JP2003524577A

JP2003524577A - ５α−還元酵素活性を調節するための方法及び組成物

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Publication number: JP2003524577A
Application number: JP2000518662A
Authority: JP
Inventors: リャオ，シューツン; ハイパッカ，リチャード・エイ
Original assignee: アーチ・デヴェロップメント・コーポレイション
Priority date: 1997-10-31
Filing date: 1998-10-30
Publication date: 2003-08-19
Anticipated expiration: 2018-10-30
Also published as: AU1289899A; EP1027045A1; KR20010031501A; WO1999022728A1; US6576660B1; JP4738592B2; US20030144346A1; EP1027045A4

Abstract

(57)【要約】５α-還元酵素を阻害する化合物を提供する。本発明の化合物は前立腺癌、乳癌、肥満、皮膚疾患及び脱毛症を治療するために使用される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】技術分野本発明は、一般に、5α-還元酵素のアイソザイムを含むステロイド-還元酵素
の活性を調整することによって、男性ホルモン及び他のステロイドホルモンの作
用及び機能を調節する化合物と、組成物と、方法とに関する。さらに詳細には、
本発明は、動物、ヒト、植物もしくは微生物の細胞もしくは器官において男性ホ
ルモンもしくは他のステロイドホルモンによって調整される、又は男性ホルモン
もしくは他のステロイドホルモンの異常な作用によって生じる過程を調節又は疾
患を治療するための本発明の化合物の用途に関する。本発明は、5α-還元酵素ア
イソザイム阻害剤として及び治療剤としての天然及び合成フラボノイド、カテコ
ール、クルクミン関連物質、キノン、カテキン及び脂肪酸並びにそれらの類似物
又は誘導体の用途に関する。本発明の化合物は市販目的の具体的な製品の望まし
い製造を促進又は調整する際にも使用することができる。

【０００２】前立腺及び皮膚などの男性ホルモン感受性器官の一部では、テストステロン（
T）は5α-還元酵素によってより活性の強い代謝物である5α-ジヒドロテストス
テロン（DHT）に変換される（アンダーソン（Anderson）及びリアオ（Liao）、1
968；ブルチョフスキー（Bruchovsky）及びウィルソン（Wilson）、1968）。5α
-還元酵素の他の基質も、ある種の特性を有する場合もある還元型の生成物に変
換される。5α-還元酵素の阻害は、良性前立腺肥大、乳癌及び前立腺癌、皮膚疾
患、脂漏症、一般的な禿頭症、男性型多毛症及び化膿性汗腺炎などの男性ホルモ
ン依存性疾患の治療法を開発するための独自の方法となる。種々の化合物が5α-
還元酵素活性を阻害すると報告されている（リアング（Liang）及びリアオ、199
2；ヒルシュ（Hirsh）ら、1993；ラッセル及びウィルソン、1994；リアオ及びヒ
ーパッカ（Hiipakka）、1995）。5α-還元酵素阻害剤であるフィナステライド（
プロスカー（Proscar）社）は血清及び前立腺のDHT濃度を低下し、前立腺容積を
低下し、一部の患者では尿量を増加する（ストナー（Stoner E.）フィナステラ
イド研究グループ、1992）。γ-リノレン酸（リアング及びリアオ、1992）及び
カテキン-3-没食子酸塩（リアオ及びヒーパッカ（Hiipakka）、1995）などのあ
る種の脂肪族不飽和脂肪酸は、インビトロにおいてラット及びヒトの肝臓及び前
立腺の5α-還元酵素活性を阻害することができる。

【０００３】 5α-還元酵素は、ハムスターの皮脂腺（タカヤス及びアダチ、1972）及びヒト
毛嚢（ランダル（Randall）、1994）を含む多数の器官に見られる（ラッセル及
びウィルソン、1994；ヒーパッカら、1993）。2種の5α-還元酵素アイソザイム
がラット及びヒトにおいて同定されている（ラッセル及びウィルソン、1994）。
1型アイソザイムは肝臓、腎臓、脳及び肺などのラット組織に主に存在するが、2
型酵素はラット精巣及び精巣上体により豊富に存在する。両アイソザイムは新生
児の皮膚に見られるが、1型アイソザイムは思春期以降の皮膚に発現される主要
な形態である。1型アイソザイムは脱毛症が進行中の頭皮にも発現されている。2
型アイソザイムが皮膚及び頭髪の成長に独自の役割を果たしているという可能性
は排除できない。4-アザステロイドであるフィナステライドは5α-還元酵素の競
合阻害剤で、アイソザイム1に対するよりもアイソザイム2に対して30倍親和性が
高い（ラッセル及びウィルソン、1994）。一方、緑茶カテキン、エピカテキン-3
-没食子酸塩及びエピガロカテキン-3-没食子酸塩は1型酵素のより効果的な阻害
剤であり、γ-リノレン酸は両酵素を同程度に阻害する（リアオ及びヒーパッカ
、1995）。

【０００４】男性ホルモン性脱毛症のサルモデルであるベニガオザルでは、経口投与された
フィナステライドは前頭部の禿頭症を防止する（ディアニ（Diani）ら、1992）
。肋骨脊柱角の各側に1つずつある器官であるハムスターの一対の側腹部器官は
男性ホルモン刺激に感受性が高い。γ-リノレン酸の局所適用は、対側的な側腹
部器官に対する全身作用を示すことなく、処理後のハムスターの側腹部器官の男
性ホルモン依存的な発育のみを抑制し、この影響は5α-還元酵素の局所的な阻害
作用による可能性が非常に高い。

【０００５】医学分野に周知な男性ホルモンの用途には、例えば、性機能低下症及び貧血の
治療が含まれる。成績を向上させるための運動選手の男性ホルモンの乱用はよく
知られている。男性ホルモンはまた、良性前立腺肥大（BPH）、前立腺癌、禿頭
症、座瘡、肥満並びに血液及び器官中の望ましくない脂質及びステロイドプロフ
ィールの形成を促進することが知られている。米国の年齢50歳以上の男性の約70
%はBPHの病理学的徴候を有する。前立腺癌は米国における男性の癌による死因の
第2位である。男性型禿頭症は遺伝的に罹患しやすい男性では十代でも発症する
ことがあり、それは30歳代の白人男性の30%、40歳代の白人男性の40%及び50歳代
の白人男性の50%に存在すると推定されている。座瘡は医師によって治療される
最も一般的な皮膚疾患である。女性では、男性型多毛症は男性ホルモン過剰の指
標の1つである。卵巣及び副腎は女性の主要な男性ホルモン源である。

