CN101961344A

CN101961344A - 药物组合物及其应用

Info

Publication number: CN101961344A
Application number: CN2009101582329A
Authority: CN
Inventors: 凌沛学; 陈建英; 贺艳丽; 陈彬合; 刘杰; 汪敏; 荣晓花
Original assignee: SHANDONG BIOLOGICAL PHARMACEUTICAL ACADEMY
Current assignee: SHANDONG BIOLOGICAL PHARMACEUTICAL ACADEMY
Priority date: 2009-07-23
Filing date: 2009-07-23
Publication date: 2011-02-02

Abstract

一种药物组合物，其特征是含有a)异喹啉类化合物中的一种；和b)透明质酸盐或透明质酸衍生物其中的一种或两种的混合物。该类组合物可用于制备非口服给药途径的药物制剂，尤其是用于制备关节腔和眼后节局部给药途径治疗相关疾病的药物制剂，具有疗效好，毒副作用少的特点。

Description

药物组合物及其应用

技术领域

本发明属于医药领域，涉及一种含有异喹啉类化合物和透明质酸的药物组合物，及该组合物在制备非口服给药途径的药物制剂中的用途。

背景技术

异喹啉类生物碱在植物界分布广泛，主要分布在防己科、毛茛科、小檗科、木兰科、罂粟科、番荔枝科、樟科、芸香科、使君子科、睡莲科等10多个植物类群中。异喹啉类生物碱从结构上可分为简单异喹啉类、苄基异喹啉类、苯并菲啶类、萘基异喹啉类、阿朴菲类、原小檗碱类、普托品类、吗啡类等20余种，总数超过1000种。由于其结构多样，因而具有抗炎、抗肿瘤、抗菌、抗虐、镇痛、抗心律失常、抗血小板聚集、降压、调节免疫等多种生理活性〔①程轩轩，王冬梅，杨得坡。中草药，2006，37(12)：1900～1904；②邵顺波，安徽医药，2007，11(3)：254～255〕。某些异喹啉类生物碱，如蝙蝠葛碱、白屈菜碱、青藤碱、粉防己碱、小檗碱、莲心碱等，具有明显的抗炎、抗肿瘤、抗菌、镇痛和免疫抑制活性，在临床上可用于肿瘤和多种自身免疫性疾病的预防和治疗。

青藤碱和粉防己碱是异喹啉类生物碱的代表物质，分别来源于抗风湿传统中药青风藤和防己，具有显著的抗炎、镇痛和免疫抑制作用。其抗炎镇痛机制主要归于对环氧酶(COX-2)的选择性抑制和对白介素(IL-1β、IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-a)等细胞因子的抑制，抑制炎症过程的多个环节，包括抑制炎症细胞功能、抗自由基损伤、抑制炎症介质释放和对抗炎症介质的效应等〔①梁瑞燕，曹柳英，王文君，等。广州中医药大学学报，2007，24(2)：141～143；②崔元璐，姚康德，戚爱棣。中草药，2006，37(12)：1847～1851〕。此外，青藤碱可促进体外培养成纤维样滑膜细胞的增殖并下调基质金属蛋白酶(MMP-3)的表达；低浓度的粉防己碱可以促进体外培养软骨细胞的增殖，提高软骨细胞的活性，维持软骨细胞的功能表达〔①张娟，李娟，赵毅，等。中国中医药信息杂志，2008，15(3)：23～25；②崔元璐，姚康德，戚爱棣。中草药，2006，37(12)：1847～1851〕。

大量临床资料已证实青藤碱对各种类型关节炎的疗效确切，其治疗急慢性风湿及类风湿关节炎(RA)的总有效率为85％以上，起效时间为2～3周，约1个月后明显好转。其给药途径主要为口服，其它还包括肌肉注射、离子导入、穴位注射以及关节腔注射等〔蔡颖，邱赛红，孙必强。中医药导报，2006，12(12)：84～86；〕。CN1154843、CN1199623和CN1206588等多项专利公开了青藤碱在治疗视网膜色素膜炎、葡萄膜炎等自身免疫性眼病的应用，CN100377707公开了青藤碱在治疗老年性黄斑变性、视网膜色素变性以及糖尿病视网膜病变等视网膜变性疾病中的应用。由于青藤碱口服治疗用药剂量大，用药周期长，采用关节腔、穴位注射或导入等局部给药方式，可使药物直接作用于病灶，减少用药剂量且减少全身用药的不良反应，CN1883483公开了适用于局部给药途径的小规格盐酸青藤碱注射液。

关节腔注射治疗兔模型膝骨关节炎(OA)的试验表明，青藤碱对血清及关节液中IL-11β和IL-6的抑制作用优于玻璃酸钠注射液(博士伦福瑞达公司生产的施沛特

主要成分为1％的透明质酸钠)，每周注射一次，连续给药5周后的软骨病理切片观察及Mankin’s评分显示青藤碱有减缓软骨降解、保护软骨的作用，可延缓OA的病变发展进程，且对软骨退变的延缓优于玻璃酸钠注射液。有临床研究资料报道，关节腔注射治疗40～70岁的OA患者，青藤碱与透明质酸减轻OA患者病情进展的疗效相当，但前者膝关节疼痛积分、僵硬积分及关节功能积分(WOMAC评分)的改善程度优于后者，且用药前后的血、尿、大便常规检查以及肝功、肾功检查未见异常，无明显不良反应及毒副作用〔①杨惠琴，陈礼荣。中西医结合学报，2008，6(12)：1275～1280；②杨惠琴，陈礼荣。中医药导报，2007，13(10)：62～64；③陈礼荣。湖北中医学院硕士学位论文，20080518〕。有临床试验报道膝OA患者行关节腔冲洗后分别注射青藤碱注射液(正清风痛宁注射液)和曲安奈德注射液，3个月后随访有效率分别为80％和57％，6个月分别为68％和38％，前者远期疗效优于后者〔甘文，刘华文，欧泽云，等。中医药导报，2006，12(9)：36～37〕。

