ~20회 혼합하였다. 겔을 20,000 MWCO CE 투석 백 내에 넣었고, PBS, pH7.4 완충제 중에서 투석하였다. PBS 완충제의 빈번한 변화와 함께 ~114시간 동안 투석을 진행하였다. 투석 후, 겔을 주사기에 넣었고, 4℃ 냉장고에 저장하였다. 컨쥬게이션 정도 및 겔 유동학적 특성을 실시예 2 및 3에 기재한 바와 같은 절차에서 측정한다. 컨쥬게이션 정도는 10㏖%이다. 겔 저장 탄성률(G')은 ~240㎩이다.
실시예 9: 가교제로서 BDDE를 사용하는 가교된 HMW HA 겔에 비타겐 컨쥬게이션, 컨쥬게이션 정도는 15㏖%이고, G'는 ~ 365㎩이다.
398.2㎎의 LMW HA를 ~40분 동안 주사기 내 1753.24㎎의 1 wt% NaOH 중에서 수화시켰다. BDDE(311.7㎎)를 첨가하여 HA를 팽창시켰고, 다른 80분 동안 HA를 팽창시켰다. 팽창된 HA/BDDE 혼합물을 50℃에서 20분 동안 사전반응시켰다.
801.9㎎의 비타겐을 1459.7㎎의 10중량% NaOH 중에서 분리하여 용해시켰고, BDDE와 사전 반응시킨 HA와 혼합하였다. 혼합물을 다른 2.5시간 동안 50℃에서 반응을 계속하였다. ~2.5시간 후, HA-비타겐 겔이 형성되었다. 그 다음에, 195㎎의 12M HCl을 9004.0㎎ 10X PBS, pH7.4에 첨가하여 HCl-PBS 용액을 얻었고, HCl-PBS 용액을 첨가하여 중화시켰고, 겔을 팽창시켰다. 겔을 중화시켰고, 오비탈쉐이커 상에서 48시간에 걸쳐 팽창시켰다. 겔을 ~60㎛ 스크린을 통해 크기를 바꾸었고, 2개 주사기 사이에 앞뒤로 통과시킴으로써 ~20회 혼합하였다. 겔을 20,000 MWCO CE 투석 백 내에 넣었고, PBS, pH7.4 완충제 중에서 투석하였다. PBS 완충제의 빈번한 변화와 함께 ~120시간 동안 투석을 진행하였다. 투석 후, 겔을 주사기에 넣었고, 4℃ 냉장고에 저장하였다. 겔 유동학적 특성을 실시예 3에 기재한 바와 같은 절차에서 측정한다. 컨쥬게이션 정도는 실시예 2에 기재된 바와 같은 AA2G 결정과 유사한 방법을 사용하여 약 15㏖%가 되는 것으로 결정하였다. 겔 저장 탄성률(G')은 ~365㎩이다.
실시예 10: 아미드화 화학을 통한 선형 HA에 비타겐 컨쥬게이션
200.3㎎의 HMW HA를 60cc 주사기 내 10㎖의 수중에서 수화시켰다. 500㎎의 비타겐을 0.5㎖의 수중에서 용해시켰고, 용액을 pH 4.8로 중화시켰다. 197.7㎎의 EDC 및 149㎎의 NHS를 6㎖의 수중에 개별적으로 용해시켰다. 상기 용액(용개 및 EDC/NHS 용액)을 23.5㎖의 물을 함유하는 다른 60cc 주사기에 첨가한다. 2개의 주사기 사이에 앞뒤로 통과시킴으로써 두 주사기를 ~20회 혼합한다. 혼합물을 하나의 주사기에 저장하였고, 37℃ 욕에서 4시간 동안 침지시켰다. 뚜렷한 비타겐이 관찰되지 않을 때까지 PBS pH7.4 완충제에 대해 용액을 최종적으로 투석하였다. 컨쥬게이션 정도를 실시예 3에 기재한 바와 유사한 방법에 의해 결정하였다. 컨쥬게이션 정도는 약 10㏖%이다.
실시예 11: HA 겔에 가교된 AA2PG 컨쥬게이션
200.4㎎의 LMW HA를 ~30분 동안 주사기 내 1000㎎의 MES 5.2 완충제 중에서 수화시켰다. 292㎎의 AA2P를 바이알 내에 넣은 후 300㎎의 스타-PEG 아민을 첨가하였다. 상기 용액을 실온에서 밤새 반응시켰다. 겔을 PBS 완충제로 수화시켰고, PBS 완충제에 대해 투석시켜 미반응 AA2P를 제거하였다. 최종적으로 겔을 실시예 2 및 3에서 기재한 바와 같이 특성규명하여 컨쥬게이션 정도 및 겔 유동학적 특성을 결정하였다. 컨쥬게이션 정도는 약 20㏖%이다. 겔 저장 탄성률(G')은 약 500㎩이다.
실시예 12
잔주름의 외관을 감소시키기 위한 AA2G를 지니는 HA/BDDE 진피 필러의 제형화
투석 후 상기 실시예에서 기재한 겔 중 어떤 것에 대해, 적합한 양의 유리 HA 겔을 겔 응집도 및/또는 주사능력을 개선 또는 변형시키기 위한 겔에 첨가하였다. 예를 들어, 유리 HA 섬유를 인산염 완충 용액 중에서 팽창시켜 균일한 점탄성 겔("유리" HA 겔)을 얻었다. 투석 단계 전 이 가교된 겔을 실시예 1에서 얻은 HA/BDDE 가교 겔에 1 첨가한다(예를 들어, 약 1% 내지 약 5% w/w 유리 HA를 갖는 조성물을 얻기 위함). 그 다음에 얻어진 겔을 바로 채울 수 있는 멸균 주사기에 채우고, 적어도 약 1분 동안 멸균화를 위해 충분한 온도 및 압력에서 오토클레이브한다. 오토클레이빙 후, 최종 HA/AA2G 생성물을 포장하고, 안와 또는 다른 얼굴 영역에서 잔주름의 외관을 개선시키기 위해 깊지 않은 주사를 위한 진피 필러로서 사용을 위해 의사에게 유통시킨다.
실시예 13
리도카인을 포함하는HA-AA2G 진피 필러의 제형화
실시예 12의 절차에 따르지만, 투석 단계 후 및 유리 HA 겔의 첨가 전, 리도카인 염소수화물(리도카인 HCl)을 혼합물에 첨가한다. 분말 형태에서 (리도카인 HCl)을 WFI 중에서 우선 가용화시킬 수 있고, 0.2㎛ 필터를 통해 여과시킬 수 있다. 약간 염기성인 PH에 도달되도록(예를 들어, 약 7.5 내지 약 8의 pH) 묽은 NaOH 용액을 응집성 HA/AA2G 겔에 첨가한다. 그 다음에 리도카인 HCl 용액을 약간 염기성인 겔에 첨가하여, 최종 원하는 농도, 예를 들어 약 0.3% (w/w)의 농도에 도달된다. 그 다음에 HA/AA2G/리도카인 혼합물의 얻어진 pH는 약 7이고, HA 농도는 약 24 mg/g이다. 기계적 혼합을 수행하여 적절한 배합 기계를 구비한 표준 반응기에서 적절한 균일성을 얻는다.