【０００６】男性では、血液中を循環する主要な男性ホルモンはテストステロンである。血
液中のテストステロンの約98%は血清タンパク質と結合しており（性ステロイド
結合グロブリンに対して高い親和性で結合し、アルブミンに対して低い親和性で
結合する）、わずか1〜2%が遊離型で存在する。結合が容易に解離可能であるア
ルブミン結合テストステロン及び遊離型は生物利用可能であると考えられ、総テ
ストステロンの約50%を占める。テストステロンは見かけ上拡散によって標的細
胞に侵入する。前立腺、精嚢、皮膚及びいくつかの他の標的器官では、テストス
テロンはNADPH-依存性5α-還元酵素によってより活性な代謝物である5α-DHTに
変換され、5α-DHTは次いで標的器官の男性ホルモン受容体（AR）に結合する。5
α-DHT-受容体複合体はゲノムの特定の部分と相互作用して、遺伝子の活性を調
節する（リアオら、1989）。テストステロンは同一のARに結合すると思われるが
、5α-DHTより親和性が低い。5α-還元酵素活性が低い筋肉及び精巣などの組織
では、テストステロンがより活性の強い男性ホルモンである場合もある。

【０００７】男性ホルモン応答性が異なる組織におけるテストステロンと5α-DHT活性の差
は、5α-還元酵素欠損症患者における所見によってさらに示唆されている。5α-
還元酵素欠損症の男性は女性様の外生殖器を有して誕生する。彼らが思春期に達
したとき、テストステロンの血漿中濃度は正常かわずかに高い。彼らの筋肉の発
育は加速し、陰茎は肥大し、声は低くなり、女性に対する性欲が発生する。しか
し、彼らの前立腺は依然として触知可能でなく、彼らは体毛が少なく、座瘡及び
禿頭症を発症しない。

【０００８】 5α-還元酵素欠損症患者における所見は、5α-還元酵素の阻害剤は前立腺癌、
BPH、座瘡、禿頭症及び女性の男性型多毛症の治療に有用であると思われること
を示唆している。臨床観察及び動物実験は、精子形成、性欲の維持、性行為及び
性腺刺激ホルモン分泌のフィードバック阻害にはテストステロンの5α-DHTへの
変換が必要ないことを示している。これは、テストステロン及び5α-DHT両者の
作用を排除する他のホルモン療法とは対照的である。

【０００９】 5α-還元酵素阻害剤による男性ホルモン依存性皮膚疾患及び前立腺疾患の治療
は、現在利用されているホルモン療法より副作用が少ないことが期待されると思
われる。これらには、去勢、エストロゲン療法、高用量のルプロライド（Luprol
ide）などの超活性生殖腺刺激ホルモン放出ホルモン並びにフルタミド、酢酸シ
プロテロン及びスピロノラクトンなどの、テストステロン及び5α-DHTのAR結合
を阻害する競合的抗男性ホルモンの使用が含まれる。競合的抗男性ホルモンの長
期効果も、生殖腺刺激ホルモン分泌の男性ホルモンによるフィードバック阻害の
阻止によって無効にされる。テストステロンは濃度がより高いと抗男性ホルモン
の作用より勝ることになる。

【００１０】過剰量の5α-DHTは、BPH、座瘡、男性型禿頭症及び女性の特発性男性型多毛症
を含むある種の男性ホルモン依存性病理学的状態に適応される。5α-還元酵素活
性は、禿頭症が進行している男性の頭皮の毛嚢では禿頭症が進行していない男性
より高いと報告されていることが示されている。

【００１１】 5α-還元酵素阻害剤による男性ホルモン依存性皮膚疾患及び前立腺疾患の治療
は、全ての男性ホルモン作用を無差別に阻害するホルモン療法より副作用が少な
いので、異なる種類の5α-還元酵素阻害剤を提供することが望ましい。

【００１２】本発明は、一般に、5α-還元酵素活性を調整することにより標的器官及び細胞
の男性ホルモン活性を抑制するためのある種の化合物の利用に関する。ある種の
態様では、本発明の化合物は、標的細胞における活性な男性ホルモンの形成及び
利用を阻害することによって男性ホルモン活性を抑制するために使用される。結
果として、本発明は、前立腺肥大、前立腺癌、男性型多毛症、座瘡、男性型禿頭
症、脂漏症及び男性ホルモンの活性亢進に関連する他の疾患を含むが、それらに
限定されない多種多様な状態の治療に有用である。本発明の化合物のいくつかは
体重を効果的に低下することが報告されており、いくつかの症例では前立腺及び
他の器官などの男性ホルモン依存性器官重量を低下することが報告されている。
本発明の化合物の有効性は、血管形成、細胞-細胞相互作用に関与する他の機序
に対する作用並びに種々の成分と器官及び細胞との相互作用に依存する場合もあ
る。

【００１３】本発明を実施する際に有用な化合物には飽和及び不飽和脂肪酸、天然及び合成
類似物、及びこれらの脂肪酸から形成することができる誘導体並びにこれらの脂
肪酸の代謝物及び酸化生成物が含まれる。これらの脂肪酸及び他の脂肪酸並びに
それらの誘導体の使用も考慮される。カテキン化合物、特に没食子酸エピカテキ
ン（ECG）及び没食子酸エピガロカテキン（EGCG）に構造が類似するカテキンも
有用である。EGCGは、5α-還元酵素が介するいくつかの過程を調整する際に驚く
べき活性を有することが見いだされている没食子酸エピカテキン分子に追加のヒ
ドロキシル基を有する。変更性ECG分子にこのような追加のOH基を有するEGCG誘
導体は、ヌードマウスにおいて体重低下を誘発する際に、特に包皮腺、前立腺腹
側部、前立腺側背部、凝固腺、精嚢、ヒト前立腺癌及び乳癌などの男性ホルモン
感受性器官のサイズを低下する際に活性であることが示されている。

【００１４】脂肪酸化合物との類似性によって、ある種の活性な没食子酸カテキンは容易に
標的細胞に侵入することができない。しかし、阻害剤化合物のヒドロキシル基の
エステル化はこれらの化合物が標的細胞に侵入する能力を増強するはずである。
一旦細胞内に侵入すると、エステルはエステラーゼによって容易に5α-還元酵素
を阻害することができるアルコールに加水分解されると思われる（ウィリアムズ
、1995）。

【００１５】本発明のさらに詳細な態様では、本発明者らは、ある種のカテキン、特にEGCG
は総体重の低下と前立腺重量の低下を区別してそれらに影響を与える体重低下を
促進するために投与することができることを発見した。具体的な実施例では、総
体重の低下に対する割合については、前立腺重量の低下は割合的には3倍よりも
多いことが示された。体重及び器官重量の低下は、体重及び器官重量の増加を制
御する経路における共通の段階をEGCGが妨害することによると思われる。EGCG及
び関連化合物はある種の脂質合成及び蓄積を調整する（おそらくタンパク質を含
有する）受容体高分子と相互作用し、それを妨害することができる。脂質は遺伝
子発現、細胞の発生及び分化並びに器官の成長を調整することができる。細胞及
び器官における脂質代謝のある種の妨害は器官、特に、前立腺、皮脂性器官、包
皮性器官及び他の分泌器官の成長を制御することができる。ある種の適用では、
これらの器官の良性又は異常な成長又は癌がカテキン関連化合物の投与によって
治療され得る又は予防することさえできることが期待される。

