JP4751326B2 - 発現ベクター - Google Patents
発現ベクター Download PDFInfo
- Publication number
- JP4751326B2 JP4751326B2 JP2006525499A JP2006525499A JP4751326B2 JP 4751326 B2 JP4751326 B2 JP 4751326B2 JP 2006525499 A JP2006525499 A JP 2006525499A JP 2006525499 A JP2006525499 A JP 2006525499A JP 4751326 B2 JP4751326 B2 JP 4751326B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- gene
- expression
- expression vector
- nucleic acid
- promoter
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 title claims abstract description 55
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 145
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 94
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 71
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 54
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 54
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 34
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 29
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 28
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 28
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 123
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 64
- 108091005904 Hemoglobin subunit beta Proteins 0.000 claims description 31
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 27
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 claims description 20
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 claims description 19
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 claims description 19
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims description 17
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims description 17
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 15
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 12
- 108091000126 Dihydroorotase Proteins 0.000 claims description 8
- 102100034581 Dihydroorotase Human genes 0.000 claims description 6
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 claims description 6
- 108010025815 Kanamycin Kinase Proteins 0.000 claims description 5
- 101710169336 5'-deoxyadenosine deaminase Proteins 0.000 claims description 4
- 102100033350 ATP-dependent translocase ABCB1 Human genes 0.000 claims description 4
- 102000055025 Adenosine deaminases Human genes 0.000 claims description 4
- 102000030907 Aspartate Carbamoyltransferase Human genes 0.000 claims description 4
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 claims description 4
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 claims description 4
- 108010047230 Member 1 Subfamily B ATP Binding Cassette Transporter Proteins 0.000 claims description 4
- 102000052812 Ornithine decarboxylases Human genes 0.000 claims description 4
- 108700005126 Ornithine decarboxylases Proteins 0.000 claims description 4
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 claims description 3
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 claims description 3
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 claims description 3
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 claims description 3
- 102100029457 Adenine phosphoribosyltransferase Human genes 0.000 claims description 2
- 108010024223 Adenine phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 claims description 2
- 108010070255 Aspartate-ammonia ligase Proteins 0.000 claims description 2
- 108010045123 Blasticidin-S deaminase Proteins 0.000 claims description 2
- 108010035563 Chloramphenicol O-acetyltransferase Proteins 0.000 claims description 2
- 101001091269 Escherichia coli Hygromycin-B 4-O-kinase Proteins 0.000 claims description 2
- 108010091358 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 claims description 2
- 102100029098 Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase Human genes 0.000 claims description 2
- 101001091268 Streptomyces hygroscopicus Hygromycin-B 7''-O-kinase Proteins 0.000 claims description 2
- 108010075344 Tryptophan synthase Proteins 0.000 claims description 2
- 108010027570 Xanthine phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 claims description 2
- 108010084455 Zeocin Proteins 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 2
