NO321941B1 - Blanding som omfatter et polypeptid, nukleinsyre som styrer ekspresjonen av polypeptidet og viral vektor, samt anvendelser derav for fremstilling av et medikament. - Google Patents

Blanding som omfatter et polypeptid, nukleinsyre som styrer ekspresjonen av polypeptidet og viral vektor, samt anvendelser derav for fremstilling av et medikament. Download PDF

Info

Publication number
NO321941B1
NO321941B1 NO19974502A NO974502A NO321941B1 NO 321941 B1 NO321941 B1 NO 321941B1 NO 19974502 A NO19974502 A NO 19974502A NO 974502 A NO974502 A NO 974502A NO 321941 B1 NO321941 B1 NO 321941B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
polypeptide
amino acid
neu
cells
seq
Prior art date
Application number
NO19974502A
Other languages
English (en)
Other versions
NO974502D0 (no
NO974502L (no
Inventor
Martin A Cheever
Mary L Disis
Original Assignee
Univ Washington
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Univ Washington filed Critical Univ Washington
Publication of NO974502D0 publication Critical patent/NO974502D0/no
Publication of NO974502L publication Critical patent/NO974502L/no
Publication of NO321941B1 publication Critical patent/NO321941B1/no

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001102—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/001103—Receptors for growth factors
    • A61K39/001106—Her-2/neu/ErbB2, Her-3/ErbB3 or Her 4/ErbB4
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/464403—Receptors for growth factors
    • A61K39/464406—Her-2/neu/ErbB2, Her-3/ErbB3 or Her 4/ ErbB4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
    • C07K14/4705—Regulators; Modulating activity stimulating, promoting or activating activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/71—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • G01N33/57488—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving compounds identifable in body fluids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/71—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/82—Translation products from oncogenes
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/806—Antigenic peptides or proteins
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
    • Y10S530/828—Cancer

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)

Description

Den foreliggende oppfinnelsen er generelt rettet mot en blanding som som omfatter et polypeptid, nukleinsyre som styrer ekspresjonen av polypeptidet og viral vektor, samt anvendelser derav for fremstilling av et medikament. Blandingen som omfatter polypeptidet tilveiebringer frembringelse eller forsterkning av en immunrespons mot HER-2/neu protein. Foreliggende oppfinnelse vedrører også anvendelse av blandingen eller nukleinsyremolekylet for fremstiling av et medikament for immunisering av et varmblodig dyr mot maligniteter som er assosiert med HER-2/neu onkogenet.
Til tross for enorme investeringer av finansielle og menneskelige ressurser så forblir cancer en av hovedårsakene for død. For eksempel så er cancer en av de ledende årsakene til død hos kvinner i alderen mellom 35 og 74. Brystcancer er den vanligste malignitet i kvinner og hyppigheten for utvikling av brystcancer er økende.
En av ni kvinner vil bli diagnostisert med denne sykdommen. Standard fremgangsmåte for å behandle brystcancer har blitt konsentrert rundt en kombinasjon av kirurgi, stråling og kjemoterapi. Disse fremgangsmåtene har resultert i noen dramatiske suksesser ved visse maligniteter. Imidlertid så har disse fremgangsmåtene ikke vært vellykkede for alle maligniteter og brystcancer er oftest ikke kurerbare når man forsøker å behandle etter et visst stadium. Alternative fremgangsmåter for å forhindre og behandle er nødvendig.
Et vanlig kjennetegn på malignitet er ukontrollert cellevekst. Cancerceller ser ut for å ha gjennomgått en transformasjonsprosess fra en normal fenotype til en malign fenotype som er i stand til å vokse ukontrollert. Amplifisering og overekspresjon av gener i somatiske celler er vurdert til å være en vanlig primær hendelse som resulterer i transformasjonen av normale celler til maligne celler. Den maligne fenotypen sine egenskaper som kodes for av onkogene gener er overført til avkommet av de transformert cellene under celledeling.
Pågående forskning som involverer onkogener har identifisert minst førti onkogener som er operative i maligne celler og som er ansvarlige for eller assosiert med transformasjon. Onkogener har blitt klassifisert inn i ulike grupper basert på
antatt funksjon eller lokalisering av deres genprodukter (slik som proteinet uttrykt av onkogenet).
Onkogener er antatt å være essensielle for visse aspekter av normalcelle fysiologi. I denne betraktning så er HER-2/neu onkogenet et medlem av tyrosin protein kinasefamilien av onkogener og deler en stor grad av homologi med den epidermale vekstfaktor reseptoren. HER-2/neu spiller sannsynligvis en rolle i cellevekst og/eller differensiering. HER-2/neu viser seg å indusere malignitet gjennom kvantitative mekanismer som er et resultat av økt eller nedregulert ekspresjon av et essensielt normalt genprodukt.
HER-2/neu (p185) er protein produktet av HER-2/neu onkogenet. Her-2/neu genet blir amplifisert og HER-2/neu proteinet blir overuttrykt i er rekke typer cancer omfattende bryst, eggstokk, tarm, lunge og prostata cancer. HER-2/neu er relatert til malign transformasjon. Det er funnet i 50% - 60% av tarmkanal in situ karsinomer og i 20%-40% av alle brystcancere så vel som en vesentlig fraksjon av adenokarsinomer som opptrer i eggstokkene, prostata, tarm og lunge. HER-2/neu er imidlertid ikke bare assosiert med malign fenotype, men også med hissigheten av maligniteten , som er funnet i en fjerde del av alle spredende brystkrefter. HER-2/neu overekspresjon er forbundet med dårlige prognoser i både bryst- og eggstokkcancer. HER-2/neu er et transmembrant protein med en relativ molekylvekt på 185 kd som er omtrentlig 1255 aminosyrer (aa) i lengde. Det har et ekstracellulært bindingsdomene (ECD) som er omtrentlig 645 aa, med 40% homologi med epidermal vekstfaktor reseptor (EGFR), et meget hydrofobt transmembrant ankerdomene (TMD) og et karboksyterminalt cytoplasmisk domene (CD) på omtrentlig 580 aa med 80% homologi med EGFR.
På grunn av vanskelighetene med de foreliggende fremgangsmåtene for terapi av cancer som er assosiert med HER-2/neu onkogenet så er det et behov innenfor fagfeltet for forbedrede forbindelser og sammensetninger. Den foreliggende oppfinnelsen oppfyller disse behovene og videre tilveiebringer andre relaterte fordeler.
Kort fortalt så tilveiebringer foreliggende oppfinnelse blandinger som omfatter et polypepitd i kombinasjon med en farmasøytisk akseptabel bærer eller fortynningsmiddel, nukleinsyremolekyler (som styrer ekspresjonen av slike polypeptider) og virale vektorer (som styrer ekspresjon av slike polypeptider) for anvendelse for fremstilling av medikamenter for immunisering, av et varmblodig dyr mot malignitet som er assosiert med HER-2/neu onkogenet. Polypeptidet eller nukleinsyremolekylet kan være tilstede i en blanding i henhold til foreliggende oppfinnelse som omfatter en farmasøytisk akseptabel bærer eller fortynningsmiddel. Et slikt nukleinsyremolekyl, viralvektor eller farmasøytisk blanding kan bli benyttet for immunisering på en engangsbasis (for eksempel når man har mistanke om malignitet) eller på en periodisk basis (for eksempel for et individ med en økt risiko for å få eller for å få tilbakefall av en malignitet). Et medikament for immunisering kan bli nyttig ved behandling av eksisterende tumor eller for å forhindre at tumorer inntreffer eller kommer tilbake.
I en utførelsesform så omfatter den foreliggende oppfinnelsen en blanding kjennetegnet ved at den omfatter en farmasøytisk akseptabel bærer eller fortynningsmiddel i kombinasjon med et polypeptid som er kodet for av en DNA-sekvens av nukleotidene 2026 til 3765 av SEQ ID NO : 1 for immunisering av et varmblodig dyr mot en malignitet i hvilken HER-2/neu onkogen er assosiert. I en foretrukket utførelsesform omfatter blandingen et polypeptid som har en aminosyresekvens som SEKV ID NO: 2 fra lysin, aminosyre 676, til valin, aminosyre 1255, eller en variant derav som produserer i det minste en tilsvarende immunrespons. En blanding ifølge den foreliggende oppfinnelsen er tilveiebragt som omfatter et polypeptid i en kombinasjon med en farmasøytisk akseptabel bærer eller fortynningsmiddel.
I en annen utførelsesform så anvendes blandingen ifølge foreliggende oppfinnelse eller et polypeptid av blandingen for fremstilling av et medikament for immunisering av varmblodige dyr mot malignitet som er assosiert med HER-2/neu onkogenet.
I en annen utførelsesform av foreliggende oppfinnelse så er det tilveiebrakt et nukleinsyremolekyl for immunisering ved transfeksjon av celler av et varmblodig dyr med et nukleinsyremolekyl, kjennetegnet ved at nevnte nukleinsyremolekyl styrer ekspresjonen av et polypeptid kodet for av en DNA-sekvens av nukleotidene 2026 til 3765 av SEQ ID NO : 1.
Foretrukket kjennetegnes nuklelinsyremolekylet ved at cellene transfekteres ex v/Vofor påfølgende levering til dyret. I en annen utførelsesform av foreliggende oppfinnelse så anvendes et slikt nukleinsyremolekyl for fremstillingen av et medikament for immunisering av et varmblodig dyr mot malignitet i hvilken HER-2/neu onkogenet er assosiert, nevnte nukleinsyremolekyl styrer ekspresjon av et polypeptid kodet for av en DNA-sekvens av nukleotidene 2026 til 3765 av SEQ ID NO : 1.
I en annen utførelsesform av foreliggende oppfinnelse er det tilveiebragt en viral vektor for immunisering av infiserte celler av et varmblodig dyr med vektoren, kjennetegnet ved at nevnte virale vektor styrer ekspresjon av et polypeptid kodet for av en DNA-sekvens av nukleotider 2026 til 3765 av SEQ ID NO : 1.1 en foretrukket utførlese kjennetegnes den virale vektoren ved at cellene infiseres ex vi<y>o for påfølgende levering til dyret. I en annen utførelsesform så anvendes en slik viral vektor for fremstillingen av et medikament for immunisering av et varmblodig dyr mot malignitet i hvilken HER-2/neu onkogenet er assosiert, hvor nevnte virale vektor styrer ekspresjon av et polypeptid kodet for av en DNA-sekvens av nukleotider 2026 til 3765 av SEQ ID NO: 1.
Foreliggende oppfinnelse vedrører i et ytterligere aspekt en blanding kjennetegnet ved at den omfatter en farmasøytisk akseptabel bærer eller fortynningsmiddel i kombinasjon med et polypeptid kodet for av en DNA-sekvens av nukleotider 2026 til 3765 av SEQ ID NO: 1 for utløsning eller forsterkning av en immunrespons tii HER-2/neu protein.
I en foretrukket utførelsesform kjennetegnes blandingen ved at polypeptidet har aminosyresekvensen til SEQ ID NO: 2 fra lysin, aminosyre 676 til valin, aminosyre 1255, eller en variant derav som tilveiebringer i det minste en ekvivalent immunrespons.
I ytterligere et aspekt vedrører foreliggende oppfinnelse anvendelse av blandingen ifølge oppfinnelsen for fremstilling av et medikament for utløsning eller forsterkning av en immunrespons til HER-2/neu protein.
I en foretrukket utførelse kjennetegnes nukleinsyremolekylet iføl9e oppfinnelsen av at det er for utløsning eller forsterkning av en immunrespons til HER-2/neu protein.
Nukleinsyremolekylet eller anvendelse av et nukleinsyremolekyl ifølge foreliggende oppfinnelse kjennetegnes i en foretrukket utførelse av at det kodete polypeptidet har aminosyresekvensen til SEQ ID NO : 2 fra lysin, aminosyre 676 til valin, aminosyre 1255, eller en variant derav for å tilveiebringe i det minste en ekvivalent immunrespons.
I andre aspekter av foreliggende oppfinnelse tilveiebringes viral vektor eller anvendelse derav for fremstilling av et medikament for utløsning av, eller forsterkning av en immunrespons til HER-2/neu protein.
I foretrukne utførelser av blandingen, eller anvendelse derav ifølge foreliggende oppfinnelse kjennetegnes blandingen av at polypeptidet er knyttet til et peptid eller polypeptid. Polypeptidet kan eventuelt være trunkert.
Disse og andre aspekter ved den foreliggende oppfinnelsen vil bli tydelige med henvisning til den etterfølgende detaljerte beskrivelsen og de vedlagte tegningene.
Kort beskrivelse av tegningene
Figur 1 viser resultatene av primingen av native T-lymfocytter /br HER-2/neu polypeptid med dendrittiske celler. Beinmarg avledede DC ble dyrket med GM-CSF og IL-6 fra CD34+ stamceller. DC pulsert med HER-2/neu polypeptid induserte proteinspesifikk proliferasjon av autologe CD4+/CD45RA+ T-lymfocytter etter ? dager med dyrking av T-celler med DC. Beinmarg avledede CD34+ stamceller som var dyrket i en uke med serumfritt medium inneholdende GM-CSF og IL-6 ble anvendt som APC. APC ble sådd ut på 96-brønners rundbunnede plater (Corning, Corning, NY, USA) med ulike konsentrasjoner og inkubert i 16-18 timer med 20-25 ug/ml av rekombinant HER-2/neu polypeptid. CD4+ T-lymfocytter ble isolert fra autologe perifere blod mononukleære celler ved positiv seleksjon ved anvendelse av
immunoaffinitets kolonner (CellPro, Inc., Bothell, WA, USA). Antigen pulserte APC ble strålet (10 Gy) og 10<5> CD4+ T-lymfocytter ble tilsatt per brønn. Proliferativ respons av T-cellene ble målt ved opptak av (<3>H) tymidin (luCi/brønn) tilsatt på dag 7 over 16-18 timer. Proliferasjonsanalyser ble utført i serum og cytokinfritt medium med 5 brønn paralleller. Symbolene står for følgende: —•— DC + HER-2/neu polypeptid + CD4+/CD45RA+ T-celler; — O— DC + CD4+/CD45RA+ T-celler; og—o— DC + HER-2/neu polypeptid. Figur 2 viser responsen av CD4+ celler mot HER-2/neu polypeptid. Ved bruk av priminganalysen beskrevet for Figur 1 så ble CD4+ T-celler fra normale donorer testet for responser mot rekombinant humant HER-2/neu polypeptid. Symbolene står forfølgende: —■— SC + CD4; og SC+CD4+HER-2/neu polypeptid. SC står for stamceller. Figur 3 viser at rotter immunisert med rotte HER-2/neu polypeptid utvikler rotte neu spesifikke antistoffer. Rotter ble immunisert med rekombinant rotte HER-2/neu polypeptid 25 ug i MPL eller vaccel adjuvans. Tre immuniseringer ble gitt, hver med 20 dagers mellomrom. Tyve dager etter den siste immuniseringen ble rottene undersøkt for antistoff respons mot rotte neu. Dyr immunisert med rotte HER-2/neu polypeptid og vaccel adjuvansen viste høye titere på rotte neu spesifikke responser. Kontrollen var et dyr immunisert med humant HER-2/neu polypeptid (fremmed protein). I separate eksperimenter utviklet rotter immunisert med 100 jxg og 300 ug med renset helt rotte neu ikke detekterbar neu spesifikke antistoffer (data ikke vist). Dataene representerer gjennomsnittet og standardavvik for 3 dyr. Symbolene står for følgende: —■— rotte HER-2/neu polypeptid / MPL; ...#». rotte HER-2/neu polypeptid / vaccel; MPL alene, —O— vacce/alene; og — + — kontroll.
«MPL» og «vaccel» eradjuvanser (Ribi, Bozeman, MT, USA). «Neu» er her HER-2/neu protein.
Figur 4 viser at brystcancerpasienter har preeksisterende immunitet mot HER-2/neu polypeptidet. Pasient PBMC ble evaluert ved å se på inkorporering av tritium merket tymidin i 24 brønn paralleller. Brønner som har verdier høyere enn gjennomsnittet og 3 standardavvik (372 cpm) av kontroll brønnene er betegnet som responderende brønner. Denne HER-2/neu positive fase II brystcancerpasienten har en signifikant respons på rekombinant humant HER-2/neu protein. Symbolet "p" står for peptider for HER-2/neu protein, «tt» står for tetanus toksin og «hHNP» står for rekombinant humant HER-2/neu polypeptid.
Før forklaringen av oppfinnelsen så kan det være nyttig for forståelsen av oppfinnelsen å forklare definisjoner av visse uttrykk som vil bli anvendt heretter.
HER- 2/ neu polypeptid - henviser heri til en del av HER-2/neu proteinet (proteinet er også kjent som p185 eller c-erbB2) som har en aminosyresekvens som i SEKV ID NO:2 fra lysin, amionsyre 676, til valin, aminosyre 1255; og kan være naturlig avledet, syntetisk produsert, genetisk fremstilt eller en funksjonell ekvivalent variant derav, for eksempel hvor en eller flere aminosyrer er erstattet med andre aminosyre(r) eller ikke-aminosyre(r) som ikke i vesentlig grad påvirker frembringelsen eller forsterkningen av en immunrespons mot HER-2/neu proteinet (f.eks. variant som stimulerer en respons ved T-hjelperceller eller cytotoksiske T-celler).
Proliferasion av T- celler - brukt heri så inkluderer det multiplikasjon av T-celler så vel som stimuleringen av T-celler som leder til multiplikasjon, for eksempel initieringen av hendelser som fører til mitose og mitose i seg selv. Metoder for å detektere proliferasjon av T-celler er diskutert nedenfor.
Som nevnt over så er den foreliggende oppfinnelsen rettet mot nukleinsyremolekyler, virale vektorer og blandinger for å frembringe eller forsterke immuniteten mot proteinproduktet uttrykt ved HER-2/neu onkogenet, omfattende maligniteter i varmblodige dyr hvori et amplifisert HER-2/neu gen er assosiert med maligniteten. Det at et amplifisert HER-2/neu gen er assosiert med en malignitet fordrer ikke at protein ekspresjonsproduktet av genet er tilstede på tumoren. For eksempel så kan overekspresjon av protein ekspresjonsproduktet være involvert i initieringen av en tumor, men protein ekspresjonen kan deretter bli borte. En anvendelse av den foreliggende oppfinnelsen er å fremstille et medikament for å frembringe eller forsterke en effektiv autokton immunrespons for å omgjøre en HER-2/neu positiv tumor til en HER-2/neu negativ.
Mer spesielt så vises at et polypeptid basert på en bestemt del (HER-2/neu polypeptid) av protein eksepresjonsproduktet fra HER-2/neu genet kan bli gjenkjent med tymus-avhengige lymfocytter (heretter «T-celler») og derfor kan den autoktone immun T-celleresponsen bli benyttet profylaktisk, eller til å behandle maligniteter hvor et slikt protein er eller har blitt overuttrykt. Åpenbaringen av foreliggende oppfinnelse viser også i et annet aspekt at nukleinsyremolekyler som styrer ekspresjon av et slikt peptid kan anvendes i et medikament for immunisering alene eller i en viralvektor.
I allminnelighet så blir CD4+ T-cellepopulasjoner betraktet å fungere som hjelpere / igangsettere under frigjøringen av lymfokiner når de blir stimulert med et spesifikt antigen; imidlertid så kan en undergruppe av CD4+ cellene fungere som cytotoksiske T-lymfocytter (CTL). På samme måten så blir CD8+T-celler betraktet å fungere ved direkte lysering av antigeniske mål; imidlertid så kan de under en rekke tilfeller utskille lymfokiner for å besørge hjelper eller DTH-funksjon. Til tross for muligheten for overlappende funksjon så er fenotypiske CD4 og CD8-markører knyttet til gjenkjenningen av peptider bundet til klasse II og klasse I MHC-antigener. Gjenkjenning av antigen i sammenheng med klasse II og klasse I MHC pålegger at CD4+ og CD8+ T-cellene responderer til ulike antigener eller det samme antigenet presentert under ulike sammenhenger. Bindingen av immunogeriiske peptider til klasse II MHC-antigener forekommer vanligvis for antigener innført av antigenpresenterende celler. Derfor gjenkjenner CD4+ T-celler vanligvis antigener som har vært utenpå tumorceller. Under normale forhold vil imidlertid binding av peptider til klasse I MHC finne sted bare for proteiner som er tilstede i cytosolet og syntetisert av målet selv, proteiner i de utenforliggende omgivelser er ekskludert. Et unntak til dette er bindingen av eksogene peptider med et nøyaktig klasse I bindings motiv som er til stede utenpå cellen i en høy konsentrasjon. CD4+ og CD8+ T-celler har vidt forskjellige funksjoner og ser ut for å gjenkjenne ulike antigener som en betraktning på hvor antigenene vanligvis oppholder seg.
Som oppdaget i den foreliggende oppfinnelsen, blir en polypeptiddel av proteinproduktet uttrykt av HER-2/neu onkogenet gjenkjent av T-celler. Sirkulerende HER-2/neu polypeptid bir degradert til peptidfragmenter. Peptidf ragmenter f ra polypeptidet binder til hoved histokompabilitetskompleks (MHC) antigener. Ved å vise frem et peptid bundet til MHC-antigen på celleoverflaten og vertscellenes gjenkjenning av kombinasjonen av peptid pluss eget MHC-antigen, så vil HER-2/neu polypeptid
(inkludert det som uttrykkes på en malign celle) være immunogent for T-cellene. Den fortreffelige spesifisiteten til T-cellereseptoren muliggjør individuelle T-celler til å diskriminere mellom peptider som er forskjellige med hensyn på en enkelt aminosyre.
Under immunresponsen mot peptidfragmentet fra polypeptidet så vil T-celler som uttrykker en T-cellereseptor med høy affinitetsbinding til peptid-MHC-komplekset binde til peptid-MHC-komplekset og derved bli aktivert og indusert til å proliferere. I den første kontakten med et peptid så vil et lite antall av immune T-celler utskille lymfokiner, proliferere og differensiere til effektor og hukommelses-T-celler. Den primære immunresponsen vil forekomme in vivo, men har vært vanskelig å detektere in vitro. Påfølgende kontakt med det samme antigen med hukommelses-T-cellene vil føre til en hurtigere og mer intens immunrespons. Den sekundære responsen vil være til stede enten in vivo eller in vitro. In wfro-responsen er lett å måle ved å detektere graden av proliferasjon, graden av cytokinproduksjon eller frembringelse av cytolytisk aktivitet for T-cellepopulasjonen ved gjentatt eksponering med antigenet. Påfølgende proliferasjon av T-cellepopulasjonen som respons på et spesielt antigen er vurdert til å indikere tidligere eksponering eller merking for antigenet.
Forbindelsene omfatter generelt HER-2/neu polypeptider eller DNA-molekyler som styrer ekspresjonen av slike peptider, hvori DNA-molekylene kan bli presentert i en viral vektor. Som påpekt over så omfatter polypeptidene som anvendes varianter av polypeptidet i SEKV ID NO:2 fra aminosyre 676 til aminosyre 1255 og som bevarer evnen til å stimulere en immunrespons. Slike varianter omfatter ulike strukturelle former av det native polypeptidet. På grunn av tilstedeværelsen av ioniserbare amino og karboksylgrupper så kan f .eks HER-2/neu polypeptid opptre i form av et surt eller basisk salt eller det kan være i nøytral form. Individuelle aminosyre rester kan også bli modifisert ved oksydasjon eller reduksjon.
Varianter innenfor rammen omfatter også polypeptider hvor det primære aminosyrestruktur native HER-2/neu polypeptidet er modifisert ved dannelse av kovalente eller aggregerte konjugater med andré peptider eller polypeptider, eller kjemiske grupper slik som glykosylgrupper, lipider, fosfat, acetylgrupper og slike. Kovalente derivater kan bli laget for eksempel ved å lenke sammen spesielle funksjonelle grupper til aminosyresidekjeder eller til N- eller C-terminalen.
HER-2/neu polypeptider kan være med eller uten glykosylering. Polypeptider uttrykt i gjær eller pattedyr ekspresjonssystemer kan være like eller noe forskjellig i molekylvekt og glykosyleringsmønster enn hva det native molekylet er, avhengig av ekspresjonssystemet. For eksempel så vil ekspresjon av polypeptid kodende DNA i bakterier slik som E. coli typisk fremskaffe ikke-glykosylerte molekyler. N-glykosyleringsseter på eukaryote proteiner er karakterisert ved aminosyretripletten Asn-ArZ, hvor Ai er enhver aminosyre unntatt Pro og Z er Ser eller Thr. Varianter av HEPi-2/neu polypeptider som har inaktiverte N-glykosyleringsseter kan bli produsert ved teknikker som er vel kjent for fagmannen, slik som oligonukleotidsyntese og ligerings- eller setespesifikke mutageneseteknikker. Alternativt så kan N-kjedede glykosyleringsseter bli tilført til et HER-2/neu polypeptid.
Polypeptider og også varianter omfattes av polypeptidet i SEKV ID NO:2 (det vil si varianter av et polypeptid som har aminosyresekvensen til SEKV ID NO:2 fra aminosyre 676 til aminosyre 1255) som har en aminosyresekvens som er forskjellig fra denne sekvensen på grunn av en eller flere delesjoner, innskudd, substitusjoner eller andre modifikasjoner. I en utførelsesform så er slike varianter vesentlig homologe med det native HER-2/neu polypeptidet og har beholdt evnen til å stimulere en immunrespons. «Vesentlig homolog» som benyttet heri refererer til aminosyresekvenser som kan være kodet av DNA-sekvenser som har evnen til å hybridisere under moderat stringente betingelser til en nukleotidsekvens komplementær til den naturlig forekommende DNA-sekvensen som koder for den spesifiserte polypeptiddelen i SEKV ID NO:2 heri (det vil si nukledtid 2026 til 3765 i SEKV ID NO:1). Egnede moderat stringente betingelser omfatter forvasking i en løsning av 5 x SSC, 0,5 % SDS, 1,0 mM EDTA (pH 8,0); hybridisering ved 50°C - 65°C, 5 x SSC, over natten; etterfulgt av vasking to ganger ved 65°C i 20 minutter med hver av 2x, 0,5x og 0,2x SSC (inneholdende 0,1 % SDS). Slike hybridiserende DNA-sekvenser er også beskrevet. Effekten av en hver slik modifikasjon på HER-2/neu polypeptidets evne til å produsere en immunrespons kan lett bli bestemt (for eksempel ved å analysere evnen til det muterte HER-2/neu polypeptidet til å indusere T-cellerespons ved for eksempel å benytte metoden som er beskrevet heri).
Generelt sett så kan aminosyresubstitusjoner utføres på mange ulike måter for å frembringe varianter som kan anvendes innenfor den foreliggende oppfinnelsen. For det første så kan aminosyresubstitusjoner for eksempel utføres konservativt, det vil si den aminosyren som skal settes inn erstatter en aminosyre med lignende egenskaper, slik at en fagmann innenfor peptidkjemi ville forutsette at den sekundære strukturen og den hydropatiske naturen til polypeptidet i vesentlig grad ville være uendret. Generelt sett så representerer de følgende gruppene av aminosyrer konservative forandringer: (1) ala, pro, gly, glu, asp, gin, asn, ser, thr; (2) cys, ser, tyr, thr; (3) val, ile, leu, met, ala, phe; (4) lys, arg, his; og (5) phe, tyr, trp, his. Et eksempel på en ikke-konservativ utskiftning er å erstatte en aminosyre fra en gruppe med en aminosyre fra en annen gruppe.
En annen måte å utføre aminosyresubstitusjoner på for å produsere varianter, er å identifisere og bytte ut aminosyrer i T-celledomener med potensialet til å binde til klasse II MHC-molekyler (for CD4+ T-cellerespons) eller klasse I MHC-molekyler (for CD8+ T-celle respons). Peptidsegmenter (av et HER-2/neu polypeptid) med et domene med teoretisk potensiale til å binde til klasse II MHC-molekyler kan bli identifisert med datamaskinanalyse. For eksempel en proteinsekvensanalysepakke, T Sites, som inkorporerer flere datamaskinalgoritmer designet for å skjelne potensielle seter for T-celle gjenkjenning kan bli benyttet (Feller and de la Cruz, Nature 349: 720-721,1991). To søkealgoritmer blir benyttet: (1) AMPHI-algoritmen beskrevet av Margalit (Feller and de la Cruz, Nature 349:720-721,1991; Margalit et al, J. Immunol. 138:2213-2229,1987) som identifiserer epitopmotiver i samsvar med alfa-heliks periodisitet og amfifilisitet; (2) Rothbard og Tylor-algoritmen identifiserer epitopmotiver i forhold til ladnings og polaritetsmønstre (Rothbard og Taylor, EMBO 7:93-100, 1988). Segmenter med begge motiver er mest egnet for binding til klasse II MHC-molekyler. CD8+ T-celler gjenkjenner peptider bundet til klasse I MHC-molekyler. Falk et al. har fastslått at peptidbindrng til spesielt MHC-molekyler deler merkbare sekvensmotiver (Falk et al, Nature 351:290-296,1991). Et peptidmotiv for binding i gropen av HLA-A2.1 har blitt bestemt ved Edman degradering av peptider fjernet fra HLA-A2.1 molekyler på en dyrket cellelinje (Tabell 2, fra Falk et al., supra). Metoden identifiserer det typiske eller gjennomsnittlige HLA-A2.1 bindingspeptidet til å være 9 aminosyrer langt med dominante anker-enheter i posisjonene 2 (L) og 9 (V). Vanlig forekommende sterke bindingsenheter har blitt identifisert i posisjonene 2 (M), 4 (E,K), 6 (V) og 8 (K). Det identifiserte domenet representerer gjennomsnittet av mange bindingspeptider.
Det utledede peptidmotivet som nettopp beskrevet er ikke spesielt stringent. Noen HLA-A2.1 bindingspeptider inneholder ikke både dominante ankerenheter og aminosyrene som dekker sidene av de dominante ankerenhetene spiller en stor rolle i det å tillate eller ikke tillate binding. Alle peptidene med det tidligere definerte bindingsdomenet vil ikke binde og noen peptider uten motivet vil binde. Imidlertid så har det angitte motivet nok troverdighet til å tillate identifikasjon av noen peptider som er i stand til å binde. Det skal bemerkes at det angitte HLA-A2.1 domenet plasserer 6 aminosyrer mellom de dominante ankeraminosyrene ved enhet 2 og 9.
Etterfølgende identifikasjon av peptiddomenet innenfor et HER-2/neu polypeptid kan man utføre konservativ eller ikke-konservativ aminosyresubstitusjoner. Den siste typen av substitusjoner er ment å produsere et forbedret polypeptid som er mer potent og/eller mer vidtgående kryss-reaktivt (MHC-polymorfisme). Et eksempel på et mer potent polypeptid er et som binder med høyere affinitet til det samme MHC-molekyl som det naturlige polypeptid uten å påvirke gjenkjenningen ved T-celler spesifikke for det naturlige polypeptidet. Et eksempel på et polypeptid med en bredere kryss-reaktivitet er et som induserer mer vidtgående kryss-reaktive immunresponser (det vil si binder til en større gruppe av MHC-molekyler) enn det naturlige polypeptidet. På samme måten kan en eller flere aminosyrer som har sitt sete mellom peptiddomenet og som har en mellomroms-funksjon (for eksempel som ikke interagerer med MHC-molekylet eller T-celle reseptoren) bli substituert konservativt eller ikke-konservativt. Det vil åpenbart for fagmenn at polypeptider som inneholder en eller flere aminosyresubstitusjoner kan bli testet for fordelaktige eller ufordelaktige immunologiske interaksjoner ved mange ulike metoder også omfattende de som er beskrevet heri for analyse av evnen til å stimulere T-cellegjenkjenning.
Varianter innenfor området kan også, eller alternativt inneholde andre modifikasjoner, omfattende fjerning og innsetting av aminosyrer som har minimal påvirkning på den ønskede immunologiske egenskapen til polypeptidet. Det vil bli satt pris på av fagmannen at de trunkerte formene eller ikke-native forlengede formene av HER-2/neu polypeptidet kan bli benyttet, forutsatt at de ønskede immunologiske egenskapene er minst tilnærmet ekvivalente til det native fullengde HER-2/neu polypeptidet. Cystein-rester kan bli fjernet eller byttet ut med en annen aminosyre for å forhindre dannelsen av ukorrekte intramolekylære disulfidbroer ved renaturering. Andre fremgangsmåter for mutagenese omfatter modifikasjon av tilgrensende dibasiske aminosyre rester for å øke ekspresjonen i gjærsystemer hvor KEX2-protease aktivitet er tilstede.
Et HER-2/neu polypeptid kan vanligvis bli oppnådd ved å benyttet genomisk eller cDNA-klon som koder for proteinet. En genomisk sekvens som koder for full lengde HER-2/neu er vist i SEKV ID NO:1, og den avledede aminosyresekvensen er vist i SEKV ID NO:2. Slike kloner kan bli isolert ved å undersøke et passende ekspresjonsbibliotek for kloner som uttrykker HER-2/neu protein. Tillagingen av biblioteket og undersøkelsen kan vanligvis bli laget ved bruk av metoder kjent for fagmannen, slik som metodene beskrevet i Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories, Cold Spring Harbor, N.Y., 1989, som herved er inkorporert som referanse. Kort forklart så kan bakteriofag ekspresjonsbibliotek bli platet ut og overført til filtre. Filtrene kan så bli inkubert med en deteksjonsreagens. I sammenheng med denne oppfinnelsen så er en «deteksjonsreagens» en hver forbindelse som har evnen til å binde HER-2/neu protein og som så kan bli detektert ved ulike metoder kjent for fagmannen. Typiske deteksjonsreagenser omfatter et «bindingsmiddel» slik som Protein A, Protein G, IgG eller et lektin bundet til en reportergruppe. Reportergrupper som foretrekkes omfatter enzymer, substrater, kofaktorer, inhibitorer, fargestoffer, radionuklider, selvlysende grupper, fluorescerende grupper og biotin. Mer foretrukket så er reporter gruppen pepperrot peroksidase som kan bli detektert ved inkubasjon med et substrat slik som tetrametyl-benzidin eller 2,2'-azino-di-3-etylbenztioazolinsulfonsyre. Plakk inneholdende genomiske eiler cDNA-sekvenser som uttrykker HER-2/neu protein er isolert og renset ved teknikker kjent av fagmannen. Egnede metoder kan for eksempel finnes i Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories, Cold Spring Harbor, N.Y., 1989.
Varianter av polypeptidet som beholder evnen til å stimulere en immunrespons kan generelt bli identifisert ved å modifisere sekvensen ved en eller flere av metodene beskrevet over og analysere de fremkommende polypeptidene med hensyn på evnen til å stimulere en immunrespons, for eksempel en T-celle respons. For eksempel så kan en slik analyse utføres ved å kontakte T-celler med det modifiserte pr/peptidet og analysere responsen. Naturlig forekommende varianter av polypeptidet kan også bli isolert ved for eksempel å undersøke et egnet cDNA eller genomisk bibliotek med en DNA-sekvens som koder for polypeptidet eller en variant derav.
De ovenfor beskrevne sekvensmodifikasjonene kan bli innført ved bruk av standard rekombinante teknikker eller ved automatisert syntese av det modifiserte polypeptidet. For eksempel så kan mutasjoner bli innført på spesielle steder ved å syntetisere oligonukleotider omfattende en mutert sekvens flankert med restriksjonsseter som muliggjør ligering til fragmenter av den native sekvensen. Den resulterende rekonstruerte sekvensen som følger etter ligasjonen koder for en analog som har den bestemte aminosyren innført, byttet ut eller fjernet.
Alternativt så kan oligonukleotid-rettete setespesif ikke mutageneseprosedyrer bli benyttet for å fremskaffe et gen hvor spesielle kodoner er endret i henhold til den substitusjonen, fjerningen eller innføringen som behøves. Metoder som eksemplifiserer det å lage en endring slik som beskrevet over er brakt for dagen av Walder et al., Gene 42:133,1986; Bauer et al, Gene 37:73,1985; Craik, BioTechniques, January 1985,12-19, Smith et al., Genetic Engeneering: Principles and Methods, Plenum Press, 1981; og U.S. Patentnummer 4,518,584 og 4,737,462.
Mutasjoner i nukleotidsekvensene konstruert for ekspresjon av slike HER-2/neu polypeptider må selvfølgelig beholde leserammen for den kodende sekvensen og må fordelaktig ikke danne komplementære regioner som kan hybridisere til å lage
sekundære mRNA-strukturer, slik som løkker eller hårnåler, som ufordelaktig vil påvirke translasjonen av mRNA. Selv om et mutasjonssete kan bestemmes på
forhånd så er det ikke nødvendig at naturen av mutasjonen per se kan bli bestemt på forhånd. For eksempel for å selektere for optimale karakteristika av mutanter for et gitt sete kan det utføres tilfeldig mutagenese på målkodonet og de uttrykte HER-2/neu polypeptidmutantene undersøkes for den bestemte aktiviteten.
Ikke alle mutasjonene i en nukleotidsekvens som koder for et HER-2/neu polypeptid vil bli uttrykt i sluttproduktet. For eksempel så kan nukleotidsubstitusjoner lages for å øke ekspresjonen, primært for å unngå sekundære strukturløkker i det transkribert mRNA (se for eksempel Europeiske patentsøknad 75.444A), eller for å fremskaffe kodoner som er lettere uttrykt av den valgte verten, slik som vel kjente foretrukne E. coli kodoner for Eco//-ekspresjon.
Polypeptidene anvendt i den foreliggende oppfinnelsen, både naturlig forekommende og modifiserte, er foretrukket produsert med rekombinante DNA metoder. Slike metoder omfatter innføring av en DNA-sekvens som koder for et HER-2/polypeptid inn i en rekombinant ekspresjonsvektor og uttrykke DNA-sekvensen i et rekombinant bakterie, pattedyr eller insektcelleekspresjonssystem under betingelser som fremmer ekspresjon. DNA-sekvensene som koder for polypeptider fremskaffet av denne oppfinnelsen kan bli samlet fra cDNA-fragmenter og korte oligonukleotidlinkere eller fra en serie av oligonukleotider for å fremskaffe et syntetisk gen som er i stand til å bli satt inn i en rekombinant ekspresjonsvektor og uttrykt i en rekombinant transskripsjonsenhet.
Rekombinante ekspresjonsvektorer inneholdende en DNA-sekvens som koder for et HER-2/neu polypeptid funksjonelt bundet til passende transskripsjons eller translasjons regulatoriske elementer avledet fra pattedyr, bakterie, virale eller insekt gener. Slike regulatoriske elementer omfatter en transskripsjonspromoter, en valgfri operatorsekvens for å kontrollere transkripsjon, en sekvens som koder for et passende mRNA ribosomalt bindingssete, en sekvens som kontrollerer termineringen av transkripsjon og translasjon. I tillegg kan det inkorporeres et utgangspunkt for replikasjon og en valgbar markør som letter gjenkjenningen av transformanter.
DNA-regioner er funksjonelt bundet når de er funksjonelt relaterte til
hverandre. For eksempel, DNA for et signalpeptid (sekresjonsleder) er funksjonelt bundet til DNA for et polypeptid hvis det blir uttrykt som en forløper som deltar i sekresjonen av polypeptidet; en promoter er funksjonelt bundet til en kodende
sekvens hvis det kontrollerer transkripsjonen av sekvensen; eller et ribosom - bindingssete er funksjonelt bundet til en kodende sekvens hvis det er plassert slik at
det tillater translasjon. Generelt så betyr funksjonelt bundet tilstøtende og i tilfellet med sekresjonsledere betyr det i leserammen. DNA-sekvenser som koder for HER-2/neu polypeptider som skal uttrykkes i en mikroorganisme vil fortrinnsvis ikke inneholde noen introns som kan terminere transkripsjonen av DNA til mRNA.
Ekspresjonsvektorer for bruk i bakterier kan inneholde en selekterbar markør og replikasjon av bakteriell opprinnelse utledet fra kommersielt tilgjengelige plasmider inneholdende genetiske elementer av den vel kjente kloningsvektoren pBR322 (ATCC 37017). Slike kommersielle vektorer omfatter for eksempel pKK233-3 (Pharmacia Fine Chemicals, Uppsala, Sverige) og pGEM1 (Promega Biotec, Madison, Wl, USA). Disse pBR322 «ryggrads» seksjonene blir kombinert med en passende promotor og den strukturelle sekvensen som skal uttrykkes. E. coli er typisk transformert ved bruk av derivater av pBR322, et plasmid avledet fra en E. coli stamme (Bolivar et. al., Gene 2:95,1977). pBR322 inneholder gener for ampicillin og tetracyclin resistens og frembringer derved enkle metoder for identifisering av transformerte celler.
De vanligst benyttede promotorene i rekombinant bakterielle ekspresjons vektorer omfatter p-laktamase, (penicillinase) og laktose promotorsystem (Chang et al., Nature 275:615,1978; og Goeddel et al., Nature 281:544,1979), tryptofan (trp) promotorsystemet (Goeddel et al., Nucl. Acids Res. 8:4057,1980; og Europeiske patentsøknad 36,776) og tac promotoren (Maniatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, p.412,1982). Et spesielt anvendbart bakterie ekspresjonssystem anvender fag X PL-promotoren og cl857ts termolabil hemmeren. Plasmidvektorer som er tilgjengelige fra The American Type Culture Collection og som inkorporerer derivater av X PL-promotoren omfatter plasmid pHUB2, fastboende i E. coli stamme JMB9 (ATCC 37092) og pPLc28, fastboende i E. coli RR1 (ATCC 53082).
Passende promotorsekvenser i gjærvektorer omfatter promotorene for metaliotionin, 3-fosfoglyceratkinase (Hitzeman etat., J. Biol. Chem. 255:2073,1980) eller andre glykolytiske enzymer (Hess et al., J. Adv. Enzyme Reg. 7:149,1968; og Holland et al., Biochem, 17:4900,1978) slik som enolase, glyceraldehyd-3-fosfat dehydrogenase, heksokinase, pyruvatdekarboksylase, fosfofruktokinase, glukose-6-fosfatisomerase, 3-fosfoglycerat mutase, pyruvatkinasé, triosefosfatisomerase, fosfoglukose isomerase og glukokinase. Anvendbare vektorer og promotorer for bruk i gjærekspresjon er videre beskrevet i R. Hitzeman et al., Europeiske patentsøknad 73,657.
Foretrukne gjærvektorer kan bli satt sammen ved anvendelse av DNA-sekvenser fra pBR322 for seleksjon og replikasjon i E. coli (Amp<r> gen og startpunkt for replikasjon) og gjær DNA-sekvensér omfattende an glukose-undertrykkende ADH2 promotor og a-faktor sekresjonsleder. ADH2-promotoren har blitt beskrevet av Russell et al. (J. Biol. Chem. 258:2674,1982) og Beier et al. (Nature 300:724,1982). Gjær a-faktor lederen, som styrer sekresjon av heterologe proteiner, kan bli satt inn mellom promotoren og det strukturelle genet for å bli uttrykt (se f.eks. Kurjan et al., Cell 30:933, 1982; og Bitter et al., Proe. Nati. Acad. Sei. USA 81:5330,1984). Leder sekvensen kan bli modifisert til å omfatte, nær sin 3'-ende, en eller flere anvendbare restriksjonsseter for å lette fusjonen av ledersekvensen til fremmede gener. Transkripsjons og translasjonskontrollsekvensene i ekspresjonsvektorene som skal anvendes for å transformere virveldyrceller kan skaffes fra virale kilder. For eksempel vanlig anvendte promotorer og forsterkere er avledet fra polyoma, adenovirus 2, simian virus 40 (SV40) og humant cytomegalovirus. DNA sekvenser avledet fra det SV40 virale genomet, for eksempel SV40 startpunktet, tidlig og sene promotorer, forsterkere, spleise og polyadenyleringsseter kan bli benyttet for å fremskaffe de andre genetiske elementene som behøves for ekspresjon av heterologe DNA-sekvenser. De tidlige og sene promotorene er spesielt anvendbare da begge er lette å oppnå fra virusene som et fragment som også inneholder SV40 viralt startsted for replikasjon (Fiers et al., Nature 273:113,1978). Kortere eller lengre SV40-fragmenter kan også bli benyttet forutsatt at den tilnærmet 250 bp lange sekvensen som strekker seg fra Hind lll-setet til Bgl ll-setet lokalisert i det virale startstedet for replikasjon er inkludert. Videre så kan virale genomiske promotorer, kontroll og/eller signalsekvenser benyttes forutsatt at slike kontrollsekvenser er kompatible med den vertscellen som velges. Vektorer kan eksempelvis bli konstruert som beskrevet av Okayama og Berg, Mol. Cell. Biol. 3:280,1983.
Et anvendbart system for stabil høynivå ekspresjon av pattedyrreseptor cDNA i C127 murine bryst epiteliale celler kan bli konstruert på vesentlig samme måte som beskrevet av Cosman et al.,(Mol. Immunol. 23:935,1986). En foretrukket eukaryot vektor for ekspresjon av LbelF4A-protein DNA er pDC406 (McMahan et al., EMBO J. 10:2821,1991), og inkluderer regulatoriske sekvenser avledet fra SV40, humant immunsviktvirus (HIV) og Epstein-Barr virus (EBV). Andre foretrukne vektorer omfatter pDC409 og pDC410 som er avledet fra pDC406. pDC410 ble avledet fra pDC406 ved å substituere EBV-startstedet for replikasjon med en sekvens som koder for SV40 stort T-antigen. pDC409 er forskjellig fra pDC406 i det at et Bgl ll-restriksjonssete utenfor det multiple kloningssete har blitt fjernet, noe som gjør Bgl II- setet innenfor det multiple kloningssetet unikt.
En anvendbar cellelinje som tillater episomal replikasjon av ekspresjonsvektorer slik som pDC406 og pDC409, som inneholder EBV-startstedet for replikasjon, er CV-1/EBNA (ATCC CRL 10478). CV-L/EBNA-cellelinjen ble avledet ved transfeksjon av CV-1 cellelinjen med et gen som koder for Epstein-Barr virus kjerne antigen-l (EBNA-1) og konstitutivt uttrykker EBNA-1 avledet fra human CMV umiddelbar-tidlig forsterker/promotor.
Transformerte vertsceller er celler som har blitt transformert eller transfektert med ekspresjonsvektorer konstruert ved anvendelse av rekombinante DNA-teknikker og som inneholder sekvenser som koder for et HER-2/neu polypeptid. Transformerte vertsceller kan uttrykke det ønskede HER-2/neu polypeptid, men vertsceller transformert med den hensikt å klone eller amplifisere HER-2/neu DNA trenger ikke uttrykke HER-2/neu polypeptidet. Uttrykte polypeptider kan med fordel bli utskilt i kultur supernatanten, avhengig av valgt DNA, men kan også bli deponert i cellemembranen.
Anvendbare vertsceller for ekspresjon av rekombinante proteiner omfatter prokaryoter, gjær og høyere eukaryote celler under kontroll av egnede promotorer. Prokaryoter omfatter gram-negative eller gram-positive organismer, for eksempel E. coli eller Bacilli. Høyere eukaryote celler omfatter etablerte cellelinjer av insekt- eller pattedyropprinnelse som beskrevet under. Cellefrie translasjonssystemer kan også bli benyttet til å produsere HER-2/neu polypeptider ved å anvende RNA'er avledet fra DNA-konstruksjoner. Egnede klonings- og ekspresjonsvektorer for bruk i bakterie, sopp, gjær og pattedyr cellulære verter er beskrevet for eksempel av Pouwels et al., Cloning Vectors: A Laboratory Manual, Elsevier, New York, 1985.
Prokaryote ekspresjonsverter kan bli benyttet for ekspresjon av HER-2/neu polypeptider som ikke har behov for omfattende proteolytisk og disulfidprosessering. Prokaryote ekspresjonsvektorer omfatter vanligvis en eller flere fenotypiske markører, for eksempel et gen kodende for proteiner som gir antibiotikaresistens eller som skaffer et autotroft behov, og et startpunkt for replikasjon som gjenkjennes av verten for å sikre amplifikasjon inne i verten. Anvendbare prokaryoteverter for transformasjon omfatter E. coli, Bacillus subtilis, Salmonella typhimurium og ulike arter innenfor slektene Pseudomonas, Streptomyces og Staphylococcus, selv om andre verter også kan bli benyttet.
Rekominante HER-2/neu polypeptider kan også bli uttrykt i gjærverter, mest foretrukket fra Saccharomyces-artene, slik som S. cerevisiae. Gjær av andre slekter slik som Pichia eller Kluyveromyces kan også bli anvendt. Gjærvektorer vil generelt sett omfatte et startpunkt for replikasjon fra 2p. gjærplasmidet eller en autonomt replikerende sekvens (ARS), en promotor, DNA kodende for HER-2/neu polypeptidet, sekvenser for polyadenylering og transkripsjonsterminering og et seleksjonsgen. Foretrukket så vil gjærvektorer omfatte et startsted for replikasjon og selekterbare markører som tillater transformasjon av både gjær og E. coli, for eksempel ampicillin-resistensgenet til E. coli og S. cerevisiae trpl-genet som tilveiebringer en seleksjons-markør for en mutant stamme av gjær som mangler evnen til å vokse i tryptofan, og en promotor avledet fra et høyt uttrykt gjærgen for å indusere transkripsjon av en strukturell sekvens nedstrøms. Tilstedeværelsen av trp1 lesjonen i gjærvertscelle-genomet tilveiebringer så et effektivt miljø for deteksjon av transformasjon ved vekst i fravær av tryptofan.
Anvendbare gjærtransfonmasjonsprotokoller er kjent for fagmannen. Et eksempel på teknikken er beskrevet av Hind et al. (Proe. Nati. Acad. Sei. USA 75:1929,1978), som involverer selektering for Trp+-transformanter i et selektivt medium inneholdende 0,67 % gjær nitrogenbase, 0,5 % casaminosyre, 2 % glukose, 10 mg/ml adenin og 20 mg/ml uracil. Vertsstammer transformert med vektorer inneholdende ADH2 promotoeren kan bli dyrket for ekspresjon i et rikt medium inneholdende 1 % gjærekstrakt, 2 % pepton og 1 % glukose supplementer! med 80 mg/ml adenin og 80 mg/ml uracil. Opphevelse av hemmingen av ADH2-promotoren finner sted når glukose i mediet er brukt opp. Urene gjærsupernatanter blir høstet ved filtrering og blir holdt ved 4°C inntil videre rensing.
Ulike pattedyr eller insekt (f.eks. Spodoptera eller Trichoplusia) cellekultursystemer kan også bli benyttet til å uttrykke rekombinant polypeptid. Bacuiovirus systemer for produksjon av heterologe polypeptider i insektceller er gjennomgått av for eksempel Luckow og Summers, Bie/Technology 6:47,1988. Eksempler på anvendbare pattedyr vertscellelinjer omfatter COS-7 linjer av apenyreceller, beskrevet av Gluzman (Cell 23:175,1981) og andre cellelinjer som har evnen til å uttrykke en passende vektor omfatter for eksempel CV-1/EBNA (ATCC CRL 10478), L-celler, C127,3T3, Kinesisk hamster ovarie (CHO), COS, NS-1, HeLa og BHK-cellelinjer. Pattedyr ekspresjonsvektorer kan omfatte ikke-transkriberte elementer slik som et startpunkt for replikasjon, en passende promotor og forsterker bundet til genet som skal uttrykkes, og andre 5' eller 3' flankerende ikke-transkriberte sekvenser, og 5' eller 3' ikke-translaterte sekvenser, slik som nødvendige ribosombindingsseter, et polyadenyleringssete, spleisede donor og akseptorseter og transkripsjonstermineringssekvenser.
Renset HER-2/neu polypeptider kan bli laget ved å dyrke egnede verts/vektor-systemer for å uttrykke de rekombinante translasjonsproduktene av DNA'ene i den foreliggende oppfinnelsen, som så blir renset fra kulturmediet eller celleekstrakter. For eksempel, supematanter fra systemer som utskiller rekombinant polypeptid i kulturmediet kan først bli konsentrert ved å anvende et kommersielt tilgjengelig protein konsentreringsfilter slik som en Amicon eller Millipore Pellicon utrafiltrerings enhet. Etter oppkonsentreringstrinnet så kan konsentratet bli satt på en passende rensingsmatriks. For eksempel en egnet affinitetsmatriks kan inneholde et strukturelt motsatt protein (det vil si et protein som HER-2/neu polypeptidet binder til i en spesifikk interaksjon basert på struktur) eller lektin eller antistoffmolekyl bundet til en egnet bærer. Alternativt så kan det anvendes en anipnbytterharpiks for eksempel en matriks eller et substrat som har hengende dietylaminoetyl (DEAE)-grupper. Matriksene kan være akrylamid, agarose, dekstran, cellulose eller endre typer som er vanlig å anvende i proteinrensing. Alternativt så kan det anvendes et kationbytter trinn. Egnede kationbyttere omfatter ulike uløselige matrikser inneholdende sulfopropyl eller karboksymetyl grupper. Sulfopropylgrupper er foretrukket. Gelfiltreringskromatografi kan også tilveiebringe en måte å rense HER-2/neu på.
Affinitetskromatografi er en foretrukket metode for å rense HER-2/neu polypeptider. For eksempel monoklonale antistoffer rettet mot HER-2/neu polypeptid kan også være anvendbare i affinitetskromatografi rensing ved å benytte metoder som er vel kjent innen for fagområdet.
Til slutt så kan et eller flere revers-fase høy-ytelses væskekromatogarfi (RP-HPLC) trinn ved anvendelse av et hydrofobt RP-HPLC medium (f.eks. silikagel som har hengende metyl eller andre alifatiske grupper) anvendes for videre rensing av en HER-2/neu polypeptid sammensetning. Noen eller alle av de ovennevnte rensings trinnene kan også bli benyttet i ulike kombinasjoner for å fremskaffe et homogent rekombinant polypeptid.
Rekombinant HER-2/neu polypeptid produsert i en bakteriekultur vil fortrinnsvis bli isolert ved først å ekstrahere fra cellepelleten, etterfulgt av et eller flere konsentrasjons, utsaltings, væskeionebytting eller størrelses kromatografi trinn. Høy-ytelses væskekromatografi (HPLC) kan bli benyttet som et siste renselsestrinn. Bakterieceller benyttet i ekspresjon av rekombinant LbelF4A-protein kan bli ødelagt ved enhver egnet metode omfattende frysing-tining sykluser, sonikering, mekanisk ødeleggelse eller ved bruk av celle lyseringsagenser.
Fermentering av gjær som uttrykker HER-2/neu polypeptid som et utskilt protein vil forenkle rensingen betraktelig. Utskilt rekombinant protein som resultat av en stor-skala fermentering kan bli renset ved metoder analoge til de som er beskrevet av Urdal et al. (J. Chromatog. 296:171,1984). Denne referansen beskriver to etterfølgende revers-fase HPLC trinn for rensing av rekombinant humant GM-CSF på en preparativ HPLC-kolonne.
Preparater av HER-2/neu polypeptider syntetisert i en rekombinant kultur kan inneholde ikke-HER-2/neu cellekomponenter, inkludert proteiner, i en mengde og av en karakter som avhenger av rensingstrinnene som er benyttet for å gjenvinne HER-2/neu polypeptidet fra kulturen. Disse komponentene vil vanligvis være av gjær, prokaryot eller ikke-human eukaryot opprinnelse. Slike preparater er typisk frie for andre proteiner som normalt vil bli assosiert med HER-2/neu proteinet slik det er funnet i naturen i sine opprinnelige arter.
Automatiserte synteser tilveiebringer en alternativ metode for å lage de foreliggende polypeptidene. For eksempel enhver kommersielt tilgjengelig fast-fase teknikk kan bli benyttet, slik som Merrifield fast-fase syntesemetode hvor aminosyrene sekvensielt blir addert på en voksende aminosyrekjede. (Se Merrifield, J. Am. Chem. Soc. 85:2149-2146,1963.) Utstyr for automatisert syntese av polypeptider er kommersielt tilgjengelig fra leverandører slik som Applied Biosystems, Inc. of Foster City, CA og kan vanligvis bli benyttet i henhold til produsentens instruksjoner.
Innenfor et aspekt av foreliggende oppfinnelse så kan anvendelse av et HER-2/neu polypeptid (eller et DNA-molekyl som styrer ekspresjonen av et slikt peptid) for å generere en immunrespons til et HER-2/neu protein (omfattende det som uttrykkes på en malignitet som er assosiert med et HER-2/neu onkogen) bli detektert. Representative eksempler på slike maligniteter omfatter bryst, eggstokk, tarm, lunge og prostatacancere. En immunrespons mot HER-2/neu proteinet, når det først er generert med et HER-2/neu polypeptid, kan vare lenge og kan bli detektert lenge etter immuniseringen, uavhengig om proteinet er tilstede eller fraværende i kroppen på tidspunktet for analyse. En immunrespons mot HER-2/neu protein som er fremskaffet ved reaksjon med et HER-2/neu polypeptid kan bli detektert ved å undersøke tilstedeværelsen eller fraværet eller forsterkning av spesifikk aktivering av CD4+ eller CD8+ T-celler. Mer spesifikt, T-celler isolert fra et immunisert individ ved rutine teknikker (slik som ved Ficoll/Hypaque tetthets gradient sentrifugering av perifere blod lymfocytter) blir inkubert med HER-2/neu protein. For eksempel så kan T-celler bli inkubert in vitro i 2-9 dager (mest vanlig 4 dager) ved 37°C med HER-2/neu protein (mest vanlig 5 ug/ml av helt protein eller regulert antall av celler syntetisert HER-2/neu protein). Det kan anbefales å inkubere en annen alikvote av T-celleprøven i fravær av HER-2/neu protein for at den kan opptrer som kontroll.
Spesifikk aktivering av CD4+ eller CD8+ T-cellene kan bli detektert på mange ulike måter. Metoder for å detektere spesifikk T-celleaktivering omfatter deteksjon av T-celleproliferasjon, produksjon av cytokiner (f.eks. lymfokiner) eller dannelsen av cytolytisk aktivitet (f.eks. dannelsen av cytotoksiske T-celler spesifikke for HER-2/neu protein). For CD4+ T-celler så ér en foretrukket metode for å detektere spesifikk T-celle aktivering å detektere proliferasjon av T-celler. For CD8+ T-celler så er en foretrukket metode for å detektere spesifikk T-celleaktivering å detektere dannelsen av cytolytisk aktivitet.
Deteksjon av proliferasjonen av T-celler kan bli utført ved ulike teknikker. For eksempel så kan T-celleproliferasjon detekteres ved å måle graden av DNA-syntese. T-celler som har blitt stimulert til å proliferere viser en øket grad av DNA-syntese. En typisk måte å måle graden av DNA-syntese er for eksempel ved puls-merking av kulturer av T-celler med tritium merket tymidin, en nukleosidforløper som blir inkorporert i nylig syntetisert DNA. Mengden av tritiummerket tymidin som er inkorporert kan bli bestemt ved å benytte væske scintilasjonsspektrofotometer. Andre måter å detektere T-celleproliferasjon omfatter måling av økninger i interleukin-2 (IL-2) produksjon, Ca<2+->flyt eller fargestoffopptak slik som 3-(4,5-dimetyltiazol-2-yl)-2,5-difenyl-tetrazolium. Alternativt så kan det måles syntese av lymfokiner (slik som interferon-gamma) eller man kan kvantifisere det relative antallet av T-celler som kan respondere på intakt p\ 85HER~ 2/ neu protein.
Ved anvendelse av eller ekspresjon av HER-2/neu polypeptid så kan T-celler som gjenkjenner HER-2/neu protein proliferere in vivo. For eksempel et medikament for immunisering med et HER-2/neu peptid (f.eks. som en vaksine) kan indusere videre økning av antallet av T-celler som er nødvendige for terapeutisk angrep mot en tumor som er assosiert med HER-2/neu onkogenet. Vanligvis så vil omtrent 0,01 ug/kg til omtrent 100 mg/kg kroppsvekt bli administrert ved den intradermale, subkutane eller intravenøse ruten. En foretrukket dose er på omtrent 1|xg/kg til omtrent 1 mg/kg, med omtrent 5 ug/kg til omtrent 200 ug/kg som spesielt foretrukket. Det vil være klart for fagmannen at antallet og frekvensen av administrasjonen vil være avhengig av responsen i pasienten. Det kan anbefales å benytte repeterende administrering av HER-2/neu polypeptidet. Det vil være åpenbart for fagmannen at mer enn et HER-2/neu polypeptid kan bli administrert enten samtidig eller sekvensielt. Foretrukne peptider for anvendelse i et medikament for immunisering er de som omfatter aminosyresekvensen i SEKV ID NO:2 startet ved omtrent lysinresten i aminosyreposisjon 676 og strukket til omtrent valinresten i aminosyreposisjon 1255. Det vil bli forstått av fagmannen at den foreliggende oppfinnelsen betrakter
anvendelsen av et intakt HER-2/neu plypeptid så vel som deling av et slikt polypeptid til et flertall av peptider. Hverken intakt p185<Her>'<2/>neu protein eller et peptid som har aminosyresekvensen for hele det ekstracellulære domenet (det vil si et peptid som har aminosyresekvens som i SEKV ID NO:2 fra aminosyreposisjon 1 opp til aminosyreposisjon 650, pluss eller minus omtrent en til fem posisjoner og med eller uten de første 21 aminosyreposisjonene) blir benyttet alene ved immunisering.
Et HER-2/neu polypeptid (eller nukleinsyre) er foretrukket formulert som en farmasøytisk blanding ved bruk i de ovennevnte metodene (f.eks. en vaksine). Farmasøytiske blandinger omfatter vanligvis en eller flere polypeptider i en blanding med en farmasøytisk akseptabel bærer, bindemiddel eller fortynner. Slike bærere vil bli ikke-toksiske for mottakeren ved de doser og konsentrasjoner som blir anvendt. Anvendelsen av et HER-2/neu polypeptid i forbindelse med kjemoterapeutiske agens er også studert.
I tillegg tii HER-2/neu polypeptidet (som fungere som et antigen) så kan det anbefales å inkludere andre komponenter i vaksinen, slik som en bærer for antigenavlevering og immunstimulerende substanser som er designet for å øke proteinets immunogenisitet. Eksempler på bærere for antigenavlevering omfatter aluminium salter, vann-i-olje emulsjoner, biodegraderbare olje bærere, olje-i-vann emulsjoner, biodegraderbare mikrokapsler og liposomer. Eksempler på immunostimulerende substanser (adjuvanser) omfatter N-acetylmuramyl-L-alanin-D-isoglutamin (MDP), lipopolysakkarider (LPS), glukan, IL-12, GM-CSF, gamma interferon og IL-15. Det vil være tydelig for fagmannen at et HER-2/neu polypeptid for en vaksine kan bli laget syntetisk eller bli naturlig avledet.
Mens enhver egnet bærer kjent av fagmannen kan bli benyttet i den farmasøytiske blandingen i følge foreliggende oppfinnelse så vil typen bærer variere avhengig av type administrasjon og hvorvidt en opprettholdt frigjøring er nødvendig. For parenteral administrering, slik som subkutan injeksjon, så inneholder bæreren med fordel vann, saltvann, alkohol, et fett en voks eller en buffer. For oral administrasjon så kan enhver av de ovennevnte bærerne eller en fast bærer slik som mannitol, laktose, stivelse, magnesiumstearat, natriumsakkarin, talkum, cellulose, glukose, sukrose og magnesiumkarbonat bli anvendt. Biodegraderbare mikrosfærer (f.eks. polylaktisk galaktid) kan også bli benyttet som bærer for den farmasøytiske blandingen i foreliggende oppfinnelse. Egnede biodegraderbare mikrosfærer er beskrevet for eksempel i US patent nummer 4,897,268 og 5,075,109. Et HER-2/neu polypeptid kan bli innkapslet inne i en biodegraderbar mikrosfære eller assosiert med overflaten på en mikrosfære. For eksempel i en foretrukket utforming , et polypeptid som har aminosyresekvensen i SEKV ID NO:2 fra aminosyre 676 til amniosyre 1255 er innkapslet inne i en biodegraderbar mikrosfære. I dette tilfellet så er det foretrukket at mikrosfæren er større enn tilnærmet 25 mikrons.
Farmasøytiske blandinger (inkludert vaksiner) kan også inneholde fortynnere slik som buffere, antioksydanter slik som askorbinsyre, lavmolekylære (mindre enn omtrent 10 enheter) polypeptider, protéiner, aminosyrer, karbohydrater omfattende glukose, sukrose eller dekstriner, chelateringsagenser slik som EDTA, glutation og andre stabilisatorer og bindemidler. Nøytralt buff ret saltvann eller saltvann blandet med ikke-spesifikk serum albumin er eksempler på egnede fortynnere. Foretrukket så er produktet formulert som et lyofilisat ved anvendelse av egnede bærerløsninger (f.eks. sukrose) som fortynner.
Som et alternativ for presentasjon av HER-2/neu polypeptider så omfatter den foreliggende oppfinnelsen blandinger som har evnen til å avlevere nukleinsyremolekyler som koder for HER-2/neu polypeptid. Slike blandinger omfatter rekombinante virale vektorer (f.eks. retroviruser (se WO 90/07936, WO 91/02805, WO 93/25234, WO 93/25698 og WO 94/03622), adenoviruser (se Berkner, Biotechniques 6:616-627,1988; Li et al., Hum. Gene Ther. 4:403-409,1993; Vincent et al., Nat. Genet. 5:130-134,1993; og Kolls et al., Proe. Nati. Acad. Sei. USA 91:215-219,1994), pox virus (se US patent nr. 4,769,330; US patent nr. 5,017,487 og WO 89/01973)), nakent DNA (se WO 90/11092), nukleinsyremolekyler kompleksbundet til et polykationisk molekyl (se WO 93/03709) og nukleinsyre assosiert med liposomer (se Wang et al., Proe. Nati. Acad. Sei. USA 84:7851,1987). I visse utførelses former så kan DNA være bundet til drept eller inaktivert adenovirus (se Curiel et al., Hum. Gene Ther. 3:147-154,1992; Cotton et al., Proe. Nati. Acad. Sei. USA 89:6094, 1992). Andre egnede blandinger omfatter DNA-ligand (se Wu et al., J. Biol. Chem. 264:16985-16987,1989) og lipid-DNA kombinasjoner (se Felgner et al., Proe. Nati. Acad. Sei. USA 84:7413-7417,1989). I tillegg så kan effektiviteten av opptak av nakent DNA inn i cellene bli øket ved å belegge DNA på bionedbrytbare kuler.
I tillegg til direkte in vivo prosedyrer så kan det benyttes ex vivo prosedyrer hvor cellene blir fjernet fra et dyr, modifisert og plassert inn i samme eller et annet dyr. Det vil være åpenbart at man kan benytte en hver av blandingene beskrevet over for introduksjon av HER-2/neu nukleinsyremolekyler inn i vevsceller i en ex vivo kontekst. Protokoller for virale, fysikalske og kjemiske metoder for opptak er vel kjente innenfor fagfeltet.
Følgelig så er anvendelsen av den foreliggende oppfinnelse nyttig for å øke eller frembringe, i en pasient eller cellekultur, en cellulær immunrespons (f. eks. frembringelsen av antigenspesifikke cytolytiske T-celler). Som anvendt heri, uttrykket "pasient" referere til et hvert varmblodig dyr, fortrinnsvis et menneske. En pasient kan lide av cancer, slik som brystcancer, eller være normal (det vil si fri for detekterbare sykdommer og infeksjoner). En "cellekultur" er enhver tilberedning av T-celler eller isolerte komponent celler (omfattende, men ikke begrenset til, makrofager, monocytter, B-celler og dendrittiske celler). Slike celler kan være isolert med enhver av en rekke av teknikker vel kjent for fagmannen (slik som Ficoll-hypaque gradient sentrifuge ring). Cellene kan (men trenger ikke) ha blitt isolert fra en pasient som lider av HER-2/neu assosiert malignitet og kan bli reintrodusert inn i en pasient etter behandling.
HER-2/neu polypeptid, i tillegg til å være immunogent for T-celler, viser seg også å stimulere B-celler til å produsere antistoffer som har evnen til å gjenkjenne HER-2/neu polypeptid. Antistoffer spesifikke (det vil si som viser en bindingsaffinitet på omtrent 10<7> liter/mol eller bedre) for HER-2/neu protein kan bli funnet i en rekke kroppsvæsker omfattende sera og bukhulevæske. I korthet, en kroppsvæskeprøve blir isolert fra et varmblodig dyr, slik som et menneske, for hvem det er ønsket å bestemme om antistoffer spesifikke for HER-2/neu polypeptider er til stede. Kroppsvæsken blir inkubert med HER-2/neu polypeptid under betingelser og i en tid som er tilstrekkelig for å tillate immun-komplekser til å dannes mellom polypeptidet og antistoffene spesifikke for proteinet. For eksempel, en kroppsvæske og HER-2/neu polypeptidet kan bli inkubert ved 4°C i 24-48 timer. Etter inkubasjonen så blir reaksjonsblandingen testet for tilstedeværelse av immunkomplekser. Deteksjon av et eller flere immunkomplekser dannet mellom HER-2/neu polypeptid og antistoffer spesifikke for HER-2/neu polypeptid kan bli utført ved en rekke kjente teknikker, slik som radioimmunoanalyser (RIA) og enzym-koblet immunosorbentanalyse (ELISA).
Egnede immunoanalyser omfatter den doble monoklonale antistoff lag immunoanalyseteknikken av David et al. (US patent 4,376,110); monoklonal antistoff laganalyse (Wide et al., i Kirkham og Hunter, eds., Radioimmunoassay Methods, E. og S. Livingstone, Edinburgh, 1970); "Western blot" metoden av Gordon et al. (US patent 4,452,901); immunopresipitering av merket ligand (Brown et al., J. Biol. Chem. 255:4980-4983,1980); enzym-koblet immunosorbentanalyse som beskrevet av for eksempel Raines og Ross (J. Biol. Chem. 257:5154-5160,1982); immunocytokjemiske teknikker omfattende anvendelsen av fluorokromer (Brooks et al., Clin. Exp. Immunol. 39:477,1980); og nøytralisering av aktivitet (Bowen-Pope et al., Proe. Nati. Acad. Sei. USA 81:2396-2400 (1984)) som alle herved er referert til. I tillegg til immunoanalysene beskrevet over så er et antall av andre immunoanalyser tilgjengelige, omfattende de som er beskrevet i US patent nr.: 3,817,827; 3,850,752; 3,901,654; 3,935,074; 3,984,533; 3,996,345; 4,034,074; og 4,098,876, som alle herved er inkorporert ved referanse.
Med hensyn på deteksjon så kan HER-2/neu polypeptid ("antigen") enten bli merket eller umerket. Når det er umerket så f inner antigenet anvendelse i agglutineringsanalyser. I tillegg så kan umerket antigen benyttes i kombinasjon med merkede molekyler som er reaktive med immunokomplekser eller i kombinasjon med merkede antistoffer (sekundære antistoffer) som er reaktive med antistoffet rettet mot HER-2/neu polypeptidet, slik som antistoffer spesifikke for immunoglobulin. Alternativt så kan antigenet bli direkte merket. I de tilfeller det er merket så kan reportergruppen omfatte radioisotoper, fluoroforer, enzymer, selvlysende stoffer eller fargepartikler. Disse og andre markører er vel kjent for fagmannen og er beskrevet for eksempel i de følgende US patenter: 3,766,162; 3,791,932; 3,817,837; 3,996,345 og 4,233,402.
Typisk i en ELISA-analyse så blir antigenet absorbert på en overflate av en mikrotiter brønn. Resterende proteinbindingsseter på overflaten blir så blokkert med en egnet forbindelse slik som bovin serum albumin (BSA), varme-inaktivert normalt geite serum (NGS) eller BLOTTO (buffret løsning av ikke-fet tørr melk som også inneholder et preserveringsmiddel, salter og en antiskumforbindelse). Brønnen blir så inkubert med en prøve som er mistenkt å inneholde spesifikt antistoff. Prøven kan bli påført ren eller mer vanlig så kan den fortynnes, vanligvis i en buffret løsning som inneholder en liten mengde (0,1 % - 5,0 % med hensyn på vekt) av protein, slik som BSA, NGS eller BLOTTO. Etter inkubasjon i en passe lang tid for å tillate spesifikk binding å oppstå, brønnen vaskes for å fjerne ubundet protein og så inkubert med en anti-type spesifikt immunoglobulinantistoff merket med en reportergruppe. Reportergruppen kan bli valgt fra en rekke enzymer inkludert pepperrotperoksydase, betagalaktosidase, alkalisk fosfatase og glukoseoksydase. En passende tid er tillatt for at spesifikk binding skal oppstå, så vaskes brønnen igjen for å fjerne ubundet konjugat og substratet for enzymet blir tilsatt. Det tillates at farge utvikles og den optiske tettheten av innholdet av brønnen er bestemt visuelt eller instrumentelt.
i en foretrukket utførelse er en reportergruppe bundet til HER-2/neu protein. Trinnet for deteksjon av immunokomplekser omfatter fjerning av vesentlig alt ubundet HER-2/neu protein og så detektere tilstedeværelse eller fravær av reportergruppe.
I en annen foretrukket utførelsesform så er en reportergruppe bundet til et sekundært antistoff som har evnen til å binde til antistoffet spesifikt for HER-2/neu protein. Trinnet for å detektere immunokomplekser omfatter (a) fjerning av vesentlig alt ubundet antistoff, (b) tilsetting av det sekundære antistoffet, (c) fjerning av vesentlig alt ubundet sekundært antistoff og videre (d) deteksjon av tilstedeværelse eller fravær av reportergruppe. I de tilfeller hvor antistoffet spesifikt for HER-2/neu protein er avldet fra et menneske så er det sekundære antistoffet et anti-menneske antistoff.
I en tredje utførelsesform for deteksjon av immunokomplekser så er reportergruppen bundet til et molekyl som har evnen til å binde til immunokomplekser. Trinnet for deteksjon omfatter (a) tilsetting av molekyl, (b) fjerning av vesentlig alt ubundet molekyl og så (c) deteksjon av tilstedeværelse eller fravær av reporter gruppen. Et eksempel på et molekyl som har evnen til å binde immunokomplekset er protein A.
Det vil bli klart for en fagmann at ulike metoder for deteksjon av immunokomplekser kan bli benyttet. Reportergrupper som egner seg for anvendelse i en hver av metodene omfatter radioisotoper, fluoroforer, enzymer, selvlysende forbindelser og fargede partikler.
I et beslektet aspekt så kan deteksjon av immunokomplekser dannet mellom HER-2/neu polypeptid og antistoffer som er spesifikke for HER-2/neu polypeptid i kroppsvæsker bli benyttet for å overvåke effektiviteten av cancer terapi, som involverer et HER-2/neu polypeptid, for en malignitet som er assosiert med HER-2/neu onkogen. Prøver av kroppsvæsker tatt fra et individ før og etter påbegynt terapi kan bli analysert for immunokomplekser ved metodene beskrevet over. Kort så sammenlignes antallet av immunokomplekser detektert i begge prøvene. En vesentlig endring i antallet av immunokomplekser i den andre prøven (etter påbegynt terapi) relativt til den første prøven (pre-terapi) gjenspeiler en vellykket terapi.
De påfølgende eksemplene er gitt for å illustrere oppfinnelsen.
EKSEMPLER
EKSEMPEL 1
EKSPRESJON OG RENSING AV REKOMBINANT HUMANT HER-2/A/EI/
POLYPEPTID
Det humane HER-2/neu polypeptidet ble oppnådd ved PCR metoden (f.eks.
US patent nr. 4,683,95; 4,683,202; 4,800,159) fra et plasmid laget i samsvar med Di Fiore et al (King et al., Science 229:974-976,1985; Di Fore et al., Science 237:178-182, 1987) ved anvendelse av oligonukleotidprimere som i tillegg introduserte et BssHII-restriksjonssete og et enterokinase proteasesete i 5' - enden og en EcoRI-sete
i 3' - enden. Primeren for 5 '- enden var
5'- TCTGGCGCGCTGGATGACGATGACAAGAAACGACGGCAGCAGAAGATC - 3'
(SEKV ID NO:3) mens primeren for 3' - enden var
5'- TGAATTCTCGAGTCATTACACTGGCACGTCCAGACCCAG - 3' (SEKV ID
NO:4). Det resulterende 1,8 kb PCR fragmentet ble subklonet inn i T-vektoren fra Novagen (Madison, Wl, USA) og sekvensen i selekterte kloner ble bestemt med en ABI 373 automatisert DNA-sekvensator (Applied Biosystems Inc., Foster City, CA, USA) ved anvendelse av overlappende sekvenseringsprimere. PCR-fragmenter med sekvens som korresponderte med den publiserte DNA-sekvensen til det humane HER-2/neu cDNA (SEKV ID NO:1; Coussens et al., Science 230:1132,1985; Yamaoto et al., Nature 319:230,1986) ble så bundet sammen i den korrekte leserammen via BSSHII setet til en E. colitioredoksinreduktase. En 6X histidin affinitetsmarkør anvendt i Ni-NTA affinitetsrensing av det uttrykte fusjonsproteinet ble inkorporert inn i tioredoksinreduktase fusjonspartneren. Dette cDNA for trxA-human HER-2/neu polypeptid fusjonsprotein ble subklonet inn i en modifisert pET ekspresjonsvektor for ekspresjon i E. coli.
Mens tioredoksinreduktase har blitt rapportert å stabilisere og løsliggjøre andre heterologe proteiner uttrykt i E. coli, så medførte den ingen signifikante fordeler for human HER-2/neu polypeptid ekspresjon i E. coli. Men en signifikant del av trxA-HER-2/neu polypeptid fusjonsproteinet var løselig, men en majoritet ble uttrykt i inklusjonslegemer. Fusjonsproteinet var også gjenstand for degradering under ekspresjon i E. coli. Tilstedeværelsen av tioredoksinreduktase fusjonspartneren kan imidlertid stabilisere proteinet under rensing. Tilgjengeligheten av monoklonale antistoffer mot tioredoksinreduktase tilveiebringer en godt egnet markør som kan følges under rensingen.
For rensing av det humane HER-2 /neu polypeptidet med tioredoksinreduktase fusjonspartneren inneholdende 6XHis affinitetsmarkøren, E. co//-pelleten ble resuspendert med proteaseinhibitorer og lysozym og sonikert. Inklusjonslegemene ble isolert ved sentrifugering og ble vasket 3X med deoksycholat, den siste vasken var over natt for å fjerne LPS. De vaskede inklusjonslegemene ble solubilisert i GuHCI for Ni-rensing. Ni-kolonnen ble eluert med imidazol i urea og dialysert mot 10 mM Tris pH 8. Utbyttet av HER -2/neu polypeptid ved bruk av denne protokollen var fra 80 % - 95 % rent full-lengde protein med degradert protein som hovedforurensning. Fra en 500 ml fermentering ble det gjenvunnet 20 mg. Det var > 98 % HER-2 / neu polypeptid. Teknikkene som benyttes heri er vel kjente for fagfolk innenfor området og har blitt beskrevet f. eks. i J. Sambrook et al., Molecular Cloning : A Laboratory Manual, 2nd Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989, Cold Spring Harbor, New York, USA.
EKSEMPEL 2
DENDRITTISKE CELLER KAN PRIME HUMANT HER - 21 NEU POLYPEPTID
A. Tilveiebringelse av DC- kulturer fra benmarg.
DC-kulturer ble tilveiebragt fra CD34+ hematopoetiske progenitor celler (HPC). CD34+ celler ble renset fra benmarg fra normale donorer ved anvendelse av celleseparasjonssystemet Ceprate LC Kit (CellPro, Bothell, WA, USA). Renheten av gjenvunnede CD34+ celler ble bestemt ved hjelp av flowcytometrianalyser til å være 80 % til 95 %. CD34+ celler ble dyrket i serum fritt medium (X-VIVO 10, Biowhittaker, Inc., Walkersville, MD, USA) tilsatt L-glutamin (584 ug/l), penicillin (10 IU7ml), streptomycin (100 ug/m|), 100 ng/ml humant rGM-CSF og 50 ng/ml humant rlL-6 (Immunex, Seattle, WA, USA). Etter dyrking i 0 til 17 dager ble cellene høstet og benyttet for fenotyping og T-celle stimuleringsanalyser. GM-CSF alene og i kombinasjon med IL-4 eller TNFa har blitt beskrevet å indusere in vitro vekst av DC. I eksperimenter hvor det anvendes KLH og OVA som antigener for å merke native T-celler, ga GM-CSF pluss IL-6 en tydelig sammenlignbar total stimulering, men med en lavere bakgrunn og derfor en høyere stimulerings indeks sammenlignet med GM-CSF pluss IL-4 eller TNFa.
B. T- cellemerkinasanalvse.
Benmarg avledede CD34+ HPC dyrket i serumfritt medium inneholdende GM-CSF og IL-6 ble benyttet som APC etter en dyrkningsperiode på 0-17 dager. Merkingsegenskapene til DC ble bestemt ved å dyrke dem sammen med autologe, naive T-lymfocytter i nærvær eller fravær av proteinantigenet rekombinant humant HER-2/neu polypeptid (hHNP) (10 u.g/ml). CD4+ T-lymfocytter ble isolert fra mononukleære celler i perifert blod ved positiv seleksjon ved bruk av immunoaffinitets kolonner (CellPro, Inc., Bothell, WA, USA). CD4+ CD45RA+ (naive) T-lymfocytter ble selektert fra CD4+ T-lymfocytter ved anvendelse av anti-CD45RA mAB direkte konjugert til FITC (Immunotech, Westbrook, ME, USA) ved flowcytometri sortering. CD4+ CD45RA+ T-cellene som ble oppnådd var 99% rene. DC-kulturer ble sådd ut i 96-brønners rundbunnede plater (Coming, Corning, NY, USA) i ulike konsentrasjoner og inkubert i 16-18 timer med en sluttkonsentrasjon av hHNP på 10 ug/ml. Antigenpulsede DC ble bestrålt (10 Gy) og autologe CD4+ CD45RA+ T-lymfocytter ble tilsatt (5 x 10<4>/brønn). Proliferativ respons av T-cellene ble målt ved å måle opptaket av (<3>H)tymidin /1uCi/brønn) som ble tilsatt på den 6. dagen, over 16-18 timer. Proliferasjonsanalysen ble utført i serumfritt og cytokinfritt medium. Resultatene er vist i Figur 1. Figur 2 viser resultatene fra testing av CD4+ T-celler, fra en normal donor, for respons til hHNP. Tilsvarende data ble oppnådd med T-celler fra ni ut av ti normale individer.
EKSEMPEL 3
ANALYSE FOR DETEKSJON AV LAV-FREKVENTE LYMFOCYTTFORLØPERE.
Tre analyser kan benyttes for deteksjon av CD4+-responser: en standard proliferasjonsanalyse, en screeningsmetode for lavfrekvente tilfeller og en begrenset fortynnings analyse (LDA). Konvensjonelle proliferasjonsanalyser er i stand til å detektere merkede responser på en enkel måte. Proliferasjonsrespons-stimuleringsindeksen tilveiebringer en løselig korrelasjon for forløperfrekvens av antigen-reaktive T-celler. Enhver spesifikk proliferasjonsrespons som detekteres fra PBL er betraktet å være en merket respons.
For å tilveiebringe en mer kvantitativ fortolkning av CD4+ T-celleresponser så ble det benyttet analysesystem utviklet for å detektere lav lymfocytt forløperfrekvensresponser (beskrevet nedenfor). Denne analysen er enkel og kostnadseffektiv. I tilfeller hvor man trenger mer presisjon så bestemmes forløperfrekvensen med begrenset fortynningsanalyse (Bishop and Orosz, Transplantation 47:671-677,1989).
Responser som er større en de som detekteres i normale individer er definert som en merket respons og tyder på en eksisterende immunitet. Lave responser som bare er detekterbare med LDA-betingelser er definert til å være ikke-merkede responser. Fravær av respons ved LDA eller en respons lavere en det som er definert ved normal populasjonsanalyse er definert til å være toleranse/anergi.
Vanligvis så kan merkede CD4+ T-celleresponser detekteres ved konvensjonelle proliferasjonsanalyser, derimot så er ikke-merkede responser ikke detekterbare i den samme analysen. Deteksjon av lavt antall av ikke-merkede T-celler er begrenset ved sammenblanding av bakgrunnsopptak av tymidin inkludert den autologt blandede lymfocyttresponsen (AMLR) med eget MHC-antigen pluss responser mot fremstilte egen-serum proteiner og eksogent tilsatte serum proteiner.
Et analysesystem for lav-frekvensresponser baser på Poisson stikkprøvestatistikker ble benyttet for å frembringe og detektere ikke-merkede T-celler (I: Pinnacles, Chiron Corporation, 1:1-2,1991). Denne typen analyser anvendes spesielt til lav frekvens tilfeller da den trenger mange paralleller for å detektere et statistisk signifikant antall positive dersom forløper frekvensen er mindre enn antallet av celler i en parallellkultur. Teoretisk så vil analysen korrigere for autologe responser ved å sette opp en kjent positiv kontroll (slik som PHA eller tetanustoksoid) og en kjent negativ kontroll (uten antigen) og evaluere alle datapunkter fra det laveste til det høyeste uten hensyn til hvilken eksperimentelle gruppe de tilhører. En grenseverdi er beregnet basert på ligningen grenseverdi = M + (F + SD), hvor M = aritmetisk middel, F = 3,29, en faktor fra tabeller over standardiserte normalfordelinger valgt slik at ikke mer enn 0,1% av de "sanne negative" av en normal fordelt bakgrunn vil være over grenseverdien, og SD = standard avvik. I denne screeningsanalysen vil brønner som ligger over grenseverdien bli betraktet som sanne positive som muligens inneholder en lymfocytt som spesifikt proliferere til antigenet av interesse. Selv om det er mulig å estimere frekvensen av lymfocytt forløpere ved denne metoden så krever en presis bestemmelse at man benytter formell LDA-analyse.
EKSEMPEL 4
HER-2/A/EL/ POLYPEPTIDBASERT VAKSINEFREMBRINGER
IMMUNITET FOR HER-2/A/EL/ PROTEIN
A. Dyr
Rotter benyttet i dette studiet var Fischer stamme 344 (CDF (F-344)/CrlBR)
(Charles River Laboratories, Portage Ml). Dyrene ble holdt ved dyrefasilitetene til University of Washington under spesifikke patogen frie betingelser og ble rutinemessig benyttet i eksperimentelle studier ved en alder på mellom 3 og 4 måneder.
B. Immuniserin<g>
Fischer-rotter ble immunisert med rekombinant rotte HER- 2/ neu polypeptid (rHNP) i flere ulike adjuvanser (MLP, Vaccel; Ribi, Bozeman, MT, USA). Dyrene mottok 50 ug av rHNP blandet med adjuvans subkutant. Tyve dager senere ble dyrene boostet med en andre immunisering med 50 fig rHNP som ble administrert på den samme måten. Tyve dager etter booster immuniseringen ble dyrene testet for tilstedeværelse av antistoffer rettet mot rotte HER-2/neu protein ( neu).
C. Cellelinjer
To cellelinjer ble benyttet som kilde for neu proteiner. SKBR3, en human brystkreft cellelinje som klart har overekspresjon av HER-2/neu (American Type Culture Collection, Rockville, MD) ble dyrket i kulturer med 10% føtalt kalveserum (FBS) (Gemini Bioproducts, Inc., Calabasas, CA) og RPMI. DHFR-G8, en NIH/3T3 cellelinje kotransfektert med cneu-p og pSV2-DHFR (American Type Culture Collection, Rockville, MD) ble benyttet som kilde for ikke-transformerende rotte neu protein (Bernards et al., Proe. Nati. Acad. Sei. USA 84:6854-6858,1987). Denne cellelinjen ble dyrket i 10% FBS og Dulbecco s modifiserte Eagle's medium med 4,5 g/L glukose. DHFR-G8 cellene ble ført gjennom det samme mediet supplert med 0,3 uM methotrexat ved hver tredje gjenomgang for å opprettholde neu transfektanten.
D. Tillaging av cellelvsater
Lysater av både SKBR3 og DHFR-G8 ble tillaget og benyttet som en kilde for neu protein. I korte trekk så ble det tilberedt en lyseringsbuffer bestående av tris base, natriumkiorid og Triton-X (1%) pH 7,5. Protease inhibitorer ble tilsatt; aprotinin (1 ug/ml), benzamidin (1 mM) og PMSF (1 mM). 1 ml av lysebufferen ble benyttet for å suspendere 10<7> celler. Cellene ble virvlet opp i 15 sekunder hvert 10 minutt over en tid på 1 time inntil de ble ødelagte. Alle prosedyrer ble utført på is i et rom med 4°C. Etter ødeleggelse ble cellene mikrosentrifugert ved 4°C i 20 minutter. Supernatanten ble fjernet fra cellerester og oppbevart i små alikoter ved -70°C inntil de skulle benyttes. Tilstedeværelse av humant og rotte neu i lysatene ble dokumentert ved Western blot analyser.
E. ELISA for rotte neu antistoffresponser
96-brønners Immulon 4 plater (Baxter SP, Remond, WA: Dynatech Laboratories) ble inkubert over natten ved 4°C med et rotte neu spesifikt mono-klonait antistoff (Onkogene Science), 7.16.4, ved en konsentrasjon på 10 ug/ml fortynnet i karbonatbuffer (like molare konsentrasjoner av Na2C03 og NaHCC-3 pH 9,6). Etter inkubering ble alle brønnene blokkert med PBS-1% BSA (Sigma Chemical, St Louis, MO, USA), 100 ul/brønn i 3 timer ved romtemperatur. Platene ble vasket med PBS-0,5% Tween og lysater av DHFRG8, en murin cellelinje transfektert med rotte neu DNA (American Type Culture Collection, Rockville, MD, USA); en kilde for rotte neu protein, bie tilsatt til alternerende rader. Platen ble inkubert overnatten ved 4°C. Platen ble så vasket med PBS-0,5% Tween og prøve-sera ble tilsatt med følgende fortynninger: 1:25 til 1:200. Serumet ble fortynnet i PBS-1% BSA-1% FBS-25 ug/ml muse lgG-0,01 % NaN3 og så serielt i PBS-1% BSA. 50 ul av fortynnet serum ble tilsatt / brønn og inkubert i 1 time ved romtemperatur. Hvert prøveserum ble tilsatt til en brønn med rotte neu og en brønn uten rotte neu. Saue anti-rotte lg F(ab)2 pepperrotperoksidase (HPR) ble tilsatt til brønnene med en fortynning på 1:5000 i PBS-1% BSA og inkubert i 45 minutter ved romtemperatur (Amersham Co., Arlington Heights, IL, USA). Etter den siste vasken ble det tilsatt TMB (Kirkegaard and Perry Laboratories, Gaithersburg, MD) fremkallingsreagens. Fargereaksjon ble avlest ved
en optisk tetthet på 450 nm. 00 for hver serumfortynning ble kalkulert som OD for rotte neu belagte brønner minus OD for PBS-1 % BSA-belagte brønner. Serum fra dyr immunisert med adjuvans alene og dyr immunisert med hHNP (fremmed protein) ble også evaluert på en tilsvarende måte. Resultatene er vist i Figur 3.
F. T- celle proliferasionsanalvse
For analyse av HER-2/neu polypeptid spesifikke responser: fersk milt eller lymfeknuteceller ble høstet ved mekanisk ødeleggelse og passering gjennom en nettingsil og vasket. 2 x 10<5> miltceller/ brønn og 1 x 105 lymfeknuteceller / brønn ble sådd ut på 96-brønners rundbunnede mikrotiterplater (Corning, Coming, NY) med 6 paralleller for hver eksperimentelle gruppe. Mediet består av EHAA 120 (Biofluids) med L-glutamin, penicillin/streptomycin, 2-merkaptoetanol og 5% FBS. Cellene ble inkubert med polypeptider. Etter 4 dager ble brønnene pulset med 1 uCi med (^H)tymin i 6-8 timer og deretter tellet. Dataene er fremstilt som en stimuleringsindeks (Sl) som er definert som gjennomsnittet av de eksperimentelle brønnene dividert med gjennomsnittet av kontrollbrønnene (uten antigen). For analyse an HER-2/neu proteinresponser: Milt eller lymfeknuteceller ble dyrket for 3 in vitro stimuleringer. På tiden for analysen ble 1 x 10<5> dyrkede milt eller lymfeknute T-celler sådd ut i 96 brønners mikrotiterplater som beskrevet over. Cellene ble inkubert med 1 |xg/ml rotte neu renset ved immunoaffinitetskolonne (fra DHFR-G8 celler som kilde for rotte neu). Etter 4 dager ble brønnene pulsert med 1 uCi med {<3>H)thymidin i 6-8 timer og deretter tellet. Dataene er fremstilt som en stimuleringsindeks som er definert som gjennomsnittet av de eksperimentelle brønnene dividert med gjennomsnittet av kontrollbrønnene (uten antigen).
EKSEMPEL 5
PRIMEDE RESPONSER TIL HUMANT HER-2 / NEU POLYPEPTID KAN BLI
DETEKTERT I PASIENTER MED BRYSTCANCER
Heparinisert blod ble oppnådd fra pasienter med fase II HER-2 / heu overekspresjonsbrystcancer. Perifere blod mononukleære celler (PBMC) ble separert med Ficoll Hypaque tetthetssentrifugering. PBMC ble sådd ut med en konsentrasjon på 2 x 105 /brønn i 96-brønners rundbunnede plater (Corning, Coming, NY, USA). 24 brønn paralleller ble utført for hver eksperimentelle gruppe. Antigener bestående av HER-2/ neu deriverte peptider (15-20 aminosyrer i lengde med oppført nummer på første aminosyren i sekvensen) 25 ug/ml, human HER-2 / neu polypeptid (hHNP) 1 ug/ml, tetanus toksid 1 ug/ml og p30 et peptid derivert fra tetanus 25 ng/ml ble tilsatt til hver av de 24 brønn replikatene. Analysen ble utført i medium inneholdende 10% humant serum. Proliferativ respons fra T-celler ble målt ved opptak av (<3>H) thymidin (1 u.Ci/brønn) tilsatt på dag 4 over 10 timer. Positive brønner, antigen reaktive brønner, ble registrert som positive dersom cpm var større enn gjennomsnittet og tre standardavvik av brønnene uten antigen. Resultatene er vist i Figur 4. Disse fase II brystcancerpasientene hadde en signifikant respons på rekombinant hHNP.

Claims (25)

1. Blanding, karakterisert ved at den omfatter en farmasøytisk akseptabel bærer eller fortynningsmiddel i kombinasjon med et polypeptid som er kodet for av en DNA-sekvens av nukleotidene 2026 til 3765 av SEQ ID NO: 1 for immunisering av et varmblodig dyr mot en malignitet i hvilken HER-2/neu onkogen er assosiert.
2. Blanding i følge krav 1,karakterisert ved at polypeptidet har aminosyresekvensen til SEQ ID NO: 2 fra lysin, aminosyre 676 til valin, aminosyre 1255, eller en variant derav som tilveiebringer i det minste en ekvivalent immunrespons.
3. Blanding I følge krav 2, karakterisert ved at polypeptidet har aminosyresekvensen til SEQ ID NO : 2 fra aminosyre 676 til aminosyre til aminosyre 1255.
4. Anvendelse av en blanding i følge et hvilket som helst av kravene 1 til 3 eller et polypeptid av blandingen for fremstilling av et medikament for immunisering av et varmblodig dyr mot en malignitet i hvilken HER-2/neu onkogen er assosiert.
5. Nukleinsyremolekyl for immunisering ved transfeksjon av celler av et varmblodig dyr med et nukleinsyremolekyl, karakterisert ved at nevnte nukleinsyremolekyl styrer ekspresjonen av et polypeptid kodet for av en DNA-sekvens av nukleotidene 2026 til 3765 av SEQ ID NO: 1.
6. Nukleinsyremolekyl i følge krav 5, karakterisert ved at cellene transfekteres ex vivo for påfølgende levering til dyret.
7. Anvendelse av et nukleinsyremolekyl ifølge krav 5 for fremstilling av et medikament for immunisering av et varmblodig dyr mot en malignitet i hvilken HER-2/neu onkogen er assosiert, nevnte nukleinsyremolekyl styrer ekspresjon av et polypeptid kodet for av en DNA-sekvens av nukleotidene 2026 til 3765 av SEQ ID NO
8. Viral vektor for immunisering av infiserte celler av et varmblodig dyr med vektoren, karakterisert ved at nevnte virale vektor styrer ekspresjon av et polypeptid kodet for av en DNA-sekvens av nukleotider 2026 til 3765 av SEQ ID NO: 1.
9. Viral vektor i følge krav 8, karakterisert ved at cellene infiseres ex vivo for påfølgende levering til dyret.
10. Anvendelse av viral vektor ifølge krav 8 for fremstilling av et medikament for immunisering av et varmblodig dyr mot en malignitet i hvilken HER-2/neu onkogen er assosiert, hvor nevnte virale vektor styrer ekspresjon av et polypeptid kodet for av en DNA-sekvens av nukleotider 2026 til 3765 av SEQ ID NO: 1.
11. Blanding, karakterisert ved at den omfatter en farmasøytisk akseptabel bærer eller fortynningsmiddel i kombinasjon med et polypeptid kodet for av en DNA-sekvens av nukleotider 2026 til 3765 av SEQ ID NO : 1 for utløsning eller forsterkning av en immunrespons til HER-2/neu protein.
12. Blanding i følge krav 11,karakterisert ved at polypeptidet har aminosyresekvensen til SEQ ID NO: 2 fra lysin, aminosyre 676 til valin, aminosyre 1255, eller en variant derav som tilveiebringer i det minste en ekvivalent immunrespons.
13. Blanding I følge krav 12, karakterisert ved at polypeptidet har aminosyresekvensen til SEQ ID NO: 2 fra aminosyre 676 til aminosyre til aminosyre 1255.
14. Anvendelse av en blanding i følge krav 11,12 eller 13 for fremstilling av et medikament for utløsning eller forsterkning av en immunrespons til HER-2/neu protein.
15. Nukleinsyremolekyl i følge krav 5, for utløsning eller forsterkning av en immunrespons til HER-2/neu protein.
16. Anvendelse av et nukleinsyremolekyl i følge krav 5, for fremstilling av et medikament for utløsning eller forsterkning av en immunrespons til HER-2/neu protein.
17. Nukleinsyremolekyl eller anvendelse av et nukleinsyremolekyl i følge et hvilket som helst av kravene 5 til 7,15 eller 16, karakterisert ved at det kodete polypeptidet har aminosyresekvensen til SEQ ID NO: 2 fra lysin, aminosyre 676 til valin, aminosyre 1255, eller en variant derav for å tilveiebringe i det minste en ekvivalent immunrespons.
18. Nukleinsyremolekyl eller anvendelse av et nukleinsyremolekyl i følge et hvilket som helst av kravene 5 til 7,15 eller 16, karakterisert ved at det kodete polypeptidet har aminosyresekvensen til SEQ ID NO: 2 fra aminosyre 676 til aminosyre 1255.
19. Viral vektor i følge krav 8, for utløsning av, eller forsterkning av en immunrespons til HER-2/neu protein.
20. Anvendelse av en viral vektor i følge krav 8 for fremstilling av et medikament for utløsning av, eller forsterkning av en immunrespons til HER-2/neu protein.
21. Viral vektor eller anvendelse av en viral vektor i følge et hvilket som helst av kravene 8 til 10,19 eller 20, karakterisert ved at polypeptidet har aminosyresekvensen til SEQ ID NO: 2 fra lysin, aminosyre 676 til valin, aminosyre 1255, etler en variant derav for å tilveiebringe i det minste en ekvivalent immunrespons.
22. Viral vektor eller anvendelse av viral vektor i følge et hvilket som helst av kravene 8 til 10,19 eller 20, karakterisert ved at polypeptidet har aminosyresekvensen til SEQ ID NO : 2 fra aminosyre 676 til aminosyre 1255.
23. Blanding eller anvendelse derav i følge et hvilket som helst av kravene 1 til 4 eller 11 til 14, karakterisert ved at polypeptidet er knyttet til et peptid eller polypeptid.
24. Blanding eller anvendelse derav i følge et hvilket som helst av kravene 1 til 4 eller 11 til 14, karakterisert ved at polypeptidet er trunkert.
25. Blanding i følge krav 24, karakterisert ved at polypeptidet er knyttet til et peptid eller polypeptid.
NO19974502A 1995-03-31 1997-09-29 Blanding som omfatter et polypeptid, nukleinsyre som styrer ekspresjonen av polypeptidet og viral vektor, samt anvendelser derav for fremstilling av et medikament. NO321941B1 (no)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/414,417 US5801005A (en) 1993-03-17 1995-03-31 Immune reactivity to HER-2/neu protein for diagnosis of malignancies in which the HER-2/neu oncogene is associated
PCT/US1996/001689 WO1996030514A1 (en) 1995-03-31 1996-03-28 Intracellular domain of the her-2/neu protein for prevention or treatment of malignancies

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NO974502D0 NO974502D0 (no) 1997-09-29
NO974502L NO974502L (no) 1997-11-27
NO321941B1 true NO321941B1 (no) 2006-07-24

Family

ID=23641368

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO19974502A NO321941B1 (no) 1995-03-31 1997-09-29 Blanding som omfatter et polypeptid, nukleinsyre som styrer ekspresjonen av polypeptidet og viral vektor, samt anvendelser derav for fremstilling av et medikament.
NO20061723A NO20061723L (no) 1995-03-31 2006-04-19 Intercellulaert domene av HER-2/neu-protein for forhindring eller behandling av malignitet

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20061723A NO20061723L (no) 1995-03-31 2006-04-19 Intercellulaert domene av HER-2/neu-protein for forhindring eller behandling av malignitet

Country Status (19)

Country Link
US (9) US5801005A (no)
EP (2) EP1418235A3 (no)
JP (2) JP4510147B2 (no)
KR (1) KR100554186B1 (no)
CN (3) CN1150318C (no)
AT (1) ATE299180T1 (no)
AU (1) AU708237B2 (no)
BR (1) BR9607889A (no)
CA (1) CA2216601C (no)
CZ (2) CZ296618B6 (no)
DE (1) DE69634912T2 (no)
DK (1) DK0817846T3 (no)
ES (1) ES2245783T3 (no)
HU (1) HUP9801826A3 (no)
NO (2) NO321941B1 (no)
NZ (1) NZ306616A (no)
PT (1) PT817846E (no)
RU (2) RU2236461C2 (no)
WO (1) WO1996030514A1 (no)

Families Citing this family (338)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7252829B1 (en) * 1998-06-17 2007-08-07 Idm Pharma, Inc. HLA binding peptides and their uses
JPH10510988A (ja) * 1994-12-14 1998-10-27 ザ スクリップス リサーチ インスティテュート 腫瘍−特異的細胞毒性ｔ細胞のインビボ活性化
US6514942B1 (en) * 1995-03-14 2003-02-04 The Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions for stimulating T-lymphocytes
US6267958B1 (en) * 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
US6685940B2 (en) 1995-07-27 2004-02-03 Genentech, Inc. Protein formulation
WO1997042973A1 (en) * 1996-05-15 1997-11-20 Altarex, Corp. Method and composition for reconforming multi-epitopic antigens to initiate an immune response
US8038994B2 (en) 1996-05-15 2011-10-18 Quest Pharmatech Inc. Combination therapy for treating disease
US20080220012A1 (en) * 1996-05-15 2008-09-11 Ragupathy Madiyalakan Therapeutic Compositions that alter the immune response
US7371376B1 (en) 1996-10-18 2008-05-13 Genentech, Inc. Anti-ErbB2 antibodies
AU6020998A (en) 1997-01-08 1998-08-03 Life Technologies, Inc. Methods for production of proteins
US6884435B1 (en) * 1997-01-30 2005-04-26 Chiron Corporation Microparticles with adsorbent surfaces, methods of making same, and uses thereof
DE69812941T2 (de) * 1997-01-30 2004-02-05 Chiron Corp. (N.D.Ges.D. Staates Delaware), Emeryville Verwendung von mikropartikeln mit adsorbiertem antigen zur stimulierung der immunabwehr
US20040202680A1 (en) * 1997-01-30 2004-10-14 O'hagan Derek Microparticles with adsorbent surfaces, methods of making same, and uses thereof
ZA9811162B (en) * 1997-12-12 2000-06-07 Genentech Inc Treatment with anti-ERBB2 antibodies.
CA2330212A1 (en) * 1998-05-08 1999-11-18 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Compositions and methods for active vaccination
GB9810040D0 (en) 1998-05-11 1998-07-08 Univ Nottingham Blood borne tumour markers
EA004107B1 (ru) * 1998-08-11 2003-12-25 Айдек Фармацевтикалс Корпорэйшн Комбинированная терапия в-клеточных лимфом, предусматривающая введение антитела против cd20
US6573043B1 (en) * 1998-10-07 2003-06-03 Genentech, Inc. Tissue analysis and kits therefor
MY155913A (en) * 1998-11-09 2015-12-15 Biogen Inc Chimeric anti-cd20 antibody treatment of patients receiving bmt or pbsc transpants
WO2000027428A1 (en) 1998-11-09 2000-05-18 Idec Pharmaceuticals Corporation Treatment of hematologic malignancies associated with circulating tumor cells using chimeric anti-cd20 antibody
US6541214B1 (en) * 1998-11-13 2003-04-01 Oregon Heath Science University N-terminally truncated HER-2/neu protein as a cancer prognostic indicator
GB9827228D0 (en) 1998-12-10 1999-02-03 Univ Nottingham Cancer detection method and reagents
US7393823B1 (en) 1999-01-20 2008-07-01 Oregon Health And Science University HER-2 binding antagonists
US7396810B1 (en) * 2000-08-14 2008-07-08 Oregon Health Sciences University Compositions and methods for treating cancer by modulating HER-2 and EGF receptors
US7625859B1 (en) 2000-02-16 2009-12-01 Oregon Health & Science University HER-2 binding antagonists
CA2357525A1 (en) 1999-01-27 2000-08-03 Cornell Research Foundation, Inc. Treating cancers associated with overexpression of her-2/neu
US7198920B1 (en) * 1999-01-29 2007-04-03 Corika Corporation HER-2/neu fusion proteins
WO2000044899A1 (en) * 1999-01-29 2000-08-03 Corixa Corporation Her-2/neu fusion proteins
CA2367692A1 (en) * 1999-03-15 2000-09-21 Introgen Therapeutics, Inc. Dendritic cells transduced with a wild-type self gene elicit potent antitumor immune responses
EP1754488A1 (en) 1999-05-24 2007-02-21 Introgen Therapeutics, Inc. Methods and compositions for non-viral gene therapy for treatment of hyperproliferative diseases
CA2382774A1 (en) * 1999-05-25 2000-11-30 Human Genome Sciences, Inc. Meth1 and meth2 polynucleotides and polypeptides
US6949245B1 (en) * 1999-06-25 2005-09-27 Genentech, Inc. Humanized anti-ErbB2 antibodies and treatment with anti-ErbB2 antibodies
US20030086924A1 (en) * 1999-06-25 2003-05-08 Genentech, Inc. Treatment with anti-ErbB2 antibodies
US20040013667A1 (en) * 1999-06-25 2004-01-22 Genentech, Inc. Treatment with anti-ErbB2 antibodies
US7041292B1 (en) 1999-06-25 2006-05-09 Genentech, Inc. Treating prostate cancer with anti-ErbB2 antibodies
BR0012195A (pt) * 1999-06-25 2002-07-23 Genentech Inc Método para tratar câncer de próstata num ser humano, artigo de fabricação e uso de um anticorpo que liga erbb2
JP4658423B2 (ja) * 1999-08-03 2011-03-23 ザ オハイオ ステイト ユニバーシティ Ｈｅｒ−２タンパク質に対する免疫反応性を増強するためのポリペプチドおよびポリヌクレオチド
US8557244B1 (en) 1999-08-11 2013-10-15 Biogen Idec Inc. Treatment of aggressive non-Hodgkins lymphoma with anti-CD20 antibody
US6627196B1 (en) 1999-08-27 2003-09-30 Genentech, Inc. Dosages for treatment with anti-ErbB2 antibodies
US20030157119A1 (en) * 1999-09-22 2003-08-21 Corixa Corporation Methods for diagnosis and therapy of hematological and virus-associated malignancies
WO2001021192A2 (en) * 1999-09-22 2001-03-29 Corixa Corporation Methods for diagnosis and therapy of hematological and virus-associated malignancies
US7378096B2 (en) 1999-09-30 2008-05-27 Health Research, Inc. Stress protein compositions and methods for prevention and treatment of cancer and infectious disease
JP2003510334A (ja) * 1999-09-30 2003-03-18 コリクサ コーポレイション 癌及び感染症の予防及び治療のためのストレスタンパク質組成物及び方法
FR2801106B1 (fr) * 1999-11-12 2007-10-05 Commissariat Energie Atomique Procede de diagnostic d'une esst provoquee par une souche d'atnc dans un echantillon biologique et son utilisation dans le diagnostic differentiel des differentes souches d'atnc
EP1239866A4 (en) * 1999-12-10 2005-02-09 Epimmune Inc INDUCTION OF HER2 / NEU CELLULAR IMMUNE RESPONSES USING PEPTIDE AND NUCLEIC ACID-CONTAINING COMPOSITIONS
AU2744201A (en) * 1999-12-29 2001-07-09 Corixa Corporation Murine neu sequences and methods of use therefor
US20020039573A1 (en) * 2000-01-21 2002-04-04 Cheever Martin A. Compounds and methods for prevention and treatment of HER-2/neu associated malignancies
US6528060B1 (en) * 2000-03-16 2003-03-04 Genzyme Corporation Therapeutic compounds
DK1272633T3 (da) * 2000-03-30 2011-05-23 Dendreon Corp Præparater og fremgangsmåder til dendritisk celle-baseret immunterapi
CA2405290C (en) * 2000-04-13 2011-06-21 Bio Life Science Forschungs Und Entwicklungsgesellschaft Mbh Vaccine against cancerous diseases
AU2001259271A1 (en) * 2000-04-28 2001-11-12 Millennium Pharmaceuticals, Inc. 14094, a novel human trypsin family member and uses thereof
KR101135233B1 (ko) * 2000-05-19 2012-04-12 제넨테크, 인크. ＥｒｂＢ 길항제에 의한 암 치료요법에 대한 효과적인 반응의 가능성을 개선시키기 위한 유전자 검출 분석
US10293056B1 (en) 2000-05-24 2019-05-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions for non-viral gene therapy for treatment of hyperproliferative diseases
US20030232399A1 (en) * 2000-06-14 2003-12-18 Robertson John Forsyth Russell Cancer detection methods and reagents
FR2812087B1 (fr) * 2000-07-21 2007-05-11 Inst Nat Sante Rech Med Procede de criblage de peptides utilisables en immunotherapie
US7229623B1 (en) 2000-08-03 2007-06-12 Corixa Corporation Her-2/neu fusion proteins
AU2001283360A1 (en) * 2000-08-14 2002-02-25 Corixa Corporation Methods for diagnosis and therapy of hematological and virus-associated malignancies
CA2419533A1 (en) * 2000-08-14 2002-02-21 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of her-2/neu-associated malignancies
PT2266603E (pt) 2000-10-18 2012-11-02 Glaxosmithkline Biolog Sa Vacinas tumorais
US20020183271A1 (en) * 2000-12-07 2002-12-05 Sunil Chada Methods of treatment involving human MDA-7
US20040121946A9 (en) * 2000-12-11 2004-06-24 John Fikes Inducing cellular immune responses to her2/neu using peptide and nucleic acid compositions
US7906492B2 (en) * 2001-01-16 2011-03-15 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Therapy-enhancing glucan
US7507724B2 (en) * 2001-01-16 2009-03-24 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Therapy-enhancing glucan
US20040071671A1 (en) * 2001-02-20 2004-04-15 Leturcq Didier J. Cell therapy method for the treatment of tumors
DK2016930T3 (en) * 2001-02-20 2014-12-08 Janssen Pharmaceuticals Inc CD8 cell suspension for use in the treatment of melanomas
EP1236740B1 (de) * 2001-02-28 2012-07-18 Bio Life Science Forschungs- und Entwicklungsges.m.b.H. Vakzine gegen Krebserkrankungen, die mit dem HER-2/neu Onkogen assoziiert sind
ES2502366T3 (es) 2001-03-09 2014-10-03 Board Of Regents, The University Of Texas System Inducción de inmunidad tumoral por variantes de proteína de unión a folato
GB0109297D0 (en) 2001-04-12 2001-05-30 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
EP1399183B1 (en) 2001-05-31 2010-06-30 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Chimeric alphavirus replicon particles
DE50111493D1 (de) * 2001-09-03 2007-01-04 Bio Life Science Forschungs & Entwicklungsgesellschaft Mbh Antigen-Mimotope und Vakzine gegen Krebserkrankungen
EP2131198B1 (en) 2001-09-20 2013-03-27 Board of Regents, The University of Texas System Measuring circulating therapeutic antibody, antigen and antigen/antibody complexes using ELISA assays
CA2477780A1 (en) * 2002-03-05 2003-09-18 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods of enhancing immune induction involving mda-7
WO2003076585A2 (en) * 2002-03-08 2003-09-18 Board Of Regents, The University Of Texas System Controlled modulation of amino acid side chain length of peptide antigens
JP2005522483A (ja) * 2002-04-11 2005-07-28 アルタレックス メディカル コーポレーション 結合剤及び腫瘍細胞をターゲティングする際のそれらの使用
AU2003251597A1 (en) * 2002-06-19 2004-01-06 Abgenix, Inc. Method for predicting response to epidermal growth factor receptor-directed therapy
US20090110702A1 (en) 2002-07-12 2009-04-30 The Johns Hopkins University Mesothelin Vaccines and Model Systems and Control of Tumors
EP1575500A4 (en) 2002-07-12 2007-01-03 Univ Johns Hopkins MESOTHELIN VACCINE AND MODEL SYSTEMS
US9200036B2 (en) 2002-07-12 2015-12-01 The Johns Hopkins University Mesothelin vaccines and model systems
KR20120002613A (ko) 2002-08-12 2012-01-06 제네렉스, 인코포레이티드 폭스바이러스 및 암과 관련된 방법 및 조성물
US20080019992A1 (en) * 2002-09-02 2008-01-24 Christoph Zielinski Antigen mimotopes and vaccine against cancerous diseases
CN1497255A (zh) * 2002-10-02 2004-05-19 ���µ�����ҵ��ʽ���� 被检测体用取样元件、被检测体处理装置及其处理方法
EP1560651A1 (en) * 2002-11-12 2005-08-10 Millipore Corporation Evaporation control device for multiwell plates
GB2424273B (en) * 2002-11-14 2007-06-27 Univ Nottingham Method for preparing tumour marker protein
JP2006516117A (ja) * 2002-11-21 2006-06-22 ジェネンテック・インコーポレーテッド 抗ＥｒｂＢ２抗体を用いた非悪性疾病または疾患の治療
WO2004061105A1 (en) 2003-01-03 2004-07-22 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti Spa Rhesus her2/neu, nucleotides encoding same, and uses thereof
US7638270B2 (en) * 2003-01-24 2009-12-29 Agensys, Inc. Nucleic acids and corresponding proteins entitled 254P1D6B useful in treatment and detection of cancer
AU2004218407A1 (en) * 2003-03-03 2004-09-16 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions involving MDA-7
US20080274129A1 (en) 2003-04-18 2008-11-06 Fikes John D Hla-A2 Tumor Associated Antigen Peptides and Compositions
JP2007525187A (ja) * 2003-05-16 2007-09-06 レセプター・バイオロジクス・インコーポレイテッド イントロン融合タンパク質、ならびにその同定方法および使用方法
US7178491B2 (en) * 2003-06-05 2007-02-20 Caterpillar Inc Control system and method for engine valve actuator
WO2004112825A2 (en) * 2003-06-17 2004-12-29 Mannkind Corporation Combinations of tumor-associated antigens for the treatment of various types of cancers
CN101173282B (zh) * 2003-07-21 2011-04-06 P.安杰莱蒂分子生物学研究所 编码人表皮生长因子2/neu抗原的合成基因及其用途
GB0321615D0 (en) 2003-09-15 2003-10-15 Glaxo Group Ltd Improvements in vaccination
WO2005041656A2 (en) 2003-10-22 2005-05-12 Fred Hutchinson Cancer Research Center Methods, compositions and devices for inducing stasis in tissues and organs
SI1725249T1 (sl) 2003-11-06 2014-04-30 Seattle Genetics, Inc. Spojine monometilvalina, sposobne konjugacije na ligande
CA2548220A1 (en) * 2003-12-01 2005-09-09 Introgen Therapeutics, Inc. Use of mda-7 to inhibit infection by pathogenic organisms
US20070281041A1 (en) * 2004-03-02 2007-12-06 Introgen Therapeutics, Inc. Compositions and Methods Involving MDA-7 for the Treatment of Cancer
AU2005245896A1 (en) * 2004-05-14 2005-12-01 Receptor Biologix, Inc. Cell surface receptor isoforms and methods of identifying and using the same
EP2471924A1 (en) * 2004-05-28 2012-07-04 Asuragen, INC. Methods and compositions involving microRNA
EP2286844A3 (en) 2004-06-01 2012-08-22 Genentech, Inc. Antibody-drug conjugates and methods
EP1768662A2 (en) 2004-06-24 2007-04-04 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Small molecule immunopotentiators and assays for their detection
EP1765313A2 (en) 2004-06-24 2007-03-28 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Compounds for immunopotentiation
WO2006034488A2 (en) 2004-09-23 2006-03-30 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
US20100111856A1 (en) 2004-09-23 2010-05-06 Herman Gill Zirconium-radiolabeled, cysteine engineered antibody conjugates
CA2583230A1 (en) * 2004-10-05 2006-04-20 Oregon Health And Science University Compositions and methods for treating disease
EP1797431B1 (en) * 2004-10-06 2011-01-26 Wellstat Biologics Corporation Detection of elevated levels of her-2/neu protein on circulating cancer cells and treatment
CA2850323A1 (en) 2004-11-12 2006-12-28 Asuragen, Inc. Methods and compositions involving mirna and mirna inhibitor molecules
US20060115862A1 (en) * 2004-11-17 2006-06-01 Duke University Anti-tenascin monoclonal antibody immunoassays and diagnostic kits
CN100381460C (zh) * 2004-11-30 2008-04-16 北京市肿瘤防治研究所 Her-2模拟抗原表位及含有该表位的肽
EP1835932A2 (en) * 2004-12-29 2007-09-26 Mannkind Corporation Methods to elicit, enhance and sustain immune responses against mhc class i-restricted epitopes, for prophylactic or therapeutic purposes
AU2006211960A1 (en) * 2005-02-08 2006-08-17 Board Of Regents, The University Of Texas System Compositions and methods involving MDA-7 for the treatment of cancer
EP1879599B1 (en) * 2005-04-20 2013-10-16 Fred Hutchinson Cancer Research Center Methods, compositions and articles of manufacture for enhancing survivability of cells, tissues, organs, and organisms
CN100398558C (zh) * 2005-05-10 2008-07-02 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 HER2/neu与Herstatin相互作用的活性片段及其编码基因与应用
US8668905B2 (en) * 2005-05-12 2014-03-11 University Of South Florida P53 vaccines for the treatment of cancers
US20090170769A1 (en) * 2005-05-13 2009-07-02 Pei Jin Cell surface receptor isoforms and methods of identifying and using the same
GB2426581A (en) * 2005-05-27 2006-11-29 Univ Nottingham Immunoassay methods
SI1889059T1 (sl) 2005-05-27 2009-12-31 Oncimmune Ltd Izboljšani imunotestni postopek
JP5222134B2 (ja) * 2005-06-15 2013-06-26 ザ オハイオ ステート ユニバーシティー リサーチ ファウンデーション Ｈｅｒ−２ペプチド
EP2385060A3 (en) 2005-06-17 2012-02-15 Mannkind Corporation Methods and compositions to elicit multivalent immune responses against dominant and subdominant epitopes, expressed on cancer cells and tumor stroma
GB0512751D0 (en) * 2005-06-22 2005-07-27 Glaxo Group Ltd New adjuvant
JP2009507853A (ja) * 2005-09-07 2009-02-26 ジェンネレックス インコーポレイティッド Ｇｍ−ｃｓｆ発現ポックスウイルスを用いる転移性および／または全身播種性癌の全身処置
CA2662798A1 (en) * 2005-09-07 2007-03-15 Receptor Logic, Ltd. Antibodies as t cell receptor mimics, methods of production and uses thereof
US8980246B2 (en) 2005-09-07 2015-03-17 Sillajen Biotherapeutics, Inc. Oncolytic vaccinia virus cancer therapy
JP5424640B2 (ja) * 2005-09-08 2014-02-26 ザ ヘンリー エム．ジャクソン ファウンデイション フォー ザ アドバンスメント オブ ミリタリー メディスン，インコーポレイティド 免疫源性ペプチドの標的特異的同定方法
US8945573B2 (en) * 2005-09-08 2015-02-03 The Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine, Inc. Targeted identification of immunogenic peptides
WO2007047749A1 (en) 2005-10-18 2007-04-26 Novartis Vaccines And Diagnostics Inc. Mucosal and systemic immunizations with alphavirus replicon particles
TWI457133B (zh) 2005-12-13 2014-10-21 Glaxosmithkline Biolog Sa 新穎組合物
US20090053221A1 (en) * 2006-01-17 2009-02-26 Cheung Nai-Kong V Immune response enhancing glucan
US8323644B2 (en) * 2006-01-17 2012-12-04 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Therapy-enhancing glucan
EP1984004A4 (en) * 2006-01-17 2010-03-03 Sloan Kettering Inst Cancer THE THERAPY REINFORCING GLUCAN
WO2007092944A2 (en) * 2006-02-08 2007-08-16 Introgen Therapeutics, Inc. Compositions and methods involving gene therapy and proteasome modulation
CA2646891A1 (en) * 2006-03-23 2007-09-27 Novartis Ag Immunopotentiating compounds
ATE539079T1 (de) * 2006-03-23 2012-01-15 Novartis Ag Imidazochinoxalinverbindungen als immunmodulatoren
EP2010530A2 (en) * 2006-03-23 2009-01-07 Novartis AG Methods for the preparation of imidazole-containing compounds
US7517270B2 (en) * 2006-05-30 2009-04-14 Minds-I, Inc. Construction system
EP2069386A4 (en) 2006-07-21 2009-10-28 Life Technologies Corp PROTEIN MOLECULAR WEIGHT STANDARDS WITH HIGH DISINFECTION
US7972602B2 (en) * 2006-08-11 2011-07-05 Dendreon Corporation Promiscuous HER-2/Neu CD4 T cell epitopes
CN101632020B (zh) 2006-09-13 2013-11-27 昂西免疫有限公司 改进的免疫测定方法
ES2741138T3 (es) 2006-09-15 2020-02-10 Childrens Hospital Of Eastern Ontario Res Institute Inc Rhabdovirus oncolítico de Farmington
EP2145001A2 (en) 2006-09-19 2010-01-20 Asuragen, Inc. Mir-15, mir-26, mir -31,mir -145, mir-147, mir-188, mir-215, mir-216 mir-331, mmu-mir-292-3p regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention
US20080075528A1 (en) * 2006-09-22 2008-03-27 Michael Marzetta Construction system
CA2700573C (en) * 2006-09-26 2016-11-22 Cedars-Sinai Medical Center Cancer stem cell antigen vaccines and methods
CA2700436C (en) 2006-09-28 2017-04-18 John S. Yu Cancer vaccines and vaccination methods
US20080131878A1 (en) * 2006-12-05 2008-06-05 Asuragen, Inc. Compositions and Methods for the Detection of Small RNA
EP2104734A2 (en) * 2006-12-08 2009-09-30 Asuragen, INC. Mir-20 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention
US8889143B2 (en) 2006-12-14 2014-11-18 Antigen Express, Inc. Ii-key/HER-2/neu hybrid cancer vaccine
US7935350B2 (en) * 2006-12-14 2011-05-03 Antigen Express, Inc. Ii-key/Her-2/neu hybrid cancer vaccine
US7410225B1 (en) * 2007-03-14 2008-08-12 Minds-I, Inc. Multi-part links for endless track
KR20080084528A (ko) * 2007-03-15 2008-09-19 제네렉스 바이오테라퓨틱스 인크. 종양살상형 백시니아 바이러스 암 치료
JP2010525326A (ja) * 2007-04-19 2010-07-22 ウェルスタット バイオロジックス コーポレイション 分離されていない循環癌細胞由来のＨｅｒ−２／ｎｅｕタンパク質の上昇したレベルの検出および治療
EP2162149B1 (en) 2007-06-01 2013-11-06 The Henry M. Jackson Foundation for the Advancement of Military Medicine, Inc. Vaccine for the prevention of breast cancer relapse
US20090017716A1 (en) * 2007-07-11 2009-01-15 Michael Marzetta Construction system
US20090061456A1 (en) * 2007-08-30 2009-03-05 Allard William J Method for predicting progression free and overall survival at each follow-up time point during therapy of metastatic breast cancer patients using circulating tumor cells
WO2009036332A1 (en) 2007-09-14 2009-03-19 Asuragen, Inc. Micrornas differentially expressed in cervical cancer and uses thereof
US20090117532A1 (en) * 2007-11-01 2009-05-07 Doyle Gerald V Pre-clinical method for monitoring serial changes in circulating breast cancer cells in mice
WO2009059450A1 (en) * 2007-11-05 2009-05-14 Shanghai Jiaotong University Peptide ligand directed drug delivery
US7841923B2 (en) * 2007-11-13 2010-11-30 Minds-I, Inc. Vehicle axle joint for a toy vehicle
CN101878429B (zh) * 2007-11-27 2015-05-20 维里德克斯有限责任公司 血液中循环黑素瘤细胞的自动化计数和表征
US8071562B2 (en) 2007-12-01 2011-12-06 Mirna Therapeutics, Inc. MiR-124 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention
US20090191535A1 (en) * 2007-12-22 2009-07-30 Mark Carle Connelly Method of assessing metastatic carcinomas from circulating endothelial cells and disseminated tumor cells
GB0725239D0 (en) * 2007-12-24 2008-02-06 Oncimmune Ltd Calibrator for autoantibody assay
US8258111B2 (en) 2008-05-08 2012-09-04 The Johns Hopkins University Compositions and methods related to miRNA modulation of neovascularization or angiogenesis
JP2010006705A (ja) * 2008-06-13 2010-01-14 Atlas Antibodies Ab Ｈｅｒ２サブセット
EP2328923B1 (en) * 2008-09-02 2016-01-13 Cedars-Sinai Medical Center Cd133 epitopes
KR20170097234A (ko) 2008-12-10 2017-08-25 더 헨리 엠. 잭슨 파운데이션 포 더 어드벤스먼트 오브 밀리터리 메디신, 인코포레이티드 유방암 재발 예방용 백신
US20100234283A1 (en) 2009-02-04 2010-09-16 The Ohio State University Research Foundation Immunogenic epitopes, peptidomimetics, and anti-peptide antibodies, and methods of their use
US20110045080A1 (en) * 2009-03-24 2011-02-24 William Marsh Rice University Single-Walled Carbon Nanotube/Bioactive Substance Complexes and Methods Related Thereto
WO2010132723A1 (en) * 2009-05-14 2010-11-18 Prometheus Laboratories Inc. Biomarkers for determining sensitivity of breast cancer cells to her2-targeted therapy
US20110065643A1 (en) 2009-06-12 2011-03-17 University Of Southern California Clusterin Pharmaceuticals and Treatment Methods Using the Same
AU2010292172A1 (en) 2009-09-09 2012-05-03 Centrose, Llc Extracellular targeted drug conjugates
ES2671570T3 (es) 2009-09-14 2018-06-07 Sillajen Biotherapeutics, Inc. Terapia combinada contra el cáncer con virus oncolítico de vaccinia
US9045729B2 (en) 2009-12-10 2015-06-02 Ottawa Hospital Research Institute Oncolytic rhabdovirus
WO2011107100A1 (en) 2010-03-03 2011-09-09 Aarhus Universitet Methods and compositions for regulation of herv4
PE20130342A1 (es) 2010-04-15 2013-04-20 Spirogen Sarl Pirrolobenzodiacepinas y conjugados de las mismas
WO2011149564A1 (en) 2010-05-28 2011-12-01 Tetris Online, Inc. Interactive hybrid asynchronous computer game infrastructure
EP2576613A1 (en) 2010-06-07 2013-04-10 Pfizer Inc. Her-2 peptides and vaccines
EP2579897A1 (en) 2010-06-08 2013-04-17 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
ES2544608T3 (es) 2010-11-17 2015-09-02 Genentech, Inc. Conjugados de anticuerpo y de alaninil-maitansinol
CA2824277C (en) 2011-01-04 2021-08-31 Jennerex, Inc. Generation of antibodies to tumor antigens and generation of tumor specific complement dependent cytotoxicity by administration of oncolytic vaccinia virus
CA2826043A1 (en) 2011-02-03 2012-08-09 Mirna Therapeutics, Inc. Synthetic mimics of mir-124
KR20140020900A (ko) 2011-02-03 2014-02-19 미르나 테라퓨틱스 인코포레이티드 Ｍｉｒ―34의 합성 모방체
CA2833212C (en) 2011-05-12 2020-06-09 Genentech, Inc. Multiple reaction monitoring lc-ms/ms method to detect therapeutic antibodies in animal samples using framework signature peptides
US9364532B2 (en) 2011-06-08 2016-06-14 Children's Hospital Of Eastern Ontario Research Institute Inc. Compositions and methods for glioblastoma treatment
HUE039009T2 (hu) 2011-08-05 2018-12-28 Res Found Dev Javított eljárások és készítmények Olfml3-mediált angiogenesis modulálására
SG10201903119QA (en) 2011-09-06 2019-05-30 Agency Science Tech & Res Polypeptide vaccine
US9644241B2 (en) 2011-09-13 2017-05-09 Interpace Diagnostics, Llc Methods and compositions involving miR-135B for distinguishing pancreatic cancer from benign pancreatic disease
HUE025661T2 (en) 2011-10-14 2016-04-28 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and their conjugates
CA2864841C (en) 2012-02-17 2020-07-07 Keith L. Knutson Methods and materials for generating cd8+ t cells having the ability to recognize cancer cells expressing a her2/neu polypeptide
WO2013130093A1 (en) 2012-03-02 2013-09-06 Genentech, Inc. Biomarkers for treatment with anti-tubulin chemotherapeutic compounds
US20150283233A1 (en) 2012-06-15 2015-10-08 Gencia Corporation Compositions and Methods for Enhancing Immune Responses
UA114108C2 (uk) 2012-07-10 2017-04-25 Борд Оф Ріджентс, Дзе Юніверсіті Оф Техас Сістем Моноклональне антитіло для застосування в діагностиці і терапії злоякісних пухлин і аутоімунного захворювання
MX364328B (es) 2012-10-12 2019-04-23 Medimmune Ltd Conjugados del anticuerpo pirrolobenzodiazepina.
WO2014057114A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Adc Therapeutics Sàrl Pyrrolobenzodiazepine-anti-psma antibody conjugates
NZ707534A (en) 2012-10-12 2018-08-31 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
NZ707486A (en) 2012-10-12 2018-09-28 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine - anti-psma antibody conjugates
DK2906251T3 (da) 2012-10-12 2017-11-20 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepin-anti-CD22-antistofkonjugater
EP2906297B1 (en) 2012-10-12 2017-12-06 ADC Therapeutics SA Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
PL2766048T3 (pl) 2012-10-12 2015-05-29 Medimmune Ltd Pirolobenzodiazepiny i ich koniugaty
US9803014B2 (en) 2012-10-24 2017-10-31 Research Development Foundation JAM-C antibodies and methods for treatment of cancer
CN110452242A (zh) 2012-12-21 2019-11-15 麦迪穆有限责任公司 吡咯并苯并二氮杂卓及其结合物
CA2894959C (en) 2012-12-21 2022-01-11 Spirogen Sarl Unsymmetrical pyrrolobenzodiazepines-dimers for use in the treatment of proliferative and autoimmune diseases
EP2956544B1 (en) 2013-02-14 2017-11-01 Immunocellular Therapeutics Ltd. Cancer vaccines and vaccination methods
CN105658790A (zh) 2013-02-21 2016-06-08 东安大略研究所儿童医院有限公司 疫苗组合物
US20160031887A1 (en) 2013-03-13 2016-02-04 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
CN105142674B (zh) 2013-03-13 2018-11-13 麦迪穆有限责任公司 吡咯并苯并二氮杂卓和其结合物
AU2014244245C1 (en) 2013-03-13 2018-04-19 Genentech, Inc. Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
EA201690195A1 (ru) 2013-08-12 2016-05-31 Дженентек, Инк. Конъюгатные соединения антитело-лекарство на основе димера 1-(хлорметил)-2,3-дигидро-1h-бензо[e]индола и способы применения и лечения
CN105899515B (zh) 2013-08-14 2020-01-14 威廉马歇莱思大学 uncialamycin的衍生物、合成方法及其作为抗肿瘤剂的用途
US9914775B2 (en) 2013-08-21 2018-03-13 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Methods for treating inflammatory disorders or cancer metastasis by administering antibodies to connexin 43 (Cx43) hemichannels
ES2745287T3 (es) 2013-08-29 2020-02-28 Univ Texas Enzimas degradadoras de cistina/cisteína de primate genomanipuladas como agentes antineogénicos
US9808486B2 (en) 2013-08-30 2017-11-07 Board Of Regents, The University Of Texas System Administration of kynurenine depleting enzymes for tumor therapy
WO2015052534A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
US10010624B2 (en) 2013-10-11 2018-07-03 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
EP3054986B1 (en) 2013-10-11 2019-03-20 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
GB201317982D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
CA2936100A1 (en) 2013-12-04 2015-06-11 Board Of Regents, The University Of Texas System Analysis of genomic dna, rna, and proteins in exosomes for diagnosis and theranosis
EP3082875B1 (en) 2013-12-16 2020-11-25 Genentech, Inc. Peptidomimetic compounds and antibody-drug conjugates thereof
MX2016007578A (es) 2013-12-16 2016-10-03 Genentech Inc Compuestos de conjugado anticuerpo-farmaco dimerico de 1-(clorometil)-2,3-dihidro-1h-benzo [e] indol, y metodos de uso y tratamiento.
CN105873614B (zh) 2013-12-16 2020-10-30 基因泰克公司 肽模拟化合物及其抗体-药物缀合物
WO2016190940A1 (en) * 2015-05-22 2016-12-01 Czerniecki Brian J Manufacturing multi-dose injection ready dendritic cell vaccines
EP3549582A3 (en) 2014-08-29 2020-01-01 The Board of Regents of The University of Texas System Novel capsazepine analogs for the treatment of cancer and other proliferative diseases
US9975959B2 (en) 2014-08-29 2018-05-22 Board Of Regents, The University Of Texas System Administration of kynurenine depleting enzymes for tumor therapy
EP3193940A1 (en) 2014-09-10 2017-07-26 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
WO2016040825A1 (en) 2014-09-12 2016-03-17 Genentech, Inc. Anthracycline disulfide intermediates, antibody-drug conjugates and methods
AR101844A1 (es) 2014-09-12 2017-01-18 Genentech Inc Anticuerpos y conjugados modificados genéticamente con cisteína
GB201416112D0 (en) 2014-09-12 2014-10-29 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
JP2017533887A (ja) 2014-09-17 2017-11-16 ジェネンテック， インコーポレイテッド ピロロベンゾジアゼピン類及びその抗体ジスルフィドコンジュゲート
KR20170101895A (ko) 2014-11-25 2017-09-06 에이디씨 테라퓨틱스 에스에이 피롤로벤조디아제핀-항체 접합체
KR20170086121A (ko) 2014-12-03 2017-07-25 제넨테크, 인크. 4급 아민 화합물 및 그의 항체-약물 접합체
JP6724023B2 (ja) 2015-02-09 2020-07-15 リサーチ ディベロップメント ファウンデーション 改善された補体活性化を示す操作された免疫グロブリンｆｃポリペプチド
RS61047B1 (sr) 2015-03-04 2020-12-31 Univ Texas Postupci za lečenje kancera sa hemizigotnim gubitkom gena tp53
CN107533065A (zh) * 2015-03-13 2018-01-02 布莱恩·J·赫尔尼奇 在癌症和免疫恢复中监测cd4+1型t辅助细胞应答的方法
US20180171294A1 (en) * 2015-03-26 2018-06-21 The Trustees Of The University Of Pennsylvania In vitro artificial lymph node method for sensitization and expansion of t cells for therapy and epitope mapping
GB201506402D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
GB201506411D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Bergenbio As Humanized anti-axl antibodies
WO2016196506A1 (en) 2015-05-29 2016-12-08 Galena Biopharma, Inc. PEPTIDE VACCINE THERAPY FOR TREATMENT OF FRα-EXPRESSING TUMORS
MA45481A (fr) 2015-06-10 2018-04-18 Univ Texas Utilisation d'exosomes pour le traitement de maladies
RU2612015C2 (ru) * 2015-06-29 2017-03-01 Общество с ограниченной ответственностью "Сибинтех" Пептид-иммуноген, используемый в терапевтической вакцине для лечения метастатического рака молочной железы у кошек и собак
WO2017019829A1 (en) 2015-07-28 2017-02-02 Board Of Regents, The University Of Texas System Implant compositions for the unidirectional delivery of therapeutic compounds to the brain
WO2017040380A2 (en) 2015-08-28 2017-03-09 Research Development Foundation Engineered antibody fc variants
MA43345A (fr) 2015-10-02 2018-08-08 Hoffmann La Roche Conjugués anticorps-médicaments de pyrrolobenzodiazépine et méthodes d'utilisation
CN108291227A (zh) 2015-10-14 2018-07-17 拜奥-帕斯控股股份有限公司 用于脂质体制剂的对乙氧基核酸
MA43354A (fr) 2015-10-16 2018-08-22 Genentech Inc Conjugués médicamenteux à pont disulfure encombré
MA45326A (fr) 2015-10-20 2018-08-29 Genentech Inc Conjugués calichéamicine-anticorps-médicament et procédés d'utilisation
RU2624862C2 (ru) * 2015-10-20 2017-07-07 Общество с ограниченной ответственностью "Эпитек" Пептид-иммуноген, используемый в терапевтической вакцине для лечения метастатического рака молочной железы
JP2018532810A (ja) 2015-11-07 2018-11-08 マルチビア インコーポレイテッド がんの処置のための腫瘍抑制因子遺伝子治療および免疫チェックポイント治療を含む組成物
EP3373968B1 (en) 2015-11-09 2024-04-17 The Children's Hospital of Philadelphia Glypican 2 as a cancer marker and therapeutic target
CN114470194A (zh) 2015-12-02 2022-05-13 斯特库伯株式会社 与btn1a1免疫特异性结合的抗体和分子及其治疗用途
CN108925136B (zh) 2015-12-02 2022-02-01 斯特赛恩斯公司 特异于糖基化的btla（b和t淋巴细胞衰减因子）的抗体
GB201601431D0 (en) 2016-01-26 2016-03-09 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines
GB201602356D0 (en) 2016-02-10 2016-03-23 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
GB201602359D0 (en) 2016-02-10 2016-03-23 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
CA3015839A1 (en) 2016-02-26 2017-08-31 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Connexin (cx)43 hemichannel-binding antibodies and uses thereof
US11376324B2 (en) 2016-03-02 2022-07-05 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Sting activating nanovaccine for immunotherapy
JP6943872B2 (ja) 2016-03-25 2021-10-06 ジェネンテック， インコーポレイテッド 多重全抗体及び抗体複合体化薬物定量化アッセイ
US20190105403A1 (en) 2016-03-29 2019-04-11 Stcube & Co., Inc. Methods for selecting antibodies that specifically bind glycosylated immune checkpoint proteins
EP3436481B1 (en) 2016-03-29 2021-06-30 Stcube, Inc. Dual function antibodies specific to glycosylated pd-l1 and methods of use thereof
WO2017176076A1 (en) 2016-04-06 2017-10-12 Ewha University - Industry Collaboration Foundation A peptide with ability to penetrate cell membrane
GB201607478D0 (en) 2016-04-29 2016-06-15 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
EP3449017B1 (en) 2016-04-29 2021-12-22 Board of Regents, The University of Texas System Targeted measure of transcriptional activity related to hormone receptors
EP3458074B1 (en) 2016-05-16 2024-04-17 Board of Regents of the University of Texas System COMPOSITIONS FOR THE DELIVERY OF tRNA AS NANOPARTICLES AND METHODS OF USE THEREWITH
PL3458101T3 (pl) 2016-05-20 2021-05-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Koniugaty PROTAC-przeciwciało i sposoby ich stosowania
JP7022080B2 (ja) 2016-05-27 2022-02-17 ジェネンテック， インコーポレイテッド 部位特異的抗体－薬物複合体の特徴付けのための生化学分析的方法
EP3463438B1 (en) 2016-05-31 2022-04-06 The Henry M. Jackson Foundation for the Advancement of Military Medicine, Inc. Vaccine therapy for treatment of endometrial and ovarian cancer
WO2017210579A1 (en) * 2016-06-03 2017-12-07 Etubics Corporation Compositions and methods for tumor vaccination and immunotherapy involving her2/neu
US10639378B2 (en) 2016-06-06 2020-05-05 Genentech, Inc. Silvestrol antibody-drug conjugates and methods of use
CN109562178A (zh) 2016-07-06 2019-04-02 得克萨斯州大学系统董事会 用于治疗胱氨酸尿症患者的人类酶介导的胱氨酸剔除
KR20190031299A (ko) 2016-07-20 2019-03-25 주식회사 에스티큐브 글리코실화된 pd-l1에 결합하는 항체의 조합을 사용하는 암 치료 방법
EP3496763A1 (en) 2016-08-11 2019-06-19 Genentech, Inc. Pyrrolobenzodiazepine prodrugs and antibody conjugates thereof
US9963498B2 (en) 2016-08-18 2018-05-08 Wisconsin Alumni Research Foundation Peptides that inhibit syndecan-1 activation of VLA-4 and IGF-1R
EP3512525B1 (en) 2016-09-16 2022-07-27 Bio-Path Holdings, Inc. Combination therapy with liposomal antisense oligonucleotides
WO2018065501A1 (en) 2016-10-05 2018-04-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods for preparing antibody drug conjugates
GB201617466D0 (en) 2016-10-14 2016-11-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine conjugates
EP3538112A4 (en) 2016-11-09 2020-09-02 Musc Foundation for Research Development CD38-NAD + REGULATED METABOLIC AXIS IN ANTITUMOR IMMUNOTHERAPY
CN110381997A (zh) 2016-12-12 2019-10-25 茂体外尔公司 用于治疗和预防癌症和感染性疾病的包含病毒基因治疗和免疫检查点抑制剂的方法和组合物
GB201702031D0 (en) 2017-02-08 2017-03-22 Medlmmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
AU2018217926B2 (en) 2017-02-08 2019-10-03 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
CN110612447B (zh) 2017-02-24 2024-02-06 德克萨斯州立大学董事会 用于检测早期胰腺癌的测定
EP3612537B1 (en) 2017-04-18 2022-07-13 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine conjugates
US20200129637A1 (en) 2017-04-20 2020-04-30 Adc Therapeutics Sa Combination therapy with an anti-axl antibody-drug conjugate
IL270503B1 (en) 2017-05-12 2024-06-01 Univ Texas Depletion of homocysteine by human enzymes for the treatment of patients with hyperhomocysteinemia and homocystinuria
WO2018209211A1 (en) 2017-05-12 2018-11-15 Board Of Regents, The University Of Texas System Engineered primate cystine/cysteine degrading enzymes for therapeutic uses
US20200131266A1 (en) 2017-05-31 2020-04-30 Stcube & Co., Inc. Methods of treating cancer using antibodies and molecules that immunospecifically bind to btn1a1
AU2018277838A1 (en) 2017-05-31 2019-12-19 Stcube & Co., Inc. Antibodies and molecules that immunospecifically bind to BTN1A1 and the therapeutic uses thereof
JP2020522562A (ja) 2017-06-06 2020-07-30 ストキューブ アンド シーオー．， インコーポレイテッド Ｂｔｎ１ａ１又はｂｔｎ１ａ１リガンドに結合する抗体及び分子を用いて癌を治療する方法
KR102442736B1 (ko) 2017-06-14 2022-09-16 에이디씨 테라퓨틱스 에스에이 항-cd19 adc의 투여를 위한 투약량 체제
JP7220203B2 (ja) 2017-08-18 2023-02-09 メドイミューン・リミテッド ピロロベンゾジアゼピン複合体
IL273387B2 (en) 2017-09-20 2023-10-01 Ph Pharma Co Ltd Thylanstatin analogs
EP4116327A1 (en) 2017-10-11 2023-01-11 Board Of Regents, The University Of Texas System Human pd-l1 antibodies and methods of use therefor
GB201803342D0 (en) 2018-03-01 2018-04-18 Medimmune Ltd Methods
CN112020510A (zh) 2018-03-19 2020-12-01 茂体外尔公司 包含用于治疗癌症的肿瘤抑制基因疗法和cd122/cd132激动剂的方法及组合物
US20210214445A1 (en) 2018-03-23 2021-07-15 Board Of Regents, The University Of Texas System Dual specificity antibodies to pd-l1 and pd-l2 and methods of use therefor
CN112088000A (zh) 2018-03-27 2020-12-15 得克萨斯州大学系统董事会 具有针对携带her2外显子19突变之癌细胞的抗肿瘤活性的化合物
GB201806022D0 (en) 2018-04-12 2018-05-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
CN108624589B (zh) * 2018-04-17 2021-12-17 广州永诺生物科技有限公司 环状RNA circ-ERBB2及其检测试剂与应用
CN108484732A (zh) * 2018-06-08 2018-09-04 天津亨佳生物科技发展有限公司 一种治疗肿瘤的抗原肽链组及其在药物中的应用
CN108715603A (zh) * 2018-06-08 2018-10-30 天津亨佳生物科技发展有限公司 一种治疗肿瘤的抗原肽链组及其在药物中的应用
GB201814281D0 (en) 2018-09-03 2018-10-17 Femtogenix Ltd Cytotoxic agents
EP3870235A1 (en) 2018-10-24 2021-09-01 F. Hoffmann-La Roche AG Conjugated chemical inducers of degradation and methods of use
US20220033848A1 (en) 2018-11-19 2022-02-03 Board Of Regents, The University Of Texas System A modular, polycistronic vector for car and tcr transduction
EA202191463A1 (ru) 2018-11-28 2021-10-13 Борд Оф Риджентс, Дзе Юниверсити Оф Техас Систем Мультиплексное редактирование генома иммунных клеток для повышения функциональности и устойчивости к подавляющей среде
CA3121210A1 (en) 2018-11-29 2020-06-04 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods for ex vivo expansion of natural killer cells and use thereof
CN113227119A (zh) 2018-12-10 2021-08-06 基因泰克公司 用于与含Fc的蛋白质进行位点特异性缀合的光交联肽
GB201901197D0 (en) 2019-01-29 2019-03-20 Femtogenix Ltd G-A Crosslinking cytotoxic agents
WO2020163705A1 (en) 2019-02-08 2020-08-13 Board Of Regents, The University Of Texas System Telomerase-containing exosomes for treatment of diseases associated with aging and age-related organ dysfunction
CN114144514A (zh) 2019-05-09 2022-03-04 富士胶片细胞动力公司 产生肝细胞的方法
EP3968971A1 (en) 2019-05-17 2022-03-23 Cancer Prevention Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating familial adenomatous polyposis
AU2020317009A1 (en) 2019-07-19 2022-02-03 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Chimeric antigen receptors containing Glypican 2 binding domains
JP2022547546A (ja) 2019-09-13 2022-11-14 エレクトロフィ，インコーポレイテッド 疾患の処置のための治療用生物学的作用剤の送達のための組成物及び方法
JP2022549504A (ja) 2019-09-26 2022-11-25 エスティーキューブ アンド カンパニー グリコシル化ｃｔｌａ－４に対して特異的な抗体およびその使用方法
US20220356248A1 (en) 2019-10-09 2022-11-10 Stcube & Co Antibodies specific to glycosylated lag3 and methods of use thereof
US20220380765A1 (en) 2019-11-02 2022-12-01 Board Of Regents, The University Of Texas System Targeting nonsense-mediated decay to activate p53 pathway for the treatment of cancer
WO2021113644A1 (en) 2019-12-05 2021-06-10 Multivir Inc. Combinations comprising a cd8+ t cell enhancer, an immune checkpoint inhibitor and radiotherapy for targeted and abscopal effects for the treatment of cancer
JP2023509516A (ja) 2020-01-07 2023-03-08 ボード オブ リージェンツ，ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム がん治療のための改良型ヒトメチルチオアデノシン／アデノシン枯渇酵素変種
EP4107173A1 (en) 2020-02-17 2022-12-28 Board of Regents, The University of Texas System Methods for expansion of tumor infiltrating lymphocytes and use thereof
CA3178726A1 (en) 2020-05-21 2021-11-25 Gregory LIZEE T cell receptors with vgll1 specificity and uses thereof
WO2021247836A1 (en) 2020-06-03 2021-12-09 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods for targeting shp-2 to overcome resistance
WO2022006286A1 (en) 2020-06-30 2022-01-06 Lunglife Ai Methods for detecting lung cancer
GB2597532A (en) 2020-07-28 2022-02-02 Femtogenix Ltd Cytotoxic compounds
EP4243839A1 (en) 2020-11-13 2023-09-20 Catamaran Bio, Inc. Genetically modified natural killer cells and methods of use thereof
US20220162288A1 (en) 2020-11-25 2022-05-26 Catamaran Bio, Inc. Cellular therapeutics engineered with signal modulators and methods of use thereof
JP2024503480A (ja) 2021-01-19 2024-01-25 ウィリアム マーシュ ライス ユニバーシティ ポリペプチドの骨特異的送達法
GB2603166A (en) 2021-01-29 2022-08-03 Thelper As Therapeutic and Diagnostic Agents and Uses Thereof
IL310550A (en) 2021-08-04 2024-03-01 Univ Colorado Regents LAT-activating chimeric antigen receptor T cells and methods of using them
WO2023020612A1 (en) * 2021-08-20 2023-02-23 Biocytogen Pharmaceuticals (Beijing) Co., Ltd. Genetically modified non-human animal with human or chimeric her2
IL311790A (en) 2021-10-05 2024-05-01 Chang Hao Ming Natural killer cells and methods of their use
CN113699221B (zh) * 2021-10-19 2023-10-10 广州吉赛医疗科技有限公司 HER2 mRNA及环状RNA多重荧光定量PCR检测引物探针及其应用
IL311837A (en) 2021-10-20 2024-05-01 Takeda Pharmaceuticals Co BCMA designated preparations and methods for their use
WO2023076880A1 (en) 2021-10-25 2023-05-04 Board Of Regents, The University Of Texas System Foxo1-targeted therapy for the treatment of cancer
CN114262689A (zh) * 2021-12-17 2022-04-01 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 一种快速检测cd19/cd20-car-t细胞活性的方法
GB202201137D0 (en) 2022-01-28 2022-03-16 Thelper As Therapeutic and diagnostic agents and uses thereof
WO2023172514A1 (en) 2022-03-07 2023-09-14 Catamaran Bio, Inc. Engineered immune cell therapeutics targeted to her2 and methods of use thereof
WO2023192976A1 (en) 2022-04-01 2023-10-05 Board Of Regents, The University Of Texas System Dual specificity antibodies to human pd-l1 and pd-l2 and methods of use therefor
WO2023211972A1 (en) 2022-04-28 2023-11-02 Medical University Of South Carolina Chimeric antigen receptor modified regulatory t cells for treating cancer
WO2023220083A1 (en) 2022-05-09 2023-11-16 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Trem compositions and methods of use for treating proliferative disorders
WO2023230531A1 (en) 2022-05-24 2023-11-30 Lunglife Ai, Inc. Methods for detecting circulating genetically abnormal cells
WO2023239940A1 (en) 2022-06-10 2023-12-14 Research Development Foundation Engineered fcriib selective igg1 fc variants and uses thereof
WO2024138128A2 (en) 2022-12-23 2024-06-27 Genentech, Inc. Cereblon degrader conjugates, and uses thereof

Family Cites Families (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL154600B (nl) * 1971-02-10 1977-09-15 Organon Nv Werkwijze voor het aantonen en bepalen van specifiek bindende eiwitten en hun corresponderende bindbare stoffen.
NL154598B (nl) * 1970-11-10 1977-09-15 Organon Nv Werkwijze voor het aantonen en bepalen van laagmoleculire verbindingen en van eiwitten die deze verbindingen specifiek kunnen binden, alsmede testverpakking.
US3817837A (en) * 1971-05-14 1974-06-18 Syva Corp Enzyme amplification assay
US3901654A (en) * 1971-06-21 1975-08-26 Biological Developments Receptor assays of biologically active compounds employing biologically specific receptors
US3766162A (en) * 1971-08-24 1973-10-16 Hoffmann La Roche Barbituric acid antigens and antibodies specific therefor
US3935074A (en) * 1973-12-17 1976-01-27 Syva Company Antibody steric hindrance immunoassay with two antibodies
US3996345A (en) * 1974-08-12 1976-12-07 Syva Company Fluorescence quenching with immunological pairs in immunoassays
US4034074A (en) * 1974-09-19 1977-07-05 The Board Of Trustees Of Leland Stanford Junior University Universal reagent 2-site immunoradiometric assay using labelled anti (IgG)
US3984533A (en) * 1975-11-13 1976-10-05 General Electric Company Electrophoretic method of detecting antigen-antibody reaction
US4098876A (en) * 1976-10-26 1978-07-04 Corning Glass Works Reverse sandwich immunoassay
US4233402A (en) * 1978-04-05 1980-11-11 Syva Company Reagents and method employing channeling
US4452901A (en) * 1980-03-20 1984-06-05 Ciba-Geigy Corporation Electrophoretically transferring electropherograms to nitrocellulose sheets for immuno-assays
US7838216B1 (en) * 1986-03-05 2010-11-23 The United States Of America, As Represented By The Department Of Health And Human Services Human gene related to but distinct from EGF receptor gene
US5401638A (en) * 1986-06-04 1995-03-28 Oncogene Science, Inc. Detection and quantification of neu related proteins in the biological fluids of humans
ES2106033T3 (es) * 1989-05-19 1997-11-01 Genentech Inc Dominio extracelular de her2.
DK0444181T3 (da) * 1989-08-04 2002-02-25 Schering Ag C-erbB-2 eksternt domæne: gp75
ATE120860T1 (de) * 1990-01-26 1995-04-15 Washington Res Found Immunreaktivität gegenüber exprimierten aktivierten oncogenen zur diagnose und behandlung von bösartigen geschwülsten.
US5958784A (en) * 1992-03-25 1999-09-28 Benner; Steven Albert Predicting folded structures of proteins
CA2157510A1 (en) * 1993-03-05 1994-09-15 Howard M. Grey Hla-a2.1 binding peptides and their uses
US5550214A (en) * 1994-02-10 1996-08-27 Brigham And Women's Hospital Isolated antigenic oncogene peptide fragments and uses
JPH10510988A (ja) * 1994-12-14 1998-10-27 ザ スクリップス リサーチ インスティテュート 腫瘍−特異的細胞毒性ｔ細胞のインビボ活性化
US6514942B1 (en) * 1995-03-14 2003-02-04 The Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions for stimulating T-lymphocytes
US5840839A (en) * 1996-02-09 1998-11-24 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Alternative open reading frame DNA of a normal gene and a novel human cancer antigen encoded therein
FR2812087B1 (fr) * 2000-07-21 2007-05-11 Inst Nat Sante Rech Med Procede de criblage de peptides utilisables en immunotherapie

Also Published As

Publication number Publication date
EP0817846A1 (en) 1998-01-14
KR100554186B1 (ko) 2007-04-11
NO974502D0 (no) 1997-09-29
AU5522296A (en) 1996-10-16
US20080076904A1 (en) 2008-03-27
CN1951398A (zh) 2007-04-25
DE69634912T2 (de) 2006-04-20
CZ296618B6 (cs) 2006-05-17
EP1418235A2 (en) 2004-05-12
US5846538A (en) 1998-12-08
US7247703B2 (en) 2007-07-24
RU2236461C2 (ru) 2004-09-20
NZ306616A (en) 2001-03-30
KR19980703453A (ko) 1998-11-05
DK0817846T3 (da) 2005-11-07
BR9607889A (pt) 1999-08-10
MX9707501A (es) 1998-06-30
DE69634912D1 (de) 2005-08-11
WO1996030514A1 (en) 1996-10-03
US6664370B2 (en) 2003-12-16
CN1183117A (zh) 1998-05-27
US5801005A (en) 1998-09-01
JPH11502710A (ja) 1999-03-09
NO974502L (no) 1997-11-27
EP1418235A3 (en) 2004-08-11
JP4510147B2 (ja) 2010-07-21
EP0817846B1 (en) 2005-07-06
CA2216601A1 (en) 1996-10-03
AU708237B2 (en) 1999-07-29
ATE299180T1 (de) 2005-07-15
RU2004115492A (ru) 2005-11-10
CN1597953A (zh) 2005-03-23
HUP9801826A2 (hu) 1998-11-30
US6075122A (en) 2000-06-13
ES2245783T3 (es) 2006-01-16
US7655239B2 (en) 2010-02-02
US5876712A (en) 1999-03-02
PT817846E (pt) 2005-11-30
CZ309697A3 (cs) 1998-01-14
US20100087621A1 (en) 2010-04-08
US5726023A (en) 1998-03-10
NO20061723L (no) 1996-10-01
JP2008056679A (ja) 2008-03-13
CA2216601C (en) 2002-10-22
HUP9801826A3 (en) 2000-12-28
CZ296617B6 (cs) 2006-05-17
US20040082758A1 (en) 2004-04-29
CN1150318C (zh) 2004-05-19
US20020055614A1 (en) 2002-05-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO321941B1 (no) Blanding som omfatter et polypeptid, nukleinsyre som styrer ekspresjonen av polypeptidet og viral vektor, samt anvendelser derav for fremstilling av et medikament.
US5869445A (en) Methods for eliciting or enhancing reactivity to HER-2/neu protein
US20020039573A1 (en) Compounds and methods for prevention and treatment of HER-2/neu associated malignancies
JP5164300B2 (ja) ＨＥＲ−２／ｎｅｕ融合タンパク質
DK2186889T3 (en) CDCA1 PEPTID AND PHARMACEUTICAL COMPOSITION, INCLUDING THIS
CZ20011144A3 (cs) Prostředky a způsoby pro WT1 specifickou imunoterapii
NO20011586L (no) Nye fremgangsmater for terapeutisk vaksinasjon
JP2004521609A (ja) Ｈｅｒ−２／ｎｅｕ融合タンパク質
CA2308127C (en) Agonist and antagonist peptides of carcinoembryonic antigen (cea)
EP0895538B1 (en) Mutated ras peptides for generation of cd8+ cytotoxic t lymphocytes
AU2013357239A1 (en) Novel MHC-independent tumor-associated antigens
US8524491B2 (en) Compounds for eliciting or enhancing immune reactivity to HER-2/neu protein for prevention or treatment of malignancies in which the HER-2/neu oncogene is associated
US7311914B2 (en) MAGE-A4 antigenic peptides and uses thereof
EP0862740B1 (en) Oncogene fusion protein peptide vaccines
US7709002B1 (en) Mutated ras peptides for generation of CD8+Cytotoxic T lymphocytes
CA2691406C (en) Preprocalcitonin antigen t epitopes
US20060009393A1 (en) Immunogenic epitopes for fibroblast growth factors 5 (FGF-5)
JPWO2005007694A1 (ja) ＨＥＲ２／ｎｅｕペプチドおよびその治療上の用途
MXPA97007501A (en) Intracellular domain of protein her-2 / neu for the prevention or treatment of malignida
WO2000013699A1 (en) An antigenic peptide encoded by an alternative open reading frame of human macrophage colony-stimulating factor
WO2004045555A2 (en) Immunogenic epitopes for fibroblast growth factor 5 (fgf-5) presented by hla-a3 and hla-a2