TW414807B - Maltose-trehalose converting enzyme, and preparation and uses thereof - Google Patents

Maltose-trehalose converting enzyme, and preparation and uses thereof Download PDF

Info

Publication number
TW414807B
TW414807B TW083107315A TW83107315A TW414807B TW 414807 B TW414807 B TW 414807B TW 083107315 A TW083107315 A TW 083107315A TW 83107315 A TW83107315 A TW 83107315A TW 414807 B TW414807 B TW 414807B
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
trehalose
maltose
enzyme
page
solution
Prior art date
Application number
TW083107315A
Other languages
English (en)
Inventor
Toshio Miyake
Hiroto Chaen
Tomoyuki Nishimoto
Toshiyuki Sugimoto
Original Assignee
Hayashibara Biochem Lab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hayashibara Biochem Lab filed Critical Hayashibara Biochem Lab
Application granted granted Critical
Publication of TW414807B publication Critical patent/TW414807B/zh

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23G—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF
    • A23G3/00—Sweetmeats; Confectionery; Marzipan; Coated or filled products
    • A23G3/34—Sweetmeats, confectionery or marzipan; Processes for the preparation thereof
    • A23G3/36—Sweetmeats, confectionery or marzipan; Processes for the preparation thereof characterised by the composition containing organic or inorganic compounds
    • A23G3/42—Sweetmeats, confectionery or marzipan; Processes for the preparation thereof characterised by the composition containing organic or inorganic compounds characterised by the carbohydrates used, e.g. polysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23G—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF
    • A23G3/00—Sweetmeats; Confectionery; Marzipan; Coated or filled products
    • A23G3/34—Sweetmeats, confectionery or marzipan; Processes for the preparation thereof
    • A23G3/343—Products for covering, coating, finishing, decorating
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23G—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF
    • A23G3/00—Sweetmeats; Confectionery; Marzipan; Coated or filled products
    • A23G3/34—Sweetmeats, confectionery or marzipan; Processes for the preparation thereof
    • A23G3/346—Finished or semi-finished products in the form of powders, paste or liquids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23G—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF
    • A23G4/00—Chewing gum
    • A23G4/06—Chewing gum characterised by the composition containing organic or inorganic compounds
    • A23G4/10—Chewing gum characterised by the composition containing organic or inorganic compounds characterised by the carbohydrates used, e.g. polysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L13/00—Meat products; Meat meal; Preparation or treatment thereof
    • A23L13/40—Meat products; Meat meal; Preparation or treatment thereof containing additives
    • A23L13/42—Additives other than enzymes or microorganisms in meat products or meat meals
    • A23L13/428—Addition of flavours, spices, colours, amino acids or their salts, peptides, vitamins, yeast extract or autolysate, nucleic acid or derivatives, organic acidifying agents or their salts or acidogens, sweeteners, e.g. sugars or sugar alcohols; Addition of alcohol-containing products
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L15/00—Egg products; Preparation or treatment thereof
    • A23L15/20—Addition of proteins, e.g. hydrolysates, fats, carbohydrates, natural plant hydrocolloids; Addition of animal or vegetable substances containing proteins, fats, or carbohydrates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L2/00—Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Their preparation
    • A23L2/52—Adding ingredients
    • A23L2/64—Re-adding volatile aromatic ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L27/00—Spices; Flavouring agents or condiments; Artificial sweetening agents; Table salts; Dietetic salt substitutes; Preparation or treatment thereof
    • A23L27/30—Artificial sweetening agents
    • A23L27/33—Artificial sweetening agents containing sugars or derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/33—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing oxygen
    • A61K8/36—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A61K8/365—Hydroxycarboxylic acids; Ketocarboxylic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/60—Sugars; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
    • A61K8/66—Enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/16—Emollients or protectives, e.g. against radiation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q11/00—Preparations for care of the teeth, of the oral cavity or of dentures; Dentifrices, e.g. toothpastes; Mouth rinses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/90—Isomerases (5.)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/12—Disaccharides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/14—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of a carbohydrase (EC 3.2.x), e.g. by alpha-amylase, e.g. by cellulase, hemicellulase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/16—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of an alpha-1, 6-glucosidase, e.g. amylose, debranched amylopectin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/20—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of an exo-1,4 alpha-glucosidase, e.g. dextrose
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/24—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of an isomerase, e.g. fructose
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C13—SUGAR INDUSTRY
    • C13K—SACCHARIDES OBTAINED FROM NATURAL SOURCES OR BY HYDROLYSIS OF NATURALLY OCCURRING DISACCHARIDES, OLIGOSACCHARIDES OR POLYSACCHARIDES
    • C13K13/00—Sugars not otherwise provided for in this class
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23G—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF
    • A23G2200/00—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF containing organic compounds, e.g. synthetic flavouring agents
    • A23G2200/02—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF containing organic compounds, e.g. synthetic flavouring agents containing microorganisms, enzymes, probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23G—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF
    • A23G2200/00—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF containing organic compounds, e.g. synthetic flavouring agents
    • A23G2200/06—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF containing organic compounds, e.g. synthetic flavouring agents containing beet sugar or cane sugar if specifically mentioned or containing other carbohydrates, e.g. starches, gums, alcohol sugar, polysaccharides, dextrin or containing high or low amount of carbohydrate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q17/00—Barrier preparations; Preparations brought into direct contact with the skin for affording protection against external influences, e.g. sunlight, X-rays or other harmful rays, corrosive materials, bacteria or insect stings
    • A61Q17/04—Topical preparations for affording protection against sunlight or other radiation; Topical sun tanning preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/02—Preparations for care of the skin for chemically bleaching or whitening the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q7/00—Preparations for affecting hair growth
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/38—Pseudomonas
    • C12R2001/40—Pseudomonas putida
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/874—Pseudomonas
    • Y10S435/877—Pseudomonas putida