- 102000005396 glutamine synthetase Human genes 0.000 claims description 2
- 108020002326 glutamine synthetase Proteins 0.000 claims description 2
- CWCMIVBLVUHDHK-ZSNHEYEWSA-N phleomycin D1 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC[C@@H](N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCCCNC(N)=N)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C CWCMIVBLVUHDHK-ZSNHEYEWSA-N 0.000 claims description 2
- 108010085336 phosphoribosyl-AMP cyclohydrolase Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 claims 2
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 claims 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims 2
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 claims 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 claims 1
- OCYSGIYOVXAGKQ-UHFFFAOYSA-N hydron;3-[1-hydroxy-2-(methylamino)ethyl]phenol;chloride Chemical compound Cl.CNCC(O)C1=CC=CC(O)=C1 OCYSGIYOVXAGKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 claims 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 4
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 86
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 28
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 27
- 102100021519 Hemoglobin subunit beta Human genes 0.000 description 27
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 26
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 20
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 18
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 17
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 17
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 16
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 16
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 16
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 15
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 14
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 14
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 13
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 13
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 12
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 12
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 12
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 11
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 11
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 11
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 11
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 10
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 10
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 10
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 10
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 9
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 9
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 9
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 9
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 9
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 8
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 8
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 8
- 108700029229 Transcriptional Regulatory Elements Proteins 0.000 description 7
- 102000044159 Ubiquitin Human genes 0.000 description 7
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 description 7
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 7
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 7
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 7
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 7
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 7
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 7
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 7
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 6
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 6
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 6
- 101150074155 DHFR gene Proteins 0.000 description 5
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 5
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 4
- 108700026226 TATA Box Proteins 0.000 description 4
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 4
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 4
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 4