透明质酸(hyalouronic acid，简称HA，药品领域称玻璃酸；其钠盐简称SH)是构成皮肤、玻璃体、关节滑液和软骨组织的重要成分，具有良好的润滑性、黏弹性和非免疫原性(Laurent TC等，Ann.Rheum.Dis.1995，54：429～432)。透明质酸及其衍生物在临床上已得到广泛应用，如作为黏弹剂用于眼科和骨科手术中、关节腔注射用于治疗OA和类风湿性关节炎(RA)、作为隔离剂用于预防术后粘连、作为填充剂用于软组织修复以及作为药物媒介用于多种药物制剂中〔凌沛学和贺艳丽等，中国生化药物杂志，1998，19：137～235〕。

透明质酸在眼玻璃体中与胶原纤维形成两个相互平衡的网状体系，胶原的网状结构起固体支架作用，透明质酸的大分子网状结构结合大量的水分，与可溶性蛋白质共同形成凝胶充填于其中。角膜基质中的透明质酸对维持角膜形态具有重要的作用。玻璃酸钠注射液(药品用名)、透明质酸凝胶(医疗器械用名)及其衍生物作为眼科手术辅助用黏弹剂近半个世纪，广泛应用于玻璃体视网膜、前房以及青光眼、角膜移植等多种眼科手术，其具有扩大手术视野、保护角膜内皮细胞及眼内组织、减少术后并发症、提高手术成功率等多种作用〔Balazs EA.CurrPharm Biotechnol.2008Aug；9(4)：236-8〕。

透明质酸在关节腔内起润滑、屏障及缓冲应力作用。目前，玻璃酸钠钠注射液、透明质酸凝胶或交联的透明质酸凝胶于关节腔内注射一次或多次，通过补充外源性透明质酸，增强关节液的黏弹性和润滑功能，保护关节内已损伤或正常的软骨面，阻止关节软骨的磨损和退变，促进软骨再生与愈合；同时外源性透明质酸可使滑膜组织和关节囊中透明质酸含量明显升高，缓冲和改变关节腔内致痛因子分布，使关节囊神经末梢离子通透性发生改变，从而减轻骨关节炎产生的疼痛〔凌沛学.透明质酸.北京：中国轻工业出版社，2000.137～150〕。

研究表明，透明质酸凝胶治疗OA的总有效率为80％以上，近三十多年大量的临床应用资料证明关节腔透明质酸注射不仅仅是对OA症状的缓解，而是可以显著降低关节的退化〔Migliore A，Granata M.Clin Interv Aging.2008；3(2)：365-9〕。交联或未交联的透明质酸产品注射后的治疗效果可维持5～13周，14～26周或更长时间内也可观察到OA症状的改善；从安全性的角度看，避免了因使用COX-2选择性或非选择性非甾体抗炎药(NSAIDs)对心血管、消化道和肾脏的毒副作用，关节腔注射透明质酸是治疗OA较好的选择〔Brzusek D，PetronD.Curr Med Res Opin.2008；24(12)：3307～22.〕。

透明质酸对轻、中度OA的疗效显著，但其对重度、晚期OA或RA的疗效欠佳。临床上对急性发作的OA往往采用关节灌洗并给予皮质类固醇，治疗效果较理想。一个包括10项临床试验的统计分析结果认为，关节腔内皮质激素注射治疗可改善膝OA症状，在2周之内及16～24周有疗效〔Arroll B，Goodyear-Smith F.BMJ.，2004328(7444)：869～870〕。虽然有人报道关节内注射透明质酸较注射甾体激素药物强的松龙对OA疼痛和功能的改善作用更显著〔Cabom D，Rush J，Lanzer W，et al.J Rheumatol，2004，3l(2)：333～343.〕，但多数临床报道认为关节腔注射皮质激素的短期疗效(注射后1～4周)与注射透明质酸产品相当，但长期疗效(5～13周或更长)在疼痛积分、僵硬积分或WOMAC评分等一个或多个指标不及透明质酸产品，且甾体激素多次、长期使用可加剧关节软骨的损害以及OA的症状〔BellamyN，Campbell J，Robinson V，et，al.Cochrane Database Syst Rev.，200619；(2)：CD005328〕。

透明质酸为直链的大分子，其分子中每一双糖单位含有一个羧基，可解离成负离子，等空间距离的负离子相互排斥，使分子在溶液中呈一定刚性的线团状。当达到一定浓度后，透明质酸分子可相互交错缠绕构成网状结构，使药物分子进入网格中，具有控制药物释放速度的作用，透明质酸对一些生物大分子药物还有生物黏附作用。透明质酸作为药物缓释载体具有诸多优点，如优良的生物相容性和可降解性，通过酯化、交联的透明质酸衍生物由于改善了对强酸、强碱、热、自由基不稳定性及对透明质酸酶的敏感性，使其降解时间延长，更适宜作为药物缓释载体的应用〔张文强，黄岳山，支晓兴。中国组织工程研究与临床康复，2008，2(23)：4515～4518〕。由于对软骨和眼组织具有保护作用，透明质酸是制备关节腔和眼内注射或植入药物最理想的药物载体。Allergan公司研究开发了一种以透明质酸为载体的皮质激素注射剂(曲安奈德，Triaris^TM)，眼玻璃体内注射用于治疗使用皮质激素外眼给药无效的内眼炎，以及关节腔内注射用于急性发作的痛风、OA、RA以及滑膜炎的短期辅助性治疗，安全性和有效性好于以其它赋形剂为载体的同类激素(Bristol-Myers Squibb公司的Kenalog

-40)。

临床有报道透明质酸联合强的松龙、曲安奈德或青藤碱和川弓嗪关节腔注射治疗重症膝OA，疼痛缓解和功能改善均优于单独使用透明质酸〔周莉华梅步云汤韶明。实中西医结合临床，2007，7(4)：93～94〕。但联合用药需要在注射时更换注射器，操作繁琐，增加污染机会，而且浪费药品包装不利于环保；更重要的是两种药物先后注入，由于透明质酸黏度大，药物不易均匀分散到透明质酸网状凝胶中，仅是简单混合，难以发挥透明质酸的缓释作用，药物很快分散流失，治疗效果降低，注射于眼内时还存在不能将药物黏附在特定位置的问题。

本发明以透明质酸作为载体，制备异喹啉类化合物非口服给药途径的药物制剂，特别是制备关节腔和眼后节局部给药途径的药物制剂，试验证明①异喹啉类化合物的抗炎、抗过敏、抗氧化或镇痛作用与透明质酸的润滑和组织保护功能相结合，二者对疾病的治疗起到协同作用，本发明治疗效果好于二者单独给药；②本发明以透明质酸作为药物载体，异喹啉类药物均匀分散在透明质酸凝胶中，具有一定缓释效果，更利于延长药物在局部的作用时间，可以降低药物的剂量或减少给药的次数，相同剂量条件下本发明疗效好于二者联合(先后)给药；③本发明在制备关节腔给药途径药物的应用中，由于异喹啉类化合物对关节软骨有保护或促进愈合的作用，与以透明质酸为载体的甾体激素注射剂相比，长期、多次关节腔给药，本发明抑制关节软骨退变的效果显著，远期疗效更好。

发明内容

本发明的目的是提供一种含有异喹啉类化合物和透明质酸的药物组合物及其在制备非口服给药途径的药物制剂中的用途。

本发明药物组合物，其特征是至少含有两个组分，其中第一组分为一种异喹啉类化合物，第二组分为一种透明质酸盐，或者是一种透明质酸衍生物，也可以是一种透明质酸盐和一种透明质酸衍生物的混合物。

本发明药物组合物中第一组分的含量为0.01％～10％(g/mL)，优选范围0.5％～5％(g/mL)，更优选范围1％～3％(g/mL)。即按重量体积百分比计算，组合物中所含异喹啉类化合物的重量占组合物总体积的0.01％～10％，优选范围0.5～5％，更优选范围1％～3％。

本发明药物组合物中第二组分的含量为0.1％～10％(g/mL)，优选范围0.5％～5％(g/mL)，更优选范围1％～3％(g/mL)。即按重量体积百分比计算，组合物中所含透明质酸盐或透明质酸衍生物的重量占组合物总体积的0.1％～10％，优选范围0.5％～5％，更优选范围1％～3％。

本发明药物组合物中的第一组分是一种异喹啉类化合物，选自异喹啉类生物碱及其衍生物。异喹啉类化合物指以异喹啉〔苯并吡啶(氮原子在β-位)〕或四氢异喹啉为基本母核衍生的一类化合物，例如苄基异喹啉、原小檗碱类、双苄基异喹啉、苯酞异喹啉、阿朴啡类和异阿朴啡类、吗啡类、苯骈菲啶类等，其中，苄基异喹啉如罂粟碱、去甲乌药碱、厚扑碱、莲心季铵碱；原小檗碱类如小檗碱、延胡索乙素、左旋延胡索乙素、轮环藤酚碱；双苄基异喹啉如粉防己碱(又称汉防己甲素)、蝙蝠葛碱(又称北豆根碱、北山豆根碱、山豆根碱)、莲心碱、异莲心碱；苯酞异喹啉如那可汀；阿朴啡类和异阿朴啡类如紫堇定(紫堇啡碱)、异紫堇定(异紫堇啡碱)、唐松草碱(又称厚果唐松草碱、木兰花碱、木兰碱、玉兰碱、洋玉兰碱)、唐松草新碱(又称厚果唐松草次碱)、荷叶碱、降荷叶碱；吗啡类如吗啡、可待因、青藤碱、莲花氏碱；苯骈菲啶类如白屈菜红碱、白屈菜碱。

本发明药物组合物中的第一组分优选蝙蝠葛碱、白屈菜碱、青藤碱、粉防己碱、小檗碱(黄连素)、莲心碱及其衍生物，更优选青藤碱、粉防己碱及其衍生物。

青藤碱又称为清风藤碱，防己碱，毛防己碱等，可以从植物中提取得到，这些植物包括但不仅限于：青藤〔Sinomenium acutum(Thunb.)Rehd.et Wils.〕或毛青藤〔Sinom-eniumacutum(Thunb.)〕的根和茎、蝙蝠葛(Menispermun dauricum DC.)叶等，也不排除通过化学合成手段获得。青藤碱化学名称为(9α，13α，14α)-7，8-二脱氢-4-羟基-3，7-二甲氧基-17-甲基吗啡喃-6-酮，英文名称为Sinomenine、coculine或Sinomenone，CAS登记号为115-53-7。

粉防己碱又名汉防己甲素、汉防己碱、粉防己甲素、小檗胺，可以从植物中提取得到，这些植物包括但不仅限于：防己科植物粉防己(Stephania tetrandra S.Moore)、头花千金藤(S.cepharantha Hayata)、马兜铃(Aristolochia debilis)或毛叶轮环藤(Cyclea barbata Miers)的根、蝙蝠葛(Menispermun dauricum DC.)的藤茎，，也不排除通过化学合成手段获得。粉防己碱化学名6，6′，7，12-Tetramethoxy-2，2′-dimethyl-1-beta-berbaman，英文名Tetrandrine，CAS登记号518-34-3。

其中，所述衍生物包括其有机酸(酒石酸、枸橼酸、鞣酸)盐、无机酸(盐酸、硫酸、磺酸)盐或氧化、还原、甲基化、甲氧基化或乙酰化衍生物。例如但不仅限于：盐酸小檗碱、鞣酸小檗碱(无味黄连素)、硫酸氢小檗碱、四氢小檗碱、9-乙酰小檗碱、莲心碱高氯酸盐、甲基莲心碱、盐酸汉防己甲素、盐酸青藤碱、轮环藤碱N-氧化物、2-乙酰-N-降荷叶碱、2，6-二乙酰-N-降荷叶碱、6-苯甲酰-N-降荷叶碱、盐酸异紫堇定(盐酸异可利定、解痉宁)等。

本发明药物组合物中的第一组分特别指定为盐酸青藤碱，为青藤碱的盐酸盐，英文名为Sinomenone Hydrochloride或Sinomenine HCl，CAS登记号为6080-33-7。

本发明药物组合物中的第二组分可以是一种透明质酸盐，选自透明质酸钠、透明质酸钾、透明质酸锌、透明质酸钙和透明质酸四丁基铵盐；优选透明质酸钠。所述透明质酸盐可以是从动物组织提取得到，也可以是从微生物发酵提取得到，还可以是从基因工程植物组织提取获得；可以是平均分子量较低的，如2～20kDa，也可以是平均分子量中等的，如20～500kDa，也可以是平均分子量较高的，如500～7000kDa。

本发明药物组合物中的第二组分也可以是一种透明质酸衍生物，选自酯化的透明质酸衍生物和交联的透明质酸衍生物；优选透明质酸交联衍生物；更优选采用环氧醚和二乙烯基砜交联的透明质酸衍生物。

酯化的透明质酸衍生物，例如，硼酸酯化、交联的透明质酸衍生物，类似于专利CN1961037(WO2005116131)中描述的的产物：苯丙酮衍生物部分酯化的透明质酸衍生物，类似专利WO03076475101405303长链脂肪醇部分酯化的透明质酸衍生物，类似专利WO9808876中描述的产物；透明质酸的丙烯酸酯，类似专利WO2007106738A2-CN101405303101405303；多元醇部分酯化、交联的透明质酸衍生物，类似于专利CN1025035(EP0265116)中描述的的产物；脂肪醇、非脂肪醇、芳香醇等部分酯化的透明质酸衍生物，类似于意大利Fidia公司的HYAFF系列凝胶(EP0216453)。

交联的透明质酸衍生物，可以是不使用交联剂的自交联产物，也可以是采用一种交联剂交联的产物，也可以是采用两种或两种以上交联剂多重交联的产物。不使用交联剂的自交联产物，例如透明质酸钠在酸性条件下产生的自交联凝胶，类似于专利CN1259343(WO2001057093)中描述的产物。采用一种交联剂交联的产物，例如环氧醚(BDDE)交联的透明质酸钠凝胶，类似于瑞典Q-Med公司的NAS透明质酸系列凝胶；二乙烯基砜交联的的透明质酸钠凝胶，类似于美国Genzyme公司hylan系列凝胶；碳二亚胺交联的透明质酸凝胶，类似于专利CN1893989(WO2005067994)中描述的产物。采用两种或两种以上交联剂多重交联的产物，例如采用醛类、碳二亚胺、缩水甘油醚等多种交联剂多重交联的透明质酸凝胶，类似于专利CN1243773(WO2000046252)、CN1200951(WO2000046253)中描述的产物。

所述透明质酸衍生物可以是通过对来源于动物组织、微生物发酵或基因工程植物组织的透明质酸修饰或交联得到的产物，可以是水溶性的凝胶，也可以是水不溶性的凝胶。

本发明药物组合物中的第二组分还可以是一种透明质酸盐和一种透明质酸衍生物的混合物，例如透明质酸钠和透明质酸酯类衍生物的混合凝胶、透明质酸钠和二乙烯基砜交联透明质酸衍生物的混合凝胶、透明质酸钠和环氧醚交联透明质酸衍生物的混合凝胶。

本发明组合物，还可以含有药物制剂中常用的辅料，例如：由无机盐或有机盐组成的缓冲体系、渗透压调节剂、抗氧剂、络合剂、增溶剂、增黏剂、防腐剂等。

由无机盐或有机盐组成的缓冲体系包括但仅不限于：磷酸盐、醋酸盐、酒石酸盐、枸橼酸盐和硼酸盐缓冲体系，优选磷酸盐缓冲体系。例如可以调节组合物pH值在5～7之间的缓冲体系：0.3mM磷酸二氢钠和0.2mM磷酸氢二钠组成的缓冲体系、1.5mM酒石酸和3.2mM氢氧化钠组成的缓冲体系、0.9mM磷酸氢二钠和0.15mM枸橼酸组成的缓冲体系、0.12mM醋酸和3.75mM醋酸钠组成的缓冲体系、0.3mM枸橼酸和1.0mM氢氧化钠组成的缓冲体系、1.8mM枸橼酸和4.5mM氢氧化钠组成的缓冲体系、3mM硼酸组成的缓冲体系、15mM硼酸和0.05mM硼砂组成的缓冲体系。

渗透压调节剂包括但不仅限于：氯化钠(NaCl)、甘油、葡萄糖、甘露醇、1，2-丙二醇，优选氯化钠。渗透压调节剂的用量与组合物中其它成分的含量有关，采用适量的渗透压调节剂可以将组合物的渗透压调节在250～350mOsmol/L之间，更理想的是调节在280～330mOsmol/L之间。

抗氧剂包括但不仅限于：亚硫酸钠(Na₂SO₃)、亚硫酸氢钠(NaHSO₃)、焦亚硫酸钠(Na₂S₂O₄)、盐酸半胱氨酸(L-cys)、抗坏血酸(V_C)。

络合剂包括但不仅限于：乙二胺四乙酸二钠(EDTA)。

增溶剂包括但不仅限于：吐温80、聚乙二醇(PEG)、β环糊精(β-CD)、乙醇、三乙醇胺、二乙醇胺。

增黏剂包括但不仅限于：甲基纤维素、羟丙甲基纤维素(HPMC)、卡波姆、泊洛沙姆、聚乙烯醇(PVA)、聚维酮(PVP)。

防腐剂包括但不仅限于：三氯叔丁醇、硫柳汞、氧氰化汞、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯、苯乙醇、山梨酸、山梨酸钾、三氯生(玉洁新DP300)。

本发明所述组合物，用于制备非口服给药途径的药物制剂，优选用于制备注射给药途径和植入给药途径的药物制剂，更优选用于制备关节腔和眼后节局部注射或植入给药途径的药物制剂。所述非口服给药途径包括但不局限于：涂布皮肤和黏膜表面给药，鼻腔和鼻泪管、外耳道和中耳腔植入(注入)给药，阴道、子宫、膀胱和直肠给药，眼内注射或植入给药，关节腔和鞘内注射或植入给药，真皮内和皮下注射或植入给药。根据本发明组合物的用途可以是注射剂、植入剂、推剂、洗剂、灌注剂、搽剂、涂剂、涂膜剂、外用凝胶剂等多种制剂类型的药物。

具体实施方式

本发明含有异喹啉类化合物和透明质酸两种组分，根据多数文献报道，在极性溶液环境中，异喹啉类化合物在pH2～5的酸性条件下稳定，然而，在酸性条件下，透明质酸易发生降解，使制剂黏度下降，丧失了透明质酸在制剂中所起到的润滑、缓冲以及使药物在局部延缓释放等作用，无法保证产品的稳定性。因此，需要确定较为适当的pH值，尽量减少透明质酸的降解，同时通过调整制剂中的其它成分，提高异喹啉类化合物在制剂中的稳定性。

以盐酸青藤碱和透明质酸钠的组合物为例，考察不同pH值条件下，不同辅料及其不同加入量对制剂两种主要成分稳定性的影响。由于透明质酸钠的降解可引起溶液黏度降低，盐酸青藤碱的降解引起溶液颜色呈黄绿色并逐渐加深，因此采用溶液的运动黏度和在420nm波长处的吸光度分别作为二者降解程度的考察指标，测定方法分别依据《中国药典》2005年版二部附录VI G和附录IV A。

(1)pH值的影响

在2mM的磷酸盐缓冲体系中加入2.5％盐酸青藤碱，用盐酸或氢氧化钠调节溶液不同pH，0.22μm滤膜除菌，按1％投入无菌透明质酸钠，加热助溶30min后过夜，完全溶解后，密封，置40℃恒温箱，5天取样用蒸馏水作10倍稀释，测定运动黏度(v)和420nm波长处的吸光度(A_420nm)，结果见下表。

以上结果表明，pH值降低使透明质酸钠分解加速，而pH值升高使盐酸青藤碱分解加速。在pH值5～7时透明质酸钠黏度变化相对较小。

(2)缓冲体系的影响

不同缓冲体系中加入2.5％盐酸青藤碱和0.5％氯化钠，用盐酸或氢氧化钠调节pH6，其它按上述(1)中描述的方法配制和考察，同样测定v和A_420nm，结果见下表。

以上结果表明，不同缓冲体系对透明质酸钠稳定性的影响无明显差异，磷酸盐和酒石酸盐缓冲体系中盐酸青藤碱稳定性的影响相对较小。

(3)其它辅料的影响

在2mM的磷酸盐缓冲体系中加入2.5％盐酸青藤碱和0.5％氯化钠和其它辅料，用盐酸或氢氧化钠调节pH6，其它按上述方法配制和考察，同样测定v和A_420nm，结果见下表。

以上结果表明，络合剂EDTA、抗氧剂NaHSO₃、Na₂S₂O₄、L-cys、增溶剂吐温80、β-CD、PEG400、防腐剂山梨酸的加入，对透明质酸钠的稳定性影响不大，但可降低盐酸青藤碱的分解，提高盐酸青藤碱在溶液中的稳定性。增黏剂HPMC、PVP的加入对盐酸青藤碱的稳定性无影响，但可显著增加溶液的黏度。

以下实施例是为了更好地说明本发明，不是限制本发明。

实施例1注射剂和植入剂的制备

处方1-1盐酸青藤碱透明质酸钠注射液(按100mL计)：盐酸青藤碱0.5g，透明质酸钠2g，二水磷酸二氢钠0.005g，十二水磷酸氢二钠0.056g，氯化钠0.55g，EDTA 0.03g，亚硫酸氢钠0.1g，余量为注射用水。

处方1-2盐酸青藤碱透明质酸钠注射液(按100mL计)：盐酸青藤碱1g，透明质酸钠1.5g，二水磷酸二氢钠0.005g，十二水磷酸氢二钠0.065g，氯化钠0.5g，EDTA 0.03g，亚硫酸氢钠0.2g，余量为注射用水。

处方1-3盐酸青藤碱透明质酸钠注射液(按100mL计)：盐酸青藤碱2.5g，透明质酸钠1g，二水磷酸二氢钠0.005g，十二水磷酸氢二钠0.065g，氯化钠0.45g，EDTA 0.05g，亚硫酸氢钠0.2g，余量为注射用水。

处方1-4盐酸青藤碱透明质酸钠注射液(按100mL计)：盐酸青藤碱2.5g，透明质酸钠2g，二水磷酸二氢钠0.005g，十二水磷酸氢二钠0.065g，氯化钠0.45g，EDTA 0.05g，亚硫酸氢钠0.2g，余量为注射用水。

处方1-5盐酸青藤碱透明质酸钠注射液(按100mL计)：盐酸青藤碱5g，透明质酸钠0.5g，二水磷酸二氢钠0.005，十二水磷酸氢二钠0.065g，甘露醇2g，聚乙二醇15005g，EDTA 0.05g，盐酸半胱氨酸0.1g，余量为注射用水。

处方1-6盐酸青藤碱透明质酸钠注射液(按100mL计)：盐酸青藤碱8g，透明质酸钠2.5g，二水磷酸二氢钠0.005g，十二水磷酸氢二钠0.07g，甘油2g，聚乙二醇40015g，EDTA0.05g，亚硫酸氢钠0.3g，余量为注射用水。

处方1-7盐酸青藤碱透明质酸钠注射液(按100mL计)：盐酸青藤碱3g，透明质酸钠2.5g，二水磷酸二氢钠0.005g，十二水磷酸氢二钠0.065g，甘露醇5g，EDTA 0.05g，焦亚硫酸钠0.2g，余量为注射用水。

处方1-8盐酸青藤碱透明质酸钠注射液(按100mL计)：盐酸青藤碱1.5g，透明质酸钠1.5g，二水磷酸二氢钠0.005g，十二水磷酸氢二钠0.065g，氯化钠0.5g，EDTA 0.05g，亚硫酸氢钠0.2g，余量为注射用水。

处方1-9盐酸青藤碱透明质酸钠注射液(按100mL计)：盐酸青藤碱6g，透明质酸钠0.5g，二水磷酸二氢钠0.005g，十二水磷酸氢二钠0.067g，葡萄糖2.5g，EDTA 0.03g，焦亚硫酸钠0.1g，余量为注射用水。

处方1-10盐酸青藤碱透明质酸钠注射液(按100mL计)：盐酸青藤碱8g，透明质酸钠2.5g，二水磷酸二氢钠0.005g，十二水磷酸氢二钠0.07g，1，2-丙二醇1.5g，聚乙二醇40015g，EDTA 0.03g，盐酸半胱氨酸0.1g，余量为注射用水。

处方1-11～1-20汉防己甲素透明质酸钠注射液(按100mL计)：将处方1-1～1-10中的盐酸青藤碱换为汉防己甲素，其它成分相同。

制备方法：将处方中除透明质酸钠以外的组分投入处方全量90％的注射用水中，搅拌溶解，必要时用稀盐酸或氢氧化钠溶液调pH值5.5～6.5，0.22μm滤膜过滤除菌，滤液置于事先灭菌的容器中，在无菌环境中，投入注射级别、无菌或事先灭菌的透明质酸钠，80～100℃加热溶解，补加注射用水至全量，混匀，无菌灌于事先灭菌的一次性使用的预灌装注射器，压封于塑料泡罩，即得。

为了便于溶解，处方中的汉防己甲素可以用盐酸汉防己甲素、硫酸汉防己甲素代替，投入量以汉防己甲素的量计算，或者先投入汉防己甲素，加少量稀盐酸溶解后再投入其它成分。

实施例2注射剂和植入剂的制备

处方2-1盐酸青藤碱交联透明质酸钠凝胶(按100mL计)：盐酸青藤碱0.5g，交联透明质酸钠2g，二水磷酸二氢钠0.005g，十二水磷酸氢二钠0.06g，氯化钠0.55g，EDTA 0.03g，焦亚硫酸钠0.1g，余量为注射用水。

处方2-2盐酸青藤碱交联透明质酸钠凝胶(按100mL计)：盐酸青藤碱1g，交联透明质酸钠1.5g，二水磷酸二氢钠0.005g，十二水磷酸氢二钠0.065g，氯化钠0.5g，EDTA 0.03g，亚硫酸氢钠0.2g，余量为注射用水。

处方2-3盐酸青藤碱交联透明质酸钠凝胶(按100mL计)：盐酸青藤碱1.5g，交联透明质酸钠2g，透明质酸钠0.2g，二水磷酸二氢钠0.005g，十二水磷酸氢二钠0.065g，氯化钠0.45g，EDTA 0.05g，盐酸半胱氨酸0.1g，余量为注射用水。

处方2-4盐酸青藤碱交联透明质酸钠凝胶(按100mL计)：盐酸青藤碱2.5g，交联交联透明质酸钠1.4g，透明质酸钠0.4g，二水磷酸二氢钠0.005g，十二水磷酸氢二钠0.065g，氯化钠0.45g，EDTA 0.05g，亚硫酸氢钠0.2g，余量为注射用水。

处方2-5盐酸青藤碱交联透明质酸钠凝胶(按100mL计)：盐酸青藤碱2.5g，交联交联透明质酸钠1.8g，二水磷酸二氢钠0.005g，十二水磷酸氢二钠0.065g，氯化钠0.45g，EDTA0.05g，亚硫酸氢钠0.2g，余量为注射用水。

处方2-6盐酸青藤碱交联透明质酸钠凝胶(按100mL计)：盐酸青藤碱2.5g，交联透明质酸钠2g，透明质酸钠0.2g，二水磷酸二氢钠0.005g，十二水磷酸氢二钠0.065g，氯化钠0.45g，EDTA 0.05g，亚硫酸氢钠0.2g，余量为注射用水。

处方2-7盐酸青藤碱交联透明质酸钠凝胶(按100mL计)：盐酸青藤碱2.5g，交联透明质酸钠1.8g，透明质酸钠0.2g，二水磷酸二氢钠0.005g，十二水磷酸氢二钠0.065g，氯化钠0.3g，EDTA 0.05g，亚硫酸氢钠0.2g，余量为注射用水。

处方2-8盐酸青藤碱交联透明质酸钠凝胶(按100mL计)：盐酸青藤碱3g，交联透明质酸钠1.8g，透明质酸钠0.2g，二水磷酸二氢钠0.005g，十二水磷酸氢二钠0.065g，氯化钠0.3g，EDTA 0.05g，焦亚硫酸钠0.2g，余量为注射用水。

处方2-9盐酸青藤碱交联透明质酸钠凝胶(按100mL计)：盐酸青藤碱5g，交联透明质酸钠2.25g，透明质酸钠0.25g，二水磷酸二氢钠0.005g，十二水磷酸氢二钠0.067g，氯化钠0.2g，EDTA 0.05g，焦亚硫酸钠0.2g，余量为注射用水。

处方2-10盐酸青藤碱交联透明质酸钠凝胶(按100mL计)：盐酸青藤碱6g，交联透明质酸钠1.5g，透明质酸钠0.5g，二水磷酸二氢钠0.005g，十二水磷酸氢二钠0.07g，1，2-丙二醇3g，EDTA 0.05g，盐酸半胱氨酸0.1g，余量为注射用水。

处方2-11～2-20汉防己甲素交联透明质酸钠注射液(按100mL计)：将处方2-1～2-10中的盐酸青藤碱换为汉防己甲素，其它成分相同。

制备方法：

(1)交联透明质酸钠凝胶的制备

在此将专利200810009194.6公开的交联透明质酸钠凝胶制备方法中所描述的交联反应、去离子水纯化和凝胶破碎等步骤引入本实施例，适量透明质酸钠和缩水甘油醚在NaOH溶液中混合反应形成水不溶性凝胶、用去离子水浸泡纯化、破碎为一定大小的颗粒，然后取凝胶颗粒于60℃旋转蒸发至原重量的1/4～1/8，制得含交联透明质酸钠约3％～10％(g/g)的凝胶，121℃加热灭菌20min，备用。

(2)混合及灌装

按处方中交联透明质酸钠的量，计算需投入(1)所得交联透明质酸钠凝胶的量W(g)，然后根据此量计算交联透明质酸钠凝胶的含水量V₁(mL)以及至处方全量需补足的注射用水量V₂(mL)。例如处方2-4，若取(1)制得的6％的交联透明质酸钠凝胶，W＝23.33g，V₁＝23.33×(1-6％)/1.01＝21.69mL，V₂＝100-V₁＝78.31mL。