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Description

4ί48緣申請t民固86年d修正 五、發明说明（id 年月 -.86. 4. 03 普·?ί 補充 (2 〇 )對胺基酸之脫羧酶試驗：對L —賴胺酸及L 一鳥胺酸爲陰性且對L _精胺酸爲陽性； (2 1 )胺基酸之利用：使用L —谷胺酸鈉，L —門 冬胺酸鈉，L 一精胺酸鈉，L 一組胺酸，L -纈胺酸及D -丙胺酸，但不使用L -色胺酸： (22) DNase:陰性； (2 3) 3 —酮基乳糖之形成：陰性：及 (2 4 ) DNA之鳥嘌呤（G)加上胞嘧啶（C)之 莫耳 ％ : : 6 3 %。 以這些結果爲基準，將其細菌學性質與Bergey’s Μα n u a 丨 〇 f S y s t e in a t i c B a c t e I· i ο I 〇 g y 第 1 版 （ 1 9 8 4 )之已知微生物者相比較，結果顯示，微生物及鑑定爲惡 臭假單胞菌種。 本發明者將此微生物命名爲 ' 惡臭假單胞菌H262"， 再於1994年2月23日寄存於日本茨城生物科學國立協會及 工業科學技術人類技術學代理處中。微生物之寄存係於同 日接收，並在協會中以PERM BP-4579之登記號加以保持。 經濟部中央樣準局員工消費合作社印製 (婧先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 該脂肪桿菌R48和惡臭假單胞菌H262係於1994年7月2δ 曰寄存於台溽食品工業發展硏究所，且其寄存編號係爲 CCRC 9 1 0006及 9 1 0007 〇 除了上述微生物外，其它假單胞菌屬之菌型及眞突變 種可足以用於本發明中，只要彼等可產生本麥芽糖一海藻 糖轉化酶即可。 此外，棲熱菌屬之微生物’例如水性棲熱菌（ 本紙張尺度適用中菌國家樣準（CNS ) Α4規格（2丨0X297公釐） -19 - 經濟部中央標準局員工消费合作杜印製 414807 A7 __B7 _ 五、發明説明（l ) 發明之背景 發明之範園 本發明係關於新穎之酵素，其製法及用途，尤其，本 發明係關於可將麥芽糖轉化成海藻糖或將海藻糖轉化成麥 芽糖之酵素（其後命名爲I麥芽糖-海藻糖轉化酶'）， 以及其製法。本發明更進一步關於可產生此酵素之微生物 *使用此酵素所製得之海藻糖，含海藻糖之糖類組成物， 及含海藻糖及糖類組成物之組成物。 先前技藝之說明 海藻糖或，σ -海藻糖已知爲由葡荷糖所組成之非 還原性糖類。如用於 Advances in Carbohydrate Chemistry, VoiZ. 18’ ΡΡ. 201 - 225 (1963 )(由美國 A c a d e m i c P r e s s 所分布〉，及 A p p 1 i e d a n d Environmental Microbiology* V o . 5 6 » p p . 3，213 — 3，215 (1990)中所述，雖然董較 低，但海藻糖乃廣泛存在於微生物，萆，昆蟲中。海藻糖 爲一種非還原性糖類，故其既不能與含胺基團之物質諸如 胺基酸及蛋白質等反應以誘生胺基一羰基反應，亦不能使 含胺基酸之物質惡化。因此，海藻糖可予使用而不會有令 人不滿之棕色化及惡化之虞。因此，吾人强烈需要確立工 業級之海藻糖製劑。 慎用之海藻糖爲（例如）於日本專利公開公報第 154，485/75號（其乃使用微生物），及於日本 本紙張尺度逍用中國國家梯率（CNS Μ4规格（210X 297公釐） ----------^------ΐτ------0 f' (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 114807 A7 B7 五、發明説明（ 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 表 12 微生物 活性 (單位/¾升） 最理想之 麵。C) 最理想之 pH 駿定性 ΓΟ pH安定性 水性樓熱菌 (ATCC 27634) 0.30 約65 約6.0-6.5 最高達80 約5.5-9.5 紅色棲熱菌 (ATCC 35948) 0.26 約50 約6.0-7.0 最高達50 約5.5-10.0 棲熱麵 (ATCC 43815) 0.25 約65 約6.0-6.5 最高達80 約5.5-9.5 實驗1-3所述之 脂肪桿菌種R48 (FERM BP-4315) 0.55 約20 約7.0-8.0 最高達30 約6.0-9.0 實驗12-14所述之 惡臭假單胞菌H262 (FERM BP-4579) 0.12 約37 約7.3-8.3 最高達40 約6.0-9.5 實驗18-2Q所述之 水性棲熱菌 (ATCC 33923) 0.35 約65 約6.0-6.7 最高達80 約5.5-9.5 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度遥用中國國家標準{ CNS ) A4規格（210x29?公釐） ―舛一
41480V A7 B7_ 五、發明説明（2 ) 專利公開公報第2 1 6，6 9 5/8 3號（其乃藉合併使 用麥芽糖一及海藻糖一磷酸化酶以將麥芽糖轉化成海藻糖 )中所揭示者。然而*前者並不適於供工業級製削用，因 爲微生物中所存在之作爲初始物質之海藻糖量通常低於乾 固健基準（d. s. b)之15W/V%(除非另有指定 ，否則於本專利說明耆中均簡寫爲） ，且萃取及純化步騄均衩雜所致。後者則具有下列之缺點 :(i )既然海藻糖係經由葡萄糖-1—磷酸鹽形成，故 作爲基質之麥芽糖之澳度不可設定在令人滿意之高値：< i i )磷酸酶之酵素反應系統爲可逆反應，且其目標海藻 糖之產率較低：及（i i i )其實質上難以安定地保持其 反應系統及平穩地持績其酵素反應，因此，上述之憤用製 劑不能用以作爲工業級製劑。 有部分澱粉水解產物（由物料澱粉諸如液化澉粉，糊 精及麥芽寡糖中製得）已知通常可因其還原性終端基團而 顯現還原力。還原力通常以佔乾燥重量之"^右旋糖當置（ DE )値#表示。已知在還原性部分澱粉水解產物中，具 有較髙D E値者則具有相當低之分子量及黏度，且可輕易 地與具有胺基團之物質諸如胺基酸及蛋白質等起反應而導 致令人不滿之棕色化，味道及品質之惡化。既然還原性部 分澱粉水解產物乃依其D E値而變，故還原性部分濺粉水 解產物及其D E値間之關聯及顳著。吾人甚至相信不可能 破壤此範画中之關聯。 有關海藻糖製劑方面，在^Food Chemicals# ， 本紙張尺皮適用中蔺國家榇奉（CNS ) A4規格（210X297公釐） ---------1餐------1T------0 .' (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 . 經濟部中央標準扃於工消费合作衽印裝
請 先 閱 讀 背 面 之 注 頁 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4规格U10XW公釐）- 71 -
I 裝 訂 經濟部中央樣率局貝工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（3 )
No. 8 8 » p p . 67 — 72 (1992 年 8 月）之，
Current Status of Starch Application Development a π d R e 1 a t e d P r o b 丨 e m s # 章回中之槺題爲 ' 0 I i g o s a c c h a-rides#之欄中報告指出i儘管海藻糖之廣泛可應用性， 但報告中指出經由直接糖類轉移反應或水解反應進行酵素 製備之方法在此範園中幾乎爲科學上不可能者^ 。故，藉 使用澱粉作爲物料進行酵素反應以製備海藻糖之方法在科 學上被視爲極其困難。 然而，本發明者改變了此常識，而成功地確立了曰本 專利申請害第3 6 2，1 3 1/9 2號所揭示之海藻糖製 劑，其中，海藻糖係藉令葡荀糖澱粉酶與可形成非還原性 糖類之非還原性糖類形成性酵素（具有作爲終端單位之海 藻糖結構且具有3或更高之葡萄糖聚合程度）共同地作用 於葡萄糖聚合程度爲3或更高之還原性部分澉粉水解產物 (由物料激粉中製得）上而由此非還原性部分澱粉水解產 物中直接製得。然而，此方法需要2或更多種型式之酵素 且使用諸如較高分子置且葡萄糖聚合程度爲3或更高且較 高黏度之澱粉性糖類。此外，所得產物之糖類組成物乃相 當複雜且其導致髙製造成本。因此，新穎海藻糖製劑之確 立，其中海藻糖係由麥芽糖及葡萄糖聚合程度爲2之部分 澱粉水解產物中所形成，此二者均爲工業製造，可穩定供 應且係商用。 發明之略要說明 本紙張尺度適用中困國家梂準（CNS)A4规格（ 210X297公釐） I---------^------1T------0 -- (請先W讀背面之注意事項再填寫本頁)
A7 B7 414807 五、發明説明（75) 如同表1 3之結果所證實，其顯示由脂肪桿菌R 4 8 種，惡臭假單胞菌H2 6 2及水性棲熱菌（ATCC 3 3 9 2 3 )中所衍出之酵素乃具高度一致之部分胺基酸 序列，吾人發現，由脂肪桿菌屬微生物中所衍出之第1 0 個 胺 基 酸 % T r Ρ Μ 至 第 1 6 個 胺 基 酸 P h e 櫸 範 圍 內 之 部 分 胺 基 酸 序 列 與 由 假 單 胞 菌 屬 MIL· 微 生 物 中 所 衍 出 之 第 3 個 胺 基 酸 % T r Ρ Μ 至 第 9 個 胺 基 酸 % P h e 衅 範 圍 內 之 序 列 間 乃 具 有 較 高 之 — 致 性 0 部 分 胺 基 酸 序 列 可 以 T r Ρ — X 1 — A r g — X 2 — A a — X 3 — P h e 表 示 ( 其 中 符 號 X 1 ft 意 指 % Ρ h e 或 P r 0 Μ * 符 號 X 2 ft 意 指 % T h r jf 或 Ρ X 0 釋 « 1 且 符 號 X 3 Μ 意 指 % V a % 0 或 A il a Jf ) 〇 吾 人 發 現 ， 在 由 脂 肪桿 菌 屬微生物中所衍出之第1 4個胺基酸至第1 7 個胺基酸* Ty 範圍內之部分胺基酸序列與由棲熱菌 屬微生物中所衍出之第9個胺基酸a#至第1 2個 胺基酸^Ty τ*範圍內之序列間乃具有較高之一致性。 此部分胺基酸序列可以Aj?a— Vai_X4 — Tyr表 示（其中符號、X，意指)。 窗驗2 3 海藻糖之物化件晳 本實驗係對藉寅驗8方法所製得之高純度海藻糖樣品 進行物化性質之硏究。結果，熔點經測定爲9 7 °C，旋先 率爲〔e〕D20 +199 °C(C=5)，熔化熱爲 本纸張尺度適用中國國家標华（CNS > A4規格（2丨OX297公釐） 78 {請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) —裝. 訂 線 經濟部中央捃^工消先合作社印製 經濟部中央橾準局負工消費合作杜印装 A7 414807_5!_ 五、發明説明（4 ) 本發明之目的係提供麥芽糖-海藻糖轉化酶，其可將 可工業製造且可穩定供應之麥芽糖轉化成海藻糖，本發明 之目的亦提供使用此酵素所製之海藻糖及含海藻糖之糖類 組成物之新穎製劑及用途。 欲達此目的，本發明者廣泛篩選可製造可由麥芽糖中 形成海藻糖之新穎糖類轉化酶之微生物。結果吾人發現脂 肪桿菌颺，亦即由日本岡山縣岡山市之土壤中所離析出之 脂肪桿菌R 4 8種：假單胞菌觸，亦即由曰本兵庫縣西宮 市之土壤中所離析出之惡臭假單胞菌H 2 6 2 ;及棲熱菌 屬微生物可形成可供將麥芽糖轉化成海藻糖之新穎麥芽糖 -海藻糖轉化酶，且確立海藻糖製劑及含海藻糖之糖類組 成物，以及含海藻糖或糖類組成物之諸如食品，化妝品及 藥劑等組成物。因而完成本發明。 附圖之鮪要說明 圖1展示溫度對由脂肪桿苗R 4 8種所衍出之本麥芽 糖一海藻糖轉化酶之酵素活性之影響。 _2展示pH對由脂肪桿菌R 4 8種所衍出之本麥芽 糖一海藻糖轉化酶之酵素活性之影響。 圖3展示溫度對由脂肪桿菌R 4 8種所衍出之本麥芽 糖一海藻糖轉化酶之安定性之影響。 圖4展示pH對由脂肪桿菌R4 8種所衍出之本麥芽 糖一海藻糖轉化酶之安定性之影響。 圈5展示溫度對由惡臭假單胞菌H2 6 2所衍出之本 本紙張尺度逍用中國國家標準（CNS ) A4规格（210><297公釐） ---------1$------11------.^- f' (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局貞工消f合作社印製 414807_B7_五、發明説明（5 ) 麥芽糖-海藻糖轉化酶之酵素活性之影響。 圖6展示pH對由惡臭假單胞菌Η 2 6 2所衍出之本 麥芽糖一海藻糖轉化酶之酵素活性之影響。 圖7展示溫度對由悪臭假單胞菌Η2 6 2所衍出之本 麥芽糖一海藻糖轉化酶之安定性之影響。 圖8展示pH對由惡奥假單胞菌Η2 6 2所衍出之本 麥芽糖一海藻糖轉化酶之安定性之影響。 圖9展示溫度對由水性棲熱菌（ATCC 3 3 9 2 3 )所衍出之本麥芽糖一海藻糖轉化海之酵素活 性之影謇。 圖1 0展示pH對由水性棲熱菌（ATCC 3 3 9 2 3 )所衍出之本麥芽糖一海藻糖轉化酶之酵素活 性之影響。 圖1 1展示溫度對由水性棲熱菌（ATCC 3 2 9 2 3 )所衍出之本麥芽糖-海藻糖轉化酶之安定性 之影響。 圖1 2展示pH對由水性棲熱菌（ATCC 3 3 9 2 3 )所衍出之本麥芽糖-海藻糖轉化酶之安定性 之影響。 發明之詳細說明 本發明係關於麥芽糖一海藻糖轉化酶，其製法及用途 。尤其，本發明係關於可將麥芽糖轉化成海藻糖或將海藻 糖轉化成麥芽糖之新穎麥芽糖一海藻糖轉化_，以及其製 ----------^------1T------.41 't <請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度逍用中國®家揉率（CNS ) A4規格（210X297公釐} 經濟部中央揉準局貝工消費合作杜印掣 414807 A7 B7 五、發明説明（6 ) 法，本發明更進一步關於可產生此酵素之微生物，使用此 酵素所製得之海藻糖，含海藻糖之糖類組成物，及含海藻 糖或糖類組成物之組成物。 本發明脂肪桿菌觴，亦即^脂肪桿菌R 4 8種'微生 物，及假單胞菌屬，亦即惡奥假單胞菌Η 2 6 2微生物之 銨定試驗可得下列之結果。此試驗係根據'Biseibutsu-No-Bunrui-to-Dotei"(微生物之分類及轚定）（日本東 京 Japan Scientific Societies Press 所公布，Takeji Hasegawa校訂）所述之方法進行。 脂肪桿菌R 4 8種之結果如下： A .形態 (1 )當於2 7 °C下，於營養瓊脂中時之細胞特性 通常以0. 5 — 0. 9X1. 5-4. 0微米 之桿形存在： 單一存在但罕以V形配對或環結形式存在； 不具運動力且不產生芽孢； 非抗酸性：及 格藍氏染色：陽性。 (2 )當於2 7 °C下，於補充有酵母菌—及麥芽一精 汁之瓊脂培養基中保溫時之細胞特性 於一天培養後具有0. 6 — 1. 0X1. 3 — 4. 2微米之大小且於3天培養後係以0. 6 -1 . 0X1. 0 — 2. 5微米大小之幾近球 本紙張尺度適用中困困家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） I I裝 I 訂 t !線 (請先聞讀背面之注意事項再填窝本頁) A7 414807 ___B7 五、發明説明（7 ) 菌形式存在： 顯現多形態：且 單一存在但罕以V形配對或環結形式存在。 B.培養性質 (1)當於2 7 °C下，於營養瓊脂培養皿中保溫時所 形成菌落之特性 形狀：於24小時保溫後爲具0. 5毫米直徑 之固形菌落，於3天保溫後爲1. 5— 2毫米； 緣：耳狀； 突起部：半球形 光澤：無； 表面：皺紋狀； 顏色：乳白色且不透明之菌落： (2 )當於2 7 °C下，於補充有酵母菌一及麥芽—精 汁之瓊脂培養皿中保溫時所形成菌落之特性 形狀：於3天保溫後爲具約1一1. 5毫米直 徑之圔形菌落； 緣：耳狀； 突起部：半球形 光澤：無； 表面：鮍紋狀； 本紙張尺度逋用中國國家揉準（CNS ) Α4規格（2丨ΟΧ297公釐） ----------^------1T------0 ί > (請先Μ讀背面之注$項再填寫本頁) 經濟部中央標準局負工消費合作社印製 -10 - 經濟部中央梯準局貝工消費合作杜印製 414807 A7 _ 五、發明説明（8 ) 顔色：乳白色及不透明之菌落： (3 )當於2 7 °C下，於斜營養瓊脂中保溫時所形成 之菌落特性 生長：令人滿意； 形狀：線狀：且 (4 )當於2 7 eC下於營養凝膠中進行穿刺培養時， 並未使凝膠液化。 C.生理性質 (1 )硝酸鹽之還原：陽性： (2 )脫氮反應：陰性： (3) 甲基紅試驗：陰性； (4) VP —試驗：陰性； (5 )蚓跺之形成：陰性： (6) 硫化氫之形成：陽性； (7) 澱粉之水解：陰性； (8) 檸様酸之利用：陽性： (9 )無機氮源之利用：使用銨鹽及硝酸鹽： (1 0 )色素之形成：陰性； (11)尿素酶：陰性； (1 2 )氧化酶：陰性； (13)過氧化氫酶：陰性； 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4规格（ 210X297公釐） r 1 批衣ir'^ ·-- (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 11 414807 A7 B7五、發明説明（9 ) 5 一—< 於 及 下 圍 範： Η 長 Ρ生 之下 成 9 園；形 I 範氧之 5 度需酸 於溫：及 :之性用 況 Ρ 要利 狀 ο 需之 長 4 之源 生 I 氧碳 \I/ \1/ \1/ 4 5 6 1L IX 1 1 i I~r [ ,种衣 訂 線 ' f (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央榡準局—工消費合作社印策 本紙張尺度逍用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X297公釐） 414807 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（/ C) 碳源 利用性 酸之形成 D —葡萄糖 + — D _半乳糖 — — D —果糖 + — D —甘露糖 + — L 一阿拉伯糖 + — D —木糖 + — L _鼠李糖 + 一 麥芽糖 + — 蔗糖 + — 乳糖 一 一 海藻糖 + 一 棉子糖 + — 甘露糖醇 一 一 糊精 + — 衛矛醇 _ 一 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國S家標率（CNS ) A4規格（2丨0X29?公釐）-f、一 -裝 訂 A7 414807 ___B7 五、發明説明（11 ) (1 7 )對胺基酸之脫羧海試驗：對L —賴胺酸，L 一精胺酸及L一鳥胺酸爲陰性： (1 8 )胺基酸之利用：使用L 一谷胺酸鈉及L 一門 冬胺酸鈉： (19) DNase :陰性： (2 0 ) 3 —酮基乳糖之形成：陰性； (2 1 ) DNA之鳥曝呤（G)加上胞嘧啶（C )之 莫耳％ : 7 2 % :及 (2 2 )細胞壁之主要二胺基酸：LL 一二胺基庚二 酸。 惡臭假單胞菌Η 2 6 2之結果如下： A 形狀 (1 )當於2 7 °C下，於營養瓊脂中保溫時之細胞特 性 通常以0. 5 — 0. 7X1· 0 — 2. 0微米 之桿形存在且不具有產芽孢力： 具有藉鞭毛運動之能力： 非抗酸性；且 格蘭氏染色：陰性。 (2 )當於2 7°C下，於補充有酵母菌一及麥芽_精 汁之瓊脂培養基中保溫時之細胞特性 於一天培養後具有〇· 6-0. 8X2. 0— 本紙張尺度速用中a國家揉準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ----------^------ΐτ------.^ (請先聞積背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央棣準局貝工消費合作社印製 -14 - 經濟部中央標隼局貝工消費合作社印製 414807 A7 _____ B7_^_ 五、發明説明（12 ) 4 . 〇微米之大小。 B·培養性質 (1 )當於2 7 °C下，於營養瓊脂培養皿中保溫時所 形成菌落之特性 形狀：於2 4小時保溫後爲具1 - 2毫米直徑 之園形菌落，於3天保溫後爲3. 5 - 4奄米； 緣：全緣； 突起部：半球形； 光澤：濕光澤； 表面：平滑； 顔色：乳白色或白色不透明菌落： (2 )當於2 7 °C下，於補充有酵母菌一及麥芽一精 汁之瓊脂培養皿中保溫時所形成菌落之特性 形狀：於3天保溫後爲具約4 — 5毫米直徑之 圃形菌落： 綠：全緣； 突起部：半球形； 光澤：濕光澤； 表面：平滑： 顏色：乳白色或白色不透明菌落： 表紙張尺度逍用中®國家標率（CNS ) A4规格（210X29?公釐） ---------^------IX------0 {請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -15 - 414807 - 五、發明説明（13 ) (3 )當於2 7 °C下，於斜營養瓊脂中保溫時所形成 菌落之特性 生長：令人滿意： 形狀：線狀，形成較薄突起部且爲平滑表面， 濕光澤，不透明及黃乳白色：且 (4 )當於2 7 °C下，於餐養凝膠中進行穿刺培養時 ，並未使凝膠液化。 C.生理性質 (1 )硝酸鹽於琥珀酸培養基中之還原作用：陽性； (2 )脫氮反應：陰性： ----------r 裝-- (請先閣讀背面之注意事項再填寫本頁) ,-'' 經濟部中央梯準局貝工沛费合作杜印製 (3 >甲基紅試驗： 陰性； (4 > V Ρ -試驗： 陰性： (5 >吲哚之形式： 陰性： (6 >硫化氫之形成 :陰性； (7 )澱粉之水解： 陰性； (8 >聚一々一羥基丁酸鹽之累稹：陰性： (9 )原兒茶酸鹽之分解：鄰位形式； (10)檸様酸之利用：陽性： (1 1 )無機氮源之利用：使用銨鹽及硝酸鹽： (1 2 )色素之形成：淡黄色色素： (13)螢光色素之形成：陽性； (1 4 )尿素酶：陽性； 本紙張尺度遘用中國國家梂準（CNS ) Α4規格（2丨0Χ297公釐） 線 -16 - 414807 a7 ___B7_ 五、發明説明（14 ) (1 5 )氧化酶：陽性： (1 6 )過氧化氫酶：陽性： (1 7 )生長狀況：於5 — 9之pH範園下及於1 0 —3 7°C之溫度範圍下生長： (18)氧之需要性：需氧； (1 9 )碳源之利用及酸之形成 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央棣準局員Η消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > Α4規格（210Χ29?公釐）
7 7 A B 414807 經濟部中央橾隼局貝工消費合作杜印製 五、發明説明（/夕） 碳源 利用性 酸之形成力 D —葡萄糖 + 一 D —半乳糖 一 一 D —甘露糖 + + D _果糖 + 一 L 一阿拉伯糖 十 D —木糖 + — L 一鼠李糖 + 麥芽糖 + — 蔗糖 + 一 乳糖 一 一 海藻糖 + — 棉子糖 + — 甘霣糖醇 一 一 山梨糖醇 — 一 衛矛醇 一 一 甘油 + ---------裝------訂------線 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度逍用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 4ί48緣申請t民固86年d修正 五、發明说明（id 年月 -.86. 4. 03 普·?ί 補充 (2 〇 )對胺基酸之脫羧酶試驗：對L —賴胺酸及L 一鳥胺酸爲陰性且對L _精胺酸爲陽性； (2 1 )胺基酸之利用：使用L —谷胺酸鈉，L —門 冬胺酸鈉，L 一精胺酸鈉，L 一組胺酸，L -纈胺酸及D -丙胺酸，但不使用L -色胺酸： (22) DNase:陰性； (2 3) 3 —酮基乳糖之形成：陰性：及 (2 4 ) DNA之鳥嘌呤（G)加上胞嘧啶（C)之 莫耳 ％ : : 6 3 %。 以這些結果爲基準，將其細菌學性質與Bergey’s Μα n u a 丨 〇 f S y s t e in a t i c B a c t e I· i ο I 〇 g y 第 1 版 （ 1 9 8 4 )之已知微生物者相比較，結果顯示，微生物及鑑定爲惡 臭假單胞菌種。 本發明者將此微生物命名爲 ' 惡臭假單胞菌H262"， 再於1994年2月23日寄存於日本茨城生物科學國立協會及 工業科學技術人類技術學代理處中。微生物之寄存係於同 日接收，並在協會中以PERM BP-4579之登記號加以保持。 經濟部中央樣準局員工消費合作社印製 (婧先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 該脂肪桿菌R48和惡臭假單胞菌H262係於1994年7月2δ 曰寄存於台溽食品工業發展硏究所，且其寄存編號係爲 CCRC 9 1 0006及 9 1 0007 〇 除了上述微生物外，其它假單胞菌屬之菌型及眞突變 種可足以用於本發明中，只要彼等可產生本麥芽糖一海藻 糖轉化酶即可。 此外，棲熱菌屬之微生物’例如水性棲熱菌（ 本紙張尺度適用中菌國家樣準（CNS ) Α4規格（2丨0X297公釐） -19 - 經濟部中央揉準局負工消費合作杜印製 414807 A7 ____B7_ 五、發明説明（17 ) ATCC 25104)，水性棲熱菌（ATCC 33923)，線形棲熱菌（ATCC 43280)， 紅色棲熱菌（ATCC 35948> ，棲熱菌種（ ATCC 43814)，及棲熱菌種（ATCC 4 3 8 1 5 )可適用於本發明中。 任何螢養培養基可用於本發明中，只要微生物可於其 內生長且可產生本酵素即可：例如，合成及天然營養培養 基可予任意使用。任何含碳之物質可用於本發明中以作爲 碳源只要其被微生物利用即可：此碳源之實例爲糖類諸如 葡荀糖，果糖，糖蜜，海藻糖，乳糖，蔴糖，甘露糖醇， 山梨糖醇，部分澱粉水解產物等：及有機酸諸如檸樺酸及 琥珀酸，以及其鹽類。這些碳源於營養培養基中之澳度及 予適當選擇。例如，如使用葡萄糖，基於微生物之生長及 增殖，理想澳度通常爲4 0W/V%或更低，最好爲1 0 W/V%或更低，d. s. b.可用於本發明中之氮源爲 (例如）無機氮化合物諸如銨鹽及硝酸鹽等：及有機含氮 之化合物諸如尿索，玉米浸液，酪蛋白，陳，酵母菌精及 肉精。可用於本發明中之無機成分爲（例如）鈣鹽，鎂鹽 ，鉀鹽，鈉鹽，磷酸鹽及其它錳，鋅，鐵，銅，鉬及鈷鹽 0 本發明所用之可使微生物生長及產生本酵素之培養狀 況爲（例如）於約4 一 8 0°C溫度範画，最好於約2 0 — 7 5 °C溫度範圍；及於約5 — 9之pH範園，最好6 — 本紙張尺度適用中國國家標率（CNS >A4规格（210X29?公釐） ----------^------ix------^ r ! (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -20 - 414807 A7 B7 五 '發明説明（18 ) 8. 5之pH範園下之需氧狀況。逋用於本發明之培養時 間乃設定在比微生物開始生長所需者更長之時間，最好爲 1 0 — 1 0 0小時，溶解之氧（DO)於營養培養基中之 濃度並不特別限制，通常在約0. 5_20ppm之範匯 內較令人滿意，DO値可藉控制充氣速率，撹拌營養培養 基，補充氧至充氣狀態，再增加醱酵器內壓而保持在此範 圍內。培養可以分批方式或以連績方式進行。 待培養完成後，將本酵索由其中復收。既然本酵素之 活性在細胞及不含細胞之上層液中均可發現，故彼等可復 收且用以作爲粗製酵素，慎用之液體一固體分離法可用於 本發明中以由培養物中移出細胞。例如，將所得培養物直 接離心，及使用預塗濾器將細胞過濾或藉將助濾劑加入以 將細胞過濾，以及藉使用板式濾器或空心絲進行膜濾以將 細胞分離之方法可予適當使用。所得之不含細胞之濾液可 完整使用以作爲酵索溶液或可於使用前以一般方式濃縮。 本發明可用之濃縮法爲（例如）使用硫酸銨之鹽析法，使 用丙酮及醉之沈稹法，及使用板式濾器，空心絲等之膜濾 法。 如果本酵素爲細胞內酵素，則其可藉慣用技術由細胞 中萃取出，且所得萃取物可用以作爲粗製酵素。欲得此萃 取物，細胞乃藉超音波破裂法，使用玻璃珠式礬土進行之 機械破裂法，french —壓縮破裂法予以破裂，繼而令所得 物進行離心或膜濾，即得清澈之粗製一酵素-溶液。 不含細胞之濾液及其澳縮物，以及細胞萃取物可藉慣 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4规格（2丨0X297公嫠） ----------^------1T------^ . t (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 414807 A7 B7 五、發明説明（19 ) 用之技術固定，此固定技術之實例爲使用離子交換劑，之 轭合法，使用樹脂及膜之其價鍵結及吸收法，以及使用高 分子置物質之包含法，由所得培養物中所分離出之完整細 胞可用以作爲粗製酵素或可於使用前予以固定，例如*細 胞係藉將彼等與藻酸鈉混合，再將懸浮液滴於氣化鈣溶液 中以使滴液凝膠化成顆粒，所得顆粒可於使用前藉聚乙烯 亞胺或戊二醛予以固定。 所得粗製酵索溶液可完整使用或於使用前藉慣用方法 ，純化。例如，可顯現電泳單帶之純化酵素製劑可藉將粗 製酵素製劑（其業已藉將破裂細胞萃取物以硫酸銨盥析， 再將所得物澳縮）滲析而製得，再將滲析溶液藉使用％ DEAE-TOYOPEARL®^ (陰離子交換劑）進 行陰離子交換柱色層分離法；使用*BUTYL— TOYOPEARL®"(疏水性樹脂）（所有均爲日本 東京TOS 0H公司產品）進行疏水柱色層分離法：使用 、Μ Ο N 0 Q H R 5 / 5，（由瑞典 Uppsala 之 Pharmacia LKB Biotechnology AB 所售之陰離子交換劑 ） 進行陰離子交換柱色層分離法：及使用I T0Y0PEARL®HW-5 5# (由日本柬京 TOSOH公司出售之樹脂）進行膠濾柱色層分離法予以 連績純化。道些步驟可提供可展示電泳單帶之酵素。 所得之本麥芽糖-海藻糖轉化酶具有下列之物化性質 (1 )作用 本纸張尺度逋用中國國家橾準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ----------^------1T------0 i f (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標率局員工消費合作杜印裝 經濟部中央梯準局負工消費合作社印製 414807 at B7 五、發明説明（20 ) 將麥芽糖轉化成海藻糖，反之亦然。 (2 )分子置 於十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺膠m泳（s d s —PAGE)上約 57，000 — 1 2 0，0 0 0道耳呑： (3 )等電點（p I ) 於使用兩性電解質之等電泳上約3. 8— 5 . 1 (4 )活性之抑制 被 ImM Cu“ ，Hg” 及 Tris — HCJ?緩衝液所抑制；且 (5 )起源 來自微生物 尤其，本酵素之物化性質乃依其起源而有所異，其性 質如下。 由脂肪桿菌R 4 8種中所衍出之麥芽糖-海藻糖轉化 酶乃具有下列之物化性質： (1 )作用 將麥芽糖轉化成海藻糖且反之亦然。 由一莫耳麥芽糖中形成約一莫耳海藻糖或由一 莫耳海藻糖中形成約一莫耳麥芽糖： (2 )分子量
於十二烷基硫酸鈉聚丙烯醢胺膠電泳（S D S 本紙張尺皮適用中國困家橾準（CNS ) Α4ΪΙ格（210X297公釐） 裝------訂------線 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -23 - 經濟部中央標準局員工消f合作社印製 414807 A7 _B7_ 五、發明説明（2l ) -PAGE)上約57，0 0 0_ 6 7，0 0 0道耳呑： (3 )等點電（P I ) 於使用兩性電解質之等電泳上約4. 1_ 5.1； (4 )活性之抑制 被 ImM Cu — ，Hg —及 Tris-HCJ?緩衝液所抑制，及 (5 )最理想之溫度
當於PH7. 0下保溫6 0分鐘時爲約2 0 °C (6 )最理想之P Η 當於2 5 °C下保溫6 0分鐘時爲約7. 0 - 8.0； (7 )熱安定性 當於PH7. 0下保溫60分鐘時，則於最髙 約3 0 °C之溫度下保持安定：及 (8 ) p Η安定性 當於2 0 °C下保溫6 0分鐘時，則於約6. 0 -9 . 0之pH下保持安定。 由惡臭單胞桿菌Η 2 6 2所衍出之麥芽糖一海藻糖轉 化酶乃具有下列之物化性質： 本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS ) Α4规格（210X297公釐） ----------^------II------i (請先鬩讀背面之注意事項再填寫本頁) -24 - 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 414807 A7 ______B7_____ 五、發明説明（22 ) (1 )作用 將麥芽糖轉化成海藻糖，且反之亦然： 由一莫耳麥芽糖中形成約一莫耳海藻糖或由 一莫耳麥芽糖中形成約一莫耳海藻糖， (2 )分子置 * 於 SDS — PAGE 上約 1 1 0，0 0 0~ 1 2 0，〇 〇 〇道耳呑； (3 )等電點（p I ) 於使用兩性電解質之電泳上約4. 1 一 5. 1 » » (4 )活性之抑制 被 ImM Cu — ，Hg —及 50mM Tr ΐ s — HCJZ緩衝液所抑制； (5 )最理想之溫度 當然PH7. 0下保溫6 0分鐘時約爲3 7。(： * (6 )最理想之p Η 當於ΡΗ7. 0下保溫60分鐘時，則於ρΗ 約7. 3—8. 3下保持安定： (7 )熱安定性 當於ΡΗ7. 〇下保溫60分鐘時，則於最商 爲4 0eC之溫度下保持安定：及 (8 ) p Η安定性 當於3 5 °C下保溫6 0分鐘時，則於約6. 〇 本紙張尺度逍用申國國家橾準（CNS ) A4规格（210X297公釐） 11 I ^ ~~ 訂 11 線 • r {請先閎讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消费合作杜印製 A7 _____B7_ 五、發明説明（23 ) _ 9 5之p Η下保持安定。 由水性棲熱菌（ATCC 33923)中所衍出之 麥芽糖一海藻糖轉化酶乃具有下列之物化性質： (1 )作用 將麥芽糖轉化成海藻糖，且反之亦然； 由一莫耳麥芽糖中形成約一莫耳海藻糖或由一 莫耳海藻糖中形成約一莫耳麥芽糖： (2 )分子置 於 SDS — PAGE 上約 1 0 0，0 〇 Ο-ΐ 1 0 ， 0 0 0 道耳呑 ： (3 )等電點（ρ I ) 於使用兩性電解質之電泳上約爲3. 8- 4 . 8 (4 )活性之抑制 被 ImM Cu” ，Hg” 及 50mM Tr i s_HCJ2緩衝液所抑制： (5 )最理想之溫度 當於PH7. 0下保溫60分鐘時約爲65T (6 )最理想之ρ Η 當於6 0 °C下保溫6 0分鏡時，則於約6. 〇 -6 . 7之pH下保持安定： (7 )熱安定性 本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) A4规格（210><297公釐） ---------^------1T------^ (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) -26 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 414807 a7 B7 五、發明説明（24 ) 當於pH7. 0下保溫60分鐘時，則於最高 爲8 0°C之溫度下保持安定： (8 ) p Η安定性 當於6 0 °C下保溫6 0分鐘時，則於約5. 5 -9. 5之pH下保持安定。 本麥芽糖一海藻糖轉化酶之活性及依下法分析：將1 毫升酵素溶液加至1毫升2 0W/V%作爲基質之麥芽糖 之lOmM磷酸鹽緩衡液（pH7. 〇)中，再將混合物 溶液於2 5°C，3 5°C或6 0°C下保溫6 0分鐘，繼而將 溶液於1 0 0°C下加熱1 0分鐘以使酵素反應懸浮。而後 將所得反應混合物以5 0mM磷酸嫌緩衝液（pH7. 5 )稀釋11倍，再將0. 4毫升之稀釋溶液與0.1毫升 具一單位/毫升海藻糖之海藻糖溶液混合。繼而將所得溶 液於4 5 eC下保溫1 2 0分鐘，再藉葡萄糖一氧化酶法以 測定葡萄糖置。作爲對照組方面，藉使用海藻糖及酵素溶 液，將之於1 0 0°C下預熱1 0分鐘以使酵素鈍化，而後 依類同於上述之方法以分析酵素溶液之活性。經由上述分 析，海藻糖之置（藉本麥芽糖一海藻糖轉化酶所形成）可 以所形成葡萄糖之量爲基準而測定，一單位之酵素活性乃 定義爲可每分鐘形成一微莫耳海藻糖之酵索量，有關於反 應溫度方面，供脂肪桿菌屬所用之酵素乃設定爲2 5 °C ; 供假單胞菌靥者乃設定爲3 5 °C ;供棲熱菌靥則設定爲 6 0 eC 〇 既然本麥芽糖-海藻糖轉化酶可將麥芽糖轉化成海藻 本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) A4規格（210X297公漦） ---------.1^------ΐτ------0 {請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -27 - 經濟部中央梯準局員工消費合作社印装 A7 _B7_ 五、發明説明（25 ) 糖且反之亦然，故作爲基質之麥芽糖或海藻糖可用以符合 其終用途。麥芽糖則用以作爲供製備海藻糖所用之基質。 任何麥芽糖均可用於本發明中，只要當接受本麥芽糖 -海藻糖轉化酶之作用時能轉化成海藻糖即可，通常，具 最高可能純度之高麥芽糖量產物，最好具7 0 %或更高， d. s. b，純度者可予逋當使用。商用麥芽糖產品及藉 慣用澱粉糖化技術所製得者亦可使用。 由澱粉所製之麥芽糖製劑實例爲彼些於日本專利公報 第1 1，437/81及1 7，078/8 1號中所揭示 者，其係令卢_澱粉酶作用於凝膠化-或液化-濉粉上以 形成麥芽糖，繼而由高分子量糊精中分離出，並以高麥芽 糖纛之產品形式復收。其它實例爲於日本專利公報第 1 3，0 8 9/7 2及3，9 3 8/7 9中所揭示者，其 係令/3 -殿粉酶與澱粉脫分支酵素諸如異澱粉酶及芽酶等 共同地作用於凝膠化一及液化一澱粉上以形成麥芽糖，雄 而以高麥芽糖置之產品形式復收。 將日本專利公報第28，1 53/8 1，3，35 6 /8 2及2 8，1 5 4/8 1號中所揭示之酵素加至所得 髙麥芽糖童產品中所存在之共存糖類諸如麥芽三糖內以增 加麥芽糖量。髙麥芽糖量產品中之麥芽糖量可依日本專利 公開公報第2 3，7 9 9/8 3號所揭示之法使用强酸陽 離子交換樹脂進行柱色餍分離以移去共存之糖類而更令人 滿意地增加。 本發明中所用之基質濃度並不特別限制，即使於 本紙張尺度逍用中國國家標準（CNS > A4規格（2丨Ο X 297公釐） I 1^1T'^ 'Λ. (請先閎讀背面之注意事項再填寫本頁) -28 - 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 A 7 B7 五、發明説明（26 ) 0.1%或50%物料麥芽糖中，本酵素之酵素反應亦持 績進行，以形成海藻糖◊含不可溶基質之懸浮液可用於本 發明中。本發明所用之溫度可設定在使酵素不鈍化之溫度 ，亦即最高約8 0°C之溫度，最好在約0 - 7 0°C之溫度 範園間。本酵素反應中所用之反應pH乃設定在約5. 5 一9. 0之範園內，最好在約6. 0—8. 5之範圍內， 本酵素反應中所用之反應時間乃依反應狀況而充分選擇， 當使用約0. 1_1〇〇單位/克基質，d· s. b，之 酵索置時，則通常在約0.1—100小時之範園內。 本酵素反應可將物料麥芽糖以較高之轉化率，亦即最 大約7 0 — 8 5%之轉化率轉化成海藻糖。 所得反應混合物係以一般方式進行過濾及離心以移去 不可溶物質，再以活性炭脫色，以H_及OH -形式之離 子交換劑脫鹽，而後澳縮成漿狀產品，如有需要，則漿狀 產品可任意乾燥成粉狀產品或製成晶狀產品。 而且，粉狀產品可藉一或更多種方法，例如，藉離子 交換柱色屠分離法及使用活性炭或矽膠之柱色層分離法予 以分級：再進行鹸處理以分解並移出餘留之還原糖類而予 以純化。可藉此柱色層分離法分離之麥芽糖可適用以作爲 基質以供經由本麥芽糖-海藻糖轉化酶將麥芽糖轉化成海 藻糖。 如有需要，則含海藻糖之本糖類組成物可藉葡荀糖澱 粉酶及α -糖苷酶予以水解，或藉使用環麥芽糊精葡聚糖 縳移酶及/或糖苷基轉化酶進行糖類轉移反應以控制其甜 本紙張尺度逋用中國國家梂隼（CNS ) Α4規格（210X297公釐） ---------^------1Τ------^ (請先«讀背面之注^^項再填寫本頁) -29 - A7 414807 B7 五、發明説明（27 ) 度，還原力及黏度。此外，所得海藻糖產品中之還原糖可 藉將之以鹼處理而分解，再使用酵母菌醱酵，或氳化成糖 醇而予任意移除，故可排除其還原力，葡萄糖則可藉上述 純化法諸如離子交換柱色層分離法而由所得產品中移除以 得高海藻糖量之部分，所得部分可輕易純化及濃鮪成漿狀 產品，如有需要，則漿狀產品可更進一步濃縮成超飽和溶 液及結晶成水性或無水晶狀海藻糖。 本發明可用之離子交換柱色層分離法包括（例如〉如 同日本專利公開公報第2 3，7 9 9/8 3及 7 2，5 9 8/8 3號所掲示之使用强酸陽離子交換樹脂 者。藉使用柱色層分離法，粗製海藻糖產品中所含之共存 糖類可輕易移除以得高海藻糖量之部分。此狀況下，固定 床，移動床及半移動法中之任一者均可任意使用。 欲製備水性晶狀海藻糖，乃將6 5 — 9 0%具6 0% 或更高純度海藻糖之溶液置於結晶器中，再逐渐冷卻，同 時於約0. 1 — 2 0%晶種之存在或缺乏下，於9 5 BC或 更低之溫度，最好於1 0 — 9 0冗之溫度範園下攪拌以得 含有水性晶狀海藻糖之糖育。連績結晶法（其可使目標糖 類於其澳度下，於 眞空中產生結晶）可予任意使用。慣 用方法諸如分離法，成塊粉化法，流懷床粒化法及噴霧乾 燥法可用於本發明中以由糖育中製備水性晶狀海藻糖或含 彼之晶狀糖類。 如爲分離法，通常令糖寶接受籃形離心以將水性晶狀 海藻糖由母液中分離出，如需要的話，將所得水性晶狀海 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨OX297公釐} ---------^------ΪΤ------^ t Φ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消费合作杜印製 -30 - 經濟部中央標準局—工消费合作社印製 414807 . A 7 B7 五、發明説明（28 ) 藻糖藉以小量冷水噴霧而淸洗，以促進增髙純度之水性晶 狀海藻糖之製備。 如爲噴霧乾燥法，則無或實質無收濕性之晶狀糖類係 藉將約60—85%，d· s. b.，濃度且約20— 6 0 % » d . s. b .，結晶度之糖育藉高壓泵由噴嘴中 噴霧：再將所得物以6 0 — 1 0 0°C之不使所得晶狀粉末 熔化之熱空氣乾燥：而後將所得粉末热化約1 — 2 0小時 ，同時以約3 0 _ 6 0°C熱空氣吹氣而輕易製得。 如爲成塊粉化法，則無或實質無收濕性之晶狀糖類係 藉令約1 0 — 2 5%濕氣置且約1 0 — 6 0%， d. s. b.，結晶度之糖育靜置數小時至3天或使整個 內容物結晶及固化成塊，再將所得塊狀物粉化或切割*而 後將所得物乾燥而輕易製得。 雖然無水晶狀海藻糖可藉將水性晶狀海藻糖乾燥以轉 化成無水形式，但其通常係藉供應濕氣量低於1 0 %之髙 海藻糖量溶液，將溶液置於結晶器中，將溶液於晶種之存 在下，於5 0 — 1 6 0 °C之溫度範圍下，最好於8 0 — 1 4 G°C之溫度範圍下，於攪拌狀況下保持，以得含無水 晶狀海藻糖之糖育，再將無水晶狀海藻糖藉慣用方法諸如 成塊粉化法，流體床粒化法及噴霧乾燥法於乾燥及較高溫 度之狀況下結晶及粉化而製得。 所得之本海藻糖乃安定且寅質上無還原力，且可與其 它物料，尤其是胺基酸及含胺基酸之物質諸如寡肽及蛋白 質等混合及加工而不會有導致令人不滿之棕色化及味道以 本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS) A4規格（210X297公釐） --------1$------ΐτ------^ (請先閱讀背面之注意事項鼻填寫本頁) -31 - 經濟部中央標準局負工消费合作社印製 414807 A7 B7 五、發明説明（29 ) 及使物料變壤之虞。海藻糖本身具有令人滿意之髙品質及 甜度。既然海藻糖可輕易水解成葡萄糖，故其當經口投服 時，可輕易被活懺所消化，吸收及利用。而且，海藻糖實 質上不被誘生鹏齒之微生物所醱酵，故使其有用以作爲實 質上不導致龋齒之甜化劑。 本海藻糖爲安定之甜化劑，晶狀海藻糖尤其當與結合 劑諸如芽素，羥乙基澱粉或聚乙烯基吡咯烷酮結合使用時 ， 可任意使用以作爲供片劑用之糖衣劑。此外，海藻糖 具有諸如滲透壓控制力，塡料參與力，光澤參與力，濕氣 保持力，黏度參與力，實質無醱酵力，預防凝膠化澱粉反 降解之能力，及避免其它糖類結晶之能力等性質。 故，本海藻糖及含彼之糖類組成物可任意使用以作爲 各種不同組成物諸如食品，香煙，煙草，飼料*化妝品及 槊劑中之甜化劑，味道改良劑，品質改良劑，安定劑及塡 料0 本海藻糖及糖類組成物可完整使用以作爲甜化調味劑 。如有需要，則彼等可與足量之一或更多種其它甜化劑例 如粉狀糖漿，葡萄糖，麥芽糖，薦糖，異構化糖，蜂蜜， 楓糖，山梨糖酵，麥芽糖醇，乳糖醇，二氫査耳酮，蛇菊 苷，or —糖苷基蛇菊替，rebaudioside ，甘草甜素，L -門冬胺醣L -苯基丙胺酸甲酯，糖精，甘胺酸及汚胺酸 等；及/或塡料諸如糊精，澱粉及乳糖等結合使用。 含本海藻糖或糖類組成物之粉狀或晶狀產品可完整使 用，如有需要，則彼等可與賦形劑，塡料，稀釋劑及結合 本紙張尺度逍用中國國家標率（CNS) Μ規格（210X 297公嫠） ---------.------1Τ------^ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -32 - A7 414807 B7 _ 五、發明説明（3〇 ) 劑混合，且於使用前形成顆粒，球，槍桿狀，板，立方酱 及片劑。 具低還原力之含海藻糖之本糖類組成物及由其中所分 離出之海藻糖可與其它具有變酸-，酸性一，鹹一，苦一 ，澀-及美一味之物料充分調和，且具有較高耐酸性及抗 熱性。故彼等通常嗜用於食品中以作爲甜化劑*味道改良 劑及品質改良劑。 本海藻糖及含彼之糖類組成物可用於調味劑諸如醬油 ，粉狀酱油，味增，''funmatsu-raiso〃（粉狀味增〉’ 'moronic (精製酒），’Iwshio'(精製醬油），’卜 urikak^ (調味魚餐），美乃滋，調味汁，醋，'Sanb-ai-z〆（糖，醬油及酯之調味品），％funmatsu-sushi-su# (供壽司用之粉狀酸），％chuka-n〇-iaoto_ (供中 國菜用之即混物）* (供日本深部脂肪油炸 食品用之酱），、n e η t s u y u # (供日本細麵條用之酱）， 管，蕃前费，""'takuan-zuke-no-motof (供酶襄葡用之 預混物〉，* h a k u s a i - z u k e - η 〇 - m 〇 t 〇 '(供新鮮油菜路漬 用之預混物），''yakiniku-no-tare# (供日本烤肉用之 酱，咖哩，即食燉煮混合物，即食湯混合物，％dashi-no -not〆（即食湯原汁混合物），混合調味料* imiri〆 (甜酒），'"shiniirin〃（合成甜酒），桌用糖及咖啡 用糖中。 本海藻糖及含彼之糖類組成物亦可自由供ifagashi # (日本蛋糕）諸如isenbei'(米製脆餅），"^arare- 本紙張尺度適用中國國家橾率（CNS > A4規格（210X297公釐） -----------¾.------IT------0 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 414807 A7 B7___ 五、發明説明（31 ) mochi'(立方體米糕），、〇koslii，（粟一及米—糕），， mochr (米糊），(夾豆酱之麵包），、uiro '(甜米製膠狀物），、an'(豆醬），、y〇ka〆（豆 製之甜膠狀物），、mizu-yokaD# (軟adzuki豆製膠狀 物），'kingyoku，（一種豆製甜膠狀物），膠，Paode Castella及％araedam^ (日本太妃糖）等；糕餅諸如麵 包，硬麵包，脆餅，餅乾，派，布丁，奶油，軟凍奶油， 奶油泡芙，軟餅，海綿蛋糕，甜甜圈，巧克力，口香糖， 焦糖及糖果等：冷凍點心諸如冰奶油及冰凍果子霣等：糖 號諸如 '''kajitsu-no-syrup-zuke# (防腐水果）及 ’ko-rimitsu# (供刨冰用之糖漿）等：糊諸如麵粉糊，花生 糊，水果糊及塗物等：加工水果及蔬菜諸如果醬，橘子果 酱，tsyrup-zuk，（水果醃汁）SMaka# (糖潰果醬 )等；醃汁及醃滇品諸如'^fukujin-zuke'(紅蘿葡醃製 品），lettara-zulie"(—種完整新鮮蘿葡醃製品）及 ’rakkyo-zuke# (醃溃慈葱）：肉製品諸如火腿及香脹 等；魚肉製品諸如魚火腿，魚香腸，Maraaboke'(蒸魚 糊），tchikuwa# (—種魚糊）及henpura 〃（日本深 部脂肪炸魚糊）；tchinra〆（調味品）諸如、1111丨-11〇-s h i 〇 k a r a * (海膽之鹽漬腸），M k a - η 〇 - s h i 〇 k a r a * ( 烏賊之鹽潰腸），'ιι-ΐίοπίΰ〆（加工海藻），13&1^-s u r u m e # (乾烏賊條）及、f u g u - η 〇 - m i r i η - b ◦ s h i 〃 （乾 燥甜酒調味之河豚）；’tsukudani# (於醬油中熬乾之 食品）諸如紫菜，食用性野生植物，乾烏賊，魚及河豚者 本紙張尺度適用中國國家揉隼（CNS 规格（210X297公釐） I-------------,1T------0 % r (請先閩讀背面之注$項再填寫本頁) 經濟部中央標準局負工消费合作社印製 -34 - 經濟部十央標準局員工消費合作杜印装 414807 at __B7 五、發明説明（32 ) :毎日用菜諸如、nimante^ (烹調豆），馬鈴薯沙拉及、 konbu-naki# (海藻卷）等；奶製品諸如奶飲料，酸奶酪 及乳酪等：罐裝及瓶裝產品諸如肉，魚肉，水果及蔬菜者 :酒精類飲料諸如合成酒，葡荀酒及酒精飲料等：不含酒 精之飲料諸如咖啡，茶可可亞，果汁，碳酸飲料，酸奶飲 料及含乳酸菌之飲料等；即食食品諸如即食布丁混合物， 即食熱蛋糕混合物及"^sokuseki-shiruc〆 （adzuki — 豆湯與米糕之即食混合物）及即食湯混合物等，及飲料諸 如嬰兒食品，轚療食品及營養補充飲料等之甜化：以及供 改良上述食品之味道及品質。 本海藻糖及含彼之糖類組成物亦可用於供動物諸如家 畜，家禽，蜜蜂，蠶及魚等之飼料及寵物食品中以增加彼 等對味道之客好。本海藻糖及糖類組成物可任意使用於其 它糊形及液狀產品諸如煙草，香煙，牙育，口紅，胭脂， 唇部乳油，內用藥，片劑，錠劑，滴液式鱔魚肝油，兒茶 ，口服清涼劑，嗽口藥，化妝品及藥劑中以作爲甜化劑， 味道改良劑，品質改良劑及安定劑。
本海藻糖及含彼之糖類組成物可用以作爲品質改良劑 及安定劑以供易於喪失其有效成分及活性之生物學有效物 質所用，以及用於含生物學有效物質之健康食品及藥學組 成物中》此生物學有效物質之實例爲淋巴細胞活素諸如α 一，；3_及r_干擾素，腫瘤壞死因子一《 (TNF_tf )，腫瘤壤死因子一>9 (TNF —；9)，巨噬細胞移動作 用抑制因子，集落刺激因子，轉移因子及內白素2 (IL 本紙張尺度逍用中國國家標牟（CNS ) Α4规格（210Χ297公釐） ---------^------、1τ------^ *' (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -35 - 經濟部中央標準局貝工消费合作杜印製 414807 五、發明説明（33 ) —2 )等：激素諸如胰島索，生長激素，催乳激素，紅血 球生成索，濾泡刺激激素，及胎盤激素等：生物學製劑諸 如卡介苗，日本腦炎疫苗，麻瘆疫苗，活小兒麻痺疫苗， 水瘡疫苗，破傷風類毒素，Trimere surus抗毒素及人類 免疫球蛋白等，抗生素諸如靑徽索，紅徽柰，氣徽素，四 環素，鏈徽素及卡那徽素硫酸鹽等；維生索諸如硫胺素， 核黃素，L 一抗壤血酸，鱈魚肝油，類胡蘿葡素，麥角固 酵反生育酚等：酵素諸如脂酶，弾性蛋白酶，尿激酶，蛋 白 酶，冷一澱粉酶，異澱粉酶，葡聚糖_及乳糖南等； 精汁諸如人參精，棘《魚精，小球藻精，蘆薈精及蜂巢嫌 膠精等：活存微生物諸如病毒，乳酸菌及酵母菌等：及其 它生物學上有效物質諸如蜂王膠等。藉使用本海藻糖及含 彼之糖類組成物，上述生物學上有效化合物可輕易製成具 令人滿意之髙度安定性及品質之健康食品及槊學組成物而 不會有使其活性及有效成分喪失或鈍化之虞。 如上所述，將本海藻糖及含彼之糖類組成物置入上述 物質及組成物中之方法包括慣用之方法，例如混合，揑合 ，溶解，熔化，沈浸，滲透，噴洒，塗敷，塗附，噴霧， 注射，結晶及固化法。海藻糖及糖類組成物通常以0. 1 %或更髙，最好1%或更高，d. s. b.，之量置入上 述物質及組成物中。 下列實驗係更詳盡解釋本發明： 奮験1 本紙張尺度遑用中國國家揉隼（CNS ) A4規格（210X297公釐） I.--------^------1T------^ ·- <請先閏讀背面之注意事項再填寫本頁) -36 - 經濟部中央樣準局貝工消費合作社印製 414807 at _B7 _ 五、發明説明（34 ) 酵棄之製造 將一百奄升整份之由2. 0W/V%葡荀糖，0. 5
W/V%多疎，〇·1W/V%酵母菌精，〇. 06W/ V%磷酸氫二鈉，0.1W/V%磷酸氫鉀，0. 05W /V%硫酸鎂七水合物，0. 5W/V%碳酸鈣及水組成 之液態營養培養基置於5 0 0毫升錐形燒瓶中，於1 1 5 °C下壓熱3 0分鐘以完成殺菌，再予冷卻，而後接種上脂 肪桿菌R48 (FERM BP—4315>之接種培養 物，繼而於2 7°C下於2 0 0 r pm之攪拌狀況下培養 2 4小時，再將所得培養物集在一起並用以作爲接種培養 物〇 將約2 0升整份之與上述培養物中所用者相同之液體 營養培養基之新鮮製劑置於3 0升醱酵器中，再予殺菌， 冷卻至2 7°C，而後接種上一V/V%之接種培養物，繼 而於27 °C及6. 0 - 8 . OpH下，於攪拌及酹氧狀況 下培養約4 0小時。 所得培養物中所累稂之麥芽糖一海藻糖轉化酶之活性 爲0. 55單位/毫升。將一部分培養物藉離心法分離成 細胞及上層液，而後令細胞懸浮於5 0 mM磷酸鹽緩衝液 (P Η 7 . 0)中以得等量之彼部分，繼而分析細胞懸浮 液及上層液之酵素活性，結果分別爲0. 5單位/毫升及 0. 0 5單位/毫升。酵素活性之値係於2 5 °C下分析。 眚驗2 本紙張尺度逍用中國國家榡準（CNS > A4规格（210X297公釐） ---------i------IT------^ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -37 - 經濟部中央樣準局貝工消費合作社印製 414807 A7 __B7__ 五、發明説明（35 ) 將資驗1所得培養物離心以得約0. 5公斤濕細胞， 而後令之懸浮於10mM磷酸鹽緩衝液（PH7. 0)中 。繼而令細胞懸浮液接受MlBROGEN-ZELLJiU'HLE"(由德 國Tubingen, Edmund Biihler所售之細胞破裂儀器）， 再將所得混合物以1 5，0 0 0 X g之速離心3 0分鐘以 得約4. 5升上層液，將硫酸銨加至上層液中，並令之溶 解以得0. 3之飽和度，繼而令溶液於4 °C下靜置4小時 ，再離心以得上餍液。 將硫酸銨更進一步加至所得上靥液中，並令之溶解以 得0. 8之飽和度，而後令溶液於4 °C下靜置過液，再離 心以得沈稹物。 令沈稹物溶於1 OmM磷酸臁緩衝液（PH7 . 0 ) 中，對相同緩衝液之新鮮製劑進行滲析2 4小時，再離心 以移去不可溶物質，而後將4 Q 0毫升所得滲析溶液分成 2部分，繼而分別使用裝塡3 0 0毫升'DEAE — TOY〇PEARL®GEL# (由日本東京Tosoh 公司所售之離子交換劑）之柱進行柱色層分離。 使用補充鹽之相同緩衝液新鮮製劑以將離子交換劑上 所吸附之本麥芽糖-海藻糖轉化酶由柱中洗提出。再將由 柱中所洗提出之具酵素活性之諸部分復收，集合，並對補 充1 Μ硫酸銨之相同緩衝液新鮮製劑進行滲析。而後將滲 析溶液離心以移去不可溶物質，再令之使用裝塡有3 0 0 奄升，BUTYL — TOYOPEARL®6 5 0 本紙張尺度適用中國國家揉率（CNS ) A4規格（210X297公釐） ---------^------ΪΤ------^ * r (請先閲读背面之注意事項再填寫本頁) -38 · 414807 a? B7 五、發明説明（36 ) GEL"(由日本東京Tosoh公司所售之疏水膝）之 柱進行疏水柱色屠分離。繼而使用線性梯度由1M至0M 之硫酸銨緩衝液將膠上吸附之麥芽糖-海藻糖轉化酶由柱 中洗提出，再復收具酵素活性之諸部分。
將諸部分集合並令之使用裝塡有1 〇毫升％MONO Q H R 5 / 5 (由瑞典 U p p s a 1 a 之 P h a r m a c i a L K B
Biotechnology AB所售之膠）之柱進行離子交換柱色層 分離法，繼而復收具酵素活性之諸部分。每一純化步驟中 之總活性，比活性及產率乃示於表1中。 I---------^.------ΪΤ------線 ' - (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁)