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 4
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 4
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 4
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 4
- 235000005979 Citrus limon Nutrition 0.000 description 3
- 244000131522 Citrus pyriformis Species 0.000 description 3
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 108020004711 Nucleic Acid Probes Proteins 0.000 description 3
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 3
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 3
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 3
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 3
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 239000002853 nucleic acid probe Substances 0.000 description 3
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 2
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 2
- 241001045988 Neogene Species 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 2
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 2
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 2
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 2
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 2
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 101150091879 neo gene Proteins 0.000 description 2
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 2
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 2
- CABVTRNMFUVUDM-VRHQGPGLSA-N (3S)-3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCSC(=O)C[C@@](O)(CC(O)=O)C)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 CABVTRNMFUVUDM-VRHQGPGLSA-N 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 108010025188 Alcohol oxidase Proteins 0.000 description 1
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 1
- 102100023927 Asparagine synthetase [glutamine-hydrolyzing] Human genes 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000006734 Beta-Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010087504 Beta-Globulins Proteins 0.000 description 1
- 101000583086 Bunodosoma granuliferum Delta-actitoxin-Bgr2b Proteins 0.000 description 1
- -1 CMV Proteins 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 102100022641 Coagulation factor IX Human genes 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 238000007702 DNA assembly Methods 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UPEZCKBFRMILAV-JNEQICEOSA-N Ecdysone Natural products O=C1[C@H]2[C@@](C)([C@@H]3C([C@@]4(O)[C@@](C)([C@H]([C@H]([C@@H](O)CCC(O)(C)C)C)CC4)CC3)=C1)C[C@H](O)[C@H](O)C2 UPEZCKBFRMILAV-JNEQICEOSA-N 0.000 description 1
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 1
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 108091029865 Exogenous DNA Proteins 0.000 description 1
- 108010076282 Factor IX Proteins 0.000 description 1
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 1
- 102000002464 Galactosidases Human genes 0.000 description 1
- 108010093031 Galactosidases Proteins 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000756632 Homo sapiens Actin, cytoplasmic 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000829958 Homo sapiens N-acetyllactosaminide beta-1,6-N-acetylglucosaminyl-transferase Proteins 0.000 description 1
- 102000002265 Human Growth Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- 239000000854 Human Growth Hormone Substances 0.000 description 1
- 241000701109 Human adenovirus 2 Species 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102100023915 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000003996 Interferon-beta Human genes 0.000 description 1
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 108010054278 Lac Repressors Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000713869 Moloney murine leukemia virus Species 0.000 description 1
- 241000714177 Murine leukemia virus Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 102100023315 N-acetyllactosaminide beta-1,6-N-acetylglucosaminyl-transferase Human genes 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000009572 RNA Polymerase II Human genes 0.000 description 1
- 108010009460 RNA Polymerase II Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 108091081062 Repeated sequence (DNA) Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- UPEZCKBFRMILAV-UHFFFAOYSA-N alpha-Ecdysone Natural products C1C(O)C(O)CC2(C)C(CCC3(C(C(C(O)CCC(C)(C)O)C)CCC33O)C)C3=CC(=O)C21 UPEZCKBFRMILAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940126574 aminoglycoside antibiotic Drugs 0.000 description 1
- 239000002647 aminoglycoside antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000012832 cell culture technique Methods 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000002230 centromere Anatomy 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- UPEZCKBFRMILAV-JMZLNJERSA-N ecdysone Chemical compound C1[C@@H](O)[C@@H](O)C[C@]2(C)[C@@H](CC[C@@]3([C@@H]([C@@H]([C@H](O)CCC(C)(C)O)C)CC[C@]33O)C)C3=CC(=O)[C@@H]21 UPEZCKBFRMILAV-JMZLNJERSA-N 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000267 erythroid cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 229960004222 factor ix Drugs 0.000 description 1
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 description 1
- 238000011990 functional testing Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 230000008571 general function Effects 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 102000018146 globin Human genes 0.000 description 1
- 108060003196 globin Proteins 0.000 description 1
- 125000003147 glycosyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 239000013605 shuttle vector Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 230000005026 transcription initiation Effects 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/795—Porphyrin- or corrin-ring-containing peptides
- C07K14/805—Haemoglobins; Myoglobins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2800/00—Nucleic acids vectors
- C12N2800/10—Plasmid DNA
- C12N2800/108—Plasmid DNA episomal vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
- C12N2830/15—Vector systems having a special element relevant for transcription chimeric enhancer/promoter combination
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
- C12N2830/80—Vector systems having a special element relevant for transcription from vertebrates
- C12N2830/85—Vector systems having a special element relevant for transcription from vertebrates mammalian
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2840/00—Vectors comprising a special translation-regulating system
- C12N2840/20—Vectors comprising a special translation-regulating system translation of more than one cistron
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2840/00—Vectors comprising a special translation-regulating system
- C12N2840/44—Vectors comprising a special translation-regulating system being a specific part of the splice mechanism, e.g. donor, acceptor
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
本願明細書で使用する“核酸”には、原核生物、真核生物および合成源に由来するDNA、RNA、mRNA、cDNA、ゲノムDNAおよびそのアナログが含まれる。“コード配列”あるいは選択されたポリペプチドを“符号化する”配列とは、適切な制御核酸(または“調節エレメント”)による制御にある場合、in vivoでポリペプチドへと転写(DNAの場合)および翻訳(mRNAの場合)される核酸分子を意味する。コード配列の区切りは5’(アミノ)末端の開始コドンと3’(カルボキシ)末端の翻訳終止コドンで決定される。コード配列には、ウイルス、原核生物または真核生物のmRNAに由来するcDNA、ウイルスまたは原核生物DNAに由来するゲノムDNA配列、および合成DNA配列が含まれるがこれに限定されない。転写終了配列は、一般的にコード配列の3’側に存在する。
プローブおよび標的配列の長さおよび性質、種々の配列の塩基組成、ハイブリダイゼーション溶液の塩濃度および別の成分の濃度、ハイブリダイゼーション溶液中の遮断剤の存在または不在(例えば、ホルムアミド、デキストランスルファートおよびポリエチレングリコール)、ハイブリダイゼーションの反応温度および時間パラメーターならびに洗浄条件の変化
ハイブリダイゼーション条件の特定の組合せは、以下の従来公知の標準法から選択される(例えば、Sambrook等、前記の通り、またはAusubel等、前記の通り、参照)。
GOIを組み込んだ宿主細胞を選択するために使用する選択マーカーと、GOIのコピー数を増幅させるのに使用する選択マーカーとを区別するために、後者を“増幅性マーカー”と称することを注記する。選択マーカーおよび増幅性マーカーは従来公知であり、本発明で使用する際には、当業者の所望する特定の発現系をもとに安定な形質移入体が分離することができるように選択される。
ネオマイシンホスホトランスフェラーゼ、グルタミンシンセターゼ、ジヒドロフォレートレダクターゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、ヒグロマイシンBホスホトランスフェラーゼ(Gritz等、1983、Gene25:179〜188およびPalmer等、1987、Proc、Natl.Acad.Sci.USA84:1055〜1059参照)、
キサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ(Mulligan等、1981、Proc.Natl.Acad.Sci.USA78:2072〜2076参照)、
ヒスチジノールデヒドロゲナーゼ、トリプトファンシンセターゼβサブユニット、ブラスチシジンSデアミナーゼ、ゼオシン、アスパラギンシンセターゼ、ヒポキサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ、チミジンキナーゼ(Littlefield等、1964、Science145:709〜710参照)、
アデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ、P−グリコプロテイン、アデノシンデアミナーゼ(Kaufman等、1986、Proc.Natl.Acad.Sci.USA83:3136〜3140参照)、