将处方中除交联透明质酸钠和透明质酸钠以外的组分投入至处方全量需补足的注射用水V₂中，搅拌溶解，必要时用稀盐酸或氢氧化钠溶液调pH值5.5～7.0，0.22μm滤膜过滤除菌。若处方中需要加入透明质酸钠，则在无菌环境中，投入注射级别、无菌或事先灭菌的透明质酸钠，80～100℃加热溶解，混匀。在无菌环境中，投入交联透明质酸钠凝胶，混匀，置4～10℃充分溶胀12～48h，无菌灌于事先灭菌的一次性使用的预灌装注射器，压封于塑料泡罩，即得。

实施例3外用凝胶剂和推剂的制备

处方3-1盐酸青藤碱透明质酸钠凝胶(按100mL计)：盐酸青藤碱0.5g，透明质酸钠1g，醋酸0.007g，醋酸钠0.04g，甘油3g，EDTA 0.03g，焦亚硫酸钠0.1g，尼泊金甲酯0.02g，尼泊金丙酯0.01g，HPMC 2g，余量为纯化水。

处方3-2盐酸青藤碱透明质酸钠凝胶(按100mL计)：盐酸青藤碱1g，透明质酸钠2g，EDTA 0.03g，亚硫酸氢钠0.2g，尼泊金乙酯0.03g，卡波姆1.2g，三乙醇胺1g，聚乙二醇4005g，余量为纯化水。

处方3-3盐酸青藤碱透明质酸钠凝胶(按100mL计)：盐酸青藤碱2g，透明质酸钠3g，硼酸0.08g，氯化钠0.45g，EDTA 0.05g，亚硫酸氢钠0.2g，山梨酸钾0.5g，余量为纯化水。

处方3-4盐酸青藤碱透明质酸钠凝胶(按100mL计)：盐酸青藤碱2.5g，透明质酸钠0.5g，硼酸0.09g，硼砂0.002g，1，2-丙二醇3g，EDTA 0.05g，抗坏血酸0.5g，硫柳汞0.001g，聚乙烯醇5g，余量为纯化水。

处方3-5盐酸青藤碱透明质酸钠凝胶(按100mL计)：盐酸青藤碱3g，透明质酸钠2.5g，二水磷酸二氢钠0.005g，十二水磷酸氢二钠0.007g，EDTA 0.05g，盐酸半胱氨酸0.2g，聚乙二醇150010g，余量为纯化水。

处方3-6～3-10汉防己甲素透明质酸钠凝胶(按100mL计)：将处方3-1～3-5中的盐酸青藤碱换为汉防己甲素，其它成分相同。

制备方法：将处方中除透明质酸钠和增稠剂以外的组分投入85％处方全量的纯化水中，搅拌溶解，0.22μm滤膜过滤除菌，滤液置于事先灭菌的容器中，在洁净环境中，投入增稠剂和外用级别透明质酸钠，搅拌溶解，用稀盐酸或氢氧化钠溶液调pH值5～6，补加0.22μm滤膜过滤除菌的纯化水至全量，混匀，灌于事先消毒的一次性使用的预灌装注射器，压封于塑料泡罩，或者灌于事先消毒的软管中，即得。

实施例4洗剂和灌注剂制备

处方4-1盐酸青藤碱透明质酸钠无菌溶液(按100mL计)：盐酸青藤碱2.5g，透明质酸钠0.03g，硼酸0.09g，硼砂0.005g，氯化钠0.45g，EDTA 0.03g，焦亚硫酸钠0.1g，余量为纯化水。

处方4-2盐酸青藤碱透明质酸钠无菌溶液(按100mL计)：盐酸青藤碱2g，透明质酸钠0.05g，枸橼酸0.003g，十二水磷酸氢二钠0.04g，氯化钠0.5g，EDTA 0.03g，亚硫酸氢钠1g，余量为纯化水。

处方4-3盐酸青藤碱透明质酸钠无菌溶液(按100mL计)：盐酸青藤碱1.5g，透明质酸钠0.08g，二水磷酸二氢钠0.005g，十二水磷酸氢二钠0.06g，氯化钠0.5g，EDTA 0.05g，亚硫酸氢钠0.2g，盐酸半胱氨酸0.05g，余量为纯化水。

处方4-4盐酸青藤碱透明质酸钠无菌溶液(按100mL计)：盐酸青藤碱1g，透明质酸钠0.1g，枸橼酸0.03g，氢氧化钠0.02g，氯化钠0.55g，EDTA 0.05g，盐酸半胱氨酸0.1g，余量为纯化水。

处方4-5盐酸青藤碱透明质酸钠无菌溶液(按100mL计)：盐酸青藤碱0.5g，透明质酸钠0.5g，酒石酸0.02g，氢氧化钠0.015g，氯化钠0.55g，EDTA 0.05g，焦亚硫酸钠0.2g，余量为纯化水。

处方4-6～4-10汉防己甲素交联透明质酸钠无菌溶液(按100mL计)：将处方4-1～4-5中的盐酸青藤碱换为汉防己甲素，其它成分相同。

制备方法：将处方中除透明质酸钠以外的组分投入90％处方全量的纯化水中，搅拌溶解，必要时用稀盐酸或氢氧化钠溶液调pH值5.5～6.5，滤膜过滤，在洁净环境中，投入注射级别透明质酸钠，溶解，补加纯化水至全量，混匀，灌于50mL西林瓶，加盖压封，蒸汽加热灭菌，即得。

实施例5搽剂、涂剂和涂膜剂的制备

处方5-1盐酸青藤碱透明质酸钠溶液(按100mL计)：盐酸青藤碱0.5g，透明质酸钠2g，硼酸0.09g，硼砂0.003g，甘油5g，EDTA 0.03g，焦亚硫酸钠0.1g，氧氰化汞0.02g，余量为纯化水。

处方5-2盐酸青藤碱透明质酸钠溶液(按100mL计)：盐酸青藤碱1g，透明质酸钠1.5g，枸橼酸0.21g，枸橼酸钠2.6g，1，2-丙二醇5g，EDTA 0.03g，亚硫酸氢钠0.2g，玉洁新0.1g，余量为纯化水。

处方5-3盐酸青藤碱透明质酸钠溶液(按100mL计)：盐酸青藤碱1.5g，透明质酸钠1g，酒石酸0.02g，氢氧化钠0.015g，甘油5g，EDTA 0.05g，亚硫酸氢钠0.2g，盐酸半胱氨酸0.05g，苯乙醇0.25g，余量为纯化水。

处方5-4盐酸青藤碱透明质酸钠溶液(按100mL计)：盐酸青藤碱2.5g，透明质酸钠1g，二乙醇胺3g，EDTA 0.05g，盐酸半胱氨酸0.1g，PVP 15g，1，2-丙二醇5g，硫柳汞0.02g，余量为纯化水。

处方5-5盐酸青藤碱透明质酸钠溶液(按100mL计)：盐酸青藤碱5g，透明质酸钠0.5g，EDTA 0.05g，焦亚硫酸钠0.2g，聚乙烯醇10g，乙醇30mL，三乙醇胺3mL，甘油5g，三氯叔丁醇0.7g，余量为纯化水。

处方5-6～5-10汉防己甲素透明质酸钠溶液(按100mL计)：将处方5-1～5-5中的盐酸青藤碱换为汉防己甲素，其它成分相同。

制备方法：将处方中除透明质酸钠、成膜剂或增稠剂以外的组分投入80％处方全量的纯化水中，搅拌溶解，0.22μm滤膜过滤除菌，滤液置于事先灭菌的容器中，在洁净环境中，投入外用级别透明质酸钠、增稠剂或成膜剂，搅拌溶解，用稀盐酸或氢氧化钠溶液调pH值5.0～6.5，补加0.22μm滤膜过滤除菌的纯化水至全量，混匀，灌于事先灭菌的塑料药瓶或玻璃药瓶中，即得。

以上所有实施例中所述的无菌环境指百级或更高级别的净化环境，可以是净化车间中达到百级要求的局部区域，所述洁净环境指百级以下，十万级以上的净化车间。

以上所有实施例中所述的纯化水和注射用水均符合中国药典2005年版的要求，其中制剂处方中使用纯化水的也可以用注射用水代替。

实验数据

1.本发明体外释放试验

方法：

(1)样品制备

按实施例中处方1-3(A)、1-4(B)、2-4(C)和2-5(D)配制盐酸青藤碱透明质酸钠注射剂，作为试验样品，同时按该处方配制不加透明质酸钠的盐酸青藤碱溶液(E)，作为对照样品。分别取4个试验样品和对照样品各2g，置截断分子量2000Da的透析袋中，备用。

(2)盐酸青藤碱的含量测定

采用紫外分光光度法测定盐酸青藤碱的含量，以生理盐水为空白对照，以盐酸青藤碱原料药为对照品，测定液用生理盐水稀释至含盐酸青藤碱约30ug/ml，参考中国药典2005年版二部附录IV A规定的方法，在265nm波长处测定吸光度并计算盐酸青藤碱的含量。

(3)体外释放曲线绘制

参考中国药典2005年版二部附录IV A规定的方法，将测定样品和对照样品置于网蝶下方，以生理盐水为释放介质，温度37±2℃，调节转速50rpm，固定时间点取样测定释放液中盐酸青藤碱的含量，计算累积释放量，以时间为横坐标绘制体外释放曲线。

结果：体外释放曲线见附图。

附图说明

附图为体外释放曲线图。从附图可以看出，溶液中加入透明质酸钠可减缓盐酸青藤碱的释放。对照样品盐酸青藤碱溶液(E)仅160min即释放药物90％以上，3h累计释放量不再增加，而含1％透明质酸钠的盐酸青藤碱注射液(A)6h后释放药物达90％，含2％透明质酸钠的盐酸青藤碱注射液(B)6h释放药物达80％以上，含1.4％交联透明质酸钠的盐酸青藤碱注射用凝胶(C)与样品B释放速度相当，含1.8％交联透明质酸钠的盐酸青藤碱注射用凝胶(D)6h释放药物达70％以上。4个试验样品的药物释放速度明显低于对照样品。表明本发明实施例中组合物1-3、1-4和2-4、2-5均具有缓释特性。

Claims

1.一种药物组合物，其特征是至少含有以下两个组分：

a)异喹啉类化合物中的一种；

b)透明质酸盐或透明质酸衍生物中的一种或两种的混合物。

2.权利要求1所述组合物，其中异喹啉类化合物的含量为0.01％～10％(g/mL)，优选范围0.5％～5％(g/mL)，更优选范围1％～3％(g/mL)。

3.权利要求1所述组合物，其中透明质酸盐或透明质酸衍生物的含量为0.1％～10％(g/mL)，优选范围0.5％～5％(g/mL)，更优选范围1％～3％(g/mL)。

4.权利要求1或2所述组合物，其中异喹啉类化合物为异喹啉类生物碱及其衍生物，优选蝙蝠葛碱、白屈菜碱、青藤碱、粉防己碱、小檗碱、莲心碱及其衍生物，更优选青藤碱、粉防己碱及其衍生物。

5.权利要求4所述组合物，其中异喹啉类化合物为盐酸青藤碱。

6.权利要求1或3所述组合物，其中透明质酸盐选自透明质酸钠、透明质酸钾、透明质酸锌、透明质酸钙或透明质酸四丁基铵盐；优选透明质酸钠。

7.权利要求1或3所述组合物，其中透明质酸衍生物选自酯化的透明质酸衍生物或交联的透明质酸衍生物；优选透明质酸交联衍生物；更优选采用环氧醚或二乙烯基砜交联的透明质酸衍生物。

8.权利要求7所述组合物，其中透明质酸衍生物为1，4-丁二醇二缩水甘油醚交联的透明质酸衍生物。

9.权利要求1所述组合物，还含有药物制剂中常用的辅料。

10.权利要求1～3任一所述组合物在制备非口服给药途径的药物制剂，优选注射给药途径和植入给药途径的药物制剂，更优选关节腔和眼后节局部注射或植入给药途径的药物制剂的用途。