실시예 14
HA 하이드로겔에 대해 카복실 작용기를 함유하는 첨가제의 컨쥬게이션
레티논산(AKA, 트레티노인), 외관 및 알파-리포산과 같은 첨가제는 카복실 작용기(-COOH)를 함유한다. 이들 첨가제는 EDC 화학을 사용하는 에스터화를 통해 HA 가수분해에 컨쥬게이션된다. 본 발명에 따른 컨쥬게이션을 위한 예는 다음과 같이 기재한다:
200㎎의 HMW HA를 60cc 주사기 내 10㎖의 pH 4.8 MES 완충제 중에서 수화시켰다. 다른 주사기에서, 200㎎의 레티노산을 5㎖의 물-아세톤 혼합물(물/아세톤 용적 비 1:3) 중에서 용해시킨다. 상기 두 주사기를 약 20회 동안 주사기 커넥터를 통해 혼합한다. 그 다음에 197.7㎎의 EDC 및 149㎎의 NHS를 6㎖의 수중에 개별적으로 용해시켰다. EDC 및 NHS를 함유하는 주사기를 HA 및 레티노산을 함유하는 주사기에 연결하여 2개의 주사기를 앞뒤로 통과시킴으로써 적어도 20회 동안 반응물을 혼합시킨다. 혼합물을 하나의 주사기에 저장하였고, 37℃ 욕에서 4시간 동안 침지시켰다. 겔을 아이소프로판올에 대해 투석시켜 미컨쥬게이트된 레티노산을 제거한 다음, 공비 조건 하에 PBS 완충제에 대해 투석한다. 겔을 멸균 주사기 내로 포장하고, 4℃에서 저장한다.
실시예 15
HA 하이드로겔에 하이드록실 작용기를 함유하는 첨가제의 컨쥬게이션.
레티놀(AKA, 트레티노인), 카탈라제, 다이메틸아미노에탄올 및 g-토코페롤과 같은 첨가제는 하이드록실 작용기(-OH)를 함유한다. 이들 첨가제는 EDC 화학을 사용하는 에스터화를 통해 HA 가수분해에 컨쥬게이션된다. 컨쥬게이션을 위한 전형적인 예를 다음과 같이 기재한다:
200㎎의 HMW HA를 60cc 주사기 내 10㎖의 pH 4.8 2-(N-모폴리노) 에탄설폰산(MES) 완충제 중에서 수화시킨다. 다른 주사기에서, 200㎎의 레티놀산을 5㎖의 물-아세톤 혼합물(물/아세톤 용적 비 1:3) 중에서 용해시킨다. 상기 두 주사기를 약 20회 동안 주사기 커넥터를 통해 혼합한다. 그 다음에 197.7㎎의 EDC 및 149㎎의 NHS를 6㎖의 수중에 개별적으로 용해시켰다. EDC 및 NHS를 함유하는 주사기를 HA 및 레티놀을 함유하는 주사기에 연결하여 2개의 주사기를 앞뒤로 통과시킴으로써 적어도 20회 동안 반응물을 혼합시킨다. 혼합물을 하나의 주사기에 저장하였고, 37℃ 욕에서 4시간 동안 침지시켰다. 겔을 아이소프로판올에 대해 투석시켜 미컨쥬게이트된 레티놀을 제거한 다음, 공비 조건 하에 PBS 완충제에 대해 투석한다. 겔을 멸균 주사기 내로 포장하고, 4℃에서 저장한다.
실시예 16
개질 후 HA 하이드로겔에 하이드록실 작용기를 함유하는 첨가제의 컨쥬게이션.
이는 2단계 과정이다.
단계 1: 가교된 HA 겔, 예를 들어 상업적 HA계 진피 필러, 예를 들어 쥬비덤(JUVEDERM)(등록상표), 캘리포니아주 얼바인에 소재한 앨러건 또는 레스틸란(Restylane)(등록상표), 메디시스 에스테틱스 인코포레이티드(Medicis Aesthetics, Inc.)를 EDC/NHS로 처리하여 HA의 카복실기를 활성화시킨다.
단계 2: 활성화된 HA 하이드로겔을 하이드록실기를 함유하는 첨가제로 처리한다. 하이드록실기를 함유하는 첨가제는 레티놀, 카탈라제, 다이메틸아미노에탄올 및 g-토코페롤 하이드록실 작용기(-OH)이다.
가교된 HA 겔에 첨가제의 컨쥬게이션을 위한 전형적인 예는 다음과 같다:
2gm의 쥬비덤 겔을 200gm의 EDC 및 150㎎의 NHS와 실온에서 혼합한다. 그 다음에 3㎖의 아세톤-물 혼합물 중의 200㎎의 레티놀을 첨가한다. 상기 혼합물을 37℃에서 4시간 동안 반응시킨다. 겔을 아이소프로판올에 대해 투석시켜 미컨쥬게이트된 레티놀을 제거한 다음, 공비 조건 하에 PBS 완충제에 대해 투석한다. 겔을 멸균 주사기 내로 포장하고, 4℃에서 저장한다.
실시예 17
HA 하이드로겔에 성장 인자, 펩타이드 또는 엘라스틴의 컨쥬게이션
표피 성장 인자(EGF), 형질전환 성장 인자(TGF) 및 펩타이드와 같은 첨가제는 작용성 아민 기를 함유하고, HA에 컨쥬게이트되어 유리한 진피 필러를 형성한다. 이들 첨가제는 아미드화 화학을 통해 HA에 컨쥬게이션된다. 컨쥬게이션을 위한 전형적인 예를 다음과 같이 기재한다:
200.3㎎의 HMW HA를 10㎖의 MES pH 5.4 완충수 중에서 수화시킨다. 100㎎의 MES 용액 중에 20㎎의 EGF를 첨가한다. 상기 혼합물에, 197.7㎎의 EDC 및 149㎎을 첨가한다. 얻어진 반응 혼합물을 37℃에서 4시간 동안 반응시킨다. 반응이 완료된 후, 겔을 아이소프로판올에 대해 투석시킨 다음, 공비 조건 하에 PBS 완충제에 대해 투석한다. 겔을 멸균 주사기 내로 포장하고, 4℃에서 저장한다.