【００１６】カテキン化合物はヒト前立腺癌及び乳癌の細胞増殖を停止又は低下することが
実証されている。カテキン化合物の有効性はこれらの化合物が実験動物に投与さ
れる方法に依存することが示された。腹腔内適用は経口投与よりさらにより有効
であった。前立腺などの器官への直接適用が非常に有効であることが期待される
。驚くべきことに、EGCGは動物モデルにおいてヒト前立腺癌及び乳癌を抑制する
際にまたそれらのサイズを低下する際にも有効であった。その効果はEGCGで例示
したが、構造的に類似しているカテキン化合物、特にECGと比較したとき、少な
くとも1つの追加のヒドロキシル基を有する点でEGCGに構造的に類似しているカ
テキン化合物も有効である。従って、8つのヒドロキシル基を含有するEGCG種は
、7つのヒドロキシル基を含有するECGより体重を低下する際に有意により有効で
ある。この一般構造の化合物はヒト前立腺癌の化学的予防及び化学療法に特に有
効であることが期待される。EGCGの構造の一部に類似する構造部分を有する化合
物も有効であることが期待される。

【００１７】化合物は局所適用又は全身適用によって抗男性ホルモン剤として使用すること
ができる。この目的のための製剤は担体、防止剤、（ビタミンC又はE及び種々の
カテキン及びポリフェノールなどの）抗酸化剤並びに他の薬学的及び薬理学的物
質を含んでもよい。このような化合物は、標的部位に送達される分子認識に関与
している送達系（経口、局所適用、注射又は植え込み）に使用することができる
ことも期待される。このような送達系は、特に、リポソーム技法又は免疫学的装
置に関係してもよい。

【００１８】受容体及び高分子の産生又は細胞作用を調整することができる天然又は合成化
合物は、脂質合成、体重及び/又は男性ホルモンの機能に関連する、肥満、BPH、
前立腺癌、皮膚疾患、禿頭症、乳癌及び男性型多毛症などの異常状態の治療に有
用である。

【００１９】種々の癌に対する化合物の有効性を実証するために動物モデルを使用すること
ができる。例えば、シオノギ（Shionogi）腫瘍及び他の腫瘍は雄ラットで検討す
ることができる。ヒト乳癌及び前立腺癌の細胞増殖はヌードマウスで検討するこ
とができる。又は、発癌性物質によって誘発される齧歯類の乳癌及びトランスジ
ェニックマウスにおいて誘発される他の癌又はラットにおけるダニング（Dunnin
g）腫瘍も同様にEGCG及び関連化合物による化学療法について分析することがで
きる。

【００２０】本発明に開示する化合物、又は天然では本発明の化合物の1つ又は複数を含有
する治療的に有効な量の薬学的組成物を、ある場合には他の治療剤及び担体と併
用して使用すること又は天然もしくは合成産物の状態で使用することは種々の疾
患の治療に適当である。これらの疾患には、例えば、男性型禿頭症、女性の男性
型多毛症、皮膚疾患、BPH、前立腺癌、乳癌、皮膚癌及び他の器官の癌のように
男性ホルモンの過剰な活性が示されている状態が含まれるが、それらに限定され
ない。

【００２１】本発明はまた新規化合物に関する。本発明の化合物は式、

【化６】（式中、xは-NHCH₂CH₂-又はCH=CH-であり、 R₁、R₂及びR₃は各々-H、-OH又はOCH₃であってもよいが、ただしR₁、R₂及びR₃の
うち1つだけは-Hであってよく、 R₄、R₅及びR₆は各々-H、-OH、-OCH₃又はN（CH₃）₂であってもよいが、ただしR₄
、R₅及びR₆のうち1つだけは-Hであってもよく、 Nは0又は1である）及び式、

【化７】（式中、Rは、

【化８】である）を有する。

【００２２】本明細書に開示し、主張する全ての組成物及び方法は本願の開示内容に鑑みて
不当に実験することなく実施することができる。本発明の組成物及び方法は好ま
しい実施態様に関して記載されているが、本発明の概念、精神及び範囲から逸脱
することなく本明細書に記載されている組成物、方法及び方法のステップ又はス
テップの順序に変更を加えることができることは当業者にあきらかである。さら
に詳細には、化学的且つ生理学的に関連があるある種の物質は本明細書に記載さ
れている物質と交換することができるが、同じ又は同様の結果が得られると思わ
れることは明らかである。当業者に明らかな全てのこのような同様の交換及び改
良は添付の請求の範囲によって規定される本発明の精神、範囲及び概念の範囲内
であると考えられる。

【００２３】 I.5α-還元酵素活性本発明は、本明細書に開示する化合物の1種などの5α-還元酵素阻害剤の有効
濃度に細胞を暴露するステップを含む、5α-還元酵素を阻害する方法に関する。
異常な男性ホルモン作用を遮断するためにこのような阻害剤を使用することは、
他の抗癌剤、化学療法、切除、放射線療法等と併用して癌を治療する働きをする
と考えられている。本明細書の化合物は、5α-還元酵素阻害剤として作用する以
外に、抗腫瘍作用に至る又は前立腺又は他の器官の異常な成長を抑制することが
できる他の効果を有し得る。

【００２４】ほ乳類では、5α-還元酵素は、小胞体膜及び隣接する核膜を含む細胞内の膜と
非常に密接に関係がある。活性な5α-還元酵素を溶解化し、精製する試みはほと
んど成功していない。従って、5α-還元酵素活性のアッセイは、NADPHの存在下
において全細胞又はミクロソーム及び核調製物によるテストステロンの5α-DHT
への変換速度を測定することによって実施される（酵素アッセイ）。又は、5α-
還元酵素の活性は、還元酵素との結合に対してテストステロンと強力に競合する
、[³H]-4-MA（[³H]4-MA-結合アッセイ）などの強力な放射性阻害剤のNADPH-依存
性非共有結合を追跡することによって信頼性よくアッセイすることができる。異
なる器官又は動物由来のミクロソーム調製物を比較のために使用するとき、この
2種のアッセイの結果は非常によく相関する。

【００２５】 A.5α-還元酵素の[³H]4-MA結合アッセイ簡単に説明すると、最終容量0.15 mlの結合アッセイ溶液はミクロソーム（2〜
20μgのタンパク質）、0.07μCiの[³H]4-MA、0.1 mM-NADPH、1 mM-ジチオスレイ
トール及び50 mM-リン酸カリウム、pH 7.0を含有し、示した量の脂質又は阻害剤
調製物を含有又は含有しない。脂質はエタノールに溶解して1〜5μlの容量を添
加する。対照の試験管には同量のエタノールを添加する。0℃において1時間イン
キュベーション後、ワットマン（Whatman）ガラス線維フィルターでミクロソー
ムを回収し、0.01%CHAPSを含有する20 mMリン酸カリウム、pH 7.0の10 mlで洗浄
して未結合の[³H]4-MAを除去して、ミクロソームに結合した[³H]4-MAを求める。

【００２６】 B.ミクロソーム5α-還元酵素の酵素活性のアッセイ最終容量0.15 mlの標準的な反応混合物はミクロソーム、1μCiの[³H]テストス
テロン、0.5〜3.0 μMの非放射性テストステロン、0.1 mM-NADPH、1 mM-ジチオ
スレイトール及び50 mM-リン酸カリウム、pH 7.0を含有し、示した量の脂質又は
阻害剤調製物を含有又は含有しない。反応はミクロソームを添加することによっ
て開始され、インキュベーションは37℃において15分間実施される。ステロイド
を抽出し、薄層クロマトグラフィーによって分離する。放射性ステロイドは蛍光
写真によって位置決めされ、存在する放射能量はシンチレーション計数によって
求められる。[³H]テストステロンの[³H]5α-DHTへの変換程度を分析することに
よって5α-還元酵素活性を測定した。

【００２７】 C.5α-還元酵素活性源ヒト肝臓及び雌のスプラーグ-ドーリー（Sprague-Dawley）ラット成獣の肝臓
の緩衝0.32 Mショ糖ホモジネートから4℃において分画遠心分離法によってミク
ロソームを調製し、5α-還元酵素活性のアッセイに使用する。ポリエチレンエー
テルW-1をルブロルックス（Lubrolx）-WXと交換する以外は、いくつかの実験に
おいて、ミクロソームは0.1%ポリオキシエチレンエーテルW-1で溶解する。

【００２８】特定の種類の5α-還元酵素アイソザイムを発現するように遺伝的に工作した細
胞を5α-還元酵素活性源として使用することもできる。5α-還元酵素を含有する
無傷の細胞、それらのミクロソーム又は核調製物を5α-還元酵素阻害剤をスクリ
ーニングするために使用することもできる。

【００２９】 II.前立腺癌及び乳癌本発明の化合物を乳癌又は前立腺癌を治療するために使用することができる。
前立腺癌及び乳癌に対するこのような化合物の有効性は、このような癌組織から
誘導される単離細胞系統又はこれらの形態の癌を提示する動物において求めるこ
とができる。例えば、ヒト前立腺癌PC-3細胞を培地で増殖する。約100万個の細
胞を雄のヌードマウスに注射して、腫瘍の増殖を追跡する。2週間以内に、腫瘍
は約100 mm³まで増殖する。3匹の腫瘍形成マウスに毎日試験化合物を注射する。

【００３０】 III.器官重量及び体重の低下本発明の化合物は器官重量及び体重を低下するために使用することができる。
従って、本発明の化合物は肥満を治療する際の用途を有する。本発明の化合物の
有効性は周知の動物モデルを使用して求めることができる。

【００３１】例えば、雄のスプラーグ-ドーリー（Sprague-Dawley）（体重180g±10g）を使
用する。化合物を1群のラットに毎日7日間腹腔内注射する。対照群のラットには
30%エタノールを0.1 ml投与する。体重及び器官重量を求める。

【００３２】 IV.皮膚疾患本発明者らは、局所的には活性であり、全身的には不活性であると思われる5
α-還元酵素阻害剤を探索した。このような薬剤は男性ホルモン依存性の皮膚疾
患の治療に理想的であると思われる。この検討では、ハムスターの側腹部器官に
γ-LAを局所投与することによる男性ホルモン作用の阻害を検討する。ハムスタ
ーの側腹部器官は、皮膚作用又は皮脂腺に対する本発明の化合物の影響の評価に
特に有用である（フロスト（Frost）及びゴメス（Gomez）、1972）。肋骨脊柱角
の角側に1つずつある一対の側腹部器官は男性ホルモン刺激に非常に感受性が強
い。側腹部器官において男性ホルモン感受性組織には、真皮メラニン形成細胞、
皮脂腺及び毛嚢が含まれる（ハミルトン及びモンタグナ（Montagna）、1950）。
この動物モデルは、男性ホルモン化合物（ハミルトン及びモンタグナ、1950；フ
ロストら、1973）及び抗男性ホルモン化合物（ボイクト（Voigt）及びフシア（H
sia）、1973；ワイスマン（Weissmann）ら、1985；チャクラバーティ（Chakraba
rty）ら、1980）を試験するために広範に使用されている。この動物モデルの独
自の利点は、試験化合物を側腹部器官の一方だけに局所的に適用して、影響を両
方の器官について観察することができることである。試験化合物が局所作用しか
持たない場合には、処理された側腹部器官だけが影響される。しかし、作用が全
身的である場合には、両方の器官が影響される。

【００３３】 4週齢で去勢された思春期前の雄シリアン（Syrian）ゴールデンハムスター
をハーランスプラーグ-ドーリー社（Harlan Sprague-Dawley Co.）（ウィスコン
シン州マディソン）から入手する。各動物は齧歯類用餌及び水を随時与え、12時
間の明/12時間の暗の明暗サイクルで個別にプラスチックケージで飼育する。

【００３４】去勢の1〜2週間後に、各動物の背面下部の体毛を電動式バリカンで刈り、軽く
剃って側腹部器官を露出する。ピペットマン（Pipetteman）及びポリエチレン使
い捨てチップを使用して1日1回右側の側腹部に処理溶液（5μl）を局所的に適用
する。特に明記しない限り、左側の側腹部器官は処理しない。処理溶液は、（a
）エタノール単独（基剤であり、対照である）、又は（b）試験化合物のどちら
かを含有する。各処理の前に、アルコールパッドで側腹部器官を拭いて残存する
化合物を除去する。各処理の終了時に（17〜25日め）、CO₂ガスによる窒息又は
過剰量のフェノバルビタール（64.8 mg/ml/動物）の腹腔内注射のどちらかで動
物を犠牲にした。色素性斑点及び皮脂腺の成長に対するこれらの処理の影響を判
定するために、処理側及び未処理側の側腹部器官を評価する。処理前後に各動物
の体重を記録する。

【００３５】動物の処理 4週齢の雄ハムスターを去勢し、性徴を確実に最大に刺激するためにより長
い明時間（16時間の明/8時間の暗の明暗サイクル）で飼育する（ルダーシュミッ
ト（Luderschmidt）ら、1984）。左右の側腹部器官を毎日0.5μg又は1μgのテス
トステロンを含有する5μlのエタノールで局所的に処理した。動物を4〜5匹のハ
ムスターの群に分ける。右側の側腹部器官を基剤（エタノール）単独又は試験化
合物（1又は2 mg）を含有する5μlの溶液で毎日18日間処理する。全ての動物の
左側の側腹部器官には同じ容量の基剤を投与する。

【００３６】デジタル表示式ノギス（ディジマティック（Digimatic）、ミツトヨ社（Mitut
oyoCorp.）、日本）を使用して、色素性スポット（色素性斑点）の長軸及び短軸
の長さを測定する。積（長軸×短軸、mm²）を表面積の指標として使用する（ウ
エスト（Wuest）及びラッキー（Lucky）、1989）。

【００３７】試験化合物で処理した側腹部器官は盛り上がり、触診可能となる。盛り上がっ
た塊の長軸及び短軸の長さをノギスで測定する。長軸×短軸の積（mm²）を、皮
脂腺の容積と相関する皮脂腺の面積の指標として使用した。

【００３８】 V.禿頭症頭髪損失及び成長に対する化合物の局所的な影響ベニガオザルはヒトの男性ホルモン性脱毛症に似たパターンの禿頭症を発症す
る。禿頭症が進行する過程は思春期直後に始まる（約4歳）。これは雄及び雌の
動物のほぼ100%で生じ、男性ホルモン依存性である。これはヒトの男性ホルモン
性脱毛症の有用な動物モデルであり、頭髪損失に対するポリ不飽和脂肪酸の影響
を実証する際に有用であると考えられている。以下は試験プロトコールを記載す
る。

【００３９】雄のベニガオザル（4歳）を3〜5匹の動物群に分ける。前頭部及び頭頂部を
含む頭皮の規定領域に、例えば入れ墨で印をする。印をした領域の頭髪を剃る。
異なる用量及び組み合わせの試験化合物溶液を1日に1回又は2回剃った領域に均
等に適用する。対照動物には同じ容量の溶媒（例えば、エタノールもしくは他の
有機溶媒、又はクリーム）を適用する。頭皮の同じ領域を4〜6週間ごとに剃って
、剃った頭髪の重量を求める。処理は6ヶ月〜2年継続することができる。この動
物において禿頭症を予防することが周知の5α-還元酵素阻害剤である4-MA（17-N
,N-ジエチルカルバモイル-4-メチル-4-アザ-5-アンドロスタン-3-オン）を陽性
対照として加える。処理前及び終了時に頭皮の生検試料（4mmパンチ）を採取す
る。5α-還元酵素活性について試料を分析し、脱毛症の徴候について組織学的に
調査する。

【００４０】 VI.ヒトモデルにおける皮脂産生に対する化合物の影響先ず、いくつかの脂肪酸及びカテキンの局所的な抗男性ホルモン作用をハムス
ター側腹部器官アッセイ又はラットアッセイにおいて評価する。抗男性ホルモン
化合物の有効性及びヒトへの使用の可能性をさらに確認するために、男性被験者
で試験を実施する。ヒトへの治療に理想的な化合物は、特に若い男性を含む症例
において、局所的には活性であるが、抗男性ホルモンの全身作用を示さない化合
物である。

【００４１】前頭部の皮脂産生の判定前頭部領域の皮脂産生を試験し、分析するために男性志願者を使用する。前頭
部を石鹸で2回十分に洗浄し、70%イソプロピルアルコールで2回すすぐ。各測定
において、56mm²の面積を覆う皮脂計測テーププローブ（7 mm×8 mm）を用いて3
0〜60分後に皮脂の産生を測定する。眉とヘアーラインとの間の額の左側又は右
側の真ん中に位置する4 cm四方の面積（16 cm²）内で10回の測定を実施する。

【００４２】皮脂計測計は、テープを額に30秒間配置する前後のテープの透明度の差を検出
し、0〜300（又はそれ以上）の間の任意の数の差（S-値）を表す。男性の額に蓄
積する皮脂のS-値は、通常、200〜300である。手の皮膚表面は、通常、非常に低
い数（5〜20）を示す。洗浄直後の額のS-値は5より小さい。男性では、S-値は洗
浄後30分以内に約50まで増加し、45分〜55分後には100〜200に達する。

【００４３】皮脂産生速度を求めるために、両側の比較領域の左側及び右側額領域を交互に
、各時間に測定する。各側について10回の測定（すなわち、両側では20回の測定
）には約15〜20分かかり、皮脂値は30〜200の範囲であると思われる。S-値は額
の異なる領域ではかなり異なり、天候、食事及び生理学的条件を含む環境条件に
よって影響されると思われる。しかし、左側の額の総S-値（10回の測定の合計）
及び右側の額の総S-値の比は一定である。従って、左側の額に適用されてL/R比
を1.1より低い値に低下する化合物は、皮脂産生を抑制する局所的に活性な薬剤
であると考えられる。

【００４４】 VII.薬学的組成物本発明の水性組成物は、薬学的に許容可能な水性媒体に溶解又は分散された有
効量の5α-還元酵素阻害剤を含む。「薬学的に許容可能な」という句は、ヒトに
投与したときアレルギー反応又は同様の好ましくない反応を生じない分子的要素
及び組成物をいう。

【００４５】活性成分としてこのような阻害性化合物を含有する水性組成物製剤は当技術上
十分に理解されている。典型的には、このような組成物は溶液又は懸濁液として
注射用として製造される。注射前に溶液又は懸濁液にするのに好適な固形剤形も
製造することができる。製剤は乳化されてもよい。

【００４６】本明細書に開示する薬学的組成物は、例えば、不活性な希釈剤もしくは吸収可
能な食用担体と共に経口投与されてもよく、又はそれらは硬殻もしくは軟殻ゼラ
チンカプセルに封入されてもよく、又は錠剤に打錠されてもよく、又はそれらは
経皮及び浸透圧用具、注射用用具及び植え込み用用具などの放出制御用に製剤化
されてもよく、又はそれらは直接食事の食物に組み込まれてもよい。経口治療投
与のためには、作用化合物に賦形剤が添加されてもよく、摂取可能な錠剤、バッ
カル錠、トローチ、カプセル、エリキシル、懸濁液、シロップ、カシェ剤等の剤
形で使用することができる。組成物及び製剤の割合は当然異なってもよく、都合
のよいことには、100%であってもよい（純粋な化合物の適用）。このような治療
上有用な組成物中の作用化合物の量は、好適な用量が得られるようである。

【００４７】錠剤、トローチ、ピル、カプセル等は以下を含有してもよい：トラガカントゴ
ム、アカシアゴム、トウモロコシデンプン又はゼラチンなどの結合剤；リン酸二
カルシウムなどの賦形剤；トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、アルギ
ン酸等などの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤；及びショ糖、乳
糖又はサッカリンなどの甘味剤；又はペパーミント、ウインターグリーン油もし
くはサクランボ着香剤などの矯味剤。投与単位剤形がカプセルである場合には、
上記の種類の材料以外に液体の担体を含有してもよい。他の種々の材料がコーテ
ィングとして、又は投与単位の物理的剤形を変更するために存在してもよい。例
えば、錠剤、ピル又はカプセルは、シェラック、糖又はその両方をコーティング
されてもよい。エリキシルシロップは作用化合物；甘味剤としてのショ糖；保存
剤としてのメチル及びプロピルパラベン；サクランボ又はミカン風味などの染料
且つ風味剤を含有してもよい。当然、いかなる投与単位剤形を製造する際に使用
されるいかなる材料も薬学的に純粋で、実質的に無毒性でなければならない。ま
た、作用化合物は徐放性調製物及び製剤に組み入れられてもよい。

【００４８】作用化合物は非経口投与、静脈内投与又は腹腔内投与されてもよい。遊離塩基
又は薬学的に許容可能な塩としての作用化合物の溶液は、適当に、ヒドロキシプ
ロピルセルロースなどの界面活性剤と混合した水で調製されてもよい。分散剤は
グリセロール、液化ポリエチレングリコール及びこれらの混合物中並びに油中で
調製されてもよい。通常の保存及び使用条件下において、これらの調製物は微生
物の増殖を防止するために保存剤を含有する。

【００４９】注射用の用途に好適な薬学的剤形は、注射用滅菌溶液又は分散剤の即時調製の
ための滅菌水溶液又は分散剤及び滅菌粉末を含む。全ての場合において、剤形は
滅菌されていなければならず、注射剤形が容易に存在する程度に流動性でなけれ
ばならない。それは製造及び保存条件下において安定でなければならず、細菌及
び真菌などの微生物の汚染作用から防護されなければならない。担体は、例えば
、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール
及び液体ポリエチレングリコール等）、それらの好適な混合物及び植物油を含有
する溶液又は分散媒であってもよい。適切な流動性は、例えば、レシチンのよう
なコーティングを使用することによって、分散剤の場合には必要な粒子サイズを
維持することによって及び界面活性剤を使用することによって維持することがで
きる。微生物の作用の防止は、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノー
ル、ソルビン酸、チメロサール等のような種々の抗菌及び抗真菌剤によって実施
することができる。多くの場合、例えば、糖又は塩化ナトリウムのような等張剤
を含むことが好ましい。注射用組成物の吸収の長期化は、例えば、モノステアリ
ン酸アルミニウム及びゼラチンのような吸収遅延剤を組成物中に使用することに
よって実施することができる。

【００５０】本明細書に使用する「薬学的に許容可能な担体」は、溶媒、分散媒、コーティ
ング、抗菌及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤等の任意のもの及び全てを含む
。薬学的作用物質のためのこのような媒体及び物質の使用は当技術上周知である
。任意の従来の媒体又は物質が作用成分と相溶性でない場合を除いて、治療用組
成物へのその使用が考慮される。補助的な作用成分が組成物に組み入れられても
よい。

【００５１】経口投与のためには、組成物に賦形剤を導入してもよく、非飲用のうがい剤及
び歯磨き剤の剤形で使用してもよい。うがい剤は、必要量の作用成分をホウ酸ナ
トリウム溶液（ドーベル（Dobell's）溶液）などの適当な溶媒に添加して調製す
ることができる。又は、作用成分を、ホウ酸ナトリウム、グリセリン及び炭酸水
素カリウムを含有する防腐剤に添加してもよい。作用成分を、ゲル、ペースト、
粉末及びスラリーを含む歯磨き剤に分散してもよい。治療的に有効な量の作用成
分を、水、結合剤、研磨剤、香味剤、発砲剤及び保湿剤を含んでもよいペースト
状の歯磨き剤に添加してもよい。

【００５２】組成物は中性すなわち塩の剤形で製剤化することができる。薬学的に許容可能
な塩は酸添加塩（タンパク質の遊離のアミノ基から形成される）を含み、例えば
、塩酸もしくはリン酸又は酢酸、シュウ酸、酒石酸酸、マンデル酸等などの有機
酸から形成される。遊離のカルボキシル基から形成される塩も、例えば、水酸化
ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウム又は水酸
化鉄などの無機塩基及びイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、
プロカイン等などの有機塩基から誘導することができる。

【００５３】溶液が形成されたら、投与製剤に合致する方法及び治療的に有効な方法で投与
される。製剤は、注射用溶液、薬剤放出型カプセル等などの種々の投与剤形で容
易に投与される。

【００５４】他の実施態様では、本明細書に開示する組成物の局所適用が望まれる場合もあ
る。このような組成物は、具体的な適用に応じてクリーム、ローション、溶液又
は固形の剤形に製剤化することができる。局所投与のための薬学的に許容可能な
基剤の製剤化は当業者に周知である（すなわち、「レミントンの製薬の科学（Re
mington's Pharmaceuticals Science）」、第15版参照）。本明細書に開示する
組成物の用量の変更は、常に、具体的な被験者及び治療される状態の性質に応じ
る。

【００５５】水溶液での非経口投与のためには、例えば、溶液は適宜適当に緩衝剤で調節さ
れるべきであり、先ず希釈用の液体が十分量の生理食塩液又はグルコースで等張
にされるべきである。これらの具体的な水溶液は、静脈内投与、筋肉内投与、皮
下投与及び腹腔内投与に特に好適である。これに関連して、使用することができ
る滅菌水性媒体は本願の開示内容に鑑みて当業者に周知である。例えば、1回量
を1 mlの等張NcCl溶液に溶解して、1000 mlの皮下注射用もしくは静脈注射用液
に添加するか、又は提案されている注入部位に注射してもよい（例えば、「レミ
ントンの製薬の科学」、第15版、1035〜1038ページ及び1570〜1580ページ参照）
。用量の変更は常に治療される被験者の状態に応じて変更する。投与責任者が常
に個々の被験者に適当な用量を決定する。さらに、ヒトへの投与のためには、調
製剤はFDA当局の生物基準（FDA Office of Biologics standards）によって要求
される滅菌性、発熱物質、一般安全性及び純度基準を満たさなければならない。

【００５６】実施例候補物質のアッセイヒト5α-還元酵素の発現。異なる種類のヒト5α-還元酵素を発現するラット1A
細胞を調製するために、ヒト1型及び2型5α-還元酵素のcDNAsを、報告されてい
る5α-還元酵素の配列、PCR及び基準ライブラリースクリーニング技法を使用し
て、ヒト前立腺λgt11及びPC-3細胞λZAP II cDNAライブラリーから単離した。1
型及び2型のcDNAsをレトロウィルス発現ベクターpMV7にサブクローニングし、1
型及び2型cDNAsを含有する高力価ウィルスストックをパッケージング細胞BOSC 2
3 293を使用して作製した。ラット1A細胞にウィルスを感染させ、レトロウィル
スが組み込まれている細胞をG418耐性について選択した（ブラウン及びスコット
、1987）。

【００５７】 5α-還元酵素のアッセイ。特定の種類のヒト5α-還元酵素を発現するラット1A
細胞からミクロソームを調製した。酵素アッセイは、ヒト1型又は2型5α-還元酵
素のどちらかを含有するラット1A細胞から調製したミクロソームの存在下におい
て、テストステロンから5α-DHTの生成を測定することに基づいていた。テスト
ステロンのジヒドロテストステロンへの変換を50%阻害する試験化合物の濃度を
適当なデータポイント間に内挿することによって求めた。

【００５８】 5α-還元酵素活性の阻害本発明者らは、2種の天然産物、緑茶カテキンである没食子酸エピカテキン（E
CG）及び没食子酸エピガロカテキン（ECGC）並びに不飽和脂肪酸はヒト5α-還元
酵素の阻害剤であることを先に示した。この活性の構造的な要件を探索するため
に構造-活性相関の検討を開始した。この検討のデータを表1〜7及び図1〜6に要
約する。

【００５９】 1.フラボノイド緑茶カテキンに関連する構造を有する種々の天然型フラボノイドを試験した（
図1、表1）。

【００６０】

【表１】

【００６１】緑茶カテキンであるECG及びEGCGは試験したフラボノイド中最も高い活性を有
し、5α-還元酵素の2型（HRED2）より1型（HRED1）のより良好な阻害剤であった
。緑茶カテキンであるエピカテキン（EC）及びエピガロカテキン（EGC）は活性
がほとんどない。4種のフラボノイドであるミリセチン、クエルセチン（quercit
in）、バイカライン（baicalein）及びフィセチンはかなりの（IC50<100μM）活
性を有し、2型イソ酵素より1型に対してより活性を示した。ビオカニン（biocha
nin）A、ケンフェロール（Kaempferol）、ゲニステイン及びダイゼインは2型イ
ソ酵素の効果的な阻害剤であるが、1型イソ酵素の阻害剤ではない。クリシン、
ケンフェロール、モリン、ミリセチン及びクエルセチンの活性を比較することに
より、特にカテコール又はピロガロール配置ではB-環のヒドロキシル基が重要で
あること、1型アイソザイムに対する活性には3位のヒドロキシルがおそらく重要
であることが示される。クエルセチンの3-ルチノースグリコシドであるルチンは
どちらのイソ酵素に対しても効果がなかった（IC50>100μM）。クエルセチンと
比較してルチンに活性がないことは、オリゴサッカライドルチノースが存在する
こと（おそらく立体障害のため）又は3位のヒドロキシルが修飾されているため
のどちらかによる。フラバノンであるタキシフォリン（Taxifolin）はどちらの
アイソザイムに対しても効果がなかった（IC50>100μM）。タキシフォリンの弱
い活性は、その活性を構造上関連のあるクエルセチンと比較すると、2,3-不飽和
結合がないことによる可能性が高い。完全な細胞において阻害活性を試験すると
、ほとんどのフラボノイドは1型のイソ酵素に対してほとんど又は全く活性を示
さなかった。おそらくこれはこれらのポリヒドロキシ化合物の細胞膜の浸透性の
低さを示している。1型酵素で得られた結果とは対照的に、4種のフラボノイド、
ビオカニンA、ダイゼイン、ケンフェロール及びゲニステインは完全な細胞アッ
セイでは2型イソ酵素に対してかなりの阻害活性を示した。これらのうち最も活
性の強いビオカニンA及びダイゼインはヒドロキシル基をそれぞれ2つ及び3つし
か持っておらず、従って他のフラボノイドより容易に細胞に浸透することができ
る。

【００６２】 2.カテコールフラボノイドを用いて検討した5α-還元酵素阻害作用は、高い阻害活性のため
にはカテコール及びピロガロール部分が重要である可能性を示した。従って、活
性についてカテコール基を有する一連の化合物を調査した（表2、図2）。

【００６３】

【表２】

【００６４】掲載した24種の化合物のうち13種はIC50が100μMより低かった。全て2型イソ酵
素より1型に対して活性が強かった。これらの化合物のうち6種、アントラロビン
、没食子酸ドデシル、ゴシポール（gossypol）、没食子酸オクチル、カフェー酸
フェネチルエステル及びノルジヒドログアイアレチン酸（nordihydroguaiaretic
acid）は完全な細胞アッセイにおいて活性であった（以下の表7）。アントラロ
ビンは2型イソ酵素より1型に対してさらにより効果的であったが、他の5種の阻
害剤は両方のイソ酵素の効果の等しい阻害剤であった。合成化合物HZIV 82は細
胞を含まないアッセイではほとんど活性を示さなかったが、完全な細胞アッセイ
では非常に活性で、1型イソ酵素に特異的であった。

【００６５】 3.クルクミン及び関連化合物クルクミンは1型又は2型イソ酵素どちらかの非常に効果的な阻害剤であった（
表3、図3）。

【００６６】

【表３】

【００６７】市販のクルクミンをPt/H2で化学的に還元し、生成物であるテトラヒドロクル
クミン及びデメトキシテトラヒドロクルクミンはクルクミンと比較してかなり活
性が低かった。しかし、鮮やかな黄色のクルクミンと比較して無色であるテトラ
ヒドロクルクミン（HZIV 81-2）は完全な細胞アッセイではかなりの活性を有し
た。構造的に関連のある化合物4-（4-ヒドロキシ-3-メトキシフェノール）-3-ブ
テン-2-オン、フェルラ酸、カプサイシン(capsaicin)、オイゲノール及び針葉樹
アルコール（coniferyl alcohol）はどちらのイソ酵素に対しても阻害剤活性を
ほとんどもたなかった（IC50>100μM）。これは5α-還元酵素に対する活性には
ジフェルロリル（diferulolyl）構造が重要であることを示している。ノルジヒ
ドログアイアレチン酸（nordihydroguaiaretic acid）も細胞を含まないアッセ
イ及び完全な細胞アッセイにおいて1型（IC50=19μM）及び2型（OC50=50μM）ア
イソザイムの効果的な阻害剤であった。

【００６８】 4.キノン種々のキノンを5α-還元酵素に対する活性について試験した（表4、図4）。

【００６９】

【表４】

【００７０】天然型のアントラキノンであるアリザリンは1型アイソザイムの非常に効果的
な阻害剤であるが、2型の阻害剤ではない。アリザリンの水溶性の硫酸誘導体で
あるアリザリンレッドSはどちらのイソ酵素に対してもほとんど活性を持たなか
った（IC50>100μM）。荷電した硫酸基が、膜結合型の5α-還元酵素との相互作
用を妨害する可能性がある。アリザリンと比較して、追加のヒドロキシルを有す
るプルプリンはアリザリンと同様の阻害活性を有した。隣接するヒドロキシル基
を持たないアリザリンの構造異性体であるアントラフラビン酸、アントラルフィ
ン及びキニザリンは活性がかなり低い。これはこのクラスのアントラキノンの強
力な阻害活性にはカテコール部分が重要であることを強調している。アントラキ
ノンは効果的な阻害剤ではなかった（IC50>100μM）。メナジオン、補酵素Q及び
2,6-ジクロロインドフェノールは両イソ酵素の強力な細胞不含阻害剤であった。
この化合物はキノン還元酵素反応に関与し、NADPHを枯渇させて、観察された阻
害作用を生じることができる。完全な細胞アッセイでは、アリザリンは1型イソ
酵素の非常に効果的な阻害剤で、メナジオンは中程度の活性を有した。

【００７１】 5.エピガロカテキン誘導体 EGCGが細胞を含まないアッセイにおいて高い阻害活性を示すが、完全な細胞ア
ッセイでは活性が低いことにより、本発明者らは完全な細胞アッセイにおける活
性を増強するために、一連のEGC誘導体を設計し、合成した（表5、図5）。

【００７２】

【表５】

【００７３】検討は、EGCGのヒドロキシル基をメチル又は酢酸塩基で誘導体化することによ
り、細胞を含まないアッセイにおける阻害活性が消失し、完全な細胞アッセイに
おける低い阻害活性が増強しないことを示した。従って、本発明者らは、完全な
細胞アッセイにおける阻害活性を増強するために、EGCGの没食子酸エステル部分
の変更に構造-活性の検討を限定した。これらの構造変化体のうち20種を表5に要
約する。完全な細胞アッセイにおける活性に至る最も重要な構造変化は、EGCGの
没食子基の代わりに脂肪酸エステルを導入したことであった。特に、ある程度の
不飽和度を有する脂肪酸は完全な細胞アッセイにおいて5α-還元酵素の両イソ酵
素に対して良好な阻害活性を示した。これらの誘導体のうち最も強力なものは、
EGCの3-ヒドロキシルにγ-リノレン酸がエステル化されたものであった。不飽和
結合を1つ有するある種の脂肪酸も活性であった。例えば、EGCのミリストレイン
エステルであるHZIV 160は両方のアッセイ系において効果的であった。不飽和度
の低い脂肪酸は酸化を受けにくく、従ってより好適な修飾剤となり得る。

【００７４】

【表６】

【００７５】

【表７】

【００７６】本発明者らの先に見いだされたように、不飽和度が大きいほど、脂肪酸の阻害
活性は良好であった。不飽和脂肪酸は容易に酸化を受けやすく、それらの有用性
が損なわれることがあるので、本発明者らは酸化を受けにくいいくつかの不飽和
脂肪酸を調査した。合成脂肪酸である共役オクタデカジエン酸（CODA）（シス又
はトランス-9,11又は10,12オクタデカジエン酸）及び5,8,11,14-エイコサテトラ
イン酸（eicosatetraynoic acid）（ETYA）は両イソ酵素の良好な阻害剤であっ
た。CODA及びETYAはIC50が、それぞれ10及び15（1型）並びに30及び3（2型）μM
であった。天然型脂肪酸であるγ-リノレン酸は両イソ酵素に対してIC50が3μM
である。ETYAなどの脂肪酸は、細胞による取り込みを増強し、5α-還元酵素阻害
剤のインビボにおける活性を促進するために、他の5α-還元酵素阻害剤を誘導体
化するために有用となり得る。γ-リノレン酸のメチル及びコレステロールエス
テルは完全な細胞アッセイでは活性がほとんどなく（表7）、従ってγ-リノレン
酸にエステル化したEGCの活性はこれらのエステルの細胞内加水分解によるとは
思われない。

【００７７】表1〜7に示す活性な5α-還元酵素阻害剤はポリフェノール又はそれらの誘導体
であり、特に空気又は酸素の存在下で、7.0より大きいpHにおいて数時間〜数日
以内に容易に酸化又は加水分解される。本発明者らは、これらの化合物の溶液の
pHを7.0より低いpHに維持することによって、これらの化合物は酸化及び加水分
解に対してより安定であることを見いだした。酸化又は加水分解の80%より多く
は、塩酸、硫酸もしくはリン酸などの無機酸又はクエン酸もしくは酢酸などの有
機酸を添加することによって防止することができる。

【００７８】以下に掲載し、本願の開示内容に引用した文献を以下に示す：

【表８】

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明のフラボノイド化合物の構造を示す。

【図２】本発明のカテコール化合物の構造を示す。

【図３】本発明のクルクミン及び関連化合物の構造を示す。

【図４】本発明のキノンを示す。

【図５】本発明のエピガロカテキン誘導体化合物を示す。

【図６】本発明のエピガロカテキン誘導体の一般式を示す。

【図７】本発明に有用な没食子酸塩の一般式を示す。

【図８】本発明に有用なクルクミン誘導体の一般式を示す。

【図９】本発明に有用なキノン及びカテコールの一般式を示す。

【図１０】本発明の脂肪酸を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｋ 31/235 Ａ６１Ｋ 31/235 31/24 31/24 31/353 31/353 Ａ６１Ｐ 3/04 Ａ６１Ｐ 3/04 13/08 13/08 17/00 17/00 17/14 17/14 35/00 35/00 43/00 １１１ 43/00 １１１Ｃ０７Ｃ 49/105 Ｃ０７Ｃ 49/105 Ｃ０７Ｄ 311/30 Ｃ０７Ｄ 311/30 311/36 311/36 311/82 311/82 311/92 １０１ 311/92 １０１ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷＦターム(参考） 4C062 EE43 EE50 FF56 HH21 HH55 HH69 4C086 AA01 AA02 AA03 BA08 GA02 GA08 MA01 MA04 MA08 MA09 MA10 NA14 ZA70 ZA81 ZA89 ZA92 ZB26 ZC20 4C206 AA01 AA02 AA03 CA19 CA34 CB14 CB18 CB23 DA05 DB17 DB43 FA12 FA32 GA07 GA28 MA01 MA04 MA13 NA14 ZA70 ZA81 ZA89 ZA92 ZB26 ZC20 4H006 AA01 AA02 AA03 AB29 AD40

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】 5α-還元酵素を表1〜7のいずれかに示す有効阻害量の化合物
に暴露するステップを含む5α-還元酵素活性を阻害する方法。
【請求項２】表1〜7のいずれかに示す有効治療量を前立腺癌の治療を必要
とする被験者に投与するステップを含む前立腺癌の治療を必要とする被験者の前
立腺癌を治療する方法。
【請求項３】表1〜7のいずれかに示す有効治療量を乳癌の治療を必要とす
る被験者に投与するステップを含む乳癌の治療を必要とする被験者の乳癌を治療
する方法。
【請求項４】表1〜7のいずれかに示す有効治療量を脱毛症の治療を必要と
する被験者に投与するステップを含む脱毛症の治療を必要とする被験者の脱毛症
を治療する方法。
【請求項５】表1〜7のいずれかに示す有効治療量を皮膚疾患の治療を必要
とする被験者に投与するステップを含む皮膚疾患の治療を必要とする被験者の皮
膚疾患を治療する方法。
【請求項６】表1〜7のいずれかに示す有効治療量を肥満の治療を必要する
被験者に投与するステップを含む肥満の治療を必要する被験者の肥満を治療する
方法。
【請求項７】表1〜7のいずれかに示す有効治療量を良性前立腺肥大又は前
立腺炎の治療を必要とする被験者に投与するステップを含む良性前立腺肥大又は
前立腺炎の治療を必要とする被験者の良性前立腺肥大又は前立腺炎を治療する方
法。
【請求項８】式【化１】（式中、xは-NHCH₂CH₂-又はCH=CH-であり、 R₁、R₂及びR₃は各々-H、-OH又はOCH₃であってもよいが、ただしR₁、R₂及びR₃の
うち1つだけは-Hであってよく、 R₄、R₅及びR₆は各々-H、-OH、-OCH₃又はN（CH₃）₂であってもよいが、ただしR₄
、R₅及びR₆のうち1つだけは-Hであってもよく、 nは0又は1である。）の化合物。
【請求項９】式【化２】（式中、Rは、炭素、酸素、硫黄及び窒素からなる一群から選ばれる2〜20の原子
を有する鎖であり、1〜4の二重結合と追加の水素を有しても、有さなくてもよい
鎖である。）の化合物。
【請求項１０】式【化３】（式中、Rは、【化４】【化５】である。）の化合物。
【請求項１１】表１〜７に示す化合物の治療用製剤の酸性度をpH 3.0〜 6
.8に維持するために無機酸、有機酸又はこれらの酸を含む天然物の有効量を添加
するステップを含む、表1〜7に示す化合物を安定化するための方法。