オルニチンデカルボキシラーゼ、およびCAD(カルバミル−P−シンセターゼ、アスパルテートトランスカルバミラーゼ、ジヒドロ−オロターゼ)
本願明細書に記載するベクターの組成および方法に関し、選択マーカーを符号化する任意の好適な核酸を使用してよい。一般的に本願明細書で使用される選択マーカーは容易に入手できる。
ジヒドロフォレートレダクターゼ、P−グリコプロテイン、アデノシンデアミナーゼ、オルニチンデカルボキシラーゼ、およびCAD(カルバミル−P−シンセターゼ、アスパルテートトランスカルバミラーゼ、ジヒドロ−オロターゼ)
本発明の発現ベクターの1つの実施形態では、neoを選択マーカーとして、DHFRを増幅性マーカーとして使用し、GOIの発現を増加させている。DHFRはプリンの生合成に必須の物質であり、外因性プリンが存在しない場合、DHFRが細胞増殖に必要となる。メトトレキサート(MTX)はDHFRの強力な競合阻害剤であり、MTX濃度が高ければDHFRを高レベルで発現する細胞が選択できる。従来のDHFR増幅法であれば、増幅されたDHFR遺伝子とGOIとを染色体に含んで安定に増幅した細胞を分離することができる。DHFRおよびMTXをそれぞれ選択マーカーとして、および遺伝子増幅に使用する場合は、以下を参照のこと(Maniatis等(1992)Molecular Cloning、A Laboratory Manual、Cold Spring Harbor,Cold Spring Harbor、NY)。
“目的遺伝子”(GOI)とは転写発現の増加が求められる任意の核酸配列のことである。GOIは機能性核酸分子(例えばアンチセンスRNA分子のようなRNA)を符号化するかまたは、より一般的に、産生増加が望まれるペプチド、ポリペプチドまたはたんぱく質を符号化する。本発明のベクターを使用して“異種”GOIを発現することができる。本願明細書で使用する用語“異種”とは、異種を起源とする核酸配列またはポリペプチド、あるいは同種起源の原形に実質的な修飾を加えた核酸配列またはポリペプチドを意味する。更に通常、細胞内で発現しない非修飾の核酸配列またはポリペプチドも異種と見なす。本発明のベクターは、1つ以上のGOIを有してよく、GOIは同一のまたは異なる挿入部位に挿入されており、各GOIは、発現を可能にする制御核酸配列と機能的に結合している。従って、本発明のベクターは、種々のたんぱく質(例えば、単量体、二量体および多量体のたんぱく質)の発現に利用することができる。別の実施形態で本発明のベクターは殆ど全ての任意の目的遺伝子の発現に使用でき、特に治療に有効な活性を有するかまたは別の商業用途を示す組換えたんぱく質を符号化する遺伝子の発現に使用できる。本発明のGOIの例には以下のものが挙げられるがこれに限定しない。
エリスロポイエチン、ヒト成長ホルモン、インシュリン、インターフェロンα、βおよび/またはγ、インターロイキン−2のようなインターロイキン類、第VIII因子および第IX因子のような造血因子
(i)Fabフラグメント、VL、VH、CLおよびCH1ドメインを含む一価フラグメント
(ii)F(ab’)2フラグメント、ヒンジ領域でジスルフィド架橋により相同された2つのFabフラグメントを含む二価フラグメント
(iii)VHおよびCH1ドメインを含むFdフラグメント
(iv)抗体のシングルアームのVLおよびCHドメインを含むFvフラグメント
(v)VHドメインから成るdAbフラグメント(Ward等、1989、Nature341:544〜546)
(vi)分離された相補鎖決定領域(CDR)
更に、Fvフラグメントの2つのドメインであるVLおよびVHは別個の遺伝子で符号化されるが、組換え法を利用して合成リンカーでつなぎ合わせることにより、VLおよびVH領域の対は一価の分子を形成する単一たんぱく質として生成される(単鎖Fv(scFv)として公知であり、Bird等、1988、Science242:423〜426;およびHuston等、1988、Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:5879〜5883参照)。このような単鎖抗体も抗体の“抗原結合部位”に含まれる。このような抗体フラグメントは当業者に公知の一般的技術により得られ、更にフラグメントは無傷の抗体と同じ方法で有用性の有無に関して調査される。
制御核酸とは、制御核酸と機能的に結合する遺伝子を発現する際、(i)転写、(ii)翻訳または(iii)翻訳後の修飾に対して制御するか、または作用する任意の配列を意味し、この配列はこのような活性を制御する“調節エレメント”を1つ以上有する。制御核酸、ならびに機能的に結合する遺伝子は、同一生物または同一細胞株に由来する必要はない。制御核酸は哺乳動物またはウイルスを起源とするのが好ましい。
前述の本発明の発現ベクター系の成分、即ち、選択マーカー遺伝子、GOIおよび適切な制御配列を、バックボーンを形成する数種の好適なベクターへ組み込み、発現ベクターおよびコンストラクトの操作を容易にする。更に、微生物での複製を可能にする手段を内包するベクターへ成分を組み込めば、コンストラクトの増殖と分離がかなり容易になる(即ち、シャトルベクターの生成)。用語“ベクター”および“発現ベクター”は本願明細書では同義的に使用され、(1)減弱したプロモーターを有する制御核酸配列と機能的に結合する選択マーカー遺伝子、(2)制御核酸配列と機能的に結合するGOIを挿入する挿入部位を含む任意の核酸を意味し、好ましくは、DNAを意味する。従ってベクターが選択マーカー遺伝子とGOIとを含有する本発明の特殊な態様では、2つの遺伝子が相関していると考えられる。本願明細書において“相関する”ならびに文法的に異なる同様の表現は、2つの独立した核酸、一般的には遺伝子が、同一ベクター内でDNAの連続した領域に存在することを意味する(ベクター上で2つの相関したDNA配列間にDNAが介在してもよい)。
本発明の核酸または発現ベクターを介して遺伝子発現が可能な任意の細胞種を宿主細胞として本発明において使用できる。用語“宿主細胞”とは、組換えDNA技術を利用したり少なくとも1種の外来遺伝子、即ち減弱したプロモーターと機能的に結合した選択マーカー遺伝子を符号化させたりしてコンストラクトしたベクターで形質転換される細胞を意味する。1つの実施形態で宿主細胞は、G418のようなアミノグリコシド系抗生物質に対して感受性があるが、当該細胞における発現に関しカナマイシン耐性遺伝子またはネオマイシン耐性遺伝子を保有してよい。このような細胞の例としてHeLa細胞、CV−1細胞、CHO細胞、3T3細胞、L細胞あまたはTC7細胞が挙げられる。
チャイニーズハムスター卵巣細胞(CHO)(例えば、DG44およびDUXB11;Urlaub等、Som.Cell Molec.Genet.12:555、1986;Haynes等、Nuc.Acid.Res.11:687〜706、1983;Lau等、Mol.Cell.Biol.4:1469〜1475、1984;Methodeds in Enzymology、1991、vol.185、537〜566、Academic Press,Inc.、San Diego、CA)、
チャイニーズハムスター線維芽細胞(例えばR1610)、
ヒト子宮頸癌細胞(例えばHELA)、
サル腎臓細胞(例えばCVIおよびCOS)、
ネズミ線維芽細胞(例えばBALBc/3T3)、
ネズミ骨髄腫細胞(p3x63−Ag3.653;NSO;SP2/0)、
ハムスター腎臓細胞(例えばHAK)、
ネズミL細胞(例えばL−929)、
ヒトリンパ球細胞(例えばRAJI)、
ヒト腎臓細胞(例えば293および293T)、
酵母宿主細胞系(例えばRE35749;US5,620,203;Gellissen等、Antonie Van Leeuwenhoek62:79〜93(1992);Romanosra ,Yeast8:423〜488(1992);Goeddel,Methods in Enzymology 185(1990);GuthrieおよびFink、Methods in Enzymology194(1991)に記載)
一般的に、宿主細胞株は(例えばBD Biosciences、Lexington、KY;Promega、Madison、WI;Life Technologies、Gaithersburg、MDから)購買入手可能であるか、またはAmerican Type Culture Collection(ATCC、Manassas、VA)から入手できる。
トランスフェクション(エレクトロポレーションを含む)、プロトプラスト融合、リン酸カルシウム沈殿、エンベロープDNAによる細胞融合、マイクロインジェクション、および無傷ウイルスの感染
通常よりも高いレベルの一過性の発現さえ、機能試験あるいは目的たんぱく質の産生および回収に有用である。形質転換された細胞を、GOI(例えば、1つの態様では抗体重鎖および/または軽鎖)の産生に適する条件で増殖させ、符号化された目的ポリペプチドを同定するためにアッセイを行う。遺伝子産物を同定および定量するための典型的なアッセイ技術には、酵素結合抗体免疫吸着法(ELISA)、ラジオイムノアッセイ(RIA)または蛍光活性化セルソーター分析(FACS)、免疫組織化学などが含まれる。
ネオマイシンホスホトランスフェラーゼ(neo)選択マーカーを促進させるSV40プロモーターをネズミβグロブリン主要プロモーターで置換し、pAGE2ベクターをpcDNA3.1(+)ベクターバックボーン(Invitrogen#V790−20)からコンストラクトした。(Berg等、1983、Molecular and Cellular Biology 3:1246およびWard等、1990、J.Biol.Chem.265:3030)。更に、ネズミジヒドロフォレートレダクターゼ(DHFR)増幅性マーカー(Nunberg等、1980、Cell 19:355)を含む発現カセットをneoカセットの上流へ挿入した。