본 발명은 이식된 지방 조직의 생존능력을 향상시키는 방법을 제공한다. 해당 방법은 일반적으로 이식된 지방 조직에 인접한 환자의 피부 내로 조성물을 도입하는 단계를 포함하되, 해당 조성물은 본 명세서의 다른 곳에 기재된 바와 같은 조성물이다. 예를 들어, 조성물은 하이알루론산 및 하이알루론산에 공유적으로 컨쥬게이트된 비타민 C 유도체를 포함할 수 있되, 컨쥬게이션 정도는 약 3㏖% 내지 약 40㏖%이다. 본 발명의 다른 양태에서, 피부를 치료하기 위한 방법은 피부에 지방 조직, 하이알루론산 및 하이알루론산에 컨쥬게이트된 비타민 C를 포함하는 조성물을 도입하는 단계를 포함한다.
실시예 18
HA 하이드로겔에 성장 인자, 펩타이드 또는 엘라스틴의 컨쥬게이션
인간 지방 조직 유래 줄기세포(human adipose tissue derived stem cell: hASC)에 대한 비타민 C 및 그것의 유도체의 미토겐 효과를 평가하기 위해, 유리형태에서 비타민 C(아스콜브산) 또는 그것의 유도체(비타겐 또는 AA2G)로 보충하거나 또는 이들이 없는 hASC를 완전한 MesenPro 배지에서 4일 동안 조직 배양물 플라스틱 상에서 배양시켰다. 제조업자(버지니아주 매너서스에 소재한 ATCC)에 의해 기재된 바와 밭은 MTT 분석에 의해 증식을 평가하였다. 4일 후, 아스콜브산, 0.25, 0.5 및 1mM의 농도는 각각 60%, 80% 및 96%만큼 아스콜브산을 결여하는 상기 대조군의 증식을 향상시키는 것으로 발견되었다(탈수소효소에 의해 옐로 테트라졸륨 MTT의 퍼플 포마잔(퍼플 포마잔은 세정제에 의해 가용화됨)으로 전환되는 양을 측정함). 동일한 농도의 AA2G를 사용하여 상기 대조군의 각각 70%, 60% 및 50%의 증식을 수득하였다. 유사한 결과를 비타겐에 의해 얻었고, 이는 대조군에 걸쳐 각각 70%, 60% 및 30% 증가를 나타내었다. 요약하면, 매질을 함유하는 성장 인자의 존재에서 비타민 C 및 그것의 유도체, AA2G 및 비타겐은 세포 배양물에서 hASC 증식을 향상시킨다.
컨쥬게이트된 비타민 C를 지니는 가교된 HA 겔
틴들 효과 및 다른 이점을 나타내는 본 발명의 특정 실시형태에 따라, 가교제로서 1,4-뷰탄다이올 다이글라이시딜에터(BDDE)를 사용하는 컨쥬게이트된 비타민 C를 지니는 가교된 HA계 겔의 제조를 이하의 실시예 19 및 20에 기재한다. 실시예 19에서, 비타민 C 유도체는 아스콜브산 2-글루코사이드(AA2G)이고, 실시예 20에서, 비타민 C 유도체는 아스코빌 3-아미노프로필 포스페이트(비타겐)이다. 이들 겔은 최적의 유동학적 특성, 우수한 주사능력 및 높은 HA 농도(25㎎/g)를 가진다. 어떤 구체적 이론의 조작으로 구속되지 않지만, 본 발명자에 의해 AA2G 또는 비타겐의 존재에서 BDDE와 HA를 가교하는 것은 겔의 특성을 크게 변화시킨다는 것을 발견하였으며, 겔은 BDDE와 가교된 상업적 HA 겔에 대해 높은 가교 밀도, 높은 HA 농도, 저점성 및 저압출력을 가진다. AA2G 또는 비타겐은 가교 동안 존재하기 때문에, 형성된 겔은 현수기로서 및 HA 쇄를 브릿징하는 가교제로서, 단독으로 또는 BDDE를 통해 결합된 이들 아스콜브산 유도체를 가진다. 겔의 현미경 구조는 크게 변화되며, 이는 30게이지 만큼 미세한 바늘을 통하더라도 매우 낮은 압출력을 갖는 겔을 야기한다. 게다가, 겔은 HA에 컨쥬게이트된 비타민 C의 약 3㏖% 내지 약 10㏖%, 또는 약 15㏖%까지를 가진다. 겔이 주사될 때, 그것들은 섬유아세포 또는 포스포타제로부터 α-글루코시다제와 같은 내인성 효소에 의해 활성 비타민 C를 방출한다. 활성 비타민 C는 피부 콜라겐화를 촉발할 수 있고, 겔 분해를 저해하기 위한 라디칼 스캐빈저로서 작용할 수 있다.
실시예 19
감소된 틴들 효과를 지니는 HA/AA2G 겔의 제형화
1764.0㎎의 5중량% NaOH 용액을 첨가한 후 60분 동안 주사기 내 400.1㎎의 LMW HA 및 402.3㎎ AA2G 혼합물을 수화시켰다. 별개의 바이알에서 800.8㎎의 AA2G를 첨가한 후 1401.1㎎의 9.1중량% NaOH 용액 및 252.6㎎의 BDDE을 첨가하였다. 얻어진 용액(pH >12)을 ~20분 동안 50℃ 수욕에서 반응시킨 후, 수화된 HA에 옮겼다. 첨가 후, 혼합물을 2개의 주사기 사이에 앞뒤로 통과시킴으로써 ~20회 혼합하였다. 그 다음에 페이스트를 바이알에 옮긴 후 ~2.5 시간 동안 50℃ 수욕에 넣었다. 가교 후, 197.0㎎의 12 M HCl 및 9.18g 10X PBS, pH 7.4를 함유하는 용액을 첨가하여 염기를 중화시켰고, 오비탈쉐이커 상에서 72시간 동안 겔을 팽창시켰다. ~60㎛ 기공 크기 메쉬를 통해 겔에 힘을 가함으로써 크기를 변경하였다. 두 주사기를 앞뒤로 통과시킴으로써 크기를 변경한 겔을 ~20회 혼합한 후, 셀룰로스 에스터 투석 백, MWCO ~ 20kDa에 옮겼고, PBS, pH 7.4 완충제에 대해 5일 동안 투석하였으며, 1일 2회 완충제를 변경하였다. 투석 후, 겔을 1㎖ COC 주사기 내로 제공하였고, 5000RPM에서 5분 동안 원심분리시켜 공기 방울을 제거하였고, 수분 스팀으로 멸균시켰다. 겔은 25㎎/g의 최종 HA 농도, 약 10㏖%의 실시예 2에서 기재한 바와 같이 계산한 AA2G㏖% 및 약 80㎩의 G'를 가졌다. 다른 겔을 유사한 방식으로 만들었고, 이는 약 60㎩ 내지 약 80㎩의 G' 값을 지녔다.
실시예 19A
감소된 틴들 효과를 지니는 리도카인 겔에 의한 HA/AA2G의 제형화
실시예 19의 겔에, 리도카인의 양을 첨가하여 0.3% ww 리도카인을 갖는 리도카인 겔에 의해 HA/AA2G를 생성하였다. PBS 완충제 pH ~7.4 중의 리도카인 HCl을 용해시킴으로써 리도카인 용액을 제조하였다. 리도카인 용액의 알리쿼트를 투석 후 그러나 멸균 전 실시예 19에서 겔에 첨가하였다. 그 다음에 겔을 철저하게 혼합하여 0.3% 리도카인 농도를 지니는 균질화된 혼합물을 얻었다.
실시예 20
감소된 틴들 효과를 지니는 HA/비타겐 겔의 제형화
401.0㎎의 LMW HA를 ~45분 동안 주사기 내 2355.0㎎의 1중량% NaOH 용액 중에서 수화시켰다. 303.8㎎ BDDE를 수화 HA에 첨가하였고, 주사기 대 주사기 혼합에 의해 10회 혼합하였다. 15분 동안 50℃ 수욕에서 혼합물을 사전반응시켰다. 800.1㎎의 비타겐을 950.6㎎의 15 wt% NaOH 중에서 그 다음에 510.1 Milli-Q 수 중에서 개별적으로 용해시켰다. 비타겐 용액을 주사기 대 주사기 혼합물 사용하여 사전 가열한 수화 HA/BDDE 혼합물과 30회 앞뒤로 혼합하였다. 혼합물을 50℃ 수욕에 다시 넣었고, 반응을 다른 2시간 동안 진행시킨 후, 148.1㎎의 12M HCl 및 8523.1㎎의 10X PBS, pH7.4를 함유하는 용액을 가교제에 첨가하였다. HCl-PBS 용액을 첨가하여 중화시켰고, 겔을 팽창시켰다. 겔을 중화시켰고, 오비탈쉐이커 상에서 48시간에 걸쳐 팽창시켰다. 겔을 ~60㎛ 스크린을 통해 크기를 바꾸었고, 2개 주사기 사이에 앞뒤로 통과시킴으로써 ~20회 혼합하였다. 겔을 20,000 MWCO CE 투석 백 내에 넣었고, PBS, pH7.4 완충제 중에서 투석하였다. PBS 완충제의 빈번한 변화와 함께 ~197시간 동안 투석을 진행하였다. 투석 후, 겔을 1㎖ COC 주사기 내로 옮겼고, 5000RPM에서 5분 동안 원심분리시켰으며, 수분 스팀으로 멸균시켰다. 겔의 최종 HA 농도는 24㎎/g였다.
1-에틸-3-[3-다이메틸아미노프로필]카보다이이미드를 통해 가교된 HA 겔
하이드로클로라이드(EDC) 화학
틴들 효과 및 다른 이점을 나타내는 본 발명의 특정 실시형태에 따라, 가교된 HA계 겔의 제조를 이하의 실시예 21 및 22에 기재한다. 실시예 21에서, 가교제를 사용하는 EDC 화학을 통해 만들어지는 겔은 헥사메틸렌 다이아민(HMDA)이고, 실시예 20에서, 3-[3-(3-아미노프로폭시)-2,2-비스(3-아미노-프로폭시메틸)-프로폭시]-프로필아민(4 암 아민-4 AA)이다. 가교제를 온화한 조건하에, 예를 들어 실온 및, 예를 들어 pH 5.4에서 수행한다. 반응 조건은 고도로 망상인 겔을 제조하도록 조절될 수 있고, 최적의 유동학적 특성, 우수한 주사능력 및 높은 HA 농도(24㎎/g)를 가진다. 매우 낮은 수화 또는 반응 농도에서 HA를 가교하며, 결합제인 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필) 카보다이이미드 하이드로클로라이드(EDC) 및 N-하이드록시숙신이미드(NHS) 또는 설포닐-NHS(설포-NHS)와 함께 HMDA 또는 4 AA의 보통의 양을 지니는 것이 유리할 수 있다는 것이 본 발명자들에 의해 발견되었다. 겔은 서로로부터 떨어져 있는 가교점을 가질 것이며, 따라서 고도로 가교된 물질은 높은 감쇠력을 가진다. 대조적으로, 이러한 낮은 수화 또는 반응 농도에서 BDDE와 HA의 가교는 가교제의 상대적 비효율성 때문에 실행불가능할 수 있다.
실시예 21
감소된 틴들 효과를 지니는 HA/HMDA 겔의 제형화
20.0g의 100mM MES 완충제 pH 5.2를 1000.0㎎의 LMW HA를 함유하는 주사기에 첨가하였다. 2010.5㎎의 100mM MES 완충제 pH 5.2 중에 260.9㎎ HMDA.HCl을 용해시키고, pH 5.2가 되도록 2㎕의 1M NaOH를 첨가함으로써 HMDA 용액을 제조하였다. EDC 용액을 1188.4㎎ 100mM MES 완충제 pH 5.2 중에서 254.2㎎의 EDC를 용해시킴으로써 제조하였고, 별개의 바이알에서, 44.3㎎의 NHS를 1341.8㎎의 100mM MES 완충제 pH 5.2 중에 용해시켰다. HA의 전체 수화 시, ~1시간 동안, 790㎕의 HMDA 용액을 수화시킨 HA에 첨가하였다. 혼합물을 10회 주사기 대 주사기 혼합에 의해 균질화시켰다. 그 다음에 490㎕ EDC 및 490㎕ NHS 용액을 균질화된 페이스트에 첨가하였고, 다시 주사기 대 주사기 혼합에 의해 10회 혼합하였다. 그 다음에 혼합물을 바이알에 옮겼고, 실온에서 5시간 동안 가교시킨 후, 17.9㎖의 1X PBS 완충제 pH 7.4를 첨가하였다. 겔을 롤러 상에서 3일 동안 팽창시킨 후, 60㎛ 기공 크기 메쉬를 통해 힘을 가하였다. 크기를 바꾼 겔을 MWCO 20 KDa을 튜빙하는 셀룰로스 에스터막에 넣었고, 1일 2회 완충제를 변화시키면서 4일 동안 1X PBS에 대해 투석시켰다. 겔을 1㎖ COC 주사기 내에서 조제하였고, 5000 RPM에서 5분 동안 원심분리시켰고, 수분 스팀으로 멸균시켰다. 겔의 최종 HA 농도는 25㎎/g였다.
실시예 22
감소된 틴들 효과를 지니는 HA/4 AA 겔의 제형화
32.55의 100mM MES 완충제 pH 5.2를 1000.4㎎의 LMW HA를 함유하는 주사기에 첨가하였다. 1039.8㎎의 100mM MES 완충제 pH 5.2 중에 256.3㎎ 4 AA를 용해시키고, pH 5.2가 되도록 380㎕의 6M HCl을 첨가함으로써 4 AA 용액을 제조하였다. EDC 용액을 1013.8㎎ 100mM MES 완충제 pH 5.2 중에서 251.2㎎의 EDC를 용해시킴으로써 제조하였고, 별개의 바이알에서, 74.7㎎의 NHS를 2020.0㎎의 100mM MES 완충제 pH 5.2 중에 용해시켰다. HA의 전체 수화 시, ~1시간 동안, 260㎕의 4 AA 용액을 수화시킨 HA에 첨가하였다. 혼합물을 10회 주사기 대 주사기 혼합에 의해 균질화시켰다. 그 다음에 277㎕ EDC 및 273㎕ NHS 용액을 균질화된 페이스트에 첨가하였고, 다시 주사기 대 주사기 혼합에 의해 10회 혼합하였다. 그 다음에 혼합물을 바이알에 옮겼고, 실온에서 5시간 동안 가교시킨 후, 6.4㎖의 10X PBS 완충제 pH 7.4를 첨가하였다. 겔을 롤러 상에서 3일 동안 팽창시킨 후, 60㎛ 기공 크기 메쉬를 통해 힘을 가하였다. 크기를 바꾼 겔을 MWCO 20 KDa을 튜빙하는 셀룰로스 에스터막에 넣었고, 1일 2회 완충제를 변화시키면서 4일 동안 1X PBS에 대해 투석시켰다. 겔을 1㎖ COC 주사기 내에서 조제하였고, 5000 RPM에서 5분 동안 원심분리시켰고, 수분 스팀으로 멸균시켰다. 겔은 23㎎/g의 최종 HA 농도를 가졌다.
실시예 23
실시예 19 내지 22의 겔의 유동학적 특성의 결정.
진동 평행판 유동계인 안톤 파르 피시카(Anton Paar Physica) MCR 301을 사용하여 겔의 유동학적 특성을 측정하였다. 25㎜의 플레이트 직경을 사용하여 1㎜의 갭 높이에서 사용하였다. 각각의 측정은 25℃의 일정한 온도에서 측정을 행하였다. 2%의 일정 변형률에서 1Hz 내지 10Hz의 주파수 스윕 및 주파수의 대수적 증가 후 변형률에서 대수적 증가에 의한 5Hz의 일정한 주파수에서 1% 내지 300%의 변형 스윕으로 이루어졌다. 저장 탄성률(G') 및 점성률(G")을 1% 변형에서 변형 스윕으로부터 얻었다.
Figure pat00004
실시예 24
실시예 19 내지 22의 겔의 압출력 측정
30게이지 니들을 통해 겔을 압출하는데 필요한 힘을 인스트론(Instron) 5564 및 블루힐(Bluehill) 2 소프트웨어를 사용하여 측정하였다. 겔을 30G½ TSK 바늘을 통해 1㎖ COC 주사기로부터 압출시켰다. 플런저를 11.35㎜에 대해 100㎜/분의 속도로 밀었고, 압출력을 기록하였다.
Figure pat00005
실시예 25
실시예 19 내지 22의 겔의 생체이용가능성 시험
겔의 50㎕ 볼루스 주사를 스프래그 돌리 래트의 배면에 진피내로 이식하였다. 이식물을 1주에 제거하였고, 헤마톡실린 및 에오신(H&E) 염색, 단핵 염증 세포에 대한 마커인 CD68 염색에 의해 조직적으로 분석하였다. CD68의 3개의 20X 영상을 염색 정도를 기반으로 0 내지 4로 스코어링하였다. 그 다음에 이들 값을 평균화하여 샘플 스코어를 제공하였다. 4개의 샘플을 각 겔로부터 분석하였다.
Figure pat00006
실시예 26
실시예 19 내지 22의 세포독성 시험, ISO 10993-5.
겔의 시험관내 세포독성 시험을 문헌[Agarose Overlay Method of ISO 10993-5: biological Evaluation of Medical Devices - Part 5: Tests for In Vitro Cytotoxicity]에 따라 NAMSA에 의해 수행하였다. 삼중 웰에 여과시킨 원판 상에 놓은 0.1㎖의 시험 물품뿐만 아니라 0.9% NaCl 용액, 음성 대조군으로서 1cm 길이의 고밀도 폴리에틸렌, 및 양성 대조군으로서 라텍스의 1 x 1㎠ 부분을 투여하였다. 각각을 L929 마우스 섬유아세포의 단일층에 직접 가로놓인 아가로스 표면 상에 놓았다. 37℃에서 5% CO2 중에서 24시간 동안 인큐베이션시킨 후, 배양물을 임의의 비정상 세포 형태 및 세포 용해에 대해 거시적으로 및 미시적으로 시험하였다. 시험 물품을 샘플의 근접한 용해 구역에 기반하여 0 내지 4로 스코어링하였다. 시험 물품으로서 0으로 스코어링된 실시예 1, 3 및 4로부터의 시험 재료는 임의의 세포 용해 또는 독성을 야기하는 증거를 나타내지 않았다.
틴들 효과의 정량적 분석
추가로 시각적 관찰을 뒷받침하고, HA 필러의 비교 수행 분석을 수행하기 위해, 틴들 효과의 정량적 분석을 하는 것이 필요한 것으로 여겼다. 진피 필러에 특이적인 틴들 효과에 대해 어떤 정량적 기법은 문헌에서 존재하지 않는다. 그러나, 피부와 빛 산란 및 빛의 상호작용에 대한 기존의 과학적 이해를 기반으로, (a) 비색법 및 (b) 분광학에 기반한 2가지 별개의 접근을 사용하여 피부에서 틴들 효과를 정량화하였다. 이들 기법에 기반하여, 생체내 틴들 효과를 측정하기 위해 3가지 별개의 정량적 변수(이하에 약술)를 정하였다.
a) 틴들 효과 시각적 스코어 : 스케일은 0.5의 증분으로 1내지 5의 범위를 가진다. 정상 피부톤을 지니며 청색 변색이 없는 주사 부위에 스코어 1이 주어진다. 두껍고, 확연한 청색 변색(전형적으로, 레스틸렌(Restylane) 또는 쥬비덤 울트라 플러스
Figure pat00007
와 관련됨)에 대해 최대 스코어 5가 주어진다. 시험 샘플을 스코어링하기 위해 맹검 전 스케일에 대해 3명의 독립적 관찰자를 훈련시켰다.
b) 피부 색의 청색 성분 - "b" : 색도계(CM2600D, 뉴저지주에 소재한 코니카 미놀타)를 사용하여 다양한 필러로 주사한 피부 부위로부터 보내진 광의 청색 성분을 정량화하였다. L-a-b 색상 규모의 "b" 성분을 사용함으로써 이를 달성하였다.
c) 피부로부터 방출된 "청색광%" : 휴대용 분광 광도계(CM2600D, 뉴저지주에 소재한 코니카 미놀타)를 사용하여 전체 가시광선 범위에서 피부로부터 방출된 청색광%을 정량화하였다. 이를 400㎚ 내지 490㎚ 하의 영역을 통합하고, 스펙트럼 하의(400㎚ 내지 700㎚) 전체 영역에 의해 정규화함으로써 달성하였다.
실시예 27
겔의 틴들 평가
2개월령의 털이 없는 래트의 대퇴부 내로 선형 스레딩 기법을 사용하여 27G½ TSK 니들을 통해 겔을 진피내로 주사하였다. 임상적 잔주름 절차를 모방하기 위해 겔을 깊지 않게 이식하였다. 겔 이식 후 48시간에 틴들에 대한 시험을 수행하였다. 틴들 시험을 수행하기 전, 헤모글로빈의 결여에 기인하는 틴들 효과의 콘트라스트를 개선시키기 위해 동물을 안락사시켰다.
이식 2일 후 실시예 19 내지 21로부터의 겔의 영상을 도 12에 나타낸다. 상업적 쥬비덤 리파인 및 레스틸란 터치(Restylane Touch)에 대한 영상을 비교를 위해 나타낸다. 푸르스름한 선(틴들 효과)은 상업적 겔 쥬비덤 리파인 및 레스틸란 터치의 영상에서 분명하게 볼 수 있다. 실시예 19, 19A(도시하지 않음) 및 21로부터의 겔은 틴들 효과를 나타내지 않았다
0.5의 증분으로 1 내지 5의 시각적 스코어를 사용하여 주사 부위를 스코어링하였다. 스코어 1을 지니는 주사 부위는 피부 변색을 나타내지 않은 반면, 스코어 5를 지니는 주사 부위는 중증의 피부 청색 변색을 나타내었다. 색채 측정기(CM2600D, 뉴저지주에 소재한 코니카 미놀타)의 도움으로 주사 부위 상에서 분광학적 분석을 수행하였다. 피부색 "b"의 청색 성분 및 피부(400㎚ 내지 700㎚)으로부터 방출된 청색광의%를 독립적으로 측정하였다. 도 13 및 도14는 시각적 틴들 스코어 및 방출된 청색광의 %를 나타낸다. 실시예 19 및 21로부터의 겔은 틴들 효과를 나타내지 않았고, 더 낮은 시각적 틴들 스코어 및 청색광 방출 값의 %를 가졌다. 틴들 스코어 및 방출된 청색광 값의 %는 쥬비덤 리파인 및 레스틸란 터치에 대해 더 높았다. 벨로테로 소프트(Belotero Soft)는 임의의 틴들을 나타내지 않았고, 값은 실시예 19 및 21의 값과 유사하였다. 도 13 및 도 14를 참조한다.
실시예 28
이력에 의한 겔의 생체내 지속 평가
본 발명의 겔 및 상업적 겔의 50㎕ 볼루스 주사를 스프래그 돌리 래트의 배면에 진피내로 이식하였다. 이식물을 1주에 제거하였고, 헤마톡실린 및 에오신(H&E) 염색에 의해 조직적으로 분석하였다. 주사 부위에서 정확하게 절편을 취하였다. 두 절편을 각 조직 샘플로부터 절단하였고, H&E 염색 절편을 스티칭 스코프를 사용하여 스티칭하였다. 그 다음에 샘플을 그룹화하였고, 다음과 같이 스코어링하였다: 남아있는 물질의 양에 따라서 없음(0%), 낮은(25%), 중간(50%) 및 높음(100%). 도 15를 참조한다.
실시예 28A
MRI에 의한 겔의 생체내 지속 평가
암컷 스프래그 돌리 래트에서 진피내 주사 후, 자기공명영상화(Magnetic Resonance Imaging: MRI)를 사용하여 40주의 기간에 걸쳐 본 발명의 겔 및 상업적 겔의 시간에 따른 용적 및 표면적 변화를 평가하였다. 겔을 이식물 당 150㎕의 표적 용적에서 주사하였다. 이식물을 어깨에 대해 약간 꼬리 쪽으로 2개의 정반대 부위, 무릎으로부터 약간 두측으로 2개의 정반대 부위 및 머리와 꼬리 사이의 중간지점에서 2개의 정반대 부위에 위치시켰다. 7 테슬라(Tesla) 70/30 브루커 바이오스펙(Bruker Biospec) MRI 스캐너 상에서 MRI 스캔을 수행하였다. 이식 당일(제0주) 및 이식 후 제12주, 제24주, 제40주에 영상을 수집하였다. 겔 대 시간의 절대 용적의 플롯을 이하의 도 16에 나타낸다. 고지속성 겔은 40주 이식에서 높은 절대 용적을 가진다.
실시예 29
안와주위 주름의 치료에서 사용되는 바와 같은 본 발명의 조성물
40세의 마른 여성은 안와주위 영역에서 미세한 주름살이 존재하며, 진피 필러 치료를 요청한다. 30게이지 바늘을 사용하여, 의사는 0.6㎖의 본 발명에 따른 HA계 겔(실시예 19에서 기재된 것과 같음)을 그녀의 눈 밑 잔주름 내로 그리고 눈물고랑 영역에서 선형 스레딩 기법을 사용하여 깊지 않게 도입한다. 겔은 깊지 않게 도입되지만, 청색 변색은 관찰되지 않았고, 환자는 결과에 만족한다.
나타낸 바와 같이, 본 발명의 조성물, 예를 들어 실시예 19 및 21의 조성물은 감소된 또는 유의하지 않은 틴들 효과를 가졌고, 특정 HA계 상업적 겔, 예를 들어, 쥬비덤 리파인/서지덤(Surgiderm) 18 및 벨로테로 소프트에 대해 신체 내에서 실질적으로 더 긴 지속기간을 가진다. 예를 들어, "잔주름" 제형 벨로테로 소프트에 대해, 본 발명의 실시예 19는 이 상업적 겔에 적어도 유리한 틴들 효과를 가질 뿐만 아니라 유리하게는 생체내 지속기간이 실질적으로 더 길었다.
실시예 30
잔주름의 외관을 개선시키기 위한 본 발명의 주사용 조성물
비타민 A, 비타민 B, 비타민 C, 비타민 D, 비타민 E 및 이의 유도체와 같은 첨가제는 단독으로 및 조합으로 다양한 실질적으로 투명한, 주사용 HA계 겔을 생성하기 위한 방식으로 가교된 하이알루론산 겔에 컨쥬게이션된다. HA 성분은 적어도 90중량%이며, 예를 들어 본 명세서의 다른 곳에서 정의되는 바와 같이 완전히 저분자량 HA, 또는 약 100% 저분자량 HA이다. 이들 첨가제는 임의의 적합한 수단을 사용하여 HA 하이드로겔에 컨쥬게이션된다. 적어도 약 20㎎/g, 예를 들어, 약 23㎎/g, 약 24㎎/g, 약 25㎎/g, 약 30㎎/g까지의 HA 농도를 갖고, 미세한 게이지 바늘을 통한 주사에 적합한, 주사용 pH 중성, 응집성 조성물을 생성하기 위해 컨쥬게이션된 겔은 크기가 바뀌고, 처리된다. 겔은 적어도 약 50㎩, 약 60㎩, 약 70㎩, 약 80㎩까지 및 약 100㎩ 이하의 G' 값을 가진다. 겔은 오토클레이브, UV 광 또는 다른 적합한 수단을 사용하여 포장되고, 멸균된다.
각각의 겔은 환자의 주름살, 예를 들어 안와주위 영역, 팔자주름 영역, 눈물고랑 영역, 목 영역 또는 진피 필링이 유리한 임의의 다른 얼굴 영역에서 깊지 않은 주사, 예를 들어 약 1.0㎜ 이하의 깊이에서 피부 내로 주사에 대해 유용하다. 겔의 깊지 않은 도입에도 불구하고, 틴들 효과에 기인하는 변색은 관찰되지 않았으며, 환자는 결과에 만족한다.
마지막으로, 본 명세서의 양태는 다양한 실시형태를 참조로 하여 기재되었지만, 당업자는 구체적인 개시된 실시형태가 본 명세서에 개시된 대상 원칙을 단지 예시한다는 것을 용이하게 인식하는 것으로 이해되어야 한다. 따라서, 본 명세서에 개시된 대상은 특정 방법, 프로토콜 및/또는 시약 등을 어떤 방법으로 제한하지 않는다. 이와 같이, 당업자는 수많은 및 다양한 변형 또는 변화를 만들 수 있거나, 또는 개시된 대상의 대안적 구성이 본 명세서의 정신으로부터 벗어나는 일 없이 본 명세서의 교시에 따라 만들어질 수 있다. 상세한 설명에서의 변화는 첨부되는 특허청부범위에서 정해지는 바와 같은 본 발명의 정신으로부터 벗어나는 일 없이 만들어질 수 있다. 최종적으로, 본 명세서에 사용된 용어는 단지 특정 실시형태를 설명하는 목적을 위한 것이며, 단지 특허청구범위에 의해서만 정해지는 본 발명의 범주를 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 추가로, 상기 설명에 함유되거나 또는 수반되는 도면에 나타낸 모든 대상은 단지 예시적이며, 제한하지 않는 것으로 해석되는 것이 의도된다. 따라서, 본 발명은 나타내고, 기재된 바와 같이 명확하게 제한되지 않는다.
본 발명의 특정 실시형태는 본 발명을 수행하기 위해 본 발명자에게 공지된 최상의 방식을 포함하여 본 명세서에 기재된다. 물론, 이들 기재된 실시형태에 대한 변형은 앞서 언급한 설명을 읽을 때 당업자에게 명백할 것이다. 본 발명자는 적절하다면 당업자가 이러한 변형을 사용하는 것을 예상하며, 본 발명자는 본 명세서에 구체적으로 기재된 것 이외에 본 발명이 실행되는 것을 의도한다. 따라서, 본 발명은 적용가능한 법에 의해 허용된다면, 본 명세서에 첨부된 특허청구범위에서 인용된 대상의 모든 변형 및 동등물을 포함한다. 게다가, 이들의 모든 가능한 변형에서 상기 기재한 구성요소의 어떤 조합은 본 명세서에 달리 표시되지 않거나 또는 문맥에 의해 달리 명확하게 모순되지 않는다면, 본 발명에 의해 포함된다.
본 명세서에 개시된 본 발명의 대안의 구성요소 또는 실시형태의 그룹은 제한으로서 해석되어서는 안 된다. 각 그룹 구성원은 개별적으로 또는 본 명세서에서 발견되는 그룹 또는 다른 구성요소의 다른 구성원과 임의의 조합에 의해 지칭되고, 특허청구될 수 있다. 그룹의 하나 이상의 구성원은 편리함 및/또는 특허가능성의 이유를 위해 그룹 내에 포함되거나 또는 그룹으로부터 삭제될 수 있다. 임의의 이러한 포함 또는 삭제가 일어날 때, 본 명세서는 변형되는 그룹을 함유하는 것으로 여겨지며, 따라서 첨부되는 특허청구범위에서 사용되는 모든 마쿠쉬 그룹의 기재된 설명을 충족한다.
달리 표시되지 않는다면, 본 명세서 및 특허청구범위에서 사용되는 성분의 양, 분자량과 같은 특성, 반응 조건 등을 표현하는 모든 숫자는 용어 "약"에 의해 모든 예에서 변형되는 것으로 이해되어야 한다. 본 명세서에 나타내는 바와 같은 용어 "약"은 이렇게 정량화된 항목, 변수 또는 용어가 언급된 항목, 변수 또는 용어의 값 초과 및 미만의 플러스 또는 마이너스 10%의 범위를 포함하는 것을 의미한다. 달리 표시되지 않는다면, 본 명세서 및 특허청구범위에서 사용되는 성분의 양, 분자량과 같은 특성, 반응 조건 등을 표현하는 모든 숫자는 용어 "약"에 의해 모든 예에서 변형되는 것으로 이해되어야 한다. 본 명세서에 나타내는 바와 같은 용어 "약"은 이렇게 정량화된 항목, 변수 또는 용어가 언급된 항목, 변수 또는 용어의 값 초과 및 미만의 플러스 또는 마이너스 10%의 범위를 포함하는 것을 의미한다. 따라서, 달리 모순되지 않는다면, 본 명세서 및 첨부되는 특허청구범위에 제시된 수치적 변수는 본 발명에 의해 얻어지는 것으로 추구되는 원하는 특성에 따라 다를 수 있는 근삿값이다. 적어도, 특허청구범위의 범주와 동등한 원칙의 적용을 제한하기 위한 시도로서가 아니라, 각각의 수치적 변수는 적어도 보고된 유의한 숫자의 수에 비추어, 그리고 보통의 반올림 기법을 적용함으로써 해석되어야 한다. 본 발명의 넓은 범주를 제시하는 수치적 범위 및 변수는 근삿값이지만, 구체적 실시예에 제시된 수치적 값은 가능한 간결하게 보고한다. 그러나, 임의의 수치적 값은 본질적으로 그것의 각각의 시험 측정에서 발견되는 표준 편차로부터 필수적으로 초래되는 특정 오류를 함유한다.
본 발명을 설명하는 문맥에서 사용되는 단수의 용어 및 유사한 언급(특히 다음의 특허청구범위의 문맥에서)은, 본 명세서에서 달리 표시되지 않거나 또는 문맥에 의해 명확하게 모순되지 않는다면, 단수와 복수를 둘 다 다루는 것으로 해석되어야 한다. 본 명세서의 범위의 인용은 단지 범위 내에 속하는 각각의 별개의 값을 개별적으로 지칭하는 단축된 방법으로서 작용하는 것으로 의도된다. 본 명세서에서 달리 표시되지 않는다면, 각각의 개개의 값은 본 명세서에서 마치 개별적으로 인용되는 것과 같이 명세서에 포함된다. 본 명세서에 기재된 모든 방법은 달리 본 명세서에 표시되지 않거나 또 다르게는 문맥에 의해 명확하게 모순되지 않는다면 임의의 적합한 순서로 수행될 수 있다. 본 명세서에서 제공되는 임의의 및 모든 실시예 또는 예시적인 언어(예를 들어, "예컨대")의 사용은 단지 본 발명을 더 양호하게 설명하기 위한 의도이며, 달리 청구되는 본 발명의 범위의 제한을 제기하지는 않는다. 본 명세서의 어떤 언어도 본 발명의 실행에 필수적인 어떤 청구되지 않는 구성요소를 표시하는 것으로 해석되어서는 안 된다.
본 명세서에 개시된 구체적 실시형태는 이루어지거나 또는 본질적으로 이루어진 언어를 사용하여 특허청구범위에서 추가로 제한될 수 있다. 특허청구범위에서 사용될 때, 보정서가 제출되든 또는 첨가되든, 전개 용어 "이루어진"은 특허청구범위에서 구체화되지 않은 어떤 구성요소, 단계 또는 성분을 제외한다. 전개 용어 "본질적으로 이루어진"은 구체화된 물질 또는 단계 및 기본적 및 신규한 특징(들)에 실질적으로 영향을 미치지 않는 것에 대한 특허청구범위의 범주를 제한한다. 이렇게 청구된 본 발명의 실시형태는 본 명세서에서 본질적으로 또는 명확하게 기재되고, 가능하게 된다.
본 명세서에서 언급되고, 확인된 모든 특허, 특허 공개 및 다른 간행물은, 예를 들어 본 발명과 관련하여 사용되는 이러한 간행물에 기재된 조성물 및 방법을 기재하고, 개시하는 목적을 위해 본 명세서에 전문이 개별적이고, 명확하게 포함된다. 이들 간행물은 단지 본 발명의 출원일 이전에 그것의 개시내용에 대해 제공된다. 이에 대해 어떤 것도 본 발명자들이 본 발명 때문에 또는 어떤 다른 이유로 이러한 개시내용보다 선행하는 것으로 자격을 부여하는 용인으로서 해석되어서는 안 된다. 이들 문헌의 내용에 대한 일자 또는 표현에 관한 모든 언급은 출원인에 대해 이용가능한 정보에 기반하며, 이들 문헌의 날짜 또는 내용의 정확함에 대한 어떤 용인을 구성하지는 않는다.

Claims (16)

  1. 하이알루론산 및 하이알루론산에 공유적으로 컨쥬게이트된 비타민 C 유도체를 포함하는 진피 필러 조성물에 있어서,
    여기서 상기 비타민 C 유도체는 L-아스콜브산 2-글루코사이드(AA2G), 아스코빌 3-아미노프로필 포스페이트, 나트륨 아스코빌 포스페이트(SAP), L-아스콜브산 2-설페이트(AA2S), L-아스콜브산 2-포스페이트(AA2P), 6-O-아실-2-O-알파-D-글루코피라노실-L-아스콜브신(6-Acyl-AA2G) 및 아스코빌 팔미테이트로부터 선택되고,
    여기서 상기 하이알루론산은 가교되고, 및
    여기서 상기 진피 필러 조성물은 비타민 C 유도체가 없다는 것만 제외하고 동일한 조성물에 비하여 감소된 틴들 효과(Tyndall effect)를 보여주는 것인 진피 필러 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 비타민 C 유도체는 3mol% 내지 15mol%의 컨쥬게이션도(degree of conjugation)로 하이알루론산에 컨쥬게이트되는 것인 진피 필러 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 비타민 C 유도체는 효소적 분해(enzymatic cleavage)에 의해 생체내에서 비타민 C로 전환되는 것인 진피 필러 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 비타민 C 유도체는 아스콜브산 2-글루코사이드(AA2G)인 진피 필러 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 비타민 C 유도체는 아스코빌 3-아미노프로필 포스페이트인 진피 필러 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 상기 비타민 C 유도체는 나트륨 아스코빌 포스페이트(SAP)인 진피 필러 조성물.
  7. 제1항에 있어서, 상기 하이알루론산은 1,4-뷰탄다이올 다이글라이시딜 에터(BDDE), 펜타에리트리톨 글라이시딜 에터(스타-PEG 에폭사이드), 펜타에리트리톨(3-아미노프로필)에터(스타-PEG 아민) 또는 리신으로 가교되는 것인 진피 필러 조성물.
  8. 제7항에 있어서, 상기 하이알루론산은 1,4-뷰탄다이올 다이글라이시딜 에터(BDDE)로 가교되는 것인 진피 필러 조성물.
  9. 제7항에 있어서, 상기 하이알루론산은 리신으로 가교되는 것인 진피 필러 조성물.
  10. 제1항에 있어서, 마취제를 더 포함하는 것인 진피 필러 조성물.
  11. 제10항에 있어서, 상기 마취제는 리도카인인 진피 필러 조성물.
  12. 연조직 상태의 치료를 필요로 하는 대상체의 연조직 상태를 치료하기 위한 방법에 유용한, 하이알루론산 및 하이알루론산에 공유적으로 컨쥬게이트된 비타민 C 유도체를 포함하는 진피 필러 조성물에 있어서,
    상기 방법은 상기 진피 필러 조성물을 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 상기 비타민 C 유도체는 L-아스콜브산 2-글루코사이드(AA2G), 아스코빌 3-아미노프로필 포스페이트, 나트륨 아스코빌 포스페이트(SAP), L-아스콜브산 2-설페이트(AA2S), L-아스콜브산 2-포스페이트(AA2P), 6-O-아실-2-O-알파-D-글루코피라노실-L-아스콜브산(6-Acyl-AA2G) 및 아스코빌 팔미테이트로부터 선택되고, 여기서 상기 하이알루론산은 가교되고, 및 여기서 상기 진피 필러 조성물은 비타민 C 유도체가 없다는 것만 제외하고 동일한 조성물에 비하여 감소된 틴들 효과를 보여주며, 및 여기서 상기 연조직 상태는 주름살 또는 흉터인 연조직 상태를 치료하기 위한 진피 필러 조성물.
  13. 제12항에 있어서, 상기 진피 필러 조성물은 1개월 이상 최대 20개월까지 비타민 C 유도체를 방출하는 것인 진피 필러 조성물.
  14. 제12항에 있어서, 상기 비타민 C 유도체는 하이알루론산에 BDDE 또는 리신을 통해 공유적으로 컨쥬게이트되는 것인 진피 필러 조성물.
  15. 제12항에 있어서, 상기 비타민 C 유도체는 아스콜브산 2-글루코사이드(AA2G)인 진피 필러 조성물.
  16. 제12항에 있어서, 상기 비타민 C 유도체는 나트륨 아스코빌 포스페이트(SAP)인 진피 필러 조성물.

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