經濟部中央標準局負工消費合作社印I 本紙張尺度逋用+國國家橾準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 414807 A7 B7 五、發明説明07) S_1 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 純化步騄 總酵素活性_ (單位） 比活性 (單位/毫克蛋白質） 產率 ⑴ 細胞破裂後 之上屠液 7,310 0 .25 100 鹽析後之 滲析溶液 2 ,730 0.31 37.3 得自離子交換 柱之洗提液 2,290 1.35 31.3 得自流水柱 之洗提液 1,160 10.8 15.9 得自離子交換 柱之洗提液 819 33.6 11.2 注意事項：符號 乃意指本麥芽糖一海藻糖轉化酶 I--------^------1T------線 - - (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度逋用中國圃家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -φ〇~ 414807 A7 B7 五、發明説明（38 ) 將上述純化步蹀所得之純化酵素製劑藉使用7. 5 % 十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺膠進行電泳以得單一蛋白質帶 ，此意指其爲具相當高純度之製劑。 窗驗3 酵棄之件晳 將資驗2所得之一部分純化麥芽糖-海藻糖轉化酶製 劑藉使用1 0 %十二烷基硫酸鈉聚丙烯醢胺膠進行氰泳。 分子置則藉與棵記蛋白質（由日本東京之日本Bio Rad 公司所售，其已同時進行竃泳）相比而測知爲約 57，000-67，000〇 另一部分之純化麥芽糖一海藻糖轉化酶製劑係藉使用 含 2V/V% 'AMPH0LINE"1 (由瑞士 Uppsala 之 Phar-m a c i a L K B B i 〇 t e c li n ο 1 〇 g y A B所售之兩性電解質）之聚 丙烯醯胺膠進行等電泳。再將所得之臃切成片，繼而測量 其酸鹸度而顯現酵素之P I爲約4 . 1 — 5. 1。 溫度及p Η對本酵素活性之效應係根據供分析酵素活 性所用之方法來硏究。結果分別示於圃1(溫度之效應） 及圊2(pH之效應）中，當於pH7. 0下保溫60分 鐘時，最理想之酵素溫度約爲2 0°C，而當於2 5 °C下保 溫6 0分鐘時，則最理想之pH約爲7. 0 - 8 . 0。酵 素之熱安定性係藉將之於試管內之5 0 m Μ磷酸鹽緩衝液 (Ρ Η 7 . 0)中，於不同溫度下保溫6 0分鐘，將試管 以冷水冷卻，再分析每一緩衝液中之餘留酵素活性而測知 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS) Α4规格（210Χ297公釐） ---------1^.------17------0 (請先^讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央梂準局貝工消費合作社印製 -41 - 經濟部中央榡準局員工消費合作社印製 414807 A7 _B7_ 五、發明説明（39 ) 。酵素之P Η安定性係藉將之於具有不同酸鹸度之5 0 mM磷酸鹽緩衝液中，於2 0eC下保溫6 0分鐘，將緩衝 液調整至P Η 7 . 0，再分析每一緩衝液中之餘留酵素活 性而測知。酵素之熱安定性及Ρ Η安定性結果乃分別示於 圇3及4中。酵素乃於最高約3 0°C之溫度下安定及於約 6. 0 — 9. 0之pH下呈安定狀態。一mM Cu+♦及
Hg —及5 OmM Tr i s—HCJ?緩衝液可抑制此酵 素。 眚驗4 對糖類之作用 本實驗乃對各種不同之糖類進行測試，無論彼等是否 用以作爲供本酵素所用之基質與否°將葡萄糖，麥芽糖， 麥芽三糖，麥芽四糖，麥芽五糖，麥芽六糖，麥芽七糖， 可溶性澱粉，平均聚合程度爲18之直鏈澱粉，海藻糖， 新海藻糖，龍膽二糖，麯二糖，異麥芽糖*嫌維二糖，麥 芽糖醇，蔗糖，麥芽果糖，土冉糖，巴拉提糖，海藻果糖 或乳糖製成溶液。再製備含葡萄糖及等量α -葡荀糖1 -磷酸鹽或y? —葡萄糖1 一磷酸鹽之溶液。 將溶液分別與實驗2方法所得之2單位/克基質， d. s.b.，之麥芽糖一海藻糖轉化酶混合，調整其基 質澳度至5W/V%，而後於2 0 1及公^17. 0下進行 酵素反應2 4小時，令酵素反應前及反應後之溶液使用^ KIESELGEL 6 0 ( 2 Ο X 2 0 公分）# (美國 Rahay 之 本紙張尺度逍用中國國家梯準（CNS ) A4规格（210X297公釐） ---------梦------ΐτ------0 t (讀先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -42 - 414807 at B7 五、發明説明（4〇 )
Merck公司所售之供薄層色餍分離用之鋁板）進行薄靥 色靥分離（TLC )以供測定本酵素是否對糖類起作用。 將所得產物於板上藉1 一丁醇，吡啶及水（=6 : 4 : 1 體積比）之延展溶劑系統延展一次。而後將板上之產物藉 將2 0 V/V%硫酸之甲醇液喷费於其上而著色，再將板 於1 1 0°C下加熱1 0分鐘，結果乃示於表2中。 ---------^------1T------0 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本页) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > A4規格（2丨0X297公釐） ™ 43 - 414807
7 7 A B 五、發明説明'(〆/) S_2 基質 酵素之作用 基質 酵素之作用 葡萄糖 - 嫌維二糖 一 麥芽糖 + + 麥芽糖醇 一 麥芽三糖 一 Ttiti xerit 薦糖 一 麥芽四糖 - 麥芽果糖 - 麥芽五糖 - 土冉糖 — 麥芽六糖 - 巴拉提糖 一 麥芽七糖 - 海藻果糖 一 可溶性澱粉 _ 乳糖 — 直鏈澱粉 _ (平均聚合 α —葡荀糖 _ 1 —磷酸鹽 經濟部中央榇準局負工消費合作社印装 度爲1 8 ) 加上葡萄糖 海藻糖 + 彡一葡萄糖 一 1 一磷酸鹽 加上葡萄糖 新海藻糖 - 新海藻糖 - 龍膽二糖 _ 麵二糖 - 異麥芽糖 - 並產乃 後它小 之其大 及因之 前乃點 之小斑 應大質 反之基 素點， 酵斑， 指質+ 意基+。 ,，、低 Γ號降 *+符幅 號、；大 符號低而 ，符降成 中；微形 表化略之 :變而物 項到成產 事察形它 意觀之其 注未物因 本紙張尺度逍用中國國家棋準（CNS ) A4規格（210><297公釐）_ .—I H I I I I 線 J ! (請先閣讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央揉隼局貝工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（42 ) 如同表2之結果所證實，其顯示本酵素在糖類中僅對 麥芽糖及海藻糖起作用，尤其不對含葡荀糖及α _葡萄糖 一 1 一磷酸鹽或>3 _葡萄糖1 —磷酸鹽之系統起作用。由 這些結果可知本酵素爲異於憤用麥芽糖-及海藻糖-磷酸 海之新穎酵素。 寅驗5 湎自麥芽糖或沲蓬艚之產品 將2單位/克麥芽糖（作爲基質〉，d. s. b.， 之實驗2方法所得麥芽糖一海藻糖轉化酶加至水性麥芽糖 溶液中以得5W/V%之最終基質濃度，再令所得溶液於 2 0°(：及口117, 0下進行酵索反應2 4小時，而後將所
得反應混合物之糖類組成物進行氣髗色層分離分析（其後 簡稱爲'"GLC")，將一部分反應混合物乾燥，溶於ftt 啶中及予三甲基甲矽烷基化以得供分析之樣品產物，GL C分析中所用之儀器及狀況爲、CG—16A# ，由日本 東京Shi nadzii公司所售之氣體色層分離術：不銹鋼柱， 3毫米直徑及2米長度，裝塡有由日本東京GL科學公司 所售之 2 % 'SILICONE 0V- 1 7 /CHROMOSORB K :作 爲載懷氣髏之氮氣流速爲4 0毫升/分：燫中之增溫之比 率爲在1 6 0°C至3 2 0 °C之範圍間每分鐘增加7 . 5 °C ，糖類組成物則於氫火焰離子化檢測器上分析》結果示於 表3中。 本紙張尺度逍用中國國家榇準（CNS>A4规格（210Χ297公釐） --------1^------ΐτ------it (請先Μ讀背面之注意事項再填寫本頁) -45 - A7 經濟部中央揉準局貝工消費合作社印製 414807 B7 五、發明説明（¢^) m_3 反應混合物 G L C逗留時間 糖類組成物 中之糖類 (分鐘） (% ) tir -*fcr W W糖 3 . 87及 4.70 4.9 麥芽糖 11 .93及12.27 22 . 3 X 12.34* 72 . 8 注意事項：符號' 之値與海藻糖者一致 0 ---------1------IT------0 一 一 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國圃家橾準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 經濟部中央揉率局員工消费合作社印製 414807 A7 …… _B7___ 五、發明説明（44 ) 如同表3之結果證實，其顯示產物乃大量形 成，且逼留時間乃與商用之海藻糖者一致。欲鑀定產物· X，，乃進行下列之確證試驗◊將與上述所用相同之水性 麥芽糖溶液之新鲜製劑以2 OmM乙酸鹽緩衝液（pH 4. 5)稀釋以得2W/V%之麥芽糖濃度，再取〇· 5 奄升與日本東京Seikagaku-Kogyo有限公司所售之 0.1單位葡萄糖澱粉歯樣品混合，繼而令混合物於40 eC下進行酵素反應2 0小時。 同樣地，將與上述所用相同之水性麥芽糖溶液之新鮮 製劑以2 OmM乙酸鹽緩衝液（pH7. 0)稀釋以得2 W/ V %之麥芽糖濃度，再取〇 . 5毫升與0. 5單位海 藻糖混合，繼而令混合物於4 0°C下進行酵素反應2 0小 時。再將完整水性麥芽糖溶液及已以葡萄糖澱粉酶及海藻 糖處理之水性麥芽糖溶液進行氣體色餍分離分析，繼而硏 究資料後，其顯示麥芽糖乃藉葡萄糖激粉海而分解成葡萄 糖，但產物* X #仍保持完整。 當以海藻糖處理時，麥芽糖仍保持完整，但產物 ^乃完全分解成葡萄糖。有鑑於葡萄糖澱粉酶及海藻糖之 反應機轉，故推論本酵素可使麥芽糖形成寡糖，亦即海藻 糖。 此外，令本發明之純化酵素於與麥芽糖所用者相同之 狀況下作用於作爲基質之海藻糖上，再將所得反應混合物 進行氣慊色屠分離分析。資料證實本酵素可使海藻糖形成 麥芽糖。結果則示於表4中。 本紙張尺度適用中娜標準（叫赠（训_公煃） ----------¢------1T------0 -*- (請先賦讀背面之注意事項再填寫本頁) 414807 A7 B7 五、發明説明（#) 表 4 基質 A B ( % ) C ( % ) D ( % ) 葡萄糖 4.9 27.9 78.5 麥芽糖 麥芽糖 22.3 0.0 21.5 海藻糖 72.8 72.1 0.0 葡萄糖 3.2 19.9 83.3 海藻糖 麥芽糖 17.2 0 . 0 16.7 海藻糖 79.6 80.1 0 . 0 注意事項：表中，符號意指反應混合物中之糖類： 符號，藉本酵素所形成之反應混合物中 之糖類：符號*C# ，已以葡萄糖澱粉酶處理 之反應混合物之糖類組成物；符號，已 以海藻糖處理之糖類組成物。 I 訂 線 ―4 (諳先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央梂準局員工消費合作社印製 本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS ) A4規格（2!0X297公釐） 經濟部中央標準局貝工消费合作社印製 414807 A7 _B7 五、發明説明（仙） 如同表4之結果所證寅，本酵素可將麥芽糖轉化成海 藻糖且反之亦然。其顯示轉化反應之均衡位置乃傾向於海 藻糖之形成，亦即麥芽糖轉化成海藻糖之轉化率約爲7 0 %或更高，此乃髙於海藻糖轉化成麥芽糖者。 賨驗6 麥芽糖澹度對海蓬糖形成之影響 將含2. 5，5，10，20或40%/7%麥芽糖 溶液與2單位/克麥芽糖，d. s. b.，之實驗2方法 所得之純化麥芽糖-海藻糖轉化酶混合，再於2 0°C下及 D Η 7 . 0下進行酵素反應。酵素反應期間，乃將反應混 合物採樣，及於1 0 0°C下加熱1 0分鏟以使酵素鈍化。 反應混合物之總糖量係藉葸萌-硫酸法測定。還原糖 之量則藉索莫一尼森（Somogyi-Uelson )法依據葡萄糖 來定量，還原力係以還原糖量與總糖量之比來測知。 將樣品稀釋以得約1 W/V%之糖類濃度，而後令之 進行、MOL — CUT 11 LGC，（日本東京之日本 Millipore有限公司）以移去蛋白質，再使用高效能液 體色層分離法（其後簡稱爲iHPLC')以分析其糖類 組成物，分析中所用之儀器及狀況爲*CCPD SYSTEM"，由日本東京TOSOH公司所售之 HPLC 儀器；％YMC — PACK PA —03'，一 種由日本東京YMC有限公司所售之直徑4. 6毫米且長 度2 5 0毫米之柱；洗提系統爲乙腈及水（=7 8 : 2 2 本紙張尺度適用中國國家梯牟（CNS ) A4規格（210X297公羡> ---------装------ΐτ------it - (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -49 - 414807 A7 B7五、發明説明（47 )體積比）；流速爲1. 2毫升/分：且以差示折射器作爲檢測器。結果則示於表5中。 —裝-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 線 經濟部中央橾率局負工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -50 - 414807 A7 B7 五、發明説明（产万) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 麥芽糖濃度 (%) 反應時間 (小時） 還原力 (% ) 糖類組成物（％) 葡萄糖 麥芽糖 海藻糖 0 50.3 0.0 100.0 0.0 2 36.7 1,3 68.8 29.9 2.5 8 21.2 2.5 38.7 58.8 23 12.3 3.8 17.2 79.0 48 14.5 5.9 17.1 77.0 2 34.8 1.9 65.3 32.8 5.0 8 20.2 2.6 35.7 61.7 23 12.0 3.2 17.3 79.5 48 14.2 5.7 17.3 77.0 2 32.2 1.3 63.0 35.7 10.0 8 19.7 2.2 34.2 63.6 23 12.5 3.6 17.5 78.9 48 14.0 6.1 17.4 76.5 2 34.2 2.0 63.7 34.3 20.0 8 20.2 2.9 35.1 62.0 23 12.9 3.4 17.4 79.2 48 15.1 6.0 17.4 76.6 2 34.8 1.6 68.2 30.2 40.0 8 21.2 2.7 38.6 58.7 23 12.8 3.7 17.7 78.6 48 14.9 5.7 17.5 76.8 (諳先W讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS) A4規格（210X297公釐）-一 414807 A7 ___B7五、發明説明（49 ) 如同表5之結果所證實，麥芽糖轉化成海藻糖之反應 乃不依麥芽糖之澳度而以約8 0 %之轉化率平穩進行。 竇驗7 溫度對海藻糖形成之效鼸 將2 0W/V%麥芽糖溶液與2單位/克麥芽糖， d. s. b.，之實驗2方法所得之純化麥芽糖一海藻糖 轉化海混合，再於5，1 0，1 5，2 0或25 °C下進行 酵索反應，酵素反應期間，將反應混合物在預定之時間間 隔採樣，而後將樣品於1 0 0°C下加熱1 0分鏟以使酵素 鈍化。依照類同於實驗6之方法，將樣品之糖類組成物進 行HPLC分析。樣品中之海藻糖董（已在不同之溫度及 反應時間採樣〉乃示於表6中。 ---------i------IT------^ (請先閲讀背面之注^^項再填寫本頁) 經濟部中央標準局貝工消費合作社印裝 本紙張尺度適用中困困家橾準（CNS) A4規格（210Χ297公釐） -52 - 414807 B7 五、發明説明（π) 表 6 反應時間 (小時） 海藻糖ft ( % ) 5 °C 1 0 °c 1 5 °C 2 0 °C 2 5 °C 2 26.1 28.9 32.9 34.6 34.7 8 49.5 54.3 61.2 62.0 61.1 23 78.2 79.5 80.9 79.2 76.7 48 81.8 80.9 80.4 76.6 72.7 --------i------ίτ------0 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央樣準局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標率{ CNS ) Α4规格（210Χ297公釐） Ο 414807 at Β7五、發明説明（51 ) 如同表6之結果所證實，海藻糖之形成速率乃隨著反 應溫度之增加而易於增加，且麥芽糖帱化成海藻糖之轉化 反應即使於5 °C下，以約8 2 %之海藻糖轉化率平穩進行 經濟部t央標準局負工消费合作社印製 窗驗8 由麥芽糖製備海荡糖之方法 令十重量份由日本岡山Hayashibara生化實驗室所 售之麥芽糖溶於4 0重量份水中，再將溶液與2單位/克 麥芽糖，d. s. b.，之實驗2方法所得之純化麥芽糖 _海藻糖轉化酶混合，繼而於15°C及pH7. 0下進行 酵素反應4 8小時，而後將所得反應混合物於1 0 0°(：下 加熱1 0分鐘以使餘留之酵素鈍化，再將含約7 4%海藻 糖，d. s . b .，之反應混合物以活性炭脫色，以H_ 及Ο Η _形式之離子交換劑脫鹽，濃縮成約7 8W/V% 溶液，而後與作爲晶種之0.1%晶狀海藻糖，d. s. b.，混合，継而令之於室溫下靜S過夜以達成結晶。再 將所得糖育分離成結晶，繼而以小量水喷霧及清洗，而後 復收約30重量份之純度爲99. 8 % » d . s . b.之 高純度晶狀海藻糖。 竇験9 酵素之製浩 將一百毫升整份之由2. 0W/V%葡萄糖，1. 0 ---------^------1T------it (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X297公釐） -54 - 414807 A7 ____B7_ 五、發明説明（52 ) W/V%硫酸銨，0. lW/ν%磷酸氫二鉀，〇. 0 6 W/V%磷酸二氫鈉，0. 05W/V%硫酸鎂，〇. 3 W/V%碳酸鈣及水組成之液態營養培養基®於5 〇 〇毫 升钍形燒瓶中，於1 1 5°C下壓熱3 0分鏟以完成殺菌， 再予冷卻，而後接種上惡臬假單胞菌（FERM B P -4 5 7 9 )之接種培養物，繼而於2 7 °C下於2 0 0 r pm之攪拌狀況下培養2 4小時。再將所得培養物集在 一起並用以作爲接種培養物。 將約2 0升整份之與上述培養物中所用者相同之液體 營養培養基之新鮮製劑置於3 0升醱酵器中，再予殺菌， 冷卻至2 7°C，而後接種上一V/V%之接種培養物，繼 而於2 7 °C及6. 5 - 8 . ΟρΗ下，於攪拌及W氣狀況 下培養約2 0小時。 所得培養物中所累稹之麥芽糖-海藻糖轉化酶之活性 爲0.12單位/毫升。將一部分培養物藉離心以分離出 細胞及上層液，而後令細胞懸浮於5 OmM磷酸鹽緩衝液 (P Η 7 . 0)中以得等童之彼部分，繼而分析細胞懸浮 液及上層液之酵素活性，結果分別爲0.11單位/毫升 及0. 0 1單位/毫升。酵素活性係於3 5 °C下分析。 奮驗1 0 酵棄之純化 將實驗9所得培養物離心以得約0. 45公斤濕細胞 ，而後令之懸浮於I OmM磷酸鹽緩衝液（pH7. 0 ) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） --------ά------、訂------.ii (請先閎讀背面之注意Ϋ項再填寫本頁) 經濟部中央樣準局員工消費合作社印製 -55 " 經濟部中央梂準局員工消费合作社印製 A7 B7五、發明説明（53 ) 中，繼而將約2升所得細胞懸浮液以*MI N I — R A B 0 # (由日本東京Da ini pp on製薬有限公司所售 之超壓細胞破裂儀器）處理*再將所得混合物以 1 5，0 0 Oxg之速離心3 0分鐘以得約1. 7升上屠 液。而後將硫酸銨加至上層液中，令之溶於其中以得 0 . 7之飽和度，令之於4 °C下靜置4小時，而後離心以 得所得沈積物。 令沈稹物溶於1 OmM磷酸鹽緩衝液（pH7 . 0 ) 中，令瑢液對相同緩衝液之新鲜製劑進行滲析2 4小時， 再離心以移去不可溶物質。而後將4 0 0毫升滲析溶液分 成2部分，繼而分別使用裝塡3 0 0毫升""DEAE — TOYOPEARL®GEL，（由日本東京Tosoh 公司所售之膠）之柱進行離子交換柱色册分離。 使用補充鹽之相同緩衝液新鮮製劑以將膠上所吸附之 本麥芽糖一海藻糖轉化酶由柱中洗提出。再將具酵素活性 之諸部分復收，而後使用裝塡有8 0毫升％DEAE — TOY〇PEARL®GEL"·之柱進行離子交換柱色層 分_，繼而使用線性梯度由0.1M至0. 3M範園之盥 將膠上吸附之麥芽糖一海藻糖轉化酶由柱中洗提出，再復 收具酵素活性之諸部分。 將諸部分集合並令之使用裝填有4 0 0毫升i TOYO-PEARL H W - 5 5 S * (―種由日本東 京To s 〇 h公司所售之膠）之柱進行膠濾柱色層分離法 ，繼而復收具酵素活性之洗提部分，每一純化步驟中之總 I I I I HI n ϋ 裝一-I I —^ 1 訂 I 1 I 線 -- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標芈（CNS ) A4规格（210X297公釐） -56 - A7 414807 B7 五、發明説明（54 ) 活性，比活性及產率乃示於表7中。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 丨裝- -6 經濟部中央標準局員工消費合作社印装 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -57 - 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 414807 a7 B7 五、發明説明（^) *__7 純化 步驟 總酵素活性 (單位） 比活性 (單位/毫克蛋白質） 產率 ⑻ 細胞破裂後 之上層液 1,750 0.04 100 鹽析後之 滲析溶液 1,200 0.07 68.5 得自離子交換柱 之第一次洗提液 1,090 0.53 62.3 得自離子交換柱 之第二次洗提液 360 4.5 20.6 得自膠濾柱 之洗提液 156 6.5 8.9 注意事項：符號'^ 〃意指本麥芽糖一海藻糖轉化酶。 --------i------ΐτ------.^ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家揉率（CNS > A4規格（210X297公釐） A7 B7 414807 五、發明説明（) 使用7. 5W/V%十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺膝令 純化之酵素製劑進行膠電泳，結果發現所得之單一蛋白質 帶乃意指其爲具較髙純度之製劑。 窗脸 酵素之性暫 將資驗10方法所得之一部分純化麥芽糖一海藻糖轉 化海製劑藉使用7. 5W/V%十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯 胺膠進行電泳，再藉將之與標記蛋白質（由日本東京之曰 本Bio-Rad賁驗至出售，其已同時進行電泳）相比而測 知其分子量爲約1 1 0，0 0 0 — 1 2 0，0 0 0道耳呑 另一部分之純化麥芽糖一海藻糖轉化酶製劑則藉使用 含 2 W / V %、AMPHOLINE'(由瑞士 Uppsala 之 Phar-in a c i a L K B B i 〇 t e c h n g 1 〇 g y A B 所售之 兩性電 解質） 之聚 丙烯醯胺膠進行等電泳。再將所得之膠切成片，繼而測置 其酸餘度而顯現酵素之PI爲約 溫度及P Η對本酵素活性之效應係根據供分析酵素活 性所用之方法來硏究。結果分別示於圓5 (溫度之效應） 及圖6(pH之效應）中。當於pH7. 0下保溫60分 鐘時，最理想之酵素溫度約爲2 0°C，而當於3 5 °C下保 溫60分鐘時，則最理想之pH約爲7. 3 - 8 . 3，酵 素之熱安定性係藉將之於容器內，與5 OmM磷酸鹽緩衝 液（pH7. 0)於不同溫度下保溫6 0分鐘，將容器內 本紙張尺度適用中國國家梯準（CNS ) Α4規格（210Χ 297公釐） I I '裝 I i ί 訂— — I ~線 (請先閱讀背面之注項再填寫本頁) 1-5 經濟部中央橾準局貝工消费合作社印製 -59 - 經濟部中央樣準局貝工消费合作社印製 A7£7_ 五、發明説明（57 ) 之所得緩衝液以冰水冷卻，再分析每一緩衝液中之餘留酵 素活性而測知。酵素之p Η安定性係藉將之於具有不同酸 餘度之5 OmM磷酸鹽緩衝液中，於3 5°C下保溫6 0分 鏟，將所得練衝液調整至PH7. 〇,再分析每一緩衝液 中之餘留酵素活性而測知。酵素之熱安定性及p Η安定性 結果乃分別示於圖7及8中，酵素乃於最高約4 0°C之溫 度下安定且於約6. 0 - 9 . 5之pH下呈安定狀態。一 mM Cu++ 或 Hg “及 5 OmM Tr i s-HC5。 緩衝液可抑制本酵素。 窗驗1 2 對糖類之作用 本實驗乃根據實驗4之方法（惟反應溫度設定爲3 5 °C )對各種不同之糖類進行測試，無論彼等是否用以作爲 供實驗1 0所得之來自惡臭假單胞菌H2 6 2之本酵索所 用之基質與否。類同於來自惡臭假單胞菌H2 6 2之本酵 索一樣，來自脂肪桿菌R 4 8種之酵素可專一地對麥芽糖 及海藻糖起作用，亦即其可將麥芽糖轉化成海藻糖且反之 亦然。其顯示，轉化反應之均衡位置乃傾向於海藻糖之形 成，亦即麥芽糖轉化成海藻糖之轉化率乃約7 0 %之高。 窗驗1 3 麥芽糖濾度對沲蓬糖形成之影響 將2單位/克麥芽糖，d. s . b .，之實驗10所 ----------.装------.玎------^ > ' -. (讀先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家橾率（CNS ) A4規格（2tOX297公釐） -60 - 414807 A7 B7 五、發明説明（58 ) 得純化麥芽糖一海藻糖轉化酶加至含5，1 0，2 0或 3 0%麥芽糖溶液中，再將溶液於3 5 °C及pH7. 0下 進行酵素反應，同時於預定之間隔時間採樣。將樣品於 1 0 0°C下加熱1 0分鐘以使餘留之酵素鈍化。 依類同於實驗6之方法，測定樣品之還原力及糖類組 成物。結果則示於表8中。 ---------、装------ΐτ------^ » -- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國圉家橾準（CNS ) Α4规格（2!ΟΧ297公釐） -61 - 414807 A7 - B7 •、發明説明（灯） 表 8 麥芽糖濃度 (%) 反應時間 (小時） 還原力 (% ) 糖類組成物（％) 葡萄糖 麥芽糖 海藻糖 0 50.3 0.0 100.0 0.0 2 43.8 0.8 88.0 11,2 5.0 7 35.0 0.5 72.7 26.8 24 17.2 0.5 41.8 57.7 48 10.3 1.8 29.7 68.5 2 46.8 1.2 86.5 12.3 10.0 7 34.6 1.4 64.9 33.7 24 16.0 2.2 36.4 61.4 48 14.8 3.7 26.5 69.8 2 44.9 0.7 86.6 12.7 20.0 7 32.7 1.2 66.6 32.2 24 21.0 2.6 35.8 61.6 48 11.2 3.9 27.0 69.1 2 44.8 0.0 89.5 10.5 30.0 7 38.2 0.6 72.5 26.9 24 17.8 1.8 41.8 56.4 48 12.9 3.9 29.6 66.5 1_^---^------装------ΐτ------^ (請先閲讀背面之注意Ϋ項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 木紙張尺度適用肀國國家揉準（CNS丨Α4規格（210X297公釐）一‘之一 Α7 Β7 啻驗1 由麥芽糖製備海荡糖之方法 令十重量份 售之麥芽糖溶於 麥芽糖，d . s 混合，而後於3 時，繼而將所得 使餘留之酵索鈍 .，之反應混合 離子交換劑脫鹽 爲晶種之0 . 1 而令之於室溫下 成結晶*繼而以 量份之純度爲9 藻糖。
4'i480lV 五、發明説明（6〇 ) 如同表8之結果所瞪實，使麥芽糖形成海藻糖之本酵 素乃不依麥芽糖基質之澳度而以約7 0 %之產率轉換。 由日本岡山Hayashibara生化實驗室所 4 0重置份水中，再將溶液與2單位/克 .b.，之本純化麥芽糖一海藻糖轉化海 5°C及ρΗ7· 0下進行酵索反應4 8小 反應混合物於1 〇 0°c下加熱1 G分鐘以 化。再將含約69%海藻糖，d· s. b 物以活性炭脫色，以Η —及0H_形式之 ，濃縮成約7 8W/V%溶液，而後與作 %晶狀海藻糖，d. s_ b·，混合，継 靜置過夜以達成結晶。再將所得糖育分離 小量水喷籌及清洗，而後復收約2 _ 3重 9. 7%，d. s. b.之高純度晶狀海 奮驗1 5 酵素之製浩 將一百毫升整份之由0· 5W/V%多腺， /V%酵母菌精，0. 0 7W/V%硝酸鈉，〇 /V%磷酸氫二鉀，〇. 02W/V%硫酸鎂， 本紙張尺度通用中國國家標準（CNS > A4規格（210X297公釐） I I I —Ο I 裝 ^—訂 I I 線 • - ·- (請先W讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央橾準局貝工消费合作社印装
.1 W 0 1 W -63 - 經濟部中央樣準局男工消費合作社印製 A7 .414&07__!Z_ 五、發明説明（61 ) W/V %氯化銬及水組成之液態營養培養基調整至p η 7· 5,置於500毫升錐彤燒瓶中，於120 °C下屋熱 2 0分鐘以完成殺菌，再予冷卻，而後接種上水性棲熱菌 (ATCC 3 3 9 2 3 )之接種培養物，繼而於60 °C 下，於2 0 0 r pm之攪拌狀況下培養2 4小時，再將所 得培養物集在一起並用以作爲接種培養物。 將約2 0升整份之與上述培養物中所用者相同之液髗 營養培養基新鮮製劑置於兩個3 0升醱酵器中，再予殺菌 ，冷卻至6 0°C，而後接種上一 V/V%接種培養物，繼 而於6 0 °C及6. 5 - 8 . 0之pH下，於攪拌及署氧狀 況下培養約2 0小時。 所得培養物中所累積之麥芽糖-海藻糖轉化酶之活性 爲0. 35單位/毫升。將一部分培養物藉離心以分離出 細胞及上腊液，而後令細胞懸浮於5 OmM磷酸鹽緩衝液 (p Η 7 . 0)中以得等置之彼部分，繼而分析細胞懸浮 液及上靥液之酵素活性，結果分別爲〇. 33單位/毫升 及0. 0 2單位/毫升。酵素活性係於6 0 °C下分析。 窗驗1 6 酵棄之純化 將實驗1 5所得培養物離心以得約〇 . 2 8克濕細胞 ，而後令之懸浮於1 OmM磷酸鹽緩衝液（PH7- 0 )
中。繼而將約1. 9升所得細胞懸浮液以"^MODEL US 3 〇 〇# (由日本新潟之Nippon Seiki有限公司所 本紙張尺度適用中圃國家標準（CNS)A4规格（210X297公釐） I 1 n —裝 1111 訂 i 11 線 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -64 - A7 B7 41480V_ 五、發明説明（62 ) 售之超音波崩解劑）處理以使細胞破裂。再將所得混合物 以1 5，0 0 Oxg之速離心3 0分鏡以得約1. 8升上 屠液。將硫酸銨加至上層液中，並令之溶解以得0. 7之 飽和度，雄而令溶液於4 °C下靜置4小時，再離心以得沈 稹物。 令沈稹物溶於lOmM磷酸鹽緩衝液（pH7. 0) 中，再令溶液對相同緩衝液之新鮮製劑進行渗析2 4小時 ，苒離心以移去不可溶物質。而後將1 5 6 0毫升之滲析 溶液分成三部分，繼而分別使用裝塡有5 3 0毫升^ DEAE-TOYOPEARL® 6 5 0 GEL，（由 日本東京To s o h公司所售之膠）之柱進行離子交換柱 色層分離。 本麥芽糖-海藻糖轉化酶乃吸附於膠上且可使用補充 鹽之相同緩衝液新鮮製劑將之洗提出。繼而復收具酵素活 性之諸部分，並對補充1 Μ硫酸銨之相同緩衝液新鮮製劑 進行滲析，而後使用裝塡有3 8 0毫升'BUTYL — TOYOPEARL®6 5 0 G E L # (由曰本東京 To s o h公司所售之疏水膠）之柱進行疏水柱色層分離 。繼而使用線性梯度由1 Μ至0 Μ之鹽將膠上吸附之麥芽 糖-海藻糖轉化酶由其中洗提出，再復收具酵素活性之諸 部分。 將諸部分集合並令之使用裝塡有3 8 0毫升| TOYOPEARL H W - 5 5 S # (由日本東京 To s 〇 h公司所售之膠）之柱進行膠濾柱色層分離，繼 本紙張尺度逍用中國8家標準（CNS > A4規格（210X297公釐） .*裝 訂 線 {請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央棣準局貝工消費合作社印製 65 414807 A7 B7__ 五、發明说明（W ) 而復收具有酵索活性之洗提部分。 將諸部分集合並令之使用裝塡有1. 0毫升t MONO Q HR 5/5'(由瑞典 Uppsala 之 Pharmacia L K B . B i 〇 t e c h π ο 1 〇 g y A B 所售 之膠） 之 柱進行 離子交 換色層分離。再使用線性梯度由0.1M至0 35M範 園之鹽將酵素由柱中洗提出，繼而復收具酵素活性之諸部 分。每一純化步驟之總活性，比活性及產率乃示於表9中 ----------^------ΪΤ------線. (請先Μ讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央橾準局員工消费合作社印製 本紙張尺度速用中國國家標率（CNS ) Α4说格（210Χ297公釐） 66 A7 經濟部中央揉準局員工消費合作社印裳
---------^------、玎------i (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局貝工消費合作社印袈 A7 _B7_ , 五、發明説明（65 ) 將純化之酵素製劑使用5 W/V %十二烷基硫酸鈉聚 丙烯醣胺膠進行電泳以得單一蛋白質，此意指其爲具較高 純度之製劑。 竇驗1 7 酵素之性質 將實驗1 6所得之一部分純化麥芽糖一海藻糖轉化酶 製劑使用含7. 5W/V%十二烷基硫酸鈉聚丙烯醸胺之 膠進行電泳，再藉將之與標記蛋白質（由日本東京之曰本 Bio-Rad實驗室所售，其已同時進行電泳）相比而測知其 分子量爲約1 0 0，0 0 0- 1 1 0，0 0 0道耳呑。 將另一部分之純化麥芽糖一海藻糖轉化酶製劑於含2 W/V%'AMPHOLINE，（由瑞士 Uppsala 之 P h a r m a c i a L K B B i 〇 t e c h u 〇丨〇 g y A B所售之兩性電解質） 之聚丙烯醣胺膠進行等電泳，其後，將所得之膠切成片， 繼而測量其酸鹸度而顯現酵素之pi爲約3. 8—4. 8 〇 溫度及P Η對本酵素活性之效應係根據供分析酵索活 性所用之方法來硏究。結果分別示於圈9 (溫度之效應） 及圖10 (pH之效應）中。當於ρΗ7. 0下保溫6〇 分鐘時，最理想之酵素溫度約爲6 5 eC，而當於6 0°C下 保溫60分鐘時，則最理想之pH約爲6. 0—6. 7, 酵素之熱安定性係藉將之於試管內之5 OmM磷酸鹽緩衡 液（PH7. 〇)中，於不同溫度下保溫60分鐘，將軾 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4规格（210X297公釐） ---------▲------ΐτ------,^ (請先閏讀背面之注意事項再填寫本頁) ~ 68 - A7 B7 414807 五、發明説明（邱） 管以冰水冷卻，再分析每一緩衝液中之餘留酵素活性而測 知，酵索之p Η安定性係藉將之於具有不同酸鹸度之5 0 mM磷酸鹽緩衡液中，於6 0°C下保溫6 0分鐘，將所得 緩衝液調整至PH7. 〇,再分析每一緩衝液中之餘留酵 素活性而測知。酵素之熱安定性及p Η安定性結果乃分別 示於圓1 1及1 2中。酵索乃於最髙約8 0eC之溫度下安 定且於約5 · 5 - 9 . 5之p Η下呈安定狀態。一 τη Μ
Cu —或 Hg 一及 5 OmM Tr i s-HCi 緩衝液 可抑制本酵素。 實例1 8 對糖類之作用 本實驗乃根據實驗4之方法（惟將反應溫度設定爲 5 0 °C )對各種不同之糖類進行測試，無論彼等是否用以 作爲得自水性棲熱菌（ATCC 3 3 9 2 3 )之本酵素 所用之基質與否，與得自脂肪桿菌R 4 8種及惡臭假單胞 菌之酵素一樣，得自水性棲熱菌（ATCC 3 3 9 2 3 )之酵素可專一性地作用於麥芽糖及海藻糖上，亦即其可 將麥芽糖轉化成海藻糖且反之亦然。其顯示轉化反應之均 衡位置乃傾向於海藻糖之形成，亦即麥芽糖轉化成海藻糖 之轉化率約爲7 0 %或更髙。 窗驗1 9 麥芽糖澹縻對海荡糖形成之彤響 本紙張尺度適用中圃國家梯準（CNS ) A4规格（210X297公釐） ---------^------ir------^ (讀先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標率局貝工消費合作社印製 -69 - A7 B7_ 五、發明説明（67 ) 將2. 5單位/克麥芽糖，d. s. b.，之藉實驗 16方法所得之得自水性棲熱菌（ATCC 3 3 9 2 3 )之純化麥芽糖—海藻糖轉化海加至含2 . 5，5，1 0 ，2 0或4 0%麥芽糖溶液中，再令溶液於6 0°C及pH 6 5下進行酵素反應。於酵素反應開始後之72小時， 將反應混合物採樣，繼而於1 0 下加熱3 0分鏟以使 餾留酵素鈍化。再根據類同於實驗6之方法測定樣品之邇 原力及糖類組成物。結果乃示於表10中。 ---------.、裝------訂------線 -- (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 本紙張尺度適用中國國家樣窣（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） -70 - 經濟部中央橾準局員工消費合作社印裝 414807 五、發明説明（Af) 表 10 麥芽糖澳度 (%) 反應時間 (小時） 還原力 (% ) 糖類組成物（％) 葡萄糖 麥芽糖 海藻糖 0 50.3 0.0 100.0 0.0 2.5 72 16.3 4.5 25.2 70.3 5.0 72 15.9 4.4 25.6 70.0 10.0 72 16.0 4.7 25.6 69.7 20.0 72 16.6 4,4 26.2 69.4 40.0 72 16.8 5.0 26.4 68.6 --------—裝-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫表頁) 訂 本紙張尺度適用中囷國家標隼（CNS ) A4规格（210X297公釐） A7 _B7___ 五、發明説明（69 ) 如同表1 0之結果所證實，麥芽糖轉化成海藻糖之反 應乃不依麥芽糖基質之濃度而以約7 0 %之轉化率進行。 窗驗2 0 溫度對海蓬耱形成之影籌 將2. 5單位/克麥芽糖，d. s. b.，之藉實驗 16方法所得之衍自水性棲熱菌（ATCC 3 3 9 2 3 )之麥芽糖一海藻糖轉化酶加至具PH6. 5之20%麥 芽糖溶液中，再令混合物於4 0，5 0，6 0或7 0°C下 進行酵素反應，同時於預定之間隔時間採樣。將樣品於 1 0 0°C下加熱3 0分鐘以使餘留之酵素鈍化。再依類同 於實驗6之方法令所得反應混合物進行Η P L C以分析其 糖類組成物，於不同溫度及反應時間下之海藻糖置乃示於 表1 1中。 ----------ά------ΐτ------0 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央揉率局貝工消費合作杜印製 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS > A4規格（2丨0X297公釐） -72 - 經濟部中央樣準局員工消費合作社印製 414807 五、-發明説明（广） 表 1 1 反應時間 (小時） 海藻糖量（％ ) 4 0 °C 5 0 °C 6 0 °C 7 0 °C 4 45.0 55.7 56.8 50.3 8 61 . 0 67.3 64.3 58.5 24 79 · 1 76 . 5 71 . 1 64.3 48 80.7 76.9 70.2 62.8 72 80 _ 0 76.4 68.5 60.2 L - (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁} 111 本紙張尺度逍用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨0><297公釐） 41480^_^_ 五、發明説明（71 ) 如同表1 1之結果所證實，酵素之反應溫度愈低，則 麥芽糖轉化成海藻糖之轉化率愈髙，酵素可以約8 0 %之 轉化率將麥芽糖轉化成海藻糖。 窗驗2 1 得自微生物之麥芽糖一海蕩糖耱化豳之製法及件皙 在慣用之微生物當中，已證實具有形成本麥芽糖一海 藻糖轉化酶能力之微生物乃根據實驗15之方法於錐形燒 瓶中保溫4 8小時，分析酵素活性後，根據實驗1 6之方 法將所得培養物進行細胞破裂。由所得混合物中製備上厝 液，再予滲析以得部分純化之酵素，繼而根據資驗1 7之 方法分析其性質，結果乃示於表12中。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標率局員工消费合作社印製 本紙張尺度逋用中國國家橾率{ CNS ) A4洗格（210X297公釐） _ 74 - 114807 A7 B7 五、發明説明（ 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 表 12 微生物 活性 (單位/¾升） 最理想之 麵。C) 最理想之 pH 駿定性 ΓΟ pH安定性 水性樓熱菌 (ATCC 27634) 0.30 約65 約6.0-6.5 最高達80 約5.5-9.5 紅色棲熱菌 (ATCC 35948) 0.26 約50 約6.0-7.0 最高達50 約5.5-10.0 棲熱麵 (ATCC 43815) 0.25 約65 約6.0-6.5 最高達80 約5.5-9.5 實驗1-3所述之 脂肪桿菌種R48 (FERM BP-4315) 0.55 約20 約7.0-8.0 最高達30 約6.0-9.0 實驗12-14所述之 惡臭假單胞菌H262 (FERM BP-4579) 0.12 約37 約7.3-8.3 最高達40 約6.0-9.5 實驗18-2Q所述之 水性棲熱菌 (ATCC 33923) 0.35 約65 約6.0-6.7 最高達80 約5.5-9.5 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度遥用中國國家標準{ CNS ) A4規格（210x29?公釐） ―舛一 414807 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（73 ) 拫據寅驗18之方法以硏究表12所示棲热菌羼之已 知微生物中所衍出之部分純化酵素對各種不同糖類之作用 。結果顯示，與水性棲熱菌（ATCC 3 3 9 2 3 )所 衍出之酵素類同，此部分純化之酵素乃專一地對麥芽糖及 海藻糖作用，及由麥芽糖中形成海藻糖。 其顯示，由紅色棲熱菌（ATCC 35948)所 衍出之麥芽糖-海藻糖轉化酶乃顯現比水性棲熱菌（ ATCC 3 3 9 2 3 )更低之最理想溫度及更低之安定 溫度，而由棲熱菌屬微生物所衍出之酵素乃具有約略與水 性棲熱菌（ATCC 33923)相同之性質，以及具 有較髙之熱安定性。 啻驗2 2 麥芽糖-海蒗糖縳化酶之部分胺基醃序列 將藉實驗2方法所得之由脂肪桿菌R 4 8種衍出之一 部分純化酵素製劑*藉實驗1 0方法所得之悪臭假單胞菌 H2 6 2 ,或藉實驗1 6方法所得之水性棲熱菌（ ATCC 33923)對蒸餾水進行滲析，約80微克 之所得蛋白質乃用以作爲樣品以供分析含酵素N端之部分 胺基酸序列。再對N端進行^PROTEIN SEQUENCER MODEL 4 7 3 A'(由美國 Foster 城之 Applied Biosystems 公司所售之蛋白質序列器）分析。含每一酵素N端之部分 胺基酸序列乃示於表13中。 I I i I 1 I I n I I n n I I ^ (諳先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS ) A4規格（2丨0X297公釐） -76 — . 經濟部中央標準扃於工消费合作衽印裝
請 先 閱 讀 背 面 之 注 頁 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4规格U10XW公釐）- 71 -
I 裝 訂
A7 B7 414807 五、發明説明（75) 如同表1 3之結果所證實，其顯示由脂肪桿菌R 4 8 種，惡臭假單胞菌H2 6 2及水性棲熱菌（ATCC 3 3 9 2 3 )中所衍出之酵素乃具高度一致之部分胺基酸 序列，吾人發現，由脂肪桿菌屬微生物中所衍出之第1 0 個 胺 基 酸 % T r Ρ Μ 至 第 1 6 個 胺 基 酸 P h e 櫸 範 圍 內 之 部 分 胺 基 酸 序 列 與 由 假 單 胞 菌 屬 MIL· 微 生 物 中 所 衍 出 之 第 3 個 胺 基 酸 % T r Ρ Μ 至 第 9 個 胺 基 酸 % P h e 衅 範 圍 內 之 序 列 間 乃 具 有 較 高 之 — 致 性 0 部 分 胺 基 酸 序 列 可 以 T r Ρ — X 1 — A r g — X 2 — A a — X 3 — P h e 表 示 ( 其 中 符 號 X 1 ft 意 指 % Ρ h e 或 P r 0 Μ * 符 號 X 2 ft 意 指 % T h r jf 或 Ρ X 0 釋 « 1 且 符 號 X 3 Μ 意 指 % V a % 0 或 A il a Jf ) 〇 吾 人 發 現 ， 在 由 脂 肪桿 菌 屬微生物中所衍出之第1 4個胺基酸至第1 7 個胺基酸* Ty 範圍內之部分胺基酸序列與由棲熱菌 屬微生物中所衍出之第9個胺基酸a#至第1 2個 胺基酸^Ty τ*範圍內之序列間乃具有較高之一致性。 此部分胺基酸序列可以Aj?a— Vai_X4 — Tyr表 示（其中符號、X，意指)。 窗驗2 3 海藻糖之物化件晳 本實驗係對藉寅驗8方法所製得之高純度海藻糖樣品 進行物化性質之硏究。結果，熔點經測定爲9 7 °C，旋先 率爲〔e〕D20 +199 °C(C=5)，熔化熱爲 本纸張尺度適用中國國家標华（CNS > A4規格（2丨OX297公釐） 78 {請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) —裝. 訂 線 經濟部中央捃^工消先合作社印製 經濟部中央標準局負工消費合作社印策 A7 414803---ϋ 五、發明説明（76 ) 57. 8千焦耳/莫耳，且無水海藻糖於水中之溶解度爲 7 7. 0克。道些資料充分地符合日本東京Vak()純化 學有限工廠所售之商用水性晶狀海藻糖者（其業已一起進 行上述實驗）° 窗驗2 4 於活艚內之利用試驗 根撺 A t s u j i 等人於 J 〇 u r JJ a 丨 〇 f c 丨 i n i c a 1 N u t r i t- 1 on » V o i? . 41»No. 2»pp. 200-208 (1 9 7 2 )中所述之方法，將實驗8中純度爲9 9. 8 %，d. s. b.，之30克髙純度海藻糖樣品製成20 W/V%水性溶液，而後經口投服至3個年齡爲2 6 —， 2 7 -及3 0歲之年輕男性志願者髗內，繼而在預定之間 隔時間採血，再測量血糖及胰島素値，對照組方面則使用 葡萄糖。結果發現海藻糖之功效類似於葡萄糖，且投服後 之最大血糖及胰島索値乃於投服後之約0. 5—1小時觀 察到，此顯示本海藻糖可輕易被活髏所消化，吸收及代謝 且可用以作爲能源。因此，本海藻糖及含彼之糖類組成物 乃適於作爲補充能量之糖類。 窗驗2 5 急_性毒性試驗 藉使用鼷鼠，將純度爲99. 8 % > d . s. b.， 之高純度海藻糖樣品經口投服至颼鼠髏內以供其急性毒性 本紙張尺度適用中國國家搮準（CNS > Α4规格（210X297公釐） ----------^------ΐτ------0 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -79 - 經濟部中央標準局員工消費合作杜印褽 A7 414802_ 五、發明説明（77 ) 試驗。結果顯示本海藻糖爲較低毒性之物質，甚至當以最 高之可投服劑董投服予飇鼠時亦無颳鼠死亡。雖然不是那 麽準確，然LD5〇經測定爲5 0克/公斤或更高。 以本麥芽糖一海藻糖轉化海所製得之本海藻糖及含彼 之糖類組成物，以及其製法乃示於實例A中，含有海藻糖 或含彼之糖類組成物之本組成物則述於實例B中： 賨例A — 1 根據實驗1之方法，將脂肪样菌R 4 8種（FERM B P — 4 3 1 5 )微生物之接種培養物於需氧及攪動狀 況下，於與實驗1所用者相同之營養培養基新鮮製劑（惟 將葡萄糖濃度調整至4. 0W/V%)中藉醱酵器培養約 6 0小時。所得培養物中之本麥芽糖-海藻糖轉化酶活性 爲0. 75單位/毫升。將一部分之培養物離心以分離成 細胞及培養上層液，繼而分析其酵素活性。結果於細胞中 觀察到約6 5%酵素活性且於培養上厝液中觀察到約3 5 %酵素活性，將約3 5升含細胞之培養物以*MINI — R A B 0 # (日本東京之Dainippon製藥有限公司所售 之超高壓細胞破裂儀器）處理以使細胞破裂β再將所得細 胞懸浮液離心以得上屠液，而後將之以U F -膜進行膜濾 ，繼而復收1. 2升含15單位/毫升本麥芽糖一海藻糖 轉化酶之澳縮物。 將2單位/克澉粉，d. s. b.，之、SP丨TASEHS 聲(由日本京都Negase生化有限公司所售之α —澱粉酶 本紙張尺度適用中國困家橾率（CNS ) A4规格（210X297公釐） --------i------ΪΤ------0 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) -80 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 41480 V A7 ________B7__五、發明説明（78 ) 樣品）加至10W/V%馬鈴薯激粉懸浮液（pH5. 5 )中*再將所得混合物凝膠化，並於搅拌及加熱狀況下液 化，繼而立即令混合物保持於1 2 0°C下2 0分鏟，再將 所得物調整至5 0°C及pH5. 0，將所得混合物與2 0 單位/克激粉，d. s. b.，之日本京都Negase生化 有限公司所售之-澱粉酶樣品，及5 0 0單位/克澱粉 ，d . s . b _ ，之日本岡山Hayashibara生化實驗室 所售之異澱粉酶樣品混合，繼而令所得混合物進行酵素反 應2 4小時以得含約9 2W/V%麥芽糖之糖類溶液。再 將反應混合物於1 0 0°C下加熱2 0分鏟，加熱至1 0°C 調整至PH7· 0,與1單位/克乾質之上述所製麥芽糖 -海藻糖轉化酶混合，再進行酵素反應9 6小時。 將反應混合物於9 5 °C下保持1 0分鎳，再冷卻，而 後使用活性炭以一般方式脫色及過濾。濾液則藉將之以Η -及OH —形式之離子交換劑脫鹽而純化*再予澳縮以得 濃度約70W/V%且產率約95%，d. s. b.，之 漿液。 此含約69%海藻糖，d. s. b.，且還原力低至 D E 1 8 . 2之產品乃具有溫和之甜度及逋當之黏度及 濕氣保持力，故其適用以作爲各種不同組成物諸如食品， 化妝品及菜劑中之甜化劑，味道改良劑，安定劑，稀釋劑 ，賦形劑及塡料。 者例A — 2 -裝 I 1 ^ ^ (請先閏讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X297公釐） 一 81 _ 經濟部中央揉準局員工消費合作社印製 41480V at ____B7 五、發明説明（烈） 將反應混合物（其中，麥芽糖-海藻糖轉化作用之酵 素反應已暫停）藉實例A—1之方法製備，與1〇單位/ 克'GLUCOZYME，（由日本京都Negase生化有 限公司所售之葡萄糖澱粉酶）混合，再於PH5· 0及 5 0°C下進行酵索反應2 4小時。而後將所得反應混合物 加熱以使餘留之酵索鈍化，再脫色，脫鹽及純化以得作爲 送料溶液之糖類溶液，令糖類溶液使用、ΧΤ_1 0 1 6 (Na*形式，聚合程度爲4%)〃 （由日本東京之東京 有機化學有限工廠所售）進行離子交換柱色層分離。將樹 脂裝塡至4套管式不銹鋼柱（內徑爲5. 4公分）中，進 行一系列階式蒸發以得2 0米之總膠床深度。 一邊保持內柱溫度於6 0°C，一邊將糖類溶液以5V /V%之量送至柱中，藉將6 0 °C熱水以0. 15之空間 速度送至柱中予以分級以移去葡萄糖，繼而復收髙海藻糖 量之諸部分，而後將諸部分集合，純化，澳縮，於眞空中 乾燥並磨成粉狀以得產率約55%，d. s. b.，之高 海藻糖董粉末。 此含約97%海藻糖，d. s. b.，且具有令人滿 意之低還原力以及溫和及髙品質甜度之產品可任意用以作 爲各種不同組成物諸如食品，化妝品及槊劑中之甜化劑， 味道改良劑，品質改良劑，安定劑，稀釋劑，陚形劑及塡 料。 賨例A — 3 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） II -裝 i I I 訂— I I I 線 (請先閲讀背面之注意Ϋ項再填寫本頁) -82 - 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 414807 五、發明説明（8〇 ) 將藉實例A — 2方法所得之高海藻糖量部分使用活性 炭以一般方式脫色，使用離子交換劑脫鏖及純化，再將滅 液瀵縮成約7 0W/V%溶液，而後S於結晶器中，與約 2 %之作爲晶種之水性晶狀海藻糖混合，繼而逐漸冷卻以 得具約4 5 %結晶度之糖育。將糖賣由裝備於乾燥塔頂部 之喷嘴中以1 5 0公斤/平方公分之高壓噴霧。噴霧步驟 中，同時使用由乾燥塔頂部所送入之8 5 °C熱空氣將糖裔 通氣，再將所得晶狀粉末於乾燥塔底層所供應之金觸嫌絲 網傳送器上收集，而後逐渐由乾燥塔中移出，同時令4 5 τ之蒸汽朝上通過金屬鐡絲網中*將所得晶狀粉末注入陳 化之塔中，再予陳化1 0小時以令結晶及乾燥作用完全， 繼而復收產率約90%，d. s. b.，之所得水性晶狀 海藻糖粉末。 此產品乃實質無收濕性且易於處理，故使之可任意用 於各種不同之組成物諸如食品，化妝品及薬劑中以作爲甜 化劑，味道改良劑，品質改良劑及安定劑。 窗例A _ 4 將藉實例A — 2方法所製得之高海藻糖量部分依實例 A — 3之方法純化，再將所得物置於蒸發器中，而後於眞 空中沸煮以得濕氣置約3. 0%之糖漿。將所得糖漿置於 結晶器中，與佔糖漿1%之無水晶狀海藻糖，d. s . b .，混合，再於12 0°C下，於攪拌狀況下結晶，繼而將 所得混合物置於鋁製平面容器中，再於1 0 0°C下陳化6 本紙張尺度適用中國國家橾率（CNS ) A4规格（210X29?公釐） 1·! I I I i I I i n ^ (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 83 經濟部中央標準局貝工消费合作社印裝 A7 B7 五、發明説明（81 ) 小時以形成塊狀物。 將所得塊狀物藉切割器切成粉狀，再藉流髗床乾燥法 乾燥以得濕氣量約3%，且產率約85%(佔高海藻 糖置部分），d. s. b. *之無水晶狀海藻糖粉末。 此產品可任意用以作爲食品，化妝品，藥劑，及其物 料及中間體中之乾燥劑，亦可用以作爲各種不同組成物諸 如食品，化妝品及篥劑中之白色粉狀甜化劑。 實例A — 5 根據實驗1之方法，將脂肪桿菌R4 8種（ FERM BP—4315)之接種培養物接種至營養培 養基上並於其內培養，再將所得培養物離心以得1 0 0克 之具有約8 0 0單位本酵素活性之濕塊，雄而與1 0 0毫 升1 OmM磷酸鹽緩衝液（其中，已有由日本東京Wako 純化學有限工廠所售之黏度爲3 0 0_4 0 0 cP之 2. 5%藻酸鈉事先溶於10mM磷酸鹽緩衝液中）捏合 。再將所得之含細胞之漿液連縯滴至已以距離溶液表面以 上約20公分處之磁性攪拌器攪拌之0.1M氣化鈣溶液 中以形成直徑約2毫米之球形膠。繼而令此膠於溶液中， 於室溫下靜置約2小時，再使用瓷漏斗過濾，而後復收以 藻酸鹽固定之細胞，將所得之固定化細胞裝塡於3 〇毫米 直徑且2 0 0毫米長度之套管玻璃柱中，再將此柱加熱及 保持於2 0 °C下。繼而將4 0%麥芽糖溶液（PH6. 8 )以0. 2之空間速度送至柱中以使之往下流動，以得含 本紙張尺度逋用中國國家樣準（CNS ) A4规格（210><297公釐> --------Ί------1T------0 (請先W讀背面之注意Ϋ項再填寫本頁} 84 414807 μ B7_ 五、發明説明（82 ) 約70%海藻糖，d· s. b.，之糖類溶液。將所得糖 類溶液純化及濃縮，即得澳度約7 0 %且產率約9 5%， d . s . b .，之糖栽。 此產品乃具有較低之還原力，溫和之甜度以及適當之 濕氣保持力，因此與實例A_ 1產品類同，可任意用於各 種不同之組成物中。 實例A — 6 將3 3 %玉米澱粉懸浮液與碳酸鈣混合以得〇. 1% 之最終澳度，再將混合物調整至PH6. 5,而後與 0. 2 單位 / 克澱粉，d. s. b.，之由 Novo Indus- 經濟部中央標準局員工消f合作社印製 (請先閔讀背面之注^^項再填寫本頁) tri A/S Copenhagen Denmark所售之α —澉粉酶樣品混 合，而後於9 5 °C下進行酵素反應1 5分鐘。繼而將反應 混合物於1 2 0°C下歷熱3 0分鐘，冷卻至5 5°C，與 5 0 0單位/克滬粉，己.3.13.，之由日本岡山11&-yashibara生化實驗室所售之異澱粉酶，及3 0單位/克 澱粉，d. s. b.，之由日本京都Negase生化有限公 司所售之jS _澱粉酶樣品混合，再令之進行酵素反應4 8 小時，繼而復收含約84%，d. s· b.，麥芽糖置之 糖類溶液。令糖類溶液於1 〇 〇°C下保持1 0分鐘，冷卻 至15°C，與1. 5單位/克澱粉，d· s. b.，之藉 實例A — 1方法所得之本麥芽糖一海藻糖轉化酶混合，再 進行酵素反應7 2小時，而後將所得反應混合物於1 0 0 °C下加熱1 5分鐘以使餘留之酵素鈍化，再使用活化炭以 本紙張尺度適用中國國家橾準< CNS ) A4规格（210X297公釐） -85 - 414807 A7 B7_ _ 五、發明説明（83 ) 一般方式脫色，以離子交換劑脫鹽及純化，繼而將所得物 濃縮，即得濃度約70%，產率約95%，d. s. b. ，之糖漿。 此產品含有約64%海藻糖，d. s. b.，且具有 較低還原力，溫和甜度以及適當之濕氣保持力，因此與實 例A_ 1之產物類同，可任意用於各種不同之組成物中。 官例A - 7 將藉實例A — 5方法所得之糖漿澳縮成約8 2 %之糖 漿，而後置於結晶器中，與約1 %晶種混合，轉移至平面 容器中，再令之於2 0°C下靜置4天以完成結晶，繼而將 所得結晶藉切剌器切成粉狀，並予乾燥，以得產率約9 5 % » d . s . b .，之糖育型水性晶狀海藻糖粉末。 此產品實質上不具收濕性且易於處理，因此其與實例 A — 1產品類同，可任意用於各種不同組成物中。 啻例A _ 9 將惡臭假單胞菌（FERM BP — 4 5 7 9 )之接 種培養物接種於營養培養基內，再根據實驗9之方法，於 攪拌及誓氧狀況下藉醱酵器醱酵約2 0小時。而後將約 18升所得培養物離心以得約0. 4公斤濕塊，維而令之 懸浮於4升1 OmM磷酸鹽緩衝液中，以'MODEL US 3 0 0"(由日本新潟之Nippon Seiki有限公司所 售之超音波崩解劑）處理以使細胞破裂，再將所得混合物 本紙張尺度逋用中國國家橾準（CNS ) A4规格（210X：W公釐） ---------i------IT------^ *» (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -86 — 經濟部t夾梯準局貝工消費合作社印裝 414807_B7_ 五、發明説明（84 ) 離心以得上層液，繼而以U F -膜澳縮，而後復收約 400亳升含3. 8單位/毫升麥芽糖一海藻糖轉化酶之 澳酵素溶液。將10%馬鈴薯懸浮液（PH5. 5)與2 單位/克》粉，d. s. b.，之由日本京都Negase生 化有限公司所售之α —澱粉海樣品混合，藉於搅拌狀況下 加熱予以凝膠化及液化，繼而於1 2 0°C下壓熱2 0分鐘 ，冷卻至5 0°C，再調整至pH5. 5。而後將5 0 0單 位/克激粉，d. s. b.，之由日本岡山Hayashibara 生化责驗室所售之芽酶樣品，及2 0單位/克澱粉， d. s. b.，之由日本京都Negase生化有限公司所售 之/9 _澱粉酶樣品加至所得混合物中，再進行酵素反應2 4小時，繼而復收含約9 2%麥芽糖之糖類溶液，再將糖 類溶液於1 0 0°C下加熱2 0分鏟，調整至4 0°C及pH 7. 0與1. 5單位/克之上述所製之麥芽糖一海藻糖轉 化酶混合，再接受酵素反應7 2小時，而後將反應混合物 於9 5°C下加熱1 0分鐘，冷卻，再使用活性炭以一般方 式脫色及過濾，繼而將所得物以Η -及OH —形式之離子 交換劑脫鹽及純化，再將所得溶液澳縮以得濃度約7 0 W /乂％，產率約9 7%，（！. s. b .，之糖漿。此產品 乃含有約65%海藻糖，d. s. b.，且具有低至DE 16. 2之較低還原力，以及具有溫和甜度及充分黏度及 濕氣保持力，因此其可任意用以作爲各種不同組成物諸如 食品，化妝品及薬劑中之甜化劑，味道改良劑，安定劑， 塡料，稀釋劑及賦形劑。 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4規格（210X297公釐） I. i 11 [I ' ^ I I (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) -87 - 414807 at _:_B7 五、發明説明（85 ) 窗例A — 1 0 將藉實例A — 9方法所得之麥芽糖一海藻糖轉化梅之 反應後混合物於9 5 °C下加熱1 0分鏟以使餘留之酵素鈍 化，再調整至PH5. 0及5 5°C，與10單位/克激粉 ，d. s . b .，之，GLUCOZYME，（由日本京 都Negase生化有限公司所售之葡萄糖澱粉酶）混合，再 進行酵素反應2 4小時。而後將反應混合物以一般方式加 熱以使餘留之酵索鈍化，繼而脫色，脫鹽，純化，漢縮成 5 5 %糖類溶液。依類同於實例A_ 2之方法，令所得糖 類溶液使用'DOWEX 9 9 (Ca+*形式，聚合程度 爲6%) # (由美國密西根Midland之Dow化學公司所 經濟部中央標準局負工消费合作社印製 (讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 售之鹼土金屬强酸陽離子交換劑）進行柱色層分離，再復 收高海藻糖量之部分。繼而將賭部分集合，純化及連縯結 晶同時濃縮，再將所得糖育藉籃型離心機分離，而後將所 得結晶以小量水噴籌以得產率約25%，d. s. b.， 之高純度水性晶狀海藻糖。此產品乃具有與寊驗2 3產品 相同之物化性質，且類同於實例A- 8產品，其可任意用 於各種不同之組成物諸如食品，化妝品，藥劑，以及工業 試劑及化學物料中。 窗例A _ 1 1 類同於實驗9之方法將惡臭假單胞菌H2 6 2 ( FERM BP—4579)之接種培養物於營養培養基 中培養，再將所得細胞藉離心法復收以得1 0 0克具約 本紙張尺度適用中國國家棣準< CNS ) A4規格（210X297公釐） -88 - 414807 A7 B7 五、發明説明（86 ) 4 0 0單位麥芽糖-海藻糖轉化酶活性之濕細胞，而後與 10 0毫升10mM磷酸鼸緩衝液（其中已有2. 5%具 3 0 0 — 4 0 0 c P黏度之藻酸鈉溶入）捏合。再將含細 胞之漿液連嫌滴至已以距溶液表面以上約2 0公分高度之 磁性攪拌器攪拌之0.1M氣化鈣溶液中以形成直徑約2 毫米之球形膠。令此膠於氯化鈣溶液中，於室溫下保持2 小時，使用瓷漏斗過濾以得以藻酸鈉固定之細胞。將所得 之固定化細胞裝塡於3 0¾米直徑及2 0 0毫米長度之套 管玻璃柱中，再保持於3 5 °C下。繼而將下游之4 0%麥 芽糖溶液（PH6. 8>以0. 1之空間速度送入以得 6 7%海藻糖溶液，根據實例A_9之方法，將海藻糖溶 液純化，濃縮，結晶及噴费乾燥以得產率約9 0%，d . s. b.，之糖育型水性晶狀海藻糖粉末。此產品乃具有 較低之還原力，溫和之甜度及充分之濕氣保持力，因此類 同於實例A_ 9產品一樣，可任意用於各種不同之組成物 中0 啻例A — 1 2 將水性棲熱菌（ATCC 3 3 9 2 3 )之接種培養 物接種於營養培養基內，再根據實驗1 5之方法，於搅動 —需氧狀況下培養約2 0小時，此培養物乃具有約 0. 32單位/毫升麥芽糖一海藻糖轉化酶之活性，令由 約18升培養物中所復收之0.18公斤濕塊懸浮於10 mM磷酸鹽緩衝液（PH7. 0)中，再將約1. 5升細 本紙張又度適用中困國家揉率（匸阳）点4规格（210兀297公釐} ---------ά------IT------^ -·- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央梯準局負工消t合作社印製 -89 - 經濟部中央標準局貝工消費合作杜印製 414807 at _B7 五、發明説明（87 ) 胞懸浮液以超音波崩解劑處理以使細胞破裂，而後將所得 細胞碎物離心，將上層液復收，再以U F —膜濃縮以得 5 0 0 0毫升具約1 〇單位/毫升麥芽糖一海藻糖轉化酶 活性之濃縮物。將2單位/克澱粉之'SP I TASE HS* (由曰本京都Negase生化有限公司所售之α —澱 粉酶樣品）加至1 5%玉米澱粉懸浮液（PH5 . 5 )中 ，再於搅拌及加熱狀況下凝膠化及液化。其後將混合物於 1 2 0°C下立即壓熱2 0分鐘，冷卻至5 5 °C，再調整至 p Η 5 . 0，繼而將3 0 0單位/克澱粉之由日本岡山
Ha y as hibara生化寅驗室所售之異澱粉酶樣品，及2 0單 位/克澱粉之由日本京都Negase生化廠所售之冷一澱粉 酶樣品加至所褥混合物中，再進行酵素反應2 4小時以得 約9 2%之麥芽糖溶液，將所得溶液於1 〇 0°C下加熱 2 0分鐘，冷卻至5 0°C，調整至pH7. 0，與以上所 製之1. 5單位/克乾重之麥芽糖_海藻糖轉化海混合， 再進行酵素反應7 2小時。其後，將所得培養物於9 5 eC 下加熱1 0分鐘，冷卻，再使用活性炭以一般方式脫色及 過濾，繼而使用Η -及OH-形式之離子交換劑將所得溶 液脫鹽及純化。再將所得溶液濃縮以得產率約9 5 %， d. s. b.，之70%糖漿。此產品乃含有約64%海 藻糖，d. s. b.，且具有DE 18. 0之低還原力 ，以及具有溫和甜度，充分黏度及令人滿意之濕氣保持力 ，因此，其可任意用以作爲各種不同組成物諸如食品，化 妝品及薬劑中之甜化劑，味道改良劑，安定劑，塡料，稀 本紙張尺度逋用中國國家榡準（CNS M4規格（210X297公釐） I * n n , n ^ (請先閣讀背面之注意事項再填寫本頁) -90 - 經濟部中央梂準扃貝工消费合作社印裝 414807 五、發明説明（88 ) 釋劑及賦形劑。 窨例A _ 1 3 將藉寅例A— 1 2方法所得之糖漿濃縮成約8 0%糖 漿，而後置於結晶器中，再依類同於實例A — 8之方法， 予以結晶及分離以得產率約20%，d. s . b .，之髙 純度水性晶狀海藻糖。此產品乃具有類同於實驗2 3產品 之物化性質，且可與贲例A — 8產品類同地用以作爲各種 不同之組成物諸如食品，化妝品及藥劑中之工業試劑，工 業物料及化學物料。 啻例A — 1 4 將水性棲熱菌（ATCC 3 3 9 2 3 )之接種培養 物接種於營養培養基中，再依類同於實驗1 5之方法培養 ，繼而將所得培養物離心以得5 0克具約1，5 0 0單位 麥芽糖一海藻糖轉化酶活性之濕塊。令細胞懸浮於1 0 0 奄升具3 0 0 — 4 0 0 cP黏度之2. 5%藻酸鈉（由日 本東京Wako純化學有限工廠所售之試劑）中。再將所得 漿液連縯滴至正藉距溶液表面以上約2 0公分高度之磁性 攪拌器撹拌之0.1M氯化鈣溶液中以形成具約2毫米直 徑之球形膠，令此膠於溶液中，於室溫下靜置約2小時， 而後使用瓷漏斗過濾以得以藻酸鹽固定之細胞，將此固定 化細胞裝塡於3 0毫米直徑且2 0 0毫米長度之套管玻璃 柱中，再加熱至6 0°C，繼而將往下流之4 0 %麥芽糖溶 本紙張尺度適用中國國家揉隼（CNS) A4規格（210X297公釐） I "裝 If—— i n n ^ (請先閲讀背面之注^項再填寫本頁) -91 - 414807 A7 B7 經濟部中央樣準局負工消費合作社印製 五、 發明説明 (89 ) 液 ( P Η 6 5 ) 以0 2 之 空 間 速度送至柱中以得約 6 6 % 之海 藻糖溶 液， 再 以 —- 般 方 式 純化，澳縮及噴霧 乾 燥 9 以 得產 率 約9 0 % d S b .，之粉狀海藻糖 〇 此 粉 末 乃具 有較低 之還 原 力 及 溫和 之 甜度，且類同於實 例 A — 1 2之 產 品一 樣， 其 可 任意 用 於 各種不同之組成物諸 如 食 品 ，化 妝 品及 薬劑 中 0 例 B -1 甜 化 將 0 . 0 1重 量份 之 % 2 G S W E E T # (由日本 東 京 T 〇 y 〇 稱 製糖 有限 公 司 所 售 之 a _葡糖苷基蛇菊苷 產 品 ) 及 0 . 0 1重 量份 之 ♦ A S P A R T A Μ E "(由 曰 本 東 京 Aji no m 〇 t 〇 有限公司所售之L —門冬胺醣一 L- 苯 基 丙 胺酸 甲 酯產 品） 均 勻 加 至 一 重 *份藉實例Α_8 方 法 所 得 之水性 晶狀 海藻 糖 粉末 中 再 將所得混合物送至 粒 化 器 中 以得 粒 狀甜 化劑 〇 此 產品 乃 具有令人 滿 意 之 甜 度 及 高於蔗糖約2 . 5 倍 之 甜 化 力， 以 及具 有低 至 約 蔗 糖 2 / 5倍之卡洛里。 既 然此 產 品具 有令 人 滿意 之 安定 力且不使混合之其 它 甜 化 劑 分解 ， 故其適用 以 作 爲 低卡 食 品中之低卡甜化劑 以 供 肥胖 人士 及 限制 低卡飲 食 之 節 食 者 所用。 此 產品 當 有誘 生齲 齒 之 微 生 物 作 用於其上時，實質 上 不 形 成 酸及 不 溶性 葡聚 糖 故使 之 有 用以供使食品甜化 而 避 免 龋 齒。 本紙張尺度適用中國國家揉芈（CNS) A4規格（2!OX297公釐） -92 - 經濟部中央棣準局員工消費合作社印裝 414807 五、發明説明（9〇 ) 實例B — 2 硬糖 將1 〇 0重量份5 5W/V%蔗糖溶液藉與3 0重量 份藉實例众- 1方法所得之海藻糖漿加熱而混合，再將所 得溶液於眞空中满縮直至濕氣置降至低於2 %爲止。而後 將濃縮物與一重量份檸樺酸及足量檸槺香料及著色劑混合 ，再將所得混合物以一般方式形成期望之產品。 此產品爲具令人滿意味道及咀嚼性質而不會有導致鹿 糖結晶之虞之髙品質硬糖。 實例B - λ 口香糖 將3重量份膠基藉加熱予以熔化直至軟化爲止，再將 所得物與3重量份晶狀麥芽糖醇及4重量份藉實例Α — 3 方法所得之水性晶狀海藻糖粉末混合，而後更進一步與足 董之香料及著色劑混合，繼而將所得混合物藉輥以一般方 式捏合，再予成形及包裝以得期望之產品。 此產品爲具令人滿意組織及味道之口香糖，且逋於作 爲較低或實質上無齲齒誘生性之口香糖。 窗例Β — 4 粉粒汁 將3 3重量份藉噴薄乾燥法所製之粉狀柳橙汁與5 〇 重量份藉實例Α - 7方法所製之糖育型高海藻糖量粉末， 本紙張尺度適用中國圃家#丰（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） ----------A------’玎------0 - (請先聞讀背面之注$項再填寫本頁) -93 - 41480 * A7 _B7__ 五、發明説明（91 ) 1 0重量份蔗糖，0. 6 5重董份無水檸槺酸，0· 1重 置份蘋果酸，0.1重置份L一抗壞血酸，0.1重置份 檸槺酸鈉，0 . 5重置份芽索，及足量之粉狀香料混合至 均勻》再將所得混合物磨成粉狀，而後使用流體床粒化器 粒化3 0分鐘以得顆粒，同時將作爲結合劑之藉實例A — 6方法所得之海藻糖漿噴霧於其上，並使用4 0eC空氣以 1 5 0立方公尺之流速通氣，所得之顆粒乃予稱重及包裝 以得期望之產品。 含有30%柳橙汁，d. s. b.，之產品乃可以較 長之時間保持其品質而不會有令人不滿之口味及刺鼻味。 音例B — 5 乳酸菌飲料 經濟部中央標隼局員工消费合作杜印裝 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 令1 7 5重量份之脫脂奶粉，1 3 0重量份藉寊例A - 9方法所得之海藻糖漿，5 0重量份日本專利公開公報 第2 8 17 9 5/9 2號所揭示之高乳蔴糖粉溶於 1，1 5 0重量份之水中，再將溶液藉於6 5 °C下加熱 3 0分鐘予以殺菌，冷卻至4 0°C，與3 0重量份作爲起 始劑之乳酸菌以一般方式混合，而後於3 7 °C下保溫8小 時以得具令人滿意口味及香味之期望產品。既然本產品含 有寡糖，故其可保留乳酸菌並促進生長。 竇例B — 6 救凍奶_油 本紙張尺度適用中國國家梯準（CNS > A4规格（210X297公釐） 94 經濟部中央樣準局貞工消費合作社印製 A7 _B7_ 五、發明説明（卯） 將1 0 0重量玉米澱粉，1 0 0重置份藉實例A— 6 方法所得之海藻糖浆，8 0重量份麥芽糖，2 0重量份蔗 糖，及1重量份鹽充分混合。再將混合物與2 8 0重量份 之蛋混合，而後與1 〇 〇重量份之沸牛奶漸次混合，繼而 將所得混合物於加熱狀況下連縯攪拌，當混合物中之玉米 澱扮完全凝膠化而使整個內容物呈半透明時，令加熱停止 ，而後將所得物冷卻，再將足量之香草香料加入，繼而將 所得混合物稱重，注入及包裝，以得期望產品。 此產品乃具有平滑之表面及光澤，以及溫和之口味及 甜度。 奮例B _ 7 lUiro-no-moto# (甜米製膝之預混物） uiro-no-moto係藉將9 0重量份米粉與2 0重量份 玉米澱粉，4 0重置份蔴糖，8 0重ft份藉實例A— 1 1 方法所得之糖育型水性晶狀海藻糖，及4重i份芽素均勻 混合而製得。再將產物與水及足置raatcha (粉狀茶）混 合，繼而將所得混合物置於容器中，並蒸6 0分鐘以得 uiro ，此產品乃具有令人滿意之光澤，咀皭性質，香昧 及口味，且因其內所含之澱粉之退減作用被充分抑制，故 具有較長之逋用期。 實例B _ 8 粉狀肽 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4規格（210X297公釐） n n ϋ n J— . l I 丁 I I I —— U3 、\έ 餘 -t (請先閎讀背面之注意事項再填寫本頁) -95 - 經濟部中央樣準局負工消費合作社印製 414807 a? _B7五、發明説明（93 ) 將1重:t份，HINUTE S"(由日本東京Fuji油有限 公司所售之含4 0 %食用性大豆之肽溶液）與2重置份之 藉實例A — 1 0方法所製之水性晶狀海藻糖混合，再將所 得混合物S於塑膠容器中，於ft空中，於5 0°C下乾燥， 而後磨成粉狀以得粉狀肽。此具有令人滿意之口味及香味 之產品可任意用以作爲物料以供糕胼諸如預混物*冰凍果 子露及冰淇淋，以及嬰兒食品及經口或插管送料彤式之醫 療營養品所用。 實例B — 9 粉狀昧增 將3重量份藉實例A- 4方法所製之粉狀水性晶狀海 藻糖加至1重童份akamiso (味增之一種）中，再將混合 物倒至於表面上具半球形孔之金屬板中，而後令之於室溫 下靜置過夜以得各約4克重之固態味噌，繼而置入粉磨機 中粉磨，以得期望產品。 此產品可任意用以作爲即食麵條及湯之調味料，以及 作成味噌糕餅。 窗例B — 1 0 粉狀蛋昔 將由新鮮蛋所得之蛋黃於6 0 - 6 4 eC下藉板式加熱 器予以殺菌，再將1重量份得液雔與4重置份藉實例A — 4方法所得之粉狀無水晶狀海藻糖混合，而後將所得混合 1 k I —訂 I I I I t 線 (請先Μ讀背面之注11^項再填寫本頁} 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Μ坑格（2丨ΟΧ297公釐） -96 - 414807 A7 B7__ 五、發明説明（94 ) 物轉移至容器中，令之於室溫下靜置過夜以形成塊狀物， 同時令無水晶狀海藻糖轉化成水性晶狀海藻糖。繼而將所 得塊狀物藉切割器切成粉狀，以得粉狀蛋黃。 此產品可任意用以作爲供糕餅用之物料以供預混物， 冰凍果子露，冰洪淋，乳化劑所用，以及供嬰兒食品及以 經口或插管送入彤式之》療營養品所用，此產品亦可用以 作爲皮虜淨化劑及頭髮復原劑。 窗例B - 1 1 A η (豆糊） 將1 0重董份作爲物料之adzuki豆與水以一般方式 混合並沸煮，繼而移去大豆之收斂及粗糙部分，以及水溶 性雜質以得約2 1重量份''adzuki-tsubu-nama-an'。再 將1 4重量份蔴糖，5重量份藉實例A - 1 2方法所得之 海藻糖漿及5重量份之水加至所得物中，而後將所得混合 物沸煮，與小量沙拉油混合，再小心揑合使大豆不糊掉， 由此可得約3 5重量份之所得產品。 此產品不因沸煮而褪色且具有令人滿意之口味及香味 故其有用以作爲豆餐麵包，含豆醬塡料之麵包，糰，塡充 豆醬之威化餅，冰凍果子露及冰淇淋之物料。 眚例B — 1 2 麵包 將1 0 0重量份小麥粉，2重量份酵母菌，5重童份 本紙張尺度適用中國國家梂準（CNS ) A4規格（210X297公釐> I.---------^------1T------.ii (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 -97 - 經濟部中央揉準局貝工消費合作社印衷 414807 A7 B7 ___ 五、發明説明（95 ) 糖，1重量份藉資例A-1 4方法所得之粉狀水性晶狀海 藻糖，0·1重置份無機酵母菌食品與水以一般方式揑合 ，於2 6 τ下醸酵2小時，陳化3 0分鏟，再烘烤。 此產品爲具有令人滿意之色彩及隆起，以及令人滿意 之彈性及溫和甜度之高品質麵包。 實例Β _ 1 3 火腿 將1 5重置份鹽及3重置份硝酸鉀加至1，0 0 0重 量份切片之火腿肉中，並碾磨至均勻，而後將火腿肉切片 堆稹，並令之於冰貯存室中靜®過夜。其後，將所得切片 先於冷貯存室中，於含5 0 0重置份水，1 0 0重董份鹽 ，3重量份硝酸鉀，4 0重董份藉實例Α — 3方法所得之 水性晶狀海藻糖粉末，及足置薄荷之鹽溶液中浸泡7天， 以冰水以一般方式清洗，使用細繩綁緊，再以煙熥，烹調 ，冷卻及包裝，即得期望產品。 此產品爲具令人滿意之色彩，口味及香味之高品質火 腿0 奮例Β — 1 4 甜化之煉$1. 令3重Μ份藉實例Α — 5方法所得之海藻糖漿*及1 重童份蔗糖溶於1 0 0重貴份作爲物料之新鮮牛奶中，再 將混合物藉以板式加熱器加熱予以殺菌，浪縮成7 0 %糖 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) Α4规格（210 X 297公釐） ----------A------ΐτ------^ • . (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -98 - 經濟部中失揉準局貝工消費合作社印製 414807 7 A7 五、發明説明（％ ) 漿，d. s. b.，繼而無菌裝罐以得期望產品。 既然此產品具有溫和之甜度及香味，故其可任意作爲 供嬰兒及兒童食品，水果，咖啡，可可及茶所用之調味劑 Ο 實例B — 1 5 化妝乳油 令2重量份聚氧化乙二酵單硬脂酸酯，5重置份單硬 脂酸甘油簾（半乳化），2重量份藉實例A — 7方法所得 之糖育型髙海藻糖量粉末，1重量份葡糖苷基芸香替 ，：I重量份礦脂，1 0重量份三一 2 —乙基己酸甘油酯， 及足量防腐劑以一般方式藉加熱法溶解，再將所得溶液與 2重置份L_乳酸，5重:！份1，3 — 丁二醇及6 6重量 份精製水混合，而後將所得混合物藉均化器乳化，繼而與 足置香料於攪拌狀況下混合以得化妝乳油。 具較高安定性之產品可任意用以作爲高品質防晒劑， 皮虜洗淨劑及皮虜白化劑。 實例B _ 1 6 粉狀人參精 將0. 5重置份人參精與1. 5重量份藉實例A—4 方法所製之無水晶狀海藻糖粉末混合，再將所得混合物轉 移至平面容器中，令之靜置2天以將無水晶狀海藻糖轉化 成水性晶狀海藻糖並形成塊狀物，繼而將塊狀物藉切割器 本紙張尺度適用中國8家棵準（CNS ) A4规格（210X297公釐） ----------ά------1Τ------0 〆 . (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 99 — 414807 A7 WJ_ 五、發明説明（97 ) 切成粉狀，再將所得物分類成粉狀人參精。 將此產品與足量粉狀維生索B 1及B 2共同於粒化器 中粒化，以得含維生素之粉狀人參精。 所得產物可任意用以作爲滋補劑，疲勞解除劑及活力 增强劑。此產品亦可用以作爲頭髮復原劑。 蓄例B _ 1 7 因鮪葜颧 將天然人類ar-干捶素製劑（由日本岡山Hayashib-ara生化資驗室所製及由日本柬京Cosmo Bio所售）以 一般方式送至固定化抗人類π —干擾素抗體之柱中以吸收 α —干擾素，再將作爲安定劑之含牛血清白蛋白之緩衝液 送至柱中，繼而移去過量之白蛋白，其後，使用含5%實 例A 2方法所製高海藻糖量粉末之生理食鹽水將α —千擾 素由柱中洗提出，而生理食鹽水之ρ Η爲多樣性，將所得 洗提液進行膜濾，再藉加入約2 0倍最之^ F I Ν Ε Τ 0 S Ε (由曰本岡山 Hayashibara Shoji 公司所售之無水晶狀麥芽糖粉末）將濾液脫水，繼而將 所得脫水產品磨成粉狀，而後藉壓片機將所得粉末製成片 劑以得每粒約2 0 0毫克重之片劑中含約1 5 0單位天然 人類-干擾素之片劑。 此產品可以1 _ 1 0粒片劑/成人/天之劑量以舌下 片劑之形式經口投服予病患，且可任意使用以治療病毒感 染，過敏，風濕症，糖尿病及惡性腫瘤。尤其，此產品可 本紙張尺度逋用中國國家樣隼（CNS〉A4规格（210X297公釐} ----------.餐------'1T------d. (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 -100 - 414807 A7 經濟部中央標芈局貝工消费合作社印製 B7五'#明説明（98 ) 適用以作爲供愛滋病及肝炎（受此些疾病所苦之病患數已 顯著增加）所用之醫療劑。併於產品中之海藻糖及麥芽糖 係允作供天然人類α -干擾素所用之安定劑，故即使於室 溫下，其活性亦能於較長時間充分維持。 眚例1 8 糖衣片劑 將作爲核心之1 5 0毫克重粗製片劑包上含4 0重置 份藉實例Α — 3方法所得粉狀水性晶狀海藻糖，2重置份 平均分子量爲2 0 0，0 0 0之芽素，3 0重1：份水， 2 5重童份滑石及3重量份氧化鈦之溶液直至總重量達約 2 3 0毫克爲止，再將所得物更進一步包上含6 5重量份 相同粉狀水性晶狀海藻糖新鮮製劑，1重董份芽索及3 4 重童份水之溶液，繼而塗上液態蠛以得具令人滿意光澤及 外觀之糖衣片劑。 此產品具有較高之衝擊耐受性且可較長時間保持其髙 品質。 實例Β — 1 9 牙眘 牙資係以一般方式藉將下列成分混合而製得： 磷酸一氳鈣 45.0% 芽素 2.95% 月桂基硫酸鈉 1.5% ----------d------IT------0 (#先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS ) A4規格（2丨0><297公釐） -101 - 此產品因具有足夠之甜度’故逋用以作爲嬰兒用牙育 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 窗例B — 2 0 供插管送入之固態製劑 含下列組份之組成物乃予製備：5 0 0重量份藉實例 A - 8方法所製之水性晶狀海藻糖，2 7 0重置份粉化蛋 黃，2 0 9重量份脫脂牛奶，4. 4重量份氣化鈉， 1. 8重量份氯化鉀，4重置份硫酸鎂，0_ 01重董份 硫胺索，0. 1重量份抗壊血酸鈉，〇. 6重量份乙酸維 生素E，及0 . 0 4重童份菸醢胺，將2 5克整份之組成 物注入防濕之層Μ小袋中，再熱封以得期望產品° 令一袋產品溶於約1 5 0 — 3 0 0毫升水中以得流體 食物，再藉插管經口或非經腸部地投服至鼻腔，胃或勝部 以補充活體之能量。 414807 μ B7 五、發明説明（99 ) 甘油 2 0 _ 〇 % 聚氧化乙烯山梨糖醇酐月桂酸_ 0· 5 % 防腐劑 0 * 0 5 % 藉實例A — 1 4方法所製之粉狀水性 晶狀海藻糖 12.0% 麥芽糖醉 5.0% 水 13.0% 本紙張尺度適用中國國家揉举（CNS > Α4規格（210Χ297公釐） n II ，裝 I I 1 I ^ I I n 線 4 (請先閎讀背面之注$項再填寫本頁) _ 102 _ 414807 A7 -_B7_ 五、發明説明π〇〇) 窗例Β — 2 1 超級營養品 令藉實例Α—10所製之高純度水性晶狀海藻糖溶於 水中以得約1 0 W/V%之水性海藻糖溶液，而後以一般 方式進行膜濾以移去致熱原，繼而無菌注入塑膠瓶中，再 密封以得期望產品。 此產品（爲靜置後實質不產生變化之令人滿意之安定 性超級營養品）適於供靜脈內及腹膜內投服。10W/V %之產品溶液與血液成等張，此意指其於活體內可補充比 葡荀糖高2倍濃度之能量。 窗例B — 2 2 耝級營養品 將藉實例A—13方法所製之髙純度水性晶狀海藻糖 ，及由下列組份所組成之胺基酸組成物藉於水中攪拌而溶 解以分別獲得5W/V%及3 0W/V%之濃度，再依資 例B_1 0之方法，將所得溶液純化以得不含致熱原之溶 液，繼而將之注入塑膠瓶中，並予密封以得期望產品。 ' 訂 I n H 線 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局貝工消费合作社印製 本紙張尺度適用申囷困家標準（CNS) A4規格（210X297公釐） -103 - 414807 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（/W) 胺基酸組成物之組份 組份 毫克/100毫升 L - 異白胺酸 180 L - 白胺酸 410 L - 賴胺酸一氫氯酸鹽 620 L - 蛋胺酸 240 L - 苯基丙胺酸 290 L - 蘇胺酸 180 L - 色胺酸 60 L — 纈胺酸 200 L - 精胺酸氫氯酸鹽 270 L - 組胺酸一氫氯酸鹽 130 甘胺酸 340 ----------.襄------ΐτ------.^ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) —j 〇 ίί 一 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS) A4说格（210X297公釐） 經濟部中央標準局貝工消費合作社印*. 414807 A7 .. _B7_ 五、發明説明（l〇2) 雖然此產品爲含海藻糖及胺基酸之多重超級營養品， 但其於靜置後並無實質變化，故具令人滿意之安定性且迪 於由靜脈內及腹膜內投服至活髖內，此產品可任意用以補 充能置以及胺基酸至活髄內。 竇例2 3 供治療外傷之敝眘 將2 0 0重量份藉實例A — 2方法所製之高海藻糖置 粉末，及3 0 0重置份麥芽糖與5 0重量份含3重量份狭 之甲醇溶液混合，再將所得溶液與2 0 0重量份1 0W/ V%水性芽素溶液混合以得具令人滿意之延展力及黏合力 之期望產品。 產品中所含之碘可展現殺菌效力，而產品中之海藻糖 則充作活存細胞之能量補充劑，因此此產品可縮短復原期 並使傷口表面獲得令人滿意之癒合。 如同以上所證實，本新穎之麥芽糖一海藻糖轉化酶可 以令人滿意之高產率將麥芽糖轉化成海藻糖。藉本酵素反 應所得之本海藻糖及含彼之糖類組成物乃具有較髙之安定 性及品質，以及偷悅之甜度，當經口投服時，彼等可作爲 能源而被活體所同化，吸收及利用，因此，彼等可任意用 以作爲各種不同組成物諸如食品，化妝品及薬劑中之甜化 劑，味道改良劑，品質改良劑，安定劑，賦形劑，稀釋劑 及塡料。 故本發明之確立係提供新穎之技術以由麥芽糖（其爲 本紙張尺度逍用中國國家橾率（CNS ) A4规格（210X297公釐） I--------^------.玎------痒 ·# (讀先stt背面之注意事項再填寫本頁) -105 - 414807 A7 B7 五、發明説明（103) 可由澱粉中製得之便宜且實質很豐富之天然來源）中製備 海藻糖，及製備工業級及較低成本之含彼之糖類組成物。 因此，本發明對各方面諸如澱粉一，酵素_及生化一科學 ，及其它工業界尤其是食品，化妝品及藥劑工業，以及林 業漁業及典業，家畜及化學工業具有無比逮大之影響。故 本發明對各界之影響爲無遠弗屆的。 雖然現今所述者乃被視爲是本發明之理想具酱實施例 ，但各種不同之改良法當然可包含於其中，只要落在本發 明眞正精髓及範圈內之所有改良法均欲涵蓋於附加之申請 專利範圍內。 ---------袭------ΪΤ------0 *, - (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局負工消費合作社印製
Lit 尺 張 I紙 本 一準 揉 家 06

Claims (1)

  1. 年月Η _ β9. 8. 補充| ----- - J -—---——Ah.. ί；Λ / \ /I- — ^ 414807 7T、申請專利範圍 e+—^ · 〆-J*" 一**· 附件（A ):第8 3 1 Ο 7 3 1 5號專利申請案 中文申請專利範圍修正本 (請先間-背面之注音)事項再填冩本頁) 民國8 9年8月修正 1 . 一種衍生自脂肪桿菌（Pimelobacter sp.) R 4 8 ( F E R M BP-4315 ： CCRC 9 1 0 0 0 6 )之酶，其具有如下所示之理化性質： (1 )作用 轉化麥芽糖成海藻糖及轉化海藻糖成麥芽糖； 自1莫耳麥芽糖生成1莫耳海藻糖•或自1莫 耳海藻糖生成1莫耳麥芽糖； (2 )分子量 以十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳（ SDS — PAGE)分析，爲 57 ，000-67，000道爾頓； (3 )等電點（p I ) 以兩性電解質等電電泳分析，爲4 . 1 - 5.1; (4 )活性之抑制作用 被 ImM Cu++ ，Hg++ 及 Tris— H C j?緩衝液所抑制； (5 )最適溫度 當於PH7 . 0培養達6 0分鐘時，爲2 0T 年月Η _ β9. 8. 補充| ----- - J -—---——Ah.. ί；Λ / \ /I- — ^ 414807 7T、申請專利範圍 e+—^ · 〆-J*" 一**· 附件（A ):第8 3 1 Ο 7 3 1 5號專利申請案 中文申請專利範圍修正本 (請先間-背面之注音)事項再填冩本頁) 民國8 9年8月修正 1 . 一種衍生自脂肪桿菌（Pimelobacter sp.) R 4 8 ( F E R M BP-4315 ： CCRC 9 1 0 0 0 6 )之酶，其具有如下所示之理化性質： (1 )作用 轉化麥芽糖成海藻糖及轉化海藻糖成麥芽糖； 自1莫耳麥芽糖生成1莫耳海藻糖•或自1莫 耳海藻糖生成1莫耳麥芽糖； (2 )分子量 以十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳（ SDS — PAGE)分析，爲 57 ，000-67，000道爾頓； (3 )等電點（p I ) 以兩性電解質等電電泳分析，爲4 . 1 - 5.1; (4 )活性之抑制作用 被 ImM Cu++ ，Hg++ 及 Tris— H C j?緩衝液所抑制； (5 )最適溫度 當於PH7 . 0培養達6 0分鐘時，爲2 0T 經脣部智鸶財產局3-工消赀合作社印3; 414807 λ, PnS I)h rr、申請專利範圍 (6 )最適p Η 當於25 °C下培養達60分鐘時，爲7. 0 ~ 8.0； (7 )熱安定性 當於PH7. 0下培養達60分鐘時，安定性 可達至3 0 °C : (8 ) p Η安定性 當於2 0°C下培養達6 0分鐘時，於pH 6. 0-9. 0下安定；及， (9)含有下述N-端之部份胺基酸序列 X 1 ρ Γτ 3 0 h P I 3 X 或 ο a ΟΛ A- 2 X- g Γ A 1爲 X - 免 2 X 其" ο Γ P f a A * 或 中 6 h ρ 爲 hτ 或 nx a V 爲 3 X 且 及 yτ I 4 X I β a V - ap- A XJy- b 中 其 或 6 h p * 爲 4 X 菌 胞 單 假 臭 惡 自 生 衍 種1 2 s a n o m o d u e s p -------------裝--------訂---------Ί {請先閱讀背面之江意事項再填寫本頁) e nx Λα d • 1x ΐ u ρ 9 7 5 4 1 P B Μ R Ε F /(\ 2 6 2 Η ο ο ο ΤΜ 9 C R C C 化 ΓΓΜ 1 理 之 示 所 下 如 有 具 其 酶 之 質 性 用 作 1 糖 芽 麥 成 糖 藻 海 化 轉 及 糖 藻 海 成 糖 芽 麥 化 轉 本纸張又度適用中S a家標準（CNS)A.l規格（21ϋ X 297公坌）-2 - 414807 C8 [)S 六、申請專利範圍 自1莫耳麥芽糖生成1莫耳海藻糖，或自1莫 耳海藻糖生成1莫耳麥芽糖； '—V 2 烯 丙 聚 鈉 酸 硫 基 烷 量二 子十 分以 Ε G A P i s D s ο ο ο 析頓 分爾 -道 ο ο ( ο 泳 ’ 電 謬 凝 1 胺爲 醯’ ο 4 爲 析 分 泳 電 電 等 質 解 ο < 電 2 點性 1 電兩 I 等以 S)- 3 Χί Ρ 4 5 活被 τ 用 作 制 抑 之 性 C Μm Μm ο 5 u i 芾 及卩 ft- + in. + 沔 液 τ^χ 一1 訂 Tr_ , 緩 + 又 + C Η U 時 鐘 分 ο 6 達 養 培 ο 7 度 Η 溫 Ρ 適於 最 當 V)- 5 p 7 3 爲 --------------衣·-- (請先閒讀背面之注意事項再填寫本頁) 線 6 經晉部智"財產局員工消货合作社印以 7 /IV 、—\ 8 Η 性 Ρ 定 於安Η 1, ’ CX 時時於 鐘 鐘 * 分 分 時 ο ο 鐘， 6 6 分及 達； 達 ο : 養定 養 6 定 培安 培 達安 下下 下 養下 0 3 ο 培 5 . . .X 下 . 7 8 7 ο 性。C 9 Η Η I 性 Η 4 定 5 I ρ 0.3 定 ρ 至安 30 適於 .安於達 Η 於 -最 當 7 熱當可 Ρ 當 6 本紙張尺垤適用中围國家標準（CNS)Al現(210 * 297匕坌）-3 - 經^部智慧財產局3工消赀合作社印於 414807 λ. US L'H I)H c、申請專利範圍 (9 )含有下述N -端之部份胺基酸序列 Τ r Ρ — X 1 -A r g — x a — A J2 a - -X Ρ h e ( 其 中 "X i ' P h e ¥ 或 Ρ r 0 1 "X 2 h r V 或 Ρ r 0 r 且， ^ X 3 V & V a % ” 或 A a ) 0 3 . 一種衍生自水性棲熱菌（Thermus aquaticus ; ATCC 33923)之酶，其具有如下所示之理化性 質： (1 )作用 轉化麥芽糖成海藻糖及轉化海藻糖成麥芽糖； 自1莫耳麥芽糖生成1莫耳海藻糖，或自1莫 莫耳海藻糖生成1莫耳麥芽糖； (2 )分子量 以十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳（ SDS-PAGE)分析，爲 100 ，〇〇◦ —1 10，000道爾頓； (3)等電點（PI) 以兩性電解質等電電泳分析，爲3. 8 - 4.8； (4 )活性之抑制作用 被 ImM Cu++ ，Hg++ 及 50mM T r i s - H C 5緩衝液所抑制； (5 )最適溫度 本紙張尺度適用中國因家標準（GNSU丨蜆了公呈）-4 - -------------枯衣，-------訂--------"，線 (請先閱讀背面之-£咅〕事項再填寫本頁) 經晋部智祛財產局員工消货合作社印Τ,'ΙΛ 414807 - cs I)H 77、申請專利範圍 當於pH7. 〇培養達60分鐘時，爲65 °C r (6 )最適Ρ Η 當於6 0°C下培養達6 0分鐘時，於pH 6. 0 — 6. 7下安定； (7 )熱安定性 當於PH7. 0下培養達6 0.分鐘時*安定性 可達至8 0 °C ; (8 ) Ρ Η安定性 當於6 0°C下培養達6 0分鐘時，於pH 5 5—9. 5下安定；及’ (9)含有下述N-端之部份胺基酸序列 Aj? a-V a i?-X4-Ty r (其中，)。 4. 一種製備如申請專利範圍第1 ，2或3項之酶的 方法*其係包含： (a )於營養培養基中，培養能夠產製該酶之微生物 以生成該酶，該微生物係選自脂肪桿菌R4 8 (FERM BP-4315 ； CCRC 910006)，惡臭假單胞菌H262( FERM BP-4579; CCRC 9 1 0 0 0 7 )，或水性棲熱菌（AT CC 3 3 9 2 3 );及’ (b )自所生成之培養物中回收所產製之酶。 本紙張尺度適用家標準（CNS)Al規格（210x297公S) — 5 - -------------裝--------訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 璦濟部智.€財產局員工消货合作社印:I,'IR 414807 、s f-；S L：!S 1)8 六、申請專利範圍 5. 如申請專利範圍第4項之方法，其中該酶係用於 產製海藻糖及降低溶液中麥芽糖之還原力。 6. 如申請專利範圍第5項之方法，其中該海藻糖係 爲水性晶狀海藻糖或無水晶狀海藻糖。 7 . —種產製海藻糖之方法，其係包含： (a) 令如申請專利範圍第1 ，2或3項之酶作用於 麥芽糖溶液以生成海藻糖，該麥芽糖係藉由令 石-澱粉酶與或不與澱粉脫支酶作用於澱粉性 物質溶液而加以製備； (b) 藉由令葡糖澱粉酶作用於所生成之溶液以增加 海藻糖之含量，及令所生成之海藻糖溶液以強 酸陽離子交換劑管柱之管柱層析法加以處理， 以純化該溶液中之海藻糖：及| (c )回收所純化之海藻糖》 8. 如申請專利範圍第7項之方法，其中所獲致之海 藻糖係爲水性晶狀海藻糖或無水晶狀海藻糖》 9. 如申請專利範圍第7項之方法，其中所獲致之海 藻糖係用於食品產物，化粧品組成物及藥學組成物中。 1 0 . —種製備高海藻糖含量產物之方法，其係包含 (a )令轉化麥芽糖成海藻糖及轉化海藻糖成麥芽糖 .之酶與麥芽糖溶液接觸，以生成海藻糖，該酶係衍生自脂 肪桿菌 R48(FERM BP-4315 ； CCRC 910006)，惡臭假單胞菌H262(FERM -------------裝--------訂--------線 (請先闉tf背面之注意事項再填寫本頁) 158 l)h 414807 六、申請專利範圍 BP - 4579 ; CCRC 9 1 0007)或水性棲熱 菌（ATCC 3 3 9 2 3 )： (b)回收所生成之含有麥芽糖和海藻糖之溶液； (c )令葡糖澱粉酶及/或α-苷酶作用於步驟（b )之溶液中’以水解該麥芽糖生成葡萄糖； (d) 令所生成之混合液經由離子交換管柱層析以除 去葡萄糖1及 (e) 回收所生成之高海藻糖含量產物。 1 1 .如申請專利範圍第1 0項之方法，其中步驟（ d)中之離子交換管柱層析係使用強酸陽離子交換劑。 1 2 .如申請專利範圍第1 0項之方法，其中該酶具 有如下所示之理化性質： (1 )分子量 以十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳（S D S -PAGE)分析，爲 57 · ◦0◦_ 120，000道爾頓； (2 )等電點（p I ) 以兩性電解質等電電泳分析，爲3 . 8 - 5 1 ; 及 (3 )活性之抑制作用 被 ImM Cu++，50mM Tris—HC 父緩 衝液所抑制》 1 3 .如申請專利範圍第1 〇項之方法，其中該陶具 部份胺基酸序列，該部份胺基酸序列含有選自下列之N — 本紙張又度適用申g因家標準丨规格{2UJ X 297 ) ---------------------^---------線 (請先閱讀背面之沒t事項再填寫本頁) 嶝-部智慧財產局員工消货合作社印泣 414807 苽 cs 1)8 穴、申請專利範圍 端： C 1 ) Trp_Xi—Arg — Xz_Ai?a — X3— Phe (對脂肪桿囷 (Pime 1 obacter sp. ) R 4 8 ( FERM BP-4315 ;CCRC 910006 )及惡臭假單胞菌（Pseudomonas putida )H 2 6 2 (FERM BP-4579;CCRC 910007)); (其中，，爲 ' 又2，爲，1'111*，或，？]*〇':且’ 爲 '¥3又，或，八爻3，）：或， (2)A5a-Va^_X4-Tyr (對脂肪桿菌（ Pimelobacter sp. ) R 4 8 ( FERM BP-4315; CCRC 9 1 0 0 0 6 )及水性棲熱菌（Thermus aquaticus )(ATCC 33923 )); (其中， -------------裝-------訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填冩本頁) 經^部智^財產局員工消货合作社印製 本紙張尺度適用+國因家標準（CNS)Al規格（210 « 297公坌> -8 -
TW083107315A 1993-07-20 1994-08-10 Maltose-trehalose converting enzyme, and preparation and uses thereof TW414807B (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP19997193 1993-07-20
JP14409294A JP3633648B2 (ja) 1993-07-20 1994-06-03 マルトース・トレハロース変換酵素とその製造方法並びに用途

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW414807B true TW414807B (en) 2000-12-11

Family

ID=26475626

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW083107315A TW414807B (en) 1993-07-20 1994-08-10 Maltose-trehalose converting enzyme, and preparation and uses thereof

Country Status (10)

Country Link
US (4) US5538883A (zh)
EP (2) EP0636693B1 (zh)
JP (1) JP3633648B2 (zh)
KR (2) KR100312858B1 (zh)
CN (1) CN1281744C (zh)
AT (1) ATE314463T1 (zh)
AU (1) AU676326B2 (zh)
CA (1) CA2128372C (zh)
DE (2) DE69434532T2 (zh)
TW (1) TW414807B (zh)

Families Citing this family (58)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH07322810A (ja) * 1994-05-31 1995-12-12 Ajinomoto Co Inc パンの製造法
US5763228A (en) * 1994-06-16 1998-06-09 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo Recombinant enzyme for converting maltose into trehalose from pimelobacter sp.
JP3650632B2 (ja) * 1994-06-16 2005-05-25 株式会社林原生物化学研究所 マルトースをトレハロースに変換する組換え型酵素
EP0693558B1 (en) * 1994-07-19 2002-12-04 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo Trehalose and its production and use
DE69532106T2 (de) * 1994-09-16 2004-07-22 Nihon Shokuhin Kako Co., Ltd. Maltose Phospharylase, Trehalose Phophorylase, Plesiomonasstamm, und Herstellung von Trehalose
JP3810457B2 (ja) * 1994-10-01 2006-08-16 株式会社林原生物化学研究所 マルトースをトレハロースに変換する組換え型耐熱性酵素
JPH08157491A (ja) * 1994-11-30 1996-06-18 Hayashibara Biochem Lab Inc トレハロース誘導体の製造方法
DE69531669T2 (de) * 1994-12-07 2004-07-15 Sun Medical Co., Ltd., Moriyama Dentale zusammensetzung für hypersensitives dentin
TW449619B (en) * 1995-02-10 2001-08-11 Hayashibara Biochem Lab Non-reducing saccharides, their preparations and uses
US5858992A (en) * 1995-02-10 1999-01-12 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo Non-reducing saccharides, their preparation and use
US5958455A (en) * 1996-02-09 1999-09-28 Quadrant Holdings Cambridge Ltd Oral solid dosage forms, methods of making same and compositions thereof
US5762961A (en) * 1996-02-09 1998-06-09 Quadrant Holdings Cambridge Ltd. Rapidly soluble oral solid dosage forms, methods of making same, and compositions thereof
DE69731016T2 (de) * 1996-03-04 2005-10-06 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo Herstellung einer Trehalulose enthaltende Polysaccharidzusammensetzung.
JP3650682B2 (ja) * 1996-03-04 2005-05-25 株式会社林原生物化学研究所 トレハルロース含有糖質とその製造方法並びに用途
JP3549366B2 (ja) * 1996-06-20 2004-08-04 株式会社林原生物化学研究所 飲食物の塩から味及び／又は旨味増強方法
US5916881A (en) * 1996-10-07 1999-06-29 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo High trehalose content syrup
JP4034846B2 (ja) * 1996-12-10 2008-01-16 株式会社林原生物化学研究所 結晶性粉末糖質とその製造方法並びに用途
EP0868916A3 (en) * 1997-03-04 2004-09-15 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo Reduction inhibitory agent for active-oxygen eliminating activity
JP4153057B2 (ja) * 1997-03-10 2008-09-17 中国化薬株式会社 Ｄ−グルクロノラクトンの製造方法
JP4034862B2 (ja) 1997-06-02 2008-01-16 株式会社林原生物化学研究所 スクロースの後味改善方法とその用途
KR100397319B1 (ko) * 1997-09-30 2003-11-17 씨제이 주식회사 트레할로오스를 생성하는 미생물
JPH11116588A (ja) 1997-10-16 1999-04-27 Hayashibara Biochem Lab Inc トレハロース及び糖アルコールの製造方法
JP3908868B2 (ja) * 1997-12-26 2007-04-25 株式会社林原生物化学研究所 トリメチルアミン生成抑制方法とその用途
JP3944323B2 (ja) 1998-04-22 2007-07-11 株式会社林原生物化学研究所 ノンフライ調理法とその用途
US6440446B1 (en) * 1998-04-22 2002-08-27 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo Agent for anti-osteoporosis
US6455096B1 (en) 1998-04-28 2002-09-24 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo Hard candy with a relatively-high moisture and hardness, and process of the same
JP4221078B2 (ja) 1998-07-09 2009-02-12 株式会社林原生物化学研究所 トレハロース２含水結晶とその製造方法並びに用途
US6268353B1 (en) 1998-09-03 2001-07-31 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo Method for inhibiting the formation of volatile aldehydes including their related compounds and/or the decomposition of fatty acids including their related compounds, and uses thereof
JP2000262252A (ja) 1999-01-11 2000-09-26 Aoba Kasei Kk タンパク質変性抑制剤、冷凍変性が抑制された擂潰食肉およびその製造方法ならびに練り製品の製造方法
AU2858899A (en) * 1999-03-24 2000-10-09 Cheil Jedang Corporation Trehalose synthase protein, gene, plasmids, microorganisms, and a process for producing trehalose
TWI283695B (en) * 1999-10-21 2007-07-11 Hayashibara Biochem Lab Thermoplastic shaped-body of trehalose, process and uses thereof
JP4652540B2 (ja) 2000-03-02 2011-03-16 株式会社林原生物化学研究所 体臭抑制剤とその用途
HUP0300840A2 (hu) 2000-07-28 2003-07-28 Henkel Kommanditgesellschaft Auf Aktien Új, Bacillus sp. A 7-7 (DSM 12368)-ból extrahált amilolitikus enzim, valamint használata mosó- és tisztítószerekben
WO2002044350A2 (de) 2000-11-28 2002-06-06 Henkel Kommanditgesellschaft Auf Aktien Cyclodextrin-glucanotransferase (cg tase) aus bicillus agaradherens (dsm 9948) sowie wasch- und reinigungsmittel mit dieser neuen cyclodextrin-glucanotransferase
JP4754066B2 (ja) 2000-12-22 2011-08-24 株式会社林原生物化学研究所 抗関節障害剤
US7749538B2 (en) 2001-04-26 2010-07-06 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo Molded object having high pullulan content, process for the producing the same, and use thereof
JP4132767B2 (ja) 2001-07-19 2008-08-13 株式会社林原生物化学研究所 プルラン含有粉末とその製造方法並びに用途
JP3759018B2 (ja) * 2001-10-18 2006-03-22 株式会社林原生物化学研究所 トレハロースを使用した梅肉シート
DE10163748A1 (de) 2001-12-21 2003-07-17 Henkel Kgaa Neue Glykosylhydrolasen
AU2003207244A1 (en) * 2002-02-22 2003-09-09 Ajinomoto Co., Inc. Amino acid powder and process for producing the same
CA2479809A1 (en) * 2002-03-21 2003-10-02 Dow Global Technologies Inc. Method for preparing metal cyanide catalyst complexes using partially miscible complexing agents
EP1568284B1 (en) 2002-11-25 2007-03-14 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo Method of producing rice flour
EP1628545A1 (en) * 2003-06-05 2006-03-01 Cargill, Incorporated Beverage additive mixture of trehalose and protein
DE102004013736A1 (de) * 2004-03-18 2005-10-06 Basf Ag Verfahren zur Anreicherung von Trehalose mit Hilfe von Alumosilikaten
CA2577657C (en) 2004-08-20 2013-03-19 Cargill, Incorporated Ingredient systems comprising trehalose, food products containing trehalose, and methods of making same
US8231925B2 (en) 2004-08-20 2012-07-31 Cargill, Incorporated Ingredient systems comprising trehalose, food products containing trehalose, and methods of making same
JP5118635B2 (ja) * 2006-05-25 2013-01-16 株式会社林原 澱粉糊化食品の食味低下の抑制方法
KR20090081392A (ko) 2006-11-24 2009-07-28 가부시끼가이샤 하야시바라 세이부쓰 가가꾸 겐꾸조 당질 함유 건조 야채와 그 제조 방법 및 용도
US20100267658A1 (en) * 2009-04-15 2010-10-21 Sudzucker Aktiengesellschaft Mannheim/Ochsenfurt Trehalulose-containing composition, its preparation and use
SG10201606201UA (en) 2011-09-21 2016-09-29 Hayashibara Co Process for producing a particulate composition comprising crystalline alpha, alpha-trehalose di-hydrate
JP6185157B2 (ja) 2013-05-30 2017-08-23 蘇州科景生物医薬科技有限公司 多機能組成物並びにその作製方法及び使用
CN104059902B (zh) * 2014-05-16 2017-01-25 齐鲁工业大学 β‑淀粉酶‑海藻糖合酶融合酶及其表达基因与应用
CN103981233B (zh) * 2014-05-29 2015-08-26 湖南尔康制药股份有限公司 一种以木薯淀粉为原料制备海藻糖的方法
CN104911135B (zh) * 2015-07-01 2018-04-13 湖南汇升生物科技有限公司 一种海藻糖合酶生产菌株及其应用
CN108779501A (zh) * 2016-01-20 2018-11-09 株式会社林原 含有α,α-海藻糖二水合物晶体的粉末、其制造方法及用途
CN108624637B (zh) * 2018-08-24 2021-10-19 湖南汇升生物科技有限公司 一种利用大米生产海藻糖的方法
WO2022138631A1 (ja) 2020-12-25 2022-06-30 株式会社林原 家畜及び／又は家禽の生産性改善方法及び腸内菌叢改善方法
CN114657069B (zh) * 2022-04-24 2023-10-20 深圳净拓生物科技有限公司 一种粪便保存液及粪菌悬液的制备方法

Family Cites Families (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT1050155B (it) * 1967-06-30 1981-03-10 Hayashibara Co Procedimento per la produzione di maltosio di elevata purezza
JPS543937B1 (zh) * 1968-11-18 1979-02-28
JPS5617078B1 (zh) * 1971-05-31 1981-04-20
DE2332396A1 (de) * 1973-06-26 1975-01-23 Marine Protein Int Corp Wasserzirkulationssystem fuer die suesswasserfischzucht
JPS50154485A (zh) * 1974-05-31 1975-12-12
US4032403A (en) * 1974-07-17 1977-06-28 Kabushiki-Kaisha Hayashibara Selbutsukagaku Kenkyujo Process for the production of saccharified starch products wherein maltose is the predominant constituent
JPS543938A (en) * 1977-06-09 1979-01-12 Matsushita Electric Ind Co Ltd High-frequency heating system
JPS5611437A (en) * 1979-07-09 1981-02-04 Toshiba Corp Liquid crystal display element
JPS5617078A (en) * 1979-07-20 1981-02-18 Hitachi Ltd Semiconductor device containing photosensor
JPS5628154A (en) * 1979-08-10 1981-03-19 Ricoh Co Ltd Roll paper feeding apparatus
JPS573356A (en) * 1980-06-06 1982-01-08 Jeol Ltd Electron gun
JPS5823799A (ja) * 1981-08-03 1983-02-12 株式会社林原生物化学研究所 高純度マルト−スの製造方法
JPS5872598A (ja) * 1981-10-26 1983-04-30 Hayashibara Biochem Lab Inc 高純度イソマルト−スの製造方法
JPS58216695A (ja) * 1982-06-07 1983-12-16 Otsuka Shokuhin Kogyo Kk トレハロ−スの製造方法
US4594322A (en) * 1983-04-19 1986-06-10 Uop Inc. Glucose or maltose from starch
JPH062071B2 (ja) * 1986-08-08 1994-01-12 新技術事業団 糖類の製造法
EP0257535B1 (en) * 1986-08-28 1994-01-26 Nihon Shokuhin Kako Co., Ltd. Process for production of starch sugar
JPS6434296A (en) * 1987-07-28 1989-02-03 Japan Res Dev Corp Production of starch saccharide
EP0302838B1 (en) * 1987-08-07 1994-06-29 ENICHEM SYNTHESIS S.p.A. Cloning of the gene coding the isoamylase enzyme and its use in the production of said enzyme
GB8802104D0 (en) * 1988-01-30 1988-02-24 No Limit Sportswear Ltd Improvements relating to waterproofing seams for garments
JP2838798B2 (ja) * 1988-02-04 1998-12-16 株式会社林原生物化学研究所 イソアミラーゼ活性を有するポリペプチドとその用途
CA2016363A1 (en) * 1989-06-05 1990-12-05 Kazuho Matsuura Method of producing trehalose
US5130239A (en) * 1990-03-08 1992-07-14 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo Process for preparing lactosucrose high-content power
JP3134229B2 (ja) * 1990-03-08 2001-02-13 株式会社林原生物化学研究所 ラクトスクロース高含有粉末の製造方法とその粉末の用途
AU7873291A (en) * 1990-05-08 1991-11-27 University Of Iowa Research Foundation, The Biodegradable sugar-based polymer
FI904124A (fi) * 1990-08-20 1992-02-21 Alko Ab Oy Oligosackaridblandning och foerfarande foer dess framstaellning.
US5229276A (en) * 1990-10-31 1993-07-20 Mitsui Sugar Co., Ltd. Process for preparing trehalulose and isomaltulose
JPH05211882A (ja) * 1991-12-11 1993-08-24 Ajinomoto Co Inc トレハロースの製造法
ATE182359T1 (de) * 1992-12-28 1999-08-15 Hayashibara Biochem Lab Nichtreduzierendes saccharidbildendes enzym, und dessen herstellung und verwendungen
BR9400368A (pt) * 1993-02-02 1994-08-23 Ajinomoto Kk Processo para isolamento e purificação de trehalose
JPH06319578A (ja) * 1993-03-18 1994-11-22 Takeda Chem Ind Ltd トレハロースの製造法
JP3559585B2 (ja) * 1993-06-03 2004-09-02 株式会社林原生物化学研究所 トレハロース遊離酵素とその製造方法並びに用途
JP3650632B2 (ja) * 1994-06-16 2005-05-25 株式会社林原生物化学研究所 マルトースをトレハロースに変換する組換え型酵素
TW426737B (en) * 1994-06-27 2001-03-21 Hayashibara Biochem Lab Saccharide composition with reduced reducibility, and preparation and uses thereof
EP0693558B1 (en) * 1994-07-19 2002-12-04 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo Trehalose and its production and use

Also Published As

Publication number Publication date
DE69434590D1 (de) 2006-02-02
JPH07170977A (ja) 1995-07-11
KR950003444A (ko) 1995-02-16
EP0636693A3 (en) 1997-01-29
EP1085096A3 (en) 2002-01-02
CA2128372A1 (en) 1995-01-21
EP0636693A2 (en) 1995-02-01
EP1085096A2 (en) 2001-03-21
DE69434532T2 (de) 2006-07-20
AU676326B2 (en) 1997-03-06
KR100331672B1 (ko) 2002-04-09
CN1281744C (zh) 2006-10-25
ATE314463T1 (de) 2006-01-15
DE69434532D1 (de) 2005-12-08
US6090792A (en) 2000-07-18
KR100312858B1 (ko) 2001-12-28
CN1106065A (zh) 1995-08-02
EP1085096B1 (en) 2005-11-02
CA2128372C (en) 2007-08-14
US5538883A (en) 1996-07-23
US5736380A (en) 1998-04-07
US5965411A (en) 1999-10-12
AU6756994A (en) 1995-02-02
DE69434590T2 (de) 2006-09-07
JP3633648B2 (ja) 2005-03-30
EP0636693B1 (en) 2005-12-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TW414807B (en) Maltose-trehalose converting enzyme, and preparation and uses thereof
TW493001B (en) A process for producing trehalose and uses thereof
TW421673B (en) Trehalose-releasing enzyme, and its preparation and uses
JP4249055B2 (ja) 非還元性糖質生成酵素とその製造方法並びに用途
TW507008B (en) Thermostable trehalose-releasing enzyme, and its preparation and uses
KR100371670B1 (ko) 말토헥사오스및말토헵타오스생성아밀라아제와그제조방법및용도
TW426737B (en) Saccharide composition with reduced reducibility, and preparation and uses thereof
KR100391375B1 (ko) 내열성 비환원성 당질 생성 효소와 그 제조방법 및 용도
KR960011095B1 (ko) 말토테트라오스 생성 아밀라아제와 그의 제조 방법 및 용도
TW494137B (en) β-fructofuranosidase, its preparation and uses
TW482656B (en) Saccharide composition containing trehalulose, its preparation and uses
TW426738B (en) Non-reducing saccharide and its production and use
JP2787764B2 (ja) マルトテトラオースとそれを含有する飲食物
JP3616166B2 (ja) トレハロースとその製造方法並びに用途
CN101186939B (zh) 非还原性糖类生成酶及其制备和应用
TW421651B (en) Crystalline O-<alpha>-D-glucopyranosyl-(1->4)-<alpha>-D-glucopyranosyl-<alpha>-D-glucopyranoside, and its production and use
JP5240480B2 (ja) トレハロース遊離酵素とその製造方法並びに用途
JP3725148B2 (ja) マルトース・トレハロース変換酵素とその製造方法並びに用途
JP2004211097A (ja) マルトヘキサオース・マルトヘプタオース生成アミラーゼとその製造方法並びに用途
IL110334A (en) The enzyme that alters maltose to terhalose preparation

Legal Events

Date Code Title Description
GD4A Issue of patent certificate for granted invention patent
MK4A Expiration of patent term of an invention patent