RU2624862C2 - Пептид-иммуноген, используемый в терапевтической вакцине для лечения метастатического рака молочной железы - Google Patents
Пептид-иммуноген, используемый в терапевтической вакцине для лечения метастатического рака молочной железы Download PDFInfo
- Publication number
- RU2624862C2 RU2624862C2 RU2015145113A RU2015145113A RU2624862C2 RU 2624862 C2 RU2624862 C2 RU 2624862C2 RU 2015145113 A RU2015145113 A RU 2015145113A RU 2015145113 A RU2015145113 A RU 2015145113A RU 2624862 C2 RU2624862 C2 RU 2624862C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- peptide
- cells
- amino acid
- immunogen
- vaccine
- Prior art date
Links
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims abstract description 9
- 206010055113 Breast cancer metastatic Diseases 0.000 title claims abstract description 6
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 51
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 claims abstract description 25
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 claims abstract description 25
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims abstract description 21
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims abstract description 13
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims abstract description 13
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 11
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 11
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 15
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 abstract description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 abstract description 5
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 abstract description 4
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 abstract description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 abstract description 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 abstract description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 37
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 25
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 18
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 16
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 14
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 14
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 11
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 8
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- 238000011887 Necropsy Methods 0.000 description 5
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 5
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 5
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 4
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 4
- 235000021050 feed intake Nutrition 0.000 description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 4
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 4
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 229940023041 peptide vaccine Drugs 0.000 description 4
- 102220240796 rs553605556 Human genes 0.000 description 4
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 4
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 3
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 3
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 3
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 3
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 3
- 102000002281 Adenylate kinase Human genes 0.000 description 2
- 108020000543 Adenylate kinase Proteins 0.000 description 2
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 2
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010029379 Neutrophilia Diseases 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 231100000161 signs of toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 229940043517 specific immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- JJAHTWIKCUJRDK-UHFFFAOYSA-N succinimidyl 4-(N-maleimidomethyl)cyclohexane-1-carboxylate Chemical compound C1CC(CN2C(C=CC2=O)=O)CCC1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O JJAHTWIKCUJRDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 229940126622 therapeutic monoclonal antibody Drugs 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 2
- FPKVOQKZMBDBKP-UHFFFAOYSA-N 1-[4-[(2,5-dioxopyrrol-1-yl)methyl]cyclohexanecarbonyl]oxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonic acid Chemical compound O=C1C(S(=O)(=O)O)CC(=O)N1OC(=O)C1CCC(CN2C(C=CC2=O)=O)CC1 FPKVOQKZMBDBKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(4-bromopyrazol-1-yl)ethyl]isoindole-1,3-dione Chemical compound C1=C(Br)C=NN1CCN1C(=O)C2=CC=CC=C2C1=O WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010002536 Anisocytosis Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 102100033620 Calponin-1 Human genes 0.000 description 1
- 241000975300 Concholepas concholepas Species 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 1
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 1
- 206010015548 Euthanasia Diseases 0.000 description 1
- 101000945318 Homo sapiens Calponin-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000652736 Homo sapiens Transgelin Proteins 0.000 description 1
- 206010021118 Hypotonia Diseases 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 208000007379 Muscle Hypotonia Diseases 0.000 description 1
- 101100273833 Rattus norvegicus Cds1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001494 anti-thymocyte effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000008512 biological response Effects 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000007665 chronic toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000160 chronic toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000001794 hormone therapy Methods 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000004201 immune sera Anatomy 0.000 description 1
- 229940042743 immune sera Drugs 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000006054 immunological memory Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 238000000816 matrix-assisted laser desorption--ionisation Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 210000001806 memory b lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000003147 molecular marker Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 239000010413 mother solution Substances 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 230000003448 neutrophilic effect Effects 0.000 description 1
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000000863 peptide conjugate Substances 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000009131 signaling function Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- VUFNRPJNRFOTGK-UHFFFAOYSA-M sodium;1-[4-[(2,5-dioxopyrrol-1-yl)methyl]cyclohexanecarbonyl]oxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonate Chemical compound [Na+].O=C1C(S(=O)(=O)[O-])CC(=O)N1OC(=O)C1CCC(CN2C(C=CC2=O)=O)CC1 VUFNRPJNRFOTGK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для получения пептида, используемого в вакцине для лечения метастатического рака молочной железы человека. Пептид-иммуноген характеризуется аминокислотной последовательностью CKGPIVLDGVIKTQPHAAEK (SEQ ID NO: 1), идентичной аминокислотным последовательностям активного центра рецептора EGFR и содержит ковалентно с ним связанный белок-носитель. В качестве белка-носителя он содержит бычий сывороточный альбумин (БСА), или катионизированный бычий сывороточный альбумин, или овальбумин или гемоцианин. Использование данного изобретения позволяет получение пептида-иммуногена, используемого в терапевтической вакцине для лечения метастатического рака молочной железы за счет высокой иммуногенности пептида и обеспечения формирования иммунного ответа только на протективные (функционально значимые) эпитопы целевых онкомаркеров, блокирующие основные пути роста и метастазирования опухоли. 1 з.п. ф-лы, 1 ил., 1 табл.
Description
Изобретение относится к пептидам-иммуногенам, способным формировать в организме эндогенные антитела узкой специфичности, направленные именно к функционально значимым участкам рецептора опухолевых клеток (EGFR) и используемым в терапевтической вакцине для лечения метастатического рака молочной железы, и может быть использовано в онкологии и медицинской иммунологии.
В настоящее время основным способом лечения онкологических заболеваний молочной железы является хирургическое лечение в комбинации с химиотерапией, гормональной терапией или таргетной терапией с использованием терапевтических моноклональных антител. Указанный способ лечения позволяет добиться хороших результатов, но при этом обладает высокой токсичностью, а в случае таргетной терапии высокой стоимостью.
Известно применение терапевтически эффективного количества анти-IL-1 alpha антитела, в частности моноклонального антитела для лечения рака, включающее введение млекопитающему, в частности человеку, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества указанных антител (заявка США №20100040574, МПК А61Р 35/00, опубл. 18.02.2010).
К недостаткам препаратов на основе моноклональных антител стоит отнести длительность курса лечения и необходимость частого внутривенного введения препарата (как правило, каждые две недели).
Эти обстоятельства вызывают в последние годы все больший интерес к препаратам с механизмом терапевтического действия, аналогичным моноклональным антителам, но при этом с продолжительным терапевтическим эффектом при минимальном количестве инъекций.
Наиболее близким аналогом (прототипом) является пептид (пептидный иммуноген), состоящий из 10-30 аминокислотных остатков, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5 и являющийся производным от последовательности рецептора эпидермального фактора роста, имеющего точку мутации Т790М, и обладающий способностью индуцировать пептид-специфический ЦТЛ ответ (международная заявка № WO 2014024965, МПК А61Р 35/00; А61Р 37/04; А61Р 43/00; C07K 14/71, опубл. 13.02.2014). На основе данного пептида получена фармацевтическая композиция, представляющая собой вакцину против немелкоклеточного рака легкого человека.
Однако данный пептидный иммуноген не способен формировать в организме человека эндогенные антитела, направленные против рака молочной железы.
Техническим результатом изобретения является получение пептида-иммуногена, используемого в терапевтической вакцине для лечения метастатического рака молочной железы за счет высокой иммуногенности пептида и обеспечения формирования иммунного ответа только на протективные (функционально значимые) эпитопы целевых онкомаркеров, блокирующих основные пути роста и метастазирования опухоли.
Указанный технический результат достигается тем, что создан пептид-иммуноген, используемый в терапевтической вакцине для лечения метастатического рака молочной железы и характеризующийся следующей аминокислотной последовательностью CKGPIVLDGVIKTQPHAAEK (SEQ ID NO: 1), идентичной аминокислотным последовательностям активного центра рецептора EGFR.
Для усиления иммунного ответа пептид-иммуноген содержит ковалентно с ним связанный белок-носитель. В качестве белка-носителя он содержит бычий сывороточный альбумин (БСА), или катионизированный бычий сывороточный альбумин, или овальбумин, или гемоцианин (keyhole limpet hemocyanin - KLH).
Создаваемая вакцина на основе заявляемого пептида-иммуногена индуцирует специфический гуморальный иммунитет, направленный против основного молекулярного маркера опухоли молочной железы (EGFR).
Механизм действия вакцины. В результате иммунизации вакциной в организме формируются эндогенные антитела узкой специфичности, направленные именно к функционально значимым участкам рецептора опухолевых клеток (EGFR). Поскольку получаемые в процессе вакцинации эндогенные антитела специфически связываются с теми участками рецептора, которые ответственны за лиганд-рецепторные взаимодействия и за конформационные изменения в рецепторе, то есть специфические эндогенные антитела будут блокировать функции рецептора и, таким образом, будут подавлять рост и метастазирование опухолевых клеток. Кроме того, опухолевые клетки, опсонизированные антителами, приобретают статус чужеродного объекта с точки зрения иммунной системы и уничтожатся клетками иммунной системы.
Антитела, сформированные в ответ на вакцинацию пептидной вакциной, блокируют функции рецептора EGFR, аналогично тому как это делают доказавшие свою эффективность в клинических испытаниях терапевтические моноклональные антитела, используемые при лечении рака молочной железы человека.
Блокировка основных путей роста и метастазирования опухоли происходит за счет того, что при вакцинировании пептидной вакциной, в состав которой входит пептидная последовательность, идентичная аминокислотной последовательности активного центра рецептора EGFR, происходит индукция В-клеток иммунологической памяти и плазматических клеток, которые секретируют эпитоп-специфические иммуноглобулины, специфичные к активным центрам онкомаркеров; эпитоп-специфические иммуноглобулины находят рецептор-мишень, блокируют его сигнальную функцию стимуляции опухолевого роста и параллельно привлекают макрофаги и нейтрофилы, которые опознают комплекс антитела с антигеном по Fc-концу иммуноглобулина, эти эффекторы неспецифического иммунитета и разрушают опухолевую клетку.
Избежать иммунологическую толерантность позволяет то, что к пептиду присоединен высокомолекулярный и высокоиммуногенный белок-носитель, а в полученную на его основе вакцину вводят адъюванты.
Пример 1. Синтез пептида-иммуногена
Синтез последовательности проводился с использованием стандартного оборудования в автоматическом режиме на пептидном синтезаторе и методик твердофазного пептидного синтеза (Peptide Synthesis, 2nd edn., Pierce Chem. Co., Rickford IL), (Rodionov I.L., Baru M.B. and Ivanov V.T. A Swellographic approach to monitoring continuous flow solid phase peptide synthesis, Peptide Res., 1992, v. 5, No. 2, p. 119-125). Синтез может быть проведен с использованием любых других методик синтеза аминокислотных последовательностей, например, таких как жидкофазный пептидный синтез, синтез с использованием генетически модифицированных микроорганизмов (технологии получения рекомбинантных белков), фрагментирование нативного белка EGFR с последующим выделением соответствующих фрагментов. Пептид очищают хроматографически методом гель-фильтрации на колонке со смолой Sephadex G-10 (26×500 мм) в 1 N уксусной кислоте. Структуру пептида затем анализируют по аминокислотному составу известными специалистам, работающим в области пептидов, методами аминокислотного анализа и MALDI-спектрометрии.
Полученный пептид-иммуноген характеризуется следующей аминокислотной последовательностью CKGPIVLDGVIKTQPHAAEK (SEQ ID NO: 1), идентичной аминокислотным последовательностям активного центра рецептора EGFR.
В качестве пептидного иммуногена (противораковой вакцины) используется пептид с использованием высокомолекулярных носителей (белков-носителей), например, таких как BSA (БСА - Бычий сывороточный альбумин), cBSA (Cationized BSA), KLH (keyhole limpet hemocyanin), ВС (Concholepas concholepas hemocyanin (marketed as Blue Carrier), Ovalbumin и д.р.
Пептид конъюгируют с белками-носителями, т.е. пришивают на белок носитель посредством ковалентной связи. Ковалентную связь создают с использованием различных конъюгирующих агентов, например, таких как ГА (глутаровый альдегид), SMCC (Succinimidyl-4-(N-maleimidomethyl) cyclohexane-1-carboxylate), Sulfo-SMCC (Sulfosuccinimidyl-4-(N-maleimidomethyl) cyclohexane-1-carboxylate), EDC (1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide) и многие другие.
Пример 2. Конъюгирование пептида, например, на белок носитель KLH (гемоцианин)
Готовят навеску SulfoSMCC (Thermo Scientific No22122) 2,5 мг. Растворяют в 500 мкл дистиллированной воды. К 350 мкл KLH (Thermo Scientific No77600) (10 мг/мл) добавляют 350 мкл SulfoSMCC (5 мг/мл). Инкубируют при комнатной температуре в течение 1 ч. Активированный KLH разделяют на колонке 10 мл Sepharose CL4B (Pharmacia Fine Chemicals No IB 28549) в восьмикратном ФСБ при длине волны 280 AU=0,2. Собирают первый пик. С помощью калибровочных образцов KLH строят калибровочную кривую и определяют концентрацию активированного KLH после очистки на колонке. 1 мг пептида растворяют в 250 мкл восьмикратного ФСБ. После чего добавляют активированный KLH, исходя из определенной концентрации таким образом, чтобы на 1 мг пептида приходилось 0,75 мг KLH. Инкубируют при комнатной температуре 2 ч.
Далее проводят диализ. Конъюгаты пептидов помещают в диализные кассеты (Thermo Scientific No87723) и диализуют в растворе NaCl в течение ночи.
Пример 3. Получение готовой пептидной вакцины
Для получения иммуногенной пептидной вакцины конъюгат пептида и белка носителя сорбируют на гидроокись алюминия, для этого, исходя из полученной концентрации конъюгатов, рассчитывают объем конъюгата согласно дозе вакцинного препарата, добавляют 110 мкл гидроксида алюминия и затем доводят общий объем до 1,9 мл стерильным физиологическим раствором.
Действие разработанной вакцины на основе противоопухолевого пептида можно проиллюстрировать следующими примерами 4-7.
Пример 4. Измерение ингибирования пролиферации клеток-мишеней иммунными сыворотками мышей
Для измерения ингибирования EGF-зависимой пролиферации использовали клетки А431 возрастом 18-20 ч, адгезированные на дне лунки 96-луночного культурального планшета таким образом, чтобы «распластанные» клетки находились раздельно или «островками». Для этого использовали посадочную концентрацию 30000 кл/мл в питательной среде DMEM с добавлением 10% сыворотки крови эмбрионов коров. 96-луночный планшет с клетками охлаждают при +4°C в течение 2-3 ч, после чего вносили по 20 мкл исследуемых сывороток в лунку. Сыворотки предварительно прогревают 30 мин при температуре 56°C, разведены в питательной среде DMEM в 2 раза, отцентрифугированы 10 мин при 10000 об/мин. Культура клеток А431 с внесенными сыворотками инкубируют 30 мин при температуре 37°C, в это время готовят раствор эпидермального фактора роста EGF - к 1300 мкл среды добавляют 2 мкл маточного раствора EGF (10 мкг/мл). Полученный раствор добавляют по 20 мкл в лунки микропланшета от А1 до Н8 так, чтобы конечная концентрация в лунке получилась равной 0,2 нМ. Инкубируют 1 ч при 37°С, затем заменяют питательную среду во всех лунках и вновь внесят по 20 мкл сывороткок в соответствующие лунки. Инкубируют 48 ч при 37°C, наблюдая EGF-индуцированную пролиферацию клеток ежедневно. Для измерения количества клеток в лунке используют окрашивание кристалл виолетом фиксированных альдегидом клеток. Для этого охлажденный монослой клеток промывают 1 раз охлажденным фосфатным буферным раствором. На охлажденный слой клеток наносят 150 мкл/лунку охлажденного 1%-ного раствора глутарового альдегида в фосфатном буферном растворе (15 мл ФБР + 0,63 мл ГА) на 10 мин. Проводят 4-5-кратное промывание раствором ФБР. Готовят 0,1% раствор кристалл виолета в воде и вносят по 100 мкл в лунки на 10-20 мин. Ополаскивают и промывают проточной водой из-под крана. Монослой высушивают и хранят при +4°С. Связавшиеся кристаллы виолета в лунке растворяли в 100 мкл раствора 0,2% тритон Х-100 в ФБР. Поглощение измеряли на планшетном спектрофотометре Мультискан ЕХ при длине волны 570 нм. Оптическая плотность раствора в лунке прямо пропорциональна количеству клеток в ней.
Полученные данные показывают усиление скорости пролиферации клеток А431 в результате воздействия фактора роста EGF, среднее значение оптической плотности в лунках с обработанными EGF клетками составляет 0,78 при стандартном отклонении 0,05, а в необработанных лунках эта величина составляет 0,33 (SD=0,04).
Сыворотки, полученные после иммунизации пептидными иммуногенами из функционально значимых районов EGFR, оказывают ингибирующее действие на рост клеток как после индукции EGF, так и без индукции. Средняя оптическая плотность по группе мышей, иммунизированных пептидными иммуногенами из функционально значимых районов EGFR, составила 0,43 против 0,78 в контрольной группе при стимуляции роста клеток с помощью фактора роста EGF. Без стимуляции EGF оптическая плотность по группе мышей иммунизированных пептидными иммуногенами из функционально значимых районов EGFR составила 0,22 против 0,33 в контроле.
Полученные результаты показывают, что антитела, индуцированные пептидными иммуногенами из функционально значимых районов EGFR, вызывают биологический ответ целевых клеток-мишеней, в нашем случае клеток человека А431, несущих рецепторы эпидермального фактора роста 1-го.
Пример 5. Антителозависимый цитотоксический лизис клеток-мишеней
Для измерения антителозависимого цитотоксического лизиса клеток-мишеней А431 эпидермоидной карциномы человека под действием антител иммунных мышей в качестве клеток-эффекторов использовали спленоциты, выделенные из селезенки нормальной неиммунной мыши Ballb/c. Антиген-специфические антитела из погруппно пулированных сывороток иммунных мышей выделяли методом аффинной хроматографии против соответствующих антигенных пептидов.
Получение клеток-эффекторов. Для получения спленоцитов мыши стерильно извлекали селезенку из неиммунной мыши Ballb/c и помещали ее в пенфлакон с 3 мл питательной среды DMEM с 10% фетальной сыворотки (DMEM-10) на льду. Стерильно в 6-луночный культуральный планшет вносили по 5 мл DMEM-10 в лунки. С помощью пинцета помещали стерильно ситечки (сито 70 мкм) в лунки со средой DMEM-10 на льду. Переносили с помощью пинцета селезенку из пенфлакона в ситечко и с помощью обратной стороны стерильного шприца на 5 мл аккуратно растирали селезенку в ситечке. Ситечко промывали полученной суспензией клеток несколько раз и переставляли с помощью стерильного пинцета в чистую лунку. С помощью автоматической пипетки на 1 мл переносили суспензию спленоцитов из одной лунки планшета в другую, пропустив ее сквозь 70 мкм ситечко на льду. Полученную суспензию спленоцитов мыши переносили в пробирку на 15 мл (на льду). Проводили 3-кратную отмывку клеток. Для этого суспензию клеток центрифугировали при +4°С в течение 3 мин при 1500 об/мин (400 g). Супернатант удаляли и заливали 5 мл новой DMEM-10, клетки тщательно ресуспендировали с помощью пипетки. Центрифугировали 3 мин при 1500 об/мин при +4°С и повторяли процедуру отмывки еще 1 раз. Супернатант полностью удаляли и проводили лизис эритроцитов. Для этого ресуспендировали осадок клеток в 1,5 мл АСК лизирующего буфера при комнатной температуре 10 мин в пробирке 15 мл, поворачивая пробирку вверх-вниз, после чего добавляли 9 мл DMEM-10 и центрифугировали 3 мин при 1500 об/мин при +4°С. Убедившись в отсутствии красных клеток в осадке, проводили вторую отмывку в 10 мл DMEM-10, осадок спленоцитов ресуспендировали пипеткой в 3 мл DMEM-10 на льду стерильно. Для определения концентрации клеток суспензию спленоцитов разводили в 10 раз в отдельных микропробирках и проводили подсчет клеток в камере Розенталя-Фукса. Вычисляли требуемое разведение клеток и готовили из исходной суспензии спленоцитов в 15 мл пробирках суспензии клеток с 3⋅106 лимфоцитов/мл, добавляя необходимый объем DMEM-10.
Нанесение клеток-эффекторов на клетки-мишени и учет результатов. Удаляли среду из культурального планшета с монослоем клеток-мишеней и вносили по 100 мкл новой среды DMEM-10. В первый ряд вносили по 50 мкл исследуемой сыворотки и титровали с 3-кратным шагом, перенося по 50 мкл в следующую лунку. Из последней лунки 50 мкл удаляли. Инкубировали планшет с монослоем клеток и исследуемыми антителами при 37°С 20 мин. Вносили по 100 мкл суспензии лимфоцитов в концентрации 3⋅106 лимфоцитов/мл в среде DMEM-10 в лунки. Таким образом, соотношение «эффекторы/мишени» соответствовало примерно 10:1. Планшет инкубировали при 37°С 3 ч и регистрировали антителозависимый лизис клеток-мишеней по высвобождению аденилат киназы из разрушенных клеток в культуральную жидкость. Концентрацию аденилат киназы измеряли с помощью набора ToxiLight BioAssay Kit (Lonza, Rockland, ME, USA) на планшетном люминометре Tecan Infinite 200.
Эффект антителозависимого цитотоксического лизиса рассчитывался по формуле
% Цитотоксичности = 100%⋅(ОЕЛэксперимент - ОЕЛспленоцит+мишень спонтанная)/(ОЕЛмишень максимальная - ОЕЛмишень спонтанная),
ОЕЛ = (ОЕЛклетки-ОЕЛчистая лунка) - относительная единица люминесценции, полученная путем вычитания из величины сигнала люминесценции при наличии клеток-мишеней в лунке величины сигнала люминесценции в соответствующей лунке без клеток- мишеней.
Полученные результаты показывают цитотоксическую активности на уровне 65% у антител, индуцированных пептидными иммуногенами из функционально значимых районов EGFR.
Пример 6. Протективность пептидного иммуногена из функционально значимых районов EGFR на модели опухоли мышей
После завершения цикла иммунизации пептидным иммуногеном из функционально значимых районов EGFR мышам прививали саркому Эрлиха. В группах мышей, иммунизированных контрольными пептидами, не наблюдали защиты вообще или она была минимальной, однако в группах мышей, иммунизированных пептидными иммуногенами из функционально значимых районов EGFR, опухоль не развивалась у 70% животных. У остальных животных этих групп наблюдали торможение роста опухоли относительно контрольной группы (см. табл. 1).
Пример 7. Протективность вакцины на модели ксенографтов опухолевых клеток человека
После завершения цикла иммунизации мышам подкожно трансплантировали культуры клеток линии А431 эпидермоидной карциномы человека. Предварительно за 1 день до трансплантации опухолевых клеток мышам вводили антитимоцитарную сыворотку для подавления ответа Т-лимфоцитов на чужеродные клетки. Антитимоцитарную сыворотку вводили с интервалом 6 дней до завершения эксперимента. В группе мышей, иммунизированных пептидными иммуногенами из функционально значимых районов EGFR, не наблюдали появление опухолевых узлов вообще, в группах, вакцинированных отдельными пептидами, опухолевые узлы проявлялись через 5-6 дней и исчезали через 1-2 недели после появления. В контрольных группах наблюдали появление твердых опухолевых узлов различных размеров на 4-6 день после трансплантации опухолевых клеток, которые не исчезали на протяжении всего эксперимента (см. фиг. 1).
Пример 8. Изучение острой токсичности пептидного иммуногена из функционально значимых районов EGFR при подкожном введении на мышах CD-1
Целью данного исследования являлось определение токсических эффектов пептидных иммуногенов из функционально значимых районов EGFR при однократном (дробно в течение суток) подкожном введении самцам и самкам мышей CD-1.
В исследовании было использовано 2 группы по 5 самцов и 5 самок мышей CD-1 в каждой. Животным 1-й группы вводили носитель. Животным 2-й группы вводили тестируемый препарат. Каждый из 4-х компонентов вакцины или носитель вводили в объеме 1 мл в отдельную область на теле животного (компонент №1 - в левую паховую область, №2 - в правую паховую область, №3 - в левую подмышечную область, №4 - в правую подмышечную область) со стороны конечности, дробно, четырехкратно по 0,25 мл в каждую точку с интервалом 3 ч. В ходе исследования у животных регистрировали прирост массы тела, потребление корма, внешние проявления токсических эффектов. На 15-й день исследования животных подвергали эвтаназии с осмотром макроповреждений органов, взвешиванием органов, их фиксацией в формалине и сбором образцов крови для гематологического анализа.
В ходе исследования гибели животных, а также признаков токсичности тестируемого препарата не наблюдалось. Статистически значимых различий между контрольными животными и животными, получавшими тестируемый препарат, по приросту массы тела и потреблению корма ни у самцов, ни у самок выявлено не было.
Результаты гематологического анализа показали, что у самцов, получавших тестируемый препарат, наблюдалось небольшое, но стастистически значимое увеличение широты распределения эритроцитов по объему (RDW) по сравнению с контрольной группой, что указывает на небольшой рост анизоцитоза эритроцитов. Кроме того, в группе самцов, получивших вакцину, зафиксировано небольшое, но стастистически значимое увеличение среднего объема тромбоцитов (MPV). У самок, получавших тестируемую вакцину, наблюдалось небольшое статистически значимое снижение значения среднего объема эритроцитов (MCV) относительно контрольной группы. Обнаруженные различия некоторых показателей относительно контрольных групп (широта распределения эритроцитов по объему RDW и средний объем тромбоцитов MPV у самцов и средний объем эритроцитов MCV у самок) незначительны и скорее всего являются случайными, не связанными с действием препарата.
При плановой некропсии в конце исследования макроскопических изменений внутренних органов, связанных с действием тестируемого препарата, обнаружено не было.
Таким образом, на основании проведенного исследования может быть сделано заключение о том, что тестируемые пептидные иммуногены из функционально значимых районов EGFR при дробном четырехкратном подкожном применении у мышей CD-I является безопасной и может быть рекомендована для проведения клинических испытаний.
Пример 9. Изучение хронической токсичности пептидного иммуногена из функционально значимых районов EGFR при подкожном введении на крысах CD
Целью данного исследования являлось определение токсических эффектов пептидных иммуногенов из функционально значимых районов EGFR при многократном подкожном введении самцам и самкам крыс CD с последующим периодом отмены.
В исследовании было использовано 2 группы по 10 самцов и 10 самок крыс CD в каждой. Животным 1-й группы вводили носитель. Животным 2-й группы вводили тестируемый препарат. Тестируемый препарат или носитель вводили подкожно, 5 раз с интервалом 14 дней. Каждый из 4-х компонентов вакцины или носитель вводили в объеме 0,5 мл в отдельную область на теле животного (компонент №1 - в левую паховую область, №2 - в правую паховую область, №3 - в левую подмышечную область, №4 - в правую подмышечную область), со стороны конечности. Носитель вводили в объеме по 0,5 мл в каждую из 4-х точек на теле животного. В ходе исследования у животных еженедельно регистрировали прирост веса тела, потребление корма и проявление клинических признаков токсичности исследуемого препарата. Ректальную температуру измеряли на следующий день после каждой инъекции. На 58-й день исследования (на следующий день после 5-й инъекции) по 5 животных из каждой группы были подвергнуты эвтаназии и некропсии с фиксацией органов для последующего гистологического анализа. Остальные животные были подвергнуты некропсии после 14-дневного периода отмены введения (72-й день исследования). При некропсии регистрировали массу внутренних органов и собирали образцы крови для биохимического и гематологического анализа.
В ходе исследования гибели животных не наблюдалось. Основными отклонениями при клиническом осмотре были уплотнения во всех 4-х областях введения у всех животных обоего пола. Данные уплотнения не были связаны с действием тестируемого вещества, поскольку наблюдались также и в группе, получавшей носитель, и по всей видимости были следствием инкапсулирования гидроксида алюминия. Другие клинические признаки включали в себя хромодакриорею, истощение и визуальную потерю веса, пилоэрекцию, сгорбленную позу, снижение мышечного тонуса и диарею. Однако эти признаки также не были связаны с действием тестируемого вещества, поскольку наблюдались как в тестируемой, так и в контрольной группе.
Статистически значимых различий между контрольными животными и животными, получавшими тестируемый препарат, по приросту массы тела и потреблению корма ни у самцов, ни у самок выявлено не было.
Данные гематололгического анализа выявили у самцов, получавших вакцину, умеренный абсолютный и относительный нейтрофилез и относительное уменьшение количества лимфоцитов и клеток средних размеров к 58-му дню исследования. Все эти параметры нормализовались к концу восстановительного периода (72-му дню исследования), и не наблюдалось статистически значимых различий между контрольной и тестируемой группами. Аналогично самцам у самок, получавших вакцину, 58-му дню исследования зарегистрирован слабый абсолютный и относительный нейтрофилез, абсолютное и относительное уменьшение количества клеток средних размеров. К 72-му дню все перечисленные параметры нормализовались, и не наблюдалось статистически значимых различий между контрольной и тестируемой группами за исключением абсолютного количества нейтрофильньтх гранулоцитов. Статистически значимых различий между контрольными животными и животными, получавшими тестируемый препарат, по всем остальным гематологическим параметрам ни у самцов, ни у самок выявлено не было.
Не наблюдалось статистически значимых различий между животными, получавшими носитель, и животными, получавшими вакцину, по массе органов за исключением массы печени у самок. Абсолютная и относительная масса печени была увеличена к 58-му дню исследования у самок, получавших вакцину, по сравнению с контрольной группой. К концу восстановительного периода различий между контрольной и тестируемой группами самок по данному параметру не наблюдалось.
При плановой некропсии в конце исследования макроскопических изменений внутренних органов обнаружено не было кроме уплотнений в местах введения препаратов.
Таким образом, на основании проведенного исследования может быть сделано заключение о том, что тестируемый пептидный иммуноген из функционально значимых районов EGFR при многократном подкожном применении у крыс CD является безопасной и может быть рекомендована для проведения клинических испытаний.
Claims (2)
1. Пептид-иммуноген, используемый в терапевтической вакцине для лечения метастатического рака молочной железы человека, характеризующийся следующей аминокислотной последовательностью: CKGPIVLDGVIKTQPHAAEK (SEQ ID NO: 1), идентичной аминокислотным последовательностям активного центра рецептора EGFR и содержит ковалентно с ним связанный белок-носитель.
2. Пептид-иммуноген по п. 1, отличающийся тем, что в качестве белка-носителя он содержит бычий сывороточный альбумин (БСА), или катионизированный бычий сывороточный альбумин, или овальбумин, или гемоцианин.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015145113A RU2624862C2 (ru) | 2015-10-20 | 2015-10-20 | Пептид-иммуноген, используемый в терапевтической вакцине для лечения метастатического рака молочной железы |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015145113A RU2624862C2 (ru) | 2015-10-20 | 2015-10-20 | Пептид-иммуноген, используемый в терапевтической вакцине для лечения метастатического рака молочной железы |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2015145113A RU2015145113A (ru) | 2017-04-26 |
| RU2624862C2 true RU2624862C2 (ru) | 2017-07-07 |
Family
ID=58642059
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2015145113A RU2624862C2 (ru) | 2015-10-20 | 2015-10-20 | Пептид-иммуноген, используемый в терапевтической вакцине для лечения метастатического рака молочной железы |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2624862C2 (ru) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2236461C2 (ru) * | 1995-03-31 | 2004-09-20 | Юниверсити Оф Вашингтон | Внутриклеточный домен белка her-2/neu для предупреждения или лечения малигнизаций |
| WO2012051247A2 (en) * | 2010-10-12 | 2012-04-19 | Arizona Biomedical Research Commission | Egfr-based peptides |
| RU2488596C2 (ru) * | 2007-03-01 | 2013-07-27 | Симфоген А/С | Композиции рекомбинантных антител против рецептора эпидермального фактора роста |
| US20150218248A1 (en) * | 2012-08-10 | 2015-08-06 | Kanagawa Prefectural Hospital Organization | Antigen Peptide Originated From T790M Point-Mutated Sequence of Epidermal Growth Factor Receptor |
-
2015
- 2015-10-20 RU RU2015145113A patent/RU2624862C2/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2236461C2 (ru) * | 1995-03-31 | 2004-09-20 | Юниверсити Оф Вашингтон | Внутриклеточный домен белка her-2/neu для предупреждения или лечения малигнизаций |
| RU2488596C2 (ru) * | 2007-03-01 | 2013-07-27 | Симфоген А/С | Композиции рекомбинантных антител против рецептора эпидермального фактора роста |
| WO2012051247A2 (en) * | 2010-10-12 | 2012-04-19 | Arizona Biomedical Research Commission | Egfr-based peptides |
| US20150218248A1 (en) * | 2012-08-10 | 2015-08-06 | Kanagawa Prefectural Hospital Organization | Antigen Peptide Originated From T790M Point-Mutated Sequence of Epidermal Growth Factor Receptor |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2015145113A (ru) | 2017-04-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2703780T3 (es) | Preparación de una vacuna que contiene anticuerpos trifuncionales con propiedades potenciadoras de la inmunogenicidad del antígeno | |
| KR101399591B1 (ko) | 동시 화학요법 및 면역요법 | |
| JPH05504554A (ja) | 免疫強化を促進するための方法と組成物 | |
| US9241987B2 (en) | Methods and compositions related to immunogenic fibrils | |
| US11020464B2 (en) | Immunogenic composition targeting S100A9 | |
| Appelbe et al. | Radiation-enhanced delivery of systemically administered amphiphilic-CpG oligodeoxynucleotide | |
| ES2429422A2 (es) | Composición farmacéutica y su uso para preparar un medicamento destinado al tratamiento y la prevención de enfermedades causadas por el VIH | |
| ES2373377T3 (es) | Péptido útil en la inmunomodulación. | |
| ES2555557A2 (es) | Fármaco y uso para preparar un medicamento destinado a la prevención de la infección del VIH y al tratamiento de enfermedades causadas por el VIH, incluido el SIDA | |
| ES2415029A2 (es) | Composición farmacéutica y uso de un anticuerpo para preparar un medicamento destinado a inhibir la producción o amplificar la eliminación de la proteína P24 | |
| CN1856323B (zh) | 在癌症治疗中用于抑制多药耐药性的靶向p-糖蛋白170的治疗性疫苗 | |
| US10660949B2 (en) | Vaccination using plant virus particles linked to HER2 antigens | |
| RU2624862C2 (ru) | Пептид-иммуноген, используемый в терапевтической вакцине для лечения метастатического рака молочной железы | |
| RU2612015C2 (ru) | Пептид-иммуноген, используемый в терапевтической вакцине для лечения метастатического рака молочной железы у кошек и собак | |
| BR112020008668A2 (pt) | nanopartículas que contêm variantes sintéticas de gangliosídeo gm3 como adjuvantes em vacinas | |
| CN104211772A (zh) | 结直肠癌抗原肽与热休克蛋白的复合物及其应用 | |
| US10590178B2 (en) | Chimeric vaccine against fungal infections | |
| CN101297966B (zh) | 肠癌富伴侣分子-抗原肽复合物瘤苗及其制备方法 | |
| EP0334300A1 (en) | The use of monoclonal antibodies and conjugates thereof as signals to direct sensitized effector cells to tumor sites | |
| CN105175498A (zh) | 一种宫颈癌相关的热休克蛋白复合物及其应用 | |
| JP7086000B2 (ja) | 体液性親和性の加速に関する方法及び組成物 | |
| EP4361262A2 (en) | Polypeptide epitopes of s. aureus and respective monoclonal antibodies for the treatment of infections and immune-diagnosis | |
| Chaudhuri et al. | Glioma therapy: a novel insight in the immunotherapeutic regime with T11TS/SLFA-3 | |
| RU2526153C2 (ru) | Способ повышения фармакологической активности действующего вещества лекарственного средства и фармацевтическая композиция | |
| WO2019045025A1 (ja) | ワクチン組成物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HE9A | Changing address for correspondence with an applicant | ||
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20181021 |