アンピシリン耐性遺伝子、マルチクローニング部位とその上流に位置するウイルスプロモーター、マルチクローニング部位に続くポリA配列(発現する目的遺伝子の挿入を可能にする)、f1 ori、DHFR遺伝子と機能的に結合するネズミβグロビン主要プロモーター、それに続く機能的に結合したSV40ポリA配列、ネオマイシン遺伝子と機能的に結合した第二のネズミβグロビン主要プロモーター、それに続く機能的に結合したSV40ポリA配列
挿入領域は、図1A〜1Bにおいて配列に注釈を付けて示している(配列番号:1)。
neo選択マーカー遺伝子の発現を促進させるネズミβグロビンプロモーターを減弱化するために、プロモーター内の転写調節エレメントを取り除いた。pAGE8ベクターをpAGE2ベクターからβグロビンプロモーターのRsaIとMs1Iの制限酵素部位間に存在する199bpを除いてコンストラクトした(図2参照)。pAGE9ベクターは、pAGE2からβグロビンプロモーター内のRsaI制限酵素切断部位のすぐ下流128bpを除いてコンストラクトした。pAGE2のネズミβグロビン主要プロモーター配列(配列番号:2)ならびにpAGE8およびpAGE9の修飾ネズミβグロビン主要プロモーター配列(配列番号S:3および4)を図2に示す。pAGE8ベクターのβグロビンプロモーターにはCCAATとTATAエレメントの両方が欠如しているが、pAGE9ベクターのβグロビンプロモーターではCCAATが欠如しているもののTATAエレメントは残存している。
目的遺伝子(GOI)を符号化するDNA配列(165のアミノ酸を有するたんぱく質)をPCR増幅し、pAGE2、pAGE8およびpAGE9各ベクターのマルチクローニング部位に存在するHindIIIおよびXhoI部位へサブクローニングした。pAGE2、pAGE8およびpAGE9のGOIコンストラクトは、neo発現するβグロビンプロモーターに加えられた修飾を除いて同一の配列を有する。
DHFR活性の欠如したチャイニーズハムスターの卵巣細胞株CHO DG44(Urlaub等、Som.Cell Molec.Genet.12:555、1986)を宿主細胞として使用し、pAGEコンストラクトからGOIを発現させた。CHO DG44細胞を、HAT(100μM ヒポキサンチン、16μM チミジン;Invitrogen#11067−030)を補足した増殖培地(CHO SSFMII;Invitrogen#31033−020)中で浮遊培養して増殖させた。
組換え抗体を発現する第2ベクター系列(pIEと称する)をコンストラクトした。βグロビンプロモーターに修飾を加えたpAGE9ベクターを用いて、抗体を高率で産生する形質移入体のコロニーの数を増加させた。このベクターはpAGE9ベクターバックボーンに、抗体の軽鎖たんぱく質および重鎖たんぱく質の2つの独立した発現カセットを含むように修飾される。代表的なpIEベクターを図4に示す。2種類の任意の目的遺伝子(例えばレセプター複合体のサブユニットまたはその他のたんぱく質)を発現できるようにpIEベクターを修飾することができるということは当業者に明らかである。
pIE−Uγ1z、pIE−Uγ1f、pIE−Uγ1fa、pIE−Uγ4、pIE−SRγ1z、pIE−SRγ1f、pIE−SRγ1fa、pIE−SRγ4
ベクターは、pIEベクターバックボーン、重鎖および軽鎖の発現を促進させるプロモーターならびに重鎖定常領域のイソタイプおよびアロタイプを表している。
ヒトの完全なモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマに由来する抗体重鎖および軽鎖可変領域cDNAを、前述のpIEベクターの重鎖および軽鎖発現カセットへサブクローン化した。pIE抗体コンストラクトを使用し、pAGE9試験GOIコンストラクトの前述のプロトコールに従ってCHO DG44宿主細胞をトランスフェクトした。pIEコンストラクトでGOIをトランスフェクトした結果、高率で抗体を産生するコロニーの割合が増加し、このことはpAGE9試験抗原で得られた結果に類似していた。図5は、典型的なモノクローナル抗体mAb1を様々な発現レベルで発現する96穴中のコロニーの数を抗体発現レベルはELISAで測定して比較したヒストグラムである。96穴中、コロニーの20/322(6%)が1000ng/mgを越える抗体を産生した。
DHFR発現カセットを前述のpAGEおよびpIEベクターへ処理し、ベクターをCHO DG44細胞のトランスフェクトに使用した。増幅を誘導するために、MTXを5nM、50nMまたは500nM補足したCHO SSFMII培地(Invitrogen#31033−020)で細胞を増殖させた。mAb4を生じる特殊な形質移入体はpIEコンストラクトを含む1つの挿入部位を有し、50nM MTXでの増幅前に8pg/細胞/日の産生能を示した。増幅後、産生能は3倍に増加し、コンストラクトのコピー数は7倍に増加した。1つの挿入部位と4pg/細胞/日のmAb産生能を示すmAb1を産生する形質移入体は、5nM、50nMおよび500nM MTXでの逐次的な増幅において、遺伝子のコピー数は8倍に増加し、産生能は12倍に増加した。
Claims (24)
- (1)SEQ ID NO:4に示す配列からなるβグロビン遺伝子プロモーターを含む制御核酸と機能的に結合した選択的マーカー遺伝子と、
(2)制御配列と機能的に結合した目的遺伝子を挿入するための1または複数の挿入部位と、を含むことを特徴とする、発現ベクター。 - 前記目的遺伝子を1または複数含有し、各該遺伝子が1または複数の前記挿入部位で制御核酸と機能的に結合していることを特徴とする、請求項1に記載の発現ベクター。
- 前記選択的マーカー遺伝子は、ネオマイシンホスホトランスフェラーゼであることを特徴とする、請求項1または2に記載の発現ベクター。
- 前記選択的マーカー遺伝子は、グルタミンシンセターゼ、ジヒドロフォラートレダクターゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、ヒグロマイシンBホスホトランスフェラーゼ、キサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ、ヒスチジノールデヒドロゲナーゼ、トリプトファンシンターゼβサブユニット、ブラスチシジンSデアミナーゼ、ゼオシン、アスパラギンシンターゼ、ヒポキサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ、チミジンキナーゼ、アデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ、P−グリコプロテイン、アデノシンデアミナーゼ、オルニチンデカルボキシラーゼ、CAD(カルバモイル−P−シンセターゼ、アスパルテートトランスカルバミラーゼ、ジヒドロオロターゼ)からなる群より選択されることを特徴とする、請求項1から3いずれかに記載の発現ベクター。
- 前記目的遺伝子は、免疫グロブリン重鎖または免疫グロブリン軽鎖をコードすることを特徴とする、請求項2に記載の発現ベクター。
- 制御核酸と機能的に結合する第1の前記目的遺伝子、および制御核酸と機能的に結合する第2の前記目的遺伝子を含むことを特徴とする、請求項2に記載の発現ベクター。
- 制御核酸と機能的に結合する前記第1の目的遺伝子、および制御核酸と機能的に結合する第2の目的遺伝子を含み、第1および第2の前記目的遺伝子が、それぞれ免疫グロブリン重鎖および免疫グロブリン軽鎖をコードすることを特徴とする、請求項2に記載の発現ベクター。
- 前記制御核酸と機能的に結合する増幅性遺伝子をコードする核酸を更に含むことを特徴とする、請求項1から7いずれかに記載の発現ベクター。
- 前記増幅性遺伝子は、ジヒドロフォレートレダクターゼであることを特徴とする、請求項8に記載の発現ベクター。
- 前記増幅性遺伝子は、P−グリコプロテイン、アデノシンデアミナーゼ、オルニチンデカルボキシラーゼ、およびCAD(カルバモイル−P−シンセターゼ、アスパルテートトランスカルバミラーゼ、ジヒドロオロターゼ)からなる群より選択されることを特徴とする、請求項8に記載の発現ベクター。
- 前記目的遺伝子を発現する宿主細胞を選択するために用いる第2の選択マーカーを更に含むことを特徴とする、請求項1から10いずれかに記載の発現ベクター。
- 請求項1から11いずれかに記載の発現ベクターでトランスフェクトした宿主細胞。
- 前記発現ベクターは、前記宿主細胞の染色体へ安定に組み込まれることを特徴とする、請求項12に記載の宿主細胞。
- 哺乳動物細胞であることを特徴とする、請求項12または13に記載の宿主細胞。
- チャイニーズハムスターの卵巣細胞であることを特徴とする、請求項14に記載の宿主細胞。
- 目的遺伝子がコードするポリペプチドの産生方法であって、請求項12から15いずれかに記載の宿主細胞を、前記目的遺伝子が前記ポリペプチドを発現できる好適な条件で培養する工程を含むことを特徴とする、ポリペプチドの産生方法。
- 前記好適な条件は、前記発現ベクターを前記細胞の染色体へ安定的に組み込むことを許容するものであることを特徴とする、請求項16に記載の方法。
- 前記選択マーカー遺伝子は、ネオマイシンホスホトランスフェラーゼであることを特徴とする、請求項16または17に記載の方法。
- 前記好適な条件として、前記選択マーカー遺伝子を発現させるために選択された化合物へ前記細胞を接触させる工程を更に含むことを特徴とする、請求項16から18いずれかに記載の方法。
- 前記発現ベクターが増幅性マーカー遺伝子を更に含み、前記好適な条件として更に該増幅性マーカー遺伝子の発現を選択するための化合物へ前記細胞を接触させる工程を含むことを特徴とする、請求項16から18いずれかに記載の方法。
- 前記増幅性マーカー遺伝子は、ジヒドロフォラートレダクターゼであることを特徴とする、請求項20に記載の方法。
- 前記発現ベクターは、2つの前記目的遺伝子を含むことを特徴とする、請求項16から18いずれかに記載の方法。
- 2つの前記目的遺伝子は、免疫グロブリン重鎖および免疫グロブリン軽鎖をコードすることを特徴とする、請求項22に記載の方法。
- 前記ポリペプチドを回収することを特徴とする、請求項16から18いずれかに記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US50080303P | 2003-09-04 | 2003-09-04 | |
US60/500,803 | 2003-09-04 | ||
PCT/US2004/028954 WO2005024015A1 (en) | 2003-09-04 | 2004-09-03 | Expression vector |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2007503837A JP2007503837A (ja) | 2007-03-01 |
JP4751326B2 true JP4751326B2 (ja) | 2011-08-17 |
Family
ID=34272998
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2006525499A Active JP4751326B2 (ja) | 2003-09-04 | 2004-09-03 | 発現ベクター |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US7674618B2 (ja) |
EP (1) | EP1660654B1 (ja) |
JP (1) | JP4751326B2 (ja) |
AT (1) | ATE532861T1 (ja) |
CA (1) | CA2536807C (ja) |
ES (1) | ES2374526T3 (ja) |
WO (1) | WO2005024015A1 (ja) |
Families Citing this family (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2505058A1 (en) | 2006-03-31 | 2012-10-03 | Medarex, Inc. | Transgenic animals expressing chimeric antibodies for use in preparing human antibodies |
CN101528259B (zh) | 2006-10-02 | 2014-04-09 | 梅达雷克斯有限责任公司 | 结合cxcr4的人类抗体及其用途 |
MX2009005776A (es) | 2006-12-01 | 2009-06-10 | Medarex Inc | Anticuerpos humanos que se enlazan al cd 22 y sus usos. |
RU2456346C2 (ru) * | 2007-05-02 | 2012-07-20 | Мериал Лимитед | Днк-плазмиды, обладающие повышенной экспрессией и стабильностью |
UA100692C2 (ru) * | 2007-05-02 | 2013-01-25 | Мериал Лимитед | Днк-плазмиды, имеющие повышенную экспрессию и стабильность |
SG10201406572TA (en) * | 2007-12-19 | 2014-11-27 | Glycofi Inc | Yeast strains for protein production |
CA2709894C (en) * | 2007-12-21 | 2017-10-24 | Novartis Ag | Mammalian expression vector |
AR072999A1 (es) | 2008-08-11 | 2010-10-06 | Medarex Inc | Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos |
JP4525863B1 (ja) | 2009-06-05 | 2010-08-18 | 東洋紡績株式会社 | 高生産性細胞の樹立のための発現ベクター及び高生産性細胞 |
JP4547643B1 (ja) * | 2009-06-05 | 2010-09-22 | 東洋紡績株式会社 | クローニングに最適化された発現ベクター |
JP4491808B1 (ja) * | 2009-06-05 | 2010-06-30 | 東洋紡績株式会社 | 高発現細胞の効率的な選別に有用な薬剤選択マーカー遺伝子発現カセット |
SG11201401386XA (en) | 2011-11-09 | 2014-10-30 | Bristol Myers Squibb Co | Treatment of hematologic malignancies with an anti-cxcr4 antibody |
US11384140B2 (en) * | 2016-05-11 | 2022-07-12 | Amgen Inc. | Direct selection of cells expressing high levels of heteromeric proteins using glutamine synthetase intragenic complementation vectors |
Family Cites Families (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4713339A (en) | 1983-01-19 | 1987-12-15 | Genentech, Inc. | Polycistronic expression vector construction |
US4876197A (en) | 1983-02-22 | 1989-10-24 | Chiron Corporation | Eukaryotic regulatable transcription |
CA2005311C (en) | 1988-12-13 | 2006-05-30 | Edward A. Hoover | Prototype felv isolates for use in disease models and vaccines |
US5256568A (en) * | 1990-02-12 | 1993-10-26 | Regeneron Phamaceuticals, Inc. | Vectors and transformed most cells for recombinant protein production with reduced expression of selectable markers |
WO1992001800A1 (en) | 1990-07-20 | 1992-02-06 | Chiron Corporation | Method for integrative transformation of yeast using dispersed repetitive elements |
US5648267A (en) * | 1992-11-13 | 1997-07-15 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Impaired dominant selectable marker sequence and intronic insertion strategies for enhancement of expression of gene product and expression vector systems comprising same |
ATE236987T1 (de) | 1992-11-13 | 2003-04-15 | Idec Pharma Corp | Konsensus-kozak-sequenzen zur säugetier- exprimierung |
US5627033A (en) * | 1995-03-28 | 1997-05-06 | Research & Diagnostics Systems, Inc. | Mammalian expression vectors |
US5928941A (en) * | 1996-10-07 | 1999-07-27 | President And Fellows Of Harvard College | Repressor kruppel-like factor |
PT981637E (pt) * | 1997-03-14 | 2005-09-30 | Biogen Idec Inc | Metodo para integrar genes em sitios especificos em celulas de mamifero atraves de recombinacao homologa e vectores para a realizacao do mesmo |
US6444421B1 (en) * | 1997-11-19 | 2002-09-03 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Methods for detecting intermolecular interactions in vivo and in vitro |
AU2400500A (en) | 1999-11-01 | 2001-05-14 | Chiron Corporation | Expression vectors, transfection systems, and method of use thereof |
US20040029229A1 (en) * | 2002-05-20 | 2004-02-12 | Reeves Philip J. | High level protein expression system |
-
2004
- 2004-09-03 CA CA2536807A patent/CA2536807C/en active Active
- 2004-09-03 ES ES04783263T patent/ES2374526T3/es active Active
- 2004-09-03 US US10/934,304 patent/US7674618B2/en active Active
- 2004-09-03 JP JP2006525499A patent/JP4751326B2/ja active Active
- 2004-09-03 AT AT04783263T patent/ATE532861T1/de active
- 2004-09-03 EP EP04783263A patent/EP1660654B1/en active Active
- 2004-09-03 WO PCT/US2004/028954 patent/WO2005024015A1/en active Application Filing
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2005024015A1 (en) | 2005-03-17 |
CA2536807C (en) | 2010-07-13 |
EP1660654A4 (en) | 2007-08-22 |
US7674618B2 (en) | 2010-03-09 |
JP2007503837A (ja) | 2007-03-01 |
EP1660654B1 (en) | 2011-11-09 |
EP1660654A1 (en) | 2006-05-31 |
ATE532861T1 (de) | 2011-11-15 |
CA2536807A1 (en) | 2005-03-17 |
US20050153394A1 (en) | 2005-07-14 |
ES2374526T3 (es) | 2012-02-17 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CA2195303C (en) | Method for selecting high-expressing host cells | |
US20230322956A1 (en) | Compositions and methods for making antibodies based on use of an expression-enhancing locus | |
JP5642549B2 (ja) | 複数の核酸からのタンパク質発現 | |
US20230130799A1 (en) | Compositions and methods for making antibodies based on use of expression-enhancing loci | |
JP4751326B2 (ja) | 発現ベクター | |
CN101688222A (zh) | 启动子 | |
KR20100065332A (ko) | 제조 방법 | |
JP6087148B2 (ja) | タンパク質の生産方法 | |
EP2938728B1 (en) | Artificial introns | |
JP2002526071A (ja) | トランスフェクションした細胞中の組換えタンパク質発現増大のためのホットスポットを含む発現ベクター | |
US9243053B2 (en) | Heterologous intron within an immunoglobulin domain | |
JP5073653B2 (ja) | 高レベルのタンパク質を産生する発現ベクター及び方法 | |
JP5666776B2 (ja) | 齧歯動物細胞におけるタンパク質発現 | |
US20140248665A1 (en) | Novel intron sequences | |
EP2938726B1 (en) | Heterologous intron within a signal peptide | |
US20190031752A1 (en) | Method for Producing Antibodies | |
TW202102669A (zh) | 含有新穎選擇標記的細胞株及其用於蛋白製造的用途 | |
US20190309323A1 (en) | Promoter with an enriched cytosine-guanine dinucleotide region, vectors, cellular lines, method for producing recombinant protein | |
EP2167540B1 (en) | Heavy chain mutant leading to improved immunoglobulin production |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20070802 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20100608 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20100907 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20100908 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20110517 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20110520 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 4751326 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140527 Year of fee payment: 3 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313111 |
|
R360 | Written notification for declining of transfer of rights |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R360 |
|
R360 | Written notification for declining of transfer of rights |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R360 |
|
R371 | Transfer withdrawn |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R371 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313111 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313111 |
|
R360 | Written notification for declining of transfer of rights |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R360 |
|
R360 | Written notification for declining of transfer of rights |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R360 |
|
R371 | Transfer withdrawn |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R371 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313111 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |