JPH06165672A - ポリシストロン性発現ベクターおよびそれを用いた所望の形質転換体の選別法 - Google Patents
ポリシストロン性発現ベクターおよびそれを用いた所望の形質転換体の選別法Info
- Publication number
- JPH06165672A JPH06165672A JP5209358A JP20935893A JPH06165672A JP H06165672 A JPH06165672 A JP H06165672A JP 5209358 A JP5209358 A JP 5209358A JP 20935893 A JP20935893 A JP 20935893A JP H06165672 A JPH06165672 A JP H06165672A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- protein
- sequence
- expression vector
- cells
- cell
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000013598 vector Substances 0.000 title claims abstract description 28
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 title claims abstract description 25
- 230000009466 transformation Effects 0.000 title description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 79
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 66
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 claims abstract description 19
- 238000013519 translation Methods 0.000 claims abstract description 9
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 claims abstract description 8
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims abstract description 5
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims abstract 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 claims description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 15
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 claims description 8
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 claims description 4
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 4
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 4
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 claims description 4
- 102100024746 Dihydrofolate reductase Human genes 0.000 claims 3
- 108020001096 dihydrofolate reductase Proteins 0.000 claims 3
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 75
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 34
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 34
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 34
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 33
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 28
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 24
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 24
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 24
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 16
- 108010054576 Deoxyribonuclease EcoRI Proteins 0.000 description 16
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 16
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 14
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 12
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 12
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 11
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 9
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 9
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 8
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 8
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 5
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 5
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 5
- 101150074155 DHFR gene Proteins 0.000 description 4
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 102000004594 DNA Polymerase I Human genes 0.000 description 3
- 108010017826 DNA Polymerase I Proteins 0.000 description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 3
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 3
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 2
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 2
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000030538 Thecla Species 0.000 description 2
- 102000007501 Thymosin Human genes 0.000 description 2
- 108010046075 Thymosin Proteins 0.000 description 2
- 101710146079 Xanthine-guanine phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- YTRQFSDWAXHJCC-UHFFFAOYSA-N chloroform;phenol Chemical compound ClC(Cl)Cl.OC1=CC=CC=C1 YTRQFSDWAXHJCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 125000001570 methylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])[*:2] 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 2
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- LCJVIYPJPCBWKS-NXPQJCNCSA-N thymosin Chemical compound SC[C@@H](N)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H]([C@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(O)=O LCJVIYPJPCBWKS-NXPQJCNCSA-N 0.000 description 2
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 102000002265 Human Growth Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- 239000000854 Human Growth Hormone Substances 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- -1 L iu et al. Proteins 0.000 description 1
- 206010067125 Liver injury Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 125000003047 N-acetyl group Chemical group 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000005157 Somatostatin Human genes 0.000 description 1
- 108010056088 Somatostatin Proteins 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012223 aqueous fraction Substances 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001728 clone cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 108010092809 exonuclease Bal 31 Proteins 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 231100000234 hepatic damage Toxicity 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000008818 liver damage Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000012805 post-processing Methods 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 102220201851 rs143406017 Human genes 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N somatostatin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)[C@@H](C)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N)C(O)=O)=O)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N 0.000 description 1
- 229960000553 somatostatin Drugs 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 229960004231 thymalfasin Drugs 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 125000002264 triphosphate group Chemical class [H]OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])O* 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/67—General methods for enhancing the expression
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2730/00—Reverse transcribing DNA viruses
- C12N2730/00011—Details
- C12N2730/10011—Hepadnaviridae
- C12N2730/10111—Orthohepadnavirus, e.g. hepatitis B virus
- C12N2730/10122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2840/00—Vectors comprising a special translation-regulating system
- C12N2840/20—Vectors comprising a special translation-regulating system translation of more than one cistron
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Virology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Ultra Sonic Daignosis Equipment (AREA)
- Polyurethanes Or Polyureas (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Sheets, Magazines, And Separation Thereof (AREA)
- Separation, Sorting, Adjustment, Or Bending Of Sheets To Be Conveyed (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 所望のタンパク質をコードするＤＮＡ配列と
第２タンパク質をコードするＤＮＡ配列とを含み、両Ｄ
ＮＡ配列が同一のプロモーター配列に機能可能に結合し
且つ翻訳終止コドン及び翻訳開始コドンによって分離さ
れており(ただし、いかなる介在スプライス部位も存在
しない)、脊椎動物宿主細胞中で所望タンパク質及び第
２タンパク質を発現し得る発現ベクター、並びに、該発
現ベクターでの形質転換によって所望のタンパク質を生
産する能力を獲得した脊椎動物細胞を選択する方法。 【効果】 高い効率で所望の異種タンパク質を生産する
脊椎動物宿主細胞の選別を可能にする。
第２タンパク質をコードするＤＮＡ配列とを含み、両Ｄ
ＮＡ配列が同一のプロモーター配列に機能可能に結合し
且つ翻訳終止コドン及び翻訳開始コドンによって分離さ
れており(ただし、いかなる介在スプライス部位も存在
しない)、脊椎動物宿主細胞中で所望タンパク質及び第
２タンパク質を発現し得る発現ベクター、並びに、該発
現ベクターでの形質転換によって所望のタンパク質を生
産する能力を獲得した脊椎動物細胞を選択する方法。 【効果】 高い効率で所望の異種タンパク質を生産する
脊椎動物宿主細胞の選別を可能にする。
Description
【０００１】本発明は、脊椎動物細胞培養におけるポリ
ペプチド産生への組換ＤＮＡ技術の適用に係る。更に詳
しくは、本発明は、脊椎動物細胞培養における外来ポリ
ペプチドの産生を操る際の手段としての第２制御ポリペ
プチドのコード配列の利用に係る。
ペプチド産生への組換ＤＮＡ技術の適用に係る。更に詳
しくは、本発明は、脊椎動物細胞培養における外来ポリ
ペプチドの産生を操る際の手段としての第２制御ポリペ
プチドのコード配列の利用に係る。
【０００２】異種タンパク質すなわち宿主細胞によって
通常産生されないタンパク質を産生するために宿主細胞
を利用する一般的原理はよく知られている。然しなが
ら、得られるタンパク質の取り扱い易さという観点から
望ましい脊椎動物宿主細胞の利用によりかなりの量の異
種タンパク質を得ることには多くの技術的困難性を伴
う。異種タンパク質をコードする遺伝物質をバクテリア
に組み込んでこれを発現させることに成功した例は沢山
知られている。たとえば、ヒトインターフェロン,デス
アセチル−チモシンα−１,ソマトスタチン及びヒト成
長ホルモンがこのようにして産生された。最近、宿主と
して酵母細胞(例えば本出願人の１９８１年２月２５日
付ＵＳ特許出願番号第２３７,９１３号;ＥＰＯ出願公開
番号第００６００５７号参照)及び脊椎動物細胞培養物
(１９８１年８月３１日に出願されたＵＳ特許出願番号
第２９８,２３５号;ＥＰＯ出願公開番号第００７３６５
６号参照)のような非−バクテリア宿主を利用すること
が可能になった。哺乳動物のタンパク質の産生に宿主と
して脊椎動物細胞培養物を利用することは有利である。
なぜならば、そのようなシステムは、修飾,グリコシレ
ーション,輸送配列の付加及び細胞の中で産生されたペ
プチドのその他の後処理に対する付加的な可能性を有し
ているからである。例えば、バクテリアは成功裡にトラ
ンスフェクトされ且つ[αチモシン]を発現し得るが、産
生されるポリペプチドは哺乳動物に見られる「天然の」α
チモシンのＮ−アセチル基を欠いている。
通常産生されないタンパク質を産生するために宿主細胞
を利用する一般的原理はよく知られている。然しなが
ら、得られるタンパク質の取り扱い易さという観点から
望ましい脊椎動物宿主細胞の利用によりかなりの量の異
種タンパク質を得ることには多くの技術的困難性を伴
う。異種タンパク質をコードする遺伝物質をバクテリア
に組み込んでこれを発現させることに成功した例は沢山
知られている。たとえば、ヒトインターフェロン,デス
アセチル−チモシンα−１,ソマトスタチン及びヒト成
長ホルモンがこのようにして産生された。最近、宿主と
して酵母細胞(例えば本出願人の１９８１年２月２５日
付ＵＳ特許出願番号第２３７,９１３号;ＥＰＯ出願公開
番号第００６００５７号参照)及び脊椎動物細胞培養物
(１９８１年８月３１日に出願されたＵＳ特許出願番号
第２９８,２３５号;ＥＰＯ出願公開番号第００７３６５
６号参照)のような非−バクテリア宿主を利用すること
が可能になった。哺乳動物のタンパク質の産生に宿主と
して脊椎動物細胞培養物を利用することは有利である。
なぜならば、そのようなシステムは、修飾,グリコシレ
ーション,輸送配列の付加及び細胞の中で産生されたペ
プチドのその他の後処理に対する付加的な可能性を有し
ているからである。例えば、バクテリアは成功裡にトラ
ンスフェクトされ且つ[αチモシン]を発現し得るが、産
生されるポリペプチドは哺乳動物に見られる「天然の」α
チモシンのＮ−アセチル基を欠いている。
【０００３】一般に、宿主細胞が異種タンパク質を産生
し得るように工夫された遺伝子工学技術にあっては、 (１) 「プロモーター」すなわちコード配列の発現を制御
且つ可能にするヌクレオチド配列; (２) mＲＮＡにリボソーム結合部位を付与する配列; (３) 「コード領域」すなわち所望ポリペプチドをコード
するヌクレオチド配列; (４) 所望タンパク質に対する全コードが解読されたな
らその転写を終止させ得る「終止配列」; (５) ベクターが直接ゲノムに組み込まれない場合の
「レプリコン」すなわちベクターが細胞内にあるなら該全
ベクターの再生を可能にする複製のオリジン;を含むＤ
ＮＡ配列すなわち「発現ベクター」を調製しなければなら
ない。
し得るように工夫された遺伝子工学技術にあっては、 (１) 「プロモーター」すなわちコード配列の発現を制御
且つ可能にするヌクレオチド配列; (２) mＲＮＡにリボソーム結合部位を付与する配列; (３) 「コード領域」すなわち所望ポリペプチドをコード
するヌクレオチド配列; (４) 所望タンパク質に対する全コードが解読されたな
らその転写を終止させ得る「終止配列」; (５) ベクターが直接ゲノムに組み込まれない場合の
「レプリコン」すなわちベクターが細胞内にあるなら該全
ベクターの再生を可能にする複製のオリジン;を含むＤ
ＮＡ配列すなわち「発現ベクター」を調製しなければなら
ない。
【０００４】本発明のベクター構築に於いては、同一の
プロモーターが二つのコード配列即ち所望のタンパク質
のコード配列と第２タンパク質のコード配列とを制御す
ることになる。転写終止もまたこれらの配列によって行
なわれる。然しながら、タンパク質は分離した形態で産
生される。なぜならば、該タンパク質は翻訳終止及び開
始シグナルによって分離されているからである。
プロモーターが二つのコード配列即ち所望のタンパク質
のコード配列と第２タンパク質のコード配列とを制御す
ることになる。転写終止もまたこれらの配列によって行
なわれる。然しながら、タンパク質は分離した形態で産
生される。なぜならば、該タンパク質は翻訳終止及び開
始シグナルによって分離されているからである。
【０００５】一般に、遺伝発現ベクターは二本鎖ＤＮＡ
の染色体外ループであるプラスミドの形態にある。これ
らはバクテリア中に天然の形態で存在するものであり、
しばしば細胞毎に多数コピーとして存在する。然しなが
ら、「制限酵素」を用いて適当な配置で上掲した４つの必
須要素を一緒に切り継ぎ(スプライシング)することによ
り、人工プラスミドを構築することも可能である(もち
ろんこれらは最も有用である)。制限酵素とはその触媒
活性が特定の塩基配列での切断に限定されるヌクレアー
ゼであり、各塩基配列は特定の制限酵素に対して特徴的
である。上掲要素(又はその断片)の末端部位をうまく構
築することにより、制限酵素はこれらの要素を一緒に切
り継ぎして最終遺伝発現ベクターを形成するものである
ことが判る。
の染色体外ループであるプラスミドの形態にある。これ
らはバクテリア中に天然の形態で存在するものであり、
しばしば細胞毎に多数コピーとして存在する。然しなが
ら、「制限酵素」を用いて適当な配置で上掲した４つの必
須要素を一緒に切り継ぎ(スプライシング)することによ
り、人工プラスミドを構築することも可能である(もち
ろんこれらは最も有用である)。制限酵素とはその触媒
活性が特定の塩基配列での切断に限定されるヌクレアー
ゼであり、各塩基配列は特定の制限酵素に対して特徴的
である。上掲要素(又はその断片)の末端部位をうまく構
築することにより、制限酵素はこれらの要素を一緒に切
り継ぎして最終遺伝発現ベクターを形成するものである
ことが判る。
【０００６】次に宿主細胞を誘発してベクターを取り込
ませ(トランスフェクション)、通常の生育の付随的な結
果として所望のポリペプチドの合成が行なわれるように
該宿主細胞を増殖する。
ませ(トランスフェクション)、通常の生育の付随的な結
果として所望のポリペプチドの合成が行なわれるように
該宿主細胞を増殖する。
【０００７】上記した方法には２つの重要な問題が残っ
ている。その１つは、ベクター中に、上掲した４つの必
須要素に加えて、実際に遺伝発現ベクターを取り込んだ
細胞を端的に選択し得るようなマーカーを有することが
望ましいことである。宿主としてバクテリアを利用する
場合、しばしば用いられるマーカーはテトラサイクリン
又はアンピシリンの如き抗生物質に対する耐性である。
薬剤耐性の細胞のみが抗生物質含有培地で成長する。そ
れ故に、トランスフェクトさせようとする細胞培養物が
抗生物質含有培地で生育する場合には、現実にトランス
フェクトされた細胞のみがコロニーとして出現する。形
質転換の頻度は極めて低いので(理想的条件下でトラン
スフェクトした場合１０6個の細胞当り約１個の細胞が
形質転換される)、これは実際問題として先ず第一に必
要な要件である。
ている。その１つは、ベクター中に、上掲した４つの必
須要素に加えて、実際に遺伝発現ベクターを取り込んだ
細胞を端的に選択し得るようなマーカーを有することが
望ましいことである。宿主としてバクテリアを利用する
場合、しばしば用いられるマーカーはテトラサイクリン
又はアンピシリンの如き抗生物質に対する耐性である。
薬剤耐性の細胞のみが抗生物質含有培地で成長する。そ
れ故に、トランスフェクトさせようとする細胞培養物が
抗生物質含有培地で生育する場合には、現実にトランス
フェクトされた細胞のみがコロニーとして出現する。形
質転換の頻度は極めて低いので(理想的条件下でトラン
スフェクトした場合１０6個の細胞当り約１個の細胞が
形質転換される)、これは実際問題として先ず第一に必
要な要件である。
【０００８】宿主として脊椎動物細胞を用いると、達成
される形質転換率はより高くなる(１０3につき約１個の
細胞)。然しながら、容易な選択は所望のトランスフェ
クトされた細胞を得る際の重要問題として残る。選択は
重要である。なぜならば、細胞分裂の速度がバクテリア
の場合よりも約５０倍低いからである。すなわち、Ｅ．
coliは約２０〜３０分毎に１回細胞分裂するが、ヒト組
織培養細胞は１２〜２４時間毎に１回細胞分裂するだけ
である。
される形質転換率はより高くなる(１０3につき約１個の
細胞)。然しながら、容易な選択は所望のトランスフェ
クトされた細胞を得る際の重要問題として残る。選択は
重要である。なぜならば、細胞分裂の速度がバクテリア
の場合よりも約５０倍低いからである。すなわち、Ｅ．
coliは約２０〜３０分毎に１回細胞分裂するが、ヒト組
織培養細胞は１２〜２４時間毎に１回細胞分裂するだけ
である。
【０００９】本発明は、一面において、例えば、宿主細
胞が欠損している必須酵素の如き第２タンパク質のコー
ド配列の発現を利用することにより、所望タンパク質用
遺伝発現ベクターを取り込んだ脊椎動物細胞を選択する
という問題に指向している。例えば、ジヒドロフォレー
トリダクターゼ(ＤＨＦＲ)をＤＨＦＲ欠損宿主を用いる
際のマーカーとして利用し得る。
胞が欠損している必須酵素の如き第２タンパク質のコー
ド配列の発現を利用することにより、所望タンパク質用
遺伝発現ベクターを取り込んだ脊椎動物細胞を選択する
という問題に指向している。例えば、ジヒドロフォレー
トリダクターゼ(ＤＨＦＲ)をＤＨＦＲ欠損宿主を用いる
際のマーカーとして利用し得る。
【００１０】外来宿主に於けるポリペプチド産生の第２
の問題は、満足的量のタンパク質を回収するということ
である。所望の異種ポリペプチド産生を調整し好ましく
は該産生量を高めるべく或るメカニズムを採用すること
は望ましいことである。本発明の別の一面に於いては、
外部制御パラメータによって影響され得る第２のコード
配列を利用し、これらのパラメータを制御することによ
り発現を制御する。更に、２つの配列をそれ自身ポリシ
ストロンとして配置することにより、第１配列の高い発
現レベルを有する形質転換体の選択が可能となる。
の問題は、満足的量のタンパク質を回収するということ
である。所望の異種ポリペプチド産生を調整し好ましく
は該産生量を高めるべく或るメカニズムを採用すること
は望ましいことである。本発明の別の一面に於いては、
外部制御パラメータによって影響され得る第２のコード
配列を利用し、これらのパラメータを制御することによ
り発現を制御する。更に、２つの配列をそれ自身ポリシ
ストロンとして配置することにより、第１配列の高い発
現レベルを有する形質転換体の選択が可能となる。
【００１１】ＤＨＦＲコード配列が、哺乳動物細胞中に
取り込まれ、発現され且つ増幅され得ることは既に示さ
れている。メトトレキセート耐性チャイニーズハムスタ
ー卵巣(ＣＨＯ)細胞からのゲノムＤＮＡがマウス細胞に
取り込まれ、これまたメトトレキセート耐性である形質
転換体が得られている(後記文献１参照)。マウス細胞に
於いてメトトレキセート(ＭＴＸ)耐性が得られるメカニ
ズムは次の３つによるものと思われる:ＤＨＦＲコード
配列遺伝子増幅(文献２,３,４参照);Ｘ摂取の低下(文献
５,６参照)及び産生されたＤＨＦＲのＭＴＸに対する親
和力の低下(文献７参照)。
取り込まれ、発現され且つ増幅され得ることは既に示さ
れている。メトトレキセート耐性チャイニーズハムスタ
ー卵巣(ＣＨＯ)細胞からのゲノムＤＮＡがマウス細胞に
取り込まれ、これまたメトトレキセート耐性である形質
転換体が得られている(後記文献１参照)。マウス細胞に
於いてメトトレキセート(ＭＴＸ)耐性が得られるメカニ
ズムは次の３つによるものと思われる:ＤＨＦＲコード
配列遺伝子増幅(文献２,３,４参照);Ｘ摂取の低下(文献
５,６参照)及び産生されたＤＨＦＲのＭＴＸに対する親
和力の低下(文献７参照)。
【００１２】ＭＴＸ曝露によるＤＨＦＲ遺伝子の増幅は
同時にトランスフェクトされた遺伝子配列の増幅を同時
に生起するものと思われる。Ｂ型肝炎ＤＮＡ配列を含む
プラスミド及びＭＴＸ耐性ＤＨＦＲの突然変異遺伝子を
含むハムスター細胞系(セルライン)からのゲノムＤＮＡ
の両者でトランスフェクトされたマウス線維芽細胞は、
ＤＨＦＲ配列増幅を刺激すべくＭＴＸが使用された場
合、培地中に増加された量のＢ型肝炎表面抗原(ＨＢsＡ
g)を分泌することが示されている(後記文献８参照)。更
に、Ｅ．coliタンパク質ＸＧＰＲＴをコードするmＲＮ
Ａは、ＭＴＸの存在下で、別個のプロモーターによる制
御下にあるＤＨＦＲ及びＸＧＰＲＴ遺伝子配列で同時に
トランスフェクトされたＣＨＯ細胞中で増幅される(文
献９参照)。また、ＭＴＸの存在下でＤＨＦＲ／ＳＶ４
０プラスミド組み合せ中のプロモーター固有の配列発現
もまた増加されることが示された(文献１０参照)。
同時にトランスフェクトされた遺伝子配列の増幅を同時
に生起するものと思われる。Ｂ型肝炎ＤＮＡ配列を含む
プラスミド及びＭＴＸ耐性ＤＨＦＲの突然変異遺伝子を
含むハムスター細胞系(セルライン)からのゲノムＤＮＡ
の両者でトランスフェクトされたマウス線維芽細胞は、
ＤＨＦＲ配列増幅を刺激すべくＭＴＸが使用された場
合、培地中に増加された量のＢ型肝炎表面抗原(ＨＢsＡ
g)を分泌することが示されている(後記文献８参照)。更
に、Ｅ．coliタンパク質ＸＧＰＲＴをコードするmＲＮ
Ａは、ＭＴＸの存在下で、別個のプロモーターによる制
御下にあるＤＨＦＲ及びＸＧＰＲＴ遺伝子配列で同時に
トランスフェクトされたＣＨＯ細胞中で増幅される(文
献９参照)。また、ＭＴＸの存在下でＤＨＦＲ／ＳＶ４
０プラスミド組み合せ中のプロモーター固有の配列発現
もまた増加されることが示された(文献１０参照)。
【００１３】本発明は、同一のプロモーターの制御下に
ある第２の遺伝コード配列を含む所望ポリペプチドの遺
伝発現ベクターで形質転換された脊椎動物細胞宿主に於
いて、この第２の配列が、一般的に形質転換体に対して
の便利な選択マーカーとなるのみならず、第１の配列に
対し制御デバイスとして作用すると共に第１配列の高い
発現レベルを示す形質転換体に対しても簡便なスクリー
ニングマーカーとなり、もって所望ポリペプチドの発現
が調整されることになり大抵の場合該発現が高められる
ことになるという発見に基づいている。
ある第２の遺伝コード配列を含む所望ポリペプチドの遺
伝発現ベクターで形質転換された脊椎動物細胞宿主に於
いて、この第２の配列が、一般的に形質転換体に対して
の便利な選択マーカーとなるのみならず、第１の配列に
対し制御デバイスとして作用すると共に第１配列の高い
発現レベルを示す形質転換体に対しても簡便なスクリー
ニングマーカーとなり、もって所望ポリペプチドの発現
が調整されることになり大抵の場合該発現が高められる
ことになるという発見に基づいている。
【００１４】このことは、本発明の方法によれば２つの
タンパク質が成熟形態で別々に産生されるので特に重要
である。融合情報(mＲＮＡ)が形成されるように２つの
ＤＮＡコード配列は同一の転写プロモーターによって制
御されるが、これらは第１の配列に対する翻訳終止シグ
ナル及び第２の配列に対する翻訳開始シグナルによって
分離されており、それ故に２つの異なったタンパク質が
得られるのである。
タンパク質が成熟形態で別々に産生されるので特に重要
である。融合情報(mＲＮＡ)が形成されるように２つの
ＤＮＡコード配列は同一の転写プロモーターによって制
御されるが、これらは第１の配列に対する翻訳終止シグ
ナル及び第２の配列に対する翻訳開始シグナルによって
分離されており、それ故に２つの異なったタンパク質が
得られるのである。
【００１５】脊椎動物宿主細胞培養システムは動物シス
テムに適当なグリコシレーション,ホスホリレーション
及び脂質会合を生起し得るので(バクテリア宿主ではこ
れが起こらない)しばしば有利であり、このような状況
に合うマーカーシステム及び調整システムが得られると
いうことは重要な意味をもつ。
テムに適当なグリコシレーション,ホスホリレーション
及び脂質会合を生起し得るので(バクテリア宿主ではこ
れが起こらない)しばしば有利であり、このような状況
に合うマーカーシステム及び調整システムが得られると
いうことは重要な意味をもつ。
【００１６】したがって、本発明の一面は、第２のタン
パク質及び所望タンパク質をコードする配列を含み、所
望配列及び第２配列の両者が同一のプロモーターによっ
て支配されているポリシストロン性発現ベクターを利用
して、脊椎動物細胞宿主から有用な異種タンパク質を得
る方法にある。コード配列は翻訳停止及び開始シグナル
コドンによって分離されている。第２配列の発現は所望
タンパク質の配列の発現に対して制御作用を及ぼし、第
２タンパク質はトランスフェクトされた細胞の選択に対
するマーカーとして作用する。本発明はこれら作用のい
ずれか一方又は両方を有する第２配列を利用するもので
ある。
パク質及び所望タンパク質をコードする配列を含み、所
望配列及び第２配列の両者が同一のプロモーターによっ
て支配されているポリシストロン性発現ベクターを利用
して、脊椎動物細胞宿主から有用な異種タンパク質を得
る方法にある。コード配列は翻訳停止及び開始シグナル
コドンによって分離されている。第２配列の発現は所望
タンパク質の配列の発現に対して制御作用を及ぼし、第
２タンパク質はトランスフェクトされた細胞の選択に対
するマーカーとして作用する。本発明はこれら作用のい
ずれか一方又は両方を有する第２配列を利用するもので
ある。
【００１７】他の面に於いては本発明は、所望の異種ペ
プチドを産生するために脊椎動物細胞をトランスフェク
トするのに適した遺伝発現ベクター,このトランスフェ
クションによって生じた細胞培養物及びこの細胞培養に
よって産生されたポリペプチドに関する。
プチドを産生するために脊椎動物細胞をトランスフェク
トするのに適した遺伝発現ベクター,このトランスフェ
クションによって生じた細胞培養物及びこの細胞培養に
よって産生されたポリペプチドに関する。
【００１８】Ａ．定 義 本明細書中の「プラスミド」とは、バクテリア中に天然に
存在するプラスミド及び人工的に構築した感情ＤＮＡ断
片の両方を含む。
存在するプラスミド及び人工的に構築した感情ＤＮＡ断
片の両方を含む。
【００１９】本明細書中の「発現ベクター」とは、宿生細
胞培養に於ける異種ペプチド発現のための上掲した４つ
の必須要素を少なくとも含むプラスミドを意味する。
胞培養に於ける異種ペプチド発現のための上掲した４つ
の必須要素を少なくとも含むプラスミドを意味する。
【００２０】本明細書中の「異種タンパク質」とは、宿生
有機体によっては通常産生されないものであるか又はそ
の生存のためには通常要求されないタンパク質又はペプ
チドを意味する。
有機体によっては通常産生されないものであるか又はそ
の生存のためには通常要求されないタンパク質又はペプ
チドを意味する。
【００２１】本明細書中の「所望タンパク質」とは、本発
明方法で産生しようとする異種タンパク質又はペプチド
を意味する。
明方法で産生しようとする異種タンパク質又はペプチド
を意味する。
【００２２】本明細書中の「第２ペプチド」とは、宿生細
胞に於ける発現の第１産物として望ましい異種ペプチド
ではないタンパク質又はペプチドを意味し、このタンパ
ク質自身の性質又はこれをコードしている配列の性質に
よって、発現ベクターによるトランスフェクションのマ
ーカーとなり得及び／又は第１の所望の異種ペプチドの
発現を調整し得る別の異種ペプチドを意味する。
胞に於ける発現の第１産物として望ましい異種ペプチド
ではないタンパク質又はペプチドを意味し、このタンパ
ク質自身の性質又はこれをコードしている配列の性質に
よって、発現ベクターによるトランスフェクションのマ
ーカーとなり得及び／又は第１の所望の異種ペプチドの
発現を調整し得る別の異種ペプチドを意味する。
【００２３】ペプチド配列は約５個のアミノ酸のように
短いものから約１０００のアミノ酸のように長いものま
である。ペプチドという用語とタンパク質という用語の
従来から観念されている相違は本明細書に於いては従来
のように識別されていない。区別されなければならない
場合には、そのように特定する。
短いものから約１０００のアミノ酸のように長いものま
である。ペプチドという用語とタンパク質という用語の
従来から観念されている相違は本明細書に於いては従来
のように識別されていない。区別されなければならない
場合には、そのように特定する。
【００２４】本明細書中の「第１配列」とは、所望ペプチ
ドをコードするヌクレオチド配列である。
ドをコードするヌクレオチド配列である。
【００２５】本明細書中の「第２配列」とは、第２ペプチ
ドをコードするヌクレオチド配列である。
ドをコードするヌクレオチド配列である。
【００２６】本明細書中の宿主細胞の「トランスフェク
ション」とは、何らかのコード配列が実際に発現される
か否かに関わりなく、検知可能なように発現ベクターが
宿主細胞に取り込まれたことを意味する。本発明に於い
ては、成功的トランスフェクションは該宿主細胞中のこ
のベクターの作用の何らかの徴候が認められたなら確認
されたことになる。この意味に於いて成功の種々のレベ
ルが存在することが判る。第１に、ベクターのコード配
列は発現されるかもしれないしされないかもしれない。
しかし、ベクターがプロモーター及びターミネーターを
含んで適切に構築されたなら、発現が生起する確率は高
い。第２に、ベクターとなるプラスミドが細胞中に取り
込まれて発現されていても細胞の正常染色体中に組み込
まれていない場合には、このプラスミドを発現する能力
は数世代後喪失される。一方、ベクターが染色体中に組
み込まれれば、宿主細胞の繰り返し複製を通じて発現は
安定している。また中間の結果となる場合もある。トラ
ンスフェクションがこのように生起し得る方法の詳細は
理解されていないが、宿主培養の数世代に亘る発現の安
定性という意味で一連の成果が実験的に認められている
ことは明らかである。
ション」とは、何らかのコード配列が実際に発現される
か否かに関わりなく、検知可能なように発現ベクターが
宿主細胞に取り込まれたことを意味する。本発明に於い
ては、成功的トランスフェクションは該宿主細胞中のこ
のベクターの作用の何らかの徴候が認められたなら確認
されたことになる。この意味に於いて成功の種々のレベ
ルが存在することが判る。第１に、ベクターのコード配
列は発現されるかもしれないしされないかもしれない。
しかし、ベクターがプロモーター及びターミネーターを
含んで適切に構築されたなら、発現が生起する確率は高
い。第２に、ベクターとなるプラスミドが細胞中に取り
込まれて発現されていても細胞の正常染色体中に組み込
まれていない場合には、このプラスミドを発現する能力
は数世代後喪失される。一方、ベクターが染色体中に組
み込まれれば、宿主細胞の繰り返し複製を通じて発現は
安定している。また中間の結果となる場合もある。トラ
ンスフェクションがこのように生起し得る方法の詳細は
理解されていないが、宿主培養の数世代に亘る発現の安
定性という意味で一連の成果が実験的に認められている
ことは明らかである。
【００２７】Ｂ．所望ペプチドの好ましい具体例 好ましい特定の具体例に於いては、例えば、第１の遺伝
子配列はＢ型肝炎表面抗原(ＨＢsＡg)をコードする。こ
のタンパク質はＢ型肝炎ウィルスから誘導されるもので
あり、ヒトのＢ型肝炎の感染源である。この病気は衰
弱,肝臓障害,初期癌及び時には死をもたらすものであ
る。この病気は特に多くのアフリカの国々及びアジアの
国々でかなり流行しており、これらの国々では多数の人
々が該病気を潜在的に伝染する慢性的保菌者となってい
る。このウィルス(ＨＢＶ)は該カプシド更にエンベロー
プで包囲されているＤＮＡ分子からなる。該ウィルスに
関連しているタンパク質は表面抗原(ＨＢsＡg),コア抗
原及びＤＮＡポリメラーゼ等である。ＨＢsＡgは感染し
たヒトに抗体を生じさせることが知られている。感染個
体の血清中に見られるＨＢsＡgは径の平均値が約２２nm
であるタンパク質粒子からなり、そのため「２２nm粒子」
と呼称されている。したがって、ＨＢsＡg粒子がワクチ
ン用の有効な基剤となると思われる。
子配列はＢ型肝炎表面抗原(ＨＢsＡg)をコードする。こ
のタンパク質はＢ型肝炎ウィルスから誘導されるもので
あり、ヒトのＢ型肝炎の感染源である。この病気は衰
弱,肝臓障害,初期癌及び時には死をもたらすものであ
る。この病気は特に多くのアフリカの国々及びアジアの
国々でかなり流行しており、これらの国々では多数の人
々が該病気を潜在的に伝染する慢性的保菌者となってい
る。このウィルス(ＨＢＶ)は該カプシド更にエンベロー
プで包囲されているＤＮＡ分子からなる。該ウィルスに
関連しているタンパク質は表面抗原(ＨＢsＡg),コア抗
原及びＤＮＡポリメラーゼ等である。ＨＢsＡgは感染し
たヒトに抗体を生じさせることが知られている。感染個
体の血清中に見られるＨＢsＡgは径の平均値が約２２nm
であるタンパク質粒子からなり、そのため「２２nm粒子」
と呼称されている。したがって、ＨＢsＡg粒子がワクチ
ン用の有効な基剤となると思われる。
【００２８】Ｃ．第２ペプチドの好ましい具体例 或る生育条件下で細胞によって産生される一定量の特定
酵素を制御するのに環境条件がしばしば有効であること
が認められている。本発明の好ましい具体例において
は、ジヒドロフォレートリダクターゼ(ＤＨＦＲ)の阻害
剤であるメトトレキセート(ＭＴＸ)に対するある種の細
胞の感受性を利用する。ＤＨＦＲは１つの炭素単位の転
位を含む合成反応に間接的に要求される酵素である。Ｄ
ＨＦＲ活性を欠いていると、その合成に１つの炭素単位
の転位が必要とされる化合物が存在する場合を除いて、
細胞は成長することができない。然しながら、ＤＨＦＲ
を欠く細胞はグリシン,チミジン及びヒポキサンチンが
共に存在すると成育する。
酵素を制御するのに環境条件がしばしば有効であること
が認められている。本発明の好ましい具体例において
は、ジヒドロフォレートリダクターゼ(ＤＨＦＲ)の阻害
剤であるメトトレキセート(ＭＴＸ)に対するある種の細
胞の感受性を利用する。ＤＨＦＲは１つの炭素単位の転
位を含む合成反応に間接的に要求される酵素である。Ｄ
ＨＦＲ活性を欠いていると、その合成に１つの炭素単位
の転位が必要とされる化合物が存在する場合を除いて、
細胞は成長することができない。然しながら、ＤＨＦＲ
を欠く細胞はグリシン,チミジン及びヒポキサンチンが
共に存在すると成育する。
【００２９】通常ＤＨＦＲを産生する細胞は、メトトレ
キセートによって阻害されることが知られている。殆ん
どの場合、適当量のメトトレキセートを正常細胞に添加
すると、細胞の死につながる。しかしながら、或る種の
細胞はＤＨＦＲの量を多くすることによってメトトレキ
セート処理に対しても生き残るようであり、この酵素を
阻害するメトトレキセートの能力を超えるものを有して
いる(後記文献２,３,４参照)。このような細胞に於いて
はＤＨＦＲ配列をコードするメッセンジャーＲＮＡの量
が増加していることが既に示されている。このことはこ
のメッセンジャーＲＮＡをコードする遺伝子物質中のＤ
ＮＡ量が増加していることを仮想することにより説明が
つくものである。実際、メトトレキセートの添加は明ら
かにＤＨＦＲ遺伝子の遺伝子増幅を生起する。同一のプ
ロモーターによって調整されてはいないが、ＤＨＦＲ配
列に物理的に結合している遺伝子配列もまた増幅される
(文献１,８,９,１０参照)。結局、別種のタンパク質(こ
の場合は所望のタンパク質である)に対する遺伝子を付
随的に増幅するために、メトトレキセート処理によって
得られるＤＨＦＲ遺伝子の増幅を利用することが可能と
なる。
キセートによって阻害されることが知られている。殆ん
どの場合、適当量のメトトレキセートを正常細胞に添加
すると、細胞の死につながる。しかしながら、或る種の
細胞はＤＨＦＲの量を多くすることによってメトトレキ
セート処理に対しても生き残るようであり、この酵素を
阻害するメトトレキセートの能力を超えるものを有して
いる(後記文献２,３,４参照)。このような細胞に於いて
はＤＨＦＲ配列をコードするメッセンジャーＲＮＡの量
が増加していることが既に示されている。このことはこ
のメッセンジャーＲＮＡをコードする遺伝子物質中のＤ
ＮＡ量が増加していることを仮想することにより説明が
つくものである。実際、メトトレキセートの添加は明ら
かにＤＨＦＲ遺伝子の遺伝子増幅を生起する。同一のプ
ロモーターによって調整されてはいないが、ＤＨＦＲ配
列に物理的に結合している遺伝子配列もまた増幅される
(文献１,８,９,１０参照)。結局、別種のタンパク質(こ
の場合は所望のタンパク質である)に対する遺伝子を付
随的に増幅するために、メトトレキセート処理によって
得られるＤＨＦＲ遺伝子の増幅を利用することが可能と
なる。
【００３０】更に、ＤＨＦＲに対する第２の配列が取り
込まれる宿主細胞そのものがＤＨＦＲ欠損であると、Ｄ
ＨＦＲはまた成功裡にトランスフェクトされた細胞の選
択に対する簡便なマーカーとして作用する。ＤＨＦＲ配
列が所望ペプチドに対する配列に有効に結合している
と、この能力は所望の配列を用いる成功的トランスフェ
クションに対するマーカーとして同様に作用する。
込まれる宿主細胞そのものがＤＨＦＲ欠損であると、Ｄ
ＨＦＲはまた成功裡にトランスフェクトされた細胞の選
択に対する簡便なマーカーとして作用する。ＤＨＦＲ配
列が所望ペプチドに対する配列に有効に結合している
と、この能力は所望の配列を用いる成功的トランスフェ
クションに対するマーカーとして同様に作用する。
【００３１】Ｄ．使用したベクター構築技術(物質及び
方法) 下記Ｆに記載の実施例で構築されたベクターは単離プラ
スミド又はＤＮＡ断片の開裂及び結合によって構築され
たものである。
方法) 下記Ｆに記載の実施例で構築されたベクターは単離プラ
スミド又はＤＮＡ断片の開裂及び結合によって構築され
たものである。
【００３２】適当なバッファー中で１種又は複数の制限
酵素で処理する開裂が起こる。一般に、約２０μgのプ
ラスミド又はＤＮＡ断片は２００μlのバッファー溶液
中の約１〜５単位の酵素を必要とする(特定の制限酵素
に対する適当なバッファーは製造業者により特定されて
いる)。３７℃で約１時間のインキュベーション時間が
実行可能である。インキュベーション後、タンパク質を
フェノール及びクロロホルムで抽出除去し、核酸をエタ
ノールを用いる沈澱により水性画分から回収する。
酵素で処理する開裂が起こる。一般に、約２０μgのプ
ラスミド又はＤＮＡ断片は２００μlのバッファー溶液
中の約１〜５単位の酵素を必要とする(特定の制限酵素
に対する適当なバッファーは製造業者により特定されて
いる)。３７℃で約１時間のインキュベーション時間が
実行可能である。インキュベーション後、タンパク質を
フェノール及びクロロホルムで抽出除去し、核酸をエタ
ノールを用いる沈澱により水性画分から回収する。
【００３３】平滑末端が要求される場合には、調製物を
１０単位のポリメラーゼＩ(Ｋlenow)を用いて１５℃で
１５分間処理し、フェノール−クロロホルム抽出及びエ
タノール沈澱する。
１０単位のポリメラーゼＩ(Ｋlenow)を用いて１５℃で
１５分間処理し、フェノール−クロロホルム抽出及びエ
タノール沈澱する。
【００３４】開裂断片のサイズ分離をＤ．Ｇoeddel et
al．,Ｎucleic Ａcids Ｒes．,８:４０５７(１９８
０)に記載されている６％ポリアクリルアミドゲルを用
いて行なう。この文献に記載の内容を本発明書中に含め
るものとする。
al．,Ｎucleic Ａcids Ｒes．,８:４０５７(１９８
０)に記載されている６％ポリアクリルアミドゲルを用
いて行なう。この文献に記載の内容を本発明書中に含め
るものとする。
【００３５】ほぼ等モル量の所望成分を結合するため
に、正しい整合性を提供するべく適当に末端処理し、
０.５μgＤＮＡにつき約１０単位のＴ４ＤＮＡリガーゼ
で処理する。
に、正しい整合性を提供するべく適当に末端処理し、
０.５μgＤＮＡにつき約１０単位のＴ４ＤＮＡリガーゼ
で処理する。
【００３６】Ｅ．好ましい具体例の詳細な説明 一般に、本発明に好適な発現ベクターは遺伝子スプライ
シング技術の適用により構築される。出発物質は天然の
バクテリアプラスミドであり、必要に応じて予め修飾し
ておく。本発明の好ましい具体例に於いては、Ｍ．Ｌus
ky et al．,Ｎature．２３９:７９(１９８１)に記載
の方法により調製された修飾pＢＲ３２２プラスミドで
あるpＭＬプラスミドを利用する。これは、サルウィル
スＳＶ４０から誘導される唯一のプロモーター並びにＤ
ＨＦＲ及びＨＢsＡgに対するコード配列を含有する。
シング技術の適用により構築される。出発物質は天然の
バクテリアプラスミドであり、必要に応じて予め修飾し
ておく。本発明の好ましい具体例に於いては、Ｍ．Ｌus
ky et al．,Ｎature．２３９:７９(１９８１)に記載
の方法により調製された修飾pＢＲ３２２プラスミドで
あるpＭＬプラスミドを利用する。これは、サルウィル
スＳＶ４０から誘導される唯一のプロモーター並びにＤ
ＨＦＲ及びＨＢsＡgに対するコード配列を含有する。
【００３７】構築に於いて、プロモーターを(リボソー
ム結合配列と共に)、所望タンパク質をコードするコー
ド配列及び第２タンパク質をコードするコード配列の上
流に位置させる。単一の転写終止配列を両者の下流に位
置させる。上流コード配列の末端部に翻訳終止シグナル
を位置させ、その下流に下流配列の翻訳開始シグナルを
位置する。このようにして、２つのコード配列が単一m
ＲＮＡ鎖中で発現するが、２つの別々の成熟タンパク質
が発現される。
ム結合配列と共に)、所望タンパク質をコードするコー
ド配列及び第２タンパク質をコードするコード配列の上
流に位置させる。単一の転写終止配列を両者の下流に位
置させる。上流コード配列の末端部に翻訳終止シグナル
を位置させ、その下流に下流配列の翻訳開始シグナルを
位置する。このようにして、２つのコード配列が単一m
ＲＮＡ鎖中で発現するが、２つの別々の成熟タンパク質
が発現される。
【００３８】特に好ましい具体例に於いては、第２ペプ
チドをコードする配列は所望ペプチドをコードする配列
の下流にある。これらの環境下にあっては、第２ペプチ
ドによって形質転換された細胞を選択しようとする方法
が、所望ペプチドの特に高い産生をも選択する。
チドをコードする配列は所望ペプチドをコードする配列
の下流にある。これらの環境下にあっては、第２ペプチ
ドによって形質転換された細胞を選択しようとする方法
が、所望ペプチドの特に高い産生をも選択する。
【００３９】Ｆ．実 施 例 下記実施例は本発明を説明するものであって、何ら本発
明を制限するものではない。
明を制限するものではない。
【００４０】実施例１ ＨＢsＡg配列含有ベクターpＥ
３４２．ＨＳ９４．ＨＢＶ 図１に、ＨＢsＡgプラスミドの構築を示す。表面抗原遺
伝子を含む１９８６ bp ＥcoＲＩ−ＢglＩＩ断片を、Ｌ
iu et al．,ＤＮＡ．１:２１３(１９８２)(本明細書
中に包含する)に記載の如く、pＢＲ３２２でクローン化
したＨＢＶウィルスゲノムから単離した。この配列をp
ＭＬのＥcoＲＩ及びＢamＨＩ部位間に結合した。pＭＬ
はＬusky et al．,Ｎature,２９３:７９(１９８１)
(本明細書中に包含する)に記載のように、サル細胞中で
の複製を阻害する配列を欠如しているpＢＲ３２２誘導
体である。得られたプラスミドの唯一のＥcoＲＩ部位
に、ウィルスゲノムのＨindＩＩＩ及びＰvuＩＩ消化に
よって得、予め修飾して両端をＥcoＲＩ制限部位にした
ＳＶ４０の３４２pbオリジン断片を挿入してp３４２Ｅ
を得た。p３４２Ｅ(pＨＢs３４８−Ｅとも指称される)
は、Ｌevinson et al．,による１９８１年１２月３日
付出願の米国特許出願第３２６,９８０号明細書に記載
されている。該出願を引用して本明細書中に包含する
(欧州特許出願公開第００７３６５６号)。要約すれば、
サルウィルスＳＶ４０のオリジンを単離するために、Ｓ
Ｖ４０ＤＮＡをＨindＩＩＩで消化し、コンバーター(Ａ
ＧＣＴＧＡＡＴＴＣ)を添加してＨindＩＩＩ末端をＥco
ＲＩ末端に変換した。ＤＮＡをＰvuＩＩで切断しＲＩリ
ンカーを添加した。ＥcoＲＩで消化後、オリジンを含む
３４８bp断片をポリアクリルアミドゲル電気泳動及び電
気溶出で単離し、pＢＲ３２２中でクローン化した。Ｈ
ＢＶ(Ａnimal Ｖirus Ｇenetics(Ｃh．５)Ａcad．Ｐr
es,Ｎ．Ｙ．(１９８０))のＥcoＲＩ及びＢglＩＩによる
消化で得られた１９８６bp断片(これはＨＢsＡgをコー
ドする遺伝子を含んでいる)を、ＥcoＲＩ部位及びＢam
ＨＩ部位でプラスミドpＭＬ(Ｌusky et al．,Ｎatur
e．２９３:７９(１９８１))にクローン化して発現プラ
スミドpＨＢs３４８−Ｅを構築した(pＭＬは、サル細胞
中でのプラスミド複製を阻害する配列が除去された欠失
を有するpＢＲ３２２誘導体である)。得られたプラスミ
ド(pＲＩ−Ｂgl)を次にＥcoＲＩで直線化し、ＳＶ４０
のオリジン領域を示す３４８bp断片をpＲＩ−ＢglのＥc
oＲＩ部位に導入した。オリジン断片はいずれの配向で
も挿入され得る。この断片は複製のオリジン以外に初期
及び後期のＳＶ４０プロモーターをコードしているの
で、オリジンの配向次第でどちらかのプロモーターが作
用し該プロモーターの制御下でＨＢＶ遺伝子が発現し得
た(pＨＢＳ３４８−Ｅは初期プロモーターの制御下で発
現したＨＢsを示す)。pＥ３４２を修飾するために、pＥ
３４２をＥcoＲＩで部分消化し、Ｋlenow ＤＮＡポリ
メラーゼＩを用いて開裂部位を充填し、プラスミドを再
結合し、これによりpＥ３４２中のＳＶ４０オリジンに
先行するＥcoＲＩ部位を除去する。得られたプラスミド
即ち、pＥ３４２△Ｒ１をＥcoＲＩで消化し、Ｋlenow
ＤＮＡポリメラーゼＩを用いて充填し、ＢamＨＩで再度
切断する。アクリルアミドゲル電気泳動後、約３５００
bp断片を電気溶出し、フェノール−クロロホルム抽出
し、前記の如くエタノール沈澱させる。ＥcoＲＩ及びＸ
baで消化してＨＢsＡgの５'非翻訳リーダー領域を除去
し、肝炎発現プラスミドpＨＳ９４(Ｌiu et al．,上
掲)の類似する１５０bpＥcoＲＩ−Ｘba断片を代わりに
挿入してpＥ３４２．ＨＳ９４．ＨＢＶを形成した。
３４２．ＨＳ９４．ＨＢＶ 図１に、ＨＢsＡgプラスミドの構築を示す。表面抗原遺
伝子を含む１９８６ bp ＥcoＲＩ−ＢglＩＩ断片を、Ｌ
iu et al．,ＤＮＡ．１:２１３(１９８２)(本明細書
中に包含する)に記載の如く、pＢＲ３２２でクローン化
したＨＢＶウィルスゲノムから単離した。この配列をp
ＭＬのＥcoＲＩ及びＢamＨＩ部位間に結合した。pＭＬ
はＬusky et al．,Ｎature,２９３:７９(１９８１)
(本明細書中に包含する)に記載のように、サル細胞中で
の複製を阻害する配列を欠如しているpＢＲ３２２誘導
体である。得られたプラスミドの唯一のＥcoＲＩ部位
に、ウィルスゲノムのＨindＩＩＩ及びＰvuＩＩ消化に
よって得、予め修飾して両端をＥcoＲＩ制限部位にした
ＳＶ４０の３４２pbオリジン断片を挿入してp３４２Ｅ
を得た。p３４２Ｅ(pＨＢs３４８−Ｅとも指称される)
は、Ｌevinson et al．,による１９８１年１２月３日
付出願の米国特許出願第３２６,９８０号明細書に記載
されている。該出願を引用して本明細書中に包含する
(欧州特許出願公開第００７３６５６号)。要約すれば、
サルウィルスＳＶ４０のオリジンを単離するために、Ｓ
Ｖ４０ＤＮＡをＨindＩＩＩで消化し、コンバーター(Ａ
ＧＣＴＧＡＡＴＴＣ)を添加してＨindＩＩＩ末端をＥco
ＲＩ末端に変換した。ＤＮＡをＰvuＩＩで切断しＲＩリ
ンカーを添加した。ＥcoＲＩで消化後、オリジンを含む
３４８bp断片をポリアクリルアミドゲル電気泳動及び電
気溶出で単離し、pＢＲ３２２中でクローン化した。Ｈ
ＢＶ(Ａnimal Ｖirus Ｇenetics(Ｃh．５)Ａcad．Ｐr
es,Ｎ．Ｙ．(１９８０))のＥcoＲＩ及びＢglＩＩによる
消化で得られた１９８６bp断片(これはＨＢsＡgをコー
ドする遺伝子を含んでいる)を、ＥcoＲＩ部位及びＢam
ＨＩ部位でプラスミドpＭＬ(Ｌusky et al．,Ｎatur
e．２９３:７９(１９８１))にクローン化して発現プラ
スミドpＨＢs３４８−Ｅを構築した(pＭＬは、サル細胞
中でのプラスミド複製を阻害する配列が除去された欠失
を有するpＢＲ３２２誘導体である)。得られたプラスミ
ド(pＲＩ−Ｂgl)を次にＥcoＲＩで直線化し、ＳＶ４０
のオリジン領域を示す３４８bp断片をpＲＩ−ＢglのＥc
oＲＩ部位に導入した。オリジン断片はいずれの配向で
も挿入され得る。この断片は複製のオリジン以外に初期
及び後期のＳＶ４０プロモーターをコードしているの
で、オリジンの配向次第でどちらかのプロモーターが作
用し該プロモーターの制御下でＨＢＶ遺伝子が発現し得
た(pＨＢＳ３４８−Ｅは初期プロモーターの制御下で発
現したＨＢsを示す)。pＥ３４２を修飾するために、pＥ
３４２をＥcoＲＩで部分消化し、Ｋlenow ＤＮＡポリ
メラーゼＩを用いて開裂部位を充填し、プラスミドを再
結合し、これによりpＥ３４２中のＳＶ４０オリジンに
先行するＥcoＲＩ部位を除去する。得られたプラスミド
即ち、pＥ３４２△Ｒ１をＥcoＲＩで消化し、Ｋlenow
ＤＮＡポリメラーゼＩを用いて充填し、ＢamＨＩで再度
切断する。アクリルアミドゲル電気泳動後、約３５００
bp断片を電気溶出し、フェノール−クロロホルム抽出
し、前記の如くエタノール沈澱させる。ＥcoＲＩ及びＸ
baで消化してＨＢsＡgの５'非翻訳リーダー領域を除去
し、肝炎発現プラスミドpＨＳ９４(Ｌiu et al．,上
掲)の類似する１５０bpＥcoＲＩ−Ｘba断片を代わりに
挿入してpＥ３４２．ＨＳ９４．ＨＢＶを形成した。
【００４１】(Ｌiu et al．,によって記載されている
ようにpＨＳ９４は真のＨＢsＡg遺伝子の翻訳開始コド
ンを含むが、５'非翻訳情報配列は全部欠如している。
前記のごときＳＶ４０初期プロモーターの制御下で真の
ＥcoＲＩ−ＢglＩＩ断片とpＨＳ９４由来等価物の双方
の発現レベルは同等であり、プラスミドの性能に影響す
ることなく交換可能である。)
ようにpＨＳ９４は真のＨＢsＡg遺伝子の翻訳開始コド
ンを含むが、５'非翻訳情報配列は全部欠如している。
前記のごときＳＶ４０初期プロモーターの制御下で真の
ＥcoＲＩ−ＢglＩＩ断片とpＨＳ９４由来等価物の双方
の発現レベルは同等であり、プラスミドの性能に影響す
ることなく交換可能である。)
【００４２】実施例２ ＤＨＦＲ配列含有ベクターpＥ
３４２．Ｄ２２ 唯一の発現可能な配列としてＤＨＦＲを担持するプラス
ミドpＥ３４８．Ｄ２２の構築を図２に示す。
３４２．Ｄ２２ 唯一の発現可能な配列としてＤＨＦＲを担持するプラス
ミドpＥ３４８．Ｄ２２の構築を図２に示す。
【００４３】ＤＨＦＲ cＤＮＡプラスミド pＤＨＦＲ
−１１(Ｎunberg et al．,Ｃell,１９:３５５(１９８
０)参照)の１６００bp ＰstＩインサートをエキソヌク
レアーゼＢal３１で処理してＰstＩ部位に隣接するポリ
Ｇ:Ｃ領域を除去し、ＢglＩＩで消化し、得られた約６
６０bp断片をゲルから単離した。Ｂal３１−ＢglＩＩ消
化cＤＮＡをＢglＩＩ部位を含有するpＢＲ３２２プラス
ミド誘導体に結合した(pＢＲ３２２をＨindＩＩＩで消
化した後、プラスミド断片をＫlenow ＤＮＡポリメラ
ーゼを用いて４種のデオキシヌクレオチド三リン酸の存
在下で充填し、ＢglＩＩで再切断した)。得られたプラ
スミドpＤＨＦＲ−Ｄ２２は、pＢＲ３２２とＤＨＦＲ
cＤＮＡの５'末端との融合部位の２９bp上流に位置する
ＥcoＲＩ部位を有する。次いで、cＤＮＡインサートの
コード配列を含むＥcoＲＩ−ＢglＩＩ断片をpＤＨＦＲ
−Ｄ２２から切り出し、ＥcoＲＩ−ＢamＨＩで消化した
pＥ３４２．ＨＢＶ(実施例１)に結合してＤＨＦＲ発現
プラスミドpＥ３４２．Ｄ２２を形成した。
−１１(Ｎunberg et al．,Ｃell,１９:３５５(１９８
０)参照)の１６００bp ＰstＩインサートをエキソヌク
レアーゼＢal３１で処理してＰstＩ部位に隣接するポリ
Ｇ:Ｃ領域を除去し、ＢglＩＩで消化し、得られた約６
６０bp断片をゲルから単離した。Ｂal３１−ＢglＩＩ消
化cＤＮＡをＢglＩＩ部位を含有するpＢＲ３２２プラス
ミド誘導体に結合した(pＢＲ３２２をＨindＩＩＩで消
化した後、プラスミド断片をＫlenow ＤＮＡポリメラ
ーゼを用いて４種のデオキシヌクレオチド三リン酸の存
在下で充填し、ＢglＩＩで再切断した)。得られたプラ
スミドpＤＨＦＲ−Ｄ２２は、pＢＲ３２２とＤＨＦＲ
cＤＮＡの５'末端との融合部位の２９bp上流に位置する
ＥcoＲＩ部位を有する。次いで、cＤＮＡインサートの
コード配列を含むＥcoＲＩ−ＢglＩＩ断片をpＤＨＦＲ
−Ｄ２２から切り出し、ＥcoＲＩ−ＢamＨＩで消化した
pＥ３４２．ＨＢＶ(実施例１)に結合してＤＨＦＲ発現
プラスミドpＥ３４２．Ｄ２２を形成した。
【００４４】実施例３ ＤＨＦＲ及びＨＢsＡg配列双方
を含有するベクター ２種のベクター、即ちＤＨＦＲ遺伝子がＨＢsＡg遺伝子
の下流にあるポリシストロン含有ベクターpＥ３４２．
ＨＢＶ．Ｄ２２、並びにＤＨＦＲ及びＨＢsＡg遺伝子が
ポリシストロンになっていないベクター、pＥ３４２．
ＨＢＶ．Ｅ４００．Ｄ２２を構築した(図３)。Ａ ．クローン化ＨＢＶ ＤＮＡ(Ｌiu et al．,上掲)
のＥcoＲＩ−ＴaqＩ断片を、ＥcoＲＩ−ＣlaＩで消化し
たpＥ３４２．Ｄ２２に結合してpＥ３４２．ＨＢＶ．Ｄ
２２を構築した。Ｂ ． pＥ３４２．ＨＢＶ．Ｄ２２のＢglＩＩ部位とＤ
ＨＦＲインサートのＣlaＩ部位間にＳＶ４０初期プロモ
ーターを融合して更に修飾した。ＨＢＶウィルスＤＮＡ
は、ＢglＩＩ部位を超えて２０bpの位置に唯一のＴaqＩ
部位を含有している。この部位を用いて、表面抗原遺伝
子を含むＥcoＲＩ−ＢglＩＩ断片を生成した。即ち、ク
ローン化ＨＢＶウィルスＤＮＡをＥcoＲＩ及びＴaqＩ消
化すると、表面抗原遺伝子を含み且つＥcoＲＩ部位から
１９８５bp離れている(Ｌiu et al．,上掲)唯一のＢg
lＩＩ部位を含有する〜２０００bpの断片が得られる。
(消化によって生成するＤＮＡ断片の末端ＴaqＩ及びＣl
aＩは粘着性であり共に結合する。)
を含有するベクター ２種のベクター、即ちＤＨＦＲ遺伝子がＨＢsＡg遺伝子
の下流にあるポリシストロン含有ベクターpＥ３４２．
ＨＢＶ．Ｄ２２、並びにＤＨＦＲ及びＨＢsＡg遺伝子が
ポリシストロンになっていないベクター、pＥ３４２．
ＨＢＶ．Ｅ４００．Ｄ２２を構築した(図３)。Ａ ．クローン化ＨＢＶ ＤＮＡ(Ｌiu et al．,上掲)
のＥcoＲＩ−ＴaqＩ断片を、ＥcoＲＩ−ＣlaＩで消化し
たpＥ３４２．Ｄ２２に結合してpＥ３４２．ＨＢＶ．Ｄ
２２を構築した。Ｂ ． pＥ３４２．ＨＢＶ．Ｄ２２のＢglＩＩ部位とＤ
ＨＦＲインサートのＣlaＩ部位間にＳＶ４０初期プロモ
ーターを融合して更に修飾した。ＨＢＶウィルスＤＮＡ
は、ＢglＩＩ部位を超えて２０bpの位置に唯一のＴaqＩ
部位を含有している。この部位を用いて、表面抗原遺伝
子を含むＥcoＲＩ−ＢglＩＩ断片を生成した。即ち、ク
ローン化ＨＢＶウィルスＤＮＡをＥcoＲＩ及びＴaqＩ消
化すると、表面抗原遺伝子を含み且つＥcoＲＩ部位から
１９８５bp離れている(Ｌiu et al．,上掲)唯一のＢg
lＩＩ部位を含有する〜２０００bpの断片が得られる。
(消化によって生成するＤＮＡ断片の末端ＴaqＩ及びＣl
aＩは粘着性であり共に結合する。)
【００４５】ＣlaＩ部位が再生される。即ち、pＥ３４
２．ＨＢＶ．Ｄ２２はＢglＩＩ及びＣlaＩ部位の双方を
含み、これらはＤＨＦＲコード配列の直前に位置してい
る。
２．ＨＢＶ．Ｄ２２はＢglＩＩ及びＣlaＩ部位の双方を
含み、これらはＤＨＦＲコード配列の直前に位置してい
る。
【００４６】ＳＶ４０ＤＮＡをＨpaＩＩで消化し、前記
のように充填し、ＨindＩＩＩで再切断して、pＥ３４
２．ＨＢＶ．Ｄ２２のＢglＩＩ及びＣlaＩ部位に対して
粘着性の制限部位を両端に有するＳＶ４０オリジンを構
築した。オリジンを含む４４０bp断片を単離した。これ
をＨindＩＩＩ及びＢamＨＩ消化によって生成する４０
００bp pＢＲ３２２断片並びに、クローン化したＨＢ
ＶウィルスＤＮＡをＥcoＲＩ消化しＫlenow ＤＮＡポ
リメラーゼＩで充填し、ＢglＩＩで再消化し、アクリル
アミドゲルで単離して生成した表面抗原遺伝子を含む１
９８６bp断片と共に三者間結合した。これら３種の断片
の結合は、充填したＨpaＩＩをＥcoＲＩと、２個のＨin
dＩＩＩ部位を互いに、且つＢglＩＩをＢamＨＩと結合
することによってのみ達成し得る。次いで、得られたプ
ラスミドをＣlaＩ及びＢamＨＩで制限消化すると、ＳＶ
４０オリジンを含む４７０bp断片が得られる。この断片
をpＥ３４２．ＨＢＶ．Ｄ２２のＣlaＩ及びＢglＩＩ部
位に挿入して、pＥ３４２．ＨＢＶ．Ｅ４００．Ｄ２２
を形成する(図３参照)。
のように充填し、ＨindＩＩＩで再切断して、pＥ３４
２．ＨＢＶ．Ｄ２２のＢglＩＩ及びＣlaＩ部位に対して
粘着性の制限部位を両端に有するＳＶ４０オリジンを構
築した。オリジンを含む４４０bp断片を単離した。これ
をＨindＩＩＩ及びＢamＨＩ消化によって生成する４０
００bp pＢＲ３２２断片並びに、クローン化したＨＢ
ＶウィルスＤＮＡをＥcoＲＩ消化しＫlenow ＤＮＡポ
リメラーゼＩで充填し、ＢglＩＩで再消化し、アクリル
アミドゲルで単離して生成した表面抗原遺伝子を含む１
９８６bp断片と共に三者間結合した。これら３種の断片
の結合は、充填したＨpaＩＩをＥcoＲＩと、２個のＨin
dＩＩＩ部位を互いに、且つＢglＩＩをＢamＨＩと結合
することによってのみ達成し得る。次いで、得られたプ
ラスミドをＣlaＩ及びＢamＨＩで制限消化すると、ＳＶ
４０オリジンを含む４７０bp断片が得られる。この断片
をpＥ３４２．ＨＢＶ．Ｄ２２のＣlaＩ及びＢglＩＩ部
位に挿入して、pＥ３４２．ＨＢＶ．Ｅ４００．Ｄ２２
を形成する(図３参照)。
【００４７】実施例４ 宿主細胞のトランスフェクショ
ン 本実施例の宿主細胞は組織培養で増殖させた脊椎動物細
胞である。当業界で公知のように、これらの細胞は単離
した正常細胞から連続トランスファー処理により得ら
れ、永久セルラインとして維持し得る。これらのセルラ
インは、液体媒質中の固体支持体上に維持されるか、又
は支持栄養物を含有する懸濁物中で増殖させることによ
り維持される。
ン 本実施例の宿主細胞は組織培養で増殖させた脊椎動物細
胞である。当業界で公知のように、これらの細胞は単離
した正常細胞から連続トランスファー処理により得ら
れ、永久セルラインとして維持し得る。これらのセルラ
インは、液体媒質中の固体支持体上に維持されるか、又
は支持栄養物を含有する懸濁物中で増殖させることによ
り維持される。
【００４８】好ましい実施例では、ＤＨＦＲ活性を欠損
しているＣＨＯ細胞を使用した。これらの細胞は、Ｕrl
aub and Ｃhasin．Ｐroc．Ｎatl．Ａcad．Ｓci．(Ｕ
ＳＡ),７７:４２１６(１９８０)(本明細書中に包含す
る)に記載のように製造し増殖させる。
しているＣＨＯ細胞を使用した。これらの細胞は、Ｕrl
aub and Ｃhasin．Ｐroc．Ｎatl．Ａcad．Ｓci．(Ｕ
ＳＡ),７７:４２１６(１９８０)(本明細書中に包含す
る)に記載のように製造し増殖させる。
【００４９】これらの細胞を上記のように調製された所
望のベクター５mgで、Ｇraham andＶan Ｄer Ｅb．
Ｖirology．５５:４５６(１９７８)(本明細書中に包含
する)の方法でトランスフェクトする。
望のベクター５mgで、Ｇraham andＶan Ｄer Ｅb．
Ｖirology．５５:４５６(１９７８)(本明細書中に包含
する)の方法でトランスフェクトする。
【００５０】一連のプラスミドが特定宿主細胞と確実に
相互作用するようにし得る方法があり、その結果１個の
プラスミドが細胞に吸収されると他のプラスミドも同様
に吸収される確立が増大する。従って、１次配列及び２
次配列を夫々含む別々のベクターを使用してこれらの配
列を導入してもよいし、両配列を含む単一ベクターを使
用して導入してもよい。
相互作用するようにし得る方法があり、その結果１個の
プラスミドが細胞に吸収されると他のプラスミドも同様
に吸収される確立が増大する。従って、１次配列及び２
次配列を夫々含む別々のベクターを使用してこれらの配
列を導入してもよいし、両配列を含む単一ベクターを使
用して導入してもよい。
【００５１】実施例５ トランスフェクトされた細胞の
増殖及びペプチドの発現 前記のトランスフェクション操作にかけたＣＨＯ細胞
を、最初非選択媒地中で２日間増殖させ、次いでグリシ
ン、ヒポキサンチン及びチミジンを欠く媒地中に細胞を
移し、プラスミドＤＨＦＲを発現し得る細胞を選択し
た。約１〜２週間後個々のコロニーをクローニングリン
グで単離した。
増殖及びペプチドの発現 前記のトランスフェクション操作にかけたＣＨＯ細胞
を、最初非選択媒地中で２日間増殖させ、次いでグリシ
ン、ヒポキサンチン及びチミジンを欠く媒地中に細胞を
移し、プラスミドＤＨＦＲを発現し得る細胞を選択し
た。約１〜２週間後個々のコロニーをクローニングリン
グで単離した。
【００５２】６０又は１００mmの組織培養皿に約０.５
×１０6細胞／皿で細胞をプレートした。２日間増殖さ
せた後、増殖培地を交換した。２４時間後ＲＩＡ(Ａusr
iaＩＩ,Ａbbott)でＨＢsＡgをアッセイした。細胞をカ
ウントし、ＨＢsＡg産生を細胞１個当りの基準で標定し
た。このようにして、使用した各ベクターについて１０
〜２０個のランダムなコロニーを解析した。
×１０6細胞／皿で細胞をプレートした。２日間増殖さ
せた後、増殖培地を交換した。２４時間後ＲＩＡ(Ａusr
iaＩＩ,Ａbbott)でＨＢsＡgをアッセイした。細胞をカ
ウントし、ＨＢsＡg産生を細胞１個当りの基準で標定し
た。このようにして、使用した各ベクターについて１０
〜２０個のランダムなコロニーを解析した。
【００５３】本発明の一実施例で次表の結果が得られ
た。
た。
【表１】
【００５４】最高の発現を示すセルラインの数個で２０
回以上の移行の間表面抗原の産生をモニターしたところ
安定であった。表面抗原を発現する細胞は基層に無限に
付着したままであり、培地を補充している限りは大量の
表面抗原を分泌し続ける。
回以上の移行の間表面抗原の産生をモニターしたところ
安定であった。表面抗原を発現する細胞は基層に無限に
付着したままであり、培地を補充している限りは大量の
表面抗原を分泌し続ける。
【００５５】ポリシストロン性遺伝子構築によって高レ
ベルのＨＢsＡgを産生する細胞が単離されることは明ら
かである。pＥ３４２．ＨＢＶ．Ｄ２２で形質転換され
たコロニーは１００％が５００mg／１０6細胞／日以上
を産生したが、非ポリシストロン性プラスミドpＥ３４
２．ＨＢＶ．Ｅ４００．Ｄ２２で形質転換されたコロニ
ーは９２％が前記量より少量を産生した。１５００ng／
１０6細胞／日以上のレベルで産生したのはポリシスト
ロン性トランスフェクションを行なった細胞のみであっ
た。
ベルのＨＢsＡgを産生する細胞が単離されることは明ら
かである。pＥ３４２．ＨＢＶ．Ｄ２２で形質転換され
たコロニーは１００％が５００mg／１０6細胞／日以上
を産生したが、非ポリシストロン性プラスミドpＥ３４
２．ＨＢＶ．Ｅ４００．Ｄ２２で形質転換されたコロニ
ーは９２％が前記量より少量を産生した。１５００ng／
１０6細胞／日以上のレベルで産生したのはポリシスト
ロン性トランスフェクションを行なった細胞のみであっ
た。
【００５６】実施例６ メトトレキセート処理 表面抗原を産生するセルラインは、１０nＭより高濃度
のメトトレキセート(ＭＴＸ．ＤＨＦＲの特異的阻害剤)
によって阻害される。ＭＴＸの組織培養細胞に対する影
響に関する従来の研究結果と一致して、約１０-5の頻度
で高濃度(５０nＭ)のＭＴＸに耐性のクローンが出現す
る。然しながら、これらのクローンは、ＭＴＸ耐性クロ
ーン中でＨＢＶ配列が増幅するにもかかわらず、最早表
面抗原を産生しない。即ちこの場合、ＨＢＶ遺伝子は増
幅されるが発現は低下する。これは、表面抗原を更に産
生すると細胞に致死性になることを示す。
のメトトレキセート(ＭＴＸ．ＤＨＦＲの特異的阻害剤)
によって阻害される。ＭＴＸの組織培養細胞に対する影
響に関する従来の研究結果と一致して、約１０-5の頻度
で高濃度(５０nＭ)のＭＴＸに耐性のクローンが出現す
る。然しながら、これらのクローンは、ＭＴＸ耐性クロ
ーン中でＨＢＶ配列が増幅するにもかかわらず、最早表
面抗原を産生しない。即ちこの場合、ＨＢＶ遺伝子は増
幅されるが発現は低下する。これは、表面抗原を更に産
生すると細胞に致死性になることを示す。
【００５７】実施例７ 所望ペプチドの回収 産生された表面抗原は、ウィルスに感染した患者の血清
で観察される２２nm粒子に類似の粒子状である。この抗
原形態は高い免疫原性を有することが示されている。仔
ウシ血清又は他の補足物を欠く培地で細胞を増殖させる
と、培地に含有されるタンパク質の約１０％が表面抗原
であり、このタンパク質は当業界に公知の方法で単離さ
れ得る。表面抗原は、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル
上を２２nm粒子由来タンパクと共に移動する。
で観察される２２nm粒子に類似の粒子状である。この抗
原形態は高い免疫原性を有することが示されている。仔
ウシ血清又は他の補足物を欠く培地で細胞を増殖させる
と、培地に含有されるタンパク質の約１０％が表面抗原
であり、このタンパク質は当業界に公知の方法で単離さ
れ得る。表面抗原は、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル
上を２２nm粒子由来タンパクと共に移動する。
【００５８】文 献 １．Ｗigler,Ｍ．et al．,Ｐroc．Ｎatl．Ａcad．Ｓc
i．７７:３５６７(１９８０) ２．Ｓchimke,Ｒobert Ｔ．et al．,Ｓcience ２０
２:１０５１(１９７８) ３．Ｂiedler,Ｊ．Ｌ．et al．,Ｃancer Ｒes．３２:
１５３(１９７２) ４．Ｃhang,Ｓ．Ｅ．et al．,Ｃell ７:３９１(１９
７６) ５．Ｆischer,Ｇ．Ａ．,Ｂiochem Ｐharmacol．１１:
１２３３(１９６２) ６．Ｓirotnak,Ｆ．Ｍ．et al．,Ｃancer Ｒes．２
８:７５(１９６８) ７．Ｆlintoff,Ｗ．Ｆ．et al．,Ｓomat．Ｃell．Ｇen
et．２:２４５(１９７６) ８．Ｃhristman,Ｊ．et al．,Ｐroc．Ｎatl．Ａcad．
Ｓci．７９:１８１５(１９８２) ９．Ｒingold,Ｇordon et al．,Ｊ．Ｍolec and Ａ
ppl．Ｇen．１:１６５(１９８１) １０．Ｋaufman,Ｒ．Ｆ．et al．,Ｊ．Ｍolec．Ｂio
l．１５９:６０１(１９８２) １１．Ｐerucho,Ｍanual et al．,Ｃell ２２:３０
９(１９８０)
i．７７:３５６７(１９８０) ２．Ｓchimke,Ｒobert Ｔ．et al．,Ｓcience ２０
２:１０５１(１９７８) ３．Ｂiedler,Ｊ．Ｌ．et al．,Ｃancer Ｒes．３２:
１５３(１９７２) ４．Ｃhang,Ｓ．Ｅ．et al．,Ｃell ７:３９１(１９
７６) ５．Ｆischer,Ｇ．Ａ．,Ｂiochem Ｐharmacol．１１:
１２３３(１９６２) ６．Ｓirotnak,Ｆ．Ｍ．et al．,Ｃancer Ｒes．２
８:７５(１９６８) ７．Ｆlintoff,Ｗ．Ｆ．et al．,Ｓomat．Ｃell．Ｇen
et．２:２４５(１９７６) ８．Ｃhristman,Ｊ．et al．,Ｐroc．Ｎatl．Ａcad．
Ｓci．７９:１８１５(１９８２) ９．Ｒingold,Ｇordon et al．,Ｊ．Ｍolec and Ａ
ppl．Ｇen．１:１６５(１９８１) １０．Ｋaufman,Ｒ．Ｆ．et al．,Ｊ．Ｍolec．Ｂio
l．１５９:６０１(１９８２) １１．Ｐerucho,Ｍanual et al．,Ｃell ２２:３０
９(１９８０)
【図１】 ＨＢsＡg発現ベクターpＥ３４２．ＨＳ９
４．ＨＢＶの構築法を表す模式図である。
４．ＨＢＶの構築法を表す模式図である。
【図２】 ＤＨＦＲ発現ベクターpＥ３４２．Ｄ２２の
構築法を表す模式図である。
構築法を表す模式図である。
【図３】 ＤＨＦＲ及びＨＢsＡg発現ベクターpＥ３４
２．ＨＢＶ．Ｄ２２及びpＥ３４２．ＨＢＶ．Ｅ４０
０．Ｄ２２の構築法を表す模式図である。
２．ＨＢＶ．Ｄ２２及びpＥ３４２．ＨＢＶ．Ｅ４０
０．Ｄ２２の構築法を表す模式図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 //(Ｃ１２Ｐ 21/00 Ｃ１２Ｒ 1:91） 7804−4Ｂ (72)発明者 クリスチャン・クリントン・サイモンゼン アメリカ合衆国、カリフォルニア・95310、 サン・ジョゼ、パークヴィユー・アヴェニ ュ・1509
Claims (13)
- 【請求項１】 所望のタンパク質及び第２タンパク質の
双方のコード配列を含むベクターで細胞を処理し、宿主
細胞の生育のために第２タンパク質の存在を必要とする
培養条件下で細胞を増殖させることからなり、双方のコ
ード配列が同一のプロモーター配列に機能可能に結合し
ており且つ翻訳終止コドン及び翻訳開始コドンによって
分離されている(ただし、いかなる介在スプライス部位
も存在しない)ことを特徴とする、所望のタンパク質を
発現し得る発現ベクターでトランスフェクトされた脊椎
動物細胞を選択する方法。 - 【請求項２】 第２タンパク質がＤＨＦＲであることを
特徴とする請求項１に記載の方法。 - 【請求項３】 培養生育条件がグリシン、ヒポキサンチ
ン及びチミジンを欠く培地であることを特徴とする請求
項２に記載の方法。 - 【請求項４】 所望のタンパク質のコード配列と、その
下流にある第２タンパク質のコード配列とを含むベクタ
ーで細胞をトランスフェクトし、トランスフェクトされ
た細胞の選択を可能にする培養条件下で細胞を増殖させ
ることからなり、両コード配列が同一のプロモーター配
列に機能可能に結合しており且つ翻訳終止シグナル及び
翻訳開始シグナルによって分離されている(ただし、い
かなる介在スプライス部位も存在しない)ことを特徴と
する、所望の異種タンパク質を高レベルで産生する脊椎
動物細胞を選択する方法。 - 【請求項５】 第２タンパク質がＤＨＦＲであることを
特徴とする請求項４に記載の方法。 - 【請求項６】 培養条件がグリシン、ヒポキサンチン及
びチミジンを欠く培地であることを特徴とする請求項５
に記載の方法。 - 【請求項７】 所望タンパク質をコードするＤＮＡ配列
と第２タンパク質をコードするＤＮＡ配列とを含み、両
ＤＮＡ配列が同一のプロモーター配列に機能可能に結合
し且つ翻訳終止コドン及び翻訳開始コドンによって分離
されており（ただし、いかなる介在スプライス部位も存
在しない）、脊椎動物宿主細胞中で所望タンパク質及び
第２タンパク質を発現し得る発現ベクター。 - 【請求項８】 第２タンパク質のコード配列がＤＨＦＲ
をコードしていることを特徴とする請求項７に記載の発
現ベクター。 - 【請求項９】 プロモーター配列がＳＶ４０に由来する
初期プロモーターであることを特徴とする請求項７に記
載の発現ベクター。 - 【請求項１０】 pＥ３４２.ＨＢＶ.Ｄ２２であること
を特徴とする請求項９に記載の発現ベクター。 - 【請求項１１】 請求項７に記載のベクターで形質転換
された脊椎動物細胞。 - 【請求項１２】 所望の異種タンパク質のコード配列と
第２タンパク質のコード配列とを含み、両コード配列が
同一のプロモーターに機能可能に結合し且つ翻訳終止コ
ドン及び翻訳開始コドンによって分離されており(ただ
し、いかなる介在スプライス部位も存在しない)、第２
タンパク質をコードする配列が所望タンパク質をコード
する配列の下流にポリシストロニックに配置された発現
ベクター。 - 【請求項１３】 第２タンパク質のコード配列がＤＨＦ
Ｒをコードしていることを特徴とする請求項１２に記載
の発現ベクター。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/459,152 US4713339A (en) | 1983-01-19 | 1983-01-19 | Polycistronic expression vector construction |
| US459152 | 1983-01-19 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59007899A Division JPH0630609B2 (ja) | 1983-01-19 | 1984-01-19 | ポリシストロン性発現ベクターおよびそれを用いた方法 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8088012A Division JP2719512B2 (ja) | 1983-01-19 | 1996-04-10 | ポリシストロン性発現ベクター |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06165672A true JPH06165672A (ja) | 1994-06-14 |
| JP2557605B2 JP2557605B2 (ja) | 1996-11-27 |
Family
ID=23823622
Family Applications (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59007899A Expired - Lifetime JPH0630609B2 (ja) | 1983-01-19 | 1984-01-19 | ポリシストロン性発現ベクターおよびそれを用いた方法 |
| JP5209358A Expired - Lifetime JP2557605B2 (ja) | 1983-01-19 | 1993-08-24 | ポリシストロン性発現ベクターを用いた所望の形質転換体の選別法 |
| JP8088012A Expired - Lifetime JP2719512B2 (ja) | 1983-01-19 | 1996-04-10 | ポリシストロン性発現ベクター |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59007899A Expired - Lifetime JPH0630609B2 (ja) | 1983-01-19 | 1984-01-19 | ポリシストロン性発現ベクターおよびそれを用いた方法 |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8088012A Expired - Lifetime JP2719512B2 (ja) | 1983-01-19 | 1996-04-10 | ポリシストロン性発現ベクター |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4713339A (ja) |
| EP (1) | EP0117058B1 (ja) |
| JP (3) | JPH0630609B2 (ja) |
| KR (1) | KR840007253A (ja) |
| AT (1) | ATE46536T1 (ja) |
| AU (1) | AU578011B2 (ja) |
| CA (1) | CA1301675C (ja) |
| DE (1) | DE3479815D1 (ja) |
| DK (1) | DK173928B1 (ja) |
| ES (1) | ES8507179A1 (ja) |
| IE (1) | IE55852B1 (ja) |
| NZ (1) | NZ206841A (ja) |
| ZA (1) | ZA84377B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010074080A1 (ja) * | 2008-12-22 | 2010-07-01 | 国立大学法人北海道大学 | 動物細胞を用いて外来遺伝子由来タンパク質を大量に生産するための発現ベクター、およびその利用 |
Families Citing this family (299)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
| KR850004274A (ko) * | 1983-12-13 | 1985-07-11 | 원본미기재 | 에리트로포이에틴의 제조방법 |
| US4703008A (en) * | 1983-12-13 | 1987-10-27 | Kiren-Amgen, Inc. | DNA sequences encoding erythropoietin |
| NZ210501A (en) * | 1983-12-13 | 1991-08-27 | Kirin Amgen Inc | Erythropoietin produced by procaryotic or eucaryotic expression of an exogenous dna sequence |
| ZA851626B (en) * | 1984-03-06 | 1986-10-29 | Lilly Co Eli | Recombinant dna expression vectors and method for gene expression |
| GB8522977D0 (en) * | 1985-09-17 | 1985-10-23 | Fujisawa Pharmaceutical Co | Production of insulin-like growth factor 1 |
| IL71691A (en) * | 1984-04-27 | 1991-04-15 | Yeda Res & Dev | Production of interferon-ypsilon |
| CA1275954C (en) * | 1984-08-31 | 1990-11-06 | Hing Cheug Wong | 3'-expression enhancing fragments and method |
| IL80511A0 (en) * | 1985-11-05 | 1987-02-27 | Genetics Inst | Multiply amplifiable vectors for high level expression of exogenous dna |
| DK13087A (da) * | 1986-01-13 | 1987-07-14 | Genex Corp | Gensekvens til fremstilling af human serumalbumin i bacillus |
| CA1297434C (en) * | 1986-04-14 | 1992-03-17 | Kenji Murakami | Method of producing peptides, recombinant plasmid for use in the same and animal cells transformed with the same |
| IL82390A0 (en) * | 1986-05-02 | 1987-10-30 | Genentech Inc | Nucleic acid and methods for the synthesis of novel daf compositions |
| JP2585532B2 (ja) * | 1986-05-10 | 1997-02-26 | 三井東圧化学株式会社 | 動物細胞の形質転換体及びそれを得る方法並びにその形質転換体を用いてｔ−ＰＡを生産する方法 |
| AU613876B2 (en) * | 1986-10-01 | 1991-08-15 | Merck & Co., Inc. | Synthetic genes encoding proteins from plasmid containing eucaryotic secretory signal peptides and process for secreting encoded proteins |
| AU1187588A (en) * | 1987-01-15 | 1988-08-10 | Codon Genetic Engineering Laboratories | Tandem gene eukaryotic expression vectors |
| US5215896A (en) * | 1987-03-20 | 1993-06-01 | Creative Biomolecules, Inc. | Leader sequences for the production of recombinant proteins |
| US5013653A (en) | 1987-03-20 | 1991-05-07 | Creative Biomolecules, Inc. | Product and process for introduction of a hinge region into a fusion protein to facilitate cleavage |
| US5876962A (en) * | 1987-08-12 | 1999-03-02 | Natural Environment Research Council | Expression vectors for the synthesis of proteins and plasmid replicons and sequence cassettes for use in constructing such vectors |
| US5648254A (en) * | 1988-01-15 | 1997-07-15 | Zymogenetics, Inc. | Co-expression in eukaryotic cells |
| JP2576200B2 (ja) * | 1988-03-09 | 1997-01-29 | 味の素株式会社 | 生理活性タンパク質の製造法 |
| US4892871A (en) * | 1988-04-12 | 1990-01-09 | The General Hospital Corporation | Azido-substituted octopamine agonists and the use thereof to control invertebrate pests |
| WO1990001550A1 (en) * | 1988-07-29 | 1990-02-22 | Zymogenetics, Inc. | High efficiency translation of polycistronic messages in eucaryotic cells |
| US5236838A (en) * | 1988-12-23 | 1993-08-17 | Genzyme Corporation | Enzymatically active recombinant glucocerebrosidase |
| US5549892A (en) * | 1988-12-23 | 1996-08-27 | Genzyme Corporation | Enhanced in vivo uptake of glucocerebrosidase |
| US6451600B1 (en) * | 1989-12-22 | 2002-09-17 | Genzyme Corporation | Enzymatically active recombinant glucocerebrosidase |
| US20020168750A1 (en) * | 1988-12-23 | 2002-11-14 | James Rasmussen | Enzymatically active recombinant glucocerebrosidase |
| HUT61591A (en) | 1989-05-10 | 1993-01-28 | Somatogen Inc | Process for producing haemoglobin and its analogs |
| US5545727A (en) | 1989-05-10 | 1996-08-13 | Somatogen, Inc. | DNA encoding fused di-alpha globins and production of pseudotetrameric hemoglobin |
| US6203976B1 (en) * | 1989-07-18 | 2001-03-20 | Osi Pharmaceuticals, Inc. | Methods of preparing compositions comprising chemicals capable of transcriptional modulation |
| US5665543A (en) * | 1989-07-18 | 1997-09-09 | Oncogene Science, Inc. | Method of discovering chemicals capable of functioning as gene expression modulators |
| US5580722A (en) * | 1989-07-18 | 1996-12-03 | Oncogene Science, Inc. | Methods of determining chemicals that modulate transcriptionally expression of genes associated with cardiovascular disease |
| US5776502A (en) | 1989-07-18 | 1998-07-07 | Oncogene Science, Inc. | Methods of transcriptionally modulating gene expression |
| EP0483249B1 (en) * | 1989-07-18 | 2003-04-23 | OSI Pharmaceuticals, Inc. | Method of transcriptionally modulating gene expression and of discovering chemicals capable of functioning as gene expression modulators |
| US7247475B2 (en) * | 1989-07-28 | 2007-07-24 | Wyeth | Method for producing monoclonal antibodies |
| US6475787B1 (en) * | 1989-07-28 | 2002-11-05 | Wyeth | Method for producing monoclonal antibodies |
| EP0859009B1 (en) * | 1990-06-11 | 2005-11-30 | Toshikazu Nakamura | Recombinant human hepatocyte growth factor and method for production thereof |
| WO1992013063A1 (en) * | 1991-01-18 | 1992-08-06 | Oncogene Science, Inc. | Methods of transcriptionally modulating expression of growth factor genes and growth factor receptor genes |
| AU1258292A (en) * | 1991-01-18 | 1992-08-27 | Oncogene Science, Inc. | Methods of transcriptionally modulating expression of hematopoietic growth factor genes |
| WO1992013091A1 (en) * | 1991-01-18 | 1992-08-06 | Oncogene Science, Inc. | Methods of transcriptionally modulating expression of oncogenes and tumor suppressor genes |
| JPH0516500U (ja) * | 1991-08-09 | 1993-03-02 | 富士通テン株式会社 | 車載用機器の取付構造 |
| DE69226197T2 (de) * | 1991-11-08 | 1999-02-11 | Somatogen Inc | Hämoglobine als arzneimittelabgabesystem |
| WO1994021669A1 (en) * | 1993-03-18 | 1994-09-29 | Medclone, Inc. | Antigen related to inflammatory diseases |
| US5639940A (en) | 1994-03-03 | 1997-06-17 | Pharmaceutical Proteins Ltd. | Production of fibrinogen in transgenic animals |
| US5877016A (en) | 1994-03-18 | 1999-03-02 | Genentech, Inc. | Human trk receptors and neurotrophic factor inhibitors |
| US5708142A (en) | 1994-05-27 | 1998-01-13 | Genentech, Inc. | Tumor necrosis factor receptor-associated factors |
| EP1382679A3 (en) | 1995-09-08 | 2004-11-10 | Genentech, Inc. | Vascular Endothelial Growth Factor Related Protein (VRP) Antagonists |
| US6030945A (en) | 1996-01-09 | 2000-02-29 | Genentech, Inc. | Apo-2 ligand |
| US6998116B1 (en) | 1996-01-09 | 2006-02-14 | Genentech, Inc. | Apo-2 ligand |
| EP1500702A1 (en) | 1996-04-01 | 2005-01-26 | Genentech, Inc. | APO-2LI and APO-3 apoptosis polypeptides from the TNFR1 familiy |
| US5851984A (en) * | 1996-08-16 | 1998-12-22 | Genentech, Inc. | Method of enhancing proliferation or differentiation of hematopoietic stem cells using Wnt polypeptides |
| US6159462A (en) * | 1996-08-16 | 2000-12-12 | Genentech, Inc. | Uses of Wnt polypeptides |
| US6462176B1 (en) | 1996-09-23 | 2002-10-08 | Genentech, Inc. | Apo-3 polypeptide |
| US5990281A (en) * | 1996-09-30 | 1999-11-23 | Genentech, Inc. | Vertebrate smoothened proteins |
| EP2264175B1 (en) | 1996-10-16 | 2012-11-21 | ZymoGenetics, Inc. | Fibroblast growth factor homologs |
| ATE356212T1 (de) | 1997-01-31 | 2007-03-15 | Genentech Inc | O-fukosyltransferase |
| US6100076A (en) | 1997-01-31 | 2000-08-08 | Genentech, Inc. | O-fucosyltransferase |
| ES2293682T5 (es) | 1997-05-15 | 2011-11-17 | Genentech, Inc. | Anticuerpo anti-apo2. |
| US6342369B1 (en) | 1997-05-15 | 2002-01-29 | Genentech, Inc. | Apo-2-receptor |
| AU739350B2 (en) | 1997-06-05 | 2001-10-11 | University Of Texas System, The | APAF-1, the CED-4 human homolog, an activator of caspase-3 |
| EP2083079A1 (en) | 1997-06-18 | 2009-07-29 | Genentech, Inc. | Apo-2DcR |
| US6342220B1 (en) | 1997-08-25 | 2002-01-29 | Genentech, Inc. | Agonist antibodies |
| IL134578A0 (en) | 1997-09-18 | 2001-04-30 | Genentech Inc | DcR3 POLYPEPTIDE, A TNFR HOMOLOG |
| WO1999019490A1 (en) | 1997-10-10 | 1999-04-22 | Genentech, Inc. | Apo-3 ligand |
| AU1126099A (en) | 1997-10-29 | 1999-05-17 | Genentech Inc. | Polypeptides and nucleic acids encoding the same |
| ATE406441T1 (de) | 1997-10-29 | 2008-09-15 | Genentech Inc | Verwendung des wnt-1 induzierten sekretierten polypeptids wisp-1 |
| US7192589B2 (en) | 1998-09-16 | 2007-03-20 | Genentech, Inc. | Treatment of inflammatory disorders with STIgMA immunoadhesins |
| ATE410512T1 (de) | 1997-11-21 | 2008-10-15 | Genentech Inc | Plättchen-spezifische antigene und deren pharmazeutische verwendung |
| EP1045906B1 (en) | 1998-01-15 | 2008-10-15 | Genentech, Inc. | Apo-2 ligand |
| US6727079B1 (en) | 1998-02-25 | 2004-04-27 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | cDNA encoding a gene BOG (B5T Over-expressed Gene) and its protein product |
| NZ525914A (en) | 1998-03-10 | 2004-03-26 | Genentech Inc | Novel polypeptides and nucleic acids encoding the same |
| DE69939374D1 (de) | 1998-03-17 | 2008-10-02 | Genentech Inc | Zu vegf und bmp1 homologe polypeptide |
| EP1865061A3 (en) | 1998-05-15 | 2007-12-19 | Genentech, Inc. | IL-17 homologous polypeptides and therapeutic uses thereof |
| NZ508878A (en) | 1998-05-15 | 2003-08-29 | Genentech Inc | IL-17B and IL-17Cactive variants of IL-17 which stimulates epithelial, endothelial and fibroblastic cells |
| EP3112468A1 (en) | 1998-05-15 | 2017-01-04 | Genentech, Inc. | Il-17 homologous polypeptides and therapeutic uses thereof |
| US20020172678A1 (en) | 2000-06-23 | 2002-11-21 | Napoleone Ferrara | EG-VEGF nucleic acids and polypeptides and methods of use |
| KR20010085838A (ko) | 1998-09-23 | 2001-09-07 | 리스 데브라 케이. | 사이토킨 리셉터 ｚａｌｐｈａ11 |
| AU764039B2 (en) | 1998-12-07 | 2003-08-07 | Zymogenetics Inc. | Growth factor homolog ZVEGF3 |
| EP1484338B1 (en) | 1998-12-22 | 2007-02-07 | Genentech, Inc. | Methods and compositions for inhibiting neoplastic cell growth |
| IL143593A0 (en) | 1998-12-23 | 2002-04-21 | Genentech Inc | Il-1 related polypeptides |
| US7833529B1 (en) | 1999-01-07 | 2010-11-16 | Zymogenetics, Inc. | Methods for inhibiting B lymphocyte proliferation with soluble ztnf4 receptor |
| BR0007423A (pt) | 1999-01-07 | 2002-01-22 | Zymogenetics Inc | Métodos para inibir a atividade de ztnf4 em um mamìfero e o acoplamento de receptor-ligando br43x2, taci ou bcma e para produzir um polipeptìdeo, molécula de polinucleotìdeo isolada, vetor de expressão, célula cultivada, e, polipeptìdeo isolado |
| EP1165791B1 (en) | 1999-03-09 | 2007-10-31 | ZymoGenetics, Inc. | Human cytokine as ligand of the zalpha receptor and uses thereof |
| US6696424B1 (en) | 1999-05-28 | 2004-02-24 | Vical Incorporated | Cytofectin dimers and methods of use thereof |
| EP1978029A3 (en) | 1999-06-15 | 2008-10-15 | Genentech, Inc. | Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids endoding the same |
| EP2339003A3 (en) | 1999-06-28 | 2011-10-19 | Genentech, Inc. | Apo-2 ligand substitutional variants |
| US20050005310A1 (en) * | 1999-07-12 | 2005-01-06 | Genentech, Inc. | Expression vectors and methods |
| US20040235715A1 (en) * | 1999-11-12 | 2004-11-25 | Bayer Corporation | Method of producing glycosylated bikunin |
| EP1661997A1 (en) | 1999-12-01 | 2006-05-31 | Genentech, Inc. | Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same |
| EP1897946B1 (en) | 1999-12-23 | 2012-07-11 | Genentech, Inc. | IL-17 homologous polypeptides and therapeutic uses thereof |
| EP1242600B1 (en) | 1999-12-23 | 2010-03-03 | ZymoGenetics, Inc. | Cytokine zcyto18 |
| CA2397207C (en) | 2000-01-13 | 2013-12-03 | Genentech, Inc. | Novel stra6 polypeptides |
| DE60028830T2 (de) | 2000-02-16 | 2007-01-18 | Genentech, Inc., South San Francisco | Anti-april antikörper und hybridomazellen |
| DE60124080T2 (de) | 2000-03-23 | 2007-03-01 | Elan Pharmaceuticals, Inc., San Francisco | Verbindungen und verfahren zur behandlung der alzheimerschen krankheit |
| EP2275549A1 (en) | 2000-06-23 | 2011-01-19 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for the diagnosis and treatment of disorders involving angiogenesis |
| CA2648051A1 (en) | 2000-06-23 | 2002-01-03 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for the diagnosis and treatment of disorders involving angiogenesis |
| WO2002000721A2 (en) | 2000-06-26 | 2002-01-03 | Zymogenetics, Inc. | Cytokine receptor zcytor17 |
| DK1717316T3 (da) | 2000-06-30 | 2008-12-08 | Zymogenetics Inc | Allelisk variant af interferon-lignende protein Zcyto21 |
| ES2248356T3 (es) | 2000-06-30 | 2006-03-16 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Compuestos para tratar la enfermedad de alzheimer. |
| EP1297168A2 (en) | 2000-07-03 | 2003-04-02 | Gala Design, Inc. | Expression vectors |
| AU2001284948A1 (en) | 2000-08-15 | 2002-02-25 | Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Animals expressing exogenous igf-i in their milk |
| EP2014298A3 (en) | 2000-08-24 | 2009-10-07 | Genentech, Inc. | Interleukin-22 polypeptides, nucleic acids encoding the same and methods for the treatment of pancreatic disorders |
| EP1944317A3 (en) | 2000-09-01 | 2008-09-17 | Genentech, Inc. | Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same |
| JP4361728B2 (ja) | 2000-09-13 | 2009-11-11 | ノボ ノルディスク ヘルス ケア アクチェンゲゼルシャフト | ヒト凝固因子ｖｉｉ変異型 |
| US6673580B2 (en) | 2000-10-27 | 2004-01-06 | Genentech, Inc. | Identification and modification of immunodominant epitopes in polypeptides |
| CA2441580A1 (en) | 2001-03-22 | 2002-10-03 | Novo Nordisk Health Care Ag | Coagulation factor vii derivatives |
| US20070160576A1 (en) | 2001-06-05 | 2007-07-12 | Genentech, Inc. | IL-17A/F heterologous polypeptides and therapeutic uses thereof |
| DK2000545T3 (da) | 2001-06-20 | 2011-11-28 | Genentech Inc | Sammensætninger og fremgangsmåder til diagnose og behandling af lunge-tumor |
| DK1427830T3 (da) | 2001-08-29 | 2012-07-23 | Genentech Inc | Bv8-nukleinsyrer og -polypeptider med mitogen aktivitet |
| NZ573740A (en) | 2001-09-18 | 2010-07-30 | Genentech Inc | Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor, particularly kidney tumor - TAT184 |
| ES2376694T3 (es) | 2001-09-27 | 2012-03-16 | Novo Nordisk Health Care Ag | Polipã‰ptidos del factor vii de coagulaciã“n humano. |
| JP2005508162A (ja) | 2001-10-02 | 2005-03-31 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | Ａｐｏ−２リガンド変異体とその使用法 |
| EP2305311A3 (en) | 2001-10-10 | 2011-07-20 | BioGeneriX AG | Glycoconjugation of peptides |
| ES2516041T3 (es) | 2001-10-10 | 2014-10-30 | Ratiopharm Gmbh | Remodelación y glicoconjugación de la hormona del crecimiento humano (hGH) |
| DK1451322T3 (da) | 2001-11-05 | 2010-02-01 | Zymogenetics Inc | Il-21-antagonister |
| EP2322165A1 (en) | 2001-11-13 | 2011-05-18 | Genentech, Inc. | Apo2 ligand/TRAIL formulations |
| US20030157641A1 (en) * | 2001-11-16 | 2003-08-21 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Polycistronic expression of antibodies |
| NZ533056A (en) | 2001-11-16 | 2007-12-21 | Biogen Idec Inc | Polycistronic expression of antibodies |
| AU2002367318B2 (en) | 2002-01-02 | 2007-07-12 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor |
| EP1476541B1 (en) | 2002-01-18 | 2008-07-16 | ZymoGenetics, Inc. | Cytokine (zcytor17 ligand) |
| CA2473733C (en) | 2002-01-18 | 2014-09-09 | Zymogenetics, Inc. | Cytokine receptor zcytor17 multimers |
| US20040258678A1 (en) | 2002-02-22 | 2004-12-23 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for the treatment of immune related diseases |
| US7303896B2 (en) | 2002-02-25 | 2007-12-04 | Genentech, Inc. | Nucleic acid encoding novel type-1 cytokine receptor GLM-R |
| US20040038304A1 (en) | 2002-03-28 | 2004-02-26 | Gala Design, Inc. | Antibody libraries |
| US7384738B2 (en) | 2002-03-28 | 2008-06-10 | Bremel Robert D | Retrovirus-based genomic screening |
| AU2003230874A1 (en) | 2002-04-16 | 2003-11-03 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor |
| EP1497415B1 (en) | 2002-04-19 | 2010-12-29 | ZymoGenetics, L.L.C. | Methods for detection or modulation of the interaction of a cytokine receptor with its ligand |
| EP2305710A3 (en) | 2002-06-03 | 2013-05-29 | Genentech, Inc. | Synthetic antibody phage libraries |
| JP2005528905A (ja) | 2002-06-07 | 2005-09-29 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | 腫瘍の診断と治療のための組成物と方法 |
| EP1556076A4 (en) | 2002-06-24 | 2009-07-08 | Genentech Inc | APO-2 LIGAND / TRAIL VARIANTS AND ITS USES |
| US20040138114A1 (en) | 2002-07-08 | 2004-07-15 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for the treatment of immune related diseases |
| EP2277532A1 (en) | 2002-09-11 | 2011-01-26 | Genentech, Inc. | Novel composition and methods for the treatment of immune related diseases |
| JP2006521082A (ja) | 2002-09-11 | 2006-09-21 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | 免疫関連疾患の治療のための新規組成物と方法 |
| EP1578364A4 (en) | 2002-09-16 | 2011-06-08 | Genentech Inc | COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING IMMUNE DISEASES |
| EP2500438A3 (en) | 2002-09-25 | 2012-11-28 | Genentech, Inc. | Novel compositions and methods for the treatment of psoriasis |
| EP2322201A3 (en) | 2002-10-29 | 2011-07-27 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for the treatment of immune related diseases |
| JP2006516094A (ja) | 2002-11-08 | 2006-06-22 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | ナチュラルキラー細胞関連疾患の治療のための組成物と方法 |
| WO2004046340A2 (en) * | 2002-11-14 | 2004-06-03 | Genentech, Inc. | Intron fusion construct and method of using for selecting high-expressing production cell lines |
| AU2003302386B2 (en) | 2002-11-26 | 2010-04-01 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for the treatment of immune related diseases |
| KR101294959B1 (ko) | 2003-03-12 | 2013-08-09 | 제넨테크, 인크. | 조혈을 촉진하기 위한 ｂｖ８ 및(또는) ｅｇ-ｖｅｇｆ의 용도 |
| EP3103869A1 (en) | 2003-03-18 | 2016-12-14 | Novo Nordisk Health Care AG | Method for the production of factor vii polypeptides |
| WO2004096124A2 (en) | 2003-04-01 | 2004-11-11 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor |
| LT2335725T (lt) | 2003-04-04 | 2017-01-25 | Genentech, Inc. | Didelės koncentracijos antikūno ir baltymo kompozicijos |
| US20040242502A1 (en) * | 2003-04-08 | 2004-12-02 | Galenica Pharmaceuticals, Inc. | Semi-synthetic saponin analogs with carrier and immune stimulatory activities for DNA and RNA vaccines |
| EP1615945B1 (en) | 2003-04-09 | 2011-09-28 | BioGeneriX AG | Glycopegylation methods and proteins/peptides produced by the methods |
| TWI353991B (en) | 2003-05-06 | 2011-12-11 | Syntonix Pharmaceuticals Inc | Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids |
| EP3552627A1 (en) | 2003-05-06 | 2019-10-16 | Bioverativ Therapeutics Inc. | Clotting factor-fc chimeric proteins to treat hemophilia |
| US20050014932A1 (en) | 2003-05-15 | 2005-01-20 | Iogenetics, Llc | Targeted biocides |
| JP2007526220A (ja) | 2003-06-05 | 2007-09-13 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | Ｂ細胞疾患の併用療法 |
| ES2353457T3 (es) | 2003-06-10 | 2011-03-02 | Nsgene A/S | Secreción mejorada de neublastina. |
| ES2751414T5 (es) | 2003-07-08 | 2024-04-23 | Novartis Pharma Ag | Anticuerpos antagonistas a polipéptidos heterólogos IL-17 A/F |
| EP2251352A1 (en) | 2003-08-07 | 2010-11-17 | ZymoGenetics, L.L.C. | Homogeneous preparations of IL-28 and IL-29 |
| WO2005019258A2 (en) | 2003-08-11 | 2005-03-03 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for the treatment of immune related diseases |
| ES2374526T3 (es) | 2003-09-04 | 2012-02-17 | Medarex, Inc. | Vector de expresión. |
| ES2381110T3 (es) | 2003-09-09 | 2012-05-23 | Novo Nordisk Health Care Ag | Polipéptidos de factor VII de coagulación |
| ES2472690T3 (es) | 2003-11-17 | 2014-07-02 | Genentech, Inc. | Anticuerpo contra CD22 para el tratamiento de tumores de origen hematopoy�tico |
| CN1926237A (zh) * | 2004-01-28 | 2007-03-07 | 森托尼克斯制药有限公司 | 用于治疗不育症的异二聚体促卵泡激素－Fc(FSH－Fc)融合蛋白 |
| CA2558811A1 (en) | 2004-03-08 | 2005-09-22 | Zymogenetics, Inc. | Dimeric fusion proteins and materials and methods for producing them |
| KR101222254B1 (ko) | 2004-07-26 | 2013-01-16 | 제넨테크, 인크. | 간세포 성장 인자 활성화를 조정하기 위한 조성물 및 방법 |
| CA2574564C (en) | 2004-07-29 | 2013-04-16 | Zymogenetics, Inc. | Use of il-28 and il-29 to treat cancer and autoimmune disorders |
| US7335491B2 (en) | 2004-08-27 | 2008-02-26 | Wyeth Research Ireland Limited | Production of anti-abeta |
| US7300773B2 (en) | 2004-08-27 | 2007-11-27 | Wyeth Research Ireland Limited | Production of TNFR-Ig |
| TWI384069B (zh) | 2004-08-27 | 2013-02-01 | Pfizer Ireland Pharmaceuticals | 多胜肽之製法 |
| JP2008540569A (ja) | 2005-05-12 | 2008-11-20 | ザイモジェネティクス， インコーポレイテッド | 免疫系を調整するためにＢ７ファミリーメンバーであるｐＮＫｐ３０を使用する方法 |
| US7858843B2 (en) | 2005-06-06 | 2010-12-28 | Genentech, Inc. | Gene disruptions, compositions and methods relating thereto |
| KR20080056714A (ko) * | 2005-08-09 | 2008-06-23 | 지모제넥틱스, 인코포레이티드 | ＴＡＣＩ―Ｉｇ 융합 분자를 사용하여 Ｂ―세포 악성종양을치료하는 방법 |
| EP1922079A2 (en) | 2005-08-09 | 2008-05-21 | ZymoGenetics, Inc. | Methods for the treatment and prevention of abnormal cell proliferation using taci-fusion molecules |
| WO2007021423A2 (en) | 2005-08-15 | 2007-02-22 | Genentech, Inc. | Gene disruptions, compositions and methods relating thereto |
| WO2007031559A2 (en) | 2005-09-14 | 2007-03-22 | Novo Nordisk Health Care Ag | Human coagulation factor vii polypeptides |
| US7855279B2 (en) | 2005-09-27 | 2010-12-21 | Amunix Operating, Inc. | Unstructured recombinant polymers and uses thereof |
| EP1962584A2 (en) | 2005-11-21 | 2008-09-03 | Genentech, Inc. | Novel gene disruptions, compositions and methods relating thereto |
| EP2385125A3 (en) | 2005-12-21 | 2012-04-11 | Inspiration Biopharmaceuticals, Inc. | Method of producing biologically active vitamin K dependent proteins by recombinant methods |
| AU2007233263A1 (en) | 2006-02-17 | 2007-10-11 | Genentech, Inc. | Gene disruptons, compositions and methods relating thereto |
| TW200745163A (en) | 2006-02-17 | 2007-12-16 | Syntonix Pharmaceuticals Inc | Peptides that block the binding of IgG to FcRn |
| WO2007103447A2 (en) | 2006-03-06 | 2007-09-13 | Humagene, Inc. | A method for the preparation of recombinant human thrombin |
| DK2004683T3 (en) * | 2006-03-24 | 2016-08-22 | Biogen Hemophilia Inc | PC5 AS A FACTOR IX PROPEPTID PROCESSING ENZYM |
| AU2007243946B2 (en) | 2006-04-05 | 2012-11-29 | Curis, Inc. | Method for using BOC/CDO to modulate hedgehog signaling |
| CA2649387A1 (en) | 2006-04-19 | 2008-03-27 | Genentech, Inc. | Novel gene disruptions, compositions and methods relating thereto |
| CA2650730A1 (en) | 2006-04-27 | 2007-11-08 | Pikamab, Inc. | Methods and compositions for antibody therapy |
| CN101489573B (zh) * | 2006-05-15 | 2013-05-22 | 阿雷斯贸易股份有限公司 | 用TACI-Ig融合分子治疗自身免疫疾病的方法 |
| KR20090013816A (ko) | 2006-05-24 | 2009-02-05 | 노보 노르디스크 헬스 케어 악티엔게젤샤프트 | 연장된 생체내 반감기를 갖는 인자 ⅸ 유사체 |
| US20080070251A1 (en) | 2006-06-30 | 2008-03-20 | Kaufman Randal J | Method of Producing Factor VIII Proteins by Recombinant Methods |
| CA2657248C (en) | 2006-07-13 | 2018-10-30 | Wyeth | Production of glycoproteins |
| AU2007353396C1 (en) | 2006-11-02 | 2013-06-27 | Biomolecular Holdings Llc | Hybrid immunoglobulins with moving parts |
| WO2008066658A2 (en) | 2006-11-03 | 2008-06-05 | The Trustees Of Princeton University | Engineered cellular pathways for programmed autoregulation of differentiation |
| CA2666317C (en) | 2006-11-03 | 2013-08-06 | Wyeth | Glycolysis-inhibiting substances in cell culture |
| AU2008218199B2 (en) | 2007-02-22 | 2013-10-31 | Genentech, Inc. | Methods for detecting inflammatory bowel disease |
| DK2115126T3 (en) | 2007-03-02 | 2015-05-04 | Wyeth Llc | Use of copper and glutamate in cell culture for the preparation of polypeptides |
| CA2683423C (en) | 2007-04-26 | 2020-10-27 | Inspiration Biopharmaceuticals, Inc. | Recombinant vitamin k dependent proteins with high sialic acid content and methods of preparing same |
| WO2009012256A1 (en) | 2007-07-16 | 2009-01-22 | Genentech, Inc. | Humanized anti-cd79b antibodies and immunoconjugates and methods of use |
| CL2008002085A1 (es) | 2007-07-16 | 2008-11-21 | Genentech Inc | Anticuerpo humanizado anti-cd79b/igbeta/b29; polinucleotido codificacnte, vector, celula huesped; metodo de fabricacion; inmunoconjugado; composicion farmaceutica; uso para tratar cancer; metodo in vitro para determinar presencia de cd79b, oinhibir crecimiento de celulas quqe expresa cd79b; ensayo in vitro para detectar celulas b |
| CN101361968B (zh) | 2007-08-06 | 2011-08-03 | 健能隆医药技术（上海）有限公司 | 白介素-22在治疗脂肪肝中的应用 |
| EA201070231A1 (ru) * | 2007-08-09 | 2010-10-29 | Синтоникс Фармасьютикалз, Инк. | Иммуномодулирующие пептиды |
| EP2200631A1 (en) | 2007-10-16 | 2010-06-30 | Zymogenetics, Inc. | Combination of blys inhibition and anti-cd 20 agents for treatment of autoimmune disease |
| PL2247620T3 (pl) | 2008-01-31 | 2017-08-31 | Genentech, Inc. | Przeciwciała anty-CD79B i immunokoniugaty i sposoby stosowania |
| WO2009120922A2 (en) | 2008-03-27 | 2009-10-01 | Zymogenetics, Inc. | Compositions and methods for inhibiting pdgfrbeta and vegf-a |
| HUE036780T2 (hu) | 2008-04-09 | 2018-07-30 | Genentech Inc | Új kompozíciók és eljárások immunológiai vonatkozású betegségek kezelésére |
| WO2009158696A1 (en) | 2008-06-27 | 2009-12-30 | Zymogenetics, Inc. | SOLUBLE HYBRID Fcγ RECEPTORS AND RELATED METHODS |
| US20100048488A1 (en) * | 2008-08-01 | 2010-02-25 | Syntonix Pharmaceuticals, Inc. | Immunomodulatory peptides |
| WO2010031074A2 (en) | 2008-09-15 | 2010-03-18 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for regulating cell osmolarity |
| US9702877B2 (en) | 2008-10-31 | 2017-07-11 | Quest Diagnostics Investments Incorporated | BCR-ABL variants |
| ES2730800T3 (es) | 2009-02-03 | 2019-11-12 | Amunix Pharmaceuticals Inc | Polipéptidos recombinantes extendidos y composiciones que comprenden los mismos |
| WO2010120561A1 (en) | 2009-04-01 | 2010-10-21 | Genentech, Inc. | Anti-fcrh5 antibodies and immunoconjugates and methods of use |
| AU2010272483B2 (en) | 2009-07-17 | 2016-07-21 | Omeros Corporation | MASP isoforms as inhibitors of complement activation |
| PT2464725T (pt) | 2009-08-11 | 2020-05-21 | Hoffmann La Roche | Produção de proteínas em meios de cultura celular isentos de glutamina |
| AU2010290131C1 (en) | 2009-08-24 | 2015-12-03 | Amunix Operating Inc. | Coagulation factor VII compositions and methods of making and using same |
| WO2011041308A1 (en) | 2009-09-30 | 2011-04-07 | Quest Diagnostics Investments Incorporated | Bcr-abl truncation mutations |
| US8535912B2 (en) | 2009-10-15 | 2013-09-17 | Genentech, Inc. | Chimeric fibroblast growth factors with altered receptor specificity |
| MX2012004617A (es) | 2009-10-22 | 2012-05-08 | Genentech Inc | Metodos y composiciones para modular activacion de hepsina de proteina que estimula macrofago. |
| WO2011056497A1 (en) | 2009-10-26 | 2011-05-12 | Genentech, Inc. | Activin receptor type iib compositions and methods of use |
| WO2011056502A1 (en) | 2009-10-26 | 2011-05-12 | Genentech, Inc. | Bone morphogenetic protein receptor type ii compositions and methods of use |
| WO2011056494A1 (en) | 2009-10-26 | 2011-05-12 | Genentech, Inc. | Activin receptor-like kinase-1 antagonist and vegfr3 antagonist combinations |
| JP5851410B2 (ja) | 2009-10-30 | 2016-02-03 | シーエヌジェイ ホールディングス、インク． | 組換えビタミンｋ依存性タンパク質の生成法 |
| EP2498817A2 (en) | 2009-11-12 | 2012-09-19 | F. Hoffmann-La Roche AG | A method of promoting dendritic spine density |
| MX338694B (es) | 2009-11-30 | 2016-04-27 | Genentech Inc | Composiciones y metodos para el diagnostico y el tratamiento de tumores. |
| US20120269830A1 (en) | 2009-12-07 | 2012-10-25 | Lawrence Horowitz | Conjugates with improved pharmacokinetic properties |
| PE20130214A1 (es) | 2010-02-23 | 2013-03-11 | Genentech Inc | Composiciones y metodos para el diagnostico y tratamiento de tumores |
| AU2011222883B2 (en) | 2010-03-05 | 2016-05-26 | Omeros Corporation | Chimeric inhibitor molecules of complement activation |
| EP2566893A1 (en) | 2010-05-03 | 2013-03-13 | F. Hoffmann-La Roche AG | Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor |
| WO2011156356A1 (en) | 2010-06-09 | 2011-12-15 | Zymogenetics, Inc. | Dimeric vstm3 fusion proteins and related compositions and methods |
| KR101768118B1 (ko) | 2010-06-25 | 2017-08-14 | 인쎄름 (엥스띠뛰 나씨오날 드 라 쌍떼 에 드 라 흐쉐르슈 메디깔) | 기도 감염의 치료를 위한 방법 및 약학 조성물 |
| US9611310B2 (en) | 2010-07-09 | 2017-04-04 | Bioverativ Therapeutics Inc. | Systems for factor VIII processing and methods thereof |
| CA2807607A1 (en) | 2010-08-20 | 2012-02-23 | Wyeth Llc | Cell culture of growth factor-free adapted cells |
| CN102380091A (zh) | 2010-08-31 | 2012-03-21 | 健能隆医药技术（上海）有限公司 | 白介素-22在治疗病毒性肝炎中的应用 |
| EP2616481A4 (en) | 2010-09-15 | 2014-04-02 | Aligna Technologies Inc | BIOPRODUCTION OF AROMATIC CHEMICALS FROM LIGNIN DERIVED COMPOUNDS |
| US8603740B2 (en) | 2010-12-29 | 2013-12-10 | Quest Diagnostics Investments Incorporated | BCR-ABL1 splice variants and uses thereof |
| WO2012101509A2 (en) | 2011-01-28 | 2012-08-02 | Sanofi Pasteur Sa | Immunological compositions against hiv |
| EP2683735A1 (en) | 2011-03-10 | 2014-01-15 | HCO Antibody, Inc. | Bispecific three-chain antibody-like molecules |
| US20140178398A1 (en) | 2011-05-03 | 2014-06-26 | Genentech, Inc | Vascular disruption agents and uses thereof |
| AU2012308636B2 (en) | 2011-09-12 | 2017-08-31 | Amunix Operating Inc. | Glucagon-like peptide-2 compositions and methods of making and using same |
| SG11201401220SA (en) | 2011-10-21 | 2014-07-30 | Pfizer | Addition of iron to improve cell culture |
| US8748097B1 (en) | 2011-12-02 | 2014-06-10 | President And Fellows Of Harvard College | Identification of agents for treating calcium disorders and uses thereof |
| CA2863328A1 (en) | 2012-01-12 | 2013-07-18 | Biogen Idec Ma Inc. | Chimeric factor viii polypeptides and uses thereof |
| WO2013116771A1 (en) | 2012-02-01 | 2013-08-08 | Synthetic Genomics, Inc. | Materials and methods for the synthesis of error-minimized nucleic acid molecules |
| CN104136041B (zh) | 2012-02-09 | 2021-06-29 | Var2制药有限公司 | 靶向硫酸软骨素聚糖 |
| SI3564260T1 (sl) | 2012-02-15 | 2023-02-28 | Bioverativ Therapeutics Inc. | Sestavki faktorja VIII in postopki njegove izdelave in uporabe |
| CA2864126A1 (en) | 2012-02-15 | 2013-08-22 | Biogen Idec Ma Inc. | Recombinant factor viii proteins |
| US9493744B2 (en) | 2012-06-20 | 2016-11-15 | Genentech, Inc. | Methods for viral inactivation and other adventitious agents |
| US20130281355A1 (en) | 2012-04-24 | 2013-10-24 | Genentech, Inc. | Cell culture compositions and methods for polypeptide production |
| EP2848687B1 (en) | 2012-04-27 | 2017-09-13 | JCR Pharmaceuticals Co., Ltd. | Novel expression vector |
| EP2841087B1 (en) | 2012-04-27 | 2017-08-23 | The United States of America, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services | Vascular endothelial growth factor antagonists and methods for their use |
| EA029685B1 (ru) | 2012-07-11 | 2018-04-30 | Амуникс Оперэйтинг Инк. | Комплекс фактора viii с xten и белком фактора фон виллебранда и его применение (варианты) |
| US20150307865A1 (en) | 2012-10-15 | 2015-10-29 | Novo Nordisk Health Care Ag | Coagulation factor vii polypeptides |
| AU2013348029A1 (en) | 2012-11-20 | 2015-07-02 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Methods and compositions for modified factor IX proteins |
| WO2014115087A2 (en) | 2013-01-22 | 2014-07-31 | Cencor Biotech Ltd. | A method for the preparation of recombinant human prothrombin and fibrinogen |
| TWI788044B (zh) | 2013-03-15 | 2022-12-21 | 美商百歐維拉提夫治療公司 | 因子ｉｘ多肽調配物 |
| JP6456356B2 (ja) | 2013-03-15 | 2019-01-23 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | ＩＬ−２２ポリペプチド及びＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質並びに使用方法 |
| DK2968495T3 (da) | 2013-03-15 | 2019-10-14 | Daniel J Capon | Hybrid immunoglobulin indeholdende en ikke-peptid-bro |
| EA201592022A1 (ru) | 2013-06-28 | 2016-05-31 | Байоджен Ма Инк. | Расщепляемый тромбином линкер, содержащий xten, и его применение |
| US10947269B2 (en) | 2013-08-08 | 2021-03-16 | Bioverativ Therapeutics Inc. | Purification of chimeric FVIII molecules |
| EP3033097B1 (en) | 2013-08-14 | 2021-03-10 | Bioverativ Therapeutics Inc. | Factor viii-xten fusions and uses thereof |
| CN104623637A (zh) | 2013-11-07 | 2015-05-20 | 健能隆医药技术（上海）有限公司 | Il-22二聚体在制备静脉注射药物中的应用 |
| CA2930687C (en) | 2013-11-15 | 2024-04-23 | Genentech, Inc. | Methods for viral inactivation using eco-friendly detergents |
| CN114736305B (zh) | 2014-01-10 | 2023-05-05 | 比奥贝拉蒂治疗公司 | 因子viii嵌合蛋白及其用途 |
| WO2015116902A1 (en) | 2014-01-31 | 2015-08-06 | Genentech, Inc. | G-protein coupled receptors in hedgehog signaling |
| MX2016011934A (es) | 2014-03-14 | 2017-04-13 | J Capon Daniel | Inmunoglobulina hibrida conteniendo un enlace no-peptidilico. |
| EP3119876A1 (en) | 2014-03-19 | 2017-01-25 | Pfizer Inc. | Method of cell culture |
| WO2016090546A1 (en) | 2014-12-09 | 2016-06-16 | Wentao Zhang | Nbp158 and uses thereof |
| KR20230110654A (ko) | 2015-02-06 | 2023-07-24 | 더 유니버시티 오브 노쓰 캐롤라이나 엣 채플 힐 | 최적화된 인간 응고 인자 viii 유전자 발현 카세트및 그의 용도 |
| CN107787328B (zh) | 2015-05-22 | 2021-08-06 | 康诺贝林伦瑙有限公司 | 用于治疗血友病的截短的血管性血友病因子多肽 |
| WO2016188905A1 (en) | 2015-05-22 | 2016-12-01 | Csl Behring Recombinant Facility Ag | Methods for preparing modified von willebrand factor |
| CN108472337B (zh) | 2015-08-03 | 2022-11-25 | 比奥贝拉蒂治疗公司 | 因子ix融合蛋白以及其制备和使用方法 |
| CA2997263C (en) | 2015-09-08 | 2022-10-04 | Theripion, Inc. | Apoa-1 fusion polypeptides and related compositions and methods |
| EP3184149A1 (en) | 2015-12-23 | 2017-06-28 | Julius-Maximilians-Universität Würzburg | Soluble glycoprotein v for treating thrombotic diseases |
| SG10201912498YA (en) | 2016-01-07 | 2020-02-27 | CSL Behring Lengnau AG | Mutated truncated von willebrand factor |
| EP3196295A1 (en) | 2016-01-25 | 2017-07-26 | Albert-Ludwigs-Universität Freiburg | Method of producing renal cells from fibroblasts |
| EP3440190A1 (en) | 2016-04-05 | 2019-02-13 | Pfizer Inc | Cell culture process |
| WO2017181143A1 (en) | 2016-04-15 | 2017-10-19 | Generon (Shanghai) Corporation, Ltd. | Use of il-22 in treating necrotizing enterocolitis |
| TW201828974A (zh) | 2016-11-11 | 2018-08-16 | 瑞士商Ｃｓｌ貝林重組技能公司 | 用於血管外施予以治療或預防凝血疾病之截短型類血友病因子（ｖｏｎ Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ ｆａｃｔｏｒ）多肽類 |
| DK3538133T3 (da) | 2016-11-11 | 2021-04-19 | CSL Behring Lengnau AG | Trunkeret von willebrand faktor polypeptider til behandling af hæmofili |
| WO2018136163A2 (en) | 2016-12-09 | 2018-07-26 | Theripion, Inc. | Tandem apoa-1 fusion polypeptides |
| WO2018152496A1 (en) | 2017-02-17 | 2018-08-23 | The Usa, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services | Compositions and methods for the diagnosis and treatment of zika virus infection |
| JP7177076B2 (ja) | 2017-03-16 | 2022-11-22 | ファイザー・インク | チロシン原栄養性 |
| EP4230649A3 (en) | 2017-04-25 | 2023-10-25 | The U.S.A. As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Antibodies and methods for the diagnosis and treatment of epstein barr virus infection |
| US11141466B2 (en) | 2017-06-22 | 2021-10-12 | CSL Behring Lengnau AG | Modulation of FVIII immunogenicity by truncated VWF |
| US11827669B2 (en) | 2017-07-19 | 2023-11-28 | The Usa, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services | Antibodies and methods for the diagnosis and treatment of hepatitis b virus infection |
| WO2019016402A1 (en) | 2017-07-20 | 2019-01-24 | Aptevo Research And Development Llc | BINDING PROTEINS BINDING AT 5T4 AND 4-1BB, COMPOSITIONS AND METHODS RELATED THERETO |
| EP4295915A3 (en) | 2017-12-20 | 2024-05-22 | Harbour Biomed (Shanghai) Co., Ltd | Antibodies binding ctla-4 and uses thereof |
| US10150801B1 (en) | 2017-12-27 | 2018-12-11 | Imunami Laboratories Pte. Ltd. | Recombinant polypeptides and methods of use thereof |
| CN111801346A (zh) | 2017-12-27 | 2020-10-20 | 免疫实验室私人有限公司 | 重组多肽及其使用方法 |
| MA51676A (fr) | 2018-01-26 | 2021-05-05 | Hoffmann La Roche | Protéines de fusion il-22 fc et procédés d'utilisation |
| EP3743088B1 (en) | 2018-01-26 | 2022-10-12 | F. Hoffmann-La Roche AG | Il-22 fc compositions and methods of use |
| CA3091139A1 (en) | 2018-02-21 | 2019-08-29 | Genentech, Inc. | Dosing for treatment with il-22 fc fusion proteins |
| US20210171610A1 (en) | 2018-05-02 | 2021-06-10 | The U.S.A., As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Antibodies and methods for the diagnosis, prevention, and treatment of epstein barr virus infection |
| CN112789504A (zh) | 2018-07-13 | 2021-05-11 | 瓦克特诊断有限责任公司 | 使用重组疟疾蛋白var2csa分离胎儿来源的循环细胞 |
| WO2020115655A1 (en) | 2018-12-06 | 2020-06-11 | Pfizer Inc. | Cells with reduced inhibitor production and methods of use thereof |
| WO2021001522A1 (en) | 2019-07-04 | 2021-01-07 | CSL Behring Lengnau AG | A truncated von willebrand factor (vwf) for increasing the in vitro stability of coagulation factor viii |
| EP4021512A1 (en) | 2019-08-26 | 2022-07-06 | Imunami Laboratories Pte. Ltd. | Recombinant polypeptides and methods of use thereof |
| US10675332B1 (en) | 2019-08-26 | 2020-06-09 | Imunami Laboratories Pte. Ltd. | Recombinant polypeptides and methods of use thereof |
| WO2021094344A1 (en) | 2019-11-11 | 2021-05-20 | CSL Behring Lengnau AG | Polypeptides for inducing tolerance to factor viii |
| WO2021207662A1 (en) | 2020-04-10 | 2021-10-14 | Genentech, Inc. | Use of il-22fc for the treatment or prevention of pneumonia, acute respiratory distress syndrome, or cytokine release syndrome |
| EP4168034A1 (en) | 2020-06-22 | 2023-04-26 | Imunami Laboratories Pte. Ltd. | Recombinant polypeptides and combinations for use in the treatment of cancer |
| US20230287455A1 (en) | 2020-07-30 | 2023-09-14 | Pfizer Inc. | Cells Having Gene Duplications and Uses Thereof |
| CA3190513A1 (en) | 2020-09-03 | 2022-03-10 | Jeffrey S. Bartlett | Soluble alkaline phosphatase constructs and expression vectors including a polynucleotide encoding for soluble alkaline phosphatase constructs |
| JP2022060169A (ja) | 2020-10-02 | 2022-04-14 | ファイザー・インク | Ｒｓｖ ｆタンパク質生産のための細胞培養工程 |
| WO2022178090A2 (en) | 2021-02-19 | 2022-08-25 | Theripion, Inc. | Dnase fusion polypeptides and related compositions and methods |
| JP2022184798A (ja) | 2021-06-01 | 2022-12-13 | ファイザー・インク | ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドを生産するための細胞培養方法 |
| WO2023012627A1 (en) | 2021-08-02 | 2023-02-09 | Pfizer Inc. | Improved expression vectors and uses thereof |
| WO2023079058A1 (en) | 2021-11-05 | 2023-05-11 | Yokogawa Insilico Biotechnology Gmbh | Cell culture with reduced production of lactate |
| WO2023148598A1 (en) | 2022-02-02 | 2023-08-10 | Pfizer Inc. | Cysteine prototrophy |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0009930B2 (en) * | 1978-10-10 | 1988-08-24 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Recombinant dna, method for preparing it and production of foreign proteins by unicellular hosts containing it |
| US4399216A (en) * | 1980-02-25 | 1983-08-16 | The Trustees Of Columbia University | Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials |
| WO1981002425A1 (en) * | 1980-02-25 | 1981-09-03 | R Axel | The use of eucaryotic promoter sequences in the production of proteinaceous materials |
| EP0054223A3 (en) * | 1980-12-08 | 1983-01-12 | F. HOFFMANN-LA ROCHE & CO. Aktiengesellschaft | Plasmid vectors for eukaryotic cells and method for selecting transfected eukaryotic cells |
| FR2500847B1 (fr) * | 1981-03-02 | 1985-09-13 | Pasteur Institut | Marqueurs genetiques selectifs pour cellules eucaryotes, procede de mise en oeuvre de tels marqueurs et application des cellules contenant un tel marqueur a la fabrication de proteines determinees apres leur transformation par un adn correspondant |
| IL68561A (en) * | 1982-05-05 | 1991-01-31 | Genentech Inc | Preparation of polypeptide with human tissue plasminogen activator function,processes for making it,and dna and transformed cell intermediates thereof |
| AU2353384A (en) * | 1983-01-19 | 1984-07-26 | Genentech Inc. | Amplification in eukaryotic host cells |
| AU572108B2 (en) * | 1983-01-19 | 1988-05-05 | Genentech Inc. | Human tpa production using vectors coding for dhfr protein |
| US4670399A (en) * | 1983-01-31 | 1987-06-02 | Stauffer Chemical Co. | Hybrid plasmid with marker |
-
1983
- 1983-01-19 US US06/459,152 patent/US4713339A/en not_active Expired - Lifetime
-
1984
- 1984-01-16 NZ NZ206841A patent/NZ206841A/en unknown
- 1984-01-17 AU AU23531/84A patent/AU578011B2/en not_active Expired
- 1984-01-17 IE IE95/84A patent/IE55852B1/en not_active IP Right Cessation
- 1984-01-18 EP EP84300298A patent/EP0117058B1/en not_active Expired
- 1984-01-18 AT AT84300298T patent/ATE46536T1/de not_active IP Right Cessation
- 1984-01-18 ZA ZA84377A patent/ZA84377B/xx unknown
- 1984-01-18 DE DE8484300298T patent/DE3479815D1/de not_active Expired
- 1984-01-18 DK DK198400209A patent/DK173928B1/da not_active IP Right Cessation
- 1984-01-19 ES ES529022A patent/ES8507179A1/es not_active Expired
- 1984-01-19 JP JP59007899A patent/JPH0630609B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1984-01-19 KR KR1019840000218A patent/KR840007253A/ko not_active Application Discontinuation
- 1984-01-19 CA CA000445589A patent/CA1301675C/en not_active Expired - Lifetime
-
1993
- 1993-08-24 JP JP5209358A patent/JP2557605B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1996
- 1996-04-10 JP JP8088012A patent/JP2719512B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| EUKARYOTIC VIRAL VECTORS=1982 * |
| MOLECULAR AND CELLULAR BIOLOGY=1981 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010074080A1 (ja) * | 2008-12-22 | 2010-07-01 | 国立大学法人北海道大学 | 動物細胞を用いて外来遺伝子由来タンパク質を大量に生産するための発現ベクター、およびその利用 |
| US9096878B2 (en) | 2008-12-22 | 2015-08-04 | National University Corporation Hokkaido University | Expression vector for producing protein derived from foreign gene in large quantity using animal cells, and use thereof |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH08252091A (ja) | 1996-10-01 |
| NZ206841A (en) | 1987-06-30 |
| EP0117058B1 (en) | 1989-09-20 |
| JP2719512B2 (ja) | 1998-02-25 |
| ATE46536T1 (de) | 1989-10-15 |
| KR840007253A (ko) | 1984-12-06 |
| JPH0630609B2 (ja) | 1994-04-27 |
| DK20984A (da) | 1984-07-20 |
| IE840095L (en) | 1984-07-19 |
| IE55852B1 (en) | 1991-01-30 |
| EP0117058A2 (en) | 1984-08-29 |
| JP2557605B2 (ja) | 1996-11-27 |
| ZA84377B (en) | 1985-02-27 |
| ES529022A0 (es) | 1985-09-01 |
| CA1301675C (en) | 1992-05-26 |
| DE3479815D1 (en) | 1989-10-26 |
| AU578011B2 (en) | 1988-10-13 |
| ES8507179A1 (es) | 1985-09-01 |
| US4713339A (en) | 1987-12-15 |
| JPS59173096A (ja) | 1984-09-29 |
| DK20984D0 (da) | 1984-01-18 |
| AU2353184A (en) | 1984-07-26 |
| DK173928B1 (da) | 2002-02-25 |
| EP0117058A3 (en) | 1986-02-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2557605B2 (ja) | ポリシストロン性発現ベクターを用いた所望の形質転換体の選別法 | |
| EP0073656B1 (en) | Preparation of polypeptides in vertebrate cell culture | |
| US4965196A (en) | Polycistronic expression vector construction | |
| US5089397A (en) | Superior mammalian expression system | |
| US8957196B2 (en) | Vector and expression cell line for mass production of recombinant protein and a process of producing recombinant protein using same | |
| JP2721139B2 (ja) | 動物のインターフェロン | |
| JPH0884588A (ja) | ヘテロポリマー系蛋白質 | |
| WO1994012629A1 (en) | Episomal vectors for gene therapy | |
| JP3438889B2 (ja) | 所望のタンパク質を高レベルに発現させる組換え宿主細胞の選別法 | |
| JP4386971B2 (ja) | スプライシング配列を含んでなる組換えアデノウイルスベクター | |
| US4741901A (en) | Preparation of polypeptides in vertebrate cell culture | |
| KR20170132784A (ko) | 글로빈 유전자 클러스터의 조절 요소를 포함하는 진핵생물 발현 벡터 | |
| JP2693361B2 (ja) | 組織プラスミノーゲン活性化因子の生産方法 | |
| CA1310601C (en) | Expression vectors | |
| CA1309044C (en) | Method of producing foreign gene products | |
| DK173671B1 (da) | Fremgangsmåde til selektion af transficerede hvirveldyrceller | |
| EP1356069B1 (en) | Enhanced transfection system | |
| JP2530632B2 (ja) | ヒトインタ―フェロンの生産方法 | |
| CN101348789B (zh) | 通过同源重组在人细胞中生产人突变蛋白 | |
| AU2022398499A1 (en) | Compositions and methods for expression of il-12 and il-1ra | |
| WO2023097318A1 (en) | Compositions and methods for expression of il-12 and il-1ra | |
| JPS63230639A (ja) | 新規なｂ型肝炎ウイルス表面抗原粒子とその製法 | |
| CA2022356A1 (en) | Method and materials for producing proteins | |
| JPH0775545B2 (ja) | Ｂ型肝炎表面抗原をコ−ドするベクタ− | |
| JPH0832236B2 (ja) | 組換えヒトインターロイキン２およびその製造法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |